PL57938B1 - - Google Patents

Description

Otrzymuje sie 885 g produktu o zabarwieniu jasnoszarym, zawieraja¬ cego 1790 jedn./mg.Przyklad IV. 880 g surowego antybiotyku otrzymanego sposobem opisanym w przykladzie III rozpuszcza sie w 20 litrach wody o wartosci pH = 7.Roztwór wodny saczy sie, potem przepuszcza na kolumnie wypelnionej 35 litrami zywicy wymie¬ niacza jonowego Dowex 1x2 w formie chlorku, przy czym odciek odrzuca sie/ Zywice przemywa sie 50 litrami wody, nastepnie 80 litrami miesza¬ niny wody i kwasu mrówkowego (90 :10 obj.), po- 45 tern 80 litrami mieszaniny metanolu, wody i kwa¬ su mrówkowego (80 :10 :10 obj.) i wreszcie 80 li¬ trami mieszaniny metanolu i wody (80 :20 obj.).Antybiotyk eluuje sie za pomoca 300 litrów mie¬ szaniny metanolu i wody (80 : 20 obj.) zawierajacej 10 g/litr chlorku potasowego.Frakcje kluczowa wynoszaca 120 litrów zageszcza sie do objetosci 5 litrów pod zmniejszonym cis¬ nieniem (20 mm Hg) w temperaturze ponizej 40°C.Roztwór dializowany, zawierajacy cala aktyw¬ nosc eluatu, zageszcza sie pod zmniejszonym cis¬ nieniem (20 mm Hg) do objetosci 0,8 litrów.Przez dodanie do koncentratu acetonu w ilosci 5 czesci objetosciowych koncentratu wytraca sie sól potasowa antybiotyku i po jej odsaczeniu, prze¬ myciu acetonem i wysuszeniu w ciagu nocy w temperaturze 35°C pod cisnieniem 2 mm Hg, otrzy¬ muje sie 195 g substancji w postaci proszku jasno- brunatnego zawierajacego 5.680 jedn./mg antybio- 65 tyku. 35 40 50 5517 57938 18 ' Przyklad V. 10 g soli potasowej antybioty¬ ku (5.000 jedn./mg) otrzymanej sposobem opisanym w przykladzie IV rozpuszcza sie w 100 ml miesza¬ niny alkoholu n-propylowego i wody (50 :50 obj.)- Roztwór przepuszcza sie przez kolumne wypelnio¬ na 20 g tlenku glinowego przy wartosci pH = 4, przy czym elucje antybiotyku przeprowadza sie za pomoca tej samej mieszaniny.Pierwsze 400 ml eluatu zageszcza sie do 10 ml pod zmniejszonym cisnieniem (20 mm Hg) w tem¬ peraturze nizszej od 40°C i otrzymany koncen¬ trat w celu oddzielenia soli mineralnych oraz róz¬ nych zanieczyszczen organicznych poddaje sie dia¬ lizie w ciagu 24 godzin w przeciwpradzie z woda destylowana w ilosci 20-krotnej objetosci koncen¬ tratu przez przepone z regenerowanej celulozy.Z roztworu dializowanego przez dodanie 10 obje¬ tosci acetonu wytraca, sie sól potasowa antybio¬ tyku, która odsacza sie, przemywa acetonem i su¬ szy w ciagu nocy w temperaturze 35°C pod cis¬ nieniem 2 mm Hg. Otrzymuje sie 2 g substancji w postaci proszku praktycznie bezbarwnego za¬ wierajacego 8.800 jedn./mg.Przyklad VI. 175 g produktu otrzymanego sposobem opisanym w przykladzie IV rozpuszcza sie w 3,5 litrach wody przy wartosci pH = 7.Roztwór wodny przepuszcza sie na kolumnie za¬ wierajacej 15 litrów zywfcy Dowex 1x2 w formie chlorku, przy czym odciek odrzuca sie. Zywice przemywa sie kolejno za pomoca 15 litrów wody destylowanej, 20 litrów mieszaniny wody i kwasu mrówkowego (90:10 obj.), 40 litrów mieszaniny metanolu i kwasu mrówkowego (80 :10 :10 obj.) oraz 20 litrów mieszaniny metanolu i wody (80 : 20 obj.). Elucje antybiotyku przeprowadza sie za pomoca 75 1 mieszaniny metanolu i wody (80 :20 obj.) zawierajacej 10 g/litr chlorku potasowego.Frakcje kluczowa wynoszaca 40 litrów zageszcza sie do 1,1 litra pod zmniejszonym cisnieniem (20 mm Hg) w temperaturze ponizej 40°C, po czym koncentrat poddaje sie dializie w ciagu 24 godzin w przeciwpradzie z woda destylowana przez prze¬ pone zregenerowanej celulozy.Roztwór dializowany zawierajacy calosc aktyw-; nosci eluatu (1,5 litra) zageszcza sie pod zmniejszo¬ nym cisnieniem (20 mm slupa rteci) do objetosci 200 ml.Przez dodanie do koncentratu 5 czesci jego obje¬ tosci acetonu wytraca sie sól potasowa antybio¬ tyku.Osad oddziela sie na wirówce, przemywa aceto¬ nem i suszy w ciagu nocy w temperaturze 35°C pod cisnieniem 2 mm slupa rteci. Otrzymuje sie 98 g soli potasowej w postaci proszku praktycznie bialego zawierajacego 8.000 jedn./mg.Przyklad VII. 9,25 g soli potasowej anty¬ biotyku, otrzymanej sposobem opisanym w przy¬ kladzie V, rozpfuszcza sie w 0,5 litrze^ wody. Roz¬ twór wstrzasa sie z 32 g Amberlitu I R 120 w formie kwasnej dodawanego porcjami do chwili ustalenia sie wartosci pH = 1,5. Zywice odsacza sie i przemywa, wstrzasajac, za pomoca 100 ml wody. Przesacz i popluczyny laczy sie.Roztwór otrzymany liofilizuje sie otrzymujac 7,2 g antybiotyku oczyszczonego, zawierajacego 8.600 jedn./mg„ o skladzie: C = 47,85—48%; H = = 7,10%; N = 4,45—4,50%; P = 2,20%; O = = 38,20—38,40% (przez róznice). 5 Przyklad VIII. 27,75 g soli potasowej otrzy¬ manej wedlug przykladu V rozpuszcza sie w 1,5 litrze wody i wstrzasa z 100 g Amberlitu w formie kwasnej tak jak podano w przykladzie VII. Otrzy¬ many roztwór kwasny doprowadza sie do war- io tosci pH = 7 przez dodanie 24,6 ml normalnego lugu sodowego.Obojetny roztwór wodny liofilizuje sie, przy czym otrzymuje sie 19,6 g soli sodowej antybio¬ tyku o skladzie: C = 45,25—45,3%; H = 6,55—. 15 6,90%; O = 38,3—38,8% (przez róznice); N = = 4,25—4,15%; P = 2,10%; Na = 3,15%.Przyklad IX. 5 g soli potasowej zawiera* jacej 8.000 jedn./mg., otrzymanej sposobem opisa¬ nym w przykladzie VI, rozpuszcza sie w 50 ml 20 mieszaniny alkoholu n-propylowego i wody (50: 50 obj,).Roztwór przepuszcza sie na kolumnie wypelnio^ nej zawiesina tlenku glinowego o wartosci pH = = 4 w mieszaninie alkoholu n-propylowegó, wody 25 i roztworu amoniaku stezonego (d = 0,925) (50: 49,5 :0,5 obj.).Frakcje eluatu odliczano po 10 ml i w kazdej z nich oznaczano aktywnosc antybiotyku metoda biologiczna. 30 Bogate frakcje eluatu uzyskano za pomoca mie¬ szaniny alkoholu n-propylowego i wody (50:50 obj.), frakcje od 3 do 11 zlaczono i zageszczono pod zmniejszonym cisnieniem (20 mm slupa rteci) do 10 ml w temperaturze nie przekraczajacej 40°C, 35 Koncentrat rozcienczono 10 ml alkoholu n-propy¬ lowego i 10 ml acetonu, przy czym antybiotyk wytraca sie. Po odsaczeniu stratu, przemyciu* go acetonem i osuszeniu w ciagu nocy w temperatu¬ rze 35°C pod cisnieniem 2 mm slupa rteci, zebrano 40 2,4 mg bezbarwnej soli potasowej antybiotyku za¬ wierajacej 9.150 jedn7mg.Bogate frakcje eluatu uzyskane za pomoca mie¬ szaniny alkoholu n-propylowego, wody i stezonego amoniaku (50 :49,5 :0,5 obj.), frakcje od 23 do 40 49 zlaczono postepujac dalej jak powyzej. Otrzyma¬ no 1,5 g proszku slabo zabarwionego, zawieraja¬ cego 8.500 jedn./mg, . PL

Claims (1)

1. Zastrzezenia patentowe 50 1. Sposób wytwarzania nowego antybiotyku ozna¬ czonego 8.036 R.P., znamienny tym, ze poddaje sie hodowli w warunkach aerobowych szczep Streptomyces canadiensis (NRRL 3155), po czym otrzymany antybiotyk wyosabnia sie z plynu hodowlanego, oczyszcza za pomoca' klasycznych metod fizyko-chemicznych i ewentualnie prze¬ prowadza w sólr 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze M jako podloze do hodowli szczepu Streptomyces canadiensis (NRRL 3155) stosuje sie podloze kla¬ syczne, zawierajace co najmniej zródlo przy¬ swajalnego wegla i zródlo przyswajalnego azo¬ tu, w warunkach stosowanych zazwyczaj do 55 tego typu hodowli.KI. 30 h,6 57938 MKP A 61 k 0,0 4000 3Q00 2500 2000 1500 iopo 9 go 800 750 700 cm "1 FIG 1 15/* 0,0 40,00 3Q00 2500 2000 1500 1200 1000 t- 900 e00 750 700 cm 15/* FIG 2 WDA-l. Zam. 2890. Naklad 220 egz. PL