CZ298915B6 - Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem - Google Patents

Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem Download PDF

Info

Publication number
CZ298915B6
CZ298915B6 CZ20070776A CZ2007776A CZ298915B6 CZ 298915 B6 CZ298915 B6 CZ 298915B6 CZ 20070776 A CZ20070776 A CZ 20070776A CZ 2007776 A CZ2007776 A CZ 2007776A CZ 298915 B6 CZ298915 B6 CZ 298915B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
vaccine
gene
bovine
plasmid
virus
Prior art date
Application number
CZ20070776A
Other languages
English (en)
Inventor
Audonnet@Jean-Christophe
Bouchardon@Annabelle
Baudu@Philippe
Riviere@Michel
Original Assignee
Merial
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial filed Critical Merial
Publication of CZ298915B6 publication Critical patent/CZ298915B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18522—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18622—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18611—Respirovirus, e.g. Bovine, human parainfluenza 1,3
    • C12N2760/18634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/813—Viral vaccine for bovine species, e.g. cattle

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Rešení se týká vakcíny umožnující vakcinaci hovezího dobytka, zvlášte proti nemocem dýchacího ústrojí. Týká se také príslušného zpusobu vakcinace. Popisuje se vakcína pro vakcinaci skotu, která obsahuje plazmid obsahující gen viru parainfluenzy typu3 (PI-3), pricemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny HN a F, a dále obsahuje vhodný nosic. Vevýhodném provedení vakcína muže dále obsahovat plazmid obsahující a exprimující gen jiného patogenurespiracní nemoci skotu vybraného ze skupiny sestávající z BHV (bovinní herpetický virus), BVDV (virus bovinní virové diarrhey) a BRSV (bovinní respiracní syncytiální virus).

Description

(57) Anotace:
Řešení se týká vakcíny umožňující vakcinaci hovězího dobytka, zvláště proti nemocem dýchacího ústrojí. Týká se také příslušného způsobu vakcinace. Popisuje se vakcína pro vakcinaci skotu, která obsahuje plazmid obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 (PI-3), přičemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny HN a F, a dále obsahuje vhodný nosič. Ve výhodném provedení vakcína může dále obsahovat plazmid obsahující a exprimující gen jiného patogenu respirační nemoci skotu vybraného ze skupiny sestávající z BHV (bovinní herpetický virus), BVDV (virus bovinní virové diarrhey) a BRSV (bovinní respirační syncytiální virus).
O σ>
CN
N
O
Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiračním nemocem
Oblast techniky
Vynález se týká vakcíny umožňující vakcinaci hovězího dobytka, zvláště proti nemocem dýchacího ústrojí. Týká se také příslušného způsobu vakcinace.
Dosavadní stav techniky
Veškerý hovězí dobytek je nositelem potenciálně patogenních virů a bakterií ve velmi různé míře.
Viry se mohou rozmnožovat při oslabení specifické imunity a při narušení dýchacích cest. V takovém případě jsou viry obsaženy v exkretech a mohou tedy nakazit ostatní zvířata.
Z virů, které přicházejí v úvahu, se příkladně uvádějí zvláště virus parainfluenzy typu 3 (Pl—3) s mírnou choroboplodností, bovinní (hovězí) respirační syncytiální virus (BRSV) a bovinní herpetický virus (BHV) nazývaný též nakažlivá hovězí rhinotracheitida (IBR) s vysokou choroboplodností.
Jiným obzvláště významným virem, vzhledem kjeho imunodepresivnímu působení a zhoubným účinkům na reprodukci, je virus onemocnění sliznic nebo-li virus bovinní virové diarrhey (BVDV).
Tyto viry se projevují obvykle v první fázi horečkou s chřipkovými příznaky a s dýchacími potížemi a s průjmovými potížemi (diarrhea) v případě BVDV. Tato fáze může být doprovázena fází sekundární s výskytem zánětu průdušek vázaných na bakteriální infekci, zejména Pasteurella, která může vést k úhynu. Tento jev je vyvolán obzvláště následným potlačením imunity vůči infekci BVDV nebo makrofágy po infekci Pl—3. Mohou se vyskytnout i další příznaky, jako zmetání způsobované BVDV a BHV.
Jeví se tudíž jako nutnost poskytnout účinnou prevenci proti hlavním virům působícím dýchací onemocnění hovězího dobytka.
Již v minulosti se navrhovalo spojení vakcín proti některým virům působících dýchací onemocnění hovězího dobytka.
Dosud vyvinuté úsilí se týkalo neaktivovaných vakcín nebo živých vakcín, případně směsí těchto vakcín. Jejich zavedení naráží na problémy vztahu účinnosti a stability. Ve skutečnosti jde o zajištění vztahu mezi různou účinností vakcín se zřetelem na různé použité antigeny nebo se zřetelem na samotné formulace jmenovitě v případech, kde se kombinují neaktivované vakcíny s živými vakcínami. Je také zřejmý problém konzervace takových kombinovaných vakcín a rovněž problém jejich neškodnosti zejména ve spojení s pomocnými prostředky. Obecně jsou takové vakcíny velmi drahé.
Podle patentových dokumentů číslo WO-A-90/11092, WO-A-93/19183, WO—94/21797 a
WO-A-95/20660 se používá nedávno vyvinuté techniky polynukleotidových vakcín. Tvrdí se, že vakcíny používají plazmidu schopného exprese antigenu začleněného do plazmidu v hostitelských buňkách. Navrhují se všechny cesty podávání (například intraperitoneální, intravenosní, intramuskulámí, transkutánní, intradermická a sliznicová čili mukosální). Použit lze rovněž různých vakcinačních prostředků, jako DNA uložených na povrchu částic zlata a urče55 ných k proniknutí do kůže zvířete (Tang a kol., Nátuře 356, str. 152 až 154, 1992) a injikování
-1 CZ 298915 B6 tekutin umožňujících proniknutí do kůže, svalů, tukových tkání a tkání děložních (Furth a kol. Analytical Biochemistry 205, str. 365 a2 368, 1992).
Polynukleotidové vakcíny mohou využívat stejně dobře jak samotné DNA jako takové, tak DNA formulované například na bázi liposomů nebo kationických lipidů.
G.J.M. Cox navrhl polynukleotidovou vakcinaci proti bovinnímu herpetickému viru typu 1 (J. Virology sv. 67, číslo 9 str. 5664 a 5667, září 1993). Rovněž byly popsány zejména plazmidy integrující geny gl (gB), glTI (gC) a glV (gD).
J.E. Crowe (Vaccine, sv. 13, č. 4, str. 415^121, 1995), podává obecný přehled různých způsobů vakcinace proti syncytiálnímu dýchacímu viru a proti viru parainfluenzy typu 3. Tento přehled udává soubor nabízených možností současnými technikami vakcinace a jednoduše předpokládá, že technologie polynukleotidové imunizace by mohla být užitečná ve strategii imunizace vůči
BRSV a Pl—3. V tomto přehledu však není popsána žádná konstrukce plazmidů, ani výsledky protivirové vakcinace hovězího dobytka.
Vynález se také týká formulace několikaúčinné (multivalentní) vakcíny umožňující zajištění vakcinace proti určitému počtu patogenních virů uplatňujících se jmenovitě v dýchací patologii hovězího dobytka a rovněž zajištění účinné vakcinace proti této chorobě.
Vynález se dále týká formulace vakcíny spojující různé účinnosti a všechna požadovaná kriteria kompatibility a stability účinnosti.
Vynález se dále týká formulace vakcíny umožňující spojení různých účinností v jednom nosiči. Vynález se dále také týká formulace vakcíny snadno a levně vyrobitelné.
Vynález se dále týká formulace vakcíny a způsobu vakcinace hovězího dobytka, které umožní získat multiúčinnou ochranu s vysokou účinností a dlouhodobě působící a zároveň neškodnou a bez vedlejších účinků.
Podstata vynálezu
Vynález se týká formulace hovězí vakcíny proti respiračním nemocem hovězího dobytka, která může obsahovat alespoň tři účinné polynukleotidové vakcíny, z nichž každá zahrnuje integrující plazmid k expresi in vivo v hostitelských buňkách, gen účinný na respirační nemoci hovězího dobytka, přičemž jsou tyto účinnosti voleny ze souboru zahrnujícího bovinní herpetický virus, bovinní syncytiální respirační virus, bovinní virus virové diarrhey a virus parainfluenzy typu 3, přičemž plazmidy mají pro každou účinnost jeden nebo několik genů volených ze souboru zahrnujícího gB a gD pro bovinní herpetický virus, F a G pro bovinní syncytiální respirační virus, E2, C + E2 a El + E2 pro virus bovinní diarrhey (onemocnění sliznic), HN a F pro virus parainfluenzy typu 3.
Za účinnost se zde požaduje alespoň jeden antigen zajišťující ochranu proti uvažovanému patogennímu viru, přičemž účinnost může zahrnovat jakožto subúčinnost jeden nebo několik přírodních nebo modifikovaných genů jednoho nebo několika kmenů uvažované choroby.
Za gen patogenního agens se považuje nejenom úplný gen, ale také různé nukleotidové sekvence včetně fragmentů zachovávajících schopnost k vyvolání ochranné odezvy. Termín gen zahrnuje nukleotidové sekvence ekvivalentní se sekvencemi podrobně popsanými v příkladech, tedy různé sekvence, avšak kódující stejný protein. Zahrnuje také nukleotidové sekvence ostatních uvažovaných patogenních kmenů, zaručující příčnou ochranu nebo ochranu specifickou kmenu nebo sku-2CZ 298915 B6 piny kmenu. Zahrnuje také nukleotidové sekvence, které byly modifikovány k usnadnění exprese in vivo u hostitelského zvířete avšak kódující stejný protein.
Předmětem vynálezu je zejména vakcína pro vakcinací skotu, která obsahuje plazmid obsahující gen viru parainfluenzy typu 3, přičemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny HN a F, a dále obsahuje vhodný nosič.
Ve výhodném provedení vakcína podle vynálezu může dále obsahovat plazmid obsahující a exprimující gen jiného patogenu respirační nemoci skotu vybraného ze skupiny sestávající ío z HBV (bovinní herpetický virus), BVDV (virus bovinní virové diarrhey a BRSV (bovinní respirační syncytiální virus).
Pokud jde o účinnost BHV, dává se přednost dvěma genům kódujícím gB a gD v různých plazmidech nebo v jednom a tomtéž plazmidu. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít jed15 noho nebo druhého z těchto genů.
Pro účinnost BRSV se používá s výhodou dvou genů G a F, začleněných do dvou různých plazmidů nebo do jednoho a téhož plazmidu. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít genu F samotného.
Pro účinnost BVDV se používá s výhodou genu E2. Případně, avšak méně výhodně, je možno použít plazmidu kódující El a E2 společně a skupinu tvořenou C, El a E2.
Pro účinnost Pl—3 se používá s výhodou skupiny dvou genů HN a F v různých plazmidech nebo 25 v jednom a témže plazmidu. Použít lze také jediného genu NH.
Výhodná formulace vakcíny podle vynálezu může zahrnovat a zaručovat expresi genu gB a gD z BHV, G a F z REV, E2 z BVDV a HN a F z PI-3.
Formulace vakcíny podle vynálezu může být ve formě dávky o objemu 0,1 až lOml a zejména 1 až 5 ml.
Dávka obvykle zahrnuje 10 ng až 1 mg, s výhodou 100 ng až 500 pg a výhodněji také 1 pg až
250 pg podle typu plazmidu.
S výhodou se používá prostých plazmidů jednoduše včleněných do vakcinačního nosiče, kterým je obecně například fyziologický roztok (0,9% roztok chloridu sodného), ultračistá voda a pufr TE. Lze ostatně použít všechny formy polynukleotidové vakcíny popsané ve stavu techniky.
Každý plazmid obsahuje promotor schopný zajistit expresi začleněného genu v závislosti na hostitelských buňkách. Obecně je to eukaryotický silný promotor a zejména časný promotor cytomegaloviru CMV-IE, lidského nebo myšího nebo případně jiného původu, jako např. z krysy, prasete nebo morčete.
Obecněji by mohl být promotor buď virového nebo buněčného původu. Jako virový promotor kromě CMV-IE je možno uvést časný nebo pozdní promotor kromě CMV-IE je možno uvést časný nebo pozdní promotor viru SV40 nebo promotor LTR viru Rousova sarkomu. Může to také být promotor viru, jehož původcem je gen, například promotor genu.
Jako buněčný promotor se uvádí promotor genu cytoskeletu, jako je například promotor desminu (Bolmont a kol., Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology, 22, str. 117 až 122 1990 a Zhenlin a kol., Gene 78, str. 243 až 254 1989) nebo ještě promotor aktinu.
Jelikož ve stejném plazmidu je obsaženo několik genů, mohou být obsažena ve stejné transkripč55 ní jednotce nebo ve dvou různých jednotkách.
-3 CZ 298915 B6
Kombinace různých účinností vakcíny podle vynálezu se mohou provádět s výhodou smísením polynukleotidových plazmidů exprimujících antigen nebo antigeny každé účinnosti, nebo lze rovněž předběžně nechat exprimovat několikaúčinné antigeny stejným plazmidem.
Vynález se také týká formulací jednoúčinných vakcín obsahujících jeden nebo několik plazmidů kódujících jeden nebo několik genů, shora popsaných, jednoho ze zvolených virů ze souboru zahrnujícího BRSV, BVDV a PI-3. Oproti jejich jednoúčinnému charakteru mohou tyto formulace zaujmout shora uvedené charakteristiky, pokud jde například o volbu genu, jejich kombinaci, složení plazmidů, objemů dávky a dávek.
Formulace jednoúčinné vakcíny mohou být využity (i) k přípravě formulace víceúčinných vakcín jak shora popsáno, (ii) individuálně proti příslušné patologii, (iii) spojení s vakcínou jiného typu (živé nebo inaktivované, rekombinantní, podjednotkové) proti jiné patologii nebo (iv) se zřetelem na shora popsanou vakcínu.
Vynález se také týká použití různých plazmidů podle vynálezu k výrobě vakcíny určené k vakcinaci prvotně vakcinovaného (primo-vakcinovaného) hovězího dobytka alespoň první klasickou vakcínou typu dosavadního stavu techniky volenou jmenovitě ze souboru zahrnujícího dřívější živou vakcínu, inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu nebo rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína obsahuje nebo může exprimovat alespoň jeden kódovaný antigen alespoň jedním plazmidem nebo alespoň jedním antigenem zajišťujícím křížovou ochranu.
Výhodně má polynukleotidová vakcína účinek, který se dá vyjádřit zesílením imunitní odezvy a založení dlouhodobě imunity.
Obecně vakcíny prvotní vakcinace mohou být voleny z obchodně dostupných vakcín od výrobců veterinárních vakcín.
Vynález se týká také vakcinačního kitu (soupravy) obsahujícího vakcínu první vakcinace jak dále popsáno a formulací vakcíny podle vynálezu pro porovnání.
Vynález se týká také způsobu vakcinace hovězího dobytka proti respiraěním chorobám s podáváním formulace účinné vakcíny shora popsané. Tento způsob vakcinace zahrnuje podávání jedné nebo několika dávek formulace vakcíny, přičemž mohou být tyto dávky podávány pos35 tupně v krátkých časových intervalech a/nebo postupně v okamžicích navzájem vzdálených.
Formulace vakcíny podle vynálezu mohou být podávány v rámci tohoto způsobu vakcinace různými cestami podání, známými ze stavu techniky pro polynukleotidové vakcinace a známými technikami vakcinace.
Vynález se týká také způsobu vakcinace spočívajícího v provádění primo-vakcinace, jak dále popsáno, a s formulací vakcíny podle vynálezu.
Při jednom výhodném způsobu podle vynálezu se podává zvířeti napřed účinná dávka vakcíny klasického typu, jmenovitě inaktivované, živé, utlumené nebo rekombinantní, nebo také vakcíny podjednotkové k zajištění primo-vakcinace a s výhodou s problením2 až 6 týdnů se zajistí podání víceúčinné nebo monoúčinné vakcíny podle vynálezu.
Při jednom výhodném způsobu podle vynálezu se podává zvířeti například účinná dávka vakcíny klasického typu, jmenovitě inaktivované, živé, utlumené nebo rekombinantní, nebo také vakcíny podjednotkové k zajištění primo-vakcinace a s výhodou s prodlením 2 až 6 týdnů se zajistí podání víceúčinné nebo monoúčinné vakcíny podle vynálezu.
Vynález zahrnuje také způsob přípravy formulace vakcíny podle tohoto popisu.
-4CZ 298915 B6
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení vynálezu přiložených obrázků.
Seznam obrázků
Obr. 1: Plazmid pVR1012
Obr. 2: Sekvence genu BHV-1 ST gB
Obr. 3: Konstrukce plazmidu pBV 156
Obr. 4: Plazmid pAB087
Obr. 5: Plazmid pABOl 1
Obr. 6: Plazmid pABOl2
Obr. 7: Plazmid pAB058
Obr. 8: Plazmid pAB060
Obr. 9: Plazmid pAB071
Obr. 10: Plazmid pAB072
Seznam sekvencí:
20 SEQ ID č. 1: SEQ ID č. 2: SEQ IDč.3: SEQ ID č. 4: SEQ ID č. 5: sekvence genu BHV-1 gB (kmen ST) oligonukleotid PB234 oligonukleotid PB235 oligonukleotid AB162 oligonukleotid AB163
25 SEQ ID č. 6: oligonukleotid AB026
SEQ ID č. 7: oligonukleotid AB027
SEQ ID č. 8: oligonukleotid AB028
SEQ ID č. 9: oligonukleotid AB029
SEQ IDč. 10 oligonukleotid AB110
30 SEQ ID č. 11 oligonukleotid AB 111
SEQ IDČ. 12 oligonukleotid AB 114
SEQ ID č. 13 oligonukleotid AB115
SEQ IDČ. 14 oligonukleotid AB 116
SEQ IDč. 15 oligonukleotid AB117
35 SEQ IDč. 16 oligonukleotid AB130
SEQ IDč. 17 oligonukleotid AB 131
SEQ ID č. 18 oligonukleotid AB132
SEQ IDč. 19 oligonukleotid AB133
-5CZ 298915 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Kultivace virů
Viry se pěstují v buněčném systému využitém až do získání cytopatického jevu. Buněčné systéio my k použití pro každý virus jsou pracovníkům v oboru dobře známy. Stručně řečeno, buňky citlivé na použity virus, pěstované v minimálním médiu podle Eagle (médium „MEM“) nebo v jiném vhodném prostředí, se očkují studovaným virovým kmenem za použití jednonásobku infekce. Infikované buňky se tedy inkubují při teplotě 37 °C po dobu potřebnou k výskytu úplného cytopatického jevu (nejméně 36 hodin).
Příklad 2
Extrakce virových genomických DNA
Po kultivaci, supematant a lýzované buňky se shromáždí a celá virová suspense se odstředí při 1000 g během 10 minut při teplotě +4 °C k vyloučení buněčných úlomků. Pak se virové částice podrobí ultraodstředění při 400000 g po dobu jedné hodiny při teplotě + 4 °C. Sraženina se vyjme do minimálního množství pufru (Tris 10 mM, EDTA 1 mM). Tato koncentrovaná virová suspen25 se se zpracuje proteinázou K (100 pg/ml konečný) v přítomnosti dodecylsulfátu sodného (SDS) (0,05 % konečný) během dvou hodin při teplotě 37 °C. Virová DNA se pak extrahuje směsí fenol/chloroform a pak se vysráží se dvěma objemy absolutního ethanolu. Nechá se stát přes noc pří teplotě -20 °C, DNA se odstředí při 10000 g během 15 minut při teplotě +4 °C. Sraženina DNA se suší a vyjme se do minimálního množství sterilní ultračisté vody. Naštěpí se restrikčními enzymy.
Příklad 3
Izolování genomických virových RNA
Virová RNA se čistí způsobem dobře známým pro pracovníky v oboru. Genomické virové RNA se pak izoluje za použití extrakční techniky „thiokyanát guanidinu/fenol-chloroform“, kterou popsali P. Chomczynski aN. Sacchi (Anal. Biochem. 162, str. 156 až 159, 1987).
Příklad 4
Technika molekulární biologie 45
Všechny konstrukce plazmidů se uskutečnily standardní technikou molekulární biologie kterou popsal J. Sambrook a technikou molekulární biologie kterou popsal J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Všechny restrikční fragmenty pro tento vynález byly izolovány pomocí kitu „Geneclean“ (BIO101 lne. La Jolla, CA).
Příklad 5
Technika RT-PCR
-6CZ 298915 B6
Specifické oligonukleotidy (nesoucí na 5' koncích restrikční místa k usnadnění klonování amplifikovaných fragmentů) byly syntetizovány tak, že pokrývají úplně kódující oblasti genů před amplifikací (viz specifické příklady). Polymerázová řetězová reakce (PCR) spražená s reverzní transkripcí (RT) byla provedena standardním způsobem (J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Sring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Každá reakce RT-PCR byla provedena s dvojicí specifických amplifikačních primerů za použití genomické RNA z virového extraktu jakožto matrice. Amplifikované komplementární DNA byly izolovány pomocí směsi fenol/chloroform/isoamylalkohol (25,24:1) před ío štěpením restrikčními enzymy.
Příklad 6
Plazmid bVR1012
Plazmid bVR1012 (obr. 1) byl získán od Vical lne. San Diego, CA, USA. Konstrukci popsal J. Hartokka a kol. (Human Gene Therapy, 7, str. 1205 až 1217, 1996).
Příklad 7
Konstrukce plazmidu pPB156 (gen BHV-lgB)
Genomická DNA bovinního herpetického viru BHV (kmen DT) LeungTack P., a kol. Virology 199, str. 409 až 421, 1994), připravená technikou popsanou v příkladu 2 se štěpí BamHI. Po vyčištění se klonuje fragment BamHI-BamHI 18 kpb do vektoru pBR322 předtím štěpeného BamHI za získání plazmidu pIBR4-BamHI (22 lpb). Plazmid plBR-4-BamHI se pak štěpí Sáli k uvolnění fragmentu Sall-Sall 6,6 kpb obsahujícího gen kódujícího glykoprotein gB BHV-1 (obr. 2 a SEQ ID č. 1). Tento fragment byl klonován ve vektoru pBR322, před tím štěpeného Sáli, pro získání plazmidu plBR-6,6-Sall (10,9 kpb). Plazmid plBR-6,6-Salt se štěpí Nhel a BglII k uvolnění fragmentu Nhel-BglII 2676 bp obsahujícího gen kódující glykoprotein gB viru oparu hovězího dobytka (BHV-1) (fragment A). Reakce PCR se uskuteční s genomickou DNA bovinního herpetického viru (BHV-1) (kmen ST) a s následujícími oligonukleotidy:
PB234 (30 mer) (SEQ IDč. 1)
5'TTGTCGACATGGCCGCTCGCGGCGGPGCTG3'
PB235 (21 mer) (SEQ ID č. 3)
5'GCAGGGCAGCGGCTAGCGCGG3’ k izolování části 5' genu kódujícího glykoprotein bB BHV-1. Po vyčištění, se produkt PCR 153 bp štěpí Sáli a Nhel k izolování fragmentu Sall-Nhel 145 bp (fragment B). Fragmenty A a B se vážou spolu s vektorem pVR1012 (příklad 6), předem štěpeným Sáli a BamHI, k vytvoření plazmidu pPB156 (7691 pb) (obr. č. 3).
Příklad 8
Konstrukce plazmidu pAB087 (gen BHV-1 gD)
-7CZ 298915 B6
Provádí se reakce PCR s genomickou DNA bovinního herpetického viru (BHV-1) (kmen ST) (P.Leung-Tack a kol. Virology, 199, str. 409 až 421,1994) připravenou způsobem popsaným v příkladu 2 s následujícími oligonukleotidy:
AB 162 (31 mer) (SEQ ID č. 4)
5'AAACTGCAGATGCAAGGGCCGACATTGGCCG3'
AB163 (27 mer) (SEQ ID č. 5)
5’ATCTTGTACCATATGACCGTGGCGTTG3' pro amplifikaci 5' části kódujícího glykoproteidu gD bovinního herpetického viru (BHV-1) (přístupové číslo sekvence GenBank = L26360) ve formě fragmentu PCR 448 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a Ndel k izolování fragmentu Pstl-Ndel 317 bp (fragment A).
Plazmid pBNHVOOl (P. Leung-Tack P a kol. Virology 199, str. 409 až 421, 1994) se štěpí Ndel a Styl k uvolnění fragmentu 942 bp obsahujícího 3' část genu kódujícího glykoprotein gD BHV1 (fragment B). Fragmenty A a B se ligují s vektorem PVRl 012 (příklad 6) předem štěpeným
Pstl a Xbal, pro vytvoření plazmidu pAB087 (6134 pb) (obr. 4).
Příklad 9
Konstrukce plazmidu pABO 11 (gen BRSV F)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genovou RNA syncytiálního respiračního viru hovězího dobytka (BRSV) (kmen 391-2) (R. Lerch a kol. Virology 181, str. 118 až 131 1991), připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
AB026 (33 mer) (SEQ ID č. 6) ’ AAAACTGCAGGGATGGCGGCAACAGCCATGAGG3 ’
AB027 (31 mer) (SEQ ID č. 7)
5’CGCGGATCCTCATTTACTAAAGGAAAGATTG3’ k izolování genu kódujícího glykoprotein fúze F (BRSV F) ve formě fragmentu PCR 1734 bp. Po 40 vyčištění se fragment štěpí Pstl a bamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHI 1717 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI, k získání plazmidu pABOl 1 (6587 pb) (obr. č. 5).
Příklad 10
Konstrukce plazmidu pABOl2 (gen BRSV G)
Provádí se reakce RT-PCR popsaná v příkladu 5 s genomovou RNA syncytiálního respiračního 50 viru hovězího dobytka (BRSV) (kmen 391-2) (R. Lerch a kol. Virology 64, str. 5559 až 5569,
1990), připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
-8CZ 298915 B6
AB028 (32 mer) (SEQ ID č. 8)
5'AAAACTGCAGATGTCCAACCATACCCATCATC3
AB029 (35 mer) (SEQ ID č. 9)
5'CGCGGATCCCTAGATCTGTGAGTTGATTGATTTG3’ k izolování genu kódujícího protein G (BRSV G) ve formě fragmentu PCR 780 bp. Po vyčištění io se fragment štěpí Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHI 763 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI, k získání plazmidu pAB012 (5634 pb) (obr. č. 6)
Přikladli
Konstrukce plazmidu pAB058 (gen BRSV C)
Provádí se reakce RT-PCR popsané v příkladu 5 s genomovou RNA viru diarrhey hovězího 20 dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L. De Moerlooze a kol., J. gen. Virol. 74, str. 1433 až 1438,
1993) připravenou jak uvedeno v příkladu 3 a s následujícími oligonukleotidy:
ABI 10 (35 mer) (SEQ ID č. 10) 25 5’AAAACTGCAGATGTCCGACACAAAAGCAGAAGGGG3'
ABI 11 (47 mer) (SEQ ID č. 11)
5' CGCGGATCCTCAATAAAAATCATTCCCACTGCGACTTGAAACAAAAC3' k amplifikaci fragmentu 342 bp obsahujícího gen kódující kapsidový protein C viru BVDV. Po vyčištění se fragment štěpí Pstl a BamHI pro získání fragmentu Pstl-BamHI 324 bp. Tento Pstl a BamHI pro získání fragmentu Pstl-BamHI 324 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Pstl a BamHI k získání plazmidu pAB058 (5183 pb) (obr. č. 7).
Příklad 12
Konstrukce plazmidu pAB059 (gen BVDV El)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomickou RNA viru diarrhey hovězího dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L. De Moerlooze a kol., J. Gen. Virol. 74, str. 1433 až 1438, 1993) a s následujícími oligonukleotidy:
ABI 14 (32 mer) (SEQ ID č. 12)
5’ACGCGTCGACATGAAGAAACTAGAGAAAGCCC3'
ABI 15 (33 mer) (SEQ ID č. 13)
5’CGCGGATCCTCAGCCGGGTTTGCAAACTGGGAG3’
-9CZ 298915 B6 k izolování sekvence kódující protein El viru BVDV ve formě fragmentu PCR 1381 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1367 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI k získání plaz5 midu pAB059 (6246 pb) (obr. č. 8).
Příklad 13 ío Konstrukce plazmidu pAB060 (gen BVDV E2)
Provádí se reakce RT-PC:R, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru diarrhey hovězího dobytka (BVDV) (kmen Osloss) (L, De Moerlooze a kol., J. Gen. Virol. 74, str. 1433 až 1438, 1993) a s následujícími oligonukleotidy:
AB116(36mer) (SEQ ID č. 14)
5'ACGCGTCGACATGACGACTACTGCATTCCTGGTATG3’
AB117 (33 mer) (SEQ ID č. 15)
5’CGCGGATCCTCATTGACGTCCCGAGGTCATTTG3’ k izolování sekvence kódující protein E2 viru BVDV ve formě fragmentu PCR 1252 bp. Po 25 vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1238 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI, k získání plazmidu pAB060 (6107 pb) (obr. ě. 9).
Příklad 14
Konstrukce plazmidu pAB071 (gen BPIV HN)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru parainfluenzy hově35 zího dobytka typu 3 (PI3=BPIV) a s následujícími oligonukleotidy:
AB130 (33 mer) (SEQ ID č. 16)
5’TTTGTCGACATGGAATATTGGAAACACACAAAC3'
AB131 (33 mer) (SEQ ID č. 17)
5'TTTGGATCCTTAGCTGCAGTTTTTCGGAACTTC3' k izolování genu kódujícího glykoprotein NH BPIV (sekvence genu HN, který uložil H. Shibatu v roce 1987, přístupové číslo sekvence GenBank = Y00115) ve formě fragmentu PCR 1737 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1725 bp. Tento fragment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sáli a BamHI, k získání plazmidu pAB017 (6593 pb) (obr. č. 10).
- 10CZ 298915 B6
Příklad 15
Konstrukce plazmidu pAB072 (gen BPIV F)
Provádí se reakce RT-PCR, popsaná v příkladu 5, s genomovou RNA viru parainfluenzy hovězího dobytka typu 3 (PI3=BP1V) a s následujícími oligonukleotidy:
AB132 (30 mer) (SEQ ID č. 18)
5'TTTGTCGACATGATCATCACAAACACAATC3'
AB133 (30 mer) (SEQ ID. č. 19) 15 5’TTTGGATCCTCATTGTCTACTTGTTAGTAC3’ k izolování genu kódujícího protein F viru BPIV (sekvence genu F, který uložil H. Shibuta v roce 1987, přístupové číslo sekvence GenBank - Y00115) ve formě fragmentu PCR 1641 bp. Po vyčištění se fragment štěpí Sáli a BamHI k získání fragmentu Sall-BamHI 1629 bp. Tento frag20 ment se liguje do vektoru pVR1012 (příklad 6) předem štěpeného Sall a BamHI, k získání plazmidu pAB072 (6497 pb) (obr. č. 11).
Příklad 16
Příprava a čištění plazmidů
K přípravě plazmidů, určených k vakcinaci zvířat, je možno použít veškeré techniky dovolující získat suspensi vyčištěných plazmidů převážně v supersvinuté formě. Tyto techniky jsou pracov30 níkům v oboru dobře známé. Používá se hlavně způsobu alkalické lyse následované dvojím následným ultraodstředěním za využití gradientu chloridu česného v přítomnosti bromidu ethidia (Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Faboratory Manual, 2. vydání Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Připomínají se též patentové dokumenty WO 95/21250 a WO 96/02658, které popisují způsoby průmyslové výroby plazmidů použitelných k vakcinaci. Pro potřeby výroby vakcín (příklad 17), jsou vyčištěné plazmidy resuspendovány způsobem k získání vysoké koncentrace (>2 mg/ml) vhodné k uskladnění. Za tímto účelem se plazmidy resuspendují buďto v ultračisté vodě nebo v pufru TE (Tris-HCl 10 mM; EDTA 1 mM, hodnota pH 8,0).
Příklad 17
Výroba asociovaných vakcín
Různé plazmidy, potřebné k výrobě asociované vakcíny, jsou směsi pocházející z jejich koncentrovaných roztoků (příklad 16). Směsi se připraví tak, aby konečná koncentrace každého plazmidu odpovídala účinné dávce každého plazmidu. Použitelné roztoky k nastavení konečné koncentrace vakcíny mohou být 9% roztoky chloridu sodného nebo pufru PBS. Zvláštní formulace, jako jsou liposomy, kationtové lipidy, mohou též připadat v úvahu k výrobě vakcín.
Příklad 18
Vakcinace hovězího dobytka
-11 CZ 298915 B6
Hovězí dobytek se vakcinuje dávkami 100 gg, 250 gg nebo 500 gg každého plazmidu. Injikuje se jehlou intramuskulámě buďto do hýžďového svalu nebo do oblasti krčních svalů. Dávky vakcíny se podávají v objemech 1 až 5 ml.
Průmyslová využitelnost
Vakcíny podle vynálezu pro ošetřování hovězího dobytka napadeného různým virovým onemocněním a k prevenci takových onemocnění.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (13)

1. Vakcína pro vakcinaci skotu, vy z n a č uj í c í se t í m , že obsahuje plazmid obsahující gen viru paraifluenzy typu 3 (PI-3), přičemž gen je vybrán ze skupiny obsahující geny HN a F, a dále obsahuje vhodný nosič.
2. Vakcína podle nároku 1,vyznačující se tím, že plazmid obsahuje oba dva geny HNaF.
3. Vakcína podle nároku 1,vyznačující se tím, že obsahuje plazmid obsahuj ící gen
25 HN a plazmid obsahující gen F.
4. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků laž 3, vyznačující se tím, že plazmid obsahuje promotor vybraný ze skupiny obsahující promotor CMV-IE, časný promotor SV40, pozdní promotor SV40, promotor LTR z viru Rousova sarkomu a promotor genu cytoskeletu.
5. Vakcína podle nároku 4, v y z n a č u j í c í se t í m , že promotor je promotor CMV-IE.
6. Vakcína podle nároku 4, vyznačující se tím, že promotor genu cytoskeletu je promotor genu desminu nebo promotor genu aktinu.
7. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že dále obsahuje plazmid obsahující a exprimující gen jiného patogenu respirační nemoci skotu, vybraného ze skupiny sestávající z bovinního respiračního syncytiálního viru (BRSV), bovinního herpetického viru (BHV) a viru bovinní virové diarrhey (BVDV).
8. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že obsahuje dva plazmidy vybrané ze skupiny obsahující plazmid obsahující gen gB nebo gen gD bovinního herpetického viru (BHV), plazmid obsahující gen E2, C+E1+E2 a E1+E2 viru bovinní virové diarrhey (BVDV) a plazmid obsahující gen F nebo G bovinního respiračního syncytiálního viru
45 (BRSV).
9. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že obsahuje
10 ng až 1 mg, výhodně 100 ng až 500 gg a výhodně 1 gg až 250 gg každého z plazmidů.
50 10. Použití jednoho nebo více plazmidů popsaných v nárocích 1 až 9, pro výrobu vakcíny, která je určena pro vakcinaci primovakcinovaného skotu užitím první vakcíny vybrané ze skupiny obsahující úplnou živou vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen nebo antigeny kódované polynukleotidovou vakcínou nebo má antigen nebo antigeny zajišťující zkříženou ochranu.
- 12CZ 298915 B6
11. Vakcinační souprava, vyznač u j í cí se tí m , že obsahuje druhou polynukleotidovou vakcínu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9 a první vakcínu, která je vybrána ze skupiny obsahující úplnou živou vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen kódovaný polynukleotidovou vakcí5 nou nebo má antigen zajišťující zkříženou ochranu, pro podávání první vakcíny jako primovakcinace a druhé vakcíny jako revakcinace.
12. Vakcína podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že je určena pro použití při revakcinaci po primovakcinaci první vakcínou vybranou ze skupiny obsahující úplnou ío živou vakcínu, úplnou inaktivovanou vakcínu, podjednotkovou vakcínu, rekombinantní vakcínu, přičemž první vakcína má antigen kódovaný polynukleotidovou vakcínou nebo má antigen zajišťující zkříženou ochranu.
13. Použití plazmidu, který je popsán v kterémkoliv z nároků 1 až 9, pro výrobu vakcíny určené
15 pro vakcinaci skotu proti viru parainfluenzy typu 3 ve spojení s úplnou vakcínou, živou nebo inaktivovanou, nebo rekombinantní nebo podjednotkovou vakcínou proti jiné nemoci skotu.
13 výkresů
CZ20070776A 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem CZ298915B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609403A FR2751229B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ298915B6 true CZ298915B6 (cs) 2008-03-12

Family

ID=9494497

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20070776A CZ298915B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem
CZ0017599A CZ298898B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0017599A CZ298898B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Vakcína obsahující gen bovinního respiracního syncytiálního viru pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem

Country Status (28)

Country Link
US (2) US6376473B1 (cs)
EP (2) EP0912194B1 (cs)
JP (1) JP2000516200A (cs)
AP (1) AP9701044A0 (cs)
AR (1) AR007862A1 (cs)
AT (2) ATE253376T1 (cs)
AU (1) AU734442B2 (cs)
BR (1) BR9710506A (cs)
CA (1) CA2260855C (cs)
CO (1) CO4700306A1 (cs)
CZ (2) CZ298915B6 (cs)
DE (2) DE69734483T2 (cs)
DK (2) DK0912194T3 (cs)
ES (2) ES2254833T3 (cs)
FR (1) FR2751229B1 (cs)
HR (1) HRP970383A2 (cs)
HU (2) HU228353B1 (cs)
ID (1) ID19513A (cs)
IL (2) IL127703A0 (cs)
MA (1) MA24269A1 (cs)
NZ (4) NZ517686A (cs)
PE (1) PE84699A1 (cs)
PL (1) PL190122B1 (cs)
PT (1) PT912194E (cs)
RU (1) RU2305560C2 (cs)
UA (1) UA70914C2 (cs)
WO (1) WO1998003200A2 (cs)
ZA (1) ZA976283B (cs)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751229B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins
US20040002472A1 (en) * 2000-01-21 2004-01-01 Audonnet Jean-Christophe Francis Vaccination or immunization using a prime-boost regimen
US6852705B2 (en) * 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US7078388B2 (en) 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
CA2545886A1 (en) 2003-11-13 2005-06-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Methods of characterizing infectious bursal disease virus
MXPA06009452A (es) 2004-02-19 2007-03-15 Univ Alberta Polimorfismos del promotor de leptin y sus usos.
RS51324B (sr) 2005-04-25 2010-12-31 Merial Ltd. Vakcine protiv nipah virusa
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
EP1951751B1 (en) 2005-11-14 2017-11-01 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
CA2684923C (en) 2007-05-02 2015-01-06 Merial Limited Dna plasmids having improved expression and stability
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
RU2559527C2 (ru) 2008-11-28 2015-08-10 Мериал Лимитед Рекомбинантная вакцина от птичьего гриппа и её применение
CA2757030C (en) 2009-04-03 2019-01-15 Merial Limited Vectors comprising newcastle disease viruses and compositions thereof
JP5933451B2 (ja) 2009-12-28 2016-06-08 メリアル リミテッド 組換えｎｄｖ抗原及びその使用
IN2012DN06589A (cs) 2010-01-19 2015-10-23 Harvard College
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
ES2795148T3 (es) 2010-03-12 2020-11-20 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas recombinantes contra el virus de la fiebre aftosa y usos de las mismas
CA2809127C (en) 2010-08-31 2019-04-02 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
AR084358A1 (es) * 2010-12-27 2013-05-08 Lilly Co Eli Composiciones y metodos para identificar y diferenciar componentes virales de vacunas multivalentes de la “fiebre de embarque” (complejo de enfermedad respiratoria bovina (brdc))
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
AU2012240246A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
EP2694677A2 (en) 2011-04-04 2014-02-12 Netherland Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
WO2012145577A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Merial Limited Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
JP6407714B2 (ja) 2011-04-25 2018-10-17 アドヴァンスド バイオサイエンス ラボラトリーズ インコーポレイテッド 短縮型ｈｉｖエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）、前記に関連する方法及び組成物
ES2764079T3 (es) 2011-05-27 2020-06-02 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus Hendra y el virus Nipah
US9669085B2 (en) 2011-06-01 2017-06-06 Merial Inc. Needle-free administration of PRRSV vaccines
WO2013012924A2 (en) 2011-07-18 2013-01-24 President And Fellows Of Harvard College Engineered microbe-targeting molecules and uses thereof
ES2626297T3 (es) 2011-08-12 2017-07-24 Merial, Inc. Preservación asistida por vacío de productos biológicos, en particular de vacunas
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
WO2013106558A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Merial Limited Lipid based adjuvants for dna - plasmid vaccines
WO2013123242A1 (en) 2012-02-14 2013-08-22 Merial Limited Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and ox40 proteins, and vaccines made therefrom
EA034564B1 (ru) 2012-02-14 2020-02-20 Мериал, Инк. Ротавирусная субъединичная вакцина, способ ее получения и применение
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
US10801039B2 (en) 2012-06-13 2020-10-13 The University Court Of The University Of Glasgow Reassortant BTV and AHSV vaccines
KR102264852B1 (ko) 2012-08-01 2021-06-14 버베리안 노딕 에이/에스 재조합 변형된 백시니아 바이러스 앙카라(ankara) (mva) 호흡기 신시티알 바이러스(rsv) 백신
WO2014164697A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Merial Limited Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
US10551379B2 (en) 2013-03-15 2020-02-04 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for improving detection and/or capture of a target entity
EP3848044A1 (en) 2013-05-21 2021-07-14 President and Fellows of Harvard College Engineered heme-binding compositions and uses thereof
US10513546B2 (en) 2013-12-18 2019-12-24 President And Fellows Of Harvard College CRP capture/detection of gram positive bacteria
EP3215188A1 (en) 2014-11-03 2017-09-13 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
AR105482A1 (es) 2015-06-23 2017-10-11 Merial Inc Vectores virales recombinantes que contienen la proteína menor del virus del síndrome reproductor y respiratorio porcino (prrsv) y sus métodos de elaboración y uso
WO2017024114A1 (en) 2015-08-06 2017-02-09 President And Fellows Of Harvard College Improved microbe-binding molecules and uses thereof
AU2016308630B2 (en) 2015-08-20 2019-09-19 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. FCV recombinant vaccines and uses thereof
PL3355915T3 (pl) 2015-09-29 2024-03-25 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Szczepionki zawierające cząstki wirusopodobne (VLP) parwowirusa psów (CPV) i ich zastosowania
MA49414A (fr) 2015-11-23 2020-04-22 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Protéines de fusion de dmdv et e2 et leurs utilisations
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109021081B (zh) * 2018-08-10 2019-06-04 山东大学 一种牛病毒性腹泻病毒样颗粒及其构建方法与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014207A1 (en) * 1992-01-06 1993-07-22 Connaught Laboratories Limited Chimeric immunogens
EP0661059A2 (en) * 1993-12-29 1995-07-05 Bayer Corporation An intranasal bovine trivalent vaccine containing modified live IBRV, PI3V and BRSV
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
EP1382348A2 (fr) * 1996-07-19 2004-01-21 Merial Formule de vaccin polynucléotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE105334T1 (de) * 1988-04-22 1994-05-15 Upjohn Co Schimaerische glykoproteine enthaltende immunogenische abschnitte von menschlichem parainfluenzavirus typ 3.
IE912586A1 (en) * 1990-07-24 1992-01-29 Uab Research Foundation Bovine respiratory syncytial virus vaccines
US5541102A (en) * 1994-09-02 1996-07-30 Board Of Regents, University Of Nebraska-Lincoln Bovine cell line resistant to in vitro infection by bovine viral diarrhea virus and all other known pestiviruses
US6019980A (en) * 1995-06-07 2000-02-01 Connaught Laboratories Limited Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines
US6060457A (en) 1996-06-20 2000-05-09 Universite De Montreal DNA plasmid vaccine for immunization of animals against BVDV
JP5566663B2 (ja) * 2009-11-09 2014-08-06 三菱重工業株式会社 多翼遠心ファンおよびそれを用いた空気調和機

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993014207A1 (en) * 1992-01-06 1993-07-22 Connaught Laboratories Limited Chimeric immunogens
EP0661059A2 (en) * 1993-12-29 1995-07-05 Bayer Corporation An intranasal bovine trivalent vaccine containing modified live IBRV, PI3V and BRSV
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
EP1382348A2 (fr) * 1996-07-19 2004-01-21 Merial Formule de vaccin polynucléotidique notamment contre la pathologie respiratoire des bovins

Also Published As

Publication number Publication date
CA2260855A1 (en) 1998-01-29
HUP9902791A3 (en) 2000-03-28
AU3773597A (en) 1998-02-10
IL127703A0 (en) 1999-10-28
DK0912194T3 (da) 2004-03-15
EP1382348B1 (fr) 2005-10-26
IL127703A (en) 2006-12-31
DE69725988D1 (de) 2003-12-11
EP0912194B1 (fr) 2003-11-05
JP2000516200A (ja) 2000-12-05
RU2305560C2 (ru) 2007-09-10
DE69725988T2 (de) 2004-11-11
NZ508940A (en) 2002-09-27
AR007862A1 (es) 1999-11-24
FR2751229A1 (fr) 1998-01-23
DE69734483T2 (de) 2006-07-20
PE84699A1 (es) 1999-11-28
ID19513A (id) 1998-07-16
US6376473B1 (en) 2002-04-23
NZ333751A (en) 2001-03-30
ATE307607T1 (de) 2005-11-15
HU225169B1 (en) 2006-07-28
WO1998003200A3 (fr) 1998-02-26
HU0500910D0 (en) 2005-11-28
CZ17599A3 (cs) 1999-06-16
NZ517686A (en) 2003-01-31
AU734442B2 (en) 2001-06-14
DE69734483D1 (de) 2005-12-01
MA24269A1 (fr) 1998-04-01
BR9710506A (pt) 1999-08-17
CZ298898B6 (cs) 2008-03-05
EP1382348A3 (fr) 2004-01-28
PL331236A1 (en) 1999-07-05
WO1998003200A2 (fr) 1998-01-29
HU228353B1 (en) 2013-03-28
EP1382348A2 (fr) 2004-01-21
NZ508939A (en) 2002-04-26
HUP9902791A2 (hu) 1999-12-28
CA2260855C (en) 2012-01-03
ES2210548T3 (es) 2004-07-01
RU2002132831A (ru) 2005-01-20
US20020160018A1 (en) 2002-10-31
AP9701044A0 (en) 1997-07-31
US6818628B2 (en) 2004-11-16
ZA976283B (en) 1999-01-19
PT912194E (pt) 2004-03-31
UA70914C2 (uk) 2004-11-15
DK1382348T3 (da) 2006-03-13
ATE253376T1 (de) 2003-11-15
EP0912194A2 (fr) 1999-05-06
HRP970383A2 (en) 1998-10-31
PL190122B1 (pl) 2005-11-30
ES2254833T3 (es) 2006-06-16
FR2751229B1 (fr) 1998-11-27
CO4700306A1 (es) 1998-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ298915B6 (cs) Vakcína obsahující gen viru parainfluenzy typu 3 pro vakcinaci skotu proti respiracním nemocem
US6228846B1 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies
US6558674B1 (en) Polynucleotide vaccine formulation against pathologies of the horse
CZ15999A3 (cs) Formulace polynukleotidové vakciny koček
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU776827B2 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter
AU5427401A (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Effective date: 20170716