CZ304258B6 - Kahalalidová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek ji obsahující a její použití - Google Patents
Kahalalidová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek ji obsahující a její použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ304258B6 CZ304258B6 CZ2002-2740A CZ20022740A CZ304258B6 CZ 304258 B6 CZ304258 B6 CZ 304258B6 CZ 20022740 A CZ20022740 A CZ 20022740A CZ 304258 B6 CZ304258 B6 CZ 304258B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- val
- thr
- phe
- dhb
- lle
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K11/00—Depsipeptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Optical Record Carriers And Manufacture Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Silver Salt Photography Or Processing Solution Therefor (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Sloučenina podobná kahalalidu F obecného vzorce II, která má cyklickou část struktury shodnou s kahalalidem F a liší se od něj v lineární části molekuly. Způsob přípravy sloučenin podobných kahalalidu F, které mají užitečnou biologickou aktivitu. Farmaceutický prostředek obsahující tuto sloučeninu, který je účinný v léčbě rakoviny.
Description
(57) Anotace:
Sloučenina podobná kahalalidu F obecného vzorce II. která má cyklickou část struktury shodnou s kahalalidem F a liší se od něj v lineární části molekuly. Způsob přípravy sloučenin podobných kahalalidu F, které mají užitečnou biologickou aktivitu. Farmaceutický prostředek obsahující tuto sloučeninu, ktetý je účinný v léčbě rakoviny.
Kahalalidová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek ji obsahující a její použití
Oblast techniky
Předložený vynález se týká kahalalidových sloučenin, zvláště kahalalidu F a příbuzných sloučenin a syntetického způsobu jejich přípravy.
Dosavadní stav techniky
Kahalalid F je biologicky aktivní cyklický depsipeptid izolovaný z měkkýše s masitou nohou Elysia rufescens ajeho stravy, zelené řasy Bryopsis sp. Kahalalid F byl poprvé izolován Hamannem a Scheuerem, viz Hamann, Μ. T.: Scheuer, P. J. J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 5825-5826. V této publikaci nebyla určena absolutní stereochemie jednotlivých valinů (3 D-Val a 2 L-Val) athreoninů (L-Thr a D-allo-Thr). V pozdější publikaci Scheuer a kol. (Goetz, G.; Yoshida, W. Y.; Scheuer, P. J. Tetrahedron 1999, 55, 7739-7746) stanovili v molekule pozici 5 Val a 2 Thr.
Tedy struktura kahalalidu F podle práce Scheuer a kol. byla:
Mezitím jednotlivé pozice 5-Val a 2-Thr stanovil také prof Reinhart (K. L. Rinehart, osobní sdělení). Zatímco jeho stanovení pro 2 Thr a 3 Val souhlasí se stanovením prof. Scheuera, pro poslední 2 Val zde existuje rozpor. Tedy v Rinehartově stanovení jsou dva po sobě následující Val v postranním řetězci orientovány opačně a struktura je vyjádřena obecným vzorcem I:
Nyní je přijímáno, a v tomto textu opět demonstrováno, že správný vzorec pro kahalalid F je obecný vzorec I.
Jedná se o složitou strukturu, která obsahuje 6 aminokyselin v cyklické části a mimo tuto cyklickou část řetězec sedmi aminokyselin zakončený acylovou skupinou. Kahalalid F (obecný vzorec
1) je výjimečně účinné a vzácné protinádorové činidlo mořského původu, jenže nedostatek odpo5 vídajícího množství brzdí plány klinických pokusů.
Jsou známy jiné kahalalidové sloučeniny, například odkazujeme na práci Hamann, Μ. T. a kol.,
J. Org. Chem., 1996, „Kahalalidy: Biologicky aktivní peptidy z mořského měkkýše Elysia rufescens a zjeho stravy - řasy Bryopsis sp., sv. 61, str. 6594-6660. Stejně jako pro kahalalid F, tento io článek podává rovněž strukturu kahalalidu A a E. Kahalalid K byl popsán v J. Nat. Prod. 1999,
62, 1192 a kahalalid O byl popsán v J. Nat. Prod. 2000, 63, 152.
Struktura těchto dalších kahalalidových sloučenin je uvedena v následujících obecných vzorcích až 11:
UR»
Kahalalid A (1)
OR*
L-Thr
Bo
Kahalalid C (3)
Lau£
Kahalalid D (4)
Kahalalid F (6)
-2CZ 304258 B6
VMS SUaHax
Kahalalid G (7)
Kahalalid H (8)
Kahalalid J (9)
Kahalalid K (10)
Kahalalid O (11)
Cyklické kahalalidy obsahují aminokyselinový kruh a postranní řetězec, který je zakončen acylo vou skupinou.
Kahalalidy mají řadu biologických aktivit, z nichž význačné jsou protinádorová a protituberku lózní aktivita.
-3 CZ 304258 B6
Podstata vynálezu
Vynález se týká sloučenin podobných kahalalidu F obecného vzorce II
kde v cyklické části struktury Rl, R2, R3, R4, R5, R6, XI a X2 jsou každý nezávisle vybraný tak, že Aaa-1 je D-rz//o-Thr, Aaa-2 je D-«//o-Ile, Aaa-3 je D-Val, Aaa-4 je Phe, Aaa-5 je ZDhb, a Aaa-6 je L-Val; kde
R7 je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající zH, Q-C20 alkylu, C5-C10 arylu nebo C1-C20 alkylu substituovaného C5-C10 arylem, případně substituovaného hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
tak, že Aaa-7 může být α-aminokyselina s L nebo D konfigurací;
a kde R8 je vybraný ze vzorce III, IV, nebo V:
-4CZ 304258 B6
kde každá ze skupin R9 a R)0 je nezávisle H nebo C,-C2o alkylová, C5-C|0 arylová nebo Ci-C2o alkylová skupina substituovaná C5-C10 arylem, případně substituovaná hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinoskupinou, karboxylovou skupinou, karboxamidoskupinou nebo halogenovou skupinou;
kde R9 a R,o případně tvoří kruh;
kde R|i je H nebo Cj-C2o alkylová, C5-C]0 arylová nebo C]-C20 alkylová skupina substituovaná C5-Cio arylem;
kde nje 0 až 6;
a s výlukou, že sloučenina vzorce II není:
5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-<2ř/o-Ile-cyÁ:/o(D-a//o-Thr-D-a//oIle-D-Val-L-Phe-Z-Dhb-L-Val).
Dále jsou popsány sloučeniny podobné přirozenému kahalalidu. Sloučeniny se mohou odlišovat vjedné nebo více aminokyselinách a v jedné nebo více složkách postranního acylového řetězce.
Vhodné sloučeniny podobné přirozenému kahalalidu, které jsou dále popsány, mají alespoňjeden z následujících rysů, kterými se odlišují od původního přírodního kahalalidu:
až 7, případně 1 až 3, případně 1 nebo 2, případně 1 aminokyselina, která se liší od aminokyseliny původního kahalalidu;
až 10, případně 1 až 6, případně 1 až 3, případně 1 nebo 2 další methylenové skupiny v acylové skupině postranního řetězce původní sloučeniny;
až 10, případně 1 až 6, případně 1 až 3, případně 1 nebo 2 vynechané methylenové skupiny v acylové skupině postranního řetězce původní sloučeniny;
až 6, případně 1 nebo 3 substituenty přidané nebo vynechané z acylové skupiny postranního řetězce původní sloučeniny.
-5CZ 304258 B6
U cyklických kahalalidů se může přidání nebo vynechání aminokyseliny uskutečnit v kruhovém cyklu nebo v postranním řetězci.
Dále jsou uvedené příklady sloučenin podobných kahalalidů F, které mají obecný vzorec II:
Aaa-7
R:
kde Aaa-1, Aaa-2, Aaa-3, Aaa-4, Aaa-6 a Aaa-7 jsou nezávisle α-amino kyseliny s L nebo D konfigurací, a Aaa-5 je příslušná aminokyselina s L nebo D konfigurací;
kde R|, R3, R4, R5, R<, a R7 jsou každý nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z H, nebo C1-C20 alkylu, C5-Cio arylu nebo Ci-C20 alkylu substituovaného C5-C10 arylem, případně substituovaných hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
kde R2 je případný a je vybrán ze skupiny sestávající z H, Ci-C20 alkylu nebo C,-C2o alkylu substituovaného C5-C10 arylem;
kde X] je O, S nebo N;
kde X2 je vybrán ze skupiny sestávající z C2-C8 alkenylu, C,-C2o alkylu, C5-C10 arylu nebo C]C20 alkylu substituovaného C5-C10 arylem, případně substituovaných hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
kde R8 je vybraný ze vzorce III, IV, nebo V:
n
Vzorec III
-6CZ 304258 B6
kde každá ze skupin R9, Ri0, a Rn je nezávisle H nebo C,-C2o alkylová, C5-C|0 arylová nebo C,C20 alkylová skupina substituovaná C5-C]0 arylern, případně substituovaná hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinoskupinou, karboxylovou skupinou, karboxamidoskupinou, nebo a halogenovou skupinou;
kde R9 a R[0 případně tvoří kruh;
kde n je 0 až 6;
a s výhradou, že sloučenina vzorce II není:
2-Me B u-D-Phe-cyÁ7o( L-Thr-D-Leu-D-Phe-D-Leu-L-Thr-L-Ser); nebo
5-MeHex-L-Tyr-cy^/o(D-Ser-L-Phe-D-Leu-L-Pro-L-Thr-Gly); nebo
5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Om-D-fl//o-Ile-cyÁ:/o(D-fl//o-Thr-D-í3//oIle-D-Val-L-Phe-Z-Dhb-L-Val); nebo
5-MeHex-Gly-cy^/o(Thr-D-Tyr-D-Trp-Thr-L-Ile-L-Val), kde aminokyseliny Thr v poslední sloučenině jsou L-Thr a D-o/fo-Thr.
Definice aminokyselin se také mohou měnit a dovolit prolin a analogické aminokyseliny včetně hydroxyprolinu. Obecné vzorce III, IV a V mohou být vzájemně promíchány a znázorňovat postranní řetězce vytvořené z opakujících se jednotek, uvedených ve více než jednom z těchto obecných vzorců.
V modifikaci je jedna nebo více aminokyselin Aaa-6 a Aaa-5 z šestičetného aminokyselinového kruhu vynecháno neboje přidána aminokyselina Aaa-7 mezi Aaa-6 a Aaa-1, aby bylo dosaženo kruhů, které jsou složeny ze čtyř, pěti nebo sedmi aminokyselin. Výhodné je, když je kruh složen ze šesti aminokyselin.
Dále je popsán syntetický postup přípravy kahalalidu F a podobných sloučenin.
-7CZ 304258 B6
Výhodná provedení
Výhodné sloučeniny jsou podobné kahalalidu F (obecný vzorec 1), kde v obecném vzorci 11 Aaa1 je D-allo-Thr (X, = O, R| = CH3), Aaa-2 je D-allo-lle (R3 = 1-methylpropyl), Aaa-3 je DVal (R4 = isopropyl), Aaa-4 je Phe (R5 = benzyl), Aaa-5 je Z-Dhb (X2 = C=CHCH3 v Z konfiguraci), Aaa-6je L-Val (R<5 = isopropyl), Aaa-7je D-allo-lle (R7 = 1-methylpropyl) a Rs obsahuje hexapeptidový derivát následujícího obecného vzorce VI:
(VI).
Další výhodné sloučeniny jsou analogicky podobné ostatním kahalalidům a mají aminokyseliny a postranní řetězce s těmito sloučeninami společné. Odvoláváme se na známé struktury kahalalidů. Výhodná je taková sloučenina tohoto vynálezu, která napodobuje přirozený kahalalid, přičemž je na jednom nebo více místech molekuly modifikována, je do ní něco vloženo nebo něco odstraněno.
Zvláště výhodné jsou sloučeniny, které mají aminokyseliny jako jsou v přírodní cyklické kahalalidové sloučenině, ale liší se postranním řetězcem, zvláště v acylové části. Takové odchylky mohou zahrnovat více nebo méně methylenových skupin, v typickém případě nejvýše změnu ve dvou methylenových skupinách a více nebo méně substituentů, jmenovitě přidání halogenu jako jsou fluorové substituenty.
Zde používaný termín „organická skupina“ označuje uhlovodíkovou skupinu, která je klasifikována jako alifatická skupina, cyklická skupina nebo kombinace alifatické a cyklické skupiny (např. arylalkylové skupiny). V kontextu předloženého vynálezu termín „alifatická skupina“ označuje nasycený nebo nenasycený, lineární nebo rozvětvený uhlovodík. Tento termín zahrnuje například alkylové, alkenylové a alkynylové skupiny.
Termín „alkylová skupina“ označuje nasycenou lineární nebo rozvětvenou uhlovodíkovou skupinu, které zahrnují například methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, t-butyl, heptyl, dodecyl, oktadecyl, amyl, 2-ethylhexyl, 2-methylbutyl, 5-methylhexyl, 9-methyl-3-decyl a podobně, zvláště alkylové skupiny, které mají jednu postranní methylovou skupinu. Vhodná alkylová skupina je dlouhá a má 1 až 20 uhlíkových atomů, výhodněji 1 až 15 nebo 1 až 10 uhlíkových atomů, nebo může být krátká a má 1 až 6 nebo 1 až 3 uhlíkové atomy. Je vhodné, když skupina Rn má dlouhý uhlíkový řetězec a obecně všechny ostatní alkylové skupiny jsou s výhodou krátké.
Termín „alkenylová skupina“ označuje nenasycenou lineární nebo rozvětvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více dvojnými vazbami uhlík-uhlík, jako je například vinylová skupina. Vhodná alkenylová skupina má 2 až 8 nebo 2 až 4 uhlíkové atomy.
-8CZ 304258 B6
Termín „alkynylová skupina“ označuje nenasycenou lineární nebo rozvětvenou uhlovodíkovou skupinu s jednou nebo více trojnými vazbami uhlík-uhlík. Vhodná alkynylová skupina má 2 až 8 nebo 2 až 4 uhlíkové atomy.
Termín „cyklická skupina“ označuje uhlovodíkovou skupinu s uzavřeným cyklem, která je klasi fikována jako alicyklická skupina, aromatická skupina nebo heterocyklická skupina. Termín „ali cyklická skupina“ označuje cyklickou uhlovodíkovou skupinu, která se svými vlastnostmi podobá alifatickým skupinám aje vhodné, když má jeden nebo dva cykly se 4 až 10 uhlíkovými atomy. Termín „aromatická skupina“ nebo „arylová skupina“ označuje aromatickou uhlovodíkovou skupinu s jedním nebo mnoha cykly, a je vhodné, když má jeden nebo dva cykly se 5 až 10 uhlíkovými atomy. Termín „heterocyklická skupina“ označuje uzavřený kruhový uhlovodík, ve kterém na místě jednoho nebo více uhlíkových atomů v kruhu je jiný prvek než uhlík (např. 1 až 3 nebo více atomů dusíku, kyslíku, síry atd.), aje to vhodné, když má jeden nebo dva cykly, ve kterých jsou umístěny 4 až 10 atomy.
V této technické oblasti se má za to, že velký rozsah substituce je nejen tolerován, ale často je i vhodný. U popsaných sloučenin je substituce předpokládaná. Pro zjednodušení diskuse a zavedení určité terminologie používané v této přihlášce, jsou termíny „skupina“ a „složka“ používány pro rozlišení mezi chemickými druhy, které umožňují substituci nebo které mohou být substituovány a těmi, které ji neumožňují nebo nemohou být takto substituovány. Tedy když je pro chemický substituent použit termín „skupina“, popisovaná chemická látka obsahuje například v řetězci nesubstituovanou skupinu a skupinu s atomy O, N nebo S, rovněž tak karbonylovou skupinu nebo jiné běžné substituenty. Když je pro popis chemické sloučeniny nebo substituentu použit termín „složka“, znamená to, že se počítá pouze s nesubstituovanými chemickými látkami. Například výrazem „alkylová skupina“ je označována nikoli pouze čistý otevřený řetězec nasycených uhlovodíkových alkylových substituentů jako jsou methyl, ethyl, isopropyl, isobutyl, tbutyl a podobně, ale také alkylové substituenty nesoucí na sobě další substituenty známé v oboru, jako jsou hydroxylová skupina, alkoxylová skupina, aminoskupina, karboxylová skupina, karboxyamidová skupina, halogenové atomy, kyanoskupina, nitroskupina, alkylsulfonylová skupina atd. Tedy „alkylová skupina“ zahrnuje éterové skupiny, halogenované alkyly, alkoholy, thioly, karboxyly, aminy, hydroxyalkyly, sulfoalkyly atd. Obyčejně je dávána přednost halogenovaným alkylovým skupinám. Na druhé straně výraz „alkylová složka“ je omezen pouze na zabudování čistého otevřeného řetězce nasyceného uhlovodíkového alkylové substituentu jako je methyl, ethyl, propyl, isobutyl a podobně.
Ve zvláště výhodném provedení je poskytnuta sloučenina obecného vzorce A:
O
CO—N-Aa1-Č-N-Aaz-C-N-Aa;
kde každý z Aa' až Aa8 se sousedním -N- respektive -CO- představuje a nebo β aminokyselinu, s výhodou a aminokyselinu, X je vazebná skupina Aa', s výhodou vybraná z aminoskupiny, hydroxylové skupiny nebo thiolové skupiny, výhodnější je hydroxylová skupina, a R je skupina
-9CZ 304258 B6 volitelně zahrnující jednu nebo více a nebo β aminokyselin, s výhodou a aminokyselin. Ve variantě nemusí být -CO-Aa6-N- přítomno, je možno aby chybělo také -CO-Aa5-N- nebo jinou možností je, že je mezi Aa6 a Aa1 vloženo -CO-Aa7-NAminokyseliny mohou mít L nebo D konfiguraci. Je výhodné, když je konfigurace stejná jako u odpovídající aminokyseliny v kahalalidové sloučenině, zvláště v kahalalidu F. Jedna nebo více
Aa1 až Aa6 s výhodou odpovídá aminokyselině na stejné pozici v přírodním kahalalidu nebo v jeho obdobě. Ve zvláště výhodném provedení je každá aminokyselina stejná jako v kahalalidu F. Tedy výhodné jsou jako Aa1 D-allo-Thr, jako Aa2-D-allo-Ile, jako Aa3 D-Val, jako Aa4 Phe,
Jako Aa5 Z-Dhb, jako Aa6 L-Val.
Když jsou používány sloučeniny obdobné, pak vhodné jsou takové, které mají nahrazeny aminokyseliny a náhrada je provedena s ohledem na strukturu příslušných aminokyselin v přírodním kahalalidu, jako je kahalalid F. Náhražkami threoninu jsou serin a jeho homology a rovněž cystein a jeho homology. Náhražkami isoleucinu jsou jiné aminokyseliny s nepolárními skupinami, jako jsou alanin, valin, leucin a prolin, a rovněž jejich analogy a homology. V tomto ohledu výskyt atomů dusíku -N- v obecném vzorci A nevylučuje možnost tvorby kruhu, tak jako k tomu dochází s prolinem. Náhražkami valinu jsou isoleucin a jiné aminokyseliny s nepolárními skupinami, včetně jejich analogů a homologů. Náhražkami fenylalaninu jsou tryptofan a tyrozin. Náhražkami Dhb jsou jiné aminokyseliny s takovým alkenylidenovým substituentem, včetně aminokyselin s C3 nebo delšími postranními řetězci a rovněž jejich analogy a homology.
Aa1 má s výhodou obecný vzorec:
kde RAai je postranní řetězec, obsahující vazebnou skupinu X. Příklady postranních řetězců jsou alkyl, aryl a arylalkyl, především alkyl, typicky alkyl s 1 až 4, hlavně se 2 uhlíkovými atomy. Výhodný je rozvětvený alkyl. Je vhodné, když vazebnou skupinou X je kyslík, přičemž je výhodné, když Aa1 je odvozeno od threoninu, avšak mohou být použity i jiné vazebné skupiny jako je síra nebo aminoskupina (nesubstituovaná nebo substituovaná alkylem, arylem nebo arylalkylem). Je vhodné, když skupina X je jedinou polární skupinou v Aa1. Aa1 může být racemickou směsí, L nebo D, aleje výhodné, když je v D konfiguraci.
Aa2 má s výhodou obecný vzorec:
RAa2 kde RAa2 je postranní řetězec jako je alkyl, aryl a arylalkyl, především alkyl, typicky alkyl s 1 až 5, hlavně se 3 uhlíkovými atomy. Výhodný je rozvětvený alkyl, jako je v isoleucinu. Je vhodné, když v Aa2 nejsou polární substituenty. Aa2 může být racemickou směsí, L nebo D, aleje výhodné, když je v D konfiguraci.
Aa3 má s výhodou obecný vzorec:
- 10 CZ 304258 B6
RAaa kde RAa3 je postranní řetězec, jako je alkyl, aryl a arylalkyl, především alkyl, typicky alkyl s 1 až 5, hlavně se 3 uhlíkovými atomy. Výhodný je rozvětvený alkyl, jako je ve valinu. Je vhodné, když v Aa3 nejsou polární substituenty. Aa3 může být racemickou směsí, L nebo D, aleje výhodné, když je v D konfiguraci.
Aa4 má s výhodou obecný vzorec:
-N
RA34 kde RAa4 je postranní řetězec, jako je alkyl, aryl a arylalkyl, především arylalkyl, typicky arylalkyl s 7 až 10, hlavně se 7 uhlíkovými atomy. Výhodný je benzyl, jako je fenylalaninu. Je vhodné, když v Aa4 nejsou polární substituenty. Aa4 může být racemickou směsí, L nebo D, ale je výhodné, když je v L konfiguraci.
Aa5 má s výhodou obecný vzorec:
kde každý z RAa5a a RAa5b je vybrán ze skupiny zahrnující vodík nebo postranní řetězce jako je alkyl, aryl a arylalkyl, především alkyl, typicky alkyl s 1 až 4, hlavně s 1 uhlíkovým atomem. S výhodou je RAa5a vodík vytvářející Z konfiguraci, jako je například ve výhodné kyselině a,bdidehydro-a-aminomáselná. Je vhodné, když v Aa5 nejsou polární substituenty. Aa5 může být racemickou směsí, L nebo D, aleje výhodné, když je v L konfiguraci.
Aa6 má s výhodou obecný vzorec:
-NRAag kde RAa^ je postranní řetězec jako je alkyl, aryl a arylalkyl, především alkyl, typicky alkyl s 1 až 5, hlavně se 3 uhlíkovými atomy. Výhodný je rozvětvený alkyl, jako je ve valinu. Je vhodné, když v Aa6 nejsou polární substituenty. Aa6 může být racemickou směsí, L nebo D, aleje výhodné, když je v L konfiguraci.
-11CZ 304258 B6
Aminokyseliny Aa1 až Aa7 mohou být takové, jak jsou definovány pro skupiny Aaa-1 až Aaa-7 v obecném vzorci II.
S výhodou postranní řetězec obsahuje 5-MeHex-D-VaI-L-Thr-L-Thr-L-Val-D-Val-D-ProL-Om-D-allo-lle, nebo jeho obdobu, včetně analogů a homologů. Příklady obdobných řetězců zahrnují takové, které mají obecný vzorec (Rl)m-(aminokyselina)n-, kde m + n nejsou nula, R1 představuje koncovou skupinu, výhodný je alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, heteroaryl, heteroalkyl, alicyklickou nebo jinou koncovou skupinu, a-(aminokyselina)n- představuje volitelný řetězec aminokyselin.
Je vhodné, když koncová alkylová skupina má 1 až 12 uhlíkových atomů, výhodnější když má 4 až 10 uhlíkových atomů, může být substituována a je výhodné když je rozvětvená. Mezi příklady patří butyl, pentyl, hexyl, heptyl, oktyl a další alkylové skupiny, obsahující 1 nebo více methylů nebo ethylů, nebo delší postranní skupiny, které s výhodou obsahují 1 až 6 uhlíkových atomů, především 5-methylhexyl a jiné alkylové skupiny, které jsou rozvětvené na opačném konci, než je jejich připojení ke zbytku molekuly. Mezi vhodné substituenty patří skupiny, jako jsou halogenová, hydroxylová, alkoxylová, aminová, karboxylová, karboxyamidová, kyanová, nitroskupina, alkylsulfonylová, alkoxylová, alkoxyalkylová, arylalkylarylová, heterocyklická, alicyklická, arylová, arylalkylová a další skupiny, které jsou zde zmíněny. Pokud je to vhodné, mohou tyto substituenty nést další substituenty, jako například tolylovou skupinu. Halogenové substituenty jsou v současné době nejvíce preferovány, zvláště 1 nebo více, jako například 1 až 3 atomy fluoru. Další koncové skupiny mohou být vybrány podle poučení v textu a zahrnují alicyklické, arylalkylové, arylové, heterocyklické nebo jiné skupiny s možnými 1 nebo více substituenty, především s 1 až 3.
Postranní řetězec R-CO-N- může na dusíku obsahovat vodík nebo substituent jako je alkylová, arylová nebo arylalkylová skupina.
Vhodné obdoby postranních řetězců používají substituované aminokyseliny, vybrané v souhlase s výše uvedenými principy, přičemž pro aminokyseliny v cyklické části molekuly jsou vybírány alternativy isoleucinu, valinu a threoninu, a alternativy ornitinu zahrnují lyzin, histidin, arginin; alternativy prolinu zahrnují alanin a jiné nepolární aminokyseliny jako jsou glycin, isoleucin a jiné, dříve zmíněné aminokyseliny. V typickém případě má řetězec R 0 až 10, výhodněji 4 až 8, jako např. 5, 6 nebo 7, zejména 7 aminokyselin. Tam kde je více než 7 aminokyselin, je výhodné, když tyto dodatečné aminokyseliny jsou přirozené aminokyseliny, zvláště ty, které jsou zde uvedeny.
Aminokyseliny mohou být použity buď ve formě racemické směsi, nebo jako forma L nebo D. Když se aminokyseliny vyskytují v postranním řetězci R, je výhodné, když se jedna nebo více z nich vyskytuje ve stejné konfiguraci, jako v přirozeném postranním řetězci. Počítáno od cyklického hexapeptidu, aminokyselinové zbytky jsou v konfiguraci DLDDLLD. Je vhodné, když koncová alkylová skupina má 1 až 12 uhlíkových atomů, výhodněji 4 až 10 uhlíkových atomů, mohou být substituovány a je výhodné, když jsou rozvětvené. Mezi vhodné substituenty patří skupiny, jako jsou halogen, hydroxylová, alkoxylová, aminová, karboxylová, karboxyamidová, kyanová, nitroskupina, alkylsulfonylová a další skupiny, které jsou zde zmíněny. Halogenové substituenty jsou v současné době nejvíce preferovány.
Obecněji může být postranní řetězec R-CO-N- ve sloučeninách obecného vzorce II definován jako postranní řetězec R8-NH-CHR7-CO-NH-, včetně sloučenin obsahujících směsi aminokyselin, které jsou definované v obecných vzorcích III, IV a V.
Třebaže výhodné rysy byly popsány odkazem na kahalalid F, tato přihláška poskytuje jiné výhodné sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, ajsou to podle stejných principů navrhované napodobeniny jiných kahalalidů. Tudíž mohou být změněny aminokyseliny a postranní
- 12CZ 304258 B6 řetězce, s výhodou ale tak, aby byla zachována hydrofilně-hydrofobní rovnováha mezi polárními a nepolárními skupinami.
Sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mají výhodnou biologickou aktivitu, mimo jiné protinádorovou aktivitu.
Předložený vynález tedy poskytuje způsob léčení jakéhokoli savce, včetně člověka, který je postižen rakovinou, kdy tento způsob zahrnuje podání postiženému jedinci terapeuticky účinného množství sloučeniny, která je předmětem tohoto vynálezu, nebo farmaceutického prostředku, který ji obsahuje.
Předložený vynález se také týká farmaceutických přípravků, které jako svou aktivní složku obsahují sloučeninu nebo sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, a rovněž postupy jejich přípravy.
Příklady farmaceutických prostředků zahrnují jakoukoli tuhou látku (tablety, pilulky, kapsle, granule atd.) nebo tekutinu (roztoky, suspenze nebo emulze), která má vhodné složení nebo orální, místní nebo parenterální způsob podávání, a mohou obsahovat čistou sloučeninu nebo tuto sloučeninu v kombinaci s jakýmkoli nosičem nebo farmakologicky aktivními sloučeninami. Pokud jsou tyto prostředky podávány parenterálně, je potřeba, aby byly sterilní.
Podávání sloučenin nebo prostředků předloženého vynálezu může být prováděno jakýmkoli vhodným způsobem, jako je intravenózní infúze, orální přípravky, intraperitoneální a intravenózní podávání. Přednost je dávána infuzním dobám až 24 hodin, výhodněji 2 až 12 hodin a nejvýhodněji 2 až 6 hodin. Zvláště žádoucí jsou krátké infuzní doby, které umožňují, aby léčení bylo provedeno bez celonočního pobytu v nemocnici. Avšak infúze mohou trvat, pokud je to vyžadováno, 12 až 24 hodin nebo ještě dále. Infúze mohou být provedeny ve vhodných intervalech, řekněme 2 až 4 týdnů. Farmaceutické prostředky obsahující sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, mohou být dodávány lipozomem nebo zapouzdřené ve strukturách nanometrových rozměrů, formami trvalého uvolňování nebo jinými standardními způsoby podávání.
Správné dávkování sloučenin bude varírovat v závislosti na určitém přípravku, na způsobu aplikace, na poloze, na hostiteli a na léčeném nádoru. V úvahu budou brány i jiné faktory jako jsou věk, tělesná hmotnost, pohlaví, strava, doba podávání, rychlost vylučování, stav hostitele, kombinace léků, citlivost reakce a vážnost choroby. Podávání může být v rámci maximálně povolené dávky prováděno kontinuálně nebo periodicky.
Sloučeniny a prostředky předloženého vynálezu mohou být použity sjinými léky a poskytnout tak kombinovanou terapii. Jiné léky mohou tvořit součást téhož prostředku nebo mohou být poskytovány jako oddělený prostředek, podávaný v téže době nebo v jiné době. Identita jiného léku není nijak zvláště omezena a mezi vhodné kandidáty patří:
a) léky s antimitotickými účinky, speciálně ty, které jsou zaměřeny na elementy cytoskeletu, včetně modulátorů mikrotubulů, jako jsou taxanové léky (jako je taxol, paclitaxel, taxoter, dodetaxel), podofylotoxiny nebo alkaloidy z brčálu (vincristin, vinblastin);
b) léky antimetabolity jako jsou 5-fluorouracil, cytarabin, gemcitabin, analogy purinu, jako jsou pentostatin, methotrexát;
c) alkylační činidla jako jsou dusíkaté hořčičné sloučeniny (jako jsou cyklofosfamid nebo ifosfamid)
d) léky které cíleně působí na DNA, jako jsou antracyklinové léky adriamycin, doxorubicin, farmorubicin nebo epirubicin;
- 13 CZ 304258 B6
e) léky které cíleně působí na topoizomerázy, jako je etoposid;
f) hormony, agonisté a antagonisté hormonů, jako jsou estrogeny, antiestrogeny (tamoxifen a podobné sloučeniny) a androgeny, flutamid, leuprorelin, goserelin, cyprotron nebo oktreotid;
g) léky které cíleně působí na přenos signálu v nádorových buňkách, včetně derivátů antibiotik jako je herceptin;
h) alkylační léky jako jsou léky obsahující platinu (cis-platin, carbonplatin, oxaliplatin, paraplatin) nebo nitrosomočoviny;
i) léky potenciálně ovlivňující metastázy nádorů, jako jsou inhibitory metaloproteináz v cytoplazmě;
j) činidla pro genovou terapii a antisense terapii;
k) proti látková léčiva;
l) jiné biologicky aktivní sloučeniny mořského původu, zejména ekteinascidiny jako je ekteinascidin 743 nebo didemniny jako je aplidin;
m) analogy steroidů, zejména dexametazon;
n) protizánětlivé léky, zejména dexametazon; a
o) protidávivé léky, zejména dexametazon.
Předložený vynález se také týká těch sloučenin vynálezu, které se používají v léčebné metodě, a použití sloučenin při přípravě prostředku pro léčení rakoviny.
U sloučenin předloženého vynálezu se také očekává, že budou mít protituberkulózní aktivitu.
Tímto vynálezem je také poskytnout postup pro přípravu sloučenin vynálezu, včetně kahalalidů F, který obsahuje uzavření kruhu mezi Aa3 a Aa4. Bylo zjištěno, že uzavření kruhu v této pozici umožní vynikající postup. Ostatní modifikace, včetně vytvoření nebo rozšíření postranního řetězce na Aa, a/nebo odstranění chránících skupin a/nebo modifikování substituentů na aminokyselinách, mohou být provedeny před a/nebo po uzavření kruhu.
Tedy proces může být znázorněn následujícím schématem:
- 14CZ 304258 B6
R-N-Aa’-C
-N-Aa
-Č——N~ 1 -Aa3
OH-C=O
X
N·
O , II
R-N-Aa1-C
I
X o
, II
-N-Aa2-C--N-Aa3
-Aa
-N-Aa kde R'je skupina R-CO- nebo její prekurzor, a kde jedna nebo více aminokyselin může obsahovat chránící skupiny, a kde -COOH na Aa3 a/nebo -NH2 na Aa4 mohou být volitelně chráněny, aktivovány nebo derivovány. Takové postupy pro používání prekurzorů nebo chránících skupin, pro aktivaci nebo derivování jsou samy o sobě zcela běžné a pro praktické provádění tohoto postupu není potřeba uvádět další podrobnosti.
Postup, který je předmětem předloženého vynálezu, může být uskutečněn z výchozích materiálů io rychlým způsobem za současné kontroly optických izomerů a sterického uspořádáni molekuly, přičemž se využívá výhoda metody syntézy na pevné fázi, kde je konstruovaná molekula v průběhu všech syntetických operací navázána na nerozpustném podkladu. Tedy nadbytek reagencií a rozpustných meziproduktů může být odstraněn jednoduše promýváním komplexu molekulapryskyřice pomocí vhodných rozpouštědel. Proto může být použit velký nadbytek rozpustných reagencií, aby byla během krátké doby posunuta reakční rovnováha ve směru produktů, aby byla potlačena racemizace (pokud o to jde) a jiné druhotné reakce. Tato metoda je také přístupná pro automatizaci.
Výhodné provedení syntetického postupu, který je předmětem předloženého vynálezu, je nejlépe znázorněno na schématu 1, kteréje zaměřeno na vytvoření sloučenin obecného vzorce II.
- 15 CZ 304258 B6
Jak je uvedeno výše na schématu 1, výhodný postup pro syntetickou přípravu kahalalidu F (obecný vzorec I), jeho derivátů a analogů, je založen na syntéze na pevné fázi (viz např. Lloyd5 Williams P., a kol., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, Boča Raton (FL), 1997.
Postup znázorněný na schématu 1 obsahuje tyto po sobě následující kroky:
io a) připojení Fmoc-aminokyseliny (Aaa3) k pevnému podkladu (např. polystyren, polyethylen nanesený na polystyrenu a podobně), který obsahuje velmi kyselou nestálou skupinu nebo linker (např. chlorotrityl, polyalkoxybenzyl a podobně), a vytvoří esterovou vazbu;
- 16CZ 304258 B6
b) prodlužování peptidického řetězce třemi aminokyselinami (Aaa2, Aaa1 a Aaa7) pomocí postupu používajícího Fmoc/tBu. Pro I, X| = OH aje vneseno bez chránících skupin. Pokud je X] = NH2, toto je vneseno s chránicí skupinou Alloc;
c) zabudování (Aaa6) pomocí postupu používajícího Fmoc/tBu;
d) prodloužení peptidického řetězce o zbývající aminokyseliny a Rn-COOH až Aaa7 pomocí postupu používajícího Fmoc/tBu;
e-l)prodloužení peptidického řetězce o 2 aminokyseliny [Aaa5 (OH,H),Aaa4] až Aaa6 pomocí postupu používajícího Fmoc/tBu. Skupina OH, připojená k Aaa5 není chráněna;
e-2) dehydratování na pevné fázi, čímž je získán peptid s Aaaf;
nebo e'-l) zabudování dipeptidu Alloc-Aaa4-Aaa5-OH, který byl spojen a dehydratován v roztoku;
f) odstranění skupiny Alloc z Aaa4, zatímco peptid je stále ukotven na pevném podkladu;
g) uvolnění peptidu s chráněným (pokud je chránění použito) postranním řetězcem z pevného podkladu;
h) cyklizace peptidu v roztoku;
i) odstranění skupin chránících postranní řetězec, kteréjsou nestálé vůči TFA.
Je nutno si uvědomit, že určitý výběr chránících skupin není kritický, a že je možný široký výběr voleb. Například typ skupin Bzl může nahradit tBu/Boc; namísto Fmoc lze použít Boc; namísto Alloc lze použít Fmoc; namísto chlorotritylu lze použít Wangovu pryskyřici.
Podrobný popis výhodných provedení postupu
Výhodný postup předloženého vynálezu je znázorněn na schématu 1. Jak je tam ukázáno a pod robněji diskutováno v příkladech které následují dále, tento postup může být proveden následujícím způsobem:
Fmoc-Aaa3-OH je s výhodou připojena k pryskyřici chlorotrityl-polystyren, viz Barlos, K.; Gatos, D.; Schafer, W. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 590-593, v přítomnosti DIEA, který udržuje úroveň substituce přibližně na 0,15 až 0,5 mmol/g. Použití vyššího plnění s sebou přináší v konečném produktu přítomnost ukončených peptidů, viz Chiva, C.; Vilaseca, M.; Giralt, E.; Albericio, F. J Pept. Sci. 1999, 5, 131-140.
Odstranění skupiny Fmoc bylo provedeno pomocí piperidinu-DMF (2:8, objem) (1 χ 1 minuta, 3 x 5 minut, 1x10 minut). Vazba Fmoc-, Aloc-Aaa-OH a Rl 1-COOH (5 ekvivalentů) bylo provedeno pomocí HATU-DIEA, viz Carpino, F. A.; El-Faham, A.; Minor, C. A.; Albericio, F. J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1994, 201-203, (5:10) v DMF po dobu 90 minut. Po spojení byl proveden ninhydrinový test a pokud byl pozitivní, vazba byla za stejných podmínek opakována, jinak bylo v postupu pokračováno. Promývání mezi deprotekčním, vazebným a opět deprotekčním krokem bylo provedeno pomocí DMF (5 x 0,5 minuty) a CH2C12 (5 x 0,5 minuty), přičemž pokaždé bylo použito 10 ml roztoku na gram pryskyřice.
- 17CZ 304258 B6
Připojení Alloc-Aaa6-OH (7 ekvivalentů), kdy XI = O, bylo provedeno pomocí ekvimolárního množství DIPCD1 a 0,7 ekvivalentu DMAP po dobu 2 hodin. Toto připojování bylo dvakrát opakováno.
Odstranění skupiny Alloc bylo provedeno pomocí Pd(PPh3)4 (0,1 ekvivalentu) v přítomnosti PhSiH3 (10 ekvivalentů) pod argonovou atmosférou, viz Gómez,-Martínez, P.; Thieriet, N.; Albericio, F.; Guibé, F. J. Chem. Soc. Perkin 1 1999, 2871-2874.
Dehydratace byla provedena na pevné fázi pomocí EDC (ve vodě rozpustný karbodiimid, 100 ekvivalentů) v přítomnosti CuCl (60 ekvivalentů) v CH2C12-DMF (10:2) po dobu 6 dní. Fukase, K.; Kitazawa, M.; Sáno, A.; Shimbo, K.; Horimoto, S.; Kubo, A.; Wakamiya, T.; Shibe, A. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1992, 65,2227-2240.
Dipeptid Alloc-Aaa4-Aaa5-OH (5 ekvivalentů), který byl připraven v roztoku z Alloc-Aaa4-OH a H-Aaa5(OH, H)-O/Bu s EDC a poté dehydratován a opracován TFA, byl spojen s HATUDIEA (5:10) po dobu 16 hodin a ještě opakováno po dobu 3 hodin. Použití jiných vazebných reagencií založených na HOBt, jako je HBTU nebo DIPCDI-HOBt, vedlo k neúplným inkorporacím dipeptidu.
Odštěpování chráněného peptidů z pryskyřice bylo provedeno pomocí TFA-CH2CI2 (1:99) (5 x 30 sekund).
Cyklizační krok byl proveden pomocí DIPCDI-HOBt (3:3 ekviv.) v CH2CI2-DMF po dobu 2 hodin. Také mohou být použity jiné metody, jako je například PyBOP/DIEA (3:6 ekviv.) v DMF.
Závěrečné odstranění chránících skupin bylo provedeno pomocí TFA-H2O (95:5) po dobu 1 hodiny.
Příklady provedení vynálezu
Zkratky
Zkratky používané pro aminokyseliny a označování peptidů odpovídají pravidlům IUPAC-IUB komise pro biochemické názvosloví, viz. J. Biol. Chem. 1972, 247, 977-983. Jsou použity následující další zkratky: 4-AcBut-OH, 4 kyselina acetoxymáselná; AcButBut.OH, kyselina 4-(4acetoxybutanoyloxy)máselná; ACH, kyselina a-kyano-4-hydroxyskořicová; Alloc, allyloxykarbonyl; Boc, terč—butyloxykarbony!; t—Bu, terč—butyl; But—OH, kyselina máselná; Cl—TrtCI— pryskyřice, 2-chlorotritylchloridová pryskyřice; Dap, kyselina 2,3-diaminopropionová; 4DiMeABut-OH, kyselina N,N-dimethyl-4-aminomáselná; 3-DiMeBut-OH, kyselina 3,3dimethylmáselná; DHB, kyselina 2,5-dihydroxybenzoová; Z-Dhb, kyselin a,b-didehydro-aaminomáselná; DIEA, Ν,Ν-diisopropylethylamin; DMF, Ν,Ν-dimethylformamid; EDC, 1ethyl-3-(3'-dimethylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid; Etg, ethylglycin; ESMS, elektrosprejová hmotnostní spektrometrie; FABMS, hmotnostní spektrometrie pomocí bombardování rychlými atomy; Fmoc, 9-fluorenylmethoxykarbonyl; HATU, N-[(dimethylamino)-lH-l,2,3triazolo-[4,5-b]pyridin-l-yl-methylen]-N-methylmethanaminium hexafluorfosforečnan Noxid; HBTU, N-[(lH-benzotriazol-l-yl)](dimethylamino)methylen]-N-methylmethanaminium hexafluorofosforečnan N-oxid; 2-Hedo-OH, kyselina 2,4-hexadienová; Hep-OH, kyselina heptanová; HOAc, kyselina octová; HOAt, kyselina l-hydroxy-7-azabenzotriazol(3hydroxy3H-l,2,3-triazol-[4,5-b]pyridin); HOBt, 1-hydroxybenzotriazol; IBut-OH, kyselina isomáselná; 3-MeBut-OH, kyselina 3-methylmáselná; 5-MeHex-OH, kyselina 5-methylhexanová; MeOH, methanol; 4-MePen.OH, kyselina 4-methylpentanová; NMM, N-methylmorfolin; 4-HOBut, kyselina 4-hydroxymáselná; (b-OH)Phe-OH, b-hydroxyfenylalanin; Lit-OH, kyselina lithocho- 18CZ 304258 B6 lová; Pal, kyselina palmitová; Phe-OH, a,b-didehydrofenylalanin; PyAOP, 7-azabenzotriazoll-yl-N-oxy-tris-(pyrrolidin)fosfonium hexafluorofosforečnan; PyBOP, benzotriazol-l-yl-Noxy-tris-(pyrrolidin)fosfoniuni hexafluorofosforečnan; SPS, syntéza na pevné fázi; TFA, kyselina trifluoroctová; Tico-OH, kyselina tetraikosanová. Pokud není stanoveno jinak, symboly aminokyselin označují L konfiguraci.
Obecné postupy. Cl-TrtCl-pryskyřice, aminokyselinové deriváty chráněné Fmoc, HOBt, PyBOP, HATU byly od PerSeptive Biosystems (Framingham, MA), Bachem (Bubendorf, Switzerland), NovaBiochem (Láufenfingen, Switzerland). Alloc-aminokyseliny byly připraveny v podstatě tak, jak je popsáno Danglesem a kol., viz Dangles, O.; Guibé, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet, A. J. Org. Chem. 1987, 52, 4984 4993. a 5-MeHex-OH pomocí syntézy přes kyselinu malonovou. DIEA, DIPCDI, EDC, piperidin, TFA byly od Aldrich (Milwaukee, WI). DMF a CH2C12 byly od SDS (Peypin, Francie). Acetonitril (pro HPLC) byl od Scharlau (Barcelona, Španělsko). Všechny komerční reagencie a rozpouštědla byly použity tak, jak byly obdrženy, s výjimkou DMF a CH2C12, které byly probublány dusíkem, aby byly odstraněny těkavé kontaminující látky (DMF) a uloženy nad aktivovaným molekulárním sítem 0,4 nm (Merck, Darmstadt, Německo) (DMF) nebo CaCl2 (CH2C12). Extrakty organických roztoků byly sušeny nad bezvodým MgSCf, a poté následovalo odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku a teplot/ <40 °C.
Syntéza na pevné fázi byla provedena v polypropylenových injekčních stříkačkách (20, 10 ml), ukončených porézním polypropylenovým diskem. Rozpouštědla a rozpustné reagencie byly odstraňovány odsáváním. Odstranění skupiny Fmoc bylo provedeno pomocí piperidinu-DMF (2:8 objem) (lxl minuta, 3x5 minut, 1x10 minut). Promývání mezi odstraňováním chránících skupin, připojováním a opětnými kroky odstraňování chránících skupin byly provedeny pomocí DMF (5 x 0,5 minuty) a CH2C12 (5 x 0,5 minuty), pokaždé bylo použito 10 ml rozpouštědla na gram pryskyřice. Peptidová syntéza a promývání byly prováděny při teplotě 25 °C. Syntézy prováděné na pevné fázi byly kontrolovány pomocí HPLC alikvotu (přibližně 10 mg) meziproduktů, získaných po odštěpení směsí TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut z peptidy 1-pryskyřice. Sloupce pro HPLC [Kromasil (podmínky A až F) /C4 (podmínky G,H)], sloupec pro reverzní fázi (byly od 4.6 x 250 mm, 10 mm) byly od Akzo Nobel (Bohům, Sweden). Analytická HPLC byla provedena na zařízení Shimadzu obsahujícím dvě pumpy pro podávání roztoků (model LC-6A), automatický injektor (model SIL-6B), detektor proměnlivých vlnových délek (model SPD6A), kontrolní jednotku systému (model SCL-6B) a souřadnicový zapisovač (model C-R6A). Detekce UV byla prováděna při 220 nm, a lineární gradienty od CH3CN (+0,036% TFA) do H2O (+0,045% TFA) byly prováděny při rychlosti průtoku 1,0 ml/min od: (podmínky A) 1:9 až 10:0 po dobu 30 min; (podmínky B) 3:7 až 10.Ό po dobu 30 min; (podmínky C) 1:19 až 19:1 po dobu 30 min; (podmínky D) 45:55 až 90:10 po dobu 30 min; (podmínky E) 45:55 až 6:4 po dobu 30 min; (podmínky F) izokraticky 1:1; (podmínky G) 3:7 až 1:0 po dobu 30 min; (podmínky H) 1:1 až 1:0 po dobu 30 min.
MALDI-TOF- a ES-MS analýzy peptidových vzorků byly provedeny v zařízení PerSeptive Biosystems Voyager DE RP, za použití matric CHCA nebo DHB, a v spektrometru Micromass VGquattro. Vzorky peptid-pryskyřice byly hydrolyzovány v 12 N vodném roztoku HCl-kyselina propionová (1:1) při teplotě 155 °C po dobu 1 až 3 hodin a vzorky bez peptidů byly hydrolyzovány v 6 N vodném roztoku HCI při teplotě 155 °C po dobu 3 hodin. Následující analýzy aminokyselin byly provedeny na autoanalyzátoru Beclanan System 6300. 'H-NMR (500 MHz, 200 MHz) a 13C-NMR (50 MHz) spektroskopie byly provedeny na zařízení Bruker DMX-500 (11,7 T) a Varian Gemini 200 (4,7 T). Chemické posuny (d) jsou vyjádřeny jako počet částí z miliónu ve směru odpovídajícímu snižování síly pole TMS. Vazebné konstanty jsou vyjádřeny v hertzech.
- 19CZ 304258 B6
Kahalalid F (1)
Příklad 1: H-D-Val-O-TrtC 1-pryskyřice
Cl-TrtCl-pryskyřice (1 g, 1,35 mmol/g) byla umístěna do 20ml polypropylenových injekčních stříkaček, ukončených porézním polypropylenovým filtračním diskem. Pryskyřice byla potom promyta CH2C12 (5 x 0,5 min.) a byl přidán roztok Fmoc-D-Val-OH (92 mg, 0,27 mmol, 0,2 ekvivalentu) a DIEA (471 ml, 2,7 mmol, 2 ekvivalenty) v CH2C12 (2,5 ml) a směs byla míchána po dobu 1 hodiny. Reakce byla ukončena přidáním MeOH (800 ml) a mícháním po dobu 15 minut. Fmoc-D-Val-O-TrtCl-pryskyřice byla dále promývána následujícími roztoky CH2C12 (3 x 0,5 min.), DMF (3 x 0,5 min.), piperidin-CH2Cl2-DMF (1:9.5:9,5 1 x 10 min.), piperidin-DMF (1:4, 1 x 15 min.), DMF (5 x 0,5 min.), isopropanol (2 χ 1 min.), DMF (5 x 0,5 min.), MeOH (2 χ 1 min.) a sušena ve vakuu. Účinnost vazby byla vypočtena na základě AAA (analýzy aminokyselin) a byla 0,15 mmol/g.
Příklad 2: Fmoc-D-allo-D-allo-Thr(Val-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-pryskyřice
Fmoc-D-allo-Ile-OH (265 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc-D-allo-Thr-OH (volná hydroxylová skupina) (256 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), a Fmoc-D-allo-Ile-OH (265 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) bylo postupně přidáno k výše získané H-D-Val-O-TrtCl-pryskyřici za použití HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) a DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 ekvivalentů) v DMF (2,5 ml). Ve všech případech byl po 90 minutách vazebné reakce ninhydrinový test negativní. Odstranění skupiny Fmoc a promývání byly provedeny tak, jak je popsáno v Obecných postupech. Alloc-Val-OH (211 mg, 1,05 mmol, 7 ekvivalentů) bylo připojeno kDIPCDI (163 mg, 1,05 mmol, 7 ekvivalentů) v přítomnosti DMAP (12,8 mg, 0,105 mmol, 0,7 ekvivalentu). Tato vazebná reakce byla dvakrát za stejných podmínek opakována. Na alikvot peptidyl— pryskyřice bylo působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a HPLC (podmínky A, tR 25,9 min.) hrubého produktu získaného po odpaření ukázala >98% čistotu. ESMS, vypočteno pro C45H63N5O11, 849,5. Zjištěno: m/z 850,1 [M+H]+.
Příklad 3: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-alloThr(V al-Al loc)-D-al 1 o—I le-D-V al-O-T rtC 1-pryskyřice
Skupina Fmoc byla odstraněna a k výše uvedené peptidyl-pryskyřici (příklad 2) byly postupně přidány Fmoc-Om(Boc)-OH (341 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc-D-Pro-OH (253 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc—D—Val—OH (2555 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc—Val— OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc-Thr(tBu)-OH (298 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů), Fmoc-D-Val-OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) Fmoc-D-Val-OH (255 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) a 5-MeHex-OH (98 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) za použití HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) a DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 ekvivalentů) v DMF (2,5 ml). Ve všech případech byly po 90 minutách vazebné reakce ninhydrinový nebo chloranilový (po inkorporaci D-Val) test negativní. Odstranění skupiny Fmoc a promývání byly provedeny tak, jak je popsáno v Obecných postupech. Na alikvot peptidyl-pryskyřice bylo působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a HPLC (podmínky A, tR 17,2 min.) hrubého produktu získaného po odpaření ukázala >82% čistotu. ESMS, vypočteno pro C66Hn6N12O|7, 1348,9. Zjištěno: m/z 1350,0 [M+Hf.
-20CZ 304258 B6
Příklad 4: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-alloThr(Val-Thr-Phe-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-pryskyřice
Skupina Alloc byla odstraněna pomocí Pd(PPh3)4 (17,3 mg, 0,015 mmol, 0,1 ekvivalentu) v přítomnosti PhSiH3 (185 μΐ, 1,5 mmol, 10 ekvivalentů) pod argonovou atmosférou. K výše uvedené peptidyl-pryskyřici (příklad 3) byly postupně přidány Fmoc-Thr-OH (volná hydroxylová skupina) (256 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) a Alloc-Phe-OH (187 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) za použití HATU (285 mg, 0,75 mmol, 5 ekvivalentů) a DIEA (261 ml, 1,5 mmol, 10 ekvivalentů) v DMF (2,5 ml). Ve všech případech byl po 90 minutách vazebné reakce ninhydrinový test negativní. Odstranění skupiny Fmoc a promývání byly provedeny tak, jak je popsáno v Obecných postupech. Na alikvot peptidyl-pryskyřice bylo působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a HPLC (podmínky A, tR 17,8 min.) hrubého produktu získaného po odpaření ukázala >70% čistotu. ESMS, vypočteno pro CygH^Ni^o, 1597,0. Zjištěno: m/z 1598,2 [M+H]+.
Příklad 5: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Om(Boc)-D-allo-Ile-D-alloThr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-pryskyřice (prostřednictvím dehydratace na pevné fázi)
Na výše uvedenou peptidyl-pryskyřici (příklad 4) bylo působeno EDC (2,88 g, 15 mmol, 100 ekvivalentů), CuCl (891 mg, 9 mmol, 60 ekvivalentů) v CH2C12-DMF (10:2) (12 ml) po dobu 6 dní. Po důkladném promytí DMF, CH2C12 a DMF, byla skupina Alloc odstraněna pomocí Pd(PPh3)4 (17,3 mg, 0,015 mmol, 0,1 ekvivalentu) v přítomnosti PhSiH3 (185 μΐ, 1,5 mmol, 10 ekvivalentů) pod argonovou atmosférou. Výsledná účinnost vazby byla vypočtena na základě AAA (analýzy aminokyselin) a byla 0,11 mmol/g (92 % celkového výtěžku. Na alikvot peptidylpryskyřice bylo působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a HPLC (podmínky A, tR 17,2 min.) hrubého produktu získaného po odpaření ukázala >70% čistotu. ESMS, vypočteno pro C75H126N14Oi7, 1495,0. Zjištěno: m/z 1,496,0 [M+H]+.
Příklad 6: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Om(Boc)-D-allo-Ile-D-alloThr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-al Ιο—I le-D-Val-OH
Chráněný peptid byl odštěpen od pryskyřice (0,5 g, 55,9 pmol) pomocí směsi TFA-CH2C12 (1:99) (5 x 30 s). Spojené filtráty byly odpařeny do sucha a lyofilizovány a bylo získáno 80,2 mg (48,5 μιηοΐ, 87% výtěžek) sloučeniny uvedené v nadpisu, která vykazovala čistotu >70%, jak bylo zjištěno pomocí HPLC (podmínky B, tR 25.7 min.). ESMS, vypočteno pro C84H142Nl4Oi9, 1651,1. Zjištěno: m/z 1652,3 [M+H].
Příklad 7: Kahalalid F (I)
Chráněný peptid (příklad 6) (40 mg, 24 pmol) byl rozpuštěn v DMF (25 ml) a byly přidány PyBOP (37,8 mg, 73 pmol, 3 ekvivalenty) a DIEA (25 ml, 145 pmol, 6 ekvivalentů). Směs byla ponechána míchat po dobu 1 hodiny a potom bylo rozpouštědlo odstraněno odpařováním za sníženého tlaku. Chráněný peptid byl rozpuštěn v TFA-H2O (19:1, 5 ml) a směs byla ponechána míchat 1 hodinu. Rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením za sníženého tlaku a potom byla přidána H2O (5 ml) a provedena lyofilizace. Hrubý produkt byl čištěn pomocí ehromatografie za středního tlaku (Vydac C,8 15-20 μιη, 30 nm, 240x24 mm), lineární gradient od 20 do 60% acetonitrilu (+0,05% TFA) ve vodě (+0,05% TFA) po dobu 5 hodin (každého rozpouštědla 300 ml), 120 ml/h, detekce při 220 nm, a byla tak získána sloučenina uvedená v nadpisu (5,0 mg, 3,4 pmol, 14% výtěžek). MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75Hi24Ni4Oi6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1478,7 [M+H]+, 1500,6 [M+Na]+, 1516,5 (M+K]+. Produkt byl eluován při HPLC společně
-21 CZ 304258 B6 [podmínky D (tR 12,5 min.), E (tR 17,4 min.) a F(tR 12,1 min.)] se vzorkem skutečného kahalalidu
F. 'H-NMR. (500 MHz, d6-DMSO) spektrum sloučeniny bylo identické s přírodním produktem (údaje uvedené v tabulce 1).
Tabulka 1
zbytek | N-H | Ha | Ηβ | jiný |
(Z)-Dhb | 9,69 (s) | - | 6,34 (q, J = 7,0 Hz) | 1,26 (d, J = 7,5 Hz, y-CH3) |
D-al.lo-lle 1 | 8,82 (d, J = 10,0 Hz) | 4,31 | 1,73 | 1,31,1,02, 0,77 (y-CH2, y- CH3, 5-CH3) |
L-Phe | 8,79 (d, J = 5,5 Hz) | 4,42 | 2,93 (m) | 7,20 (1 H Ar, m) 7,28 (4H Ar, m) |
D-al.lo- Thr | 8,56 (d, J = 8,0 Hz) | 4,53 | 4,96 (m) | 1,07 (δ, J = 6,5 Hz, y-CH3) |
D-Val 3 | 8,10 (d, J = 8,5 Hz) | 4,26 | 1,94 | 0,86 (2 y-CH3) |
L-Om | 7,95 (d, J = 8,5 Hz) | 4,49 | 1,48 (2H) | 1,67 (y-CH2), 2,74 (bs, δ- CH2), 7,69 (ε-ΝΗ3 +) |
D-al.lo-lle 2 | 7,90 (d) | 4,37 | 1,69 | 1,30, 1,03, 0,77 (y-CH2, y- CH3, 6-CH3) |
D-Val 5 | 7,88 (d) | 4,23 | 1,96 | 0,84 (2 y-CH3) |
L-Thr | 7,82 (d, J = 8,0 Hz) | 4,26 | 3,97 (m) | 4,88 (d, J = 5,0 Hz, OH), 0.98 (d, J = 6,5 Hz, y-CH3) |
D-Val2 | 7,62 (d, J = 8,5 Hz) | 4,46 | 2,17 | 0,77 (y-CH3), 0.62 (d, J = 7,0 Hz, y-CH3) |
L-Val 4 | 7,57 (d, J = 8,5 Hz) | 4,28 | 1,98 | 0,80 (2 y-CH3) |
L-Val 1 | 6,76 (d, J = 9,0 Hz) | 3,86 | 1,39 | 0.62 (d, J = 7,0 Hz, y-CH3), 0,58 (d, J = 6,0 Hz, y-CH3) |
D-Pro | - | 4,36 | 2,03, 1,87, 1,79 (β-ΟΗ2, y-CH2), 3,76 (1H, m, 5-CH2), 3,53 (1H, m, -CH2) | |
5-MeHex | 2,13 (2H) | 1,47 (β-ΟΗ2, δ-CH), 1,11 (y-CH2), 0,82 (2 ε- CH3) |
-22CZ 304258 Β6
Příklad 7bis: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-alIo-Thr-Dallo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 7. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tn 17,4 min., podmínky B) a ESMS, vypočteno pro C75H124N]4Oi6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1501,3 [M+Na]+, 1,517,3 [M+K]+.
Kahalalid F (I)
Příklad 8: Alloc-Phe-Thr-OtBu
H-Thr-OtBu*HCl (3,1 g, 15 mmol, 1,3 ekvivalentu) byl rozpuštěn v CH2C12 (30 ml) a bylo přidáno DIEA (2,9 ml, 17 mmol, 1,5 ekvivalentu) a směs byla ponechána míchat po dobu 30 min. Potom byly přidány Alloc-Phe-OH (2,8 g, 11 mmol, 1 ekvivalent) a EDC (2,8 g, 15 mmol, 1,3 ekvivalentu) v CH2C12 (35 ml) a reakce byla míchána pc dobu 18 hodin. Organická reakční směs byla promyta H2O (3 x 25ml), sušena (MgSO4) a koncentrována ve vakuu. Výsledný olej (4,12 g) byl chromatograficky čištěn [CHCl3-MeOH-HOAc (9:1:0,2)] a poskytl produkt uvedený v nadpisu (3,25 g, 8 mmol, 71% výtěžek), který byl charakterizován analytickou HPLC (t!t 20,9 min, >98% čistota; podmínky C); ESMS, vypočteno pro C2iH30N2O6, 406,2. Zjištěno: m/z 408,0 [M+H]+; 'H-NMR (200 MHz, CDC13): 7,1 až 7,3 (5 H, m, Ar); 6,89 (1 H, d, J = 8,8 Hz, NH); 5,7 až 5,9 (1 H, m, CH allyl); 5,56 (1 H, d, J = 8,0 Hz, OH); 5,2 až 5,3 (2 H, m, CH2 gallyl); 4,52 (2 H, d, J = 5,4 Hz, CH2 a-allyl); 4,45 (1 H, dd, J = 8,4 Hz, 2,8 Hz, a-CH Thr); 4,22 (1 H, dq, J = 6,2 Hz, J = 3,0 Hz, b-CH Thr); 3,0 až 3,2 (2 H, m, b-CH2 Phe); 1,47 (9 H, s, tBu); 1,15 (3 H, d, J = 6,6 Hz, g-CH3 Thr); l3C-NMR (50 MHz, CDC13): 172,2 (CO), 169,5 (CO); 156,0 (CO); 136,1 (Cq, Ar); 132,5 (CH, allyl); 129,3 (CH, Ar); 128,5 (CH, Ar); 126,9 (CH, Ar); 117,7 (CH2, allyl); 82,7 (Cq, tBu); 68,5 (b-CH Thr); 65,9 (CPE, allyl); 58,0 (a-CH Thr); 56,2 (aCH Phe); 38,3 (b-CH2 Phe); 28,0 (CH3, tBu); 20,8 (g-CH3 Thr).
Příklad 9: Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu
Alloc-Phe-Thr-OtBu (3,25 g, 8,0 mmol), EDC (9,90 g, 52 mmol, 6,5 ekvivalentu) a CuCl (2,14 g, 22 mmol, 2,7 ekvivalentu) bylo rozpuštěno ve směsi CH2Cl2-bezvodý DMF (65 ml, 12:1) v atmosféře N2 a směs byla ponechána míchat po dobu 2 dní v atmosféře N2. Organické rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek byl dán do nasyceného roztoku EDTA (100 ml), který byl extrahován EtOAc (3 x 50 ml). Spojený organický roztok byl promýván solankou (3 x 60 ml), sušen (MgSO4) a koncentrován ve vakuu, čímž byla získána světle žlutá pevná látka (2,8 g), která byla čištěna chromatografii [CHCl3-MeOH-HOAc (9:1:0,1)] a byl získán produkt uvedený v nadpisu (2,6 g, 6,7 mmol, 84% výtěžek), který byl charakterizován pomocí analytické HPLC (tR 23,1 min., >95% čistota; podmínky C); ESMS, vypočteno pro C2iH28N2O5, 388,2. Zjištěno: m/z 389,6 [M+H]+; ’Η-NMR (200 MHz, CDC13): 7,2 až 7,4 (5 H, m, Ar); 6,69 (1 H, q, J = 7,4 Hz, CH Dhb); 5,8 až 6,0 (1 H, m, CH allyl); 5,2 až 5,3 (2 H, m, CH2 g-allyl); 4,5 až 4,6 (2 H, m, a-CH2 allyl); 3,1 až 3,3 (2 H, m, b-CH2 Phe); 1,67 (3 H, d, J = 7,2 Hz, CH3 Dhb); 1,47 (9 H, s, tBu); 13C-NMR(50 MHz, CDC13): 168,9 (CO); 163,1 (CO); 156,0 (CO); 136,0 (Cq, Ar); 132,6, 132,3 (CH, allyl; b-CH Dhb); 129,3 (CH, Ar); 128,7 (CH, Ar); 127,0 (CH, Ar); 117,9 (CH2, allyl); 81,7 (Cq, tBu); 66,0 (CH2, allyl); 56,3 (a-CH Phe); 38,2 (b-CH2 Phe); 28,0 (CH3, tBu); 14,7 (CH3 Dhb).
-23 CZ 304258 B6
Příklad 10: Alloc-Phe-Z-Dhb-OH
Alloc-Phe-Z-Dhb-OH
Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu (2,6 g, 6,7 mmol) byl rozpuštěn v TFA-CH2Cl2-H2O (90:8:2, 5,5 ml) a směs byla ponechána míchat po dobu 3 hodin. Organická reakce byla koncentrována ve vakuu a byl získán produkt uvedený v nadpisu (2,2 g, 6,6 mmol, 99% výtěžek), který byl charakterizován pomocí analytické HPLC (tR 17,0 min., >95% čistota; podmínky C); ESMS, vypočteno pro Cl7H20N2O5, 332,1. Zjištěno: m/z 333,7 [M+H]+; 'H-NMR (200 MHz, CDC13): 7,2 až 7,3 (5 H, m, Ar); 6,84 (1 H, q, J = 7,2 Hz, CH Dhb); 5,8 až 6,0 (1 H, m, CH allyl); 5,1 až 5,3 (2 H, m, CH2 g—allyl); 4,4 až 4,5 (2 H, m, a-CH2 allyl); 3,2 až 3,3 (1 H, m, b-CH2 Phe); 2,8 až 3,0 (1 H, m, bCH2 Phe); 1,66 (3 H, d, J = 7,4 Hz, CH3 Dhb); 13C-NMR (50 MHz, CDC13): 173,1 (CO); 138,5 (Cq, Ar); 136,7, 134,1 (CH, allyl; b-CH Dhb); 130,3 (CH, Ar); 129,4 (CH, Ar); 127,7 (CH, Ar); 117,4 (CH2, allyl); 66,6 (CH2, allyl); 57,8 (a-CH Phe); 39,1 (b-CH2 Phe); 14,1 (CH3 Dhb).
Příklad 11: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Om(Boc)-D-allo-IleD-alloThr( V al-A 11 oc)-Z)-a//o-I le-D-V al-O-T rtC 1-pry skyřice
Cl-TrtCl-pryskyřice (0,45 g, l,35mmol/g) byla umístěna do lOml polypropylenových injekčních stříkaček, ukončených porézním polypropylenovým filtračním diskem. Peptidyl-pryskyřice byl získán pomocí stejného postupu, který je popsán v příkladech 1 až 3 s tou výjimkou, že při připojování první aminokyseliny (Fmoc-D-Val-OH) k pryskyřici bylo použito 0,3 ekvivalentu namísto 0,2 ekvivalentu. Počáteční náplň, jak bylo vypočteno na základě aminokyselinové analýzy, byla 0,29 mmol/g. Jakmile byly aminokyseliny navázány, na alikvot peptidyl-pryskyřice bylo působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a HPLC (podmínky B, tR 17,3 min.) hrubého produktu, získaného po odpaření, vykazovala čistotu >80%. ESMS, vypočteno pro CéóHnéN^On, 1348,9. Zjištěno: m/z 1350,1 [M+H]+.
Příklad 12: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-IleD-alloThr(Val-Z-Dhb-Phe-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-pryskyřice (pomocí inkorporace dipeptidu)
Na peptidyl-pryskyřici bylo kvůli odstranění skupiny Alloc působeno Pd(PPh3)4 (15,1 mg, 0,013 mmol, 0,1 ekvivalentu) v přítomnosti PhSiH3 (161 μΐ, 1,3 mmol, 10 ekvivalentu) v atmosféře Ar. Alloc-Phe-Z-Dhb-OH (217 mg, 0,65 mmol, 5 ekvivalentů) a HATU (249 mg, 0,65 mmol, 5 ekvivalentů) byly rozpuštěny v DMF (1,25 ml) a přidány k peptidyl-pryskyřici, potom byl přidán DIEA (228 μΐ, 1,3 mmol, 10 ekvivalentů) a směs byla míchána přes noc. Po promýváních bylo, pokud byl ninhydrinový test negativní, připojování opakováno se stejným množstvím chemikálií po dobu 3 hodin. Po promýváních pomocí DMF a CH2C12, bylo na alikvot peptidylpryskyřice působeno TFA-H2O (9:1) po dobu 60 minut a po HPLC (podmínky B, tR 18,3 min.) vykazoval hrubý produkt, získaný po odpaření, čistotu >80%. MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C79H|30N14O19, 1579,0. Zjištěno: m/z 1,580,3 [M+Hf, 1602,2 [M+Na]+, 1618,2 [M+K]+.
Příklad 13: 5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-alloThr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-al 1 o-l le-D-Val-OH
Skupina Alloc byla z peptidyl-pryskyřice (příklad 12) odstraněna pomocí Pd(pPh3)4 (15,1 mg, 0,013 mmol, 0,1 ekvivalentu) v přítomnosti PhSiH3 (161 μΐ, 1,3 mmol, 10 ekvivalentů) v atmosféře Ar. Závěrečná náplň, jak bylo vypočteno na základě aminokyselinové analýzy, byla 0,16 mmol/g (79% výtěžek). Chráněný peptid byl z pryskyřice odštěpen (235 mg, 37,5 mmol) pomocí směsi TFA-CH2C12 (1:99) (5 x 30 sec.). Spojené filtráty byly za sníženého tlaku odpa-24CZ 304258 B6 řeny dosucha a lyofilizovány, čímž bylo získáno 40,5 mg (24,5 mmol, 65%) sloučeniny uvedené v nadpise v čistotě >80%, jak bylo zjištěno pomocí HPLC (podmínky B, tR 24,3 min.). MALDITOF-MS, vypočteno pro C84H142N14O19, 1651,1. Zjištěno: m/z 1674,8 [M+Na]+, 1690,8 [M+K]+.
Příklad 14: Kahalalid F (I)
Chráněný peptid (příklad 13) (38,5 mg, 23 pmol) byl rozpuštěn v DMF (25 ml) a byly přidány PyBOP (36,4 mg, 70 pmol, 3 ekvivalenty) a DIEA (24 ml, 140 pmol, 6 ekvivalentů). Směs byla ponechána míchat po dobu 1 hodiny a potom bylo rozpouštědlo odstraněno odpařováním za sníženého tlaku. Chráněný cyklický peptid byl rozpuštěn v TFA-H2O (19:1, 5 ml) a směs byla ponechána míchat 1 hodinu. Rozpouštědlo bylo odstraněno odpařením za sníženého tlaku a potom byla přidána H2O (5 ml) a provedena lyofilizace. Hrubý produkt byl čištěn tak, jak bylo popsáno v příkladu 7 a byla získána sloučenina uvedená v nadpisu (3,6 mg, 2,4 pmol, 10% výtěžek), která byla identická s produktem získaným v příkladu 7.
5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-DVal-Phe-Z-Dhb-Val) (struktura určená pro kahalalid F Goetzem, G. a kol., Tetrahedron, 1999, sv. 55, str. 7739-7746)
Příklad 15: 5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (pomocí dehydratace na pevné fázi)
Experimentální postupy byly provedeny, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3, Fmoc-Val-OH byl inkorporován do D-Pro-peptidyl-pryskyřice a potom po odstranění skupiny Fmoc byl inkorporován Fmoc-D-Val-OH. Závěrečná náplň, jak bylo vypočteno na základě aminokyselinové analýzy, byla 0,106 mmol/g (87% celkový výtěžek), výtěžek štěpení byl 83%, a bylo získáno 4,7 mg sloučeniny uvedené v nadpise, což představuje
13% celkový výtěžek ve třech krocích - cyklizačním kroku, kroku odstraňování chránících skupin a purifikačním kroku. Tento produkt byl eluován v HPLC o 0,8 až 1,9 min. později než vzorek pravého kahalalidu F [podmínky D (tR 13,3 oproti 12,5 min.), E (tR 18,8 oproti 17,4 min.), a F(tR 14,0 oproti 12,1 min.)]. MALD1-TOF-MS, vypočteno pro C75Hi24N|4O|6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1478,7 [M+H]+, 1500,7 [M+Na]+, 1516,6 [M+K]+.
'H-NMR (500 MHz, d6-DMSO) spektrum sloučeniny (tabulky 11 a III) bylo odlišné od spektra, získaného u vzorku skutečného kahalalidu F. Největší odchylka byla v tom, že získaná syntetická sloučenina vykazovala dvě konformace, což bylo způsobeno cis-trans rovnováhou mezi L-ValD-Pro zbytky, která nebyla pozorována ani v přírodním produktu ani v izomerů získaném v pří40 kladu 7.
-25CZ 304258 B6
Tabulka II (hlavní, trans izomer)
zbytek | N-H | Ha | Ηβ | jiný |
(Z)-Dhb | 9,67 (s) | - | 6,33 (q) | 1,27 (d, J = 7,0 Hz, y-CH3) |
D-al.lo-lle 1 | 8,80 (d) | 4,31 | 1,73 | 1,32, 0,77 (y-CH2, y-CH3, δ- -CH3) |
L-Phe | 8,78 (d, J = 5,5 Hz) | 4,43 | 2,93 (m) | 7,20 (1 H Ar, m) 7,28 (4H Ar, m) |
D-al.lo- -Thr | 8,58 (d, J = 9,0 Hz) | 4,53 | 4,95 (m) | 1,07 (d, J = 6,5 Hz, y-CH3) |
L-Val 3 | 7,97 (d, J = 8,5 Hz) | 4,34 | 1,94 | 0,84 (2 y-CH3) |
L-Orn | 7,77 (d, J = 8,5 Hz) | 4,47 | 1,46 (2H) | 1,66(y-CH2), 2,72 (bs, δ-CH2), 7,66 (ε-ΝΗ3 +) |
D-al.lo-lle 2 | 7,87 (d, H= 8,5 Hz)) | 4,37 | 1,68 | 0,75 (δ-ΟΗ3 nebo d-CH3 a y-CH3) |
D-Val 5 | 7,90 | 4,22 | 1,95 | 0,85 (2 y-CH3) |
L-Thr | 7,90 (d) | 4,24 | 4,02 | 4.98 (OH), 1,02 (d, J = 6,5 Hz, y-CH3) |
D-Val2 | 7,63 (d, J = 8,5 Hz) | 4,45 | 2,18 | 0,77 (y-CH3), 0,62 (y-CH3) |
D-Val 4 | 7,56 (d, J = 9,0 Hz) | 4,34 | 2,02 | 0,84 (γ-CHa), 0,79 (y-CH3), |
L-Val 1 | 6,75 (d) | 3,86 | 1,39 | 0,62 (2 y-CH3) |
D-Pro | - | 4,30 | 2,03, 1,81,1,73 (β-ΟΗ2, y-CH2), 3,73 (1H, m, Ó-CH2), 3,52 (1H, m, 5-CH2) | |
5-MeHex | 2,08 (1H) 2,15 (1H) | 1,48 (b-CH2, δ-CH), 1,11 (y-CH2), 0,82 (2 ε- -CH3) |
-26CZ 304258 B6
Tabulka III (vedlejší, cis izomer)
zbytek | N-H | Ha | Ηβ | jiný |
(Z)-Dhb | 9,63 (s) | - | 6,33 (q) | 1,278 (d, J =6,5 Hz, y-CH3) |
D-al.lo-lle 1 | 8,76 (d) | 4,30 | 1,71 | 1,33, 0,76 (y-CH2, y-CH3, δ- -CH3) |
L-Phe | 8,78 (d, J = 5,5 Hz) | 4,43 | 2,93 (m) | 7,20 (1 H Ar, m) 7,28 (4H Ar, m) |
D-al.lo- -Thr | 8,58 (d, J = 9,0 Hz) | 4,53 | 4,95 (m) | 1,00 (y-CH3) |
L-Val 3 | 8,06 (d, J = 8,5 Hz) | 4,11 | 1,81 | 0,71 (y-CH3), 0,60 (y-CH3) |
L-Orn | 8,37 (d, J = 9,0 Hz) | 4,62 | 1,52 (2H) | 1,64 (y-CH2), 2,78 (bs, δ- -CH2), 7,66 (ε-ΝΗ3 +) |
D-al.lo-lle | 8,09 (d, H= 9,0 Hz)) | 4,42 | 1,64 | 0,77 (δ-0Η3 nebo d-CH3 a |
2 | Y-CH3) | |||
D-Val 5 | 7,90 | 4,22 | 1,95 | 0,85 (2 y-CH3) |
L-Thr | 7,88 (d) | 4,23 | 3,99 | 4.93 (OH), 1,02 (y-CH3) |
D-Val2 | 7,63 (d, J = 8,5 Hz) | 4,45 | 2,18 | 0,77 (y-CH3), 0,62 (y-CH3) |
D-Val 4 | 7,49 (d, J = 9,0 Hz) | 4,34 | 1,94 | 0,79 (y-CH3), 0,73 (y-CH3), |
L-Val 1 | 6,72 (d) | 3,84 | 1,38 | 0,62 (2 y-CH3) |
D-Pro | - | 4,93 | 2,06, 1,89, 1,75 (β-ΟΗ2, y-CH2), 3,3 (m, δ- -CH2) | |
5-MeHex | 2,08 (1H) 2,15 (1H) | 1,48 (p-CH2, δ-CH), 1,11 (y-CH2), 0,82 (2 ε- -CH3) |
Příklad 15bis: 5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D_allo-lle-cyklo(D-allo-ThrD-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racernizace během cyklizačního kroku) v příkladu 15. Produkt byl charakterizován pomocí analytické HPLC (//; 17,6 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75H124N14O16, 1477,9. Zjištěno: m/z 1479,2 [M+H]+; 1501,2 [M+Na]+, 1517,2 [M+K]+.
-27CZ 304258 B6
Příklad 16: 5-MeHex-D-VaI-Thr-D-VaI-VaI-D-Pro-Om-I>-aIlo-Il^-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (pomocí inkorporace dipeptidu)
Experimentální postupy byly provedeny, jak bylo popsáno v příkladech 8 až 14 pouze stou výjimkou, že v příkladu 14, Fmoc-Val-OH byl inkorporován do D-Pro-peptidyl-pryskyřice a potom po odstranění skupiny Fmoc byl inkorporován Fmoc-D-Val-OH. Závěrečná náplň, jak bylo vypočteno na základě aminokyselinové analýzy, bylo 0,16 mmol/g (79% celkový výtěžek), výtěžek štěpení byl 78%, a bylo získáno 3,4 mg sloučeniny uvedené v nadpise, což představuje 10% celkový výtěžek ve třech krocích - cyklizačním kroku, kroku odstraňování chráničích skupin a purifikačním kroku. Vyčištěný produkt byl identický s produktem získaným v příkladu 15. Hamann a kol., Kahalalid B [5-MeHex-Tyr-cyklo(D-Ser-Phe-D-Leu-Pro-Thr-Gly)j
Příklad 17: H_Thr(tBu)-O-TrtCl-pryskyřice
Cl-TrtCl-pryskyřice (0,5 g, 1,35 mmol/g) byla umístěna do lOml polypropylenových injekčních stříkaček, ukončených porézním polypropylenovým filtračním diskem. Pryskyřice byla potom promyta CH2C12 (5 x 0,5 min.), byly přidány roztoky Fmoc-Thr(tBu)-OH (54 mg, 0,135 mmol, 0,2 ekvivalentu) a DIEA (235 ml, 1,35 mmol, 2 ekvivalenty) v CH2C12 (1,25 ml) a směs byla míchána po dobu 1 hodiny. Reakce byla ukončena přidáním MeOH (400 ml) po patnáctiminutovém míchání. Fmoc-Thr(tBl:t)-O-TrtCl-pryskyřice byla podrobena následujícím promýváním a opracováním: CH2C12 (3x0,5 min.), DMF (3 x 0,5 min.), piperidin-CH2Cl2-DMF (1:9,5:9,5, 1x10 min.), piperidin-DMF (1:4, 1 x 15 min.), DMF (5 x 0,5 min.), isopropanol (2 x 1 min.), DMF (5 x 0,5 min.), MeOH (2 x 1 min.) a sušena ve vakuu. Náplň, jak bylo vypočteno na základě aminokyselinové analýzy, byla 0,15 mmol/g.
Příklad 18: 5-MeHex-Tyr-D-Ser(Gly-H)-Phe-D-Leu-Pro-Thr-OH
Fmoc-Pro-OH (178 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů), Fmoc-D-Leu-OH (187 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů), Fmoc-Phe-OH (204 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů), Fmoc-D-Ser-OH (volná hydroxylová skupina) (173 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů), Fmoc-Tyr(tBu)-OH (243 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) a 5-MeHex-OH (69 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) byly postupně přidány kvýše získanému H-Thr(tBu)-O-TrtCl-pryskyřice pomocí DIPCDI (82 μΐ, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) a HOBt (81 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) v DMF (1,25 ml). Ve všech případech kromě u D-Ser, byl po 90 minutách vazebné reakce ninhydrinový test negativní. Fmoc-D-SerOH (173 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) byl znovu připojován s HATU (201 mg, 0,53 mmol, 7 ekvivalentů) v přítomnosti DIEA (184 μΐ, 1,06 mmol, 14 ekvivalentů) v DMF po dobu 90 min. Odstranění skupiny Fmoc a promývání byly provedeny tak, jak bylo popsáno v obecných postupech. Boc-Gly-OH (119 mg, 0,68 mmol, 9 ekvivalentů) byl připojován pomocí DIPCDI (105 μΐ, 0,68 mmol, 9 ekvivalentů) v přítomnosti DMAP (8,3 mg, 68 pmol, 0,9 ekvivalentu) po dobu
2,5 hodiny. Připojování bylo opakováno s čerstvými reagenciemi po dobu 1,5 hodiny. Výsledná náplň byla 0,10 mmol/g, což představuje 77% výtěžek syntézy. Nechráněný peptid byl z pryskyřice odštěpen (525 mg, 54 μιηοΐ) působením TFA-H2O (92:8) po dobu 2 hodin. Spojené filtráty byly za sníženého tlaku odpařeny do sucha, byla přidána H2O (5 ml), roztok byl lyofilizován a byly získány 43,0 mg (48,0 pmol, 89% výtěžek) sloučeniny uvedené v nadpisu, která vykazovala čistotu >85% a byla kontrolována pomocí HPLC (podmínky A, 18,5 min.). ESMS, vypočteno pro C45H65N7OP, 895,5. Zjištěno: m/z 896,6 [M+H]+.
-28CZ 304258 B6
Příklad 19: Kahalalid B [5-MeHex-Tyr-cyklo(D-Ser-Phe-D-Leu-Pro-Thr-Gly)]
Nechráněný peptid (příklad 18) (40,5 mg, 45 pmol) byl rozpuštěn v DMF (48 ml) a byly přidány PyBOP (70 mg, 0,135 mmol, 3 ekvivalenty) a DIEA (47 ml, 0,271 mmol, 6 ekvivalentů). Směs byla ponechána míchat po dobu 2 hodin a potom bylo rozpouštědlo odstraněno odpařením za sníženého tlaku, byla přidána H2O (5 ml) a roztok byl lyofilizován. Hrubý produkt byl čištěn pomocí chromatografie za středního tlaku (Vydac C]8 15-20 pm, 30 nm, 240 x 24 mm), lineární gradient od 20 do 60% acetonitrilu (+0,05% TFA) ve vodě (+0,05% TFA) po dobu 5 hodin (každého rozpouštědla 300 ml), 120 ml/h, detekce při 220 nm, a byla tak získána sloučenina uvedená v nadpisu (8,7 mg, 9,9 pmol, 22% výtěžek). Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (podmínky A, z/;
21.6 min.) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C45H63N70u, 877,5. Zjištěno: m/z 878,7 [M+H]J,
900.6 [M+Na]+, 916,5 [M+K]+. AAA: Gly 1,02 (1), Thr 0,95 (1), Phe 0,99 (1), Ser 1,00 (1), Pro 1,20(1), Leu 1,00(1), Tyr 0,87(1).
Příklad 20: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dal Io-Ile-D-V al-Phe-Etg-V al)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 4 a 6 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 4 byl Fmoc-Thr-OH zaměněn za Fmoc-Etg-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 16,8 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75Hi26Ni4Oi6, 1479,0. Zjištěno: m/z 1480,2 [M+H]+, 1502,2 [M+Na]+, 1518,0 [M+K]+.
Příklad 20b: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-D-Etg-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 4 a 6 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 4 byl Fmoc-Thr-OH zaměněn za Fmoc-Etg-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 17,0 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75Hi26Ni4Oi6, 1479,0. Zjištěno: m/z 1501,0 [M+Na]+,
1517,9 [M+K]+.
Příklad 20c: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-alIo-Thr-Dallo-IIe-D-Val-Phe-D-Thr-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 4 a 6 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 4 byl Fmoc-Thr(tBu)-OH zaměněn za Fmoc-D-Thr(tBu)-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 19,9 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75HI26N 4Οπ, 1494,9. Zjištěno: m/z 1517,4 [M+Na]+, 1533,4 [M+K]+.
Příklad 20d: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-D-allo-Thr-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 4 a 6 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 4 byl Fmoc-Thr(tBu)-OH zaměněn za Fmoc-D-allo-Thr-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 18,0 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C75H|26N]4Oi7, 1494,9. Zjištěno: m/z 1496,6 [M+H]+, 1518,6 [M+Na]*, 1534,6 [M+K]+.
-29CZ 304258 B6
Příklad 20e: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-D-Phe-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 4 byl Fmoc-Thr-OH zaměněn za Fmoc-D/L-(bOH)Phe-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (ΖΛ 22,2 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C8oHi26Ni4Oi6, 1538,95. Zjištěno: m/z 1540,3 [M+H]+, 1562,4 [M+Na]+, 1578,4 [M+K]+.
Příklad 21: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Ile-DVal-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s těmi výjimkou, že v příkladu 2 byl Fmoc-D-allo-Thr-OH zaměněn za Fmoc-D-Dpa(Alloc)-OH a že před inkorporací Alloc-Val-OH, který byl inkorporován jako poslední z chráněných aminokyselin, byla Alloc skupina z Dpa odstraněna, jak je ukázáno výše. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC a ESMS, vypočteno pro C74H123N15O15, 1461,9. Zjištěno: m/z 1463,3 [M+H]+.
Příklad 22: But-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za But-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (6; 14,7 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C72Hil8N14O16, 1435,9. Zjištěno: m/z 1459,6 [M+Na]+, 1475,6 [M+K]+.
Příklad 22bis: But-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 22. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (//? 16,0 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C72HngNi40i6, 1435,9. Zjištěno: m/z 1459,6 [M+Na]\ 1475,5 [M+K]+.
Příklad 23: 5—MeBut—D—Val—Thr—Val—D—Val—D—Pro—Orn—D—allo—Ile—cyklo(D—allo—Thr—D— allo-I le-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 3MeBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (ř/; 15,9 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C73Hi2oN|40|6, 1449,9. Zjištěno: m/z 1473,2 [M+Na]', 1489,9 [M+K]+.
Příklad 23bis: 5-MeBut-D-Val-Thr-Val-D_Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-ThrD-allo-Ile-V al-Phe-Z-Dhb-V al)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 23. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (6; 17,0 min., podmínky B) a ESMS, vypočteno pro C73H|2oNi40|6, 1449,9. Zjištěno: m/z 1473,3 [M+Na]+, 1489,4 [M+K]+.
-30CZ 304258 B6
Příklad 24: 3,3-DiMeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-ThrD-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 3,3DiMeBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 16,3 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C74Hi22Ni4Oi6, 1463,9. Zjištěno: m/z 1487,4 [M+Na]+,
1503,6 [M+K]+.
Příklad 24bis: 3,3-DiMeBut-D-Val_Thr-Val-D-Val_D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-alloThr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 24. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (Z« 17,6 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C74H122N14O16, 1463,9. Zjištěno: m/z 1487,3 [M+Na]+, 1503,3 [M+K]+.
Příklad 25: 4-MePen-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 4MePen-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 16,5 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C74H122N14O16, 1463,9. Zjištěno: m/z 1487,7 [M+Na]+, 1503,6 [M+K]+.
Příklad 25bis: 4-MePen-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-lle-cyklo(D-allo-ThrD-allo-Ile-V al-Phe-Z-Dhb-V al)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 25. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 17,8 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C74H122N14O16, 1463,9. Zjištěno: m/z 1487,8 [M+Na]+, 1503,6 [M+K]+.
Příklad 26: Hep—D—Val—Thr—Val—D-Val—D—Pro—Orn—D-allo— Ile—cyklo(D—allo—Thr—D—alloIle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za HepOH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 17,5 min., podmínky B) a MALDI-TOFMS, vypočteno pro C75H]24Ni4Oi6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1501,4 [M+Na]+, 1517,5 [M+K]+.
Příklad 26bis: Hep-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 26. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (/« 18,9 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C75Hi24N14Oi6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1501,6 [M+Na]+, 1517,7 [M+K]+. 1463,9. Zjištěno: m/z 1487,8 [M+Na]+, 1503,6 [M+K]+.
-31 CZ 304258 B6
Příklad 27: Pal-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-all(^-lle-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lleD-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za Pal-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 22,1 min., podmínky G) a MALD1-TOF-MS, vypočteno pro C84H142N14O16, 1603,1. Zjištěno: m/z 1626,9 [M+Na]+, 1642,9 [M+K]+.
Příklad 27bis: Pal-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 27. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (/« 18,9 min., podmínky G) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C75H124N14O16, 1603,1. Zjištěno: m/z 1626,8 [M+Na]+, 1642,8 [M+K]+.
Příklad 27a: 4-DiMeABut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cyklo(D_allo-ThrD-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 4DiMeBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 12,0 min., podmínky B) aMALDI-TOF-MS, vypočteno pro C74Hi23Ni5O]6, 1477,9. Zjištěno: m/z 1478,6 [M+H]+, 1500,6 [M+Na]+, 1516,6 [M+K]+.
Příklad 27b: 2-Hedo-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-lle-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-D-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 2-HedoOH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 15,8 min., podmínky B) a MALDI-TOFMS, vypočteno pro C74HH8N14O16, 1458,9. Zjištěno: m/z 1460,0 [M+H]+, 1482,0 [M+Na]+,
1497,9 [M+K]+.
Příklad 27c: 4-ABut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-D-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 4AcBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC 18,2 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C74H120N14O18, 1492,9. Zjištěno: m/z 1493,7 [M+H]+, 1515,8 [M+Na]+,
1531,7 [M+K]+.
Příklad 27d: 4-HOBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allc^Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-D-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 4HOBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tK 16,6 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C72H1 18Νι4Ο|7, 1450,9. Zjištěno: m/z 1451,6 [M+H]+, 1473,6 [M+Na]1, 1489,6 [M+K]+.
-32CZ 304258 B6
Příklad 27e: Ac-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-alIo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-DIle-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za 4HOAc. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 17,0 min., podmínky B) a MALDI-TOFMS, vypočteno pro C70H114N14O16, 1406,9. Zjištěno: m/z 1407,8 [M+H]+, 1429,8 [M+Na]+.
Příklad 27f: TFA-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile^yklo(D-allo-Thr-D-alloD-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (trifluoroacetylace během cyklizačního kroku) v příkladu 27e. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (/« 14,7 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C70H1HF3N14O16, 1460,8. Zjištěno: m/z 1462,0 [M+H]+, 1481,1 [M+Naj+, 1500,9 [M+K]+.
Příklad 27g: AcButBut-D-VaI-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-allo-Ile-cykIo(D-allo-Thr-Dallo-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za AcButBut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (/« 14,1 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C78Hi26N1402o, 1578,9. Zjištěno: m/z 1581,2 [M+H]\ 1602,2 [M+Na]+, 1618,2 [M+K]+.
Příklad 27h: IBut-D-allo-Ile-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-alloThr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za FmocD-allo-Ile-OH, odstranění skupiny Fmoc a acylací pomocí lbut-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (Z/; 15,3 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C78Hi29Ni5O|7, 1548,0. Zjištěno: m/z 1548,8 [M+H]+, 1570,8 [M+Na]+, 1586,8 [M+K]+.
Příklad 27i: Lit—D—Val—Thr—Val—D—Val—D—Pro-Orn—D—allo—Ile—cyklo(D—allo—Thr—D—allo— Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za Lit-OH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (Z/; 13,1 min., podmínky H) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C92Hl50Ni4Oi7, 1723,1. Zjištěno: m/z 1724,6 |'M+H]+, 1746,6 [M+Na]+, 1761,5 [M+K]+.
Příklad 27j: TFA-Lit-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (trifluoroacetylace během cyklizačního kroku) v příkladu 27i. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 17,1 min., podmínky H)
-33 CZ 304258 B6 a MALD1-TOF-MS, vypočteno pro C94H159N14O1S, 1819,1. Zjištěno: m/z 1820,6 [M+H]+, 1842,6 [M+Na]+, 1858,6 [M+K]+.
Příklad 27k: TIco-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výj imkou, že v příkladu 3 byl 5-MeHex zaměněn za TIcoOH. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 16,8 min., podmínky H) a ES-MS, vypočteno pro C92H158NI4O16, 1715,2. Zjištěno: m/z 858,2 [M+H]+/2, 1171,8 [M+H]+.
Příklad 28: H-D-V al-Thr-V al-D-V al-D-Pro-Orn-D-al 1 o—I le-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-l leD-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a experimentální postupy byly provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, pouze s tou výjimkou, že v příkladu 3 nebyl inkorporován 5-MeHex. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tK 11,6 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C68H1I2N14O15, 1364,8. Zjištěno: m/z 1388,3 [M+Na]+, 1404,3 [M+K]+.
Příklad 28bis: H-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-allo-IleVal-Phe-Z-Dhb-Val)
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 28. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tK 12,9 min., podmínky B) a MALDITOF-MS, vypočteno pro C68Hn2N|40i5, 1364,8. Zjištěno: m/z 1388,4 [M+Na]+, 1404,4 [M+K]+.
Příklad 29: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-D-allo-lle-cyklo(D-allo-Thr-D-alloIle-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2.
-34CZ 304258 B6
Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Orn(Boc)-OH nebyl inkorporován. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 23,9 min., podmínky A) a MALD1-TOF-MS, vypočteno pro
C70H114N12O15, 1362,9. Zjištěno: m/z 1386,4 [M+Na]+, 1402,4 [M+K]+.
Příklad 29bis: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-I>-Val-D-Pro-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-Dallo-Ile-V al-Phe-Z-Dhb-V al) 10
Byl získán jako vedlejší produkt v průběhu přípravy (racemizace během cyklizačního kroku) v příkladu 29. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tK 12,9 min., podmínky B) a MALDITOF-MS.
-35CZ 304258 B6
Příklad 30: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-allo-lle-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-DVal-Phe-Z-Dhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Om(Boc)-OH a Fmoc-D-Pro-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 20,3 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C65H107N11O14, 1265,8. Zjištěno: m/z 1288,5 [M+Na]+,
1304,5 [M+K]+.
Příklad 31: 5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D~allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-PheZ-Dhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Om(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH a Fmoc-D-Val-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (//<· 20,0 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C6oH9gN|0Oi3, 1166,7. Zjištěno: m/z
1190,9 [M+Na]+, 1206,9 [M+K]+.
Příklad 32: 5-MeHex-D-Val-Thr-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-ZDhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Orn(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH a Fmoc-Val-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 24,6 min., podmínky A) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C55H89N9O12, 1067,7. Zjištěno: m/z 1068,7 [M+H]+, 1090,6 [M+Na]+, 1106,5 [M+K]+.
Příklad 33: 5-MeHex-D-Val-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-DhbVal)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Om(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-Val-OH a Fmoc-Thr(tBu)-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 19,8 min., podmínky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C5|H82N8O10, 966,6. Zjištěno: m/z 990,7 [M+Na]+, 1007,2 [M+Kf.
Příklad 34: 5-MeHex-D-allo-Ile-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-Om(Boc)-OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH a Fmoc-D-Val-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tR 22,0 min., podmínky B) a MALDI-TOFMS, vypočteno pro C46H73N7O9, 966,6. Zjištěno: m/z 890,6 [M+Na]+, 906,6 [M+K]+.
Příklad 35: 5-MeHex-cyklo(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)
Experimentální postupy byly v podstatě provedeny tak, jak bylo popsáno v příkladech 1 až 7, ale podle schématu 2. Vycházelo se z 200 mg pryskyřice a Fmoc-D-allo-lle-OH, Fmoc-Orn(Boc)OH, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH a Fmoc-DVal-OH nebyly inkorporovány. Produkt byl charakterizován pomocí HPLC (tK 17,1 min., pod-36CZ 304258 B6 minky B) a MALDI-TOF-MS, vypočteno pro C^FtaNóOs, 754,5. Zjištěno: m/z 755,7 [M+H]+,
777,7 [M+Na]+, 793,7 [M+K]+.
Biologická aktivita
Biologická aktivita sloučenin předloženého vynálezu je převedena na výsledcích v následujících tabulkách, které byly získány podle metodologie Berjeron a kol., Biochem and. Bioph. Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854. Buněčnými liniemi jsou P388, myší lymfom; A549, lidský plicní karcinom; HT-29, lidský karcinom tlustého střeva; MEL-28, lidský melanom; DU-145, lidský io karcinom prostaty.
Tabulka sloučenin obdobných kahalalidu F
sloučenina | cyklus | řetězec” | molekulová hmotnost |
27j | cyklo( D-al lo-Thr-D-al lo-l le-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: TFA-Lit- | 1820 |
27i | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: lithocholoyl (Lit). | 1724 |
27 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: palmítoyl Palm | 1604 |
27bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: palmitoyl Palm | 1604 |
27g | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 4-(4- -acetoxybutanoyloxy)-butyryl (AcButBut-) | 1579 |
27h | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | IBut-D-allo-lle-D-Val-L-Thr- -L-Val-D-Val-D-Pro-L-Om-D- -allo-lle- | 1548 |
20e | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-D-Phe-Val)-D-Phe: a,b-didehydrofenylalanin | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-L-Om-D-allo- -lle- | 1539 |
20c | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Thr-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Va 1 -D-P ro-L-Orn-D-a 11 o- -lle- | 1495 |
27c | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 4- -acetoxibutyryl (4-AcBut) | 1493 |
-37CZ 304258 B6
20 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-L-Etg-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-L-Om-D-allo- -lle- | 1479 |
20b | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-D-Etg-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo- -lle- | 1479 |
27a | cyklo( D-al lo-Thr-D-allo-l le-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: N,N- -dimethyl-4-aminobutyryl (4- -DiMeABut) | 1478 |
(jako Scheuer) 15 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-Val- -L-Val-D-Pro-L-Om-D-allo- -lle- | 1477 |
15 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-Val- -L-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo- -lle- | 1477 |
26 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: Heptanoyl (Hep) | 1477 |
26 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: Heptanoyl (Hep) | 1477 |
(Rinehart) 7 | cyklo(D-al lo-Thr-D-ai lo-l le-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-L-Om-D-allo- -lle- | 1477 |
7 bis | cyklo( D-al lo-Thr-D-a 11 o-l le- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo- -lle- | 1477 |
24 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3,3- -dimethylbutyryl (3,3- -DiMeBut) | 1463 |
24 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3,3- -dimethylbutyryl (3,3- | 1463 |
-38CZ 304258 B6
-DiMeBut) | |||
25 | cyklo(D-al lo-Thr-D-al lo-l le-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3- -methylpentanoyl (4-MePen) | 1463 |
25 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3- -methylpentanoyl (4-MePen) | 1463 |
27f | cyklo( D-a 11 o-Thr-D-al lo-l le-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: trifluoracetyl (TFA) | 1461 |
27b | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 2,4- -hexadienoyl (Hedo) | 1459 |
27d | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 4- -hydraxybutyryl | 1451 |
23 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3- -methylbutyryl (3-MetBut) | 1451 |
23b | cyklo(D-allo-Thr-D-alio-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: 3- -methylbutyryl (3-MetBut) | 1451 |
22 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: butyryl (But) | 1435 |
22b | cyklo( D-al lo-Thr-D-al 1 o-l le- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: butyryl | 1435 |
27c | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: acetyl | 1407 |
28 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: nikoli mastná kyselina | 1365 |
28 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | koncová skupina: nikoli mastná kyselina | 1365 |
29 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-D-allo-lle- | 1363 |
29 bis | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-Val-D-Pro-D-allo-lle- | 1363 |
-39CZ 304258 B6
31 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val- -D-allo-lle- | 1167 |
32 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-allo- -lle- | 1068 |
19 | L-Phe-D-Leu-L-Pro-_-Thr-Gly- -D-Ser | 5-MeHex-L-Tyr- | 878 |
34 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex-D-allo-lleL-Tyr- | 868 |
35 | cyklo(D-allo-Thr-D-allo-lle-D- -Val-Phe-Z-Dhb-Val) | 5-MeHex- | 754 |
** Sloučeniny, u kterých je řetězec označen „koncová skupina“, mají stejný řetězec jako ve sloučenině 7, ale s uvedenou substitucí za 5-MeHex.
Tabulka cytotoxicity sloučenin obdobných kahalalidu F, hodnoty 1C50 (molární) pro deriváty
sloučenina | A549M | DU145M | HT29M | MEL28M | p388M |
27j | 5.49E-08 | 5.49E-08 | 5.49E-08 | 5.49E-08 | 2.75E-06 |
27i | 5.80E-07 | 5.80E-07 | 2,90E-08 | 1.45E-07 | 1.45E-06 |
27 | 1.56E-07 | 3.12E-08 | 6.23E-08 | 6.23E-08 | 3.12E-06 |
27bis | >3,12E-06 | 1.56E-06 | 6.23E-07 | 6.23E-07 | >3,12E-06 |
27g | >6,33E-07 | >6,33E-07 | 1.58E-06 | 3.17E-06 | >3,17E-06 |
27h | NA | NA | NA | NA | NA |
20e | 3.25E-06 | 6.50E-07 | NA | NA | NA |
20c | NA | NA | NA | NA | NA |
27c | NA | NA | 6.70E-07 | 3.35E-06 | NA |
20 | >3,38E-06 | >3,38E-06 | >3,38E-06 | >3,38E-06 | >3,38E-06 |
20b | >3,38E-06 | 3.38E-06 | 3.38E-06 | >3,38E-06 | >3,38E-06 |
-40CZ 304258 B6
27a | NA | NA | NA | NA | NA |
Oako Scheuer) 15 | >3,29E-06 | 3.29E-06 | 3.29E-06 | >3,29E-06 | >3,29E-06 |
15 bis | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 |
26 | >3,39E-07 | >3,39E-05 | 6.77E-07 | 1.69E-06 | 3.39E-06 |
26 bis | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-07 | 1.69E-06 | >3,39E-06 |
(Rinehart) 7 | >3,39E-07 | 1.69E-07 | >3,39E-08 | >3,39E-07 | >3,39E-06 |
7 bis | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 | >3,39E-06 |
24 | 1.71E-06 | 3.42E-07 | 3.42E-07 | 3.42E-06 | >3,42E-06 |
24 bis | >3,42E-06 | >3,42E-06 | 3.42E-06 | >3,42E-06 | >3,42E-06 |
25 | 3.42E-06 | 3.42E-06 | 3,42E-06 | >3,42E-06 | >3,42E-06 |
25 bis | >3,42E-06 | >3,42E-06 | >3,42E-06 | >3,42E-06 | >3,42E-06 |
27f | NA | 3.42E-06 | >3,42E-06 | 3.42E-06 | >3,42E-06 |
27b | 3.43E-06 | 6.85E-07 | 3,43E-06 | NA | NA |
27d | NA | NA | NA | NA | NA |
23 | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 |
23b | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 | >3,45E-06 |
22 | >3,48E-06 | 1.74E-06 | NA | NA | NA |
22b | >3,48E-06 | >3,48E-06 | 1.74E-06 | >3,48E-06 | >3,48E-06 |
27c | NA | >3,55E-06 | >3,55E-06 | >3,55E-06 | >3,55E-06 |
28 | >3,66E-06 | >3,66E-06 | >3,66E-06 | >3,66E-06 | >3,66E-06 |
28 bis | >3,66E-06 | >3,66E-06 | NA | NA | NA |
29 | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 |
29 bis | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 | >3,67E-06 |
31 | >4,28E-07 | >4,28E-05 | >4,28E-06 | >4,28E-06 | >4,28E-06 |
32 | NA | NA | 4.68E-08 | 4.68E-08 | >4,68E-06 |
19 | >5,69E-06 | >5,69E-06 | NA | NA | NA |
34 | NA | NA | >5,76E-06 | >5,76E-06 | >5,76E-06 |
35 | >5,76E-06 | >5,76E-06 | >5,76E-O6 | >5,76E-06 | >5,76E-06 |
-41 CZ 304258 B6
Citace
Hamann, Μ. T.; Scheuer, P. J. J. Am. Chem. Soc., 1993. „Kahalalide F: a Bioactive Depsipeptide from the Sacoglossan Mollusk Elysia refescens and the Green Alga Bryopsis sp.“, sv. 115, str. 5825-5826.
Hamann, Μ. T., a kol. J. Org. Chem., 1996. „Kahalalides: Bioactive Peptides from Marině Mollusk Elysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp.“, sv. 61, str. 6594-6660. García-Rocha, M., a kol. Cancer Lett., 1996, „The Antitumoral Compound Kahalalide F Acts on Cell Lysosomes“, sv. 99, str. 43-50.
Hamann, M. T„ a kol. J. Org. Chem., 1998. „Kahalalides: Bioactive Peptides from Marině Mollusk Elysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp.“, sv. 63, p. 485 (oprava J. Org. Chem., 1996, sv. 61, str. 6594-6660).
Lloyd-Williams, P„ a kol. Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC Press, Boča Raton (FL), 1997.
Goetz, G„ a kol. J. Nat. Prod., 1997. „Two Acyclic Kahalalides from the Sacoglossan Mollusk Elysia rufescens“, sv. 60, str. 562-567,
Goetz, G., a kol. Tetrahedron, 1999. The Absolute Stereochemistry of Kahalalide F“, sv. 55, str. 7739-7746.
Kan, Y„ a kol. J. Nat. Prod., 1999, sv. 62, str. 1169-1172.
Horgen, F. D. a kol. J. Nati. Prod., 2000, sv. 63, str. 152-154.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (11)
1. Sloučenina podobná kahalalidu F obecného vzorce II
Aaa?
(II), kde v cyklické části struktury, Rl, R2, R3, R4, R5, R6, XI a X2 jsou každý nezávisle vybraný tak, že Aaa-1 je D-a//o-Thr, Aaa-2 je D-a//o-Ile, Aaa-3 je D-Val, Aaa-4 je Phe, Aaa-5 je ZDhb, a Aaa-6 je L-Val; kde
-42CZ 304258 B6
R7 je nezávisle vybraný ze skupiny sestávající z H, Ci-C2o alkylu, C5-C10 arylu nebo C,-C20 alkylu substituovaného C5-C10 arylern, případně substituovaného hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinovou skupinou nebo halogenem;
tak, že Aaa-7 může být α-aminokyselina s L nebo D konfigurací;
a kde R8 je vybraný ze vzorce III, IV, nebo V:
15 kde každá ze skupin R9 a R10 je nezávisle H nebo C,-C2o alkylová, C5-C,o arylová nebo C,-C2o alkylová skupina substituovaná C5-C10 arylern, případně substituovaná hydroxyskupinou, merkaptoskupinou, aminoskupinou, guanidinoskupinou, karboxylovou skupinou, karboxamidoskupinou nebo halogenovou skupinou;
20 kde R9 a Ri0 případně tvoří kruh;
kde Ri 1 je H nebo Ci-C2o alkylová, C5-C10 arylová nebo C!-C2o alkylová skupina substituovaná C5-C10 arylern;
25 kdenjeOažó;
a s výlukou, že sloučenina vzorce II není:
5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-«Z/o-Ile-cy^Zo(D-o//o-Thr-D-o//o30 Ile-D-Val-L-Phe-Z-Dhb-L-Val).
2. Sloučenina podle nároku 1, kde R7 je případně substituovaná C|-C20 alkylová skupina.
-43 CZ 304258 B6
3. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 nebo 2, kde R9 je případně substituovaná C]-C2o alkylová skupina.
5 4. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde Rn je Ci-C20 alkylová skupina.
5. Sloučenina podle nároku 1, kterou je sloučenina vzorce:
** sloučeniny, ve kterých je řetězec označen výrazem Ukončení, mají řetězec 5-MeHex-D-ValL-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-a//o-lle, ale s vyznačenou substitucí za 5-MeHex.
6. Sloučenina podle nároku 1, kterou je sloučenina vzorce:
-44CZ 304258 B6 cyklická část postranní řetězec** cyklo(D-a//o-Thr-D-a//o-lle-D-ValPhe-Z-Dhb-Val)
5-MeHex-D-a//o-llecyklo(D-a//o-Thr-D-a//o-lle-D-ValPhe-Z-Dhb-Val)
5-MeHexcyklo(D-a//o-Thr-D-a//o-lle-D-ValPhe-Z-Dhb-Val)
Ukončení: 2,4-hexadienoyl (Hedo) cyklo(D-a//o-Thr-D-a//o-lle-D-ValPhe-Z-Dhb-Val)
Ukončení: acetyl ** sloučeniny, ve kterých je řetězec označen výrazem Ukončení, mají řetězec 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Om-D-allo-Ile, ale s vyznačenou substitucí za 5-MeHex.
7. Sloučenina vzorce H-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Om-D-o7/o-Ile-cyklo(D-fl//o-ThrD-fl//o-Ile-D-VaI-Phe-Z-Dhb-Val).
8. Sloučenina podle nároku 1, kde sloučenina je Pal-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D«//ó>-Ile-cyklo(D-a//o-Thr-D-ú'//0-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
9. Sloučenina vzorce TFA-Lit-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro- Om-D-a/Zo-Ile-cyklo(D-fl//o-Thr-D-a//o-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val).
10. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
11. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9 pro přípravu léčiva pro léčbu rakoviny, kde léčba zahrnuje podávání účinného množství této sloučeniny.
12. Způsob syntézy sloučeniny vzorce II definované v kterémkoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tí m , že se kruh uzavře podle následujícího schématu:
Ri5—CO—(Aaa)n—Aaa7-Aaai—Aaa2-Aaa3-OH
R2 X^ Aaae Aaa3 Aaa4 H
Rn—CO—(Aaa)n—Aaay-Aaa!—Aaa2-Aaa:
R2 Xj Aaa6 Aaa3 Aaa4
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0002952.0A GB0002952D0 (en) | 2000-02-09 | 2000-02-09 | Process for producing kahalalide F compounds |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ20022740A3 CZ20022740A3 (cs) | 2003-01-15 |
CZ304258B6 true CZ304258B6 (cs) | 2014-02-05 |
Family
ID=9885232
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ2002-2740A CZ304258B6 (cs) | 2000-02-09 | 2001-02-09 | Kahalalidová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek ji obsahující a její použití |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7482429B2 (cs) |
EP (3) | EP1829889A3 (cs) |
JP (1) | JP5188665B2 (cs) |
KR (1) | KR100871489B1 (cs) |
CN (2) | CN1422278A (cs) |
AT (1) | ATE371667T1 (cs) |
AU (1) | AU783542B2 (cs) |
BG (1) | BG65926B1 (cs) |
BR (1) | BR0108213A (cs) |
CA (1) | CA2399187C (cs) |
CY (1) | CY1106992T1 (cs) |
CZ (1) | CZ304258B6 (cs) |
DE (1) | DE60130192T2 (cs) |
DK (1) | DK1254162T3 (cs) |
ES (1) | ES2292558T3 (cs) |
GB (1) | GB0002952D0 (cs) |
HK (1) | HK1047290A1 (cs) |
HU (1) | HUP0301817A3 (cs) |
IL (2) | IL150981A0 (cs) |
MX (1) | MXPA02007760A (cs) |
NO (1) | NO331847B1 (cs) |
NZ (1) | NZ520488A (cs) |
PL (1) | PL207121B1 (cs) |
PT (1) | PT1254162E (cs) |
RU (1) | RU2280039C2 (cs) |
SK (1) | SK11242002A3 (cs) |
UA (1) | UA76949C2 (cs) |
WO (1) | WO2001058934A2 (cs) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6274551B1 (en) * | 1994-02-03 | 2001-08-14 | Pharmamar, S.A. | Cytotoxic and antiviral compound |
GB0002952D0 (en) * | 2000-02-09 | 2000-03-29 | Pharma Mar Sa | Process for producing kahalalide F compounds |
KR100834138B1 (ko) | 2000-10-31 | 2008-06-02 | 파르마 마르, 에스.에이. | 카할라리드 에프 |
US20050054555A1 (en) * | 2001-10-19 | 2005-03-10 | Jose Jimeno | Kahalalide compounds for use in cancer therapy |
GB0304367D0 (en) * | 2003-02-26 | 2003-04-02 | Pharma Mar Sau | Methods for treating psoriasis |
US7507708B2 (en) | 2003-02-26 | 2009-03-24 | Pharma Mar, S.A.U. | Antitumoral compounds |
GB0321066D0 (en) | 2003-09-09 | 2003-10-08 | Pharma Mar Sau | New antitumoral compounds |
GB0408958D0 (en) * | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Pharma Mar Sa | Convergent synthesis for kahalalide compounds |
CN100396696C (zh) * | 2004-04-23 | 2008-06-25 | 中国科学院海洋研究所 | 一种海洋绿藻在提取抗肿瘤活性环肽组分中的应用 |
CN101861159A (zh) * | 2007-10-19 | 2010-10-13 | 马尔药品公司 | 改进的抗肿瘤治疗 |
JP2011515330A (ja) * | 2008-01-30 | 2011-05-19 | ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ | 改良抗腫瘍治療剤 |
CN101965192A (zh) * | 2008-03-07 | 2011-02-02 | 法马马有限公司 | 改善的抗肿瘤治疗 |
CN103641891B (zh) * | 2013-05-23 | 2017-03-22 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备Kahalalide F的方法 |
US10457627B2 (en) | 2015-09-23 | 2019-10-29 | Xw Laboratories Inc. | Prodrugs of gamma-hydroxybutyric acid, compositions and uses thereof |
EP3601235A4 (en) | 2017-03-30 | 2020-11-18 | XW Laboratories Inc. | BICYCLIC HETERARYL DERIVATIVES, PREPARATION AND ASSOCIATED USES |
JOP20190254A1 (ar) | 2017-04-27 | 2019-10-27 | Pharma Mar Sa | مركبات مضادة للأورام |
CN112004802B (zh) | 2018-09-30 | 2021-12-28 | 凯瑞康宁生物工程(武汉)有限公司 | 作为神经元组胺受体-3拮抗剂的化合物及其用途 |
CN115244028A (zh) | 2019-12-20 | 2022-10-25 | 凯瑞康宁生物工程有限公司 | 4-缬氨酰氧基丁酸的合成方法 |
EP4167966A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | XWPharma Ltd. | Pharmaceutical granulations of water-soluble active pharmaceutical ingredients |
AU2021292406B2 (en) | 2020-06-18 | 2024-03-14 | XWPharma Ltd. | Controlled release granulations of water-soluble active pharmaceutical ingredients |
US11896573B2 (en) | 2020-07-24 | 2024-02-13 | XWPharma Ltd. | Pharmaceutical compositions and pharmacokinetics of a gamma-hydroxybutyric acid derivative |
KR20230058151A (ko) | 2020-10-05 | 2023-05-02 | 엑스더블유파마 리미티드 | 감마-하이드록시부티르산 유도체의 변형된 방출 조성물 |
CN117098533A (zh) | 2021-03-19 | 2023-11-21 | 凯瑞康宁公司 | γ-羟基丁酸衍生物的组合释放型制剂的药物动力学 |
US20230382851A1 (en) * | 2022-04-21 | 2023-11-30 | Zevra Therapeutics, Inc. | Gamma-hydroxybutyrate delivering compounds and processes for making and using them |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0610078A1 (en) * | 1993-02-03 | 1994-08-10 | Pharma Mar, S.A. | Cytotoxic and antiviral compound |
EP1254162A2 (en) * | 2000-02-09 | 2002-11-06 | Pharma Mar, S.A. | Kahalalide f and related compounds |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US39496A (en) * | 1863-08-11 | Improvement in ratchet-drills | ||
CU22545A1 (es) * | 1994-11-18 | 1999-03-31 | Centro Inmunologia Molecular | Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico |
US4943533A (en) * | 1984-03-01 | 1990-07-24 | The Regents Of The University Of California | Hybrid cell lines that produce monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
JPS6178719A (ja) | 1984-09-25 | 1986-04-22 | Tanabe Seiyaku Co Ltd | 総合輸液剤 |
GR870129B (en) * | 1987-01-27 | 1987-02-04 | Giatzidis Ippokratis | Stable bicarbonate - glycylglycine dialysate for hemodialysis and peritoneal dialysis |
US5399363A (en) * | 1991-01-25 | 1995-03-21 | Eastman Kodak Company | Surface modified anticancer nanoparticles |
US5558864A (en) * | 1991-03-06 | 1996-09-24 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschrankter Haftung | Humanized and chimeric anti-epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies |
US5849704A (en) | 1991-12-20 | 1998-12-15 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
GB9300059D0 (en) * | 1992-01-20 | 1993-03-03 | Zeneca Ltd | Quinazoline derivatives |
US6274551B1 (en) * | 1994-02-03 | 2001-08-14 | Pharmamar, S.A. | Cytotoxic and antiviral compound |
US5932189A (en) * | 1994-07-29 | 1999-08-03 | Diatech, Inc. | Cyclic peptide somatostatin analogs |
US5705511A (en) | 1994-10-14 | 1998-01-06 | Cephalon, Inc. | Fused pyrrolocarbazoles |
GB9508538D0 (en) * | 1995-04-27 | 1995-06-14 | Zeneca Ltd | Quinazoline derivatives |
US5747498A (en) * | 1996-05-28 | 1998-05-05 | Pfizer Inc. | Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines |
JP3927248B2 (ja) | 1995-07-11 | 2007-06-06 | 第一製薬株式会社 | Hgf凍結乾燥製剤 |
ID19609A (id) * | 1996-07-13 | 1998-07-23 | Glaxo Group Ltd | Senyawa-senyawa heterosiklik |
US6235883B1 (en) * | 1997-05-05 | 2001-05-22 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor |
WO1998050406A1 (en) * | 1997-05-09 | 1998-11-12 | The General Hospital Corporation | Cell proliferation related genes |
GB9800569D0 (en) * | 1998-01-12 | 1998-03-11 | Glaxo Group Ltd | Heterocyclic compounds |
GB9803448D0 (en) | 1998-02-18 | 1998-04-15 | Pharma Mar Sa | Pharmaceutical formulation |
US6200598B1 (en) * | 1998-06-18 | 2001-03-13 | Duke University | Temperature-sensitive liposomal formulation |
WO2000031048A1 (en) * | 1998-11-19 | 2000-06-02 | Warner-Lambert Company | N-[4-(3-chloro-4-fluoro-phenylamino)-7-(3-morpholin-4-yl-propoxy)-quinazolin-6-yl]-acrylamide, an irreversible inhibitor of tyrosine kinases |
US7311924B2 (en) * | 1999-04-01 | 2007-12-25 | Hana Biosciences, Inc. | Compositions and methods for treating cancer |
UA74803C2 (uk) * | 1999-11-11 | 2006-02-15 | Осі Фармасьютікалз, Інк. | Стійкий поліморф гідрохлориду n-(3-етинілфеніл)-6,7-біс(2-метоксіетокси)-4-хіназолінаміну, спосіб його одержання (варіанти) та фармацевтичне застосування |
JP2004514407A (ja) * | 2000-04-28 | 2004-05-20 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 異種キャプシド中にシュードタイピングされたaav5キャプシドおよびaav5ベクターを含む組換えaavベクター |
US6440465B1 (en) * | 2000-05-01 | 2002-08-27 | Bioderm, Inc. | Topical composition for the treatment of psoriasis and related skin disorders |
KR100834138B1 (ko) | 2000-10-31 | 2008-06-02 | 파르마 마르, 에스.에이. | 카할라리드 에프 |
US20050054555A1 (en) | 2001-10-19 | 2005-03-10 | Jose Jimeno | Kahalalide compounds for use in cancer therapy |
GB0304367D0 (en) * | 2003-02-26 | 2003-04-02 | Pharma Mar Sau | Methods for treating psoriasis |
US7507708B2 (en) * | 2003-02-26 | 2009-03-24 | Pharma Mar, S.A.U. | Antitumoral compounds |
GB0321066D0 (en) * | 2003-09-09 | 2003-10-08 | Pharma Mar Sau | New antitumoral compounds |
GB0408958D0 (en) * | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Pharma Mar Sa | Convergent synthesis for kahalalide compounds |
-
2000
- 2000-02-09 GB GBGB0002952.0A patent/GB0002952D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-02-09 RU RU2002123877/04A patent/RU2280039C2/ru active
- 2001-02-09 PL PL356800A patent/PL207121B1/pl unknown
- 2001-02-09 CA CA2399187A patent/CA2399187C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-09 MX MXPA02007760A patent/MXPA02007760A/es active IP Right Grant
- 2001-02-09 PT PT01904169T patent/PT1254162E/pt unknown
- 2001-02-09 EP EP07010878A patent/EP1829889A3/en not_active Withdrawn
- 2001-02-09 CN CN01807743A patent/CN1422278A/zh active Pending
- 2001-02-09 HU HU0301817A patent/HUP0301817A3/hu unknown
- 2001-02-09 NZ NZ520488A patent/NZ520488A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-09 ES ES01904169T patent/ES2292558T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-09 EP EP10178150A patent/EP2258715A1/en not_active Withdrawn
- 2001-02-09 EP EP01904169A patent/EP1254162B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-09 WO PCT/GB2001/000576 patent/WO2001058934A2/en active IP Right Grant
- 2001-02-09 AU AU32086/01A patent/AU783542B2/en not_active Ceased
- 2001-02-09 US US10/182,881 patent/US7482429B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-09 CN CN200810178807.9A patent/CN101597326B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-09 AT AT01904169T patent/ATE371667T1/de active
- 2001-02-09 JP JP2001558081A patent/JP5188665B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-09 DE DE60130192T patent/DE60130192T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-09 CZ CZ2002-2740A patent/CZ304258B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-02-09 BR BR0108213-2A patent/BR0108213A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-02-09 DK DK01904169T patent/DK1254162T3/da active
- 2001-02-09 IL IL15098101A patent/IL150981A0/xx unknown
- 2001-02-09 SK SK1124-2002A patent/SK11242002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-02-09 KR KR1020027010355A patent/KR100871489B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-09-02 UA UA2002097267A patent/UA76949C2/uk unknown
-
2002
- 2002-07-30 IL IL150981A patent/IL150981A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-08-08 NO NO20023749A patent/NO331847B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-08-21 BG BG107020A patent/BG65926B1/bg unknown
- 2002-12-05 HK HK02108862A patent/HK1047290A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-11-08 CY CY20071101442T patent/CY1106992T1/el unknown
-
2008
- 2008-08-25 US US12/198,013 patent/US20080318849A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0610078A1 (en) * | 1993-02-03 | 1994-08-10 | Pharma Mar, S.A. | Cytotoxic and antiviral compound |
EP1254162A2 (en) * | 2000-02-09 | 2002-11-06 | Pharma Mar, S.A. | Kahalalide f and related compounds |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Goetz G. et al. Tetrahedron 55(25), 1999, 7739-7746 * |
Hamann MT a Scheuer PJ J. Am. Chem. Soc. 115(13), 1993, 5825-5826 * |
Hamann MT et al. J. Org. Chem. 61(19), 1996, 6594-6600 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CZ304258B6 (cs) | Kahalalidová sloučenina, způsob její přípravy, farmaceutický prostředek ji obsahující a její použití | |
WO2012173846A2 (en) | Peptidomimetic macrocycles | |
Rodriguez et al. | An update on new methods to synthesize cyclotetrapeptides | |
CZ20013318A3 (cs) | Noví LH-RH-antagonisté se zlepąenými vlastnostmi rozpustnosti | |
WO2005103072A1 (en) | Convergent synthesis for kahalalide compounds | |
US11975040B2 (en) | Plexin binding regulator | |
US6673769B2 (en) | Lanthionine bridged peptides | |
CA2537128A1 (en) | New antitumoral compounds | |
WO2024043249A1 (ja) | 環状ペプチドまたはその塩、およびmdmx阻害剤 | |
WO2024043250A1 (ja) | 環状ペプチドまたはその塩、およびmdmx阻害剤 | |
TW202417032A (zh) | 環肽或其鹽及mdmx抑制劑 | |
Kaur | Total Syntheses of Naturally Occurring Cyclic Peptides | |
Isidro Llobet | New Protecting Groups for the Synthesis of Complex Peptides | |
Bladon | Analogue and conformational studies on peptide hormones and other biologically active peptides | |
White | Synthesis and Site-Specific Functionalizations of Aziridine-2-Carboxylic Acid-Containing Cyclic Peptides | |
Li | Studies toward the synthesis of coibamide A and analogues | |
Hall | Poster presentation abstracts |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150209 |