Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowego antybiotyku teichomycyny 8327 ewen¬ tualnie w postaci mieszaniny czynników Alf A2 i A3 oraz skladników 8327B i 8327C.Mieszanine antybiotyczna otrzymuje sie w wy¬ niku fermantacji szczepu Actinoplanes teichomy- ceticus nov. sp. oznaczonego w zbiorze Firmy sym¬ bolem A/8327, a w American Type Culture Colllec- tion numerem 31121.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze prowadzi sie hodowle szczepu Actinoplanes teicho- myceticus nov. sp. ATCC 31121 w warukach fer¬ mentacji podpowierzchniowej z napowietrzaniem, w wodnej pozywce, zawierajacej zródlo przyswa¬ jalnego wegla oraz zródlo przyswajalnego azotu i sole nieorganiczne, w odpowiedniej temperatu¬ rze w ciagu okresu czasu, wystarczajacego do wytworzenia odpowiedniego poziomu antybiotyku, pc czym oddziela grzybnie od brzeczki i z roztwo¬ ru wyodrebnia mieszanine antybiotyczna konwen¬ cjonalnym sposobem, korzystnie za pomoca ekstrak¬ cji nie mieszajacym sie z woda organicznym roz¬ puszczalnikiem, a nastepnie ekstrakt oddziela, zate- za i z wytraconego osadu, stanowiacego mieszani¬ ne antybiotyczna czynników A^ A2 i A8 teichomy¬ cyny 8327, wyodrebnia czynniki Alf A2 i A8, a z roztworu organicznego wydziela skladnik 8327 B i skladnik 8327 C.Fermentacje prowadzi sie zazwyczaj dwustopnio¬ wo; w kolbach na wytrzasarce do wytworzenia 31 grzybni, stanowiacej inokulum, a nastepnie w tan¬ kach fermentacyjnych, zaszczepionych tym inoku¬ lum, na odpowiedniej pozywce. W trakcie fermen¬ tacji przeprowadza sie badania mikrobiologiczne metoda dyfuzji w agarze, w celu okreslenia ste¬ zenia wytworzonej substancji antybiotycznej.Grzybnie oddziela sie od brzeczki w znany sposób, zwlaszcza przez odsaczenie, a z przesaczu wyod¬ rebnia mieszanine antybiotyczna konwencjonalny¬ mi sposobami, jak zwlaszcza ekstrakcja organicz¬ nymi rozpuszczalnikami, w których ta mieszanina jest rozpuszczalna, a nie mieszajacymi sie z wod¬ nym srodowiskiem.Ekstracje przeprowadza sie po doprowadzeniu brzeczki do pH okolo 3,5. Odpowiednie do ekstracji rozpuszczalniki korzystnie dobiera sie sposród chlo¬ rowcowanych weglowodorów o 1—4 atomach wegla i alkanoli o 4—6 atomach wegla, korzystnie takich, jak butanol. Ekstrakt oddziela sie od brzeczki w drodze wirowania przy wysokiej liczbie obrotów, zateza do okolo 1/10—1/20 poczatkowej objetosci, oziebia i pozostawia do wypadniecia osadu, który odsacza sie.Glównym skladnikiem osadu jest antybiotyk 8 327 czynnik A /teichomycyna/, tj. mieszanina teicho- mycyn Alf A2 i A8. Czynniki B i C antybiotyku 8 327 pozostaja zasadniczo w roztworze organicz¬ nym, a wytraca sie je dodatkiem duzej objetosci obojetnego niepolarnego rozpuszczalnika, jak lek¬ kie frakcje ropy naftowej. 98 59398 593 Teichomycyny Alf A2 i A8 oddziela sie od sie¬ bie w drodze chromatografii kolumnowej, a czyn¬ nik B od czynnika C w drodze rozdzialu przeciw- pradowego, przy czym teichomycyne A2 oczyszcza sie dalej za pomoca zywicy z sulfonowanego po¬ listyrenu w wodnym roztworze o pH=4, a teicho¬ mycyne A± oczyszcza sie dalej za pomoca chroma¬ tografii kolumnowej na krzemionce i celicie przy eluowaniu mieszanina n-butanolu, kwasu octowe¬ go i wody.Przez ekstrakcje placka grzybni mozliwe jest uzyskanie dalszej porcji produktu. Po oddestylo¬ waniu acetonu faze wodna poddaje sie takiej sa¬ mej obróbce, jak wyzej opisana obróbka brzeczki fermentacyjnej.Szczep, oznaczony wewnetrznym numerem ko¬ dowym Firmy jako A/8327, zostal wyizolowany z próbki gleby pobranej w Nimodi Village — Indore (Indie). Szczep dobrze rozwija sie na róznych aga¬ rach odzywczych. Na agarze z maka owsiana ko¬ lonie maja srednice 5—6 mm, regularne kontury z centralna kopulasta wypukloscia. W niektórych pozywkach znajduje sie obfita, sterylna grzybnie powietrzna.Zarodnie, obficie wytwarzane na wiekszosci po¬ zywek, znajdowane sa glównie na kopule kolonii.Maja ksztalt kulisty do jajowatego, regularne kon¬ tury, srednice 15—25 m^i. Sporangiofory sa proste, dlugosci okolo 15 m\i i srednicy 2 m^. Zarodniki, wy¬ soce ruchliwe, sa kuliste do jajowatych, srednicy 1,5—2 mu. Na podstawie tej charakterystyki szczep A/8327 zostal przypisany do rodzaju Actinoplanes i nazwany Actinoplanes teichomyceticus nov. sp.ATCC 31 121.W tablicy 1 przedstawiono charakterystyke ho¬ dowli Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC na standardowych pozywkach, proponowanych przez Shirlinga i Gottlieba /Int. J. Syst. Bacteriol., 16, 313, 340, 1966/ i innych pozywkach, polecanych przez Waksmana /The Actinpmycetes, tom II, wy¬ dawca Williams and Wilkins Co., 1961/. Charakte¬ rystyke oznaczano po 6—14 dniach inkubacji w °C.W tablicy 2 przedstawiono utylizacje zródel we¬ gla, badana sposobem Pridhama i Gottlieba /Jo¬ urnal Bacteriol., 56, 107, 1948/. W tablicy 3 przed¬ stawiono fizjologiczna charakterystyke szczepu.Szczep Actinoplanes teichomyceticus nov. sp.ATCC 31121 hodowano lacznie z A. brasiliensis, A. missourensis, A. utahensis, A. filippinensis, A. itali- cus, A. armeniacus, A. deccanensis ATCC 21983, A. garbadinensis ATCC 31 049 i A. liguriae ATCC 31 048. Od powyzszych szczepów mozna go wyraz¬ nie odróznic na podstawie charakterystyki mor¬ fologicznej i pigmentacji. Ponadto peptonizuje on mleko lakmusowe, co stanowi rzadko spotykana ceche, wlasciwa równiez wisnioworózowo pigmen- towanemu A. italicus. Dla powyzszych przyczyn szczep A/8327 uznano za nowy i nadano mu nazwe Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121. 4 Tablica 1 Charakterystyka hodowlana Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 Srodowisko agar Hickey'a i Tresnera 1 agar Benneta agar glukozowy Czapeka agar glukozowo- -asparaginowy agar ziemnia¬ czany agar odzywczy agar z albumi¬ na jaja agar peptonowo- -glukozowy przekrojony ziemniak Loefflera oso¬ cze krwi pozywka nr 2 /agar z ekstak¬ tem drozdzo¬ wym i slodem/ Charakterystyka hodowli obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnobra- zowej 14/B/9 — slady biala¬ wej grzybni powietrznej — umiarkowane wytwarzanie zarodni — brazowy rozpusz¬ czalny pigment obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnopo- maranczowej 9/ /B/7 — u- miarkowane wytwarzanie grzybni powietrznej barwy jasnorózowej obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnopo- maranczowej 9/B/7 — u- miarkowane wytwarzanie zarodni i umiarkowany wzrost z glad¬ ka powierzchnia barwy po- i maranczowej 10/D/12 obfity wzrost z gladka i cienka powierzchnia, barwy piwnobrazowej — obfite wy¬ twarzanie zarodni barwy ja¬ snorózowej — jasny piwno- brazowy rozpuszczalny pig¬ ment slaby wzrost z gladka i cienka powierzchnia, barwy pomaranczowej 10/5/11 obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnorózo- wawopomaranczowej 9/B/5 — obfite wytwarzanie za¬ rodni obfity wzrost ze zmarszczo- | na powierzchnia, barwy ciemnopomaranczowej 10/C/- /12 — jasnobursztynowy rozpuszczalny pigment slaby wzrost ze zmarszczona powierzchnia, barwy jasno- pomaranczowej nieliczne kolonie barwy ja- snopomaranczowej z szara- wobrazowym rozpuszczalnym pigmentem obfity wzrost z lekko zmar¬ szczona powierzchnia, barwy jasnorózowawopomaranczo- wej 9/B/6 — obfite zarodnie barwy rózowej 9/A/5 — bursztynowy rozpuszczalny pigment | 98 591 40 45 50 5598 593 c.d. tablicy 1 Srodowisko Charakterystyka hodowli pozywka nr 3 /agar z maka owsiana 20°/«/ pozywka nr 4 /agar skrobio¬ wy/ pozywka nr 5 /agar gliceryno- wo-asparagino- wy/ pozywka nr 6 /agar z pepto¬ nem, ekstraktem drozdzowym i zelazem/ pozywka nr 7 /agar tyrozyno¬ wy/ agar z maka owsiana 60%/ agar z odtlusz¬ czonym mlekiem agar z jablcza- nem wapnia agar obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnopo- maranczowej 9/B/5 — obfi¬ te zarodnie barwy jasnoró- zowej 9/A/5 obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy ciemnopo- maranczowej 9/H/10, slabe wytwarzanie zarodni obfity wzrost z cienka i gladka powierzchnia barwy pomaranczowej 9/B/7 — u- miarkowane wytwarzanie grzybni powietrznej slaby wzrost umiarkowany wzrost z glad¬ ka i cienka powierzchnia barwy rózowawobrazowej 12/A/ — wytwarzanie skapej bialawej grzybni powietrz¬ nej — rózowawobrazowy rozpuszczalny pigment 12/- /A/9 obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy jasnopo- maranczowej 9/B/5 do j asnopomaranczowobrazowej 12/B/8, ze starzeniem obfi¬ te zarodnie barwy jasnoró- zowej 9/B/5, jasny, piwno- brazowy rozpuszczalny pig¬ ment obfity wzrost z gladka po¬ wierzchnia barwy podpala¬ nego bursztynu 15/A/12 ciemny, bursztynowobrazo- wy pigment 7/E/12 slaby wzrost z gladka i cienka powierzchnia barwy jasnopomaranczowej 9/B/5 — umiarkowane wytwarza¬ nie zarodni umiarkowany wzrost, bez¬ barwny — umiarkowane wytwarzanie zarodni Oznaczenia barwy wykonano sposobem Maerza i Paula /Maerz, A., M. Reg Paul 1950, A Dictio- nary of color, wydanie drugie, Mc. Grow-Hill Book Company, Inc., New York/.Numery pozywek odnosza sie do podanych przez Shirlinga i Gottlieba. 40 50 55 6 Tablica 2 Utylizacja wegla przez Actionoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 | Zródlo wegla inozyt fruktoza ramnoza mannit ksyloza rafinoza arabinoza celuloza salicyna sacharoza mannoza laktoza glukoza/dodatnia kontrola Wzrost + + — + + + + — + + — + + + + + ± + + objasnienie: — = brak utylizacji ± = watpliwa utylizacja + + = silnie dodatnia utylizacja Tablica 3 Fizjologiczna charakterystyka Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 hydroliza skrobi tworzenie H2S czynnosc chromogeniczna hydroliza tyrozyny hydroliza kazeiny hydroliza maleinianu Ca koagulacja mleka lakmuso¬ wego peptonizacja mleka lakmu¬ sowego redukcja azotanów uplynnienie zelatyny rozklad celulozy Wzrost + + + + + + — +++ — — + + + + + — 85 objasnienie: — = reakcja ujemna + = reakcja slabo dodatnia ++ = reakcja dodatnia + + + = reakcja silnie dodatnia Wytwarzanie i izolacja antybiotyków. Wynala¬ zek ilustruja nizej podane przyklady, z których przyklad I objasnia sposób prowadzenia fermen¬ tacji, a przyklad II wlasciwosci biologiczne i fi¬ zyczne nowego antybiotyku.Przyklad I. Proces hodowli szczepu Actino¬ planes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 pro¬ wadzono dwuetapowo, w warunkach fermentacji podpowierzchniowej z napowietrzaniem. W etapie I proces prowadzono w kolbach, na wstrzasarce, na pozywce o pH, utrzymywanym w zakresie war¬ tosci 6—8, o skladzie: ekstrakt miesny 3,0 g/litr trypton 5,0 g/litr ekstrakt z drozdzy 5,0 g/litr7 98 593 8 glukoza 1,0 g/litr skrobia rozpuszczalna 24,0 g/litr jablczan wapnia 4,0 g/litr woda destylowana uzupelnieniedo 1 litra Kolby wstrzasa sie w ciagu okolo 24 godzin w temperaturze 28—30°C, a otrzymana hodowle /w objetosci jednego litra/ szczepi sie tanki fermen¬ tacyjne o objetosci po 10 litrów pozywki o naste¬ pujacym skladzie: ekstrakt miesny pepton ekstrakt z drozdzy chlorek sodu maka sojowa glukoza weglan wapnia woda wodociagowa uzupelnienie do 40 g 40 g g g 100 g 500 g 50 g litrów Zawartosc tanków inkubuje sie aerobowo, z mie¬ szaniem, w temperaturze 28—30°C. Periodycznie bada sie aktywnosc antybiotyczna metoda dyfuzji w agarze, stosujac jako organizm testowy Staphy- lococcus aureus. Maksymalna aktywnosc osiaga sie w 72—96 godzinie fermentacji.Izolacja teichomycyn 8327 Al9 A2 i A3 i czyn¬ ników B i C.Antybiotyki, obecne zarówno w przesaczu, jak i w placku grzybni ekstrahuje sie konwencjonal¬ nymi sposobami, stosujac organiczne rozpuszczal¬ niki, przy czym postepuje sie w ten sposób, ze przesaczona brzeczke za pomoca 8% HC1 doprowa¬ dza sie do pH=3,5 i dwukrotnie ekstrahuje 30°/o objetoscia butanolu. Organiczne ekstrakty zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 45°C, do 1/10 poczatkowej objetosci, przemywa mala objetoscia wody o pH=3,5 i dalej zateza do malej objetosci. Stezony roztwór utrzymuje sie w ciagu 10—15 godzin w niskiej temperaturze, do wytracenia osadu, który odsacza sie. Przesacz wy¬ lewa sie do duzej objetosci lekkiej fracji ropy na¬ ftowej i odsacza wytracony surowy osad.Placek grzybni przemywa sie woda o pH~3,5, suszy pod zmniejszonym cisnieniem i ekstrahuje 45 mieszanina 2:8 wody z acetonem. Acetonowy ekstrakt zateza sie pod zmniejszonym cisnieniem, w temperaturze 40—45°C. Wodna pozostalosc do¬ prowadza sie do pH=3,5 i trzykrotnie ekstrahuje butanolem. Polaczone ekstrakty butanolowe prze¬ mywa sie mala objetoscia wody o pH=3,5 i pod zmniejszonym cisnieniem do 1/20 poczatkowej objetosci. Stezony roztwór utrzymuje sie w ciagu —12 godzin w temperaturze 4°C, a nastepnie odsacza surowy osad. Przesacz wlewa sie do duzej objetosci lekkiej frakcji ropy naftowej, uzyskujac nastepna porcje osadu.Badania chromatograficzne przeprowadzone w sposób, przedstawiony w tablicy 4 wykazuja, ze produkty, otrzymane przez oziebienie zatezonych ekstraktów butanolowych, zawieraja glównie teichomycyny Aif A2 i Aj, przy przewazajacym udziale teichomycyny A2, a produkty, otrzymane przez wytracenie w obojetnym rozpuszczalniku nie- polarnym /lekkiej frakcji ropy naftowej/, zawie¬ raja antybiotyk 8 327 czynniki B i C.Czynniki B i C antybiotyku 8 327 oddziela sie od siebie technika rozdzialu przeciwpradowego i wyodrebnia jako indywidualne zwiazki antybio- tyczne. Do rozdzialu stosuje sie uklad: 0,15 m bu¬ for fosforanowy-n-butanol-heksan 1:1:0,05.Teichomycyny Al9 A2 i A3 rozdziela sie chroma¬ tografia kolumnowa na nosniku Sephadex LH-20, prowadzac eluowanie mieszanina n-propanol-octan etylu 0,2 n NH4OH 10:7:7.Frakcje eluatu analizuje sie technika chromato¬ grafii cienkowarstwowej na zelu krzemionkowym w ukladzie n-propanol-octan etylu-stezony NH4OH 2:1:2 z wywolaniem biologicznym, stosujac jako szczep testowy S. aureus. Wartosci Rf poszczegól¬ nych teichomycyn sa nastepujace: AA—0,48, A2—0,10, As—0,0.Frakcje, zawierajace pojedyncze skladniki, zate¬ za sie do malej objetosci, rozciencza metanolem i wylewa do duzej objetosci acetonu, w którym wszystkie trzy antybiotyki wytracaja sie jako bez¬ postaciowy proszek barwy bialej.W tablicy 4 przedstawiono wartosci Rf wszyst¬ kich pieciu skladników kompleksu antybiotyczne- go w róznych ukladach.Tablica 4 Wartosci Rf skladników antybiotycznego kompleksu 8 327 i Wywolanie mikrobiologiczne z uzyciem szczepu Staphylococus aureus 1 nosnik: bibula Whatman Nr 1 uklad: 1/ butanol nasycony 0,15 m buforem fosforanowym o pH=6,0 2/ butanol, nasycony 2% wodnym roztworem kwasu p-toluenosulfono- wego i 3/ butanol, nasycony 2°/# wodnym roztworem wodorotlenku amonu Czynnik B 2 0,85 0,83 0,73 Czynnik C 3 0,86 0,88 0,79 Teichomy- -cyna A* 4 0,0 0,05 0,0 Teichomy- cyna A* 0,0 0,13 0,0 Teichomy- cyna A* 6 0,0 0,0 0,339 98 593 1 1 4/ 0,15 m bufor fosforanowy o pH=6,0, nasycony butanolem / 20% wodny roztwór NH4C1 6/ butanol rmetanol:woda /40:10:20/ z 0,75% zawartoscia oranzu metylowego 7/ butanol:metanol:woda /40:10:20/ 8/ octan etylu nasycony woda 9/ n-propanol:n-butanol:10 n NH4OH /2:3:4/ nosnik: cienka warstwa zelu krzemionkowego uklad: n-propanol:octan etylu:stezony NH4OH /2:1:2,/ 2 0,0 0,0 0,88 0,89 0,20 — — 3 0,76 — 0,88 0,90 0,70 0,88 — 4 0,20 0,0 0,42 0,46 0,0 0,55 0,48 0,25 0,0 0,37 0,41 0,0 0,43 0,10 6 0,65 0,61 0,13 0,20 0,0 0,10 0,0 Przyklad II. Wlasciwosci biologiczne teicho- mycyna, bacytracyna, cefalosporyna, rifampicyna, mycyn Alf A2 i A3 oraz czynników B i C anty- streptomycyna, neomycyna i chloramfenikol, biotyku 8 327 oraz wlasciwosci fizyczne tych sub- Z powyzszych wlasciwosci wynika, ze nowe an- stancji. tybiotyki moga byc uzyteczne do róznych celów, Tablica 5 Szczep 1 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Staphylococcus aureus Tour Staphylociccus aureus Tour+30% bovine serum Streptococcus haemolyticus C-203 Diplococcus pneumoniae UC 41 Clostridium perfringens ISS 30 543 Escherichia coli SKF 12 140 Proteus vulgaris X 19 H Pseudomonas aeruginosa ATCC 10 145 Candida albicans SKF 2 270 Trichophyton mentagrophytes SKF 17 410 Mycobacterium tuberculosis H37RV ATCC 9 360 Mycoplasma gallisepticum H 21 C.Z.B.Neisseria gonorrhoae Najnizsze stezenie hamujace /ng/ml/ Teicho- mycyna At 2 0,02 0,05 50 0,5 0,5 2,0 100 100 100 100 Teicho- mycyna A2 3 0,5 1,0 1,0 0,05 0,1 0,05 100 100 100 100 100 100 100 1,0 Teicho- mycyna A* 4 2,0 2,0 2,0 1,0 2,0 ,0 100 100 100 100 100 100 8 327 czynnik B 2,0 ,0 2,0 2,0 100 100 100 100 100 100 100 8 327 czynnik C 6 | 2,0 2.0 2,0 0,5 2,0 50 100 100 100 100 100 ioo 1 100 1/ W tablicy 5 przedstawiono wyniki badan ak- jak leczenie chorób zakaznych u zwierzat, dezyn- tywnosci inwitro. fekcja przedmiotów i instrumentów, jako czynniki Teichomycyny sa równiez aktywne w stosunku promotujace wzrost zwierzat i w innych zastoso- do bakterii opornych na antybiotyki szerokiego waniach, wymagajacych powstrzymywania rozwoju stosowania, jak penicylina, tetracyklina, strepto- «5 chorobotwórczych bakterii.98 593 ll 2/ Ostra toksycznosc u myszy Teichomycyna At 500 mg/kg /dozylnie/ Teichomycyna A2 1000 mg/kg /dozylnie/ 3/ Aktywnosc in vivo w zakazeniach doswiad¬ czalnych przedstawiono w tablicy 6.Tablica 6 12 | Szczep zakazny Streptococcus haemolyticus Staphylococcus aureus Diplococcus pneumoniae ED50 mg/kg (podskórnie) 1 Teicho¬ mycyna Ai 2,14 11,5 Teicho¬ mycyna A2 0,1 3,97 0,57 rozpuszczalnik W(nm) E bufor fosforowy pH=7,38 278 55 0,1 n HC1 278 55 0,1 n NaOH 297 74 Przedstawione na figurze 1 widmo zarejestrowa¬ no na aparacie Beckman DK-2. 4/ Widmo absorpcji w podczerwieni Widmo absorpcji w podczerwieni dla zawiesiny w nujolu przedstawiono na rys. figura 2. Najwaz¬ niejsze pasma absorpcji wystepuja przy nastepu¬ jacej czestosci /cm-1/: 3 300 /szerokie/, ~2 900 /nujol/, 1720 /przegiecie/, 1660, 1600 /przegiecie, ~1 500, 1 455 /nujol/, 1 375 /nujol/, 1 235, 1190—930, 850, 720 /szerokie/. Widmo zarejestrowano na apa¬ racie Perkin Elmer 157./ Rozpuszczalnosc Zwiazek jest rozpuszczalny w wodnych roztwo¬ rach o pH=7,0, w wodnym roztworze kwasnego weglanu sodu, w rozcienczonych wodnych roztwo¬ rach wodorotlenków metali alkalicznych i w mie¬ szaninach metanolu z woda, czesciowo rozpuszczal¬ ny w metanolu i etanolu, nierozpuszczalny w roz¬ cienczonych kwasach nieorganicznych i w niepo- larnych rozpuszczalnikach organicznych. 6/ Charakterystyczne reakcje: Fehlinga dodatnia Tollensa dodatnia z KMn04 z FeCl3 ze stezonym H2S04 dodatnia dodatnia zabarwienie ciemnofioletowe dodatnia ujemna ujemna ujemna Czynniki B i C antybiotyku 8 327 nie wykazaly zadnej aktywnosci w podskórnych dawkach do 80 mg/kg podskórnie.Fizykochemiczne wlasciwosci teichomycyny A2.Teichomycyna otrzymana w wyzej opisany sposób jest bezpostaciowym proszkiem, który po dalszym oczyszczeniu przez obróbke zywica z sulfonowanego polistyrenu /Dowex 50/ w wodnym roztworze o pH=4 wykazuje nastepujace wlasciwosci: 1/ Temperatura topnienia: 260°C /z rozkladem/ 2/ Analiza elementarna /wartosci srednie z trzech oznaczen/: C=54,20«/o, H=5,70°/o, N=6,80%, Cl=3,30°/o, O /z róznicy/=30,00% 3/ Widmo absorpcji w nadfiolecie /patrz rys. fi¬ gura 1/ S Folin Ciocolteu Griessa z antranonem Schiffa 7/ Miareczkowanie potencjometryczne io Miareczkowanie potencjometryczne wykazuje obecnosc funkcji zasadowej o wartosci pKa=4,9 Miareczkowanie za pomoca HC104 w dwumety- losulfotlenku wykazuje ciezar równowaznikowy 1170 Fizykochemiczne wlasciwosci teichomycyny Ai Teichomycyne A1} otrzymana w wyzej opisany sposób, oczyszcza sie dalej w drodze chromato¬ grafii kolumnowej na mieszaninie 1:1 /objetnos- ciowo/ zelu krzemionkowego z celitem, stosujac jako czynnik eluujacy mieszanine n-butanol-kwas octowy-woda /8:2:2/. Otrzymuje sie bezpostaciowy proszek o nastepujacych wlasciwosciach: 1/ Temperatura topnienia: 220°C /z rozkladem/ 2/ Analiza elementarna /wartosci srednie z trzech oznaczen/: C=52,9Vo, H=7,6°/o, N=5,26*/o, popiól = 3,26°/o 3/ Widmo absorpcji w nadfiolecie: brak absorpcji miedzy 220 a 360 nm widmo zarejestrowano na aparacie Beckman DK-2 4/ Widmo absorpcji w podczerwieni Widmo absorpcji w podczerwieni dla zawiesiny w nujolu przedstawiono na figurze 3. Najwazniej¬ sze pasma absorpcji wystepuja przy nastepujacej czestosci /cm-1/: 3350 /szerokie/, 2930—2850 /nujol/, 2750—2000, 1720 /przegiecie/, 1670 /szerokie/, 1620 /przegiecie/, 1560 /szerokie/, 1460 i 1370 /nujol/, 1% 1340 /przegiecie/, 1260, 1240, 1155 /przegiecie/, 1120 1 cm /przegiecie/, 1040 /bardzo szerokie/, 970 /szerokie/, 950 /przegiecie/, 900 /szerokie/, 865, 805, 720. Wid¬ mo w podczerwieni zarejestrowano na aparacie Perkin Elmer 517./ Rozpuszczalnosc Zwiazek jest rozpuszczalny w wodnych roztwo¬ rach o pH=7,0, w wodnym roztworze kwasnego 45 weglanu sodu, w rozcienczonych roztworach wod¬ nych wodorotlenków metali alkalicznych, w dwu- metyloformamidzie i w dwumetylosulfotlenku, czesciowo rozpuszczalny w metanolu i etanolu, nie¬ rozpuszczalny w rozcienczonych kwasach nieorga- 50 nicznych i niepolarnych rozpuszczalnikach orga¬ nicznych. 6/ Charakterystyczne reakcje: Fehlinga dodatnia Tollensa dodatnia 55 z KMn04 dodatnia Griessa ujemna z antranonem dodatnia Schiffa ujemna Molisha dodatnia 40 85 7/ Ciezar czasteczkowy: oznaczenia w drodze chromatografii na nosniku Sephadex G 75 wyka¬ zaly nastepujace wartosci: 000 w buforze fosforanowym pH=7,38 000 w buforze cytrynianowym pH=4,498 593 13 14 PL PL PL PL PL PL PL PL