PT1254162E - Kahalalide f e compostos relacionados - Google Patents

Description

ΡΕ1254162 1

DESCRIÇÃO "KAHALALIDE F E COMPOSTOS RELACIONADOS" 0 presente invento refere-se a compostos Kahalalide, e em particular a Kahalalide F e compostos relacionados, assim como a uma via sintética para tais compostos.

ANTECEDENTES DO INVENTO 0 Kahalalide F é um depsipéptido cíclico bio-activo isolado a partir do molusco sarcoglossano Elysia rufescens e do seu alimento, a alga verde Bryopsis sp. 0 Kahalalide F foi isolado em primeiro lugar por Hamann e Scheuer, ver Hamann, M.T.; Scheuer, P.J.J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 5825-5826 e ver também os documentos CP 610078 e US 6011010. Nestas publicações não foi determinada a estequiometria absoluta das valinas (3 D-Val e 2 L-Val) e das treoninas (L-Thr e D-alo-Thr) individuais. As publicações mostram que o Kahalalide F é uma mistura de isómeros. Numa publicação mais recentes, Scheuer et al. (Goetz, G.; Yoshida, W.Y.; Scheuer, P.J. Tetrahedron 1999, 7730-7746) designa uma posição na molécula para a 5 Vai e a 2 Thr.

Deste modo, a estrutura de Kahalalide F de acordo com Scheuer et al. foi: 2 ΡΕ1254162

Entretanto, o Prof. Rinehart também designou a posição individual da 5-Val e da 2-Thr (K.L. Rinehart, comunicação pessoal). Embora para a 2 Thr e a 3 Vai a sua designação concorde com a do Prof. Scheuer, para a última 2 Vai existe uma discrepância. Deste modo, na designação de Rinehart as duas Vai consecutivas na cadeia lateral são trocadas e a estrutura é de fórmula (I):

É agora aceite e novamente demonstrado neste texto, que a fórmula correcta do Kahalalide F é a fórmula (I) - A estrutura é complexa, compreendendo seis aminoácidos como uma parte cíclica e uma cadeia exocíclica ΡΕ1254162 de sete aminoácidos com um grupo acilo terminal. 0 Kahalalide F é um agente antitumoral derivado de animais marinhos raros altamente potente, embora a ausência de quantidades adequadas tenha abrandado os planos de testes clinicos.

Outros compostos de Kahalalide são conhecidos e, por exemplo, refere-se Hamann, M.T., J. Org. Chem., 1996, "Kahalalides: Bioactive Peptides from Marine Mollusk Elysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp.", vol. 61, p. 6594-6660. Tal como para o Kahalalide F, este artigo dá estruturas para os Kahalalides A a E. O Kahalalide K foi relatado em J Nat. Prod. 1999, 62, 1169 e o Kahalalide O foi relatado em J Nat Prod 2000, 63, 152.

As estruturas destes outros compostos de Kahalalide são mostradas nas fórmulas seguintes:

4 ΡΕ1254162

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Os Kahalalides cíclicos possuem um anel de aminoácidos e uma cadeia lateral que termina num grupo acilo.

Os Kahalalides possuem uma gama de actividades biológicas, especialmente uma actividade antituberculose.

SUMARIO DO INVENTO

Os derivados deste invento possuem uma estrutura com uma parte cíclica e uma cadeia lateral derivada da fórmula (I): 5 ΡΕ1254162

diferindo o derivado da cadeia lateral da fórmula (I) em um ou mais dos seguintes aspectos: 1 ou 2 aminoácidos que não são o mesmo que o aminoácido na cadeia lateral da estrutura da fórmula (I), ou que são omitidos; 1 a 10 grupos metileno adicionais no grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 1 a 6 grupos metileno omitidos do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); e 1 a 3 substituintes adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).

Adequadamente, os compostos deste invento diferem da fórmula (I) em um ou mais dos seguintes aspectos: 1 aminoácido que mesmo que o aminoácido na cadeia lateral da estrutura da fórmula (I), ou que são omitidos; 6 ΡΕ1254162 1 a 10 grupos, especialmente 1 a 6, mais especialmente 1 a 3, muito especialmente 1 ou 2 grupos metileno adicionais no grupo acilo da cadeia lateral do composto de partida; 1 a 6, especialmente 1 a 3, mais especialmente 1 ou 2 grupos metileno omitidos do grupo acilo da cadeia lateral do composto de partida; 1 a 3, especialmente 1 ou 3, substituintes adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral do composto de partida.

Os derivados deste invento são os compostos relacionados com o Kahalalide F e possuindo a fórmula: laa-7

em que Aaai, Aaa2, Aaa3, Aaa4, Aaas com X2 e Aaa6 são tal como no Kahalalide F, R7 é H ou um grupo orgânico seleccionado do grupo constituído por um grupo alquilo, um grupo arilo, um grupo aralquilo, e os seus derivados 7 ΡΕ1254162 substituídos com um grupo hidroxi, um grupo mercapto, um grupo amino, um grupo guanidino, um grupo halogéneo; em que Xi é 0; em que 1¾ é, independentemente, com as seguintes fórmulas III, IV ou V:

em que Rg, Rio e Rn são, cada um, independentemente, H ou um grupo orgânico seleccionado do grupo constituído por um grupo alquilo, um grupo arilo, um grupo aralquilo e os seus derivados substituídos com um grupo hidroxi, um grupo mercapto, um grupo amino, um grupo guanidino, um grupo carboxilo, um grupo carboxamido, um grupo halogéneo; R9 e Rio podem formar parte do mesmo ciclo; Rg pode conferir configuração S ou R, se aplicável, ao carbono a que estão ligados; e n é 0 a 6. As partes respectivas entre parêntesis nas fórmulas (III), (IV) e (V) podem ser intermisturadas para originar uma cadeia lateral de unidades repetidas tomadas de mais do que uma ΡΕ1254162 destas fórmulas. R7 e Rs são escolhidos para estarem de acordo com os derivados na reivindicação 1. 0 presente invento é ainda relacionado com um processo de síntese para a formação de compostos de Kahalalide F e estruturas relacionadas.

Os compostos deste invento estão relacionados com o Kahalalide F (I), em que Aaa-1 é D-alo-Thr (Xi =0, Ri = CH3) , Aaa-2 é D-alo-Ile (R3 = metilpropilo), Aaa-3 é D-Val (R4 = isopropilo), Aaa-4 é Phe (R5 = benzilo), Aaa-5 é Z-Dhb (X2 = C=CHCH3 com configuração Z), Aaa-6 é L-Val (Rô = isopropilo), Aaa-7 é D-alo-Ile (R7 = 1-metilpropilo) e Rê contém um derivado hexapéptido com a seguinte fórmula (Fórmula VI):

JrefiftfRtíEà VJ 9 ΡΕ1254162

Especialmente preferidos são os compostos que possuem os mesmos aminoácidos que na fórmula (I), mas que diferem na cadeia lateral, especialmente na parte acilo. Tais diferenças podem incluir mais ou menos grupos metileno, tipicamente, no máximo, uma alteração de dois grupos metileno e mais ou menos substituintes, especialmente a adição de halogéneo, tais como substituintes de flúor.

Tal como aqui utilizado, o termo "grupo orgânico" significa um grupo hidrocarbonado que é classificado como grupo alifático, grupo ciclico ou uma combinação de grupos alifáticos e cíclicos (e.g. grupos aralquilo). No contexto do presente invento, o termo "grupo alifático" significa um hidrocarboneto linear ou ramificado saturado ou insaturado. 0 termo é utilizado para englobar grupos alquilo, alcenilo, e alcinilo, por exemplo. 0 termo "grupo alquilo" significa um grupo hidrocarboneto linear ou ramificado saturado incluindo, por exemplo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo t-butilo, heptilo, dodecilo, octadecilo, amilo, 2-etil-hexilo, 2-metilbutilo, 5-metil-hexilo, 9-metil-3-decilo e outros do género, particularmente grupos alquilo que possuem um único grupo metilo ramificado. Adequadamente, o grupo alquilo é comprido e possui 1 a 20 átomos de carbono, mais tipicamente 1 a 15 ou 1 a 10 átomos de carbono, ou pode ser curto e ter 1 a 6 ou 1 a 3 átomos de carbono. O grupo Rn é adequado para as cadeias carbonadas longas e, em geral, todos os grupos alquilo são preferencialmente curtos. 10 ΡΕ1254162 O termo "grupo alcenilo" significa um grupo hidrocarbonado linear ou ramificado insaturado com uma ou mais ligações duplas carbono-carbono, tal como um grupo vinilo. Adequadamente o grupo alcenilo possui de 2 a 8 ou 2 a 4 átomos de carbono. O termo "grupo alcinilo" significa um grupo hidrocarbonado linear ou ramificado insaturado com uma ou mais ligações triplas carbono-carbono. Adequadamente o grupo alcenilo possui de 2 a 8 ou 2 a 4 átomos de carbono. O termo "grupo ciclico" significa um grupo hidro-carboneto en anel fechado que é classificado como grupo aliciclico, grupo aromático ou grupo heterociclico. O termo "grupo aliciclico" significa um grupo hidrocarboneto possuindo propriedades que se assemelham às dos grupos alifáticos e é, adequadamente, um mono ou biciclo com 4 a 10 átomos de carbono. O termo "grupo aromático" ou "grupo arilo" significa um grupo hidrocarboneto aromático mono ou policíclico, adequadamente um mono ou biciclo com 5 a 10 átomos de carbono. O termo "grupo heterociclico" significa um grupo hidrocarboneto em anel fechado em que um ou mais dos átomos no anel é um elemento que não o carbono (e.g. 1 a 3 de um ou mais de azoto, oxigénio, enxofre, etc.), adequadamente um mono ou biciclo com 4 a 10 átomos no anel.

Tal como será entendido nesta área técnica, um grande grau de substituição não é apenas tolerado como é 11 ΡΕ1254162 frequentemente aconselhável. A substituição é antecipada nos compostos do presente invento. Como meio para simplificar a discussão e a recitação de certa terminologia utilizada ao longo desta descrição, os termos "grupo" e "porção" são utilizados para diferenciar entre espécies químicas que permitem a substituição ou que podem ser substituídas e aquelas que não permitem ou que não podem ser substituídas. Deste modo, quando o termo "grupo" é utilizado para descrever um substituinte químico, o material químico descrito inclui o grupo não substituído e esse grupo com átomos de 0, N ou S, por exemplo, na cadeia como grupo carbonilo ou outra substituição convencional. Quando o termo "porção" é utilizado para descrever um composto ou substituinte químico, apenas se pretende que seja incluído material químico não substituído. Por exemplo, a frase "grupo alquilo" pretende incluir não apenas substituintes alquílicos com a cadeia hidrocarbonada saturada aberta, tais como metilo, etilo, propilo, isobu-tilo, e outros do género, mas também substituintes alquílicos tendo ainda mais substituintes conhecidos na arte, tais como hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo, carboxamido, átomos de halogéneo, ciano, nitro, alquilsulfonilo etc. Deste modo, "grupo alquilo" inclui grupos éter, haloal-quilos, álcoois, tióis, carboxilo, aminas, hidroxialquilos, sulfoalquilos, etc. Os grupos haloalquilo são correntemente preferidos. Por outro lado, a frase "porção alquilo" está limitada à inclusão apenas de substituintes alquílicos de cadeia hidrocarbonada saturada aberta, tais como metilo, etilo, propilo, isobutilo e outros do género. 12 ΡΕ1254162

Preferencialmente, a cadeia lateral R compreende 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Pro-L-Orn-D-alo-Ile, ou um congénere deste, incluindo análogos e homólogos. Exemplos de congéneres incluem os de fórmula geral () m— (aminoácido) η-^ com m+n não zero, em que R11 representa um grupo terminal, adequadamente um alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroalquilo, aliciclico ou outro terminador e -(aminoácido) n_ representa uma cadeia de aminoácido consistente com a reivindicação 1.

Um grupo alquilo terminal adequado possui de 1 a 12 átomos de carbono, mais tipicamente 4 a 10 átomos de carbono e pode ser substituído e é preferencialmente ramificado. Exemplos incluem butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo e outros grupos alquilo tendo 1 ou mais metilo ou etilo ou grupos laterais mais longos, preferencialmente, de 1 a 6 átomos de carbono, especialmente 5-metil-hexilo e outros grupos alquilo com ramificação distai em relação ao ponto de ligação ao resto da molécula. Substituintes adequados incluem halogéneo, hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo, carboxamido, ciano, nitro, alquilsulfonilo, alcoxi, alcoxialquilo, arilal-quilarilo, heterocíclico, aliciclico, arilo, aralquilo e outros grupos aqui mencionados. Tal como adequado, tais substituintes podem ter outros substituintes, tal como por exemplo, um grupo tolilo. Substituintes de halogéneo são, correntemente, muito preferidos, especialmente 1 ou mais, tais como 1 a 3, átomos de flúor. Podem ser seleccionados 13 ΡΕ1254162 outros grupos terminais de acordo com os ensinamentos dados neste texto e incluem grupos aralquilo, arilo, hetero-cíclicos ou outros grupos, possivelmente com 1 ou mais, especialmente 1 a 3 substituintes. A cadeia lateral R-CO-N pode ter hidrogénio ou um substituinte no azoto, tal como um grupo alquilo, arilo ou aralquilo.

Congéneres de cadeia lateral adequados empregam aminoácidos substitutos em que a substituição é feita em relação à estrutura do aminoácido respectivo no Kahalalide F. Os substitutos da treonina incluem a serina e outros homólogos assim como a cisteina e homólogos. Substitutos da isoleucina incluem outros aminoácidos com grupos não polares, incluindo alanina, valinina, leucina, e prolina, assim como análogos e homólogos. A este respeito, a amostra de átomos de azoto -N- na fórmula (A) não exclui a possibilidade da formação de anel tal como ocorre com a prolina. Os substitutos da valina incluem isoleucina e os outros aminoácidos com grupos não polares, incluindo análogos e homólogos.

Alternativas à ornitina incluem lisina, histidi-na, arginina; alternativas à prolina incluem alanina e outros aminoácidos não polares, tais como a glicina, isoleucina e os outros previamente mencionados. A cadeia R possui adequadamente 5, 6 ou 7, especialmente 7 residuos de aminoácidos. Quando existe mais do que sete residuos de ΡΕ1254162 aminoácidos, então os aminoácidos extra são, preferencialmente, aminoácidos naturais, particularmente os aqui mencionados .

Podem ser utilizados aminoácidos L ou D racé- micos. Preferencialmente, quando estão presentes aminoácidos na cadeia lateral R, então um ou mais destes está na configuração dada à cadeia lateral natural. Ao ver no hexapéptido, os resíduos de aminoácidos estão na configuração DLDDLLD. 0 grupo alquilo terminal possui, adequadamente, 1 a 12 átomos de carbono, mais tipicamente, 4 a 10 átomos de carbono e pode ser substituído e é preferencialmente ramificado. Substituintes adequados incluem halogé-neo, hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo, carboxamido, ciano. Nitro, alquilsulfonilo e outros grupos aqui mencionados. Substituintes de halogéneo são correntemente muito preferidos .

Mais geralmente, a cadeia lateral R-CO-N- pode ser tal como definida para a cadeia lateral R8-NH-CHR7-CO-NH- nos compostos de fórmula (II), incluindo compostos com misturas de aminoácidos definidos nas fórmulas (III), (IV) e (V) .

Os compostos deste invento possuem actividade biológica útil, incluindo uma actividade antitumoral.

Deste modo, o presente invento, permite um método para tratar qualquer mamífero, especialmente um humano, 15 ΡΕ1254162 afectado por cancro, que compreende a administração ao indivíduo afectado de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto do invento, ou de uma composição farmacêutica deste. 0 presente invento refere-se também a preparações farmacêuticas que contêm, como inqrediente activo, um composto ou compostos do invento, assim como aos processos para a sua preparação.

Exemplos de composições farmacêuticas incluem qualquer sólido (comprimidos, pílulas, cápsulas, grânulos, etc.) ou líquido (soluções, suspensões ou emulsões) com composição adequada ou administração oral, tópica ou parentérica e estas podem conter o composto puro ou em combinação com qualquer portador ou outros compostos farma-ceuticamente aceitáveis. Estas composições podem necessitar de ser estéreis quando administradas parentericamente. A administração de compostos ou composições do presente invento através de qualquer método adequado, tal como infusão intravenosa, preparações orais, administração intraperitoneal e intravenosa. Prefere-se que sejam utilizados tempos de infusão de até 24 horas, mais preferencialmente de 2-12 horas, com 2-6 horas sendo muito preferido. Tempos de infusão curtos que permitem que o tratamento seja realizado sem ter que passar uma noite, são especialmente desejáveis. Contudo, a infusão pode ser de 12 a 24 horas ou mesmo mais duradoura, se requerido. A infusão 16 ΡΕ1254162 pode ser realizada a intervalos adequados de, digamos 2 a 4 semanas. As composições farmacêuticas contendo os compostos do invento podem ser administrados através de encapsulamento em lipossomas ou nanosferas, em formulações de libertação sustentada ou através de outros meios de administração correntes. A dosagem correcta dos compostos variará de acordo com a formulação particular, o modo de aplicação, e a particular situação, hospedeiro e tumor a ser tratado. Outros factores, tais como a idade, peso corporal, sexo, dieta, tempo de administração, velocidade de excreção, condição do hospedeiro, combinações de fármacos, sensibilidades reaccionais e gravidade da doença devem ser tomados em consideração. A administração pode ser realizada conti-nuamente ou periodicamente dentro da dose tolerada máxima.

Os compostos e composições deste invento podem ser utilizados com outros fármacos para proporcionar uma terapia de combinação. Os outros fármacos podem formar parte da mesma composição ou ser proporcionados como uma composição separada para administração ao mesmo tempo ou num tempo diferente. A identidade dos outros fármacos não é particularmente limitada e candidatos adequados incluem: a) fármacos com efeito antimitótico, especialmente aqueles que têm como alvo elementos citoesqueletais, incluindo moduladores microtubulo, tais como os fármacos taxano (tal como taxol, paclitaxel, taxótero, docetaxel), 17 ΡΕ1254162 podofilotoxinas ou alcaloides vinca (vincristina, vinblas-tiba); b) fármacos antimetabolito, tais como o 5-fluorouracilo, citarabina, genmcitabina, análogos da puri-na, tais como a pentostatina, metotrexato); c) agentes de alquilação tais como mostardas de azoto (tais como a ciclofosfamida ou a ifosfamida); d) fármacos com ADN alvo, tais como os fármacos de antraciclina, adiramicina, doxorubicina, farmorubicina ou epirubicina; e) fármacos com topoisiomerases alvo, tais como etopósido; f) hormonas e agonistas ou antagonistas de hormonas, tais como estrogénios, antiestrogénios (tamoxifen e compostos relacionados) e androgénios, flutamida, leuprorelina, goserelina, ciprotrone e octreótido; g) fármacos com transdução de sinal alvo em células tumorais incluindo derivados de anticorpos, tais como a herceptina; h) fármacos de alquilação, tais como fármacos de platina (cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, paraplati-na) ou nitrosoureias; 18 ΡΕ1254162 i) fármacos afectando potencialmente metástases de tumores, tais como inibidores de metaloproteinase de matriz; j) terapia de genes e agentes antisense; k) agentes terapêuticos anticorpos; l) outros compostos bioactivos de origem marinha, especialmente as ecteinascidinas, tais como a ecteinasci-dina 743 ou as didemninas, tais como a aplidina; m) análogos esteróides, em particular dexametasona; n) fármacos anti-inflamatórios, em particular dexametasona; e o) fármacos anti-eméticos, em particular dexametasona. 0 presente invento refere-se também aos compostos do invento para utilização num método de tratamento, e à utilização dos compostos na preparação de uma composição para o tratamento do cancro.

Espera-se que os compostos do invento tenham também actividade antituberculose. ΡΕ1254162 19

De acordo com este invento é também proporcionado um processo para a preparação de compostos deste invento incluindo Kahalalide F, que compreende o fecho do anel entre Aa3 e Aa4. Verificou-se que o fecho do anel nesta posição origina um processo superior. 0 fecho do anel pode ser precedido e/ou seguido por outras modificações na molécula, incluindo a formação ou a extensão da cadeia lateral em Aai e/ou a remoção de grupos protectores e/ou substituintes de modificação nos aminoácidos,

Deste modo, o processo pode ser ilustrado pelo esquema seguinte: α o 0=

0 ffili HIÍ i Ú ‘•C****""^ μ,u€Í ‘tu flj -···'

0' 20 ΡΕ1254162 em que R' é um grupo R-CO- ou um precursor deste, e em que um ou mais dos aminoácidos podem ter grupos de protecção, e em que o -COOH de Aa3 e/ou o -NH2 de Aa4 pode ser, opcionalmente, protegido, activado ou derivatizado. Tais procedimentos utilizando precursores de protecção, activação ou derivatização são, eles próprios, inteiramente convencionais e não são necessários mais detalhes para praticar o processo. O processo deste invento pode ser realizado a partir de materiais de partida de uma maneira enantio e estéreo-controlada e rápida, aproveitando a metodologia de síntese em fase sólida, em que a molécula em construção está ligada a um suporte insolúvel durante todas as operações de síntese. Deste modo, o excesso de reagentes e de subprodutos solúveis pode ser removido lavando simplesmente a molécula-resina com solventes adequados. Grandes excessos dos reagentes solúveis podem, por isso, ser utilizados de modo a conduzir as reacções até serem completadas num curto período de tempo, evitando a racemização (se aplicável) e outras reacções secundárias. O método é também adequado para automação. A forma de concretização preferida do processo de síntese do presente invento é melhor representado no Esquema 1, que é dirigido à formação de compostos de fórmula (II) . 21 ΡΕ1254162

i

Tal como mostrado acima no Esquema 1, o processo preferido para a síntese do Kahalalide F (I) e derivados e análogos baseia-se numa aproximação de fase sólida, ver por exemplo, Lloyd-Williams, P. et al., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, Boca Raton (FL), 1997. 0 processo do Esquema 1 compreende os passos sequenciais de: (a) incorporação de um Fmoc-aminoácido (Aaa3) num suporte sólido (e.g. poliestireno, polietileno enxertado em poliestireno e outros do género) contendo um ligante ou extensão lábil super-ácido (e.g. clorotritilo, 22 ΡΕ1254162 polialcoxibenzilo e outros do género), formando uma ligação éster; (b) alongamento da cadeia peptidica com três aminoácidos (Aaa2, Aaa2, Aaa7) utilizando uma estratégia Fmoc/tBu. Para I, Xi = OH e introduzido sem protecção. Quando Xi = NH2, isto é introduzido com protecção de Alloc; (c) incorporação (Aaa6) utilizando uma estratégia

Alloc/tBu; (d) alongamento da cadeia peptidica com os aminoácidos remanescentes e R11-COOH através de Aaa7 utilizando uma estratégia Fmoc/tBu; (e—1) alongamento da cadeia peptidica com dois aminoácidos (Aaa5 (OH, H), Aaa4) através de Aaa6 utilizando uma estratégia Alloc/tBu. O O ligado ao Aaa5 não está protegido; (e-2) desidratação em fase sólida para originar o péptido com Aaa5; ou (e'—1) incorporando o dipéptido Alloc-Aaa4-Aaa5-OH, que foi combinada e desidratada em solução; (f) remoção do grupo Alloc do Aaa4 enquanto o péptido está ainda ancorado ao suporte sólido; 23 ΡΕ1254162 (g) clivagem da cadeia lateral protegida, se aplicável, péptido do suporte sólido; (h) ciclização do pépetido em solução; (i) remoção dos grupos protectores da cadeia lateral lábil de TFA.

Será apreciado que a escolha particular dos grupos protectores não seja critica e que outras escolhas estejam amplamente disponíveis. Por exemplo, os grupos do tipo Bzl podem substituir tBu/Boc; Boc em vez de Fmoc; Fmoc em vez de Alloc; resina de Wang em vez de clorotritilo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS FORMAS DE CONCRETIZAÇÃO PREFERIDAS DO PROCESSO 0 processo preferido do presente invento é ilustrado no Esquema 1. Tal como aqui mostrado e tal como discutido com maior detalhe nos exemplos que se seguem, este processo foi conduzido como se segue:

Fmoc-Aaa3-0H foi, preferencialmente, incorporado numa resina de clorotritilo-poliestireno, ver Barlos, K.; Gatos, D.; Schafer, W. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 590-593, na presença de DIEA mantendo o nível de substituição de aprox. 0,15-0,5 mmol/g. A utilização de maiores cargas conduz à presença de péptidos terminados no 24 ΡΕ1254162 produto final, ver Chiva, C.; Vilaseca, M.; Giralt, E.; Albericio, F. J. Pept. Sei. 1999, 5, 131-140. A remoção do grupo Fmoc foi realizada com piperidina-DMF (2:8, v/v) (lxl min, 3x5 min, 1 x 10 min) . As ligações de Fmoc-, Alloc-Aaa-OH e Rll-COOH (5 equiv) foram realizadas com HATU-DIEA, ver Carpino, L.A.; El-Faham, A.; Minor, C.A.; Albericio, F. j. chem. Soc., Chem. Commun., 1994, 201-203, (5:10) em DMF durante 90 min. Após o teste de nin-hidrina de ligação ter sido realizado e se foi positivo a ligação foi repetida nas mesmas condições, e de outra maneira o processo foi continuado. As lavagens ente os passos de desprotecção, ligação e, novamente, desprotecção foram realizados com DMF (5 x 0,5 min) e CH2CI2 (5 x 0,5 min) utilizando cada tempo 10 ml de sovente/g de resina. A incorporação de Alloc-Aaa6-OH (7 equiv) quando XI = O foi realizada com uma quantidade equimolar de DIPCDI e 0,7 equiv de DMAP durante 2 h. Esta ligação foi repetida duas vezes. A remoção do grupo Alloc foi realizada com Pd(PPh3)4 (0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (10 equiv) sob atmosfera de Ar, ver Gomez-Martinez, P.; Thiriet, N.; Albericio, F.; Guibé, F.J. Chem. Soc. Perkin I 1999, 2871-2874. 25 ΡΕ1254162 A desidratação foi realizada em fase sólida com EDC (carbodiimida solúvel em água, 100 equiv) na presença de CuCl (60 equiv) em CH2CI2-DMF (10:2) durante 6 dias. EDC/CuCl foi utilizado por desidratação em solução de um residuo de Thr num fragmento de Nisin. Fukase, K.; Kitazawa, M.; Sano, A.; Shimbo, K.; Horimoto, S.; Fujita, H.; Kubo, A.; Wakamiya, T.; Shibe, A. Buli. Chem. Soc. Jpn. 1992, 65, 2227-2240. O dipéptido Alloc-Aaa4-Aaa5-OH (5 equiv) que foi preparado em solução a partir de Alloc-Aaa4-OH e H-Aaa5 (OH, H)-OtBu com EDC e posterior desidratação e tratamento com TFA, foi ligado a HATU-DIEA (5:10) durante 16 h e re-ligação durante 3 h. A utilização de outros reagentes de ligação com base em HOBt, tais como HBTU ou DIPCDI-HOBt conduziram a incorporações completas do dipéptido. A clivagem do péptido protegido da resina foi conseguida por TFA-CH2CI2 (1:99)(5 x 30 seg). O passo de ciclização foi realizado com DIPCDI-HOBt (3:3 equiv) em CH2CI2-DMF durante 2 h. Outros métodos, tais como PyBOP/DIEA (3:6 equiv) em DMF podem ser também utilizados.

A desprotecção final foi realizada com TFA-H2O (95:5) durante 1 h. 26 ΡΕ1254162

EXEMPLOS DO INVENTO

Abreviaturas

As abreviaturas utilizadas para os aminoácidos e as designações dos péptidos seguiram as regras da IUPAC-IUB Commission of Biochemical Nomenclature em J. Biol. Chem. 1972, 247, 977-983. São utilizadas as abreviaturas adicionais seguintes: 4-AcBut-OH, ácido 4-acetoxibutírico; AcButBut-OH, ácido 4-(4-acetoxibutanoiloxi(-butirico; ACH, ácido a-ciano-4-hidroxicinâmico; Alloc, aliloxicarbonilo; Boc, terc-butiloxicarbonilo; t-Bu, terc-butilo; But-OH, ácido butirico; Cl-TrtCl-resina, cloreto de 2-clorotritilo-resina; Dap, ácido 2,3-diaminopripiónico; 4-DiMeABut-OH, ácido 17, N-dimetil-4-aminobutírico; 3,3-DiMeBut-OH, ácido 3,3-dimetilbutirico; DHB, ácido 2,5-di-hidroxibenzóico; Z-Dhb, ácido a,b-didesidro-a-aminobutirico; DIEA, N, N-diisopropiletilamina; DMF, N,N-dimetilformamida; EDO, clo-ridrato de l-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)carbidiimida; Etg, etilglicina; ESMS, espectroscopia de massa com elec-tro-pulverização; FABMS, espectroscopia de massa por bombardeamento atómico rápido; Fmoc, 9-fluorenilmetoxicar-bonilo; HATU, N-óxido do hexafluorofosfato de W-[(dime-tilamino)-1H-1,2,3-triazolo[4,5—b]piridin-l-il-metileno]-N-metilmetanamínio; 2-Hedo-OH, ácido 2,4-hexadienóico; Hep-OH, ácido heptanóico; HOAc, ácido acético; HOAt, 1-hidroxi-7-azabenzotriazole (3-hidroxi-3H-l,2,3-triazolo[4,5-b]pi-ridina); HOBt, 1-hidroxibenzotriazole; IBut-OH, ácido iso-butírico; 3-MeBut-OH, ácido 3-metilbutírico; 5-MeHex-OH, 27 ΡΕ1254162 ácido 5-metil-hexanóico; MeOH, metanol; 4-MePen-OH, ácido 4-metilpentanóico; NMM, N-metilmorfolina; 4-HOBut, 4-hidroxibutírico; (b-OH)Phe-OH, b-hidroxifenilalanina; Lit-OH, ácido litocólico; Pal, ácido palmitico, D-Phe-OH, a,b-didesidrofenilalanina; PyAOP, hexafluorofosfato de 7-azabenzotriazol-l-il-N-oxi-tris(pirrolidino)fosfónio;

PyBOP, hexafluorofosfato de benzotriazol-l-il-N-oxi-tris-(pirrolidino)fosfónio; SPS, síntese em fase sólida; TFA, ácido trifluoroacético; Tico-OH, ácido tetraicosanóico. Os símbolos do aminoácido estão na configuração L a menos que indicado em contrário. Todos as razões de solvente são volume/volume a menos que indicado em contrário.

Procedimentos Gerais. Cl-TrtCl-resina, derivados de Fmoc-aminoácidos protegidos, HOBt, PyBOP, HATU eram da PerSpetive Biosystems (Framingham, MA) , Bachem (Bubendorf, Suiça), NovaBiochem (Laufelfingen, Suiça) . Os alo-amino-ácidos foram preparados essencialmente tal como descrito por Dangles et al., ver Dangles, 0.; Guibé, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet, A., J. org. Chem., 1987, 52, 4984-4993 e 5-MeHex-0H através de síntese malónica. DIEA, DIPCDI, EDO, Piperidina, TFA eram da Aldrich (Milwaukee, WI) . DMF e CH2CI2 são da SDS (Peypin, França) . 0 acetonitrilo (grau HPLC) era da Scharlau (Barcelona, Espanha) . Todos os reagentes comerciais e solventes foram utilizados tal como recebidos com a excepção do DMF e do CH2CI2, que foram borbulhados com azoto para remover contaminantes voláteis (DMF) e armazenados sobre crivos moleculares de 4 Â activados (Merck, Darmstadt, Alemanha) 28 ΡΕ1254162 (DMF) ou CaCl2 (CH2CI2). Foram realizadas reacções em solução em balões de fundo redondo. Os extractos em solventes orgânicos foram secos com MgS04, seguido de remoção do solvente a pressões reduzidas e 40°C. Síntese em fase sólida foi realizada em seringas de propileno (20, 10 ml) equipadas com um disco poroso de polietileno. Os solventes e os reagentes solúveis foram removidos por sucção. A remoção do grupo Fmoc foi realizada com piperidina-DMF (2:8, v/v) (lxl min, 3x5 min, 1 x 10 min) . Lavagens entre os passos de desprotecçâo, ligação e novamente desprotecçâo foram realizados em DMF (5 x 0,5 min) e CH2CI2 (5 x 0,5 min) utilizando em cada tempo 10 ml solvente/g resina. As transformações e lavagens da síntese do pépetido foram realizadas a 25°C. As sínteses realizadas em fase sólida foram controladas por HPLC dos intermediários obtidos após a clivagem com TFA-H2O (9:1) durante 60 min uma aliquota (aprox. 10 mg) das colunas de de HPLC de resina de peptidilo [Kromasil Cis (Condições A-F)/C4 (Condições G, H] coluna de fase inversa, 4,6 x 250 mm, 10 mm) eram da Akzo Nobel (Bohum, Suécia). HPLC analítica foi realizada num equipamento Shimadzu compreendendo duas bombas de administração de solvente (modelo LC-6A), injec-tor automático (modelo SIL-6B), detector de comprimento de onda variável (modelo SPD-6A), controlador de sistema (modelo SCL-6B) e impressora (modelo C-R6A). A detecção UV foi a 220 nm e os gradientes lineares de CH3CN (+0, 036% TFA) em H20 (+0,045% TFA) foram realizados com um caudal de 1,0 ml/min: (Condição A) 1:9 a 10:0 ao longo de 30 min; 29 ΡΕ1254162 (Condição B) 3:7 a 10:0 ao longo de 30 min; (Condição C) 1:19 a 19:1 ao longo de 30 min; (Condição D) 45:55 a 90:10 ao longo de 30 min; (Condição E) 45:55 a 6:4 ao longo de 30 min; (Condição F) isocrático 1:1; (Condição G) 3:7 a 1:0 ao longo de 30 min; (Condição H) 1:1 a 1:0 ao longo de 30 min.

Análises MALDI-TOF e ES-MS das amostras do péptido foram realizadas num equipamento PerSeptive Biosystems Voyager DE RP, utilizando matrizes CHCA ou DHB, num espectrómetro Micromass VG-quattro. As amostras de péptido-resina foram hidrolisadas em HCl aquoso 12 N-ácido propiónico (1:1), a 155°C, durante 1-3 h e as amostras sem péptido foram hidrolisadas em HCl aquoso 6N, a 155°C, durante lh. Análises de aminoácidos subsequentes foram realizadas num autoanalisador Beckman System 6300. Espectroscopia de 1H-RMN (500 MHz, 200 MHz) e 13C-RMN (50 MHz) foi realizada em equipamentos Bruker DMX-500 (11,7 T) e Varian Gemini 200 (4,7 T) . Os desvios químicos (d) em relação ao TMF são expressos em partes por milhão. As constantes de acoplamento são expressas em hertz.

Kahalalide F (I)

Exemplo 1 H-D-Val-O-TrtCl-resina

Cl-TrtCl-resina (1 g, 1,35 mmol/g) foi colocada numa seringa de polipropileno de 20 ml com um disco filtro 30 ΡΕ1254162

de polietileno. A resina foi então lavada com CH2CI2 (5 x 0,5 min) e uma solução de Fmoc-D-Val-OH (92 mg, 0,27 mmol, 0,2 equiv.) e foi adicionado DIEA (471 ml, 2,7 mmol, 2 equiv.) em CH2CI2 (2,5 ml) e a mistura foi agitada durante 1 h. A reacção foi terminada por adição de MeOH (800 ml) após agitação de 15 min. O Fmoc-D-Val-O-TrtCl-resina foi sujeita aos seguintes lavagens/tratamentos com CH2C12 (3 x 0,5 min), DMF (3 x 0,5 min), piperidina-CH2Cl2-DMF (1:9,5:5,1, 1 x 10 min), piperidina-DMF (1:4, 1 x 15 min), DMF (5 x 0,5 min), isopropanol (2x1 min), DMF (5 x 0,5 min), MeOH (2x1 min) e seca-se sob vácuo. A carga foi calculada como sendo 0,15 mmol/g.

Exemplo 2

Fmoc-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-alloc)-D-alo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina

Fmoc-D-alo-Ile-OH (265 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-D-alo-Thr-OH (grupo hidroxi livre) (256 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e Fmoc-D-alo-Ile-OH (265 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) foram adicionados, sequencialmente, à atrás mencionada H-D-Val-O-TrtCl-resina utilizando HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 equiv) em DMF (2,5 ml). Em todos os casos, após 90 min de ligação, 0 teste de nin-hidrina foi negativo. A remoção do grupo Fmoc e as lavagens foram realizadas, tal como descrito nos Procedimentos Gerais. Alloc-Val-OH (211 mg, 10,5 mmol, 7 equiv) foi ligado a DIPCDI (163 mg, 1,05 mmol, 7 equiv) na presença de 31 ΡΕ1254162 DMAP (12,8 mg, 0,105 mmol, 0,5 equiv). Esta ligação foi repetida nas mesmas condições duas vezes. Uma aliquota da peptidilo-resina foi tratada com TFA-H20 (9:1) durante 60 min e HPLC (Condição A, tR 25,9 min) do produto em bruto obtido mostrou uma pureza de >98%. ESMS, calc. para C45H63N5O11, 849,5. Verificado: m/z 850,1 [M+H] + .

Exemplo 3 5-MelHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Alloc)-D-alo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina O grupo Fmoc foi removido e Fmoc-Orn(Boc)-OH (341 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-D-Pro-OH (253 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-D-Val-OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-Val-OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-Thr(tBu)-OH (298 mg, 0,75 mmol, 5 equiv), Fmoc-D-Val-OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e 5-MeHex-OH (98 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) foram, sequencialmente, adicionados ao peptidilo-resina anterior (Exemplo 2), utilizando HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 equiv) em DMF (2,5 ml). Em todos os casos, após 90 min de ligação, os testes de nin-hidrina e de cloranil (após incorporação de D-Val) foram negativos. A remoção do grupo Fmoc e as lavagens foram realizadas tal como descrito nos Procedimentos Gerais. Uma aliquota da peptidilo-resina foi tratada com TFA-H20 (9:1) durante 60 min e HPLC (Condição B, tR 17,2 min) do produto obtido em bruto após evaporação mostrou uma pureza de >82%. ESMS, calc. para C66Hn6Ni20i7, 1348,9. Verificado: m/z 1350 [M+H] + . 32 ΡΕ1254162

Exemplo 4 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Thr-Phe-Alloc)-D-alo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina O grupo Alloc foi removido com Pd(PPh3)4 (17,3 mg, 0,015 mmol, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (185 μΐ, 1,5 mmol, 10 equiv) sob atmosfera de Ar. Fmoc-Thr-OH (grupo hidroxi livre) (256 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e Alloc-Phe-OH (187 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) foram adicionados, sequencialmente, à peptidilo-resina anterior (Exemplo 3), utilizando HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 equiv) e DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 equiv) em DMF (2,5 ml). Em todos os casos, após 90 min de ligação, os testes de nin-hidrina foram negativos. A remoção do grupo Fmoc e as lavagens foram realizadas tal como descrito nos Procedimentos Gerais. Uma aliquota da peptidilo-resina foi tratada com TFA-H20 (9:1) durante 60 min e HPLC do produto obtido em bruto após evaporação mostrou uma pureza por HPLC (Condição B, tR 17,8 min) de >70%. ESMS, calc. para C79H132N14O20, 1597,0.

Verificado: m/z 1598,2 [M+H]+.

Exemplo 5 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-alo-Ile-D-Val-O-

TrtCl-resina 33 ΡΕ1254162 0 peptidilo-resina anterior (Exemplo 4) foi tratada com EDC (2,88 g, 15 mmol, 100 equiv), CuCl (891 mg, 9 mmol, 60 equiv) em CH2CI2-DMF (10:2) (12 ml) durante 6 dias. Após lavagens extensivas com DMF, CH2C12 e DMF, o grupo Alloc foi removido com Pd(PPh3)4 (17,3 mg, 0,015 mmol, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (185 μΐ, 1,5 mmol, 10 equiv) sob atmosfera de Ar. A carga final calculada por AAA foi de 0,11 mmol/g (92% de rendimento global). Uma aliquota do peptidilo-resina foi tratada com TFA-H2O (9:1) durante 60 min e HPLC (Condição B, tR 17,2 min) do produto obtido em bruto após evaporação mostrou uma pureza de >70%. ESMS, calc. para C75H126N14O17, 1495, 0. Verificado: m/z 1496,0 [M+H]+.

Exemplo 6

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-alo-Ile-D-Val-OH O péptido protegido foi clivado da resina (0,5 g, 55,9 pmol) por TFA-CH2CI2 (1:99) (5 x 30 seg) . Os filtrados combinados foram evaporados até à secura sob pressão reduzida e liofilizados para originar (48,5 pmol, 87% de rendimento) do composto do titulo com uma pureza de >70%, tal como confirmado por HPLC (Condição B, tR 25,7min). ESMS, calc. para C84H142N14O19, 1651,1. Verificado: m/z 1652,3 [M+H]+. ΡΕ1254162

Exemplo 7

Kahalalide F (I) . O péptido protegido (Exemplo 6) (40,0 mg, 24 μΐ) foi dissolvido em DMF (25 ml) e foram adicionados PyBOP (37,8 mg, 73 pmol, 3 equiv) e DEIA (25 ml, 145 pmol, 6 equiv). A mistura foi deixada a agitar durante lhe então o solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida. O péptido cíclico protegido foi dissolvido em TFA-H2O (19:1,5 ml) e a mistura foi deixada a agitar durante 1 h. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e então foi adicionada H20 (5 ml) e liofilizou-se. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de pressão média (Vydac Cie 15-20 pm, 300 Â, 240 x 24 mm), gradiente linear de 20% a 60% de acetonitrilo (+0,05% TFA) em água (+0,05% TFA) em 5 h (300 ml de cada solvente), 120 ml/h, detecção a 220 nm, para originar o produto do título (5,0 mg, 34 pmol, 14% de rendimento). MALDI-TOF-MS, calc para C75Hi24Ni40i6, 1477, 9. Verificado m/z 1478,7 [M+H]+, 1500,6 [M+Na]+, 1516,5 [M+K]+. O produto co- eluído por HPLC [Condição D (tR 12,5 min), E (tR, 17,4 min) e F (tR, 12,1 min)] com uma amostra autêntica de Kahalalide F. O espectro de 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) do composto foi idêntico ao do produto natural (dados mostrados na Tabela ΡΕ1254162 35

Tabela I RESÍDUO N-H Ha Ηβ OUTROS (Z)-Dhb 9,69 (s) - 6,34 (q, J= 7,0 Hz) 1,26(d,J=7,5Hz,y-CH3) D-alo-Ile 1 8,82 (d, J= 10,0 Hz) 4,31 1,73 1,31, 1,02, 0,77 (y-CH2, y-CH3, 5-CH3) L-Phe 8,79 (d, J= 5,5 Hz) 4,42 2,93 (m) 7,20 (1 H Ar, m) 7,28 (4H Ar, m) D-alo-Thr 8,56 (d, J= 8,0 Hz) 4,53 4,96 (m) 1,07 (δ, J=61,5 Hz, y-CH3) D-Val 3 8,10 (d, J= 8,5 Hz) 4,26 1,94 0,86 (2y-CH3) L-Om 7,95 (d, J=8,5 Hz) 4,49 1,48 (2 H) 1,67 (y-CH2), 2,74 (bs,õ-CH2) , 7,69 (ε- NH3+) D-alo-Ile 2 7,90(d) 4,37 1,69 1,30, 1,03, 0,77 (y-CH2, y-CH3, õ-CH3) D-Val 5 7,88(d) 4,23 1,96 0,84 (2y-CH3) L-Thr 7,82 (d, J=8,0 Hz) 4,26 3,97(m) 4,88 (D, J=5,0 Hz, OH), 0,98 (d, J=6,5 Hz, y-CH3) D-Val 2 7,62 (d, J= 8,5Hz) 4,46 2,17 0,77 (y-CH3) , 0,62 (d, J=7,0 Hz, y-CH3) L-Val 4 7,57 (d, J=8,5 Hz) 4,28 1,98 0,80 (2y-CH3) L-Val 1 6,76 (d, J— 9,0Hz) 3,86 1,39 0,62 (d, J= 7,0Hz, y-CH3) , 0,58 (d, J= 6,0 Hz, y-CH3) , D-Pro - 4,36 2,03, 1,87, 1,79 (β-ΟΗ2, y-CH2), 3,76 (1H, m, 5-CH2) , 3,53 (1H, m, -CH2) 5-MeHex - 2,13 (2 H) 1,47 (β-ΟΗ2, o, δ-CH), 1,11 (y-CH2) , 82 (2ε-ΟΗ3) 36 ΡΕ1254162

Kahalalide F (I)

Exemplo 8

Alloc-Phe-Thr-OtBu H-Thr-OtBu-HCl (3,1 g, 15 mmol, 1,3 equiv) foi dissolvido em CH2C12 (30 ml) e DEIA (2,9 ml, 17 mmol, 1,5 equiv) foi aficionado e a mistura foi deixada a agitar durante 30 min. Alloc-Phe-OH (2,8 g, 11 mmol, 1 equiv) e EDC (2,8 g, 15 mmol, 1,3 equiv) em CH2C12 (35 ml) foi então adicionado e a mistura reaccional foi agitada durante 18 h. A mistura reaccional orgânica foi lavada com H20 (3 x 25 ml) , seca (MgS04) e concentrou-se in vácuo. O óleo resultante (4,12 g) foi purificado por cromatografia rápida [CHCl3-MeOH-HOAc (9:1:0,2)] para originar o composto do titulo (3,25 g, 8 mmol, rendimento de 71%), que foi caracterizado por HPLC analitica (tR 20,9 min, >98% pureza; Condição C) ; ESMS calc. para C2iH3oN206, 406,2. Verificado

m/z 408,0 [M+H]+; 1H-RMN (200 MHz, CDC13) ; 7,1-7,3(5H, m, Ar); 6,89 (1H, d, J = 8,8 MHz, NH) ; 5,7-5,9 (1H, m, CH alil); 5,56 (1H, d; J = 8 Hz, OH); 5,2-5,3 (2H, m, CH2 g-alil); 4,52 (2H, d, J = 5,4 Hz, CH2 alil); 4,45 (1H, dd, J = 8,4 Hz, 2m8 Hz, a-CH Thr); 4,22 81H, dq, J = 6,2 Hz, J = 3,0 Hz, b-CH Thr); 3,0-3,2 (2H, m, b-CH2 Phe); 1,47 (9H, s, tBu) ; 1,15 (3H, d, J = 6, 6 Hz, g-CH3 Thr); 13C-RMN (50 MHz, CDC13) ; 172,2 (CO) , 169,5 (CO) ; 156,0 (CO) ; 136,1 (Cq, Ar) ; 132,5 (CH, alil); 129,3 (CH, Ar); 128,5 (CH, Ar); 117,7 37 ΡΕ1254162 (CH2, alil) ; 82,7 (Cq, tBu) ; 68,5 (b-CH Thr) ; 65,9 (CH2, alil) ; 129,3 (CH, Ar); 128,5 (CH, Ar); 126,9 (CH, Ar); 117,7 (CH2, alil); 82,7 (Cq, tBu); 68,5 (b-CH Thr); 65,9 (CH2, alil); 58,0 (a-CH Thr); 56,2 (a-CH Phe); 38,3 (b-CH2 Phe); 28,0 (CH3, tBu); 20,8 (g-CH3 Thr).

Exemplo 9

Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu

Alloc-Phe-thr-OtBu (3,25 g, 8,0 mmol), EDC (9,90 g, 52 mmol, 6,5 equiv) e CuCl (2,14 g, 22 mmol, 2,7 equiv) foi dissolvido em CH2C12-DMF anidro (65 ml, 12:1) sob N2 e a mistura foi deixada a agitar durante 2 dias sob N2. O solvente orgânico foi removido in vácuo e o resíduo foi tomado numa solução saturada de EDTA (100 ml), que foi extractada com EtOAc (3 x 50 ml) . A solução orgânica combinada foi lavada com água salgada (3 x 60 ml) seca (MgS04) e concentrada in vácuo para originar um sólido amarelo claro (2m8 g), que foi purificado por cromatografia rápida [CHCl3-MeOH-HOAc (9:1:0,1)] para originar o composto do título (2,6 g, 6,7 mmol, rendimento de 84%), que foi caracterizado por HPLC analítica (tR 23,1 min, >95% pureza; Condição C) ; ESMS calc. para C2iH28N205, 388,2. Verificado m/z 389, 6 [M+H]+; 1H-RMN (200 MHz, CDC13) ; 7,2-7,4 (5H, m,

Ar); 6,89 (1H, d, J = 7,4 MHz, CH Dhb); 5,8-6,0 (1H, m, CH alil); 5,2-5,3 (2H, m, CH2 g-alil) ; 4,5-4,6 (2H, m, a-CH2 alil); 3,1-3,3 (2H, m, b-CH2 Phe); 1,67 (3H, d, J = 7,2 Hz, 38 ΡΕ1254162 CH3 Dhb) ; 1,47 (9H, s, tBu) ; 13C-RMN (50 MHz, CDC13) ; 168,9 (CO), 163,1 (CO); 156,0 (CO); 136,0 (Cq, Ar); 132,6, 132,3 (CH, alil; b-CH Dhb); 129,3 (CH, Ar); 128,7 (CH, Ar); 127,0 (CH, Ar); 117,9 (CH2, alil); 81,7 (Cq, tBu); 66,0 (CH2, alil); 56,3 (a-CH, Phe); 38,2 (b-CH2 Phe); 28,0 (CH3, tBu); 14,7 (CH3, Dhb).

Exemplo 10

Alloc-Phe-Z-Dhb-OH.

Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu (2,6 g, 6,7 mmol) foi dissolvido em TFA-CH2C12-H20 (90:8:2, 5, 5 ml) e a mistura foi deixada a agitar durante 3 h. A mistura reaccional orgânica foi concentrada in vácuo para originar o composto do titulo (2,2 g, 6,6 mmol, rendimento de 99%), que foi caracterizado por HPLC analítica (ír 17,0 min, >95% pureza; Condição C) ; ESMS calc. para Ci7H20N2O5, 332,1. Verificado m/z 333, 7 [M+H]+; 1H-RMN (200 MHz, CD3OD) ; 7,2-7,3 (5H, m,

Ar); 6,84 (1H, g, J = 7,2 Hz, CH Dhb); 5,8-6,0 (1H, m, CH alil); 5,1-5,3 (2H, m, CH2 g-alil) ; 4,4-4,5 (2H, m, a-CH2 alil); 3,2-3,3 (1H, m, b-CH2 Phe); 2,8-3,0 (1H, m, b-CH2

Phe); 1,66 (3H, d, J = 7,4 Hz, CH3 Dhb); 13C-RMN (50 MHz, CD3OD): 173,1 (CO); 138,5 (Cq, Ar); 136,7, 134,1 (CH; alil; b-CH Dhb); 130,3 (CH, Ar); 129,4 (Ch, Ar); 127,7 (CH, Ar); 117,4 (CH2, alil); 66,6 (CH2, alil); 57,8 (a-CH Phe); 39,1 (b-CH2 Phe); 14,1 (CH3 Dhb). 39 ΡΕ1254162

Exemplo 11 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc) -D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Alloc)-D-alo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina.

Cl-TrtCl-resina (0,45 g, 1,35 mmol/g) foi colocado numa seringa de polipropileno de 10 ml com um disco de polietileno. O peptidilo-resina foi obtido a seguir ao mesmo procedimento descrito nos Exemplos 1-3 excepto que na ligação do primeiro aminoácido (Fmoc-D-Val-OH) à resina foi utilizado 0,3 equiv em vez de 0,2 equiv. A carga inicial calculada por AAA foi de 0,29 mmol/g. Depois dos amino-ácidos estarem ligados, uma aliquota de peptidilo-resina foi tratada com TFA-H20 (9:1) durante 60 min e HPLC (Condição B, tR 17,3 min) do produto em bruto obtido após evaporação mostrou uma pureza de >80%. ESMS calc. para C66H116N12O17, 1348, 9. Verificado m/z 1350, 1 [M+H] + .

Exemplo 12 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-Alloc)-D-alo-Ile-D-Val-O-TrtCl-resina (via incorporação do dipéptido). O peptidilo-resina foi tratado com Pd(PPh3)4 (15,1 mg, 0,013 mmol, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (161 μΐ, 1,3 mmol, 10 equiv) sob atmosfera de Ar, para remoção 40 ΡΕ1254162

do grupo Alloc. Alloc-Phe-Z-Dhb-OH (217 mg, 0,65 mmol, 5 equiv) e HATU (249 mg, 0,65 mmol, 5 equiv) foram dissolvidos em DMF (1,25 ml) e adicionados ao peptidilo-resina, e então adicionou-se DIEA (228 μΐ, 1,3 mmol, 10 equiv) e a mistura foi agitada durante a noite. Após as lavagens, a ligação foi repetida com a mesma quantidade de reagentes durante 3 h, quando o teste de nin-hidrina foi negativo. Após as lavagens com DMF e CH2C12, uma aliquota do peptidilo-resina foi tratada com TFA-H20 (9:1) durante 60 min e HPLC (Condição B, tR 18,3 min) do produto em bruto obtido após evaporação mostrou uma pureza de >80%. ESMS calc. para C79H130N14O19, 1579,0. Verificado m/z 1602,2 [M+Na]+, 1618,2 [M+K]\

Exemplo 13 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc) -D-alo-Ile-D-alo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-alo-Ile-D-Val-OH. O grupo Alloc do peptidilo-resina (Exemplo 12) foi removido com Pd(PPh3)4 (15,1 mg, 0,013 mmol, 0,1 equiv) na presença de PhSiH3 (161 μΐ, 1,3 mmol, 10 equiv) sob atmosfera de Ar. A carga final calculada por AAA foi de 0,16 mmol/g (rendimento global de 79%). O péptido protegido foi clivado da resina (235 mg, 37,5 mmol) por TFA-CH2C12 (1:99) (5 x 30 seg) . Os filtrados combinados foram evaporados até à secura sob pressão reduzida e liofilizados, para originar 40,5 mg (24,5 mmol, 65%) do 41 ΡΕ1254162 composto do título com uma pureza de >80%, tal como verificado por HPLC (Condição B, ír 24,3 min). MALDI-TOF-MS, calc. para C84H142N14O19, 1651,1. Verificado m/z 1674,8 [M+K] +.

Exemplo 14

Kahalalide F (I) O péptido protegido (Exemplo 13) (38,5 mg, 23 ymol) foi dissolvido em DMF (25 ml) e foram adicionados PyBOP (36,4 mg, 70 pmol, 3 equiv) e DIEA (24 ml, 140 ymol, 6 equiv). A mistura foi deixada a agitar durante lhe então o solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida. O péptido cíclico protegido foi dissolvido em TFA-H2O (19:1, 5 ml) e a mistura foi deixada a agitar durante 1 h. O solvente foi removido por evaporação sob pressão reduzida e então adicionou-se H20 (5 ml) e liofilizou-se. O produto em bruto foi purificado, tal como descrito no Exemplo 7 para originar 0 produto do título (3,6 mg, 2,4 ymol, rendimento de 10%), que foi idêntico ao obtido no Exemplo 7. 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (estrutura atribuída a Kahalalide F por Goetz, G., et al. Tetrahedron, 1999, vol. 55, p. 7739-7746) 42 ΡΕ1254162

Exemplo 15 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-Val-D-Pro-0rn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (via desidratação em fase sólida).

Foram realizados procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7 com a única excepção de que, no Exemplo 3, Fmoc-Val-OH foi incorporado no D-Pro-peptidilo-resina e então, após a remoção do grupo Fmoc, o Fmoc-D-Val-OH foi incorporado. A carga final calculada por AAA foi de 0,106 mmol/g (rendimento global de 87%), o rendimento de clivagem foi de 83% e obteve-se 4,7 mg do composto do titulo, o que representou um rendimento global de 13% nos passos ciclização, desprotecção e purificação. Este produto eluido em HPLC 0,8-1,9 min depois do que uma amostra autêntica da Kahalalide F [Condição D (tR 13,3 vs 12,5 min), E (tR 18,8 vs 17,4 min) e F(tR 14,0 vs 12,1 min)]. MALDI-TOF-MS, calc. para C75H124N14O16, 1479, 9.

Verificado m/z 1478,8 [M+H]+, 1500,7 [M+Na]+, 1516,6 [M+K]+. O espectro de 1H-RMN (500 MHz, d6-DMSO) do composto (Tabelas II e III) era diferente do obtido para uma amostra autêntica de Kahalalide F. A maior diferença foi a de que o composto sintético obtido, apresentava duas conformações devido ao equilíbrio cis-trans entre os 43 ΡΕ1254162 resíduos L-Val-D-Pro que não se observava quer no produto natural quer no isómero obtido no exemplo 7.

Tabela II (Isómero trans, mais abundante) RESÍDUO N-H Ha Ηβ OUTROS (Z)-Dhb 9,67 (s) - 6,33 (q) 1,27 (d, J=7,0 Hz, y- CH3) D-alo-Ile 1 8,80 (d) 4,31 1,73 1,32, 0,77 (y-CH2, γ- CH3, õ-CH3) L-Phe 8,78 (d, J= 5,5 4,43 2,93 (m) 7,20 (1H Ar, m) 7,28 Hz) (4H Ar, m) D-alo-Thr 8,58 (d, J = 4,53 4,95 (m) 1,07 (d, J=6,5Hz, γ- 9,0 Hz) CH3) L-Val 3 7,97 (d, J= 8,0 4,34 1,94 0,84 (2y-CH3) Hz) L-Orn 7,77 (d, J= 8,5 4,47 1,46 (2 H) 1,66 (y-CH2), 2,72 Hz) (bs,õ-CH2) , 7,66 (ε- NH3+) D-alo-Ile 2 7,87 (d, J= 8,5 4,37 1,68 0,75 (õ-CH3 ou d-CH3 e Hz) Y-CH3) D-Val 5 7,90 4,22 1,95 0,85 (2y-CH3) L-Thr 7,90 (d) 4,24 4,02 4,98 (OH), 1,02 (γ- CH3) D-Val 2 7,63 (d, J= 4,45 2,18 0,77 (γ-ΟΗ3), 0,62 (γ- 8,5Hz) CH3) D-Val 4 7,56 (d, J= 9,0 4,34 2,02 0,84 (y-CH3), 0,79 (γ- Hz) CH3) L-Val 1 6,75 (d) 3,86 1,39 0,62(2y-CH3) D-Pro - 4,30 2,03, 1,81, 1 73 (β-ΟΗ2, y-CH2) , 3,73 (1H, m, õ-CH2 ), 3,52 (1H, m, õ-CH2) 5-MeHex - 2,08 1,48 (b-CH2, δ -CH)( 1,11 (y-CH2) , 0,82 (1H) (2ε-ΟΗ3) 2,15 44 ΡΕ1254162 (1H)

Tabela III (Isómero cis, menos abundante) RESÍDUO N-H Ha Ηβ OUTROS (Z)-Dhb 9,63 (s) - 6,33 (q) 1,28 (d, J= 6,5 Hz, γ- CH3) D-alo-Ile 1 8,76 (d) 4,30 1,71 1,33, 0,76 (y-CH2, γ- CH3, õ-CH3) L-Phe 8,78 (d, J= 5,5 4,43 2,93 (m) 7,20 (1H Ar, m) 7,28 Hz) (4H Ar, m) D-alo-Thr 8,58 (d, J=9,0 4,53 4,95 (m) 1,00 (y-CH3) Hz) L-Val 3 8,06 (d, J=8,5 4,11 1,81 0,71 (γ-ΟΗ3), 0,60 (γ- Hz) CH3) L-Orn 8,37 (d, J= 4,62 1,52 (2H) 1,64 (y-CH2) ,2,78 (bs, 9,0Hz) õ-CH2), 7,66 (ε-ΝΗ3+) D-alo-Ile 2 8,09 (d,J= 9,0 4,42 1,64 0,77 (õ-CH3 ou d-CH3 e Hz) Y-ch3) D-Val 5 7,90 4,22 1,95 0,85 (2y-CH3) L-Thr 7,88 (d) 4,23 3,99 4,93 (OH), 1,02 (γ- CH3) D-Val 2 7,63 (d, 4,45 2,18 0,77 (y-CH3), 0,62 (γ- J=8,5Hz) CH3) D-Val 4 7,49 (d, 4,34 1,94 0,79 (γ-ΟΗ3) , 0,73(γ- J=9,0Hz) CH3) L-Val 1 6,72 (d) 3,84 1,38 0,62 (2y-CH3) D-Pro - 4,93 2,06, 1,89, 1 75 (β-ΟΗ2, y-CH2) , 3,33 (m, õ-CH2) 5-MeHex - 2,08 1,48 (β-ΟΗ2, δ -CH); 1,11 (y-CH2) , 0,82 (1H) (2ε-ΟΗ3) 2,15 (1H) 45 ΡΕ1254162

Exemplo 16 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-Val-D-Pro-0rn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (via incorporação do dipéptido).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 8-14 com a única excepção de que, tal como no Exemplo 14, Fmoc-Val-OH foi incorporado em D-Pro-peptidilo-resina e então, após remoção do grupo Fmoc, o Fmoc-D-Val-OH foi incorporado. A carga final calculada por AAA foi de 0,16 mmol/g (rendimento global de 79%), o rendimento da clivagem foi de 78% e foi obtido 3,4 mg do composto do titulo, que representou 10% do rendimento global nos passos de ciclização, desprotecção e purificação. O produto purificado era idêntico ao obtido no Exemplo 15.

Exemplo 22

But-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por But-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 14,7 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C72H118N14O16, 1435,9. Verificado m/z 1459,6 [M+Na]+, 1475,6 46 ΡΕ1254162 [Μ+Κ]+.

Exemplo 23 3-MeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-0rn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 3-MeBut-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 15,9 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C73H120N14O16, 1449, 9. Verificado m/z 1473,2 [M+Na]+, 1489,2 [M+K]+.

Exemplo 23bis: omitido

Exemplo 24 3,3-DiMeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 3,3-DiMeBut-OH. O produto foi 47 ΡΕ1254162 caracterizado por HPLC (tR 16,3 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74H122N14O16, 1463, 9. Verificado m/z 1487,4 [M+Na]+, 1503,6 [M+K]+.

Exemplo 25 4-MePen-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 4-MePen-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 16,5 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74H122N14O16, 1463, 9. Verificado m/z 1487,7 [M+Na]+, 1503, 6 [M+K]+.

Exemplo 26

Hep-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) .

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por Hep-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 17,5 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C75Hi24Ni4Oi6, 1477, 9. Verificado m/z 1501,4 [M+Na]+, 1517,5 48 ΡΕ1254162 [Μ+Κ] +.

Pal-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por Pal-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 22,1 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C84H142N14O16, 1603,1. Verificado m/z 1626, 9 [M+Na]+, 1642,9 [M+K]+.

Exemplo 27a 4-DiMeABut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 4-DiMeABut-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 12,0 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74Hi23N15Oi6, 1477, 9. Verificado m/z 1478,6 [M+H]+, 1500,6 [M+Na]+, 1516,6 [M+K]+.

Exemplo 27b 2-Hedo-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile- 49 ΡΕ1254162 ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 2-Hedo-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 15,8 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74H118N14O16, 1458, 9. Verificado m/z 1460, 0 [M+H]+, 1482,0 [M+Na]+, 1497, 9 [M+K]\

Exemplo 27c 4-AcBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 4-AcBut-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 18,2 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74H120N14O18, 1492,9. Verificado m/z 1493, 7 [M+H]+, 1515,8 [M+Na]+, 1531,7 [M+K]+.

Exemplo 27d 4-HOBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val). 50 ΡΕ1254162

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por 4-DiMeABut-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 16,6 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C74H123N15O16, 1477,9. Verificado m/z 1478, 6 [M+H]+, 1500,6 [M+Na]\ 1516,6 [M+K]\

Exemplo 27e

Ac-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por HOAc-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 17,0 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C70H114N14O16, 1406, 9. Verificado m/z 1407, 8 [M+H]+, 1429,8 [M+Na]+.

Exemplo 27f TFA-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-lle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Obtido como produto secundário durante a prepa- 51 ΡΕ1254162 ração (trifluoroacetilion durante o passo de ciclização) do Exemplo 27e. 0 produto foi caracterizado por HPLC (tR 14,7 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C70H111F3N14O16, 1460,8. Verificado m/z 1462,0 [M+H]+, 1484,1 [M+Na]+, 1500,0 [M+K]+.

Exemplo 27g

AcButABut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por AcButBut-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 14,1 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C78H126N14O20, 1578,9. Verificado m/z 1581,2 [M+H]+, 1602,2 [M+Na]+, 1618,2 [M+K]+.

Exemplo 27k

Ibut-D-alo-Ile-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por Fmoc-D-alo-Ile-OH. O produto foi 52 ΡΕ1254162 caracterizado por HPLC (tR 15,3 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C78H129N15O17, 1548,0. Verificado m/z 1548,8 [M+H]+, 1570,8 [M+Na]+, 1586,8 [M+K]+.

Exemplo 27i

Lit-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por Lit-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 13,1 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C92H150N14O17, 1723, 1. Verificado m/z 1724,6 [M+H]+, 1746,6 [M+Na]+, 1761,5 [M+K]+.

Exemplo 27j TFA-Lit-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Obtido como produto secundário durante a preparação (trifluoroacetilion durante o passo de ciclização) do Exemplo 27i. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 17,1 min, Condição H) e MALDI-TOF-MS, calc. para C94H159F3N14O18, 1819,1. Verificado m/z 1820,6 [M+H]+, 1842,6 [M+Na]+, 1858,6 [M+K]+. 53 ΡΕ1254162

Exemplo 27k

Tlco-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex ser substituído por Tlco-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 16,8 min, Condição H) e ES-MS, calc. para C92Hi58Ni4Oi6, 1715,2. Verificado m/z 858,2 [M+H]+/2, 1404,3 [M+K] +.

Exemplo 28 H-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, começando com 200 mg de resina, com a única excepção de, no Exemplo 3, o 5-MeHex não ter sido incorporado. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 11,6 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C68H112N140i5, 1364,8. Verificado m/z 1388,3 [M+Na]+, 1404,3 [M+K] +.

Exemplo 29 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-D-alo-Ile- 54 ΡΕ1254162 ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) .

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, mas de acordo com o esquema 2. OHff m 0 Ό 9 \ SMfessHAâá:} ^sl^D«t^slí^&Vaí-0I04^2BNHn*"HI iSStenHAa»} e-aeíIt»fâ«t^Míâlíe-{iVBM3H Ç^ahZBhfe-PhMf

I fSKhssHíM®) ^aSiMíaT^oelle^iíWiá ^ o-v«~-3S*MMn<* A síntese inicia-se com 200 mg de resina e não foi incorporado Fmoc-Orn(Boc)-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 23,9 min, Condição A) e MALDI-TOF-MS, calc. para C70H114N12O15, 1362,9. Verificado m/z 55 ΡΕ1254162 1386.4 [M+Na]+, 1402,4 [M+K]+.

Exemplo 30 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, mas de acordo com o Esquema 2. A sintese inicia-se com 200 mg de resina, e não foi incorporado Fmoc-Orn(Boc)-OH e Fmoc-D-Pro-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 20,3 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C65H107N11O14, 1265, 8. Verificado m/z 1288.5 [M+Na]+, 1304,5 [M+K]+.

Exemplo 31 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-alo-Ile-ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, mas de acordo com o Esquema 2. A sintese inicia-se com 200 mg de resina, e não foi incorporado Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH e Fmoc-D-Val-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 20,0 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C60H98N10O13, 1166,7. Verificado m/z 1190,9 [M+Na]+, 1206,9 [M+K]+. ΡΕ1254162

Exemplo 32 5-MeHex-D-Val-Thr-D-alo-lle-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, mas de acordo com o Esquema 2. A sintese inicia-se com 200 mg de resina, e não foi incorporado Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH e Fmoc-D-Val-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 24,6 min, Condição A) e MALDI-TOF-MS, calc. para C55H89N9O12, 1067,7. Verificado m/z 1068, 9 [M+H]+, 1090,6 [M+Na] +, 1106,5 [M+K] +.

Exemplo 33 5-MeHex-D-Val-D-alo-Ile-ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Foram utilizados os procedimentos experimentais tal como descritos nos Exemplos 1-7, mas de acordo com 0 Esquema 2. A sintese inicia-se com 200 mg de resina, e não foi incorporado Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-D-Val-OH e Fmoc-Thr (tBu)-OH. O produto foi caracterizado por HPLC (tR 19,8 min, Condição B) e MALDI-TOF-MS, calc. para C5iH82N8Oio, 966, 6. Verificado m/z 990,7 [M+Na]+, 1007,2 [M+K]\ ΡΕ1254162 57

BIOACTIVIDADE A bioactividade dos compostos deste invento com o composto de fórmula (I) sendo a estrutura de Kahalalide F de acordo com Rinehart é demonstrada pelos resultados nas tabelas seguintes de acordo com a metodologia de Berjeron et al., Biochem and Bioph Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854. As linhas de células são P388, linfoma murino; A549, carcinoma do pulmão humano; HT-29, carcinma do cólon humano; MEL-28, melanoma humano; DU-145, carcinoma da próstata humana.

Tabela

Congéneres de Kahalalide F Composto Ciclo Cadeia** PM 27 j Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: TFA-Lit- 1820 27i Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: litocoloil (Lit) 1724 27 Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: palmitoil Palm 1604 27g Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: 4-(4-acetoxibuta-noiloxi)-butiril (AcButBut-) 1579 27h Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Ibut-D-alo-Ile-D-Val-L-Thr- L-Val-D-Val-D-Pro-L-Om-D- alo-Ile- 1548 27c Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: 4-acetoxibutiril (4-AcBut) 1493 27a Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: N,N-dimetil-4-aminobutiril (4-DiMeABut) 1478 58 ΡΕ1254162 (como Ciclo (D-alo-Thr-D-alo- 5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-L- 1477 Scheuer) 15 Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Val-D-Pro-L-Orn-D-alo-Ile- ΡΕ1254162 59 (continuação)

Conqéneres de Kahalalide F Composto Ciclo Cadeia** PM 26 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: Heptanoil (Hep) 1477 (Rinehart) Ciclo (D-alo-Thr-D-alo- 5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-L- 1477 7 Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Val-D-Pro-L-Orn-D-alo-Ile- 24 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Va1-Phe-Z-Dhb-Va1) Terminal: 3,3-dimetilbutiril (3,3-DiMeBut) 1463 25 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo- Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal-Metilpentanoil (4- MePen) 1463 27f Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: trifluoroacetil (TFA) 1461 27b Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: 2,4-hexadienoil (Hedo) 1459 27d Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal 4: 4-hidroxibutiril 1451 23 Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: 3-Metilbutiril (3-MetBut) 1451 22 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: Butiril (But) 1435 27c Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: acetil 1407 28 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) Terminal: sem ácido gordo 1365 29 Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro—D-alo-Ile- 1363 31 Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D- alo-Ile- 1167 32 Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) 5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-alo- Ile- 1068 ** Compostos em que a cadeia é indicada Terminal possuem a mesma cadeia que no composto 7, mas com a substituição indicada do 5-MeHex ΡΕ1254162 60

Tabela

Citoxicidade dos congéneres de Kahalalide F Valores de IC50 (molar) para os derivados Composto A549M DU145M HT2 9M MEL28M P388M 27 j 5,49E-08 5,49E-08 5,49E-08 5,49E-08 2,7 5E-0 6 27i 5,80E-07 5,80E-07 2,90E-08 1,45E-07 1,45E-06 27 1,58E-07 3,12E-08 6,23E-08 6,23E-08 3,12E-0 6 27g >6,33E-07 >6,33E-07 1,58E-06 3,17E-06 >3,17E-06 27h NA NA NA NA NA 27c NA NA β,70E-07 3,35E-06 NA 27a NA NA NA NA NA (como Scheuer) 15 >3,39E-06 3,39E-06 3,39E-06 >3,39E-06 >3,39E-06 26 3,39E-07 3,39E-08 6,77E-07 1,69E-06 3,39E-06 (Rinehart) 7 3,39E-07 1,69E-07 3,39E-08 3,39E-07 >3,39E-08 24 1,71E-06 3,42E-07 3,42E-07 3,42E-06 >3,42E-06 25 3,42E-07 3,42E-07 >3,42E-06 >3,42E-0 6 >3,42E-06 27f NA 3,42E-06 >3,42E-06 3,42E-06 3,42E-0 6 27b 3,43E-07 6,85E-06 3,43E-06 NA NA 27d NA NA NA NA NA 23 >3,45E-06 >3,45E-07 >3,45E-08 >3,45E-07 >3,45E-06 22 >3,48E-06 1,74E-06 NA NA NA 27c NA >3,55E-0 6 >3,55E-06 >3,55E-0 6 >3,55E-06 28 >3,66E-06 >3,66E-06 >3,66E-06 >3,66E-06 >3,66E-06 29 >3,67E-0 6 >3,67E-0 6 >3,67E-06 >3,67E-0 6 >3,67E-06 31 >4,28E-07 >4,28E-08 >4,28E-06 >4,28E-0 6 >4,28E-0 6 32 NA NA 4,68E-06 4,68E-06 >4,68E-0 6 61 ΡΕ1254162

REFERÊNCIAS

Hamann, M.T.; Scheuer, P.J.J. J. Am. Chem. Soc., 1983. "Kahalalide F: a Bioactive Depsipeptide from the Sacoglossan Mollusk Elysia refescens and the Green Alga Bryopsis sp.", vol. 115, p. 5825-5826.

Hamann, M.T. et al. J. Org. Chem., 1996, "Kahalalides: Bioactive Peptides from Marine Mollusk Elysia rufescens and its algal Diet Bryopsis sp.", vol. 61, p. 6594-6660.

Garcia-rocha, M., et al. Câncer Lett., 1996 "The Antitumoral Compound Kahalalide F Acts on Cell Lisosomes", vol. 99, p. 43-50.

Hamann, M.T. et al. J. Org. Chem., 1996, "Kahalalides: Bioactive Peptides from Marine Mollusk Elysia rufescens and its algal Diet Bryopsis sp.", vol.63, p. 485 (Correcção de J. Org. Chem., 1996, vol. 61, p. 6594-6660).

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Goetz, G.; et al. J. Nat. Prod., 1997. "Two Acyclic Kahalalides from the Sacoglossan Mollusk Elysia rufescens". Vol. 60, p. 562-567. 62 ΡΕ1254162

Goetz, G.; et al. Tetrahedron 1999. The Absolute Stereochemistry of Kahalalide F", vol.55, 7739-7746.

Kan, Y. et al., J. Nat. Prod., 1999, vol.62, p. 1169-1172.

Horgen, F.D. et al. J. Nat. Prod., 2000, vol.63, p. 152-154.

Lisboa, 22 de Novembro de 2007

Claims (23)

1. ΡΕ1254162 1 REIVINDICAÇÕES 1. Derivado de kahalalide F, possuindo o deri vado uma estrutura com uma parte cíclica e uma cadeia lateral derivada da fórmula (I) :

   diferindo o derivado da cadeia lateral da fórmula (I) em um ou mais dos seguintes aspectos: 1 ou 2 aminoácidos que não são o mesmo que o amino-ácido na cadeia lateral da estrutura da fórmula (I), ou que são omitidos; 1 a 10 grupos metileno adicionais no grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 1 a 6 grupos metileno omitidos do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); e 1 a 3 substituintes adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I). 2 ΡΕ1254162
2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que 1 a 10 grupos metileno são adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).
3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que 1 a 6 grupos metileno são adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).
4. 4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que 1 a 6 grupos metileno são omitidos do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).
5. 5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que 1 a 3 substituintes são adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I) .
6. 6. Composto de acordo com a reivindicação 5, em que os substituintes são halogéneos.
7. 7. Composto de acordo com a reivindicação 1, que difere da fórmula (I) em um ou mais dos seguintes aspectos: 1 aminoácido que não é o mesmo aminoácido que na estrutura de fórmula (I) ; 1 grupo metileno adicional no grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 3 ΡΕ1254162 1 grupo metileno omitido do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 1 substituinte adicionado ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).
8. 8. Derivado de acordo com a reivindicação 1, em que as diferenças da cadeia lateral da fórmula (I) são um ou mais dos seguintes aspectos: 1 a 10 grupos metileno adicionais no grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 1 a 6 grupos metileno omitidos do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); e 1 a 3 substituintes adicionados ao grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I).
9. 9. Derivado de acordo com a reivindicação 1, em que as diferenças da cadeia lateral da fórmula (I) são um ou mais dos seguintes aspectos: 1 a 10 grupos metileno adicionais no grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I); 1 a 6 grupos metileno omitidos do grupo acilo da cadeia lateral da estrutura de fórmula (I)
10. 10. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que 1 ou 2 aminoácidos que não são o mesmo que o aminoácido na cadeia lateral da estrutura da fórmula (I) são omitidos e a omissão é na cadeia lateral da estrutura. 4 ΡΕ1254162
11. 11. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que o 5-MeHex é substituído por um grupo terminal alquilo, alcenilo, alcinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroalquilo ou alicíclico.
12. 12. Composto de acordo com a reivindicação 11, com um grupo terminal alquilo.
13. 13. Composto de acordo com a reivindicação 12, em que o grupo terminal alquilo possui de 4 a 10 átomos de carbono.
14. 14. Composto de acordo com a reivindicação 13, em que o grupo terminal alquilo possui 1 ou mais grupos metilo ou etilo ramificando em pontos distais em relação ao ponto de ligação ao resto da molécula.
15. 15. Composto de acordo com a reivindicação 12, 13 ou 14 em que o grupo alquilo possui um único grupo metilo ramificado.
16. 16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 15, em que o grupo alquilo é substituído com halogéneo, hidroxi, alcoxi, amino, carboxilo, carboxa-mido, ciano, nitro, alquilsulfonilo, alcoxi, alcoxialquilo, arilalquilarilo, heterociclo, aliciclo, arilo e aralquilo.
17. 17. Composto que tem a fórmula: 5 ΡΕ1254162 Parte cíclica Cadeia lateral** Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: TFA-Lit- Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: litocoloil (Lit) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: palmitoil Palm Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 4-(4-acetoxibutanoiloxi)- Phe-Z-Dhb-Val) butiril (AcButBut-) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- IBut-D-alo-Ile-D-Val-L-Thr-L-Val-D- Phe-Z-Dhb-Val) Val-D-Pro-L-Orn-D-alo-Ile- Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 4-acetoxibutiril (4- Phe-Z-Dhb-Val) AcBut) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: N,N-dimetil-4- Phe-Z-Dhb-Val) aminobutiril (4-DiMeABut) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- 5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-L-Val-D- Phe-Z-Dhb-Val) Pro-L-Orn-D-alo-Ile- Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: Heptanoil (Hep) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 3,3-dimetilbutiril (3,3- Phe-Z-Dhb-Val) DiMeBut) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 4-Metilpentanoil (4- Phe-Z-Dhb-Val) MePen) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: trifluoroacetil (TFA) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 2,4-hexadienoil (Hedo) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal 4: 4-hidroxibutiril Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: 3-Metilbutiril (3-MetBut) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: Butiril (But) Phe-Z-Dhb-Val) Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- Terminal: acetil Phe-Z-Dhb-Val) PE1254162 6 (continuação) Parte cíclica Cadeia lateral** Ciclo (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D- Phe-Z-Dhb-Val) Pro—D-alo-Ile- Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val- 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D- Phe-Z-Dhb-Val) alo-Ile- Ciclo(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-D-alo-Ile- ** Compostos em que a cadeia é indicada Terminal possuem a cadeia 5- MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-substituição indicada do 5-MeHex -L-Orn-D-alo-Ile-, mas com a
18. 18. H-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo-(D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
19. 19. Pal-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo- (D-alo-Thr-D-alo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
20. 20. TFA-Lit-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-alo-Ile-ciclo- (D-alo-Thr-D-alo-lle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
21. 21. Composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável.
22. 22. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, na preparação de um medicamento para tratar o cancro que inclui a administração de uma quantidade eficaz de um tal composto. 7 ΡΕ1254162
23. 23. Processo para a preparação de um derivado de Kahalalide F de acordo com a reivindicação 1 ou Kahalalide F possuindo a estrutura (I):

    processo que compreende o fecho de anel entre Aa3 e Aa4, de acordo com o esquema seguinte: I f * I „ i * ! I H

    I

    ΡΕ1254162 em que Aal com o respectivo -N- e -C0- adjacente é D-alo-Thr, Aa2 com o respectivo -N- e -C0- adjacente é D-alo-Ile, Aa3 com o respectivo -N- e -CO- adjacente é D-Val, Aa4 com o respectivo -N- e -CO- adjacente é L-Phe, Aa5 com o respectivo -N- e -CO- adjacente é Z-Dhb, Aa6 com o respectivo -N- e -CO- adjacente é L-Val, X é 0 e R' é escolhido de modo a originar um derivado de Kahalalide F de acordo com a reivindicação 1 ou Kahalalide F de fórmula (I), e em que o grupo R' pode ser um precursor deste e em que um ou mais aminoácidos podem ter grupos protectores e em que -COOH de Aa3 e/ou ο NH2 do Aa4 pode opcionalmente ser protegido, activado ou derivatizado. Lisboa, 22 de Novembro de 2007 1 ΡΕ1254162 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * US 6011010 A Literatura que não é de patentes citada na Descrição * HAMANN, MT; SCHEOER, P.J, 1 Am. Omt. Soe, 1SS3, yd. 115,5825-5826 * SCHEUER; GOETZ, G; YOSHÍOA, W.Y' SCHEU- ER.PJ et 31. Teimlmiren, 1SS3, vos. 55.7739-7746 * HAMANN, M.T et aí, KahaisKes: BioactsVe Feptiáes ftem Matiné Meltesk Eiysis i&sscens and its Aigai Qiet BrycpsiB sp J. Org. Gtem, 1995, voi SI.. 6594-5660 ' J NaL Prod., 1SS9, vai 62.1163 * J^FW2SOC,voL63,1õ2 · LL OYO-WI LLiAM S, P et at Ctowca? Awfoatím to lhe Stmíhssis of Psstm-ss uva Proseies, 1997 * BERJEROfci et ai, SkxStemand Bmk fias. Coam, 1334,1¾). 121: (3|, 84S-S54 ♦ HAMANN, M.T ; SCHEtíER,. P.J. K5h3l3ltos F: 3 Sf-osdive Dsssípeptide tom tire Sscogiossao Mc-liasfc Elysia refescens aeci 8» Grees Aios Sr/opss SP J. Am. Ctsm. Soc. 1993. vos 115, 5825-533:6 - HAMANN, M.Tet ai, Ks^sIsBoss: SioactivePeplides foorc Matiné Meíusk EJysis «descens and its ASpt Díet Bryopsis sc. J. Org. Cisem... 19§6, vai. 61. 6594-5660 * GAROA-B.OC HA. M et at. The Antitairassf Cgr> pouná fâAalsHtós F Ae» ai Ceii Lysosmes. Câncer leti, 1996. vaL.99, 43-56 ♦ HAMANN, M.T et at. Kshaísltoes: Sioactive Feptfcíes fcom Marins Molissis Elysia n&seens and its Aõal Dset Bryepsis sp. J. Org. Citem, 1998, vot 63, 485 4. Org CAsni 1SS6, vot S1:. 65S4-S666 LLOYO-WíLLfAMS. P et aí. Císeeiicsí Approaches to the Synti;esis of Peptides and Preteios. CRC Press, 1997 GOETZ, G et at. mi... 1997. vet 60,552-567. * GOETZ, G et ai. The Ateolute SlereocheoiisSy ot KahsisMt?. Tefraheórm, 1SÔ§. Yd. 55,7739-7746 ♦ KAR, Y et ai. J. Hst Prod., 1899, «8.62.11S9-1172 - HORGEM, F.D et aí, J. Nai. P1xt, 2000, vot 63, 152-154 1 BARLQS, K ; GAJOS, 0.; SCMAFER, W. Angew. Cisem. Iní Ed. Engi, >591, vai. 39, 596-593 * CHIVA, C ; VILASECA, M; G1RALT, E; ALBERf-Cto, F, 4. Pspi. Ses, 1633. «8. 5,131-140 * CARPiNO, LA ; EL-FAHAM, A; MSNGR,C.A: AL-BEfiiOO, F, J. Cftsm. Soc., Gtem. Comam., 1SS4, 281-203 - GÒMEZ-MARTSNEZ, P; THÍERÍET, N r ALBERI-CIO, F ; GUiBÉ, F. J. Citem. Soc. P&m 1 899« vot. S. 2S71-2374 * FUKASE.K ; K1TAZAWA. M;SANO, A.; SHEMBO, K ; HORÍMGTO. S; FUJITA. H ; StUBG, A WAKA-MiYA, T; SB1SE. A. BuH. Chem. Soc. Jpn., 1992, voí. 65,2227-2248 - 1 8ίΰί Citem, 1972, vsi. 247,377-933 * DANGLES; DANGLES, G; GUiBÉ, F,: BALA-VOINE. 6; LAVtELLE, S: MARQUEI, A st A J. Org. Citem, 1967, vol. 5¾ 4884-4993