SU503511A3 - Способ получени калликреинтрипсин-ингибитора - Google Patents
Способ получени калликреинтрипсин-ингибитораInfo
- Publication number
- SU503511A3 SU503511A3 SU1765857A SU1765857A SU503511A3 SU 503511 A3 SU503511 A3 SU 503511A3 SU 1765857 A SU1765857 A SU 1765857A SU 1765857 A SU1765857 A SU 1765857A SU 503511 A3 SU503511 A3 SU 503511A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- inhibitor
- water
- methanol
- kallikrein
- units
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8114—Kunitz type inhibitors
- C07K14/8117—Bovine/basic pancreatic trypsin inhibitor (BPTI, aprotinin)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Treatments For Attaching Organic Compounds To Fibrous Goods (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
Нар ду с чистой водой примен ют и 0,01 М сол ную кислоту и затем 0,02 М раствор натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты . При этом удал ют примеси. Вымывание ингибитора из смолы осуществл ют органическими , смешиваемыми с водой растворител ми , например метанолом, этанолом, изопропанолом , ацетоном.
Концентраци , при которой вымывают каллЕкреин-трипсин-ингибитор , зависит от вида растворител . Добавки к растворителю могут изменить процесс десорбции. Так, например, добавка аммиака содействует ускорению вымывани , причем вымываютс и крас щие компоненты. Полученный таким образом калликреин-трипсин-ингибитор как показал электрофорез в полиакриламиде или на ацетилцеллюлозе , в значительной степени свободен от других сопутствующих полипептидов и солей . Специфическа активность составл ет 3000-4000 единиц калликреин-ингибитора на 1 мг сухого веса. Выход составл ет 60-80% содержани ингибитора сырого экстракта при обогащении в 30-40 раз.
Пример 1. 700 г легкого крупного рогатого скота, освобожденного от соединительной ткани и измельченного, перевод т в растворимую форму метанолом при добавке хлорида кальци . Суспензию отдел ют центрифугированием и в вакууме в ротационном испарителе сгущают до 275 мл. Метанол полностью удал ют. Значение рН раствора 1,5 устанавливают, добавл 2 н. сол ную кислоту , затем снова центрифугируют. Отделившийс сверху слой содержит 880000 единиц калликреин-ингибитора . Этот раствор ввод т в следующую колонну.
50 г пористой полистирольной смолы с поверхностью 330 поглощают в метаноле и до тех пор промывают, пока метанол не станет практически свободен от адсорбируемых при ультрафиолетовом облучении (280 нм) веществ. Затем метанол декантируют и замен ют кип ченой дистиллированной водой. Водную суспензию смолы (примерно 100 мл), свободную от пузырей, ввод т в стекл нную колонну и промывают 200 мл воды.
Содержащий ингибитор сырой экстракт ввод т в колонну с пропускной скоростью 100 мл/ч, промывают 200 мл 0,01 М сол ной кислоты и затем 200 мл натриевой соли 0,02 М этилендиаминтетрауксусной кислоты и 100мл воды. Ингибитор при этом с линейным градиентом 1 л воды к 80% метанола вымывают и фракционированно улавливают. Содержащую ингибитор фракцию объедин ют, метанол выпаривают в вакууме и водный раствор подвергают сублимационной сушке. Получают 180 мг ингибитора с 714 единицами калликреи 1-ингибитора , что составл ет 81 % содержани ингибитора. Специфическа активность составл ет 3960 единиц калликреин-ингибитора на 1 мг.
Пример 2. 4 кг измельченного легкого крупного рогатого скота смеп1ивают с 7,2 л
дистиллированной воды. По истечении 10 мин размешивани добавл ют 350 мл 10%-ной (по объему) H2SO4 до установлени значени рН 1,9. Дополн ют до 12л, дополн ют 200 мл толуола и размешивают в течение ночи при комнатной температуре. Суспепзию центрифугируют в течение 10 мин при 4800 об/мин. Обща активность в отсто вшемс наверху слое 8,15X10 единиц калликреин-ингибитора.
Размешива в течение 30 мин, добавл ют (ЫП4)250.1 до насыщени 0,45. Значение рП посредством добавки концентрированной H2SO4 устанавливают на 1,5, в качестве фильтровального вспомогательного вещества добавл ют 320 г кизельгура и немедленно фильтруют .
7 л этого раствора (обща активность 4,38X10 единиц) калликреин-ингибитора ввод т в колонну примерно с 2 л пористой
полистирольной смолы с поверхностью 150 . Перед этим кислоту промывают 1 н. метанольным НС1, метанолом и водой. После введени экстракта колонну промывают 4 л 0,01 н. ПС1, 4 л 0,02 ЕДТА (натриева соль
этилендиаминотетрауксусной кислоты) и 2 л дистиллированной воды, затем вымывают линеарным градиентом, состо ющим из 5 л дистиллированной воды и 5л 80%-ного метанола . Активные фракции объедин ют, метаНОЛ отгон ют в вакууме и раствор лиофилизируют . Получают 1,3 г вещества со специфической активностью 2500 единиц калликреин-ингибитора на 1 мг (обща активность 3,22X10 единиц калликреин-ингибитора),
что соответствуетВЫХОДУ 73,5%.
Пример 3. 120 кг легкого крупного рогатого скота метанолом при добавке хлорида кальци согласно примеру 1 перевод т в растворимую форму. Из 400 л полученного прозрачного фильтрата метанол тщательно отгон ют . Водный раствор, содержащий калликреин-трипсин-илгибитор в сыром виде, подкисл ют НС1 до значени рП 1,5 и ввод т в колонну с 8 л пористой полистирольной смолы
с поверхностью 150 . Обща активность 152X10 единиц калликреин-ингибитора. Колонну промывают 16 л 0,01 н. ПС1, 16 л 0,02 М ЕДТА и 10 л дистиллированной воды. Затем активное вещество вымывают линеарным градиентом из 20 л дистиллированной воды и 20 л 80%-ного метанола. Фракции, содержаHuie активное вещество, объедин ют, метанол отгон ют и раствор лиофилизируют. Получают 25,7 г твердого вещества со специфической активностью 4200 единиц калликреин-ингибитора на 1 мг (обща активность единиц калликреин-ингибитора), что соответствует выходу 71 %. Пример 4. 120 л легкого крупного рогатого скота, переведенного согласно примеру 1 с метанолом-хлоридом кальци в растворимую форму, после удалени метанола, установлени значени рН 1,5 и центрифугировани дали 67 мл отделившегос сверху сло с
150000 единицами калликреин-ингибитора. В
этот сырой раствор ингибитора ввод т 10 мл пористой полистирольной смолы. После 30 мин на нутч-фильтре смолу отсасывают и промывают 100 мл воды. Затем смолу суспендируют и в течение 30 мин размешивают в растворе 20 мл изопропанола, дополненного водой до 100 мл. Смолу отсасывают и в фильтрате после отгонки изопропанола в вакууме определ ют ингибитор. Выход 123 единиц калликреин-ингибитора, что составл ет 80% имевшегос содержани ингибитора.
Claims (1)
- Формула изобретениСгюсоб получени калликреин-трипсин-ингибитора путем селективного выделени изсырого экстракта органов крупного рогатого скота, отличающийс тем, что, с целью упрощени процесса, экстракт подкисл ют до рН 1,0-3,0, ввод т в него соли, например сульфат аммони , в концентрации 1-400 г/л, подвергают контакту с нейтральным нерастворимым в воде сшитым полимером пористой структуры из стирола и дивинилбензола с активной поверхностью 10-1000 м-/г, последовательно промывают полимер водой или разбавленной сол ной кислотой и раствором соли этилепдиаминотетрауксусной кислоты, элюируют целевой продукт градиентом воды и смешивающегос с водой органического растворител .
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2116377A DE2116377C3 (de) | 1971-04-03 | 1971-04-03 | Verfahren zur Gewinnung des Kallikrein-Trypsin-Inhibitors aus Rinderorganen |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU503511A3 true SU503511A3 (ru) | 1976-02-15 |
Family
ID=5803799
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU1765857A SU503511A3 (ru) | 1971-04-03 | 1972-03-31 | Способ получени калликреинтрипсин-ингибитора |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3830790A (ru) |
| AT (1) | AT314727B (ru) |
| BE (1) | BE781559A (ru) |
| CA (1) | CA982050A (ru) |
| CH (1) | CH584035A5 (ru) |
| CS (1) | CS168583B2 (ru) |
| DD (1) | DD99360A5 (ru) |
| DE (1) | DE2116377C3 (ru) |
| DK (1) | DK129388B (ru) |
| ES (1) | ES401299A1 (ru) |
| FI (1) | FI47892C (ru) |
| FR (1) | FR2132316B1 (ru) |
| GB (1) | GB1352293A (ru) |
| HU (1) | HU163661B (ru) |
| IL (1) | IL39109A (ru) |
| NL (1) | NL7204366A (ru) |
| NO (1) | NO134377C (ru) |
| PL (1) | PL83395B1 (ru) |
| SE (1) | SE408752B (ru) |
| SU (1) | SU503511A3 (ru) |
| ZA (1) | ZA722194B (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5544726B2 (ru) * | 1973-05-17 | 1980-11-13 | ||
| JPS59199631A (ja) * | 1983-04-25 | 1984-11-12 | Nippon Chem Res Kk | ヒト尿チオ−ルプロテア−ゼインヒビタ−の採取法 |
-
1971
- 1971-04-03 DE DE2116377A patent/DE2116377C3/de not_active Expired
-
1972
- 1972-03-29 IL IL39109A patent/IL39109A/xx unknown
- 1972-03-29 US US00239315A patent/US3830790A/en not_active Expired - Lifetime
- 1972-03-29 NO NO1088/72A patent/NO134377C/no unknown
- 1972-03-29 SE SE7204135A patent/SE408752B/xx unknown
- 1972-03-29 CH CH471472A patent/CH584035A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-03-29 ES ES401299A patent/ES401299A1/es not_active Expired
- 1972-03-29 DK DK158572AA patent/DK129388B/da unknown
- 1972-03-30 AT AT276872A patent/AT314727B/de not_active IP Right Cessation
- 1972-03-30 DD DD161937A patent/DD99360A5/xx unknown
- 1972-03-30 ZA ZA722194A patent/ZA722194B/xx unknown
- 1972-03-30 NL NL7204366A patent/NL7204366A/xx not_active Application Discontinuation
- 1972-03-30 FI FI720906A patent/FI47892C/fi active
- 1972-03-30 CS CS2147A patent/CS168583B2/cs unknown
- 1972-03-30 CA CA138,608A patent/CA982050A/en not_active Expired
- 1972-03-30 GB GB1502872A patent/GB1352293A/en not_active Expired
- 1972-03-31 SU SU1765857A patent/SU503511A3/ru active
- 1972-03-31 BE BE781559A patent/BE781559A/xx unknown
- 1972-03-31 FR FR7211457A patent/FR2132316B1/fr not_active Expired
- 1972-03-31 HU HUBA2722A patent/HU163661B/hu unknown
- 1972-04-01 PL PL1972154516A patent/PL83395B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI47892C (fi) | 1974-04-10 |
| ES401299A1 (es) | 1975-02-16 |
| DD99360A5 (ru) | 1973-08-05 |
| FR2132316A1 (ru) | 1972-11-17 |
| NL7204366A (ru) | 1972-10-05 |
| CS168583B2 (ru) | 1976-06-29 |
| DE2116377C3 (de) | 1978-05-18 |
| HU163661B (ru) | 1973-10-27 |
| BE781559A (fr) | 1972-10-02 |
| NO134377B (ru) | 1976-06-21 |
| IL39109A (en) | 1974-11-29 |
| CA982050A (en) | 1976-01-20 |
| DE2116377B2 (de) | 1977-09-22 |
| FI47892B (ru) | 1974-01-02 |
| DK129388C (ru) | 1975-04-07 |
| GB1352293A (en) | 1974-05-08 |
| FR2132316B1 (ru) | 1976-06-11 |
| AT314727B (de) | 1974-04-25 |
| US3830790A (en) | 1974-08-20 |
| IL39109A0 (en) | 1972-05-30 |
| CH584035A5 (ru) | 1977-01-31 |
| DE2116377A1 (de) | 1972-10-19 |
| SE408752B (sv) | 1979-07-09 |
| ZA722194B (en) | 1972-12-27 |
| PL83395B1 (ru) | 1975-12-31 |
| DK129388B (da) | 1974-10-07 |
| NO134377C (ru) | 1976-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100293172B1 (ko) | 스트렙토마이세스sp. P6621 FERM P2804의 발효액으로부터 클라불란산과 제약학적으로 허용가능한 이들의 염을 단리하는 신규한 방법 | |
| US3972777A (en) | Method for recovery of refined α-galactosidase | |
| SU503511A3 (ru) | Способ получени калликреинтрипсин-ингибитора | |
| US2500173A (en) | Extraction of digitalis glycosides | |
| JPH02150286A (ja) | 発酵媒体からの２―ケト―ｌ―グロン酸の分離方法 | |
| CN106967186A (zh) | 一种从鱼鳔中提取类肝素化合物的方法 | |
| US3838148A (en) | Process for the industrial preparation of desoxyribonucleic acids of high molecular weight | |
| US2457887A (en) | Purification of bacitracin | |
| CN107641161A (zh) | 一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺 | |
| Emiliani et al. | Induced Autolysis of Aspergillus oryzae (A. niger group) IV. Carbohydrates | |
| US2643997A (en) | Isolation and purification of streptomycin phosphate | |
| SU423303A3 (ru) | Способ получения производных цефалоспорина с | |
| SU1175484A1 (ru) | Способ получени лектина | |
| US3184454A (en) | Recovery of cephalosporin c | |
| CN113801174B (zh) | 一种从灯盏花素酸沉废液中回收灯盏花素的工艺 | |
| SU538018A1 (ru) | Способ выделени и очистки кислой протеиназы из растворов | |
| US3118909A (en) | Purification of gibberellins | |
| US3872075A (en) | Salts of amino-acids with polysulfuric esters of natural gly-copeptides and process for preparing same | |
| DE3922278A1 (de) | Verfahren zur herstellung von freiem epsilon-polylysin | |
| SU1551647A1 (ru) | Способ получени кремнегел | |
| Ohta et al. | Isolation and identification of acetylated pteridines from loach | |
| US2793161A (en) | Process for recovering vitamin b12 | |
| JPH05399B2 (ru) | ||
| SU608763A1 (ru) | Способ получени очищенного бикарбоната натри | |
| JPS5982340A (ja) | アブサイジン酸の精製法 |