PL190122B1 - Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układuoddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepioniki dla bydła - Google Patents

Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układuoddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepioniki dla bydła

Info

Publication number
PL190122B1
PL190122B1 PL97331236A PL33123697A PL190122B1 PL 190122 B1 PL190122 B1 PL 190122B1 PL 97331236 A PL97331236 A PL 97331236A PL 33123697 A PL33123697 A PL 33123697A PL 190122 B1 PL190122 B1 PL 190122B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
vaccine
plasmid
virus
gene
cattle
Prior art date
Application number
PL97331236A
Other languages
English (en)
Other versions
PL331236A1 (en
Inventor
Jean-Christophe Audonnet
Annabelle Bouchardon
Philippe Baudu
Michel Riviere
Original Assignee
Merial Sas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial Sas filed Critical Merial Sas
Publication of PL331236A1 publication Critical patent/PL331236A1/xx
Publication of PL190122B1 publication Critical patent/PL190122B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/813—Viral vaccine for bovine species, e.g. cattle

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Kompozycja szczepionki przeciwko patologii ukladu oddechowego bydla, znamienna tym, ze obejmuje przynajmniej trzy wartosciowosci szczepionek polinukleotydowych, z których kazda obejmuje integrujacy plazmid obejmujacy gen jednej z wartosciowosci pato- genu bydla, który wyraza go in vivo w komórce gospodarza, przy czym wartosciowosci te wybrane sa z grupy skladajacej sie z bydlecego wirusa herpes, syncytialnego wirusa ukladu oddechowego bydla, wirusa choroby sluzówek i wirusa paragrypy typu 3, a plazmidy obejmuja dla kazdej wartosciowosci jeden lub wiecej genów wybranych z grupy skladajacej sie z gB i gD dla bydlecego wirusa herpes, F i G dla syncytialnego wirusa ukladu oddechowego bydla, E2, C + E 1 + E2 i E 1 + E2 dla wirusa choroby sluzówek, HN i F dla wirusa para grypy typu 3. 8. Zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, jak okreslone w zastrz. 1-7, do wytwa- rzania szczepionki przeznaczonej do szczepienia bydla, uprzednio szczepionego pierwsza szczepionka wybrana z grupy obejmujacej zywa pelna szczepionke, inaktywowana pelna szczepionke, szczepionke podjednostkowa, szczepionke rekombinowana, przy czym ta pierw- sza szczepionka posiada antygen(y) kodowane(y) przez plazmid albo antygen(y) zapewniaja- cy(e) odpornosc krzyz owa. 9. Zestaw do szczepienia obejmujacy kompozycje szczepionki okreslona w zastrz. 1 i pierwsza szczepionke wybrana z grupy obejmujacej zywa pelna szczepionke, inaktywowana pelna szczepionke, szczepionke podjednostkowa, szczepionke rekombinowana, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen kodowany przez szczepionke polinukleotydowa albo antygen zapewniajacy odpornosc krzyzowa, do podawania tej pierwszej szczepionki podczas pierwszego szczepienia i kompozycji szczepionki podczas szczepienia przypominajacego. PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki przeciwko patologii układu oddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepionki dla bydła.
Bydło jest nosicielem wirusów i bakterii, które są w różnym stopniu potencjalnie patogenne
Wirusy mogą się namnazać, gdy swoista odporność jest osłabiona i gdy występują zmiany w układzie oddechowym. Są rozsiewane przez zwierzęta i mogą zarazać inne osobniki.
Wśród wirusów, które się spotyka szczególnie należy zwrócić uwagę na typ 3 wirusa paragrypy (PI-3), o wrodzonej umiarkowanej patogenności, syncytialnego wirusa układu oddechowego bydła (RSV) i bydlęcego wirusa herpes (IBR) o wrodzonej wysokiej patogenności.
Inne wirusy, które są szczególnie istotne ze względu na ich rolę osłabiającą odporność i ich uszkadzające działanie na układ rozrodczy to wirus choroby błon śluzowych albo bydlęcy pestiwirus (BVDV).
Zakażenie tymi wirusami manifestuje się w pierwszym etapie gorączką, zespołem grypowym i zaburzeniami oddychania, w przypadku BVDV zaburzeniami ze strony układu oddechowego Temu etapowi może towarzyszyć drugi etap z początkiem objawów odoskrzelowego zapalema płuc związanego z zakazeniami bakteryjnymi, zwłaszcza Pasteurella, które mogą prowadzić do zgonu zwierzęcia. Zjawisko to jest wzmacniane szczególnie przez osłabieme odporności wynikające z zakazenia BVD albo z zakazenia makrofagów przez PI-3. Inne objawy, takie jak poronienia w przypadku zakazenia wirusami BDV i BHV, mogą pojawić się później
Tak więc wydaje się, ze istnieje potrzeba rozwoju skutecznej ochrony przed podstawowymi zakazeniami wirusowymi wywołującymi choroby układu oddechowego u bydła.
190 122
W przeszłości proponowano kombinacje szczepionek przeciwko konkretnym wirusom odpowiedzialnym za choroby układu oddechowego u bydła.
Jak dotąd szczepionki skojarzone przygotowywano ze szczepionek inaktywowanych albo szczepionek żywych i ewentualnie mieszanin takich szczepionek Ich rozwój napotyka problemy związane ze zgodnością między wartościowościami i stabilnością szczepionek. Istnieje rzeczywista potrzeba zapewnienia zgodności między różnymi wartościowościami szczepionek, z powodu zastosowania różnych antygenów, bądź z powodu samych kompozycji, szczególnie w przypadku gdzie połączone są szczepionki inaktywowane lub i szczepionki żywe Istnieje również problem konserwacji takiej kombinacji szczepionek i ich bezpieczeństwa szczególnie w obecności adiuwantu. Takie szczepionki są na ogół dosyć drogie.
W zgłoszeniach patentowych WO-A-90 11092, WO-A-93 19183, WO-A- 94 21997 i WO-A-95 20660 doniesiono o stosowaniu ostatnio opracowanych technik szczepionek polinukleotydowych. Wiadomo, ze szczepionki te wykorzystują plazmid zdolny do wyrażania w komórkach gospodarza antygenu włączonego do plazmidu. Proponowano wszystkie drogi podawania (dootrzewnową, dożylną, domięśniową, przezskórną, śródskórną, śluzówkową i podobne). Do Szczepień stosowane są różne środki, takie jak DNA osadzone na powierzchni cząstek złota i wystrzeliwane tak, że penetrują przez skórę zwierzęcia (Tang i in., Nature 356, 152-159, 1992) i wtryskiwacze do wstrzyknięć strumienia płynu, które powodują, ze jest możliwa jednoczesna transfekcja skóry, tkanek mięśniowych, tkanek tłuszczowych i tkanek gruczołu sutkowego (Furth i in., Analytical Biochemistry, 205, 365-368, 1992).
W szczepionkach polinukleotydowych mogą również być stosowane zarówno nagie DNA, jak i kompozycje DNA, na przykład wewnątrz kationowych lipidowych liposomów.
Juz wcześniej G. J. M. Cox w J. of Virology, tom 69, nr 9, wrzesień 1993, 5669-5669 proponował szczepienie szczepionką poiinukleotydową przeciwko bydlęcemu wirusowi herpes typ 1 Autorzy również opisali plazmidy integrujące geny gl (gB), gili (gC) i gIV (gD)
J. E. Crowe w Vaccine, tom 13, nr 9, 915-921, 1995 prezentował ogólny przegląd różnych sposobów szczepienia przeciwko syncytialnemu wirusowi układu oddechowego i wirusowi paragrypy typu 3. W przeglądzie tym ponownie omówiono wszystkie możliwości oferowane przez obecne techniki szczepienia i jasno sugerowano, ze techniki immunizacji polinukleotydowej mogą być przydatne w strategii immunizacji przeciwko RSV i PI-3. W pracy tej me opisano ani konstruktów plazmidowych, ani wyników szczepień bydła przeciwko tym wirusom.
Celem wynalazku jest dostarczenie kompozycji multiwalentnej szczepionki przeciwko wielu patogennym wirusom, zwłaszcza wywołującym choroby układu oddechowego bydła, która zapewni skuteczne szczepienie przeciwko tym chorobom, która zawiera różne wartościowości oraz spełnia wszystkie wymagane kryteria wzajemnej zgodności i stabilności wartościowości. Taka kompozycja szczepionki umożliwi połączenie różnych wartościowości w tym samym nośniku i jest łatwa w użyciu i niedroga. Kompozycja szczepionki umożliwi szczepienie bydła, które prowadzi do uzyskania ochrony, w tym ochrony multiwalentnej, z wysokim poziomem skuteczności i długim czasem trwania, jak również zapewni bezpieczeństwo i brak pozostałości po szczepionce.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest kompozycja szczepionki przeciwko patologii układu oddechowego bydła, która obejmuje przynajmniej trzy wartościowości szczepionek polinukleotydowych, z których każda obejmuje integrujący plazmid obejmujący gen jednej z wartościowości patogenu bydła, który wyraża go in vivo w komórce gospodarza, przy czym wartościowości te wybrane są z grupy składającej się z bydlęcego wirusa herpes, syncytialnego wirusa układu oddechowego bydła, wirusa choroby śluzówek i wirusa paragrypy typu 3, a nla7mirlv nhpimnia dla ka7rlpi wartnśrinwniri ιρΗρπ Inh wipw \whranvrt-i 7 σηιην o . ---------a aż ------j ------ — * j * ej ó j ©* pry składającej się z gB i gD dla bydlęcego wirusa herpes, F i G dla syncytialnego wirusa układu oddechowego bydła, E2, C + E1 + E2 i E1 + E2 dla wirusa choroby śluzówek, HN i F dla wirusa paragrypy typu 3
Wartościowość według niniejszego wynalazku należy rozumieć jako przynajmniej jeden antygen zapewniający ochronę przeciwko wirusowi jako rozważanemu patogenowi i jest możliwe, ze wartościowość zawiera, jako podwartościowości, jeden lub więcej zmodyfikowanych lub naturalnych genów z jednego lub więcej szczepów rozważanego patogenu.
190 122
Gen czynnika patogennego należy rozumieć nie tylko jako gen kompletny, lecz również jako różnorodne sekwencje nukleotydowe, w tym fragmenty zachowujące zdolność do wywołania odpowiedzi odpornościowej Wyrażenie, że geny obejmują sekwencje nukleotydowe równoważne z tymi opisanymi szczegółowo w przykładach, dotyczy sekwencji różniących się, lecz kodujących to samo białko. Oznacza to również sekwencje nukleotydowe innych szczepów rozważanego patogenu, które zapewniają ochronę krzyżową albo ochronę charakterystyczną dla danego szczepu, albo grupy szczepu. Oznacza również sekwencje nukleotydowe, które zostały zmodyfikowane w celu ułatwienia ekspresji in vivo w zwierzęciu będącym gospodarzem, lecz ciągle kodują to samo białko.
Korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku obejmuje cztery wartościowości.
Korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku obejmuje geny gB i gD bydlęcego wirusa herpes, w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach.
W odniesieniu do wartościowości RSV korzystnie kompozycja według wynalazku obejmuje geny F i G, w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach. Ewentualnie możliwe jest wykorzystanie samego genu F.
W odniesieniu do wartościowości dla BDV w korzystnym wykonaniu kompozycji szczepionki według wynalazku plazmid dla wirusa choroby śluzówek obejmuje gen E2.
Korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku dla wartościowości wirusa paragrypy typu 3 (PI-3) obejmuje gen HN w jednym plazmidzie lub wszystkie geny HN i F w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach.
W korzystnym wykonaniu wynalazku kompozycja szczepionki według wynalazku ma dołączoną instrukcję obsługi wskazującą, że tę kompozycję można zastosować jako szczepionkę przypominającą dla pierwszej szczepionki wybranej z grupy obejmującej żywą pełną szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową, szczepionkę rekombinowaną, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen kodowany przez szczepionkę polinukleotydową albo antygen zapewniający odporność krzyżową.
Kompozycja szczepionki według wynalazku może być dostarczana w postaci dawki o objętości generalnie od 0,1 do 10 ml, a zwłaszcza od 1 do 5 ml. '
Zazwyczaj korzystna dawka będzie w zakresie 10 ng - 1 mg, korzystnie między 100 ng a 500 pg, jeszcze korzystniej między 1 pg a 250 pg na dany rodzaj plazmidu.
Korzystnie należy stosować nagie plazmidy po prostu w nośniku do szczepionki, którym zazwyczaj będzie sól fizjologiczna (0,9% NaCl), woda destylowana, bufor TE i podobne. Mogą oczywiście zostać wykorzystane wszystkie kompozycje szczepionki polinukleotydowej wcześniej opisane w stanie techniki.
Każdy plazmid zawiera promotor zdolny do zapewnienia ekspresji włączonego genu, pod jego kontrolą w komórkach gospodarza. Zazwyczaj będzie to silny promotor eukariotyczny, a zwłaszcza wczesny promotor CMV-IE wirusa cytomegalii pochodzenia ludzkiego lub mysiego albo ewentualnie o innym pochodzeniu np. od szczurów, świń albo od świnek morskich.
Bardziej ogólnie, promotor może być zarówno pochodzenia wirusowego, jak i komórkowego Jako promotor wirusowy można wymienić wczesny i późny promotor wirusa SV40 albo promotor LTR wirusa mięsaka Rous'a. Możliwy jest również promotor wirusa, z którego pochodzi gen, na przykład własny promotor genu.
Jako promotor komórkowy należy wymienić promotor genu cytoszkieletu, taki jak na przykład promotor desminy (Bolmont i in., Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology, 1990, 22, 117-122; i Zhenlin i in., Gene, 1989, 78, 243-254) albo alternatywnie promotor aktyny
Gdy kilka genów znajduje się w tym samym plazmidzie, mogą być obecne w tej samej ./-..-1..^-..-, + /-¼.^ Ind ... /l.-..Aed .« A d.
juuuudiw pv.yjiivj iuu w uwwu lUżuycu.
Kombinację różnych wartościowości szczepionki według wynalazku można korzystnie uzyskać przez zmieszanie plazmidów polinukleotydowych wyrażających antygen(y) każdej wartościowości, lecz jest również możliwe, że antygeny kilku wartościowości są wyrażane przez ten sam plazmid.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest również zastosowanie jednego albo wielu plazmidów według wynalazku do wytwarzania szczepionki przeznaczonej do szczepienia bydła, uprzednio szczepionego pierwszą szczepionką wybraną z grupy obejmującej żywą pełną
190 122 szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową, szczepionkę rekombinowaną, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen(y) kodowane(y), (to znaczy zawiera lub jest zdolna do ekspresji) przez plazmid albo antygen(y) zapewniający^) odporność krzyżową.
Warte odnotowania jest, ze szczepionka polinukleotydowa posiada potencjalne działanie dawki przypominającej, co powoduje spotęgowanie odpowiedzi immunologicznej i nabycie długotrwałej odporności.
Ogólnie, szczepionka służąca do pierwszego szczepienia może być wybrana ze szczepionek różnych producentów szczepionek weterynaryjnych dostępnych na rynku.
Przedmiotem wynalazku jest również zestaw do szczepienia obejmujący kompozycję szczepionki według wynalazku i pierwszą szczepionkę wybraną z grupy obejmującej żywą pełną szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową, szczepionkę rekombinowaną, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen kodowany przez szczepionkę polinukleotydową albo antygen zapewniający odporność krzyżową, do podawania tej pierwszej szczepionki podczas pierwszego szczepienia i kompozycji szczepionki podczas szczepienia przypominającego Odnosi się to również do kompozycji szczepionki według wynalazku z dołączoną instrukcją tłumaczącą zastosowanie tej kompozycji jako dawki przypominającej dla pierwszego szczepienia opisanego powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest również szczepionka dla bydła obejmująca plazmid zawierający gen bydlęcego wirusa oddechowego wybrany z grupy składającej się z F i G i odpowiedni nośnik, korzystnie plazmid zawiera oba geny F i G, korzystniej szczepionka obejmuje plazmid zawierający gen F oraz plazmid zawierający gen G, jeszcze korzystniej plazmid zawiera gen F
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest szczepionka dla bydła obejmująca plazmid zawierający sekwencję nukleotydową z wirusa choroby śluzówek, wybraną z grupy składającej się z sekwencji nukleotydowych kodujących E2, C + E1 + E2 i E1 + E2 i odpowiedni nośnik, korzystnie plazmid zawiera sekwencję nukleotydową kodującą E2, korzystniej plazmid zawiera sekwencję nukleotydową kodującą E1 + E2, jeszcze korzystniej plazmid zawiera sekwencję nukleotydową kodującą C + E1 + E2.
W zakres wynalazku wchodzi również szczepionka dla bydła obejmująca plazmid zawierający gen wirusa paragrypy typu 3 wybrany spośród HN i F i odpowiedni nośnik, korzystnie plazmid zawiera oba geny HN i F, korzystniej obejmuje plazmid zawierający gen HN oraz plazmid zawierający gen F
Przedmiotem wynalazku jest również szczepionka dla bydła obejmująca plazmid zawierający gen bydlęcego wirusa herpes wybrany spośród gB i gD, korzystniej plazmid zawiera oba geny gB i gD, jeszcze korzystniej szczepionka obejmuje plazmid zawierający gen gB oraz plazmid zawierający gen gD.
Pomimo monowalentnego charakteru powyższych szczepionek według wynalazku, kompozycje te mogą posiadać przedstawione powyżej charakterystyki odnośnie co do wyboru genów, ich kombinacji, kompozycji plazmidów, objętości dawki, dawek i mnych.
Kompozycje monowalentnej szczepionki mogą być również stosowane (i) do wytwarzania kompozycji opisanej powyżej szczepionki poliwalentnej, (ii) pojedynczo w przypadku aktualnie trwającej choroby, (iii) do połączenia ze szczepionką innego typu (żywą lub w całości inaktywowaną, rekombinowaną, podjednostkową) przeciwko innej patologii albo (iv) jako dawka przypominająca dla szczepionki jak opisano powyżej.
Korzystnym wykonaniem wynalazku jest szczepionka, w której plazmid zawiera promotor wybrany z grupy składającej się z promotora CMV-IE, wczesnego promotora SV40, późnego promotoia SV40, piomotoia LTR wirusa mięsaka Rousa i promotora genu cytoszkieletu, a korzystniej promotorem jest promotor CMV-IE.
Sposób szczepienia bydła kompozycją szczepionki opisaną powyżej obejmuje podawanie jednej lub więcej dawek kompozycji kolejno w krótkich odstępach czasu i/lub kolejno w długich odstępach czasu.
Kompozycje według wynalazku mogą być podawane według tego sposobu szczepienia, różnymi sposobami podawania opisanymi we wcześniejszym stanie techniki dla szczepionek polinukleotydowych albo znanymi technikami podawania.
190 122
Ί
Szczepienia mogą być przeprowadzone tak, ze będą obejmować pierwsze szczepienia, tak jak to opisano powyżej i dawkę przypominającą kompozycję szczepionki według wynalazku.
Korzystne jest na przykład podawanie w pierwszej kolejności zwierzęciu skutecznej dawki szczepionki tradycyjnej, szczególnie inaktywowanej, żywej, atenuowanej albo rekombinowanej, albo alternatywnie szczepionki podjednostkowej, zapewniającej pierwsze szczepienie i podawanie po czasie korzystnie od 2 do 6 tygodni poliwalentnej albo monowalentnej szczepionki według wynalazku.
Wynalazek dalej zostanie opisany bardziej szczegółowo przez wykonania wynalazku podane w odniesieniu do towarzyszących rysunków
Lista figur
Figura nr 1: Plazmid pVR1012
Figura nr 2: Sekwencja genu gB BHV-1 ST
Figura nr 3: Konstrukcja plazmidu pPB156
Figura nr 4: Plazmid pAB081
Figura nr 5 Plazmid pAB011
Figura nr 6: Plazmid pAB012
Figura nr 7: Plazmid pAB058
Figura nr 8. Plazmid pAB059
Figura nr 9: Plazmid pAB060
Figura nr 10: Plazmid pAB011
Figura nr 11. Plazmid pAB012
Lista sekwencji Id. Sekw. nr:
ld. Sekw. nr 1: Sekwencja genu gB BHV-1 (szczep ST)
Id. Sekw. nr 2: oligonukleotyd PB234
Id. Sekw nr 3: oligonukleotyd PB235
Id Sekw nr 4: oligonukleotyd AB162
Id Sekw'. nr 5: oligonukleotyd AB163
Id. Sekw. nr 6: oligonukleotyd AB026
Id. Sekw. nr Ί· oligonukleotyd AB021
Id. Sekw. nr 8: oligonukleotyd AB028
Id. Sekw. nr 9: oligonukleotyd AB029
Id Sekw. nr 1(0 oligonukleotyd AB110
Id. Sekw. nr 11: oligonukleotyd AB111
Id. Sekw. nr 12: oligonukleotyd AB114
Id. Sekw nr 13 oligonukleotyd AB115
Id Sekw. nr 14: oligonukleotyd AB116
Id Sekw. nr 15: oligonukleotyd AB117
Id. Sekw. nr 16: oligonukleotyd AB130
Id Sekw nr 1Ί: oligonukleotyd AB131
Id. Sekw nr 18: oligonukleotyd AB132
Id Sekw nr 19: oligonukleotyd AB133
Przykłady
Przykład 1. Hodowla wirusa
Wirusy hoduje się w odpowiednim układzie komórkowym, do uzyskania efektu cytopatycznego Układy komórkowe do zastosowania dla każdego z wirusów są znane specjalistom. Pokrótce, komórki wrażliwe na wirusa, które hoduje się w minimalnej niezbędnej pożywce Eagle'a (MEM) albo innej odpowiedniej pożywce, zakaża się badanym szczepem wirusa stosując wielokrotność zakażenia równą 1 Zakażone komórki inkubuje się w 31°C przez czas niezbędny do wystąpienia całkowitego efektu cytopatycznego (średnio 36 godzin).
Przykład 2. Ekstrakcja wirusowych genomowych DNA
Po hodowli, nadsącz i rozłożone komórki zbiera się i całą zawiesinę wirusa wiruje się przy 1000 g przez 10 minut w 4°C w celu usunięcia resztek komórkowych. Cząstki wirusa zbiera się przez ultrawirowanie przy 400000 g przez godzinę w 4°C. Osad pobiera się w mi8
190 122 nimalnej objętości bufora (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Tę zatężoną zawiesinę wirusa traktuje się arntelnaząK (100 ng/ml objętości końcowej) w obecności soli sodowej siarczanu doOecylu (SDS) (0,5%) przez 2 godziny w 37°C Wirusowy DNA ekstrahuje się mieszaniną fecol/chłnrofnrm i arenbaitkJe 2 objętośkami absolutnego etanolu. Po pozostawieniu przez coc w -20°C, DNA wiruje się przy 10000 g przez 15 minut w 4°C. Osad DNA suszy się i pobiera w minimalnej objętości sterylnej, ułtraczystej wody. Następnie można go trawić enzymami reątrykrbJcbml
Przykład 3. Izolacja wirusowych genomowych RNA
Wirusy RNA onzbsccconn według technik znanych specjalistom Następnie, genomowy wirusowy RNA każdego z wirusów izolowano stosując technikę ekstrakcji „rodanek gkgcidbr_b/'i'enol-chIoroform” opisaną przez Chomczynski i Sacch! (Anal. Biochem., 1987, 162:156-159)
Przykład 4. Techniki biologii mołekułgrcej
Wszystkie konstrukcje plazmidów przeprowadzono ątoąująn standardowe techniki biologii mnlekułgrnej, opisane przez Sambrook i in., (Molecułgr Cloning: A Laboratory Manual, wyd 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Wszystkie fragmenty restrykcyjne zastosowane do wynalazku wyizolowano stosując zestaw „Geneclear” (BIO 101 Inc., La Jolla, CA).
Przykład 5. TechnikaRT-PCR
Swoiste nhgonkkleotydb (obejmujące miejsca restrykcyjne na końcach 5' w celu ułatwienia klonowania amplifikowanych fragmentów) syntetyzowano w taki sposób, ze pokrywały w całości regiony kodujące genów, które miały być amplifikowane (patrz konkretne przykłady). Reakcję odwrotnej trgnąkryacei (RT) i reakcje łańcuchową aołimergcb (PCR) przeprowadzono technikami standardowymi (Sambrook i in., 1989). Każdą z reakcji RT-PCR przeprowadzono z parą swoistych starterów amplifikacji z ekstrahowanym genomowym wirusowym RNA jako matrycą. Amplifikowany komplementarny DNA ekstrahowano mieszaniną fecol/rhłnroform/głkohol izoαmylowb (25:24.1), po czym trawiono enzymami restrykcyjnymi.
Przykład 6 Plaz.midpVR1012
Plazmid pVR1012 (figura 1) otrzymam z Vicał Inc., San Diego, CA, USA. Jego konstrukcję opisam w Hartikka i in. (Humac Gece Therapy, 1996, 7:1205-1217).
Przykład 7. Konstruowacie plazmidu pPB 156 (gen gB BHV-1)
Gecomowy DNA bydlęcego wirusa herpes BVH-1 (szczep ST) (Leucg-Tank i ic., Virology, 1994, 199:409-421) wytworzono techniką według przykładu 2 i trawiono BamHI. Po oczyscrcecik, fragment BamHI-BamHI o wielkości 18kbp klonnwgno do wektora pBR332, wcześniej trawionego BamHI, w celu otrzymania plazmidu pIBR-4-BamHI (22 kbp). Plazmid pIBR-4- BamHI trawiono SalI w celu uwolnienia fragmentu 6,6 kbp SalI-SalI zawierającego gec kodujący gliknaroteinę gB BHV-1 (figura 2 i Id. Sekw. cr 1). Fragment ten klonowaco do wektora pBR322 uprzednio trawionego SalI w celu otrzymania plazmidu pIBR^ó-San (10,9 kbp). Plazmid pIBR-6,6-SalI trawiono NheI i BglII w celu uwolnienia fragmentu NheI-BglII o wielkości 2676 bp zawierającego gec kodujący glikoaroteinę gB bydlęcego wirusa herpes (BHV-1) (fragment A).
Reakcję PCR przeprowadzono z gecomowym DNA bydlęcego wirusa herpes (BHV-1) (szczep ST) z następującymi ołigockkleotydami:
PB234 (30-mer) (Id. Sekw nr 2) 5'TTGTCGACATGGCCGCTCGCGGCGGTGCTC3'
PB235 (21-mer) (Id. Sekw. cr 3) 5'GCAGGGCAGCGGCTAGCGCGG3' tak więc izolowano kociec 5' genu kodującego glikoproteinę gB BHV-1. Po oczyszczeniu, produkt PCR o wielkości 153 bp trawiono SalI i NheI w celu izolacji fragmentu SalI-NheI o uiełkośni 145 bp (fragment B).
Fragment A i fragment B następnie poddano ligacji razem do wektora pVR1012 (przykSaO 6), trawionego uprzednio SalI i BamHI, otrcymkjąn plazmid pPB156 (7691 bp) (figura 3).
Przykład 8 Konstrukcja plazmidu pAB087 (gec gD BHV-1)
Reakcję PCR przeprowadzono z gecomowym DNA bydlęcego wirusa herpes (BHV-1) (szczep ST) (Leucg-Tack i ic., Vlrołogy, 1994, 199:409-421) przeprowadzono zgodnie z techniką opisaną w przykładzie 2, z następującymi oligonukleotydami:
AB162 (3 1-mer) Ild Sekw nr4 ) A AACTGCAGATGCAAGGGCCGACAfTGGCCGm AB163 i3U-nierj (Id Sekw. nr 5) 5'ATCTTGTACCATATGACCGTGGCGTTG3' tak więc amplifikowano koniec 5' genu kodującego glikopeoteinę gD (BHV-1) (GenBank numer dostępu L26360) w postaci fragmentu PCR o wielkości 338 bp Po oczyszczeniu fragment ten trawiono PstI i NdeI w celu izolacji fragmentu PstI-NdeI o wielkości 317 bp (fragment A)
Plazmid pBHV001 (Leung-Tack i in , Virology. 1994, 199:409-421) trawiono NdeI i StyI w celu uwolnienia fragmentu o wielkości 942 bp zawierającego koniec 3' genu kodującego glikoproteinę gD BHV-1( fragment B). Fragment A i fragment B następnie poddano ligacji razem do wektora pVR1012 (przykład 6), trawionego uprzednio PStI i XbaI, otrzymując plazmid pAB087 (6134 bp) (figura 4)
Przykład 9 Konstrukcja plazmidu pAB011 (gen F BRSV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego syncytialnego wirusa oddechowego (BRSV) (szczep 391-2) (R. Lerch i in., Virology, 1991, 181, 118-131) wytworzonym techniką według przykładu 3 z następującymi oligonukleotydarni
AB026 (33-mer) (Id. Sekw. nr 6) 5'AAAACTGCAGGGATGGCGGCAACAGCCATGAGG3' AB027 (31-mer) (Id Sekw nr 7) 5' CGCGGATCCTCATTTACTAAAGGAAAGATTG3' w taki sposób, że izolowano gen kodujący glikoproteinę fuzyjną F (BRSV F) w postaci fragmentu PCR o wielkości 1734 bp. Po oczyszczeniu, fragment trawiono PstI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu PstI-BamHI o wielkości 1715 bp. Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio PstI i BamHI, otrzymując plazmid pAB011 (6587 bp) (figura 5).
Przykład 10. Konstrukcja plazmidu pAB012 (gen G BRSV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego syncytialnego wirusa oddechowego (BRSV) (szczep 391-2) (R. Lerch i m., Virology, 1991, 64, 5559-5569) wytworzonym techniką według przykładu 3 z następującymi oligonukleotydarni
AB028 (32-mer) (Id Sekw. nr 8) 5'AAAACTGCAGATGTCCAACCATACCCATCATC3' AB029 (35-mer) (Id. Sekw. nr 9) 5'CGCGGATCCCTAGATCTGTGTAGTTGATTGATTTG3' w taki sposób, że izolowano gen kodujący białko G (BRSV G) w postaci fragmentu PCR o wielkości 780 bp. Po oczyszczeniu, fragment trawiono PstI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu PstI-BamHI o wielkości 763 bp. Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio PstI i BamHI, otrzymując plazmid pAB012 (5634 bp) (figura 6)
Przykład 11. Konstrukcja plazmidu pAB058 (gen C BVDV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego wirusa biegunki (BVDV) (szczep Osloss) (L. De Moerlooze i in., J. Gen. Virol., 1993, 74, 1433-1438) przygotowanym według metody przedstawionej w przykładzie 3 z następującymi oligonukleotydarni:
AB110 (35-mer) (Id. Sekw. nr 10)
5AAAACTGCAGATGTCCGACACAAAAGCAGAAGGGG3'
AB 111 (47-mer) (Id. Sekw nr 11)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCATTCCCACTGCGACTTGAAACAAAAC3' w taki sposób, że amplifikowano fragment 342 bp obejmujący gen kodujący białko kapsydowe C wirusa BVDV Po oczyszczeniu produktu RT-PCR, fragment trawiono PstI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu PstI-BamHI o wielkości 324 bp Fragment ten następnie nnddann bawił 7 wektorem nVR1019 trawinn^ nnrzpd^ PctT i R nmWT ' r- z --o J- .n ---------- r -kład — )^dr.jwdiikd yyj .u v . r d y ddj ddd p s t i —d Ba -hi . — ii, otrzymując plazmid pAB058 (5183 bp) (figura 7).
Przykład 12. Konstrukcja plazmidu pAB059 (gen E1 BVDV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego wirusa biegunki (BVDV) (szczep Osloss) (L. De Moerlooze i in, J. Gen. Virol., 1993, 74, 1433-1438) z następującymi oligonukleotydamr
AB114 (32-mer) (Id Sekw. nr 12)
5' ACGCGTCGACATGAAGAAACTAGAGAAAGCCC3'
190 122
AB115 (33-me)) (Id. Sekw. nr 13)
5'GCGGGATCCTCAGCCGGGTTTGCAAACTGGGAGC3' w taki sposób, że izolowano sekwencję kodującą białko E1 wirusa BRSV w postaci fragmentu PCR o wielkości 1381 bp Po oczyszczeniu, fragment trawiono SalI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu SalI-BamHI o wielkości 136Ί bp. Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio SalI i BamHI, otrzymując plazmid pAB059 (6236 bp) (figura 8)
Przykład 13. Konstrukcja plazmidu pAB060 (gen E2 BVDV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego wirusa biegunki (BVDV) (szczep Osloss) (L De Moerlooze i in., J. Gen. Virol., 1993, Ί4, 1433-1438) z następującymi oligonukleotydami:
AB116 (36-mer) (Id. Sekw. nr 14)
5'ACGCGTCGACATCAGGACTACTGCATTCCTGGTATG3'
AB111 (33-mer) (Id. Sekw. nr 15)
5'CGCGGATCCTCATTGACGTCCCGAGGTCATTTG3' w taki sposób, że izolowano sekwencję kodującą białko E2 wirusa BRSV w postaci fragmentu PCR o wielkości 1252 bp. Po oczyszczeniu, fragment trawiono SalI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu SalI-BamHI o wielkości 1238 bp. Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio SalI i BamHI, otrzymując plazmid PAB060 (610Ί bp) (figura 9).
Przykład 14. Konstrukcja plazmidu pAB011 (gen HN BPIV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego wirusa paragrypy typ 3 (PIS - BPIV) z następującymi oligonukleotydami:
AB130 (33-mer) (Id . Sekw. nr 16)
5' TTTGTCGACATGGAATATTGGAAACACACAAAC3'
AB13) (33-mer) (Id . Sekw. rr 17)
TTTGGATC CTTAGCTGC AGTTTTTC GGAACTTC3' w taki sposób, że izolowano gen kodujący glikoproteinę HN BPIV (sekwencja genu HN zdeponowana przez H. Shibuta w 198Ί, GenBank nr dostępu Y00115) w postaci fragmentu PCR o wielkości 1Ί3Ί bp. Po oczyszczeniu, fragment trawiono SalI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu SalI-BamHI o wielkości 1Ί25 bp. Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio SalI i BamHI, otrzymując plazmid pAB011 (6593 bp) (figura 10).
Przykład 15 Konstrukcja plazmidu pAB012 (gen F BPIV)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 5 przeprowadzono z genomowym RNA bydlęcego wirusa paragrypy typu 3 (PI3) = BPIV) z następującymi oligonukleotydami:
AB132 (βΟ-ι·^) (Id . Sekw. nr 18)
5' TTTGTCGACATGATCATCACAAACACAATC3'
AB133 (30-meri (Id Sekw nr 19)
5' TTTGGATCCTCATTGTCTACTTGTTAGTAC3' w taki sposób, że izolowano gen kodujący glikoproteinę F BPIV (sekwencja genu F zdeponowana przez H. Shibuta w 198Ί, GenBank nr dostępu Y00115) w postaci fragmentu PCR o wielkości 1641 bp. Po oczyszczeniu, fragment trawiono SalI i BamHI w celu uwolnienia fragmentu SalI-BamHI o wielkości 1629 bp Fragment ten następnie poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 6), trawionym uprzednio SalI i BamHI, otrzymując plazmid pAB012 (649Ί bp) (figura 11)
Przykład 16. Wytwarzanie i oczyszczanie plazmidów
Do wytwarzania plazmidów przeznaczonych do szczepienia zwierząt można zastosować dowolną technikę, która umożliwia otrzymanie zawiesiny oczyszczonych plazmidów, głównie w postaci super-skręconej Techniki te znane są specjalistom. W szczególności można wymienić technikę lizy alkalicznej, a następnie dwa kolejne ultrawirowania na gradiencie' chlorku cezu, w obecności bromku etydyny, jak to opisano w Sambrook i in., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Można również powołać zgłoszenie patentowe pCt WO 95/21250 i PCT WO 96/02658 opisujące metodę wytwarzania, na skalę przemysłową, plazmidów, które można
190 122 zastosować do szczepienia. W celu wytwarzania szczepionek (patrz przykład 17), oczyszczone plazmidy zawiesza się w celu otrzymania zawiesin o wysokim stężeniu (> 2 mg/ml), które są możliwe do przechowywania W tym celu, plazmidy zawiesza się w ultraczystej wodzie albo w buforze Te (10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8,0).
Przykład 17 Wytwarzanie szczepionek skojarzonych
Różne plazmidy konieczne do wytwarzania szczepionek skojarzonych miesza się wychodząc z ich stężonych roztworów (przykład 16) Mieszaniny wytwarza się w taki sposób, że stężenie końcowe każdego z plazmidów odpowiada skutecznej dawce każdego z nich. Roztwory, które można zastosować do ustalenia stężenia końcowego szczepionki mogą być roztworami 0,9% NaCl albo buforem PBS. Szczególne formulacje, takie jak liposomy lub kationowe lipidy można również wykorzystać w przygotowaniu szczepionek.
Przykład 18. Szczepienie bydła
Bydło szczepi się dawkami 100 gg. 250 gg albo 500 gg na plazmid. Wstrzykiwanie można przeprowadzić igłą, drogą domięśniową, zarówno na poziomie mięśnia pośladkowego, jak i na poziomie mięśni szyi Dawki szczepionki podaje się w objętości między 1 a 5 ml
190 122
ATGCCCGCTCGCGGCCGTGCTGAACGCGCCCCCGGCGCCGGAGACGGTCGGCGAGGACACCGT
1' MetA3AAlaArgGlyQlyAlaaiuArgAlaAIaalyAlaGIyAspQlyArgArgalyaiaArg
CGTCATCTACGACCCGGACGTGTTCTCGCTGCTCTACCCGGTCCTGCAGCGCCTGGCGCCCGC 22 > Arę^isIeuArgProGlyAirBValIeuAlaAlaLeuAEgalyProAlaAlaPPoQlyAlaQly
7 GGCGCGCCCCCCCCGCTAGCCCCTGCCCTCCTATGGGCG ACGTGGGCCCTGCTCCTGGCGGCG 43 > GlyAlaAzgAlaAlaLeuAl&AlaAl&LauLeuXxpAlaThxTxpAlALeuLeuLeuAlaAla
190 CCCCCCCCGGGGCGACCGCCGACAACCCCCCCGGCGCCCCCGCCCGAAGAGGCCGCGAGCCCG > P-mAla Al aniyAigProAlanłirtłlrPFriPrrAl aPmPraPmflli *TI nAl a XI a ροτψτρ
253 CCCCCCCCCGCGACCCCCAGCCCCCCCGGCCCCGACGGCCACGACGCCGCCAGCCCCCACAAC 95 > AlaPsDPeoAlaSerProSecProPEoOlyęroAspOlyAspAstAlaAlaSerPEoAspAsa
L06 * Sex13irAspValAr5AraA±aLeuAxgLeuAlAGlnAlAAlaalyG34iAstiSexArgPhflPbe
379 CTGTGCCCGCCCCCCTCCGGCGCCACGGTCCTCCGGCTCGCCCCCGCCCGGCCGTGCCCTGAG 127 > ValCysProPxoProSet<łlyAla3atcVlalVelAreLeuAlaPtoAlaAioPxoęyaPxoaiu
442 TACGGGCTCGGGCGGAACTACACGGAGGGCATCOGCGTCATTTACAAOGAGAACATCCCCCCG 148 ► TyxGlyŁ«<nyAxuAsx£tyrttaaiuaiyIleaiy4fclIleTyrItfsaiuAsaIleAlaPro
505 TACACGTTCAAGGCCTACATTTACAAAAAGGTGATCGTGACCACGACCTGGCCGGGCAGCACG 16 9 ► TyrtŁdPfaelysAlaiyrlleTysLysAsayillleTftaBttTfaEliirttpAlaaiySerthr
568 TACCCGGCCATTACAAACCAGTACACGGACCCCCTCCCĆCTGGCCATCGCCGAGATCACGGAC 190 ► Tyr-Αΐ a Al a TT wTłrrAmfn nTyr^lłreAigpArtfUłł'! frmVa 1 OlyMatOlymiiTT «·Ηη->«ρ
631 CTGGTGGACAAGAAGTGGCGCTGCCTITCGAAAGCCGAGTACCTGCGCAGCGGGCGCAAGGTG 211 > LeuValAspXtf3XysTxpAxgcysLeuSexiysAlai31t£CyzLeuA£gSe£aiyA]3jŁytftfcl
694 GTGGCCTTTGACCGCGACGACGACCCCTGGCAGGCGCCGCTGAAGCCTCCGCGGCTGAGCGCG
3 2 > YilAlaPbftAspArcAspAspAspProTrpGluALaLProLeuLyaProAlaAzgLeuSerAla
757 CCCGGGGTGCGGGGCTGGCACACGACGGACGATGTGTACACGGCGCTGGGCTCGGCGGGGCTC 253 > PxoQlyValArgOlyTcpBisTtu3hEAspA3p\folTyETbxAlaL0uQlySesAlaGlyLeu
820 TACCGCACGGGCACCTCTGTGAACTGCATCGTGGAAGAACTGGAGGCGCGCrCGGTGTACCCG 27 4 > TyrAxgałH^ylbxSerValAsi£y3lleValGluQhiVaiGluAlaAraSetVSU.TyrPro
883 TACG ACTCGTTCGCGCTCTCG ACCGGGGACATTATCTACATGTCGCCCTTTTACGCGCTGCGC 295 ► Tyi^lspSerPhaAlaleuSerTlccGlyAspllellaTyiilatSerProPbaTyrGlyŁeuArg
946 CAGGGCGCGCACCGCGAGCACACCAGGCTACTCGCCGGAGCGCTTCCAGCAGATCGAGGGCTA 316 > GluGlyMaHlsArgGluHisttixArgLeuLeuAlaQlyAlaLeuPxaAlaAspAxgGlyLeu
3 7 ► LeuGlnAlaArgHisGlytlisGlyProAiaProGlnGlyAlaGlyŁeuAlaGIuŁeuPheAla
1072 TACACAGCACCTGACGCTACCCTCGGACrCGCTCCCCAACCGCAAAAACGTGTCCTCGCTCGC 353 ► TyrlhEAlaArgAspGlySerLeuGlyLeuGlyAlaGlnAlaGlnLysArgMalLeuAlaGly
190 122
..35 C AAGTGGCCCG ACGCGCACC AAATGCTGCG AGACCACAGCCGCGGGAACTTCCCCTTCACGGC
L 39? CCCCTCCCTCTCCCCCACCTTrCTCACCGACAGCCACACCTTCCCCTTGCAGAATGTCCCCCT 4 00 > ProIjeuAlaLeuGlyAspŁeuCysaluArgainPzoaiaŁeuAztpralAlaOluCyeAlaAIa
1261 GAGCGACTGCGTG ATCGAAGAGGCCGAGGCCGCGGTCGAGCGCGTCTACCGCGACCGCTACAA 421 > GluArgŁjeuAcTA^pAEgArgGlyArgaiyftzgaiyAcsAlaAzoŁeuFsaAcgAlaŁeuaLa
1324 CGGCACGC ACGTGCTCTCGGGC AGCTTCG ACACGTACCTGGCCCCCCGCCGCTTTCTCCTCGC 442 > A£gH±sAlaAxgAlaValGly<niiŁ£UQlyAspVaXP£tXUyAlaArgAxvLeuCysAE'gGly'
1337 CTTCCGGCG ATCCTC AGCAACGAGCTCCCCAAGCTGTACCTCCAGGAGCTGCCCCGCTCGAAC
6 3 > LmiPmAlaMetJ^uSaxAsri31uXeuAlaŁyaLeuTyrŁeufl3x01UlieuAlaAroSaiAea
1450 ggcacgctcgaggggctgttcgccgccgcggcgcccaagccgggcccgcggcgcgcgcgccgc
484 > myTłiTToumunlyTguPhAAlaAlAAlaAlAPmt.ygPrpfllyPmApgArgŁTAłrgA-nj
1513 GCCCCCCCCTCTCCCCCCGCCGGCCCGGGCGCGGCCAACCGGCCCGCCCCCGACGGCCACGCC 505 > AlaAlaPEoSerAlaPBoGlyGlyProOlyAlaAlaAsnOlySsoAlafllyAscOlyAspAla
1576 CGCGCGCGCCTCACTACCCTGACCTCCCCCGAGTTTGCCGCGCTGCAGTTCACCTACCACCAC 526 > GlyqlyftŁqVam3rthxVłłT nOlnPhnA.I λ Al aTfntTInPbwTłnTyrAspala
1639 ATCCAGGACCACGTGAACACCATGTTCAGCĆCCCTCCCCACCTCCTGCTGCCTGCTGCACAAC 647 > HeoiQAsi>alsValAsDa3XEHatPbeSecKraŁeuXla33xES«clZcQyaIjeuŁeuaiaAen
1702 AAGGAGCGCGCCCTGTGGGCCGAGGCGGCTAAGCTCAACCCCAGCCCGGCCGCCAGCGCTGCG 563 ► LysQluAcgAlaŁeuXzpAlaaiuAlaAlaZysIjeuAsafxoSezMaAlaAlaSecMaAla
1765 CTCGACCGCCGCGCCGCCGCGCGCATGTTGGGGGACGCCATGGCCGTGACGTACTCCCACGAG
8 9 ► LeuAspAf^AręAlaAlaAlaAcgMatŁeuOlyAspAlaMatAla.ltalSltETyzCysSiaGau
1828 CTGGGCGAGGGGCGCGTGTTCATCGAGAACTCGATCCGCCCGCCCGGCCGCCTTTGCTACAGC
610 ► LcuOly<łluiJlyArgVAlIbaIleGluAanSex}iatAr3AlAProalyalyViICyBTyrSer
1391 CGCCCGCCGGTCTCCTTTGCCTTCGGCAACGAGAGCGAGCCGGTCGAGGGCCAGCTCGGCGAG 631 > ArvProProVilSeil>beAlaPtieaiyAsri(31uSaraiuJ>roValCIlualyainLaJ3lyGlu
1954 CACAACCAGCTGCTCCCCGCCCGCGAGCTCGTCGAGCCCTGCACCCCCAACCACAAGCCCTAC
652>
2017 TTCCCCTTTGGCGCGGACTACGTCTACTACGAGAACTACCCGTACCTCCCGCCGCTCCCGCTC 673 ► PheAxg?be01yAlaAspTyxtfalTyi3yxaiuAsxayxAlaTyxV<LlAEgAJcgV&lfxoLeu
2080 GCGGAGCTGCAĆGTGATCAGCACCTTTGTGGACCTAAACCTCACGGTrCTCGAGGACCGCGAG 694 ► AlaGliiLeui3luValIleSerTtix5haValAspLeuAstiLfit£Ił3iVllljeuQluAspAxgQlu
2143 TTCTTGCCCCTAG AAGTGTAC ACCCGCGCCGAGCTCCCCGACACGGGTCTGCTCCACTACAGC 71S> Ph£LeuProIeuGluValTyiiI3iiArgAlal*luLeuAlaAspOiEGlyLeuLeuAsjrtyxSer
2206 OAGATAC AGCCCCCC AACCAGCTCCACGAGCTCCCGTTCTACGACATTCACCGCGTCGTCAAG 7 3 6 ► GluXleGljiArGArgAsi3GlnIj2uHisGluLeuArgPheTyrAspIltAspArgValValLy3
190 122 = 9 -CCGACGGCAATATGGCCATC ATGCGAGGGCTCGCCAACTTCTTrCAGGGCCTGGGCGCCCTC 757 > ThrAsp31yAsnMatATarieMeCArgGlyIjsuAlaAsiPhePheGlc<jlyI>euGlyAlaVaJ.
2 32 GGGC AGGCGGTGCGCACGGTGGTGCTGGGCGCCGCGGGTGCCGCCCTCTCGACCGTGTCGGGC 778 > GlyGlnAlaValGiyrłłxValValIjeuGlyAlaAlnGlyAlaALaX^uSenlirValSei<31y
2395 ATCCCCTCGTTTATTGCGAACCCCrrCCGCCCGCTCGCCACCGGGCTGCTGGTGCTCGCCGGG 799 ► IlaAlaSetPhelleAlaAsoSroPbeGlyAlaleuAlalŁrGIytaiLeuYalLeuAlaOly
2453 CTGGTGGCCGCTTTCCTGGCGTACCGGTACATTTCCCGCCTCCCCAGCAACCCCATGAAGGCG 320 ► LeuVa2LAlAA2^helJ=uAiATyrAraTyrIleS«xArgLeuArgSeiAsaPrcMetLy3Ala
2521 CTGTACCCGATCACCACGCGCGCGCTCAAGG ACGACGCCCGGCGCGCAACCGCCCCCGGCGAG 841 > I>2uTyxiWlleairf2irArgAlaLeuLyEAsciAspAlAAi75alyAla3łirAlaPiXjGly<31u
2534 GAAGAGGAGGAGTTTGACGCGGCCAAACTCGAGCAGGCCCGCGAGATGATCAAGTATATCTCG 8 6 2 > GluGlt431uG&uPheAspAlaAlaLyaIjauGluG3jiAlxArcGluMatIleJjysTyrltetSer fi 4 7 CTCGTGTCAGCCCTCGAGCGGCAAG AGCACAAGGCGAAAAAGAGCAAC AAGGGCGGCCCCCTG 8 3 3 > ŁeuVaXSexAlaValGluAfgt3lDaluHl3lyaAlALysŁ!y3Se£AsaŁysalyGXyPrQŁeu
2710 CTGGCGACCCGGCTGACGCAGCTCGCCCTTCCCCGGCGACCGCCGCCGGAGTACCAGCACCTT 904 > I^uAlalbłArgleuaiiirtSlaŁeMAlaleuArgArgArBAlaProPrcGluiysaiafllnLeti
2773 CCGATGGCCGACGTCGGGGGGGCATGA 92 5 > ?«MetAlaAspV&lSlyGlyAla· · ·
190 122
f
Μ* 3
190 122
Bglll
N*
190 122
N‘ 5
190 122
190 122
190 122
EL
Ν’ ί
190 122
Ε.
190 122
&
g
N 1 °
190 122
Sglll
U1”29
190 122
Departament Wydawnictw UP RP Nakład 50 egz. Cena 9,00 zł.

Claims (25)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1 Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układu oddechowego bydła, znamienna tym, ze obejmuje przynajmniej trzy wartościowości szczepionek polinukleotydowych, z których każda obejmuje integrujący plazmid obejmujący gen jednej z wartościowości patogenu bydła, który wyraża go in vivo w komórce gospodarza, przy czym wartościowości te wybrane są z grupy składającej się z bydlęcego wirusa herpes, syncytialnego wirusa układu oddechowego bydła, wirusa choroby śluzówek i wirusa paragrypy typu 3, a plazmidy obejmują dla każdej wartościowości jeden lub więcej genów wybranych z grupy składającej się z gB i gD dla bydlęcego wirusa herpes, F i G dla syncytialnego wirusa układu oddechowego bydła, E2, C + El +- E2 i El + E2 dla wirusa choroby śluzówek, HN i F dla wirusa para grypy typu 3.
  2. 2 Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje cztery wartościowości szczepionek polinukleotydowych.
  3. 3 Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, ze obejmuje geny gB i gD bydlęcego wirusa herpes, w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach.
  4. 4. Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, ze obejmuje geny F i G, w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach.
  5. 5 Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, ze plazmid dla wirusa choroby śluzówek obejmuje gen E2.
  6. 6 Kompozycja szczepionki według zastrz. 1 albo 2. znamienna tym, ze dla wartościowości wirusa paragrypy typu 3 obejmuje gen HN w jednym plazmidzie lub wszystkie geny HN i F w tym samym plazmidzie albo w różnych plazmidach.
  7. 7 Kompozycja szczepionki według zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje od 10 ng do 1 mg, korzystnie od 100 ng do 500 (ig, jeszcze korzystniej od 1 pg do 250 pg każdego z plazmidów.
  8. 8. Zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, jak określone w zastrz. 1-7, do wytwarzania szczepionki przeznaczonej do szczepienia bydła, uprzednio szczepionego pierwszą szczepionką wybraną z grupy obejmującej żywą pełną szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową, szczepionkę rekombinowaną, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen(y) kodowane(y) przez plazmid albo antygen(y) zapewniaj ący(e) odporność krzyzową.
  9. 9. Zestaw do szczepienia obejmujący kompozycję szczepionki określoną w zastrz. 1 i pierwszą szczepionkę wybraną z grupy obejmującej żywą pełną szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową, szczepionkę rekombinowaną, przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen kodowany przez szczepionkę polinukleotydową albo antygen zapewniający odporność krzyzową, do podawania tej pierwszej szczepionki podczas pierwszego szczepienia i kompozycji szczepionki podczas szczepienia przypominającego.
  10. 10. Kompozycja szczepizrz<i według zasfrz . 1, tr do1ączonąinstrukcjąobsługi wskazującą. ze tę kompozycję można zastosować jako szczepionkę przypominającą dla pierwszej szczepionki wybranej z grupy obejmującej żywą pełną szczepionkę, inaktywowaną pełną szczepionkę, szczepionkę podjednostkową. szczepionkę rekombinowaną. przy czym ta pierwsza szczepionka posiada antygen kodowany przez szczepionkę aohnkkleotyOową albo antygen zapewniający odporność krzyzową.
  11. 11 Szczepiznka dln bzdła . znamienna tym, ze obejmuje pljumid zawieraiwcy gen hyg 0lęregn wirusa oddechowego wybrany z grupy ąkłgOąjącee się z F i G i odpowiedni nośnik
  12. 12. Szczepionka według zastrz. 11, znamienna tym, ze plazmid zawiera oba geny F i G.
  13. 13. Szczepionka według zastrz. 11, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający gen F oraz plazmid zawierający gen G
    190 122
  14. 15, znamienna tym, 15, znamienna tym, ze plazmid zawiera sekwencję nuze plazmid zawiera sekwencję nu14 Szczepionka według zastrz 11, znamienna tym, ze plazmid zawiera gen F
    15 Szczepionka dla bydła, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający sekwencję nukleotydową z wirusa choroby śluzówek, wybraną z grupy składającej się z sekwencji nukleotydowych kodujących E2, C + El + E2 i El + E2 i odpowiedni nośnik
  15. 16. Szczepionka według zastrz 15, znamienna tym, ze plazmid zawiera sekwencję nukleotydową kodującą E2
  16. 17 Szczepionka według zastrz kleotydową kodującą El + E2.
  17. 18. Szczepionka według zastrz. kleotydową. kodującą C + El + E2.
  18. 19 Szczepionka dla bydła, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający gen wirusa paragrypy typu 3 wybrany spośród HN i F i odpowiedni nośnik.
  19. 20. Szczepionka według zastrz. 19, znamienna tym, ze plazmid zawiera oba geny HN i F
  20. 21. Szczepionka według zastrz 19, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający gen HN oraz plazmid zawierający gen F
  21. 22. Szczepionka dla bydła, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający gen bydlęcego wirusa herpes wybrany spośród gB i gD
  22. 23 Szczepionka według zastrz. 22, znamienna tym, ze plazmid zawiera oba geny gB i gD
  23. 24 Szczepionka według zastrz. 22, znamienna tym, ze obejmuje plazmid zawierający gen gB oraz plazmid zawierający gen gD.
  24. 25 Szczepionka według dowolnego z zastrz. 11 do 24, znamienna tym, ze plazmid zawiera promotor wybrany z grupy składającej się z promotora CMV-IE, wczesnego promotora SV40, późnego promotora SV40, promotora LTR wirusa mięsaka Rousa i promotora genu cytoszkieletu.
  25. 26 Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, ze promotorem jest promotor CMV-IE.
PL97331236A 1996-07-19 1997-07-16 Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układuoddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepioniki dla bydła PL190122B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609403A FR2751229B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
PCT/FR1997/001325 WO1998003200A2 (fr) 1996-07-19 1997-07-16 Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL331236A1 PL331236A1 (en) 1999-07-05
PL190122B1 true PL190122B1 (pl) 2005-11-30

Family

ID=9494497

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97331236A PL190122B1 (pl) 1996-07-19 1997-07-16 Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układuoddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepioniki dla bydła

Country Status (29)

Country Link
US (2) US6376473B1 (pl)
EP (2) EP1382348B1 (pl)
JP (1) JP2000516200A (pl)
AP (1) AP9701044A0 (pl)
AR (1) AR007862A1 (pl)
AT (2) ATE307607T1 (pl)
AU (1) AU734442B2 (pl)
BR (1) BR9710506A (pl)
CA (1) CA2260855C (pl)
CO (1) CO4700306A1 (pl)
CZ (2) CZ298915B6 (pl)
DE (2) DE69734483T2 (pl)
DK (2) DK1382348T3 (pl)
ES (2) ES2210548T3 (pl)
FR (1) FR2751229B1 (pl)
HR (1) HRP970383A2 (pl)
HU (2) HU225169B1 (pl)
ID (1) ID19513A (pl)
IL (2) IL127703A0 (pl)
MA (1) MA24269A1 (pl)
NZ (4) NZ508939A (pl)
PE (1) PE84699A1 (pl)
PL (1) PL190122B1 (pl)
PT (1) PT912194E (pl)
PY (1) PY970078A (pl)
RU (1) RU2305560C2 (pl)
UA (1) UA70914C2 (pl)
WO (1) WO1998003200A2 (pl)
ZA (1) ZA976283B (pl)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
US7078388B2 (en) 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US20040002472A1 (en) * 2000-01-21 2004-01-01 Audonnet Jean-Christophe Francis Vaccination or immunization using a prime-boost regimen
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US6852705B2 (en) * 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
EP1689858B1 (en) 2003-11-13 2013-05-15 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of characterizing infectious bursal disease virus
EP1718770B1 (en) 2004-02-19 2011-05-25 The Governors of the University of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
WO2006115843A2 (en) 2005-04-25 2006-11-02 Merial Limited Nipah virus vaccines
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
EP3147296A1 (en) 2005-11-14 2017-03-29 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
AU2007352618B2 (en) 2007-05-02 2013-07-18 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. DNA plasmids having improved expression and stability
CN102271704A (zh) 2008-11-28 2011-12-07 梅里亚有限公司 重组禽流感疫苗及其用途
KR101715418B1 (ko) 2009-04-03 2017-03-10 메리얼 인코포레이티드 뉴캐슬 질환 바이러스-벡터를 이용한 조류 백신
KR20120101572A (ko) 2009-12-28 2012-09-13 메리얼 리미티드 재조합 ｎｄｖ 항원 및 이의 용도
JP5959440B2 (ja) 2010-01-19 2016-08-02 プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ 病原体の検出および治療のための改変オプソニン
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
EP2944322B1 (en) 2010-03-12 2018-01-17 Merial, Inc Bluetongue virus recombinant vaccines and uses thereof
EP4014989A1 (en) 2010-08-31 2022-06-22 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
AR084358A1 (es) * 2010-12-27 2013-05-08 Lilly Co Eli Composiciones y metodos para identificar y diferenciar componentes virales de vacunas multivalentes de la “fiebre de embarque” (complejo de enfermedad respiratoria bovina (brdc))
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
AU2012240240A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
WO2012138789A2 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US9216213B2 (en) 2011-04-20 2015-12-22 Merial, Inc. Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
AP2013007180A0 (en) 2011-04-25 2013-10-31 Advanced Bioscience Lab Inc Truncated HIV envelope proteins (ENV), methods andcompositions related thereto
ES2764079T3 (es) 2011-05-27 2020-06-02 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus Hendra y el virus Nipah
EP2714077B1 (en) 2011-06-01 2018-02-28 Merial, Inc. Needle-free administration of prrsv vaccines
AU2012284097B2 (en) 2011-07-18 2017-08-03 President And Fellows Of Harvard College Engineered microbe-targeting molecules and uses thereof
CA2844927C (en) 2011-08-12 2017-10-31 Merial Limited Vacuum-assisted preservation of biological products, in particular of vaccines
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
WO2013106558A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Merial Limited Lipid based adjuvants for dna - plasmid vaccines
DK2814508T5 (da) 2012-02-14 2017-06-12 Merial Inc Rotavirus-underenhedsvacciner og fremgangsmåder til fremstilling og anvendelse deraf
EP3466443B1 (en) 2012-02-14 2020-12-16 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
RU2656187C2 (ru) 2012-06-13 2018-05-31 Мериал, Инк. Реассортантные btv и ahsv вакцины
BR112015002131B1 (pt) 2012-08-01 2022-11-01 Bavarian Nordic A/S Vírus vaccinia ankara modificado (mva) recombinante, composição farmacêutica e uso do referido mva recombinante
HK1216006A1 (zh) 2013-03-12 2016-10-07 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. 反向遺傳學施馬倫貝格病毒疫苗組合物，和其使用方法
WO2014144325A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for improving detection and/or capture of a target entity
WO2014190040A1 (en) 2013-05-21 2014-11-27 President And Fellows Of Harvard College Engineered heme-binding compositions and uses thereof
EP3083658B1 (en) 2013-12-18 2019-05-08 President and Fellows of Harvard College Crp capture/detection of gram positive bacteria
WO2016073410A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
US9981033B2 (en) 2015-06-23 2018-05-29 Merial Inc. PRRSV minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
EP3763378A1 (en) 2015-08-06 2021-01-13 President and Fellows of Harvard College Improved microbe-binding molecules and uses thereof
MA42653A (fr) 2015-08-20 2018-06-27 Merial Inc Vaccins recombinants contre le fcv et utilisations de ceux-ci
RS65084B1 (sr) 2015-09-29 2024-02-29 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vakcine čestica sličnih virusu (vlp) parvovirusa pasa (cpv) i njihova upotreba
CA3006078A1 (en) 2015-11-23 2017-06-01 Merial, Inc. Fmdv and e2 fusion proteins and uses thereof
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109021081B (zh) * 2018-08-10 2019-06-04 山东大学 一种牛病毒性腹泻病毒样颗粒及其构建方法与应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU611784B2 (en) * 1988-04-22 1991-06-20 Pharmacia & Upjohn Company Chimeric glycoproteins containing immunogenic segments of human parainfluenza virus type 3
WO1992001471A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
GB9200117D0 (en) * 1992-01-06 1992-02-26 Connaught Lab Production of recombinant chimeric proteins for vaccine use
CA2136677A1 (en) * 1993-12-29 1995-06-30 Intervet, Inc. Method of intranasally administering to bovines a trivalent vaccine containing modified live ibrv, pl3v and brsv
EP1170368B1 (en) * 1994-01-27 2010-07-28 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
US5541102A (en) * 1994-09-02 1996-07-30 Board Of Regents, University Of Nebraska-Lincoln Bovine cell line resistant to in vitro infection by bovine viral diarrhea virus and all other known pestiviruses
US6019980A (en) 1995-06-07 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines
US6060457A (en) 1996-06-20 2000-05-09 Universite De Montreal DNA plasmid vaccine for immunization of animals against BVDV
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
JP5566663B2 (ja) * 2009-11-09 2014-08-06 三菱重工業株式会社 多翼遠心ファンおよびそれを用いた空気調和機

Also Published As

Publication number Publication date
ZA976283B (en) 1999-01-19
HUP9902791A2 (hu) 1999-12-28
ATE307607T1 (de) 2005-11-15
CO4700306A1 (es) 1998-12-29
RU2002132831A (ru) 2005-01-20
HU225169B1 (en) 2006-07-28
HU228353B1 (en) 2013-03-28
FR2751229A1 (fr) 1998-01-23
US20020160018A1 (en) 2002-10-31
BR9710506A (pt) 1999-08-17
NZ508940A (en) 2002-09-27
ES2210548T3 (es) 2004-07-01
DK1382348T3 (da) 2006-03-13
JP2000516200A (ja) 2000-12-05
CZ298915B6 (cs) 2008-03-12
DE69725988D1 (de) 2003-12-11
ES2254833T3 (es) 2006-06-16
WO1998003200A2 (fr) 1998-01-29
IL127703A (en) 2006-12-31
AU734442B2 (en) 2001-06-14
AP9701044A0 (en) 1997-07-31
CA2260855C (en) 2012-01-03
CZ298898B6 (cs) 2008-03-05
MA24269A1 (fr) 1998-04-01
EP0912194B1 (fr) 2003-11-05
PY970078A (es) 2001-12-03
AR007862A1 (es) 1999-11-24
AU3773597A (en) 1998-02-10
UA70914C2 (uk) 2004-11-15
ATE253376T1 (de) 2003-11-15
WO1998003200A3 (fr) 1998-02-26
PL331236A1 (en) 1999-07-05
EP1382348B1 (fr) 2005-10-26
HUP9902791A3 (en) 2000-03-28
IL127703A0 (en) 1999-10-28
EP1382348A2 (fr) 2004-01-21
DE69734483T2 (de) 2006-07-20
EP1382348A3 (fr) 2004-01-28
DK0912194T3 (da) 2004-03-15
FR2751229B1 (fr) 1998-11-27
NZ333751A (en) 2001-03-30
CZ17599A3 (cs) 1999-06-16
ID19513A (id) 1998-07-16
CA2260855A1 (en) 1998-01-29
DE69725988T2 (de) 2004-11-11
US6376473B1 (en) 2002-04-23
NZ508939A (en) 2002-04-26
RU2305560C2 (ru) 2007-09-10
HRP970383A2 (en) 1998-10-31
HU0500910D0 (en) 2005-11-28
PE84699A1 (es) 1999-11-28
PT912194E (pt) 2004-03-31
DE69734483D1 (de) 2005-12-01
US6818628B2 (en) 2004-11-16
EP0912194A2 (fr) 1999-05-06
NZ517686A (en) 2003-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL190122B1 (pl) Kompozycja szczepionki przeciwko patologii układuoddechowego bydła, zastosowanie jednego albo wielu plazmidów, zestaw do szczepienia oraz szczepioniki dla bydła
AU733563B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating dog diseases, particularly respiratory and digestive diseases
AU722878B2 (en) Intradermal bovine polynucleotide vaccine
CA2261346C (en) Polynucleotide vaccine formula for treating porcine respiratory and reproductive diseases
PL188409B1 (pl) Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni
PL191551B1 (pl) Kompozycje immunogenne, plazmidy, zastosowania plazmidów, zestawy oraz szczepionki
AU2844899A (en) Adjuvant-containing vaccines
AU776827B2 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU765539B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter