PT1028727E - Componentes que aumentam a penetração na pele - Google Patents

Description

ΡΕ1028727 1 DESCRIÇÃO "COMPONENTES QUE AUMENTAM A PENETRAÇÃO NA PELE"

Esta presente invenção relaciona-se com um tratamento eficaz para a psoriase e outras patologias dermatológicas utilizando um agente imunossupressor aplicado topicamente. A formulação preferida não permite o aparecimento do agente no sangue ou noutro sistema circulatório a qualquer nível significativo.

As patologias dermatológicas podem ser incómodas e embaraçosas para o paciente, por isso é requerido um tratamento seguro eficaz. Algumas patologias dermatológicas são causadas por um sistema imunitário hiperactivo, os exemplos são psoriase, alopécia, líquen plano, lúpus eritematoso, piodermite gangrenosa, vitiligo e doença de enxerto versus hospedeiro. Outras podem ser causadas devido a infecções bacterianas ou pustulares da pele.

As condições dermatológicas causadas por um sistema imunitário hiperactivo podem ser tratadas por macró-lidos imunossupressores, por exemplo Sirolimus (rapamicina) , FK-506 (tacrolimus) ou SDZ ASM 981. As que são causadas por bactérias ou são infecções de pele mais profundas, tais como acne vulgar e hidradenite supurativa, podem ser tratadas por antibióticos macrólidos, por exemplo 2 ΡΕ1028727 eritromicina, azitromicina e claritromicina. Os agentes anteriores podem ser aplicados por meio de cremes tópicos e loções tópicas ou podem ser tomados oralmente. A psoriase afecta 2,4% da população e o entendimento actual da patogénese da doença é que é inicialmente conduzida através de imunócitos. Estes e os queratinócitos são estimulados mutuamente e activados através da produção de citoquinas, TGFa, IL-6 e IL-8 a partir de linfócitos. Isto conduz a uma epiderme hiper-proliferativa com ciclo rápido de 36 horas do compartimento amplificador do condutor de queratinócitos.

Outras formas de tratamento de patologias dermatológicas podem incluir a utilização de esteróides tópicos mas estes têm efeitos indesejáveis como atrofia irreversível e púrpura.

No tratamento do corpo humano ou animal, uma das considerações é que qualquer medicamento deve tanto quanto possível afectar somente a parte afectada. É bem conhecido que quantidades de fármaco circulante devem ser mantidas tão baixas quanto possível para evitar mutações indese-jadas. Um problema com a aplicação tópica de medicamentos para a pele por exemplo, é que o medicamento tende a penetrar a pele e estabelecer-se por si só no sistema de sangue circulante. Isto não é o que é pretendido no tratamento de patologias dermatológicas. 3 ΡΕ1028727 O antibiótico de lactona macrociclica de rapami-cina por exemplo como descrito em EP-A-0533433 foi já utilizado topicamente para tratar as referidas desordens de pele como a psoríase e a dermatite. No entanto não se efectuou qualquer tentativa para reduzir a quantidade de rapamicina translocalizada através da pele no sistema sistémico. Nem existe qualquer discussão da redução dos niveis de rapamicina circulante ou outro fármaco macrólido ao mesmo tempo que se proporciona um tratamento terapeu-ticamente eficaz para uma variedade de desordens de pele.

Verificou-se agora que isto pode ser atingido através da adição aos referidos fármacos de um modulador de permeação. Os intensificadores de permeação são bem conhecidos como uma classe de facilitadores de translo-calização do fármaco, mas o objectivo destes é aumentar o fluxo de fármaco através da pele. Um modulador de permeação tem no entanto a facilidade porém de permitir que o fármaco penetre na pele, e particularmente o extracto córneo, sem passar significativamente através da epiderme através dos sistemas sistémicos (e.g. os sistemas sanguíneo ou linfático). É também conhecido que os agentes imunossupresso-res tomados oralmente e os esteróides aplicados topicamente podem ser utilizados para tratar patologias dermatológicas, tais como psoríase ou eczema. No entanto, eles são muitas vezes não específicos na sua acção o que conduz a efeitos secundários indesejáveis. Logo seria desejável desenvolver 4 ΡΕ1028727 uma formulação de distribuição tópica para um agente imunossupressor que tratasse preferencialmente somente os locais da doença e evitasse a exposição sistémica significativa; reduzindo assim efeitos secundários prejudiciais. 0 Sirolimus é um antibiótico de lactona macro-cíclica produzido pelo organismo Streptomices higrosco-picus", é conhecido por ter actividades imunossupressoras potentes. 0 Sirolimus actua através da ligação específica de uma família de imunofilinas citosólicas denominado de proteínas ligantes FK (FKBP). 0 complexo Sirolimus FKBP actua em pelo menos três locais. Primeiramente, através do bloqueio da activação da fosforilação de p70 s6 cinase, uma enzima que actua na subunidade ribossomal 40S da proteína s6, reduzindo assim a eficiência de translação. Em segundo lugar através da prevenção da activação dos factores de alongamento específicos requeridos para a síntese proteica. Em terceiro lugar, inibe a actividade enzimática da cinase dependente de ciclina do complexo cdK-ciclina E que forma um dos mais apertados controlos da transição Gl/S na divisão celular através da inibição do declínio normal do inibidor de p27 cdK que provocaria a estimulação de IL-2. 0 Sirolimus apresenta uma vantagem em relação aos outros agentes imunossupressores no tratamento de psoríase uma vez que apresenta um efeito inibitório na proliferação de queratinócito. As experiências in vitro demonstraram que este efeito inibitório acontece a concentrações na gama 5 ΡΕ1028727 desde 3-10 μg/mL. Uma gama mais larga pode ser utilizada por exemplo 1 a 20 μq/mLr mas a gama mais eficaz é 5-8 μg/mL.

De acordo com o primeiro aspecto da invenção, é proporcionada uma formulação tópica para o tratamento de uma patologia dermatológica que compreende um macrólido imunossupressor seleccionado de entre Sirolimus e seus derivados farmacologicamente activos; um modulador de permeação seleccionado de entre um ácido alcanóico e um ácido alquénico; em que o modulador de permeação e o macrólido ou o seu derivado farmacologicamente activo estão presentes em quantidades relativas tais como quando uma quantidade terapêutica é aplicada à pele; um efeito sistémico mínimo é produzido.

Preferencialmente o macrólido imunossupressor é Sirolimus. O termo "efeito sistémico mínimo", pretende significar que a quantidade de principio activo detectável na corrente sanguínea é preferencialmente menor que 0,3 ng/mL durante 4 a 24 horas após a administração, mais preferivelmente abaixo de 0,1 ng/mL durante o mesmo período. 0 Sirolimus é um antibiótico eficaz que é útil na preservação microbiológica da formulação. As propriedades microbiológicas do Sirolimus são também úteis no tratamento da psoríase do couro cabeludo e flexural, dermatite sebor-reica e no eczema atópico secundário. Preferencialmente, o 6 ΡΕ1028727 ácido alcanóico ou ácido alquénico é seleccionado de entre ácido cáprico, ácido octanóico e ácido oleico. 0 modelador de permeação auxilia a penetração do macrólido imunossupressor através do extracto córneo, a barreira principal para a penetração dos fármacos. O extracto córneo é um agregado de estruturas empilhadas e aplainadas de queratina preenchida por células intercaladas com estruturas monocamada de lípidos e água. A adição do modulador de permeação à formulação resulta numa ruptura parcial dos componentes de barreira, particularmente das estruturas de lípidos. Pode então ser produzido um gradiente do fármaco particularmente através do extracto córneo, o que facilita a difusão do macrólido imunossupressor através do extracto córneo na epiderme viva. As concentrações relativas do macrólido e do modulador de permeação são seleccionadas de modo a que ocorra uma penetração parcial da pele; os macrólidos imunossupressores alcançam as áreas que requerem tratamento mas é evitada a absorção significativa dos referidos fármacos na circulação sistémica reduzindo assim a probabilidade de qualquer efeito secundário sistémico.

Convenientemente o modulador de permeação é utilizado em conjunto com um sistema solvente. Preferencialmente, o sistema de solvente compreende um álcool aromático ou um derivado de benzeno biologicamente aceitável, com ou em uma mistura de monoglicéridos e/ou um éster de ácido gordo (e.g. miristato de isopropilo). Outros 7 ΡΕ1028727 solventes que podem ser utilizados, incluem benzaldeído, benzoato de benzilo e acetona. A combinação de solvente e modulador de permeação optimiza adicionalmente a passagem do macrólido imunossupressor através do extracto córneo.

Preferencialmente, a formulação compreende até 10% em peso do macrólido imunossupressor ou seu derivado; um modulador de permeação está presente a 0,1 a 60% em peso.

Preferencialmente a patologia dermatológica é seleccionada de entre psoríase, alopécia, dermatite de eczema, líquen plano, lúpus eritematoso, piodermite gangrenosa, vitiligo e doença de enxerto versus hospedeiro, infecções pustulares de pele, infecções bacterianas de pele ou acne vulgar.

Preferencialmente, a patologia dermatológica é dermatite do eczema e a concentração do macrólido imunossupressor ou seu derivado é 0,05% a 2% em peso. O termo "% em peso" aqui utilizado refere-se à "% em peso da formulação final".

Preferencialmente, o modulador de permeação compreende ácido cáprico e o sistema de solvente compreende álcool benzílico.

Preferencialmente, a concentração do sistema de solvente é 5% até 90% em peso. ΡΕ1028727

Preferencialmente está presente um agente espessante na formulação. Se a formulação vai ser utilizada topicamente, deve ser de uma consistência apropriada. Por isso, os agentes espessantes tais como álcool cetoestea-rílico ou parafina mole branca de grau médico disponível comercialmente podem ser adicionados. Preferencialmente o agente espessante é seleccionado de entre parafina mole branca, álcool cetoestearílico, parafina mole amarela, álcool cetílico, álcool esterílico, sabões de ácido carbo-xílico divalente e cera de carnaúba. Estes podem reduzir a penetração do agente imunossupressor mas eles são necessários para uma aplicação eficaz. As formulações da invenção são particularmente apropriadas para o tratamento de patologias do couro cabeludo.

Em adição aos veículos líquidos e sólidos apresentados anteriormente, as formulações podem incluir adicionalmente um dos seguintes: - agentes aromatizantes, lubrificantes, solubilizantes, agentes de suspensão, de enchimento e aglomerantes. A formulação pode também ser dissolvida ou suspensa em qualquer veículo ou transportador líquido farma-ceuticamente aceitável tais como água ou um óleo ou gordura farmaceuticamente aceitável. 0 referido veículo ou transportador líquido pode conter outros aditivos farmaceutica-mente aceitáveis tais como solubilizantes, emulsificantes, 9 ΡΕ1028727 tampões, conservantes, agentes de suspensão, agentes espes-santes, agentes colorantes, reguladores de viscosidade, estabilizadores ou reguladores osmo.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionada a utilização de um macrólido imunossupressor seleccionado de entre Sirolimus e seus derivados farmacologicamente activos na preparação da formulação tópica.

Preferencialmente, o macrólido imunossupressor está presente em até 10% em peso da composição. A invenção será descrita agora, apenas a titulo ilustrativo, com referência para os exemplos, tabelas e figuras seguintes que acompanham a especificação a Figura 1 é uma representação gráfica do efeito no fluxo ^g/h/cm2) de Sirolimus (y) através do extracto córneo fazendo variar a razão de ácido cáprico e álcool benzilico, em que x é a percentagem de ácido cáprico no álcool benzilico. A Figura 2 é uma representação gráfica do efeito no fluxo (μq/h/cm2) de Sirolimus (y) através do extracto córneo fazendo variar a razão de ácido octanóico e álcool benzilico, em que x é a percentagem de ácido octanóico no álcool benzilico. 10 ΡΕ1028727 A Figura 3 é uma representação gráfica do efeito no fluxo ^g/h/cm2) de Sirolimus (y) através do extracto córneo fazendo variar a razão de ácido oleico e álcool benzilico, em que x é a percentagem de ácido oleico no álcool benzilico. A Figura 4 é uma representação gráfica do efeito no fluxo ^g/h/cm2) de Sirolimus (y) através do extracto córneo fazendo variar a concentração de Sirolimus (mg/mL) (x) enquanto se mantém constante a razão de ácido cáprico em ácido benzilico. A Figura 5 é uma representação gráfica dos resultados da contagem clinica (y) determinados após a aplicação da formulação de Sirolimus ( ) e o controlo (:::) no Exemplo 3. A Figura 6 é uma representação gráfica das diferenças na contagem clinica após a aplicação com formulação de Sirolimus no Exemplo 3, em que y é o número de sujeitos em cada grupo. Uma contagem positiva (x) mostra o melhoramento coma utilização da formulação activa.

As figuras 1 a 4 são obtidas através de experiências in vitro. Os resultados foram utilizados para optimizar a concentração de Sirolimus e a razão de 11 ΡΕ1028727 intensificador de permeaçao e solvente utilizado nas experiências in vivo.

Exemplo 1 A formulação foi formada com 8% de Sirolimus e 92% de um veiculo de ácido cáprico (50%) com álcool benzí-lico (50%) . Esta foi testada em experiências de aplicação única em quatro sujeitos com pele normal. Foram retiradas amostras de sangue venoso a 4, 7 e 24 horas após aplicação e não foram detectados niveis significativos de Sirolimus utilizando MSGCMS, que é capaz de detectar niveis de Sirolimus abaixo de 0,1 ng/mL.

Em paralelo, foram retiradas biopsias da pele dos sujeitos após 7 horas, as amostras de biopsia foram coladas a uma placa de vidro e seccionados horizontalmente em série em 4 camadas cada uma com 0, 7 mm de espessura e extraídas com acetonitrilo. Os resultados são proporcionados na Tabela 1. A Tabela 1 apresenta as concentrações de tecido de Sirolimus 7 horas após a aplicação de ácido cáprico: álcool benzílico (50:50) contendo Sirolimus a 8%. As secções horizontais de pele apresentavam 0,7 mm cada uma. Do mesmo modo, por exemplo, a secção de pele designada 2 correspondia à camada horizontal de pele 0,7-1,4 mm da superfície da pele. 12 ΡΕ1028727

Secção de pele 1 = Concentração de Sirolimus j.g/mg superfície A B C D 1 0, 059 0,288 0,301 0,216 2 Não realizada 0,108 0, 144 0, 126 3 0,255 0,173 0,339 0,256 4 0,239 0,214 0,370 0,241

Exemplo 2

Uma formulação de Sirolimus (2,2%) num veículo compreendendo miristato de isopropilo 40%, álcool benzílico 10% e ácido cáprico 50% foi testada em experiências de aplicação única em três sujeitos com pele normal. Foram levadas amostras de sangue venoso a 4, 7 e 24 horas após aplicação e não foram detectados níveis significativos de Sirolimus utilizando MSGCMS. Após 7 horas, foram retiradas amostras de biopsia a dois dos sujeitos. Estas foram bissectadas paralelamente à superfície para proporcionar uma metade superior e inferior, correspondendo aproxima-damente à epiderme e derme. Homogeneizou-se a pele com acetonitrilo e determinou-se a concentração de Sirolimus através de HPLC. Os resultados estão proporcionados na Tabela 2 . A Tabela 2 apresenta as concentrações de tecido de Sirolimus 7 horas após a aplicação de ácido cáprico: miristato de isopropilo: álcool benzílico (50:40:10) contendo Sirolimus a 2,2%. 13 ΡΕ1028727 Nível de segmento de pele Concentração de Sirolimus μq/mq Sujeito A Sujeito B Superior (1) 0 1,5 Inferior (2) 0,333 0,5

Exemplo 3

Realizou-se uma dupla ligação, comparação esquerda-direita do efeito da aplicação tópica de Sirolimus em formulações como descrito nos Exemplos 1 e 2, a 24 pacientes com psoríase em placa crónica (mais de três meses). (22 em 24 pacientes foram eventualmente analisados) . Tratou-se uma placa-alvo única durante as 6 primeiras semanas com formulação de potência mais baixa do Exemplo 2. Após isto, o tratamento activo foi aumentado para a formulação de potência mais elevada do Exemplo 1 durante 6 semanas a menos que já tenha ocorrido uma melhoria clara num dos lados. 0 estudo inclui adultos com psoríase em placa crónica estável, claramente demarcada, e duas placas comparáveis bem demarcadas, contra-laterais, com cerca de 50cm2 em área em lados opostos do corpo. Os sujeitos eram todos de idade superior a 18 anos, foram capazes de administrar os cremes e não tinham problemas médicos significativos. As transaminases não eram maiores que duas vezes o limite superior ao normal e os sujeitos foram seleccionados de modo a evitar os que provavelmente tinham férias ao sol durante as 6-12 semanas do ensaio. 14 ΡΕ1028727

Antes do ensaio começar, houve duas semanas de período morto no qual apenas foram aplicados em clientes insípidos às lesões alvo. O tratamento foi realizado duas vezes aleatoriamente. As mãos foram lavadas completamente entre as duas aplicações diárias das formulações de teste. A formulação activa foi aplicada consistentemente a uma placa enquanto um controlo compreendendo apenas o veículo base foi aplicado consistentemente à placa do lado oposto. Onde possível foram seleccionados os braços ou cotovelos como áreas alvo uma vez que a contaminação cruzada é menos provável nestes locais.

As avaliações eram realizadas às semanas 0, 2, 4 e 6 no tratamento de potência mais baixa e às 8,10 e 12 na formulação de dose mais elevada, desde que não houvesse sinais ou evidências laboratoriais de toxicidade. A contagem clínica foi realizada a cada frequência e as áreas traçadas no início e no fim do tratamento. Realizaram-se biopsias das lesões activas e de controlo no final do tratamento ou a cada retirada. Não se realizaram biopsias se ocorreram eventos adversos tais como uma reacção à aplicação uma vez que iria influenciar as medições a serem avaliadas.

As lesões foram também avaliadas a intervalos quinzenais com contagem subjectiva numa escala de 0-8 de 15 ΡΕ1028727 eritema, espessamento, e escalamento. As medidas objectivas de melhoria foram realizadas em ambas as lesões no final de cada período de tratamento (formulações baixas e elevadas). Estas incluíram uma medição de varrimento pulsado A de ultra-sons da espessura da lesão e medição do eritema com um metro de reflectância de eritema, ambos foram medidos em 5 áreas em cada lesão de psoriática e foram validados utilizando um estudo prévio que foi realizado utilizando betametasoma como referência. A cada visita mediu-se a contagem total de sangue, bioquímica, incluindo ureia, electrólitos, enzimas hepáticas, bilirubina, cálcio, magnésio, ácido úrico, glicose, amilase, enzimas musculares, lípidos e colesterol. Os níveis de Sirolimus foram verificados a cada 2 semanas durante a terapia. As amostras para níveis de Sirolimus foram armazenadas a menos 80°C e distribuídas para um laboratório de referência central para análise por LC/MS/MS através de Wyeth Ayerst Research.

Nas biopsias, a espessura epidérmica foi medida e realizada a imuno-histoquímica de imunoperoxidase utilizando os seguintes anticorpos para a contagem de células num modo ligante.

Assim, utilizou-se o anticorpo Ki-67 para proporcionar uma medição de hiper-proliferação na epiderme e utilizaram-se auxiliares CD4 de linfócitos para propor- 16 ΡΕ1028727 cionar a medição da actividade auto-imune que conduz à psoriase. A contagem de células em tecidos foi automatizada, utilizando uma análise de imagem assistida por computador (Seescan). Analisaram-se os resultados através do teste T de Student para resultados emparelhados e o teste de Wilcoxon. A comparação das contagens finais, activa vs placebo atingiram uma significância a 0,032 através do teste T ou 0,0457 no teste Wilcoxon, veja-se Tabela 3 e Figura 5 e 6. As medidas de eritema e as gravações de ultra-som não foram significativamente diferentes. Três dos vinte e dois pacientes desenvolveram sensibilidade por contacto às preparações tópicas, um ao álcool benzilico, um ao Sirolimus e um a ambos.

Os testes de anticorpos com Ki-67 mostraram uma redução significativa das células proliferativas de uma média de 83/mm3 no controlo a 55/mm3 com Sirolimus (rapami-cina) para proporcionar uma significância de P-0,027 (teste T) . Utilizando células CD4 os valores de controlo foram 61/mm3 contra os valores médios de 32,7/mm3 seguindo a rapamicina para proporcionar a significação de P-0,0026 (teste T) . O teste T foi desemparelhado devido à falta de amostras. ao A Tabela 3 ilustra a resposta clinica 17 ΡΕ1028727

Sirolimus tópico. A contagem clínica é medida numa escala de 0-24 com valores elevados indicando um resultado melhor, o espessamento ultra-sónico em mm e a medição de eritema em unidades arbitrárias.

Sirolimus Controlo Significância Média d.p. Média d.p. Contagem clínica 11,2 5, 8 9,1 4,8 p = 0,032 Espessamento ultra-sónico 2,99 0,6 2,96 0, 72 SS Medição de eritema 34, 5 7,9 33, 1 7, 7 SS

Estes resultados mostram que a penetração de Sirolimus de uma formulação descrita anteriormente ocorre. Pensa-se que o aumento da adsorção ocorreria pelo couro cabeludo para tratar eficazmente a psoríase do couro cabeludo.

Lisboa, 21 de Setembro de 2006

Claims (14)

1. ΡΕ1028727 1 REIVINDICAÇÕES 1. Formulação tópica para o tratamento de uma patologia dermatológica que compreende um macrólido imunossupressor seleccionado de entre Sirolimus, e seus derivados farmacologicamente activos; um modelador de permeação seleccionado de entre um ácido alcanóico e um ácido alquénico; em que o modelador de permeação e o macrólido ou seu derivado farmacologicamente activo estão presentes em quantidades relativas tais como quando uma quantidade terapêutica é aplicada à pele produzindo um efeito sistémico minimo.
2. 2. Formulação de acordo com a reivindicação 1 compreendendo até 10 % em peso de macrólido imunossupressor ou seu derivado; o modelador de permeação está presente a 0,1 até 60 % em peso.
3. 3. Formulação de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que o ácido alcanóico ou o ácido alquénico é seleccionado de entre ácido cáprico, ácido octanóico e ácido oleico.
4. 4. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a patologia dermatológica é seleccionada de entre psoríase, alopécia, dermatite de eczema, líquen plano, lúpus eritematoso, piodermite gan- 2 ΡΕ1028727 grenosa, vitiligo e doença de enxerto versus hospedeiro, infecções pustulares de pele, infecções bacterianas de pele ou acne vulgar.
5. 5. Formulação de acordo com a reivindicação 4, em que a patologia dermatológica é dermatite do eczema e a concentração do macrólido imunossupressor ou seu derivado é 0,05% a 2% em peso.
6. 6. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o modelador de permeação é utilizado em conjunto com um sistema de solvente.
7. 7. Formulação de acordo com a reivindicação 6, em que o sistema de solvente compreende um álcool aromático ou um derivado de benzeno biologicamente aceitável, com ou em uma mistura de monoglicéridos e/ou um éster de ácido gordo.
8. 8. Formulação de acordo com a reivindicação 6 ou 7, em que o modelador de permeação compreende ácido cáprico e o sistema de solvente compreende álcool benzi-lico.
9. 9. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações de 6 a 8, em que a concentração do sistema de solvente é 5% até 90% em peso. 3 ΡΕ1028727
10. 10. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores compreendendo ainda um agente espessante.
11. 11. Formulação de acordo com a reivindicação 10, em que o agente espessante é seleccionado de entre parafina mole branca, álcool cetoestearílico, parafina mole amarela, álcool cetilico, álcool esterílico, sabões de ácido carbo-xílico divalente e cera de carnaúba.
12. 12. Formulação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que o macrólido imunossupres-sor é Sirolimus.
13. 13. Utilização de um macrólido imunossupressor seleccionado de entre Sirolimus e seus derivados farmacolo-gicamente activos na preparação de uma formulação tópica como reivindicado em qualquer uma das reivindicações de 1 a 12 .
14. 14. Utilização de acordo com a reivindicação 13, em que o macrólido imunossupressor está presente em até 10% em peso da composição. Lisboa, 21 de Setembro de 2006