CZ298898B6 - Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem - Google Patents

Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem Download PDF

Info

Publication number
CZ298898B6
CZ298898B6 CZ0017599A CZ17599A CZ298898B6 CZ 298898 B6 CZ298898 B6 CZ 298898B6 CZ 0017599 A CZ0017599 A CZ 0017599A CZ 17599 A CZ17599 A CZ 17599A CZ 298898 B6 CZ298898 B6 CZ 298898B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
vaccine
plasmid
gene
bovine
promoter
Prior art date
Application number
CZ0017599A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ17599A3 (cs
Inventor
Audonnet@Jean-Christophe
Bouchardon@Annabelle
Baudu@Philippe
Riviere@Michel
Original Assignee
Merial
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial filed Critical Merial
Publication of CZ17599A3 publication Critical patent/CZ17599A3/cs
Publication of CZ298898B6 publication Critical patent/CZ298898B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/813—Viral vaccine for bovine species, e.g. cattle

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Rešení se týká farmaceutického prostredku vakcínyumožnující vakcinaci hovezího dobytka, zvlášte proti nemocem dýchacího ústrojí. Týká se také príslušného zpusobu vakcinace. Konkrétní vakcína podle vynálezu obsahuje plazmid obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru (RSV), pricemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny F a G, a dále obsahuje vhodný nosic. V jednom z výhodných provedení vynálezu vakcína dále obsahuje plazmid obsahující a exprimující gen jiné respiracní nemoci skotu vybrané ze skupiny sestávající z PI-3 (parainfluenza typu 3), BHV (bovinní herpetický virus) a BVD (bovinní virová diarrhea).

Description

Vakcína obsahující gen bovinního respiračního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiračním nemocem
Oblast techniky
Vynález se týká farmaceutického prostředku vakcíny umožňující vakcinaci hovězího dobytka, zvláště proti nemocem dýchacího ústrojí. Týká se také příslušného způsobu vakcinace.
Dosavadní stav techniky
Veškerý hovězí dobytek je nositelem potenciálně patogenních virů a bakterií ve velmi různé míře.
Viry se mohou rozmnožovat při oslabení specifické imunity a při narušení dýchacích cest. V takovém případě jsou viry obsaženy v exkretech a mohou tedy nakazit ostatní zvířata.
Z virů, které přicházejí v úvahu, se příkladně uvádějí zvláště virus parachřipky (parainfluenzy) typu 3 (Pl—3) s mírnou choroboplodností, hovězí (bovinní) respirační syncytiální virus (RSV) a hovězí virový opar (BHV) nazývaný též nakažlivá hovězí rhinotracheitida (IBR) s vysokou choroboplodností.
Jiným obzvláště významným virem pro jeho imunodepresivní působení a zhoubné účinky na reprodukci je virus onemocnění sliznic nebo-li virus (bovinní) virové diarrhey (BVDV).
Tyto viry se projevují obvykle v první fázi horečkou s chřipkovými příznaky a s dýchacími potížemi a s průjmovými potížemi (diarrhea) v případě BVD. Tato fáze může být doprovázena fází sekundární s výskytem zánětu průdušek vázaným na bakteriální infekci, zejména Pasteurella, která může vést k úhynu. Tento jev je vyvolán obzvláště následným potlačením imunity vůči infekci BVD nebo makrofágové infekcí Pl—3. Mohou se vyskytnout i další příznaky, jako zmetání způsobované BVD a BHV.
Jeví se tudíž jako nutnost poskytnout účinnou prevenci proti hlavním virům působícím dýchací onemocnění hovězího dobytka.
Již v minulosti se navrhovalo spojení vakcín proti některým virům působícím dýchací onemocně35 ní hovězího dobytka.
Dosud vyvinuté úsilí se týkalo neaktivovaných vakcín nebo živých vakcín, případně směsí těchto vakcín. Jejich zavedení naráží na problémy vztahu účinnosti a stability. Ve skutečnosti jde o zajištění vztahu mezi různou účinností vakcín se zřetelem na různé použití antigeny nebo se zřetelem na samotné formulace jmenovitě v případech, kde se kombinují neaktivované vakcíny s živými vakcínami. Je také zřejmý problém konzervace takových kombinovaných vakcín a rovněž problém jejich neškodnosti zejména ve spojení s pomocnými prostředky. Obecně jsou takové vakcíny velmi drahé.
Podle patentových dokumentů číslo WO-A-90/11092, WO-A-93/19183, WO-A-94/21797 a WO-A-95/20660 se používá nedávno vyvinuté techniky polynukleotidových vakcín. Tvrdí se, že vakcíny používají plazmidů schopného exprese antigenu začleněného do plazmidů v hostitelských buňkách. Navrhují se všechny cesty podávání (například intraperitoneální, intravenosní, intramuskulámí, transkutánní, intradermická a sliznicová). Použít lze rovněž různých vakcinač50 nich prostředků, jako DNA uložených na povrchu částic zlata a určených k proniknutí do kůže zvířete (Tang a kol., Nátuře 356, str. 152 až 154, 1992) a injektáž tekutin umožňujících proniknutí do kůže, svalů, tukových tkání a tkání děložních proniknutí do kůže, svalů, tukových tkání a tkání děložních (Furth a kol. Analytical Biochemistry 205, str. 365 až 368, 1992).
-1 CZ 298898 B6
Polynukleotidové vakcíny mohou vyžívat stejně dobře jak DNA jako takové, tak DNA formulované například na bázi liposomů nebo kationických lipidů.
G. J. M. Cox navrhl polynukleotidovou vakcinaci proti viru hovězího oparu typu 1 (J. Virology sv. 67. číslo 9 str. 5664 až 5667, září 1993). Rovněž byly popsány zejména plazmidy integrující geny gl (gB), hlll (gC) a glV (gD).
J. E. Crowe (Vaccine, sv. 13, č. 4, str. 415^421, 1995) podává obecný přehled různých způsobů ío vakcinace proti syncytiálnímu dýchacímu viru a proti parachřipkovému viru typu 3. Tento přehled udává soubor nabízených možností současnými technikami vakcinace a jednoduše předpokládá, že technologie polynukleotidové imunizace by mohla být užitečná ve strategii imunizace vůči RSV a PI-3. V tomto přehledu však není popsána žádná konstrukce plazmidu, ani výsledky protivirové vakcinace hovězího dobytka.
Vynález se také týká formulace několikaúčinné (multivalentní) vakcíny umožňující zajištění vakcinace proti určitému počtu patogenních virů uplatňujících se jmenovitě v dýchací patologii hovězího dobytka a rovněž zajištění účinné vakcinace proti této chorobě.
Vynález se dále týká formulace vakcíny spojující různé účinnosti a všechna požadovaná kriteria kompatibility a stability účinnosti. Vynález dále týká formulace vakcíny umožňující spojení různých účinností v jednom nosiči.
Vynález se dále týká formulace vakcíny snadno a levně vyrobitelné.
Vynález se dále týká formulace vakcíny a způsob vakcinace hovězího dobytka, která umožní získat multiúčinnou ochranu s vysokou účinností a dlouhodobě působící a zároveň neškodnou a bez vedlejších účinků.
Podstata vynálezu
Vynález se týká formulace hovězí vakcíny proti dýchacím nemocem hovězího dobytka, která může obsahovat alespoň tři účinné polynukleotidové vakcíny, z nichž každá zahrnuje integrující plazmid k expresi in vivo v hostitelských buňkách, gen účinný na respirační nemoci hovězího dobytka, přičemž jsou tyto účinnosti voleny ze souboru zahrnujícího virus oparu hovězího dobytka (herpetický virus), syncytiální respirační virus hovězího dobytka, virus onemocnění sliznic (virus diarrhey) a parachřipkový virus typu 3, přičemž plazmidy mají pro každou účinnost jeden nebo několik genů volených ze souboru zahrnujícího gB a gD pro hovězí herpetický virus (BHV), F a G pro syncytiální respirační virus hovězího dobytka (BRSV), E2, C + E2 a El + E2 pro virus diarrhey (BVDV), HN a F pro parachřipkový virus typu 3 (PI—3).
Za účinnost se zde považuje alespoň jeden antigen zajišťující ochranu proti uvažovanému patogennímu viru, přičemž účinnost může zahrnovat jakožto subúčinnost jeden nebo několik přírodních nebo modifikovaných genů jednoho nebo několik kmenů uvažované choroby.
Za gen patogenního činidla se považuje nejenom úplný gen, ale také různé nukleotidové sekvence včetně fragmentů zachovávajících schopnost k vyvolání ochranné odezvy. Termín gen zahrnuje nukleotidové sekvence ekvivalentní se sekvencemi podrobně popsanými v příkladech, tedy různé sekvence, avšak kódující stejný protein. Zahrnuje také nukleotidové sekvence ostat50 nich uvažovaných patogenních kmenů, zaručující příčnou ochranu nebo ochranu specifickou kmenu nebo skupiny kmenu. Zahrnuje také nukleotidové sekvence, které byly modifikovány k usnadnění exprese in vivo u hostitelského zvířete avšak kolující stejný protein.
-2CZ 298898 B6
Předmětem vynálezu je zejména vakcína pro vakcinaci skotu, která obsahuje plazmid obsahující gen bovinního respiračního syncytiálního viru, přičemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny F a G, a dále obsahuje vhodný nosič.
Ve výhodném provedení vakcína podle vynálezu může dále obsahovat plazmid obsahující a exprimující gen jiné respirační nemoci skotu vybrané ze skupiny sestávající z PI—3 (parainfluenza typu 3), BHV (bovinní herpetický virus) a BVD (bovinní virová diarrhea).
Pokud jde o účinnost BHV, dává se přednost dvěma genům kódujícím gB a gD v různých ío plazmidech nebo v jednom a tomtéž plazmidu. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít jednoho nebo druhého z těchto genů.
Pro účinnost RSV se používá s výhodou dvou genů G a F, začleněných do dvou různých plazmidů nebo do jednoho a téhož plazmidu. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít genu F samotného.
Pro účinnost BVD se používá s výhodou genu E2. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít plazmidu kódujícího El a E2 společně a skupinu tvořenou C, El a E2.
Pro účinnost PI—3 se používá s výhodou skupiny dvou genů HN a F v různých plazmidech nebo v jednom a téhož plazmidu. Použít lze také jediného genu HN.
Výhodná formulace vakcíny podle vynálezu může zahrnovat a zaručovat expresi genu gB a gD z BHV, G a F z RSV, E2 z BVD a HN a F z PI-3.
Formulace vakcíny podle vynálezu může být ve formě dávky o objemu 0,1 až 10 ml a zejména 1 až 5 ml.
Dávka obvykle zahrnuje 10 ng až 1 mg, s výhodou 100 ng až 500 pg a výhodněji také 1 pg až 250 pg podle typu plazmidu.
S výhodou se používá prostých plazmidů jednoduše včleněných do vakcinačního nosiče, kterým je obecně například fyziologický roztok (0,9% roztok chloridu sodného), ultračistá voda a pufr TE. Lze ostatně použít všechny formy polynukleotidové vakcíny popsané ve stavu techniky.
Každý plazmid obsahuje promotor schopný zajistit expresi genu začleněného v závislosti v hostitelských buňkách. Obecně je to eukaryotový silný promotor a zejména časný promotor cytomegaloviru CMV-IE, lidského nebo myšího nebo případně jiného původu, jako např. z krysy, prasete nebo morčete.
Obecněji by mohl být promotor bod virového nebo buněčného původu. Jako virový promotor kromě CMV-IE je možno uvést časný nebo pozdní promotor viru SV40 nebo promotor LTR viru Rousova sarkomu. Může to také být promotor viru, jehož původcem je gen, například promotor genu.
Jako buněčný promotor se uvádí promotor genu cytoskeletu, jako je například promotor desminu (Bolmont a kol. Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology, 22, str. 117 až 122 1990 a Zhenlin a kol., Gene 78, str. 243 až 254 1989) nebo ještě promotor aktinu.
Jelikož ve stejném plazmidu je obsaženo několik genů, mohou být obsaženy ve stejné transkripční jednotce nebo ve dvou různých jednotkách.
Kombinace různých účinností vakcíny podle vynálezu se mohou provádět s výhodou smísením polynukleotidových plazmidů exprimuj ících antigen nebo antigeny každé účinnosti, nebo lze rovněž nechat exprimovat antigeny několika účinností stejným plazmidem.
-3CZ 298898 B6
Vynález se také týká formulací jednoúčinných vakcín obsahujících jeden nebo několik plazmidů kódujících jeden nebo několik genů, shora popsaných, jednoho ze zvolených virů ze souboru zahrnujícího RSV, BVD a PI-3. Oproti jejich jednoúčinnému charakteru mohou tyto formulace zaujmout shora uvedené charakteristiky, pokud jde například o volbu genu, jejich kombinaci, složení plazmidů, objemů dávky a dávek.
Formulace jednoúčinné vakcíny mohou být využity (i) k přípravě formulace víceúčinných vakcín jak shora popsáno, (ii) individuálně proti příslušné patologii, (iii) spojením s vakcínou jiného typu (živé nebo inaktivované, rekombinantní, podjednotkové) proti jiné patologii nebo (iv) se zřetelem na shora popsanou vakcínu.
Vynález se také týká použití různých plazmidů podle vynálezu k výrobě vakcíny určené k vakcinaci prvotně vakcinovaného (primo-vakcinovaného) hovězího dobytka alespoň první klasickou vakcínou typu dosavadního stavu techniky volenou jmenovitě ze souboru zahrnujícího dřívější živou vakcínu, dřívější inaktivovanou vakcínu podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína obsahuje nebo může exprimovat alespoň jeden antigen kódovaný alespoň jedním plazmidem nebo alespoň jeden antigenem zajišťující křížovou ochranu.
Výhodně má polynukleotidová vakcína účinek, kteiý se dá vyjádřit zesílením imunitní odezvy a založení dlouhodobé imunity.
Obecně vakcíny prvotní vakcinace mohou být voleny z obchodně dostupných vakcín od výrobků veterinárních vakcín.
Vynález se týká také vakcinačního kitu (soupravy) obsahujícího vakcínu první vakcinace jak dále popsáno a formulaci vakcíny podle vynálezu pro porovnání.
Vynález se týká také způsobu vakcinace hovězího dobytka proti respiračním chorobám s podáváním formulace účinné vakcíny shora popsané. Tento způsob vakcinace zahrnuje podávání jedné nebo několika dávek formulace vakcíny, přičemž mohou být tyto dávky podávány postupně v krátkých časových intervalech a/nebo postupně v okamžicích navzájem vzdálených.
Formulace vakcíny podle vynálezu mohou být podávány v rámci tohoto způsobu vakcinace různými cestami podání, známými ze stavu techniky pro polynukleotidové vakcinace a známými technikami vakcinace.
Vynález se týká také způsobu vakcinace spočívajícího v provádění primo-vakcinace, jak dále popsáno, a s formulací vakcíny podle vynálezu.
Při jednom výhodném způsobu podle vynálezu se podává zvířeti napřed účinná dávka vakcíny klasického typu, jmenovitě neaktivované, živé, utlumené nebo rekombinantní, nebo také vakcíny podjednotkové k zajištění primo-vakcinace a s výhodou s prodlením 2 až 6 týdnů se zajistí podání víceúčinné nebo monoúčinné vakcíny podle vynálezu.
Vynález zahrnuje také způsob přípravy formulace vakcíny podle tohoto popisu.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení pomoci přiložených obrázků.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1: Plazmid pVRl 012
Obr. 2: Sekvence genu BHV-1 ST gB
Obr. 3: Konstrukce plazmidu pPB156
-4CZ 298898 B6
Obr. 4: Plazmid pABO87 Obr. 5: Plazmid pABOl 1 Obr. 6: Plazmid pABOl2 Obr. 7: Plazmid pABO58
Obr. 8: Plazmid pABO59 Obr. 9: Plazmid pAB060 Obr. 10: Plazmid pAB071 Obr. 11: Plazmid pAB072
Seznam sekvencí
SEQ ID č. 1: sekvence genu BHV-1 gB (kmen ST)
SEQ ID č. 2: oligonukleotid PB234 SEQ ID č. 3: oligonukleotid PB236 SEQ ID č. 4: oligonukleotid AB162
SEQ ID č. 5: oligonukleotid AB163 SEQ ID č. 6: oligonukleotid AB026 SEQ ID č. 7: oligonukleotid AB027 SEQ ID č. 8: oligonukleotid AB028 SEQ ID č. 9: oligonukleotid AB029
SEQ ID č. 10: oligonukleotid AB110 SEQ ID č. 11: oligonukleotid AB111 SEQ ID č. 12: oligonukleotid AB114 SEQ ID č. 13: oligonukleotid AB115 SEQ ID č. 14: oligonukleotid AB116
SEQ ID č. 15: oligonukleotid AB117 SEQ ID č. 16: oligonukleotid AB130 SEQ ID č. 17: oligonukleotid AB131 SEQ ID č. 18: oligonukleotid AB132 SEQ ID č. 19: oligonukleotid AB133
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 Kultivace virů
Viry se pěstují v buněčném systému využitém až do získání cytopathického jevu. Buněčné systémy k použití pro každý virus jsou pracovníkům v oboru dobře známy. Stručně řečeno, buňky citlivé na použity virus, pěstované v minimálním médiu podle Eagle (médium „MEM“) nebo v jiném vhodném prostředí, se očkují studovaným virovým kmenem za použití jednonásobku infekce. Infikované buňky se tedy inkubují při teplotě 37 °C po dobu potřebnou k výskytu úplného cytopatického jevu (nejméně 36 hodin).
Příklad 2
Extrakce virových genomických DNA
Po kultivaci, supematant a lýzované buňky se shromáždí a celá virová suspenze se odstředí při
1 000 g během 10 minut při teplotě +4 °C k vyloučení buněčných úlomků. Pak se virové částice
-5CZ 298898 B6 podrobí ultraodstředění při 400 000 g po dobu jedné hodiny při teplotě + 4 °C. Sraženina se vyjme do minimálního množství pufru (Tris 10 mM, EDTA 1 mM). Tato koncentrovaná virová suspenze se zpracuje proteinázou K (100pg/ml konečný) v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS) (0,5% konečný) během dvou hodin při teplotě 37 °C. Virová DNA se pak extrahuje směsí fenol/5 chloroform a pak se vysráží se dvěma objemy absolutního ethanolu. Nechá se stát přes noc při teplotě -20 °C, DNA se odstředí při 10 000 g během 15 minut při teplotě + 4 °C. Sraženina DNA se suší a vyjme se do minimálního množství sterilní ultračisté vody. Naštěpí se restrikčními enzymy.
Příklad 3 ío Izolování genomických virových RNA
Virová RNA se čistí způsoby dobře známými pro pracovníky v oboru. Genomické virové RNA se pak izolují za použití extrakční techniky „thiokyanát guanidinu/fenol-chloroform“, kterou popsali P. Chomczynski aN. Sacchi (Anal. Biochem. 162, str. 156 až 159, 1987).
Příklad 4
Techniky molekulární biologie
Všechny konstrukce plazmidů se uskutečnily standardní technikou molekulární biologie kterou popsal J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Všechny restrikční fragmenty pro tento vynález byly izolovány pomocí kitu „Geneclean“ (BIO101 lne. La Jolla, CA).
Příklad 5
Technika RT-PCR
Specifické oligonukleotidy (nesoucí na 5' koncích restrikční místa k usnadnění vnějšího klonová25 ní amplifikovaných fragmentů) byly syntetizovány tak, že pokrývají úplně kódující oblasti genů před amplifikaci (viz specifické příklady). Polymerázová řetězová reakce (PCR) spřažená s reverzní transkripcí (RT) se uskutečnila standardními technikami (J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Každá reakce RT-PCR byla provedena s dvojicí specifických amplifikačních primerů za použití matrice RNA genomickém virového extraktu. Amplifikované komplementární DNA byly izolovány pomocí směsi fenol/chloroform/isoamylalkohol (25:24:1) před štěpením restrikčními enzymy.
Příklad 6
Plazmid pVRl 012
Plazmid pVR1012 (obr. 1) byl získán od Vical lne. San Diego, CA, USA. Konstrukci popsal J. Hartokka a kol. (Human Gene Therapy, 7, str. 1205 až 1217, 1996).
Příklad 7
Konstrukce plazmidu pPBl56 (gen BHV-lgB)
Genomická DNA viru hovězího oparu BHV (kmen DT) (Leung-Tack P, a kol. Virology 199, str. 409 až 421, 1994), připravená technikou popsanou v příkladu 2 se štěpí BamHI. Po vyčištění se klonuje fragment BamHI-BamHI 18 kbp do vektoru pBR322 předtím štěpeného BamHI za získání plazmidu pIBR4-BamHI (221 bp). Plazmid plBR-4-BamHI se pak štěpí Sáli k uvolnění fragmentu Sall-Sall 6,6 kpb obsahujícího gen kódující glykoprotein gB BHV-1 (obr. č. 2 a SEQIDč.l). Tento fragment byl klonován ve vektoru pBR322, předběžně štěpeného Sáli pro získání plazmidu plBR-6,6-SalI (10,9 kpb). Plazmid plBR-6,6-Salt se štěpí Nhel a Bglll k uvolnění fragmentu Nhel-BglII 2676 bp obsahujícího gen kódující glykoprotein gB viru oparu hovězího dobytka (BHV-1) (fragment A). Reakce PCR se uskuteční s genomickou DNA viru oparu hovězího dobytka (BHV-1) (kmen ST) a s následujícími oligonukleotidy:
-6CZ 298898 B6
PB234 (30 mer)(SEQ ID č. 2)
5'TTGTCGACATGGCCGCTCGCGGCGGPGCTG3'
PB235 (21 mer) (SEQ ID č. 3)
5'GCAGGGCAGCGGCTAGCGCGG3' k izolování části 5' genu kódujícího glykoprotein gB BHV-1. Po vyčištění, se produkt PCR 153 bp štěpí Sáli a Nhel k izolování fragmentu Sall-Nhel 145 bp (fragment B). Fragmenty A a B se vážou spolu s vektorem pVR1012 (příklad 6), předběžně štěpeným Sáli a BamHI, k dodání plazmidu pPB156 (7691 pb) (obr. č. 3).
Příklad 8
Konstrukce plazmidu pAB087 (gen BHV-1 gD)
Provádí se reakce PCR s genomickou DNA viru oparu hovězího dobytka (BHV-1) (kmen ST) ίο (P. Leung-Tack a kol. Virology, 199, str. 409 až 421,1994) připravenou způsobem popsaným v příkladu 2 a s následujícími oligonukleotidy:
AB162 (31 mer) (SEQ ID č. 4)
5'AAACTGCAGATGCAAGGGCCGACATTGGCCG3'
AB163 (27 mer) (SEQ ID č. 5)
5'ATCTTGTACCATATGACCGTGGCGTTG3’ pro amplifikaci 5' části kódujícího glykoproteinu gD viru oparu hovězího dobytka (BHV-1) (č. přístupu sekvence GenBank=L26360) ve formě fragmentu PCR 448 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a Ndel k izolování fragmentu Pstl-Ndel 317 bp (fragment A).
Plazmid pBNHVOOl (P. Leung-Tack P a kol. Virology 199, str. 409 až 421, 1994) se štěpí Ndel a Styl k uvolnění fragmentu 942 bp obsahujícího 3' část genu kódujícího glykoprotein gD BHV-1 (fragment B). Fragmenty A a B se ligují s vektorem PVR1012 (příklad 6) předem štěpe20 ným Pstl a Xbal, pro vytvoření plazmidu pAB087 (6134 pb) (obr. 4).
Příklad 9
Konstrukce plazmidu pABO 11 (gen BRSV F)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA syncytiálního respiračního viru hovězího dobytka (BRSV) (kmen 391-2) (R. Lench a kol. Virology 181, str. 118 až 131 1991), připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
AB026 (33 mer) (SEQ ID č. 6)
5'AAAACTGCAGGGATGGCGGCAACAGCCATGAGG3'
AB027 (31 mer) (SEQ ID č. 7)
5'CGCGGATCCTCATTTACTAAAGGAAAGATTG3’ k izolování genu kódujícího glykoprotein fuze F (BRSV F) ve formě fragmentu PCR 1734 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHI 1717 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI, k získání plazmidu pABOl 1 (6587 pb) (obr. č. 5).
Příklad 10
Konstrukce plazmidu pABOl2 (gen BRSV G)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5 s genomovou RNA syncytiálního respiračního viru hovězího dobytka (BRSV) (kmen 391-2) (R. Lench a kol. Virology 64, str. 5559 až 5569 1990), připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
-7CZ 298898 B6
AB028 (32 mer) {SEQ ID č. 8) ' AAAACTGCAGATGTCCAACCATACCCATCATC3 '
AB029 (35 mer) (SEQ ID č. 9)
5’CGCGGATCCCTAGATCTGTGAGTTGATTGATTTG3' k izolování genu kódujícího protein G (BRSV G) ve formě fragmentu PCR 780 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHI 763 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI, k získání plazmidu pAB012 (5634 pb) (obr. č. 6).
Příklad 11
Konstrukce plazmidu pAB058 (gen BRSV C)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5 s genomovou RNA viru diarrhey hovězího dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L. De Moerlooze a kol., J. Gen. Virol. 74, str. 1433 až 1438, 1993) připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
AB110 (35 mer) (SEQ ID č. 10)
5' AAAACTGCAGATGTCCGACACAAAAGCAGAAGGGG3 '
AB111 (47 mer) (SEQ ID č. 11)
5' CGCGGATCCTCAATAAAAATCATTCCCACTGCGACTTGAAACAAAAC3' k amplifíkaci fragmentu 342 bp obsahujícího gen kódující kapsidový protein C viru BVDV. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a BamHI pro získání fragmentu Pstl-BamHI 324 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI k získání plazmidu pAB058 (5183 pb) (obr. č. 7).
Příklad 12
Konstrukce plazmidu pAB059 (gen BVDV El)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomickou RNA viru diarrhey hovězího dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L. De Moerlooze a kol., J. Gen. Virol. 74, str. 1433 až 1438, 1993) a s následujícími oligonukleotidy:
AB114 (32 mer) (SEQ ID č. 12) ’ ACGCGTCGACATGAAGAAACTAGAGAAAGCCC3'
AB115 (33 mer) (SEQ ID č. 13) ’ CGCGGATCCTCAGCCGGGTTTGCAAACTGGGAG3' k izolování sekvence kódující protein El viru BVDV ve formě fragmentu PCR 1381 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1367 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI k získání plazmidu pAB059 (6246 pb) (obr. č. 8).
Příklad 13
Konstrukce plazmidu pAB060 (gen BVDV E2)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru diarrhey hovězího dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L. De Moerlooze a kol., J. Gen, Virol. 74, str. 1433 až 1438, 1993) a s následujícími oligonukleotidy:
-8CZ 298898 B6
AB116 (36 mer) (SEQ ID č. 14)
5' ACGCGTCGACATGACGACTACTGCATTCCTGGTATG3'
AB117 (33 mer) (SEQ ID č.15) ' CGCGGATCCTCATTGACGTCCCGAGGTCATTTG3' k izolování sekvence kódující protein E2 viru BVDV ve formě fragmentu PCR 1252 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1238 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI, k získání plazmidu pAB060 (6107 pb) (obr. č. 9).
Příklad 14
Konstrukce plazmidu pAB071 (gen BPIV HN)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru parachřipky hovězího io dobytka typu 3 (PI3=BPIV) a s následujícími oligonukleotidy:
AB130 (33 mer) (SEQ ID č. 16)
5’TTTGTCGACATGGAATATTGGAAACACACAAAC3'
AB131 (33 mer) (SEQ ID č. 17)
5'TTTGGATCCTTAGCTGCAGTTTTTCGGAACTTC3' k izolování genu kódujícího glykoprotein NH BPIV (sekvence genu HN, který uložil H. Shibuta v roce 1987, číslo přístupu sekvence GenBank = Y00115) ve formě fragmentu PCR 1737 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1725 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předběžně štěpeného Sáli a BamHI, k získání plazmidu pAB071 (6593 pb) (obr. č. 10).
Příklad 15
Konstrukce plazmidu pAB072 (gen BPIV F)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru parachřipky hovězího dobytka typu 3 (PI3=BPIV) a s následujícími oligonukleotidy:
AB132 (30 mer) (SEQ ID č. 18)
5'TTTGTCGACATGATCATCACAAACACAATC3’
AB133 (30 mer) (SEQ ID č. 19)
5'TTTGGATCCTCATTGTCTACTTGTTAGTAC3' k izolování genu kódujícího protein F viru BPIV (sekvence genu F, který uložil H. Shibuta v roce 1987, číslo přístupu sekvence GenBank = Y00115) ve formě fragmentu PCR 1641 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1629 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI, k získání plazmidu pAB072 (6497 pb) (obr. č. 11).
Příklad 16
Příprava a čištění plazmidů
K přípravě plazmidů, určených k vakcinaci zvířat, je možno použít veškeré techniky dovolující získat suspenzi vyčištěných plazmidů převážně ve formě supersvinuté. Tyto techniky jsou pracovníkům v oboru dobře známé. Používá se hlavně způsobu alkalické lýze následované dvojím následným ultraodstředěním za využití gradientu chloridu česného v přítomnosti bromidu ethidia (Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Připomínají se též patentové dokumenty WO
-9CZ 298898 B6
95/21250 a WO 96/02658, které popisují způsoby průmyslové výroby plazmidů použitelných k vakcinaci. Pro potřeby výroby vakcín (příklad 17), jsou vyčištěné plazmidy resuspendovány způsobem k získání vysoké koncentrace (> 2 mg/ml) vhodné k uskladnění. Za tímto účelem se plazmidy resuspendují buďto v ultračisté vodě, nebo v pufru TE (Tris-HCl 10 mM; EDTA
1 mM, hodnota pH 8,0).
Příklad 17
Výroba asociovaných vakcín
Různé plazmidy, potřebné k výrobě asociovaných vakcíny, jsou směsi pocházející z jejich kon10 centrovaných roztoků (příklad 16). Směsi se připraví tak, aby konečná koncentrace každého plazmidu odpovídala účinné dávce každého plazmidu. Použitelné roztoky k nastavení konečné koncentrace vakcíny mohou být 9% roztoky chloridu sodného nebo pufru PBS. Zvláštní formulace, jako jsou liposomy, kationtové lipidy, mohou též připadat v úvahu k výrobě vakcín.
Příklad 18
Vakcinace hovězího dobytka
Hovězí dobytek se vakcinuje dávkami 100 pg, 250 pg nebo 500 pg každého plazmidu. Injikuje se jehlou intramuskulámě buďto do hýžďového svalu, nebo do oblasti krčních svalů. Dávky vakcíny se podávají v objemech 1 až 5 ml.
Průmyslová využitelnost
Vakcíny pro ošetřování hovězího dobytka napadeného různým virovým onemocněním a k pre25 věnci takových onemocnění.

Claims (14)

1. Vakcína pro vakcinaci skotu, vyznačující se tím, že obsahuje plazmid obsahující gen bovinního respiračního syncytiálního viru, přičemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny
35 F a G, a dále obsahuje vhodný nosič.
2. Vakcína podle nároku 1, vyznačující se tím, že plazmid obsahuje oba dva geny FaG.
40
3. Vakcína podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje plazmid obsahující gen
F a plazmid obsahující gen G.
4. Vakcína podle nároku 1, vyznačující se tím, že plazmid obsahuje gen F.
45
5. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že plazmid obsahuje promotor vybraný ze skupiny obsahující promotor CMV-IE, časný promotor SV40, pozdní promotor SV40, promotor LTR z viru Rousova sarkomu a promotor genu cytoskeletu.
6. Vakcína podle nároku 5, vy z n a č uj í c í se t í m , že promotor je promotor CM V-1E.
7. Vakcína podle nároku 5, vyznačující se tím, že promotor genu cytoskeletu je promotor genu desminu nebo promotor genu aktinu.
-10CZ 298898 B6
8. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7, vyznačující se tím, že dále obsahuje plazmid obsahující a exprimující gen jiné respirační nemoci skotu vybrané ze skupiny sestávající zPI-3 (parainfluenza typu 3), BHV (bovinní herpetický virus) a BVD (bovinní virová diarrhea).
9. Vakcína podle nároku 8, vyznačující se tím, že obsahuje dva plazmidy vybrané ze skupiny obsahující plazmid obsahující gen gB nebo gen gD bovinního herpetického viru, plazmid obsahující gen E2, C+E1+E2 a E1+E2 viru bovinní virové diarrhey a plazmid obsahující gen NH nebo gen F z viru parainfluenzy typu 3.
io
10. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků laž9, vyznačující se tím, že obsahuje 10 ng až 1 mg, výhodně 100 ng až 500 pg a výhodněji 1 pg až 250 pg každého z plazmidů.
11. Použití jednoho nebo více plazmidů popsaných v nárocích 1 až 9, pro výrobu vakcíny proti
15 bovinnímu respiračnímu syncytiálnímu viru, která je určena pro vakcinaci primovakcinovaného skotu užitím první vakcíny vybrané ze skupiny obsahující úplnou živou vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen nebo antigeny kódované plazmidem nebo plazmidy nebo má antigen(y) zajišťující zkříženou ochranu.
12. Vakcinační souprava, vyznačující se tím, že obsahuje druhou vakcínu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10 a první vakcínu, která je vybrána ze skupiny obsahující úplnou živou vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen kódovaný polynukleotidovou vakcínou nebo má antigen
25 zajišťující zkříženou ochranu, pro podávání první vakcíny jako primovakcinace a druhé vakcíny jako revakcinace.
13. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků lažlO, vyznačující se tím, že je použita při revakcinaci po primovakcinaci první vakcínou vybranou ze skupiny obsahující úplnou živou
30 vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen kódovaný polynukleotidovou vakcínou nebo má antigen zajišťující zkříženou ochranu.
14. Použití plazmidu, který je popsán v kterémkoliv z nároků 1 až 7, pro výrobu vakcíny určené
35 pro vakcinaci skotu proti bovinnímu respiračnímu syncytiálnímu viru ve spojení s úplnou vakcínou, živou nebo inaktivovanou, nebo rekombinantní nebo podjednotkovou vakcínou, proti jiné nemoci skotu.
CZ0017599A 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem CZ298898B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609403A FR2751229B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ17599A3 CZ17599A3 (cs) 1999-06-16
CZ298898B6 true CZ298898B6 (cs) 2008-03-05

Family

ID=9494497

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20070776A CZ298915B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem
CZ0017599A CZ298898B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20070776A CZ298915B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem

Country Status (28)

Country Link
US (2) US6376473B1 (cs)
EP (2) EP0912194B1 (cs)
JP (1) JP2000516200A (cs)
AP (1) AP9701044A0 (cs)
AR (1) AR007862A1 (cs)
AT (2) ATE253376T1 (cs)
AU (1) AU734442B2 (cs)
BR (1) BR9710506A (cs)
CA (1) CA2260855C (cs)
CO (1) CO4700306A1 (cs)
CZ (2) CZ298915B6 (cs)
DE (2) DE69734483T2 (cs)
DK (2) DK0912194T3 (cs)
ES (2) ES2254833T3 (cs)
FR (1) FR2751229B1 (cs)
HR (1) HRP970383A2 (cs)
HU (2) HU228353B1 (cs)
ID (1) ID19513A (cs)
IL (2) IL127703A0 (cs)
MA (1) MA24269A1 (cs)
NZ (4) NZ517686A (cs)
PE (1) PE84699A1 (cs)
PL (1) PL190122B1 (cs)
PT (1) PT912194E (cs)
RU (1) RU2305560C2 (cs)
UA (1) UA70914C2 (cs)
WO (1) WO1998003200A2 (cs)
ZA (1) ZA976283B (cs)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
US20040002472A1 (en) * 2000-01-21 2004-01-01 Audonnet Jean-Christophe Francis Vaccination or immunization using a prime-boost regimen
US6852705B2 (en) * 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7078388B2 (en) 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
CA2545886A1 (en) 2003-11-13 2005-06-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of characterizing infectious bursal disease virus
MXPA06009452A (es) 2004-02-19 2007-03-15 Univ Alberta Polimorfismos del promotor de leptin y sus usos.
RS51324B (sr) 2005-04-25 2010-12-31 Merial Ltd. Vakcine protiv nipah virusa
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
EP1951751B1 (en) 2005-11-14 2017-11-01 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
CA2684923C (en) 2007-05-02 2015-01-06 Merial Limited Dna plasmids having improved expression and stability
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
RU2559527C2 (ru) 2008-11-28 2015-08-10 Мериал Лимитед Рекомбинантная вакцина от птичьего гриппа и её применение
CA2757030C (en) 2009-04-03 2019-01-15 Merial Limited Vectors comprising newcastle disease viruses and compositions thereof
JP5933451B2 (ja) 2009-12-28 2016-06-08 メリアル リミテッド 組換えｎｄｖ抗原及びその使用
IN2012DN06589A (cs) 2010-01-19 2015-10-23 Harvard College
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
ES2795148T3 (es) 2010-03-12 2020-11-20 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas recombinantes contra el virus de la fiebre aftosa y usos de las mismas
CA2809127C (en) 2010-08-31 2019-04-02 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
AR084358A1 (es) * 2010-12-27 2013-05-08 Lilly Co Eli Composiciones y metodos para identificar y diferenciar componentes virales de vacunas multivalentes de la “fiebre de embarque” (complejo de enfermedad respiratoria bovina (brdc))
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
AU2012240246A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
EP2694677A2 (en) 2011-04-04 2014-02-12 Netherland Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
WO2012145577A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Merial Limited Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
JP6407714B2 (ja) 2011-04-25 2018-10-17 アドヴァンスド バイオサイエンス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 短縮型ｈｉｖエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）、前記に関連する方法及び組成物
ES2764079T3 (es) 2011-05-27 2020-06-02 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus Hendra y el virus Nipah
US9669085B2 (en) 2011-06-01 2017-06-06 Merial Inc. Needle-free administration of PRRSV vaccines
WO2013012924A2 (en) 2011-07-18 2013-01-24 President And Fellows Of Harvard College Engineered microbe-targeting molecules and uses thereof
ES2626297T3 (es) 2011-08-12 2017-07-24 Merial, Inc. Preservación asistida por vacío de productos biológicos, en particular de vacunas
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
WO2013106558A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Merial Limited Lipid based adjuvants for dna - plasmid vaccines
WO2013123242A1 (en) 2012-02-14 2013-08-22 Merial Limited Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom
EA034564B1 (ru) 2012-02-14 2020-02-20 Мериал, Инк. Ротавирусная субъединичная вакцина, способ ее получения и применение
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
US10801039B2 (en) 2012-06-13 2020-10-13 The University Court Of The University Of Glasgow Reassortant BTV and AHSV vaccines
KR102264852B1 (ko) 2012-08-01 2021-06-14 버베리안 노딕 에이/에스 재조합 변형된 백시니아 바이러스 앙카라(ankara) (mva) 호흡기 신시티알 바이러스(rsv) 백신
WO2014164697A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Merial Limited Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
US10551379B2 (en) 2013-03-15 2020-02-04 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for improving detection and/or capture of a target entity
EP3848044A1 (en) 2013-05-21 2021-07-14 President and Fellows of Harvard College Engineered heme-binding compositions and uses thereof
US10513546B2 (en) 2013-12-18 2019-12-24 President And Fellows Of Harvard College CRP capture/detection of gram positive bacteria
EP3215188A1 (en) 2014-11-03 2017-09-13 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
AR105482A1 (es) 2015-06-23 2017-10-11 Merial Inc Vectores virales recombinantes que contienen la proteína menor del virus del síndrome reproductor y respiratorio porcino (prrsv) y sus métodos de elaboración y uso
WO2017024114A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 President And Fellows Of Harvard College Improved microbe-binding molecules and uses thereof
AU2016308630B2 (en) 2015-08-20 2019-09-19 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. FCV recombinant vaccines and uses thereof
PL3355915T3 (pl) 2015-09-29 2024-03-25 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Szczepionki zawierające cząstki wirusopodobne (VLP) parwowirusa psów (CPV) i ich zastosowania
MA49414A (fr) 2015-11-23 2020-04-22 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Protéines de fusion de dmdv et e2 et leurs utilisations
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109021081B (zh) * 2018-08-10 2019-06-04 山东大学 一种牛病毒性腹泻病毒样颗粒及其构建方法与应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014207A1 (en) * 1992-01-06 1993-07-22 Connaught Laboratories Limited Chimeric immunogens
EP0661059A2 (en) * 1993-12-29 1995-07-05 Bayer Corporation An intranasal bovine trivalent vaccine containing modified live IBRV, PI3V and BRSV
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE105334T1 (de) * 1988-04-22 1994-05-15 Upjohn Co Schimaerische glykoproteine enthaltende immunogenische abschnitte von menschlichem parainfluenzavirus typ 3.
IE912586A1 (en) * 1990-07-24 1992-01-29 Uab Research Foundation Bovine respiratory syncytial virus vaccines
US5541102A (en) * 1994-09-02 1996-07-30 Board Of Regents, University Of Nebraska-Lincoln Bovine cell line resistant to in vitro infection by bovine viral diarrhea virus and all other known pestiviruses
US6019980A (en) * 1995-06-07 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines
US6060457A (en) 1996-06-20 2000-05-09 Universite De Montreal DNA plasmid vaccine for immunization of animals against BVDV
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
JP5566663B2 (ja) * 2009-11-09 2014-08-06 三菱重工業株式会社 多翼遠心ファンおよびそれを用いた空気調和機

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014207A1 (en) * 1992-01-06 1993-07-22 Connaught Laboratories Limited Chimeric immunogens
EP0661059A2 (en) * 1993-12-29 1995-07-05 Bayer Corporation An intranasal bovine trivalent vaccine containing modified live IBRV, PI3V and BRSV
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit

Also Published As

Publication number Publication date
CA2260855A1 (en) 1998-01-29
HUP9902791A3 (en) 2000-03-28
AU3773597A (en) 1998-02-10
IL127703A0 (en) 1999-10-28
DK0912194T3 (da) 2004-03-15
EP1382348B1 (fr) 2005-10-26
IL127703A (en) 2006-12-31
DE69725988D1 (de) 2003-12-11
EP0912194B1 (fr) 2003-11-05
JP2000516200A (ja) 2000-12-05
RU2305560C2 (ru) 2007-09-10
DE69725988T2 (de) 2004-11-11
NZ508940A (en) 2002-09-27
AR007862A1 (es) 1999-11-24
FR2751229A1 (fr) 1998-01-23
DE69734483T2 (de) 2006-07-20
PE84699A1 (es) 1999-11-28
ID19513A (id) 1998-07-16
US6376473B1 (en) 2002-04-23
NZ333751A (en) 2001-03-30
ATE307607T1 (de) 2005-11-15
HU225169B1 (en) 2006-07-28
WO1998003200A3 (fr) 1998-02-26
HU0500910D0 (en) 2005-11-28
CZ17599A3 (cs) 1999-06-16
CZ298915B6 (cs) 2008-03-12
NZ517686A (en) 2003-01-31
AU734442B2 (en) 2001-06-14
DE69734483D1 (de) 2005-12-01
MA24269A1 (fr) 1998-04-01
BR9710506A (pt) 1999-08-17
EP1382348A3 (fr) 2004-01-28
PL331236A1 (en) 1999-07-05
WO1998003200A2 (fr) 1998-01-29
HU228353B1 (en) 2013-03-28
EP1382348A2 (fr) 2004-01-21
NZ508939A (en) 2002-04-26
HUP9902791A2 (hu) 1999-12-28
CA2260855C (en) 2012-01-03
ES2210548T3 (es) 2004-07-01
RU2002132831A (ru) 2005-01-20
US20020160018A1 (en) 2002-10-31
AP9701044A0 (en) 1997-07-31
US6818628B2 (en) 2004-11-16
ZA976283B (en) 1999-01-19
PT912194E (pt) 2004-03-31
UA70914C2 (uk) 2004-11-15
DK1382348T3 (da) 2006-03-13
ATE253376T1 (de) 2003-11-15
EP0912194A2 (fr) 1999-05-06
HRP970383A2 (en) 1998-10-31
PL190122B1 (pl) 2005-11-30
ES2254833T3 (es) 2006-06-16
FR2751229B1 (fr) 1998-11-27
CO4700306A1 (es) 1998-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ298898B6 (cs) Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem
KR100620302B1 (ko) 개 질병, 특히 호흡기 및 소화성 질병 치료용폴리뉴클레오티드 백신 제제
CA2660355C (en) Polynucleotide vaccine formulation against pathologies of the horse
CZ15999A3 (cs) Formulace polynukleotidové vakciny koček
AU776827B2 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU765539B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170716