PL201312B1 - Zastosowanie bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej i kompozycja zdrowotna do jamy ustnej - Google Patents

Zastosowanie bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej i kompozycja zdrowotna do jamy ustnej

Info

Publication number
PL201312B1
PL201312B1 PL345890A PL34589099A PL201312B1 PL 201312 B1 PL201312 B1 PL 201312B1 PL 345890 A PL345890 A PL 345890A PL 34589099 A PL34589099 A PL 34589099A PL 201312 B1 PL201312 B1 PL 201312B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
teeth
bacteria
lactic acid
pellicle
cncm
Prior art date
Application number
PL345890A
Other languages
English (en)
Other versions
PL345890A1 (en
Inventor
Jean-Richard Neeser
Bernhard Guggenheim
Elena-Maria Comelli
Francesca Stingele
Pier Sandro Cocconcelli
Original Assignee
Nestle Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nestle Sa filed Critical Nestle Sa
Publication of PL345890A1 publication Critical patent/PL345890A1/xx
Publication of PL201312B1 publication Critical patent/PL201312B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1236—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using Leuconostoc, Pediococcus or Streptococcus sp. other than Streptococcus Thermophilus; Artificial sour buttermilk in general
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Confectionery (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Zastosowanie bakterii mlekowych, wybranych z grupy sk ladaj acej sie ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie s a cz escia mikroflory stale wyst epuj acej w ustach, s a mniej zakwaszaj ace ni z patogeniczne szczepy, powoduj ac ze pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i s a zdolne do przywierania bezpo srednio do b lonki z ebów, to jest wyka- zuj a procent przywierania do z lo za hydroksyapatytów pokrytych slin a co najmniej 1,96, po przywiera- niu w ci agu 45 minut w temperaturze 37°C, do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do profilaktyki lub leczenia próchnicy z ebów, p lytki naz ebnej i zaka zenia oko loz ebowego. 11. Kompozycja zdrowotna do jamy ustnej, przeznaczona do profilaktyki lub leczenia próchnicy z ebów, p lytki naz ebnej i zaka zenia oko loz ebowego, zawieraj aca oprócz konwencjonalnych sk ladników bakterie kwasu mlekowego, znamienna tym, ze zawiera co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych wybrany z grupy sk ladaj acej si e ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie s a cz esci a mikroflory stale wyst epuj acej w ustach, s a mniej zakwaszaj ace ni z patogeniczne szczepy, powoduj ac, ze pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i s a zdolne do przywierania bezpo srednio do b lonki z ebów. PL PL PL PL PL PL PL

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 201312 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 345890 (13) (22) Data zgłoszenia: 26.07.1999 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
26.07.1999, PCT/EP99/05473 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
24.02.2000, WO00/09080 PCT Gazette nr 08/00 (51) Int.Cl.
A61K 35/74 (2006.01) A61P 1/02 (2006.01) A61K 8/99 (2006.01) A61Q 11/00 (2006.01) A23L 1/29 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01)
Zastosowanie bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej i kompozycja zdrowotna do jamy ustnej
(73) Uprawniony z patentu:
SOCIETE DES PRODUITS NESTLE S.A.,
(30) Pierwszeństwo: Vevey,CH
12.08.1998,EP,98202707.0 (72) Twórca(y) wynalazku:
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 14.01.2002 BUP 02/02 Jean-Richard Neeser,Savigny,CH Bernhard Guggenheim,Erlenbach,CH Elena-Maria Comelli,Lausanne,CH Francesca Stingele,Lausanne,CH
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: Pier Sandro Cocconcelli,Piacenza,IT
31.03.2009 WUP 03/09 (74) Pełnomocnik:
Agnieszka Jakobsche, PATPOL Sp. z o.o.
(57) 1. Zastosowanie bakterii mlekowych, wybranych z grupy składającej się ze szczepów CNCM
I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w ustach, są mniej zakwaszające niż patogeniczne szczepy, powodując że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów, to jest wykazują procent przywierania do złoża hydroksyapatytów pokrytych śliną co najmniej 1,96, po przywieraniu w ciągu 45 minut w temperaturze 37°C, do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
11. Kompozycja zdrowotna do jamy ustnej, przeznaczona do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego, zawierająca oprócz konwencjonalnych składników bakterie kwasu mlekowego, znamienna tym, że zawiera co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych wybrany z grupy składającej się ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w ustach, są mniej zakwaszające niż patogeniczne szczepy, powodując, że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów.
PL 201 312 B1
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zastosowania bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej, przeznaczonej do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego oraz kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej.
Jama ustna zawiera stale występującą i niewystępującą stale mikroflorę. Pierwsza obejmuje mikroorganizmy, które są zdolne do bardziej lub mniej ciągłego występowania na powierzchni jamy ustnej. Te bakterie są głównie zlokalizowane na języku, policzkowej błonie śluzowej i zębach, podczas gdy dziąsła, wargi, policzki, podniebienie i dno ust są podłożem tylko dla bardzo rzadko rozsianej mikroflory. Na języku i policzkowej błonie śluzowej naturalnie występująca mikroflora obejmuje mikroorganizmy wybrane z Streptococcus, Veillonella, Bacteroides i Haemophilus. Na zębach przeważają Streptococci, Lactobacilli i Actynomyces, ale można znaleźć różne gram dodatnie i ujemne ziarenkowce oraz pałeczkowce.
Na przykład Frandsen i in. Wykazali, że S. sanguis przeważa na policzkowej błonie śluzowej, ale jego głównym środowiskiem jest powierzchnia zębów, że S. oralis i S. gordonii rosną w dojrzałej płytce nazębnej ponad dziąsłem, że S. mitis wzrastają w początkowej fazie powstawania płytki nazębnej (Oral Microbiol. Immunol., 6, 129 - 133, 1991).
Szczepy należące do grup mutantów są zlokalizowane na zębach (S. criscetus, S. downei, S. ferus, S. macacae, S. mutans, S. rattus, S. sobrinus). Szczepy należące do grupy S. milleri przeważają w ropniach zębów (S. anginosus, S. constellatus, S. intermedius; Bentley i in. Int. J. System. Bacter. 1991, 41, 487 - 494; Wood i in., The Genera of Lactic Acid Bacteria, Blackie Academic and Professional, Chapman&Hall, W.H. wydawcy, 1995).
Wiele z tych mikroorganizmów jest nieszkodliwymi drobnoustrojami komensalnymi, ale wiele z nich zostało rozpoznanych jako czynniki etiologiczne całkiem wielu chorób (Hill, M. J. i Marsh, P. D. wyd. Human Microbial Ecology, 1990, CRC Press, Boca Raton Florida, USA).
Płytka nazębna jest błoną, która tworzy się na powierzchni zębów składającą się z komórek bakterii w matrycy zewnątrzkomórkowych polisacharydów i produktów ślinowych. Natychmiast po wyrośnięciu zęby są pokryte amorficzną warstwą śliny, nabytą błonką szkliwa (acquires enamel pellicle - AEP) o grubości około 1,3 μm, która nie może być usunięta przez normalne szczotkowanie zębów. Osadzanie się bakterii na zębach następuje natychmiast po utworzeniu AEP, a płytka staje się widoczna w ciągu 8 - 12 godzin jako wielowarstwowa struktura. Pierwsza warstwa składa się z bakterii (najwcześniejsi kolonizatorzy), które przyłączają się do zębów głównie za pomocą rozpoznawania specyficznych receptorów adhezyjnych, tworzą one podłoże dla następnych kolonizatorów, którzy przywierają jeden do drugiego za pomocą analogicznego specyficznego przyłączania lub przez zwykłe zestawianie obok siebie. Zwartość płytki jest zasadniczo gwarantowana przez trzy mechanizmy; obecność ślinowej błonki na zewnętrznej warstwie bakterii, specyficzną koagregację między różnymi gatunkami bakterii i glukanami zsyntetyzowanymi przez bakterie, i tak zostają zatrzymane w matrycy płytki (Skopek i in., Oral Microbiol. Immunol., 9, 19 - 24, 1994; Kolenbrander i in., Meth. Enzymol., 253, 385 - 397, 1995; Hiroi i in., FEMS Microbiol Lett., 96, 193 - 198, 1992; Gibbons i in., Infect. Immun., 52, 555 - 561, 1986).
Kwasy organiczne produkowane przez bakterie stale występujące we florze ust podczas procesów fermentacji bezpośrednio powodują próchnicę zębów. Te kwasy atakują twardą tkankę zęba, a w konsekwencji uwalniają jony takie jak wapniowe, fosforanowe, węglanowe, magnezowe, fluorkowe, sodowe. Gdy pH w jamie ustnej znowu wzrasta do około obojętnego, to ślina staje się nasycona wapniem i dlatego jego uwalnianie z zębów jest powstrzymywane.
Spośród resztek jedzenia występujących w jamie ustnej to węglowodany wykazują największy wpływ na wywoływanie próchnicy będąc bezpośrednio dostępnymi dla występujących w ustach procesów fermentacji bakteryjnych.
Potencjalnie wszystkie mikroorganizmy fermentujące cukier są próchnicogenne, ale głównymi etiologicznymi czynnikami próchnicy koron i korzeni zębów są mutanty streptococci, ponieważ są one wytwórcami silnych kwasów, ale lactobacilli, które są wysoko zakwaszające, również mogą brać w tym udział. U ludzi S. mutants i S. sobrinus są najbardziej próchnicogennymi szczepami, żyją na zębach, ale nie kolonizują całego uzębienia. Zmniejszanie się ich liczby od zębów trzonowych do zębów przednich zostało wykazane (Lindquist i in., Dent. Res., 69, 1160 - 1166, 1990). Ponadto u ludzi w przeciętnej płytce S. mutants i S. sobrinus preferencyjnie kolonizują najbardziej podatne na próchnicę miejsca wierzchołkowe do powierzchni styku zębów (Ahmady i in., Caries Res., 27, 135 - 139,
PL 201 312 B1
1993). Stwierdzono również większe rozpowszechnienie szczepu S. sobrinus na obszarach zębów trzonowych w porównaniu z S. mutans (Lindquist i in., Caries Res., 25, 146 - 152, 1991).
Wykazano, że S. mutans i S sobrinus atakują błonkę zębów głównie za pomocą specyficznych receptorów adhezyjnych. Gibbons i in. wykazali że S. mutans posiadają adhezynę, która wiąże się do składników ślinowych zawartych w błonce, podczas gdy wydaje się, że komórki S. sobrinus posiadają adhezynę która wiąże się do glukanu zawartego w błonce (Infect. Immun., 52, 555 - 561, 1986).
Przejściowa mikroflora zawiera egzogenne bakterie, które mogą okazjonalnie występować w jamie ustnej, ale nie stanowią flory stale występującej (nawet, gdy prowadzi się powtarzane wprowadzanie tych bakterii). Wszystkie bakterie spożywcze, a w szczególności bakterie mlekowe mogą stanowić część tej przejściowej mikroflory. Nigdy nie wykazano, że te egzogenne bakterie mlekowe są zdolne do bezpośredniego przywierania do błonki zębów. Powtarzane podawanie egzogennych bakterii mlekowych może jednak prowadzić do kolonizacji jamy ustnej na wszystkich powierzchniach, takich jak język, policzkowa błona śluzowa, dziąsła, wargi, policzki, podniebienie, dno jamy ustnej i zęby. Ta kolonizacja może być skutkiem przyłączania za pomocą specyficznego wiązania do bakterii stale występującej mikroflory (zjawisko ko-agregacji), albo za pomocą zatrzymywania w matrycy polisacharydów wytwarzanej przez stale występujące bakterie albo za pomocą przywierania do białek śliny (zwłaszcza glikoprotein).
Opisano, że Lactobacillus casei rhamnosus GG (ATCC53103) kolonizuje jamę ustną, najbardziej prawdopodobnie na nabłonku policzkowej błony śluzowej. Ten szczep również przywiera do nabłonka dróg jelitowych (patent Stanów Zjednoczonych Ameryki US-5032399, Gorbach i in., Micr. Ecol. In Health and Dis., 7, 295 - 298, 1994). W przeciwieństwie do to tego L. rhamnosus nie przywierają do zębów.
Japoński opis patentowy JP-4021633 (Cyconmedix KK) również opisuje kolonizację jamy ustnej przez Lactobacillus acidophilus, najbardziej prawdopodobnie na nabłonku policzkowej błony śluzowej. Wiadomo, że wiele Lactobacillus acidophilus przywiera do nabłonka dróg jelitowych (EP-577904; EP199535, Perdigon i in., Medicina, 46, 751 - 754, 1986; Perdigon i in., Immunology, 63, 17 - 23, 1988).
Egzogenne bakterie mogą również produkować czynniki, które powodują hamowanie wzrostu mikroflory stale występującej w jamie ustnej. Np. EP-759469 (Societe des Produits Nestle) opisuje stosowanie bakteriocyny, wytworzonej przez Micrococcus varians do hamowania rozwoju patogenów ust S. sobrinus, S. sanguis, S. mutans i A. viscosus.
Stosowano pewne strategie dla zminimalizowania rozwoju mikroflory stale występującej w ustach, mianowicie podawano komensalne bakterie stale występującej mikroflory, które nie są próchnicogenne, takie jak Streptococcus mutans (JP 59220191) lub Streptococcus salivarius (JP 05004927) i/lub Stomatococcus mucilaginosus i/lub powtarzalne podawanie egzogennych bakterii mlekowych takich jak L. casei, L. fer mentum, L. acidophilus, L. crispatus. L. gasseri. L. salivarius, L. bulgaricus i S. salivarius (Tanzer i in., Infec. and Immunity, 48, 44 - 50, 1985; WO 92/14475; EP-0524732).
Stosowanie bakteriocyn jest również jednym z badanych sposobów, jakie zaproponowano dla zmniejszenia próchnicy zębów. Te cząsteczki są atrakcyjne jako potencjalne środki przeciwpróchnicze i jako czynniki ważne dla modulowania kolonizacji jamy ustnej. Moc przeciwpróchnicza stosowania pewnych bakteriocyn pochodzi z ich silnej i szerokiej aktywności przeciwbakteryjnej przeciw mutantom streptokoków i bakteriom związanym z płytką nazębną oraz ich naturalnego występowania w bakteriach uznanych za bezpieczne dla ludzi (opis patentowy US-5368845 na rzecz Colgate, oraz publikacja patentowa WO 94/12150 na rzecz SmithKline Beecham).
Stosowanie pochodnych mleka jest również interesujące dla zdrowia jamy ustnej. W opisie patentowym US-5427769 (Nestec S.A.) opisano inną alternatywę, gdy próchnicy zębów zapobiega się przez kontaktowanie zębów z jadalną kompozycją zawierającą micelarną kazeinę w ilości wystarczającej do zahamowania kolonizacji przez Streptococcus sobrinus. Publikacja patentowa EP-748591 (Societe des Produits Nestle S.A.) również opisuje stosowanie fluorowanej micelarnej kazeiny lub jej micelarnych podjednostek do leczenia próchnicy i płytki nazębnej. Opis patentowy US-4992420 (Nestec S.A.) opisuje traktowanie jamy ustnej kappa-kazeinoglikomakropeptydem, pochodzącym z mleka w celu usuwania płytki nazębnej i próchnicy.
Nigdy nie wykazano, że bakterie mlekowe, które nie są częścią mikroflory stale występującej w jamie ustnej, są rzeczywiście zdolne do bezpośredniego przywierania do błonki zębów.
Zatem przez kolonizowanie powierzchni zębów takie bakterie mlekowe mogłyby wykazywać aktywność hamowania wzrostu stale występującej mikroflory, w tym patogenów ust.
PL 201 312 B1
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie bakterii mlekowych, wybranych z grupy składającej się ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w jamie ustnej, są mniej zakwaszające niż patogeniczne szczepy, powodując, że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów, to jest wykazują procent przywierania do złoża hydroksyapatytów pokrytych śliną co najmniej 1,96, po przywieraniu w ciągu 45 minut w temperaturze 37°C, do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
Korzystnie, bakterie mlekowe są wybrane z grupy składającej się z:
- zakwaszających bakterii mlekowych, które przywierają do błonki zębów i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające;,
- nieprzywierających bakterii mlekowych, które są słabo zakwaszające i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów;
- nieprzywierających zakwaszają cych bakterii mlekowych, które został y genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów i genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające.
Korzystnie, kompozycja jest przeznaczona do usuwania patogenów zębów lub do zapobiegania ich przyczepianiu się.
Korzystnie, bakterie mlekowe są pochodzenia mleczarskiego.
Korzystnie, bakterie mlekowe przywierają do błonki zębów za pomocą czynników adhezyjnych.
Szczególnie korzystnie, bakterie mlekowe zostały genetycznie zmodyfikowane dla zwiększenia ich przywierania do błonki zębów i/lub genetycznie zmodyfikowane tak, aby były jeszcze mniej zakwaszające.
Najkorzystniej, kompozycja jest kompozycją jadalną zawierającą ilość bakterii mlekowych skuteczną dla profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
Szczególnie korzystnie, kompozycja zawiera co najmniej 104 - 109 cfu/g bakterii mlekowych.
Ponadto, korzystnie bakterie mlekowe są połączone z mlekiem, fermentowanym mlekiem, pochodnymi mleka lub bakteriocyną.
Najkorzystniej, pochodne mleka są wybrane z dowolnych postaci kazeinoglikomakropeptydu, micelarnej kazeiny, fluorowanej micelarnej kazeiny lub podpuszczkowego mleka.
Następnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja zdrowotna do jamy ustnej, przeznaczona do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego, zawierająca oprócz konwencjonalnych składników bakterie kwasu mlekowego, zawierająca co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych wybrany z grupy składającej się ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I -1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w ustach, są mniej zakwaszające niż patogeniczne szczepy, powodując, że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów.
W kompozycji tej korzystnie bakterie mlekowe został y genetycznie zmodyfikowane dla zwię kszenia ich przywierania do błonki zębów i/lub genetycznie zmodyfikowane tak, aby były jeszcze mniej zakwaszające.
Korzystnie, bakterie mlekowe są wybrane z grupy składającej się z:
- zakwaszających bakterii mlekowych, które przywierają do błonki zębów i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające;
- nieprzywierają cych bakterii mlekowych, które są słabo zakwaszają ce i które został y genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów;
- nieprzywierających zakwaszających bakterii mlekowych, które został y genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów i genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające.
Korzystnie, bakterie mlekowe zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów za pomocą czynników adhezyjnych i powodują że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7.
Korzystnie, kompozycja według wynalazku zawiera ilość bakterii mlekowych skuteczną dla profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
Korzystnie, kompozycja według wynalazku zawiera co najmniej 104 - 109 cfu/g bakterii mlekowych.
Korzystnie, w kompozycji według wynalazku bakterie mlekowe są połączone z mlekiem, fermentowanym mlekiem, pochodnymi mleka lub bakteriocyną.
PL 201 312 B1
Szczególnie korzystnie, pochodne mleka są wybrane z dowolnych postaci kazeinoglikomakropeptydu, micelarnej kazeiny, fluorowanej micelarnej kazeiny lub podpuszczkowego mleka lub bakteriocyny.
W poniższym opisie, jama ustna oznacza jamę ustną ludzi lub zwierząt takich jak zwierzęta domowe, składającą się z ustnej śluzówki (dziąseł, warg, policzków, podniebienia i dna ust), języka i zębów (w tym zębów sztucznych).
Mikroflora stale występująca w ustach obejmuje wszystkie mikroorganizmy, które naturalnie żyją w ustach, ponieważ mogą one ciągle występować na powierzchniach ust. Mikroflora stale występująca w ustach obejmuje również bakterie, które żyją w obszarze między twardymi a miękkimi tkankami (połączenie ząb-dziąsło), nawet gdy szczelina dziąsła i kieszeń ozębna nie występują w zdrowych ustach. Ta mikroflora obejmuje mikroorganizmy wybrane z Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Micrococcus, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus, Corynebacterium, Actinomyces, Arachnia, Rothia, Alcaligenes, Eubacterium, Propionibacterium, Bifidobacterium, Bacillus, Clostridium, Neisseria/Branhamella, Veillonella, Enterobacteriaceae, Campylobacter, Eikenella, Actinobacillus, Capnocytophga, Haemophilus, Simonsiella, Bacteroides, Fusobacterium, Porphyromonas, Prevotella, Leptotrichia, Wolinella/Selenomonas, Mycoplasma, Candida, Spirochaetes, Protozoa.
Przejściowa mikroflora obejmuje egzogenne bakterie, które mogą okazjonalnie występować w ustach, ale które nie wystę pują cią gle. Ta przejś ciowa mikroflora moż e obejmować wszystkie mikroorganizmy występujące w żywności, takie jak bifidobakterie (B. infantis, B. adolescentis, B. breve i B. longum), laktokoki (Lactococcus lactis subsp. lactis, lactococcus lactis subsp. cremoris, oraz Lactococcus lactis subsp. lactic biovar diacetylactis); streptokoki (Streptococcus thermophilus, S. lactis, S. lactis cremoris i S. lactis diacetylactis); laktobacilli (Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Lactobacillus Helvetius, Lactobacillus farciminis, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus casei subsp.
casei, Lactobacillus delbruckii subsp. lactis, Lactobacillus sake, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus fermentum i grupa acidofilna obejmująca L. johnsonii, patrz Fujisawa i in., Int. J. Syst. Bact., 42, 487
- 491, 1992); pediokoki (Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidilactici i Pediococcus halophilus); enterokoki, stafilokoki (Staphylococcus xylosus i Staphylococcus carnosus); mikrokoki (Mikrococcus varians); drożdże z rodzajów Debaromyces, Candida, Pichia, Torulopsis i Saccharomyces, oraz pleśnie z rodzajów Aspergillus, Rhizopus, Mucor i Penicillium.
Bakterie mlekowe stosowane w wynalazku przywierają do błonki zębów za pomocą specyficznych lub niespecyficznych oddziaływań i/lub czynników adhezyjnych. Specyficznymi czynnikami adhezyjnymi są białka lub polisacharydy.
Stosowane bakterie mlekowe są wybrane ze szczepów CNCM I -1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM 1-1987 i LMP P-18997.
Te szczepy zostały wyselekcjonowane spośród szczepów bakterii mlekowych ze względu na ich zdolność do przywierania do błonki zębów i optymalny wzrost w temperaturze około 37°C to jest temperaturze jamy ustnej. Ponadto są one zdolne do fermentacji glukozy i sacharozy i nie syntezują glukanów, które są czynnikami patogeniczności wywołujących próchnicę szczepów.
Jak wyżej podano, korzystnie stosuje się genetycznie modyfikowane bakterie mlekowe.
Modyfikację bakterii mlekowych można uzyskać na przykład przez insercję genów X17390, X14490 lub X53657 (oznaczenia według GenBanku). Te geny są odpowiedzialne w S. mutans za ekspresję antygenu I/II który pośredniczy w przywieraniu do glikoprotein ślinowych.
Można również genetycznie zmodyfikować bakterie mlekowe tak, aby były słabo zakwaszające. Dla bakterii mlekowych, które już są słabo zakwaszające ta modyfikacja ma na celu zwiększenie tego efektu przez zmniejszenie wytwarzania przez nie kwasu mlekowego.
Modyfikacje można prowadzić wieloma drogami, a korzystnie zgodnie z jednym z protokołów opisanych w następujących dokumentach: Boumerdassi i in., Appl. Environ. Microbiol., 63, 2293
- 2299, 1997; Platteeuw i/lub in., Appl. Environ. Microbiol., 61, 3967 - 3971, 1995; Ito i in., Biosci. Biotechnol. Biochem., 58, 1569 - 1573, 1994.
Jak wyżej podano, co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych genetycznie zmodyfikowanych lub nie, jest stosowany w „ilości skutecznej” do wytwarzania kompozycji do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego u ludzi lub zwierząt takich jak zwierzęta domowe. Ta ilość korzystnie wynosi między 104 do 109 cfu/g.
Można również stosować, jak wyżej wspomniano, co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych w połączeniu z pochodnymi mleka, tak jak mlekiem lub fermentowanym mlekiem albo pochodnymi
PL 201 312 B1 mleka wybranymi na przykład z postaci kazeinoglikomakropeptydów, micelarnej kazeiny, fluorowanej micelarnej kazeiny, podpuszczkowego mleka lub bakteriocyn.
Biochemiczna charakterystyka wybranych szczepów
Wzór fermentacji: 49 prostych cukrów testowano w teście paskowym api 50 CH bioMerieux (bioMerieux SĄ, 69280 Marcyl'Etoile, Francja), a wyniki przedstawiono w poniższej Tabeli 1.
Krzywe zakwaszania: krzywe zakwaszania określano w temperaturze 37°C w następujących warunkach;
S. sobrinus OMZ 176: FUM sacharoza 1% i FUM glukoza 1%
S. thermophilus CNCM 1-1985: sacharoza Belliker 1% i glukoza Belliker 1%
Inokulowanie zawsze wynosiło 5%, pH odczytywano co 20 minut.
S. thermophilus CNC I-1985, podczas fermentacji sacharozy, obniża pH do 4,5, podczas gdy S. sobrinus OMZ 176 do 4.
T a b e l a 1
Fermentacja cukru przez szczepy L. lactis CNCM I-1987, L. lactis CNCM I-1986,
S. thermophilus CNCM I-1984, S. thermophilus CNCM I-1985 i S. thermophilus LMG P-18997
Cukier L. lactis L. lactis S. th. S. th. S. th.
CNCM I-1987 CNCM I-1986 CNCM I-1984 CNCM I-1985 LMG P-18997
Adonitol +++
Aesculin ++ ++++
Amigdalin ++++
D-arabinoza L-arabinoza D-arabitol L-arabitol +++
Arbutin +++ +++
Cellobioza Dulcitol +++ ++++
Erytriol D-fruktoza + ++++
D-fukoza L-fukoza Galaktoza ++ ++++
β-gentiobioza Glukonian +++
2-keto-glukonian 5-keto-glukonian GlcNAc + ++++
D-glukoza Glicerol + ++++ + ++ ++
Glikogen Inositol
Inulina Laktoza + ++++ +++ ++++ ++++
D-lyksoza Maltoza ++
Mannitol +++ ++
D-mannoza Melezitoza Melibioza + ++++
α-metylo-D-glukozyd α-metylo-D-mannozyd D-rafinoza Rhamnoza Ryboza ++ ++
Salicyna Sorbitol L-sorboza Skrobia Sacharoza +++ +++ +++ ++++ +++
D-tagatoza Trehaloza ++
PL 201 312 B1
D-turanoza Ksylitol D-ksyloza L-ksyloza β-metyloksylozyd ++ +++
+, ++, +++, ++++ pokazują, że fermentacja rozpoczęła się po 3, 6, 24 lub 48 godzinach.
Kompozycje według wynalazku są szczególnie interesujące dla profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów i zakażenia okołozębowego. Zawarte w tej kompozycji szczepy bakterii mlekowych mogą być wprowadzane na przykład do żywności, karmy dla zwierząt domowych, kosmetycznych lub farmaceutycznych kompozycji.
Zgodnie z tym, takie kompozycje to korzystnie na przykład pasta do czyszczenia zębów, płukanka do ust, guma, spray, napój, cukierek, kompozycja przeznaczona dla dzieci, lody śmietankowe, mrożone desery, słodkie dressingi do sałatek, preparaty mleka, ser, ser biały, jogurt, zakwaszane mleko, śmietanka do kawy lub bita śmietana.
W tych kompozycjach szczepy bakterii mlekowych mogą być wprowadzane same lub w po łączeniu z pochodnymi mleka, na przykład w celu otrzymania preparatów synergicznych. W takim przypadku, kompozycje zdrowotne do ust zawierają:
- wyż ej opisane bakterie mlekowe, które nie są częścią mikroflory stale wystę pującej w ustach, które są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów;
- dowolne postaci mlecznych glikopeptydów, podpuszczkowego mleka lub bakteriocyny, jak kazeinoglikomakropeptydy (CGMP), fluorowana lub nie micelarna kazeina (którą można otrzymać jak opisano w EP-0604802 i EP-0748591) lub podpuszczkowe mleko. Kazeinoglikomakropeptydy dodawane są w minimalnej ilości około 0,1%. Wykazano również, że kazeinoglikomakropeptydy nie zapobiegają przywieraniu do błonki zębów wymienionych bakterii mlekowych (Fig. 2 i 3).
Można również wytwarzać synergiczne kompozycje przez dodawanie co najmniej jednej bakteriocyny, która jest aktywna przeciw ustnym bakteriom gram-dodatnim. W tym przypadku ustne kompozycje higieniczne mogą zawierać 0,00001 do 50%, a korzystnie od 0,00001 do 15% oczyszczonej bakteriocyny, liczone na wagę kompozycji. Bakteriocyną korzystnie jest variacyna (EP-0759469).
W celu ochrony kompozycji przed degradacją można również dodawać rozpuszczalne w oleju przeciwutleniacze. Odpowiednie przeciwutleniacze obejmują „tokoferole”, butylohydroksyanizol (BHA), butylohydroksytoluen (BHT) i palmitynian askorbylu. Rozpuszczalne w oleju przeciwutleniacze korzystnie występują w ilościach od 0,005% do 0,5%, korzystnie 0,005% do 0,01% wagi kompozycji.
Środki ścierne odpowiednie do stosowania w kompozycjach dentystycznych według niniejszego wynalazku obejmują węglan wapnia, glinokrzemian wapnia, tlenek glinowy, wodziany tlenku glinu, ortofosforan cynku, cząstki plastikowe i krzemionkę, z których krzemionka jest korzystnym środkiem ściernym.
Kompozycje według wynalazku mają pH, które jest dopuszczalne w ustach i przy którym aktywność wymienionych szczepów bakterii mlekowych nie jest zmniejszana. Wartość pH może mieścić się w zakresie 3,0 - 9,5, korzystnie w zakresie 3,5 do 6,5.
Te kompozycje mogą być wytwarzane konwencjonalnymi metodami obejmującymi wymieszanie składników w odpowiednich względnych ilościach, a wreszcie, i jeżeli jest to konieczne, dostosowanie pH do wymaganej wartości.
Opisany w przykładach sposób skriningowania bakterii mlekowych, zdolnych do przywierania do zębów może zawierać etapy:
(1) wytwarzania monoklonalnych przeciwciał rozpoznających specyficznie powierzchnię białek szczepu bakterii mlekowych zdolnych do przywierania do zębów i (2) skriningowania dowolnego szczepu bakterii mlekowych za pomocą monoklonalnego przeciwciała szczepu zdolnego do przywierania do zębów.
Monoklonalne przeciwciała są stosowane jako narzędzie do wykrywania wymienionych szczepów bakterii wśród innych szczepów rosnących obok.
Niniejszy wynalazek ilustrują poniższe przykłady, nieograniczając jego zakresu, który jest oczywisty dla fachowców w tej dziedzinie w świetle niniejszego opisu i załączonych rysunków. Dopuszczalne są modyfikacje mieszczące się w zakresie zastrzeżeń patentowych.
W opisie zacytowano róż ne publikacje, których ujawnienia są włączone jako odnoś niki literaturowe do niniejszego opisu w zakresie niezbędnym do zrozumienia wynalazku. Manipulacje DNA, klonowanie i transformacja komórek bakterii są, o ile nie podano inaczej, prowadzone zgodnie z publikacją
PL 201 312 B1
Sambrook i in.,(Sambrook i in., Molecular Cloning, A Laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989). Poniższe przykłady mają na celu podanie krótkiego opisu stosowanych plazmidów, szczepów i różnych mediów, jak również sposobu wytwarzania monoklonalnego przeciwciała.
Szczepy S. termophilus S118 (NCC 1529), S123 (NCC 1561), L. lactis subsp. lactis 29 (NCC 2211), L. lactis subsp. lactis biovar dioacetylactis 69 (NCC 2225) zostały zdeponowane zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w Narodowej Kolekcji Kultur Mikroorganizmów (odpowiednio CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986 i CNCM I-1987), INSTITUT PASTEUR, 25 Rue du docteur Roux, 75724, Paryż, Francja dnia 3 marca 1998. Szczep S. thermophilus BF11116 (CNBL1177) został zdeponowany zgodnie z Traktatem Budapeszteńskim w Belgijskiej Koordynowanej Kolekcji Mikroorganizmów LMP P-18997, K.L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Gean, Belgium, dnia 5 lipca 1999. Wszystkie restrykcje dotyczące dostępności tych depozytów zostaną usunięte po pierwszej publikacji niniejszego zgłoszenia lub innych publikacji, które zastrzegają pierwszeństwo z tego zgłoszenia.
Opis rysunków
Fig. 1a, 1b i 1c przedstawiają, odpowiednio, krzywe nasycenia przyłączenia dla szczepów S sobrinus OMZ 176, L. lactis NCC2211 i S. thermophilus NCC1561.
Fig. 2 przedstawia krzywe otrzymane dla trzech szczepów przez zapisywanie liczby przyłączonych komórek w stosunku do zwiększającej się ilości CGMP.
Fig. 3 przedstawia krzywe otrzymane dla trzech szczepów przez zapisywanie liczby przyłączonych komórek w stosunki do zwiększającej się ilości As-CGMP.
P r z y k ł a d 1; Szczepy i warunki hodowli
Ponad 100 szczepów (należących do zbioru kultur Nestle) skriningowano dla określenia ich zdolności do atakowania złoża hydroksyapatytów pokrytego śliną, a w szczególności badano poniższe 23 szczepy: S. thermophilus YS4 (NCC 2284), S. thermophilus Sfi6 (NCC 1971), S. thermophilus Sfi13 (NCC 2008), S. thermophilus Sfi21 (NCC 2038), S. thermophilus Sfi39 (NCC 2130), S. thermophilus Sfi42 (NCC 2145), S. thermophilus Sfi47 (NCC 2172), S. thermophilus S118 (NCC 1529), S. thermophilus S119 (NCC 1536), S. thermophilus S122 (NCC 1554), S. thermophilus S123 (NCC 1561), S. thermophilus S126 (NCC 1587), L. lactis subsp. cremoris 15 (NCC 92), L. lactis subsp. cremoris 25 (NCC 1932), L. lactis subsp. cremoris 136 (NCC 2419), L. lactis subsp. cliacetylactis 8 (NCC 1970), L. lactis subsp. diacetylactis 28 (NCC 2057), L. lactis subsp. diacetylactis 69 (NCC 2225), L. lactis subsp. diacetylactis 80 (NCC 2272), L. lactis subsp. lactis 29 (NCC 2211), L. lactis subsp. lactis 50 (NCC 2224), L. lactis subsp. lactis 54 (NCC 2228), S. macedonicus 216 (NCC 2484).
ustnych szczepów, S. sobrinus OMZ 176, S. oralis OMZ 607, A. naeslundii OMZ 745, V. dispar OMZ 493 i F. nucleatum OMZ 596 otrzymano z Institut far Orale Mikrobiologie und Allgemeine Immunologie, University of ZOrich, i były one hodowane w środowisku FUM w anaerobowych warunkach (GasPack-System, BBL) w temperaturze 37°C.
Wszystkie szczepy przechowywano w glicerolu w temperaturze -20°C i wstępnie hodowano przez 14 godzin przed zastosowaniem w specyficznej dla nich optymalnej temperaturze; S. sobrinus OMZ 176 wzrastały w środowisku FUM (Gmϋr i in.), laktokoki i streptokoki w M17 (Difco) z wyjątkiem
S. thermophilus NCC1529, S119, S122, NCC1561 i S126 które wzrastały w Belliker (przygotowanym przez rozpuszczenie wody w 1 litrze 20 g tryptonu, 5 g ekstraktu drożdżowego, 2,5 g żelatyny, 5 g dekstrozy, 5 g sacharozy, 5 g laktozy, 4 g NaCl, 0,5 g kwasu askorbinowego, 10 g ekstraktu wołowego).
Licząc na płytkę: S. sorbinus OMZ 176 hodowano w agarze Mitis-Salivarius (Difco), S. thermophilus NCC1529, S119, S122, NCC1561, BF11116 i S126 w agarze Belliker (przygotowanym przez dodanie do ciekłego Belliker 15 g agaru Bacto, Difco), a pozostałe szczepy bakterii mlekowych w agarze M17 (Oxoid).
P r z y k ł a d 2; Wytwarzanie monoklonalnego przeciwciała
Monoklonalne przeciwciało może być stosowane jako narzędzie do wykrywania L. lactis subsp. lactis NC2211 między 5 ustnymi szczepami wzrastającymi razem na krążkach S-HA i tworzącymi biofilm, który imituje płytkę nazębną. Monoklonalne przeciwciało testowano na tych szczepach dla zweryfikowania czy nie wystąpiły reakcje krzyżowania.
Na koniec monoklonalne przeciwciało jest wytwarzane jak opisano w publikacji Granato i in., „A mouse monoclonal IgE antibody antibovine milk lactoglobulin allows studies of allergy in gastrointestinal tract.”, Glin. Exp. Immunol., 63, 703 - 710, 1986.
PL 201 312 B1
P r z y k ł a d 3; Wybór przywierających bakterii mlekowych
Przyłączanie do złoża hydroksyapatytów (S-HA) pokrytych śliną
Dla wybrania szczepów mleczarskich bakterii mlekowych, które są zdolne do przyłączania do złoża hydroksyapatytów (S-HA) pokrytych śliną stosowano procedurę wcześniej opisaną przez Neeser'a i in. (1994) z niewielkimi modyfikacjami: złoża przemywano 150 μl objętościami, a wodorotlenek Hyaminy zastąpiono wodorotlenkiem benzotioniowym (Sigma).
Wszystkie szczepy wzrastały do końca fazy log w FUM z wyjątkiem S. thermophilus NCC1529, S119, S122, NCC1561 i S126 które hodowano w Belliker. S. sobrlnus OMZ 176, L. lactis subsp. lactis NCC2211, 50 i 54, S. thermophilus NCC1529, S119, S122, NCC1561 i S126 wzrastały w temperaturze 37°C, a pozostałe laktokoki w temperaturze 30°C a pozostałe streptokoki w temperaturze 42°C.
mg złoża hydroksyapatytów (BDH Chemicals Ltd, Poole, Anglia) pokryto 70 μl sklarowanej śliny uzyskanej od ochotników w laboratorium i przygotowanej jak wcześniej objaśniono (Neeser i in., 1994). Pokryte śliną złoża trzymano przez noc w temperaturze 4°C, następnie przemyto (najpierw destylowaną wodą a potem buforem HEPES), a na koniec inokulowano 100 μl metabolicznie znaczonej zawiesiny bakterii (bakterie wzrastające w ich środowisku, uzupełniono 10 μθί/ml kwasem octo14 wego 14C). Przywieranie następowało podczas 45 minut w temperaturze 37°C, następnie niezwiązane bakterie odmywano a komórki bezpośrednio przyłączone liczono za pomocą scyntylacyjnego licznika LKB (typ 1219 Rackbeta).
Procentowe przywieranie jest wyrażane jako ilość radioaktywnych komórek przyłączonych do złoża do całkowitej ilości radioaktywnych komórek dodanych do każdego dołka. Wszystkie pomiary prowadzono w trzech powtórzeniach. Tabela 2 podaje procenty przywierania do złoża hydroksyapatytów pokrytych śliną otrzymane dla kilkunastu badanych szczepów i dla S. sobrinus OMZ176 (szczep do określenia poziomu odniesienia).
T a b e l a 2
Procenty przywierania do złoża hydroksyapatytów pokrytych śliną otrzymane dla kilkunastu badanych szczepów
Szczep % przywierania (+/-SD)
S. sobrinus OMZ 176 2,23 +/- 0,49
S. thermophilus Sfi42 (NCC 2145) 0,08 +/- 0, 02
S. thermophilus Sfi47 (NCC 2172) 0,14 +/- 0,04
S. thermophilus NCC1529 2,89 +/- 0,260
S. thermophilus S119 (NCC 1536) 0,15 +/- 0,04
S. thermophilus S122 (NCC 1554) 0,93 +/- 0,17
S. thermophilus NCC1561 2,19 +/- 0,50
S. thermophilus S126 (NCC 1587) 1,19 +/- 0,56
S. lactis subsp. diacetylactis S28 (NCC 2057) 1,59 +/- 0,17
S. lactis subsp. diacetylactis NCC2225 1,96 +/- 0,40
S. lactis subsp. diacetylactis 80(NCC 2272) 1,20 +/- 0,35
S. lactis subsp. lactis NCC2211 2,85 +/- 0,85
Cztery szczepy S. thermophilus NCC1529 (CNCM I-1984), S. thermophilus NCC1561 (CNCM I-1985), L. lactis subsp. lactis NCC2211 (CNCM I-1986) (oznaczany dalej jako L. lactis NCC2211) i L. lactis subsp. diacetylactis NCC2225 (CNCM I-1987) wykazały wartości zbliżone do wartości dla S. sobrinus OMZ 176.
L. lactis NCC2211 i S. thermophilus NCC1561 zostały wybrane jako bardziej obiecujące szczepy ponieważ wzrastają bardzo dobrze w temperaturze 37°C, to jest w temperaturze ust, podczas gdy L. diacetylactis NCC2225 ma optymalną temperaturę wzrostu 30°. W szczególności L. lactis NCC2211 nie może rosnąć na sacharozie, ale może fermentować w szerokim zakresie cukrów, ponadto inne szczepy występujące w ustach mogą dostarczać glukozy przez ich inwertazę.
Krzywe nasycenia przywierania
Określano krzywe przyłączenia CFU w stosunku do CF inokulowanego na dołek dla sprawdzenia czy można uzyskać nasycenie złoża. 50% nasycenie wyprowadzono bezpośrednio z punktu przyłączania na otrzymanych krzywych. Określono krzywe nasycenia przywierania dla S. sobrinus OMZ 176, L. lactis NCC2211 i S. thermophilus NCC1561. Przedstawiono je na Figurze 1.
Dla trzech szczepów miano CFU inokulowane do dołka dla otrzymania 50% nasycenia złoża i odpowiadające mu miano CFU były bezpośrednio odczytywane z punku przyłączenia krzywych, wyniki podano w Tabeli 3.
PL 201 312 B1
T a b e l a 3
Miano CFU inokulowanego na dołek dla otrzymania 50% nasycenia złoża
cfu/dołek związane cfu % adhezji
S. sobrinus OMZ 176 4,00E+07 4,00E+06 10%
L. lactis NCC2211 1,00E+07 9,00E+05 9%
S. thermophilus NCC1561 3,00E+07 2,00E+06 7%
P r z y k ł a d 4; Wpływ kazeinoglikomakropeptydów
Badano wpływ CGMP na przywieranie L. lactis NCC2211 i S. thermophilus NCC1561 dla sprawdzenia możliwości stosowania ich dla wytworzenia przewagi jednego z tych dwóch szczepów nad szczepem patogenicznym (konkretnie S. sorbrinus OMZ 176). Kazeinoglikopeptyd (CGMP) i jego pochodną z której usunięto resztę kwasu sialowego (As-CGMP) otrzymano z Nestec S.A., Lozanna (sposób wytwarzania patrz Neeser i in., 1994).
Badano wpływ typu dawka - odpowiedź na przywieranie komórek do złoża S-HA przez inokulowanie na dołek 100 μl zawiesiny bakteryjnej (CFU/ml odpowiadające wcześniej obliczonemu 50% nasyceniu złoża), która to zawiesina zawierała CGMP lub As-CGMP w różnych stężeniach, a następnie prowadzono ocenę przywierania jak zazwyczaj. Testowano stężenia w zakresie 0,05 - 3 mg/ml. Nie prowadzono wcześniejszego inkubowania bakterii w obecności CGMP lub As-CGMP.
Figura 2 pokazuje krzywe otrzymane dla trzech szczepów przez odczytywanie ilości związanych komórek w stosunku do zwiększającej się ilości CGMP, ilość inokulowanych komórek odpowiadającą 50% nasycenia złoża została wcześniej określona dla każdego szczepu. Obserwowane silne zahamowanie w przypadku S. sobrinus OMZ 176 potwierdza wcześniejsze wyniki otrzymane przez Neeser'a i in. (1994) oraz Schijpbach'a i in. (J. Dent. Res., 75, 1779 - 1788, 1996).
Jak wyraźnie widać z Fig. 2, 0,25 mg/ml daje 50% zahamowania przywierania S. sobrinus 176, podczas gdy więcej niż 2 mg/ml było konieczne dla osiągnięcia tego samego wyniku przez S. thermophilus NCC1561. CGMP nieznacznie zwiększa przywieranie L. lactis NCC2211.
Tak jak w przypadku CGMP, z której usunięto resztę kwasu sialowego pochodna hamuje przywieranie S. sobrinus OMZ 176; tylko 0,05 mg/ml wystarcza dla otrzymania 50% zmniejszenia procentu przywierania. As-CGMP nie ma wpływu na przywieranie L. lactis NCC2211, nieznacznie odżywia jeden z S. thermophilus NCC1561 (Fig. 3).
P r z y k ł a d 5; Pasta do zębów
Przygotowano pastę do zębów przez dodanie 105 cfu/ml co najmniej jednego szczepu bakterii mlekowych CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 lub LMG P-18997 w liofilizowanej postaci, do następującej mieszaniny zawierającej:
chlorek cetylopirydyniowy 1,65%
sorbitol (70% roztwór) 33,0%
gliceryna 25,0%
karboksymetyloceluloza sodowa 2,0%
fluorek sodu 0,25%
krzemionka (RP 93) 26,3%
krzemionka zagęszczająca (Sident 22) 8,1%
sacharyna sodowa 0,5%
poloksamer (Pluropnic F108) 3,2%
Ta pasta do zębów jest przeznaczona do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki na-
zębnej i zakażenia okołozębowego.
P r z y k ł a d 6; Lody śmietankowe
Przygotowano śmietankę zawierającą 10,8% tłuszczu mlecznego, 13,5% stałych składników mleka (nietłuszczowych), 0,3% Emulstab ® SE30 w 0,3% piance Emulstab ® (Grindsted, DK), którą następnie pasteryzowano w temperaturze 105°C przez 20 sekund, homogenizowano w temperaturze 75°C przy ciśnieniu 300 barów, ochłodzono do 38°C i inokulowano prekulturami w medium MRS, pobranymi w ekspotencjalnej fazie wzrostu, w stężeniu 107 - 108 cfu/ml co najmniej jednego szczepu bakterii mlekowych CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 lub LMG P-18997. Śmietankę następnie fermentowano przez 10 godzin w temperaturze 38°C do pH około 4,5. Pod koniec fermentacji dodano sacharozę i syrop glukozowy. Skład kompozycji przedstawiono w poniższej Tabeli 4.
PL 201 312 B1
Mieszankę następnie ubijano, ochłodzono do 4°C, przechowywano w temperaturze 4°C, ochłodzono do stopnia rozszerzenia objętościowego 95°C.
T a b e l a 4
Składniki Kompozycja (kg) Tłuszcze (%) Stałe składniki nietłuszczowe (%) Sacharoza (%) Zawartość stałych składników (%)
śmietanka (35%) 30,83 10,79 1,54 12,33
proszek odtłuszczonego mleka 12,45 11,95 11,95
Emulstab ® SE30 0,41 0,37
Emulstab ® pianka 0,41 0,36
woda 55,91
całość: baza śmietanki 100,00 10,79 13,49 - 25,01
baza śmietanki 74,14 8,00 10,00 - 18,54
sacharoza 22,06 15,00 15,00
syrop glukozowy 3,80 3,00
fermentowane lody śmietankowe 100,00 8,00 10,00 15,00 36,54
P r z y k ł a d 7; Jogurt l kultury w środowisku MRS sterylizowano przez 15 minut w temperaturze 121°C a następnie inokulowano 5% objętościowymi aktywnej kultury co najmniej jednego szczepu S. Thermophilus CNCM I-1984, CNCM I-1985 lub LMG P-18997 zawierającą w przybliżeniu 109 cfu/ml. Po inkubowaniu przez 8 godzin w temperaturze 41°C otrzymano starter zawierający 4,5x108 cfu/ml.
l odtworzonego odtłuszczonego mleka o zawartości suchej masy 10%, do którego dodano 0,1% ekstraktu drożdżowego, sterylizowano przez 15 minut w temperaturze 121°C i inokulowano 2% aktywnej kultury handlowego zagęszcza Streptococus thermophilus zawierającą w przybliżeniu 109 komórek/ml. Po inkubowaniu przez 4 godziny w temperaturze 41o otrzymano starter zawierający 4,5x108 komórek/ml.
Jeden zbiornik pełnego mleka zawierającego 3,7% tłuszczu wzmocnionego 2,5% proszku odtłuszczonego mleka, a następnie pasteryzowano przez 30 minut w temperaturze 90°C a potem inokulowano 2% objętościowymi startera z co najmniej jednym szczepem CNCM I-1984, CNCM I-1985 lub LMG P-18997 i 3% objętościowymi startera zagęszczającego Streptococcus thermophilus. Inokulowane mleko mieszano, wylano do naczyń i inkubowano przez 4 godziny w temperaturze 41°C.
Otrzymany jogurt miał dobrą sztywną i gładką teksturę i jest przewidziany dla utrzymywania zdrowia jamy ustnej.
P r z y k ł a d 8; Guma do żucia
Można przygotować gumę do żucia zapobiegającą lub leczącą próchnicę zębów, płytkę nazębną lub zakażenie okołozębowe, przed dodanie aktywnej kultury co najmniej jednego szczepu S. Thermophilus CNCM I-1984, CNCM I-1985 lub LMG P-18997 tak że zawiera w przybliżeniu 104 do 109 cfu/g, do następujących typowych składników:
ksylitol 67,5% gumowe podłoże 20% węglan wapnia 5% gliceryna 3%
Pluronic F127 2% guma celulozowa 1% związki balastowe 0,5% związki smakowo-zapachowe 1%
P r z y k ł a d 9; Kompozycja do karmienia zwierząt domowych
Kompozycję do karmienia zwierząt domowych wytwarza się przez przygotowanie mieszaniny wyjściowej składającej się z kukurydzy, glutenu pszennego, mięsa drobiowego i mięsa ryb, soli, witamin i minerałów. Wyjściową mieszaninę wprowadza się do wstępnego mieszalnika flotacyjnego i nawilża.
PL 201 312 B1
Nawilżony wsad opuszczający wstępny mieszalnik flotacyjny następnie wprowadza się do wytłaczarki z gotowaniem i żelatynizuje się. Zżelantynizowaną matrycę opuszczającą wytłaczarkę przepuszcza się przez dyszę i wytłacza. Wytłoczony produkt tnie się na kawałki odpowiednie do karmienia psów, suszy w temperaturze około 100°C przez około 20 minut i chłodzi do utworzenia peletek, które mają aktywność wody około 0,6.
Peletki pokrywa się, przez rozpylanie, 3 mieszankami powlekającym. Każda mieszanka powlekająca zawiera aktywną kulturę co najmniej jednego szczepu S. Thermophilus CNCM I-1984, CNCM I-1985 lub LMG P-18997, ale jedna mieszanka powlekająca zawiera utwardzany tłuszcz soi jako podłoże powłokowe, jedna mieszanka powlekająca zawiera wodę jako podłoże powłokowe a jedna mieszanka powlekająca zawiera ekstrahowane białko jako podłoże powłokowe. Peletki zawierają w przybliżeniu 104 do 109 cfu/g wymienionego szczepu.

Claims (18)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Zastosowanie bakterii mlekowych, wybranych z grupy składającej się ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w ustach, są mniej zakwaszające niż patogeniczne szczepy, powodując że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów, to jest wykazują procent przywierania do złoża hydroksyapatytów pokrytych śliną co najmniej 1,96, po przywieraniu w ciągu 45 minut w temperaturze 37°C, do wytwarzania kompozycji przeznaczonej do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
  2. 2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że bakterie mlekowe są wybrane z grupy składającej się z:
    - zakwaszających bakterii mlekowych, które przywierają do błonki zębów i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające;
    - nieprzywierających bakterii mlekowych, które są słabo zakwaszające i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów;
    - nieprzywierających zakwaszających bakterii mlekowych, które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów i genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające.
  3. 3. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że kompozycja jest przeznaczona do usuwania patogenów zębów lub do zapobiegania ich przyczepianiu się.
  4. 4. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że bakterie mlekowe są pochodzenia mleczarskiego.
  5. 5. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że bakterie mlekowe przywierają do błonki zębów za pomocą czynników adhezyjnych.
  6. 6. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że bakterie mlekowe zostały genetycznie zmodyfikowane dla zwiększenia ich przywierania do błonki zębów i/lub genetycznie zmodyfikowane tak, aby były jeszcze mniej zakwaszające.
  7. 7. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że kompozycja jest kompozycją jadalną zawierającą ilość bakterii mlekowych skuteczną dla profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
  8. 8. Zastosowanie według zastrz. 7, znamienne tym, kompozycja zawiera co najmniej 104 - 109 cfu/g bakterii mlekowych.
  9. 9. Zastosowanie według zastrz. 1 albo 2, znamienne tym, że bakterie mlekowe są połączone z mlekiem, fermentowanym mlekiem, pochodnymi mleka lub bakteriocyną.
  10. 10. Zastosowanie według zastrz. 9, znamienne tym, że pochodne mleka są wybrane z dowolnych postaci kazeinoglikomakropeptydu, micelarnej kazeiny, fluorowanej micelarnej kazeiny lub podpuszczkowego mleka.
  11. 11. Kompozycja zdrowotna do jamy ustnej, przeznaczona do profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego, zawierająca oprócz konwencjonalnych składników bakterie kwasu mlekowego, znamienna tym, że zawiera co najmniej jeden szczep bakterii mlekowych wybrany z grupy składającej się ze szczepów CNCM I-1984, CNCM I-1985, CNCM I-1986, CNCM I-1987 i LMG P-18997, które nie są częścią mikroflory stale występującej w ustach, są mniej zakwaszające niż
    PL 201 312 B1 patogeniczne szczepy, powodując, że pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7 i są zdolne do przywierania bezpośrednio do błonki zębów.
  12. 12. Kompozycja według zastrz.11, znamienna tym, że bakterie mlekowe zostały genetycznie zmodyfikowane dla zwiększenia ich przywierania do błonki zębów i/lub genetycznie zmodyfikowane tak, aby były jeszcze mniej zakwaszające.
  13. 13. Kompozycja według zastrz.11 albo 12, znamienna tym, że bakterie mlekowe są wybrane z grupy skł adają cej się z:
    - zakwaszających bakterii mlekowych, które przywierają do błonki zębów i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające;
    - nieprzywierających bakterii mlekowych, które są słabo zakwaszające i które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów;
    - nieprzywierających zakwaszających bakterii mlekowych, które zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów i genetycznie zmodyfikowane tak, że są słabo zakwaszające.
  14. 14. Kompozycja według zastrz. 11 albo 12, znamienna tym, że bakterie mlekowe zostały genetycznie zmodyfikowane tak, że przywierają do błonki zębów za pomocą czynników adhezyjnych i powodują ż e pH w jamie ustnej wynosi 5,5 - 7.
  15. 15. Kompozycja według zastrz. 11 albo 12, znamienna tym, że zawiera ilość bakterii mlekowych skuteczną dla profilaktyki lub leczenia próchnicy zębów, płytki nazębnej i zakażenia okołozębowego.
  16. 16. Kompozycja według zastrz.15, znamienna tym, że zawiera co najmniej 104 - 109 cfu/g bakterii mlekowych.
  17. 17. Kompozycja według zastrz. 11 albo 12, znamienna tym, że bakterie mlekowe są połączone z mlekiem, fermentowanym mlekiem, pochodnymi mleka lub bakteriocyną .
  18. 18. Kompozycja według zastrz.17, znamienna tym, że pochodne mleka są wybrane z dowolnych postaci kazeinoglikomakropeptydu, micelarnej kazeiny, fluorowanej micelarnej kazeiny lub podpuszczkowego mleka lub bakteriocyny.
PL345890A 1998-08-12 2001-01-11 Zastosowanie bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej i kompozycja zdrowotna do jamy ustnej PL201312B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP98202707 1998-08-12
PCT/EP1999/005473 WO2000009080A1 (en) 1998-08-12 1999-07-26 Incorporation of exogenous lactic bacteria into the oral microflora

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL345890A1 PL345890A1 (en) 2002-01-14
PL201312B1 true PL201312B1 (pl) 2009-03-31

Family

ID=8234030

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL345890A PL201312B1 (pl) 1998-08-12 2001-01-11 Zastosowanie bakterii mlekowych do wytwarzania kompozycji zdrowotnej do jamy ustnej i kompozycja zdrowotna do jamy ustnej

Country Status (24)

Country Link
US (3) US6942849B2 (pl)
EP (1) EP1104281B1 (pl)
JP (1) JP4564169B2 (pl)
KR (2) KR100727338B1 (pl)
CN (1) CN1240372C (pl)
AR (1) AR020169A1 (pl)
AT (1) ATE501640T1 (pl)
AU (1) AU773799B2 (pl)
BG (1) BG105188A (pl)
BR (1) BR9912946A (pl)
CA (1) CA2337082C (pl)
DE (1) DE69943283D1 (pl)
ES (1) ES2363201T3 (pl)
HU (1) HUP0103229A3 (pl)
ID (1) ID28917A (pl)
IL (1) IL140641A (pl)
IN (1) IN2001CH00156A (pl)
NZ (1) NZ509722A (pl)
PL (1) PL201312B1 (pl)
RO (1) RO121005B1 (pl)
TR (1) TR200100406T2 (pl)
TW (1) TW552142B (pl)
WO (1) WO2000009080A1 (pl)
ZA (1) ZA200101110B (pl)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1159951A1 (en) * 2000-06-02 2001-12-05 Societe Des Produits Nestle S.A. Use of exogenous lactic bacteria strain against Actinomyces naeslundii-related diseases
IL140641A (en) 1998-08-12 2007-07-04 Nestle Sa Incorporation of exogenous lactic bacteria into the oral microflora
JP4528472B2 (ja) * 2001-11-29 2010-08-18 ビオフェルミン製薬株式会社 歯周病の予防または治療剤
AU2003285875A1 (en) 2002-10-11 2004-05-04 Walker Digital, Llc Method and apparatus for outputting a message at a game machine
US6872565B2 (en) * 2003-01-29 2005-03-29 Biogaia Ab Product containing Lactobacillus reuteri strain ATTC PTA-4965 or PTA-4964 for inhibiting bacteria causing dental caries
JP4656288B2 (ja) * 2004-08-19 2011-03-23 ライオン商事株式会社 動物用オーラルケア用ペットフードの製造方法
EP1634948A1 (en) * 2004-09-10 2006-03-15 Basf Aktiengesellschaft Means and methods for preventing and/or treating caries
US8038990B2 (en) * 2005-06-01 2011-10-18 The Ohio State University Compositions and methods for the prevention and removal of biofilms on inert and biological surfaces
TW200808191A (en) 2006-08-09 2008-02-16 Genmont Biotech Inc Product containing Lactobacillus paracasei
CN101273738B (zh) * 2007-03-28 2011-06-01 哈尔滨正方科技有限公司 在常温下保持高活菌数的调配型酸性乳饮料的制备方法
GB0709162D0 (en) * 2007-05-11 2007-06-20 Jagotec Ag Dosage foam
KR100898491B1 (ko) * 2007-10-10 2009-05-19 주식회사한국야쿠르트 사람의 구강 충치균에 저해능이 있는 스트렙토코커스써머필러스 에이취와이9012 및 이를 이용한 식품
AU2009271287A1 (en) * 2008-06-24 2010-01-21 Wm. Wrigley Jr. Company Probiotic chewing gum method of manufacture
RU2011129693A (ru) * 2008-12-16 2013-01-27 Нестек С.А. Композиции и способы улучшения здоровья полости рта
WO2011057336A1 (en) * 2009-11-11 2011-05-19 Oral Health Australia Pty Ltd Antibiofilm glycopeptides
JP2014506923A (ja) 2011-03-01 2014-03-20 クオラム イノベーションズ リミテッド ライアビリティ カンパニー 病原性バイオフィルムと関連した状態を治療するための物質および方法
CA2828583A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-13 Tufts University Oral bacteria and uses thereof
WO2014047625A1 (en) 2012-09-24 2014-03-27 Montana State University Recombinant lactococcus lactis expressing escherichia coli colonization factor antigen i (cfa/i) fimbriae and their methods of use
RS63856B1 (sr) * 2013-07-05 2023-01-31 Stellar Biome Inc Probiotički sojevi bakterija za prevenciju i lečenje bolesti u usnoj duplji
KR101523205B1 (ko) * 2013-08-28 2015-05-28 한국식품연구원 페디오코쿠스 펜토사세우스 kft-18 및 이를 이용하여 세포외다당류를 대량 생산하는 방법
EP3086796B1 (en) * 2013-12-27 2018-10-24 Colgate-Palmolive Company Prebiotic oral care methods using a saccharide
EP3100614A1 (en) * 2015-06-02 2016-12-07 Universiteit van Amsterdam Compositions comprising anti-cariogenic bacteria and fermentable saccharides
EP3196318A1 (en) 2016-01-19 2017-07-26 Symrise AG Probiotics for altering the composition of oral biofilms
KR101833727B1 (ko) * 2016-05-13 2018-02-28 정규헌 세균의 소독이 가능한 물치약과 그 조성물
EP3351259A1 (en) 2017-01-18 2018-07-25 Symrise AG Probiotics for aggregation with disease-associated species in the oral cavity
CN110267641A (zh) 2017-02-10 2019-09-20 赢创德固赛有限公司 含有至少一种生物表面活性剂和氟化物的口腔护理组合物
CN110237024B (zh) * 2019-07-22 2022-04-19 佛山卡丝生物科技有限公司 一种美白益生菌牙膏及其制备方法

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5135739A (en) * 1983-02-15 1992-08-04 Kitasato Kenkyusho Non-cariogenic composition and drink
JPS59220191A (ja) * 1983-04-07 1984-12-11 Kitasato Inst:The 非う蝕性組成物および飲料
US4839281A (en) 1985-04-17 1989-06-13 New England Medical Center Hospitals, Inc. Lactobacillus strains and methods of selection
JPS61291413A (ja) 1985-06-18 1986-12-22 Shin Nippon Kagaku Kogyo Co Ltd 水酸化マグネシウム懸濁液の製造法
CH671879A5 (pl) * 1987-02-26 1989-10-13 Nestle Sa
JPH0687776B2 (ja) * 1990-02-20 1994-11-09 愛三 松代 新規形質転換株およびその製造方法
JPH0421633A (ja) 1990-05-17 1992-01-24 Saikon Medics:Kk 生体下口腔内有用微生物叢の維持管理法および維持管理組成物
FR2672494A1 (fr) 1991-02-13 1992-08-14 Madinier Isabelle Ferments prophylactiques favorisant la prevention de la carie dentaire.
DE4117782C2 (de) * 1991-05-28 1997-07-17 Diagnostikforschung Inst Nanokristalline magnetische Eisenoxid-Partikel, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diagnostische und/oder therapeutische Mittel
JPH054927A (ja) 1991-06-28 1993-01-14 Aizo Matsushiro 乳酸菌含有組成物及びその製造方法
DE69219768T2 (de) 1992-07-06 1997-08-28 Societe Des Produits Nestle S.A., Vevey Milchbakterien
GB9224598D0 (en) 1992-11-24 1993-01-13 Smithkline Beecham Plc Novel compositions
CH684773A5 (fr) 1992-12-28 1994-12-30 Nestle Sa Composition alimentaire anti-cariogène.
CO4560537A1 (es) 1992-12-28 1998-02-10 Nestle Sa Composicion lactea y procedimiento de preparacion
US5368845A (en) 1993-01-07 1994-11-29 Colgate Palmolive Company Oral composition
JP3078431B2 (ja) * 1993-09-27 2000-08-21 富士写真フイルム株式会社 黒白ハロゲン化銀写真感光材料の現像方法
US5358858A (en) * 1994-03-17 1994-10-25 National Science Council Process for preparing phycoerythrin from bangia atropurpurea and porphyra angusta
DE69421921T2 (de) * 1994-08-19 2000-05-11 Societe Des Produits Nestle S.A., Vevey Verzweigtes Polysaccharide, es produzierender Mikroorganismus und Zusammensetzungen welche sie enthalten
JP3101173B2 (ja) * 1995-03-22 2000-10-23 雪印乳業株式会社 フローズンヨーグルトの製造法
ATE206877T1 (de) 1995-06-16 2001-11-15 Nestle Sa Fluorierte kasein-mizellen
PT759469E (pt) * 1995-08-07 2003-08-29 Nestle Sa Bacteriocina
JP3356599B2 (ja) * 1995-09-22 2002-12-16 雪印乳業株式会社 低酸度型フローズンヨーグルトの製造法
KR19990024297A (ko) * 1997-08-07 1999-04-06 오종석 인체 구강내 치태형성을 억제하는 신규한 유산균
IL140641A (en) 1998-08-12 2007-07-04 Nestle Sa Incorporation of exogenous lactic bacteria into the oral microflora

Also Published As

Publication number Publication date
NZ509722A (en) 2003-05-30
IN2001CH00156A (pl) 2005-03-04
JP2002522464A (ja) 2002-07-23
US6942849B2 (en) 2005-09-13
IL140641A (en) 2007-07-04
AU5415999A (en) 2000-03-06
AU773799B2 (en) 2004-06-10
US20020012637A1 (en) 2002-01-31
KR100727338B1 (ko) 2007-06-13
EP1104281A1 (en) 2001-06-06
BG105188A (bg) 2001-09-28
ID28917A (id) 2001-07-12
TW552142B (en) 2003-09-11
CA2337082A1 (en) 2000-02-24
AR020169A1 (es) 2002-04-10
CA2337082C (en) 2012-05-15
HUP0103229A2 (hu) 2001-12-28
RO121005B1 (ro) 2006-11-30
JP4564169B2 (ja) 2010-10-20
IL140641A0 (en) 2002-02-10
US20050186148A1 (en) 2005-08-25
KR20070035111A (ko) 2007-03-29
ATE501640T1 (de) 2011-04-15
PL345890A1 (en) 2002-01-14
ZA200101110B (en) 2002-02-08
DE69943283D1 (de) 2011-04-28
EP1104281B1 (en) 2011-03-16
CN1240372C (zh) 2006-02-08
HUP0103229A3 (en) 2003-07-28
KR20010072440A (ko) 2001-07-31
US20050238590A1 (en) 2005-10-27
CN1312704A (zh) 2001-09-12
ES2363201T3 (es) 2011-07-26
BR9912946A (pt) 2001-05-08
WO2000009080A1 (en) 2000-02-24
TR200100406T2 (tr) 2001-12-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6942849B2 (en) Incorporation of exogenous lactic bacteria into the oral microflora
EP1002052A1 (en) Novel lactic acid bacteria
US7491386B2 (en) Treatment of actinomyces naeslundii-related diseases with exogenous lactic bacteria strains
AU2001272449A1 (en) Use of exogenous lactic bacteria strain against actinomyces naeslundii related diseases

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20090726