PL188409B1 - Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni - Google Patents

Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni

Info

Publication number
PL188409B1
PL188409B1 PL97331202A PL33120297A PL188409B1 PL 188409 B1 PL188409 B1 PL 188409B1 PL 97331202 A PL97331202 A PL 97331202A PL 33120297 A PL33120297 A PL 33120297A PL 188409 B1 PL188409 B1 PL 188409B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
plasmid
vaccine
promoter
nucleotide sequence
vaccine according
Prior art date
Application number
PL97331202A
Other languages
English (en)
Other versions
PL331202A1 (en
Inventor
Jean-Christophe Audonnet
Annabelle Bouchardon
Michel Riviere
Original Assignee
Merial Sas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial Sas filed Critical Merial Sas
Publication of PL331202A1 publication Critical patent/PL331202A1/xx
Publication of PL188409B1 publication Critical patent/PL188409B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/27—Equine rhinopneumonitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Szczepionka do leczenia koni, znamienna tym, ze obejmuje przynajmniej: (i) plazmid lub plazmidy, które zawieraja i wyrazaja in vivo w komórce gospodarza konskiego sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace gB, gC lub gB i gD konskiego wirusa zapalenia nosa i pluc (EHV); (ii) plazmid lub plazmidy, które zawieraja i wyrazaja in vivo w komórce gospodarza konskiego sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace HA, NP, N lub HA i NP konskiego wirusa grupy (EIV); (iii) plazmid lub plazmidy, które zawieraja i wyrazaja in vivo w komórce gospoda- rza konskiego sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace podjed- nostke C toksyny tezca; i (iv) farmaceutycznie dopuszczalna zaróbke. 2. Szczepionka wedlug zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje plazmid(y) zawie- rajace i wyrazajace sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace gB lub gD EHV-4 i/lub EHV-1. 3. Szczepionka wedlug zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje plazmid(y) zawie- rajacy(e) i wyrazajacy(e) sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace gB i gD EHV-4 i/lub EHV-1. 4. Szczepionka wedlug zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje plazmid(y) zawie- rajacy(e) i wyrazajacy(e) sekwencje nukleotydowa lub sekwencje nukleotydowe kodujace HA lub HA i NP EIV. PL

Description

Przedmiotem wynalazku są szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni.
188 409
Istnieje względnie duża różnorodność chorób koni. Obok dobrze poznanych chorób układu oddechowego, takich jak zapalenie jamy nosowej i płuc i grypy, konie są wrażliwe, szczególnie na kontynencie amerykańskim, na patogeny wywołujące zapalenia opon mózgowych i mózgu. Na koniec konie mogą chorować na różne inne schorzenia, można wymienić między innymi tężec, chorobę z Lyme i końskie zapalenie stawów, nie należy zapominać o niebezpieczeństwie ekspozycji na wirusa wścieklizny.
Okoliczności, w jakich konie są poddawane ekspozycji na różne patogenne drobnoustroje staję się coraz częstsze ze względu na przemieszczanie wielkich ilości koni na znacznych odległościach czy to drogą lądową. czy też powietrzną, tak więc ryzyko zakażeń ma tendencję wzrostową
Jednakże z punktu widzenia wysokiej ceny tych zwierząt, zwłaszcza w przypadku zwierząt hodowlanych, koni pod siodło i koni wyścigowych z powodów ekonomicznych ważne jest kontrolowanie, tak bardzo jak to możliwe, ryzyka zakażeń, które atakują zwierzęta i powodują ich niesprawność przez długi okres czasu albo utratę tych zwierząt. Istnieje już znacząca liczba szczepionek dla koni, o różnej skuteczności.
Tak więc, przeciwko zapaleniu jamy nosowej i płuc koni, wywoływanemu przez różne szczepy wirusa herpes koni (EHV) stworzono szczepionki inaktywowane albo podjednostkowe, które jednakże wykazują pewne ograniczenia, wyrażane jako niepełna i krótkoterminowa ochrona i być może problematyczne bezpieczeństwo szczepionki związane z zastosowanym adiuwantem.
Starano się zapobiegać grypie koni, która jest inną istotną chorobą poprzez szczepienia. Używane szczepionki to szczepionki inaktywowane lub podjednoskowe, które są skuteczne do pewnego stopnia, pomimo to nie są pozbawione wad.
Stąd ochrona jest zwykle niepełna i zwykle o względnie krótkim czasie trwania, przez co wymaga ponownych szczepień, tak jak w przypadku zapalenia nosa i płuc. Są również problemy z bezpieczeństwem.
Stworzono również oparte szczepionki na anatoksynie przeciwtężcowej i są one niezaprzeczalnie skuteczne.
Szczepionki przeciwko zapaleniu opon mózgowych i mózgu, niektórym wschodnim typom zapalenia opon mózgowych i mózgu, zachodnim typom zapalenia opon mózgowych i mózgu i wenezuelskiemu zapaleniu opon mózgowych i mózgu również istnieją, choć ich skuteczność jest ciągle słabo poznana.
Ze względów ekonomicznych z jednej strony i racjonalnego zarządzania szczepieniem koni z drugiej strony proponowano multiwalentne kompozycje szczepionek do zapobiegania wielu z tych chorób zakaźnych.
W kombinacjach, które do tej pory wytwarzano zastosowano szczepionki inaktywowane albo żywe, i jeśli było to konieczne, ich mieszaniny. Ich wprowadzenie stworzyło problem ze zgodnością między wartościowościami i ze stabilnością. Tak więc, istnieje potrzeba osiągnięcia zgodności między różnymi wartościowościami, zarówno ze względu na wykorzystanie różnych antygenów i ze względu na samą kompozycję, zwłaszcza w sytuacji, gdy połączone są w tym samym czasie szczepionki inaktywowane i żywe. Istnieje również problem z trwałością takich kombinowanych szczepionek, jak również z ich bezpieczeństwem szczególnie w obecności adiuwantu.
Następnie kompozycje te nie dawały możliwości połączenia trzech podstawowych wartościowości to znaczy grypy koni, zapalenia nosa i płuc, zwłaszcza EHV-1 i EHV-4 i wartościowości dla tężca. Znane są na przykład kombinacje wartościowości grypy i zapalenia opon mózgowych i mózgu albo zapalenia nosa i płuc w połączeniu z zapaleniem opon mózgowych i mózgu.
W zgłoszeniach patentowych WO-A-90) 11092, WO-A-93 19183, WO-A- 94 21797 i WO-A-95 20660 proponowano stosowanie obecnie rozwijanych technik szczepionek polinukleotydowych. Wiadomo, że szczepionki te wykorzystują plazmid zdolny do wyrażania w komórkach gospodarza antygenu włączonego do plazmidu. Proponowano wszystkie drogi podawania (dootrzewnową, dożylną, domięśniową, przezskómą, śródskórną, śluzówkową i podobne). Wykorzystywane są różne śluzówkową i podobne. Wykorzystywane są różne rodzaje szczepień, takie jak DNA zdeponowany na cząstkach złota i wystrzeliwane tak, że pene6
188 409 truje przez skórę zwierzęcia (Tang i in., Nature 356, 152-154, 1992) i automatyczne strzykawki wstrzykujące strumień płynu, które powodują, że jest możliwa jednoczesna transfekcja skóry, tkanek mięśniowych, tkanek tłuszczowych i tkanek gruczołu sutkowego (Fuith i in., Analytical Biochemistry, 205, 365-368, 1992).
Szczepionki polinukleotydowe mogą również wykorzystywać zarówno nagie DNA jak i kompozycję DNA, na przykład wewnątrz kationowych lipidów albo liposomów.
Wektory polinukleotydowe integrujące geny HA i NT próbowano stosować u myszy, fretek i kurcząt w przypadku wirusa grypy. Nie ma danych dla koni.
W odniesieniu do tężca, ostatnio doniesiono, że szczepienie myszy plazmidem, który wyraża nie-toksyczny C-końcowy region toksyny tężcowej, łącznie z fragmentem C wywołuje wystąpienie w surowicy myszy przeciwciał ochronnych.
Jednakże nie jest możliwe proste przełożenie wyników uzyskanych na tych zwierzętach 0 krótkim okresie życia na inne ssaki, zwłaszcza ssaki o dużych rozmiarach.
Dlatego istnieje potrzeba uzyskania poprawy ochrony przeciwko chorobom zakaźnym zwierząt kopytnych, zwłaszcza koni.
Celem wynalazku jest dostarczenie takiej kompozycji szczepionki zawierającej różne wartościowości, która spełnia wszystkie wymagane kryteria wzajemnej zgodności i stabilności wartościowości, która umożliwia połączenie różnych wartościowości w tej samej zaróbce oraz która jest łatwa i niedroga w użyciu.
Dalszym celem wynalazku jest dostarczenie kompozycji która umożliwi taki sposób szczepień koni, w wyniku którego uzyska się ochronę, w tym ochronę multiwalentną, z wysokim poziomem skuteczności i długim czasem trwania, z wysokim stopniem bezpieczeństwa.
Tak więc niniejszy wynalazek dotyczy kompozycji szczepionki przeciw chorobom koni obejmującej przynajmniej trzy wartościowości szczepionki polinukleotydowej, z których każda zawiera plazmid integrujący gen z wartościowością jednej patologii zwierząt kopytnych i wyraża go in vivo w komórce gospodarza, przy czym wartościowości te wybrano z grupy obejmującej wirusa zapalenia jamy nosowej i płuc, EHV, wirusa grypy koni, ElV i tężca (Cl. tetani), plazmidów zawierających dla każdej wartościowości, jeden lub więcej genów wybranych z grupy obejmującej gB i gD dla wirusa zapalenia jamy nosowej i płuc, HA, NP i N dla wirusa grypy koni i geny kodującego całą albo część podjednostki C toksyny tężcowej.
Szczepionki do leczenia koni według wynalazku obejmuje przynajmniej (i) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące gB, gC lub gB i gD końskiego wirusa zapalenia nosa i płuc (EHV); (ii) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące HA, NP, N lub HA i NP końskiego wirusa grupy (ElV); (iii) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące podjednostkę C toksyny tężca; i farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka obejmuje plazmid(y) zawierające i wyrażające sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące gB i/lub gD EhV-4 i/lub EHV-1. W kolejnym korzystnym wykonaniu szczepionka obejmuje plazmid(y) zawierający(e) i wyrażający(e) sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące HA lub HA i NP EIV.
W dalszym korzystnym wykonaniu szczepionka obejmuje przynajmniej jeden plazmid zawierający i wyrażający in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową kodującą antygen wirusa wschodniego zapalenia mózgu (EEV), antygen wirusa zachodniego zapalenia mózgu (WEV), antygen wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu (VEV), antygen B. burgdorferi antygen końskiego wirusa zapalenia tętnic lub antygen wirusa wścieklizny, korzystnie obejmuje plazmid(y) zawierające C lub C i E2 EEV, C lub C i E2 WEV, C lub C i E2 VEV, lub C lub C i E2 EEV, WEV i VEV, korzystnie plazmid(y) zawierające i wyrażające OspA B. burgdorferi. Według korzystnego wykonania wynalazku szczepionka obejmuje od 10 ng do lmg każdego plazmidu, korzystnie, od 100 ng do 500 pg każdego plazmidu, jeszcze korzystniej od 1 pg do 250 (ig każdego plazmidu określonego w punktach (i) - (iii) ze str. 5.
188 409
W korzystnym wykonaniu szczepionce według wynalazku towarzyszy ulotka wskazująca, że ta szczepionka może być użyta jako przypominająca dla pierwszej szczepionki dla koni, wybranej z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym pierwsza szczepionka zawiera antygen(y), kodowany(e) przez plazmid(y) lub antygen(y) zapewniaj ący(e) odporność krzyżową.
Wynalazek obejmuje też szczepionkę dla koni obejmującą przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową kodującą gB, gD, lub gB i gD końskiego wirusą zapalenia nosa i płuc (EHV) i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, a korzystnie plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową koduj ącągB i gD EHV.
Szczególnie korzystnie szczepionka obejmuje pierwszy plazmid zawierający i wyrażający sekwencję nukleotydową kodującą gB EHV i drugi plazmid zawierający i wyrażający sekwencję nukleotydową kodującą gD EHV.
W korzystnym wykonaniu EHV jest EHV-1, korzystniej EHV jest EHV-4, jeszcze korzystniej obejmuje przynajmniej sekwencję nukleotydową z EHV-1 i przynajmniej sekwencję nukleotydową z EHV-4.
Przedmiotem wynalazku jest również szczepionka dla koni obejmująca przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą HA, NP, Ν EIV lub ich kombinację i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, a korzystnie plazmid zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą HA EIV, lub NP EIV.
W korzystnym wykonaniu szczepionka według wynalazku obejmuje pierwszy plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą HA EIV i drugi plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową NP EIV.
W zakres wynalazku wchodzi również szczepionka dla koni, którą obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą C, E2 lub C i E2 końskiego wirusa zapalenia mózgu i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę a korzystnie obejmuje plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą C i E2, korzystniej obejmuje pierwszy plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą C i drugi plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą E2.
Korzystniej wirus końskiego zapalenia mózgu jest wirusem wenezuelskiego zapalenia mózgu (VEV), wirusem wschodniego zapalenia mózgu (EEV), wirusem zachodniego zapalenia mózgu (WEV).
Korzystnie szczepionka obejmuje sekwencje nukleotydowe z VEV i WEV, VEV i EEV, WEV i EEV lub WEV, VEV i EEV.
W innym wykonaniu szczepionka według wynalazku obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą G wirusa wścieklizny i farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę.
W jeszcze innym wykonaniu szczepionka według wynalazku obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową koduj ącąE, Μ, N, lub ich kombinacje wirusa końskiego zapalenia tętnic.
W korzystnym wykonaniu szczepionka według wynalazku jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej(wych) plazmid(y) obejmuje(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE.
W kolejnym korzystnym wykonaniu szczepionka według wynalazku jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor LTR wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu, przy czym korzystnym promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
Wartościowość według niniejszego wynalazku należy rozumieć jako przynajmniej jeden antygen zapewniający ochronę przeciwko wirusowi jako rozważanemu patogenowi, i jest możliwe, że wartościowość zawiera, jako pddwartościowości, jeden lub więcej zmodyfikowanych lub naturalnych genów z jednego lub więcej szczepów rozważanego patogenu.
188 409
Gen czynnika patogennego należy rozumieć nie tylko jako gen kompletny, lecz również jako różnorodne sekwencje nukleotydowe, w tym fragmenty zachowujące zdolność do wywołania odpowiedzi odpornościowej. Wyrażenie, że geny pokrywają sekwencje nukleotydowe monowalentne z tymi opisanymi szczegółowo w przykładach, dotyczy sekwencji różniących się, lecz kodujących to samo białko. Oznacza to również sekwencje nukleotydowe innych szczepów rozważanego patogenu, które zapewniają ochronę krzyżową albo ochronę charakterystyczną dla danego szczepu albo grupy szczepu. Oznacza również sekwencje nukleotydowe, które zostały zmodyfikowane w celu ułatwienia ekspresji in vivo w zwierzęciu będącym gospodarzem, lecz ciągle kodują to samo białko.
Tak więc, szczególnie korzystnie kompozycja szczepionki według wynalazku obejmuje wartościowości dla zapalenia jamy nosowej i płuc koni, przynajmniej jeden antygen ze szczepu EHV-1 i przynajmniej jeden antygen ze szczepu EHV-4, przy czym korzystnie te antygeny są tym samym typem antygenu.
Terapeutycznie skuteczne ilości wartościowości polinukleotydowych, zawarte są w zaróbce, którą można podawać zwierzętom, korzystnie domięśniowo. Korzystnie zaróbka jest zaróbką wodną, pozbawioną olejowych składników.
W odniesieniu do wartościowości dla zapalenia jamy nosowej i płuc koni korzystnie zastosowane mogą być oba geny gB i gD, korzystnie ze szczepu EHV, zwłaszcza ze szczepów 1 i 4.
W odniesieniu do wartościowości dla grypy koni korzystnie można wykorzystać geny kodujące hemaglutyninę HA albo zastosować można kombinację genów kodujących HA i NP. Sekwencje HA wirusa grypy, zwłaszcza z różnych szczepów spotykanych na danym obszarze, są korzystnie połączone w jednej szczepionce. Z drugiej strony, NP zapewnia krzyżową odporność, tak więc sekwencja z jednego szczepu wirusa będzie wystarczająca.
W odniesieniu do wartościowości dla tężca, korzystne jest wykorzystanie podjednostki C, korzystnie zmodyfikowanej przez mutację i delecję.
Połączenie genów kodujących kilka antygenów dla jednej i tej samej wartościowości, albo antygenów jednego i tego samego szczepu w jedną wartościowość można osiągnąć przez zmieszanie plazmidów, ekspresjonujących pojedynczy antygen albo, przeciwnie przez włączenie kilku genów do jednego i tego samego plazmidu.
Szczepionka w której połączone są różne wartościowości można korzystnie uzyskać przez zmieszanie plazmidów polinukleotydowych, wyrażających jeden lub więcej antygenów dla danej wartościowości, ale również możliwe jest uzyskanie wyrażenia wielu antygenów różnych wartościowości w jednym i tym samym typie wektora, w plazmidzie.
W korzystnej postaci wynalazku, kompozycja może również obejmować jedną lub więcej wartościowości innych patogenów końskich, zwłaszcza wartościowości dla wschodniego zapalenia opon mózgowych i mózgu, EEV, zachodniego zapalenia opon mózgowych i mózgu, WEV i wenezuelskiego zapalenia opon mózgowych i mózgu, VEV, korzystnie wszystkie trzy jednocześnie.
Wartościowości również korzystnie mogą obejmować wartościowość dla choroby z Lyme, B. burgdorferi, zapalenia stawów koni (EAV) i wścieklizny.
Wykorzystywane geny wyżej wymienionych zapaleń opon mózgowych i mózgu to geny dla antygenów C i E2, korzystnie gen E2 sam albo w połączeniu z dwoma genami E2 i C.
W przypadku wartościowości dla choroby z Lyme, wybiera się pomiędzy genami OspA, OspB i plOO, korzystny jest gen OspA.
W przypadku zapalenia stawów koni, wybierane są geny E, M i N, stosowane zarówno samodzielnie, jak i w połączeniu.
W przypadku wścieklizny wybierany jest gen G.
Kompozycję szczepionki według wynalazku można dostarczyć w postaci dawki o objętości generalnie między 0,1 a 10 ml, -a zwłaszcza między 1 a 5 ml.
Zazwyczaj dawka jest w zakresie między 10 ng a 1 mg, korzystnie między 100 ng a 500 ng, jeszcze korzystniej między 1 |_g a 250 (ig na dany rodzaj plazmidu.
Korzystnie stosuje się nagie plazmidy po prostu w zaróbce do szczepionki, którą zazwyczaj będzie sól fizjologiczna (0,9% NaCl), woda destylowana, bufor TE i podobne. Mogą oczywiście zostać wykorzystane wszystkie kompozycje szczepionki polinukleotydowej wcześniej opisane w stanie techniki.
188 409
Każdy plazmid zawiera promotor zdolny do zapewnienia ekspresji włączonego genu, pod jego kontrolą w komórkach gospodarza. Zazwyczaj będzie to silny promotor eukariotyczny, a zwłaszcza wczesny promotor CMV-IE wirusa cytomegalii pochodzenia ludzkiego lub mysiego, albo ewentualnie innego pochodzenia; od szczurów, świń albo od świnek morskich.
Bardziej ogólnie, promotor może być zarówno pochodzenia wirusowego jak i komórkowego. Jako promotor wirusowy można wymienić wczesny i późny promotor wirusa SV40 albo promotor LTR wirusa mięsaka Rous'a. Możliwy jest również promotor wirusa, z którego pochodzi gen, na przykład własny promotor genu.
Jako promotor komórkowy może być wymieniony promotor genu cytoszkieletu, taki jak na przykład promotor desminy (Bolmont i in., Joumał of Submicroscopic Cytology and pathology, 1990, 22, 117-122; i Zhenlin i in., Gene, 1989, 78, 243-254), albo alternatywnie promotor aktyny.
Gdy kilka genów jest prezentowanych w tym samym plazmidzie, to mogą być prezentowane w tej samej jednostce transkrypcji lub w dwóch różnych.
Sposób szczepienia obejmuje podawanie jednej lub więcej dawek kompozycji szczepionki.
Kompozycje szczepionki według wynalazku mogą być podawane według tego sposobu szczepienia, innymi sposobami podawania opisanymi we wcześniejszym stanie techniki dla szczepionek polinukleotydowych albo znanymi technikami podawania. Jednakże korzystna jest zwłaszcza domięśniowa droga podawania.
Możliwe jest szczepienie drogą domięśniową z użyciem przyrządu do wtryskiwania płynu, korzystnie o wielu strumieniach, wtiyskiwacza do wstrzyknięć, a zwłaszcza wtryskiwacza do wstrzyknięć z głowicą do wstrzyknięć o wielu jamach lub o wielu końcówkach wylotowych, szczególnie posiadającego od 5 do 6 jam lub końcówek wylotowych, taki jak przyrząd Pigjet produkowany i rozprowadzany przez Endoscoptic, Laons, France.
Objętość dawki dla takich przyrządów zostanie korzystnie zmniejszona do zakresu od 0,1 do 0,9 ml, a zwłaszcza od 0,2 do 0,6 ml i korzystnie do zakresu między 0,4 a 0,5 ml, będzie możliwe podawanie tej objętości w jednym lub wielu wstrzyknięciach, korzystnie w dwu wstrzyknięciach.
Wyżej opisane szczepionki monowlentne mogą zostać wykorzystane zwłaszcza do przygotowania poliwalentnej szczepionki według wynalazku.
Kompozycja monowałentnej szczepionki może zostać wykorzystana w połączeniu ze szczepionką innego rodzaju (pełną żywą lub inaktywowaną, rekombinowaną lub podjednostkową) przeciwko innym czynnikom chorobotwórczym, lub jako dawka przypominająca dla szczepionki opisanej powyżej.
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest również zastosowanie jednego lub więcej plazmidów opisanych powyżej do wytwarzania szczepionki do szczepienia koni, które początkowo zaszczepiono pierwszą szczepionką wybraną z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym ta pierwsza szczepionka zawiera antygen lub antygeny kodowane przez plazmid lub plazmidy, lub antygen(y), które zapewniają odporność krzyżową.
Warte odnotowania jest, że szczepionka polinukleotydowa posiada potencjalne działanie dawki przypominającej co powoduje spotęgowanie odpowiedzi immunologicznej i nabycie długotrwałej odporności.
Ogólnie, szczepionka służąca do pierwszego szczepienia może być wybrana ze szczepionek różnych producentów szczepionek weterynaryjnych dostępnych na rynku.
W korzystnym wykonaniu sposobu według wynalazku skuteczna dawka tradycyjnej szczepionki, zwłaszcza inaktywo wanej, żywej, atenuowanej albo rekombinowanej albo jeszcze szczepionki podjednostkowej jest jako pierwsza podawana zwierzętom jako szczepienie początkowe a szczepionka poliwalentna albo monowalentna według wynalazku jest podawana po okresie oczekiwania korzystnie po 2 do 4 tygodni. Wynalazek również dotyczy zestawu do szczepień koni, który obejmuje szczepionkę według wynalazku (B) i szczepionkę (A) wybraną z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym szczepionka (A) ta zawiera antygen(y), który jest (są) kodowany(e) przez plazmid(y) lub antygen(y) zapewniający(e)
188 409 odporność krzyżową, i szczepionka (A) przeznaczona jest do pierwszego szczepienia, a do szczepienia przypominającego szczepionka (B) według wynalazku.
Wynalazek teraz zostanie opisany bardziej szczegółowo przez wykonania wynalazku przedstawione w odniesieniu do załączonych rysunków.
Lista Figur
Figura nr 1 Figura nr 2 Figura nr 3 Figura nr 4 Figura nr 5 Figura nr 6 Figura nr 7 Figura nr 8 Figura nr 9 Figura nr 10 Figura nr 11 Figura nr 12 Figura nr 13 Figura nr 14 Figura nr 15 Figura nr 16 Figura nr 17 Figura nr 18 Figura nr 19 Figura nr 20
Plazmid pVR1012
Plazmid pAB042
Plazmid pAB031
Plazmid pAB013
Plazmid pAB032
Plazmid pAB043
Plazmid pAB033
Sekwencja genu HA grypy koni szczep Fontainbleau
Plazmid pAB099
Plazmid pAB085
Plazmid pAB084
Plazmid pAB070
Plazmid pAB017
Plazmid pAB094
Plazmid pAB093
Plazmid pAB096
Plazmid pAB095
Plazmid pAB098
Plazmid pAB097
Plazmid pAB041
Lista sekwencji Id.
Id. Sekw. nr 1 Id. Sekw. nr 2 Id. Sekw. nr 3 Id. Sekw. nr 4 Id. Sekw. nr 5 Id. Sekw. nr 6 Id. Sekw. nr 7 Id. Sekw. nr 8 Id. Sekw. nr 9 Id. Sekw. nr 10 Id. Sekw. nr 11 Id. Sekw. nr 12 Id. Sekw. nr 13 Id. Sekw. nr 14 Id. Sekw. nr 15 Id. Sekw. nr 16 Id. Sekw. nr 17 Id. Sekw. nr 18 Id. Sekw. nr 19 Id. Sekw. nr 20 Id. Sekw. nr 21 Id. Sekw. nr 22 Id. Sekw.nr 23 Id. Sekw. nr 24 Id. Sekw. nr 25 Id. Sekw. nr 26 Id. Sekw. nr 27 Id. Sekw. nr 28
Sekw. nr:
oligonukleotyd AB013 oligonukleotyd AB014 oligonukleotyd AB071 oligonukleotyd AB074 oligonukleotyd AB030 oligonukleotyd AB031 oligonukleotyd AB075 oligonukleotyd AB076 oligonukleotyd AB015 oligonukleotyd AB016 oligonukleotyd AB077 oligonukleotyd AB078 oligonukleotyd AB 186 oligonukleotyd AB 187
Sekwencja genu HA grypy koni szczep Fontainbleau oligonukleotyd AB 156 oligonukleotyd AB 159 oligonukleotyd AB 157 oligonukleotyd AB 128 oligonukleotyd AB 129 oligonukleotyd AB038 oligonukleotyd AB039 oligonukleotyd AB 176 oligonukleotyd AB 177 oligonukleotyd AB 174 oligonukleotyd AB 175 oligonukleotyd AB 180 oligonukleotyd AB 181
188 409
Id. Sekw. nr 29 Id. Sekw. nr 30 Id. Sekw. m 31 Id. Sekw. m 32 Id. Sekw. m 33 Id. Sekw. nr 3 4 Id. Sekw. nrr 4 Id. Sekw. nrr 4 oligonukleotyd AB 178 oligonukleotyd AB179 oligonukleotyg AB18o oligonukleotyd AB ieo oligonukleotyd AB 17o oligonukleotyd AB183 oligonukleotyd rUBOl 1 oligonukleotyd rUkOl 2
Przykłady
Przykład 1: Hodowla wirusa
Wirusy hoduje się w odpowiednim układzie komórkowym, do uzyskania efektu cytopatycznego. Układy komórkowe do zastosowania dla każdego z wirusów są znane specjalistom. Pokrótce, komórki wrażliwe na wirusa, które hoduje się w minimalnej niezbędnej pożywce Eagle'a (MEM) albo inne odpowiedniej pożywce, zakaża się badanym szczepem wirusa stosując wielokrotność zakażenia równą 1. Zakażone komórki inkubuje się w 47°C przez okres czasu niezbędny do wystąpienia całkowitego efektu cytopatycznego (średnio 46 godzin).
Przykład 2: Hodowla bakterii
Tężec... Bakterie hodowano w odpowiedniej pożywce, w warunkach dobrze znanym specjalistom, aż do uzyskania biomasy bakterii wystarczającej do ekstrakcji materiału genetycznego. Ekstrakcję przeprowadzono według klasycznych technik opisanych przez J. Sambrook i in., (Molecular cloning: A Laboratory Manuał, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989).
Szczepy Borelia burgdorferi hodowano w odpowiedniej pożywce, w warunkach dobrze znanym specjalistom. Warunki te i pożywka są opisane w szczegółach przez A. Barbour (J. Biol. Med. 1984, 57. 71-75). Ekstrakcję bakteryjnego DNA przeprowadzono w warunkach opisanych przez W. Simpson i in., (Infect. Immun. 1990. 58. 847-854). Klasyczne techniki opisane zostały przez J. Sambrook i in., (Molecular cloning: A Laboratory Manuał, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989).
Przykład 4: Ekstrakcja wirusowych genomowych DNA
Po hodowli, nadsącz i rozłożone komórki zbiera się i całą zawiesinę wirusa wiruje się przy 1000 g przez 10 minut w 4°C w celu usunięcia resztek komórkowych. Cząstki wirusa zbiera się przez ultrawirowanie przy 400000 g przez godzinę w 4°C. Osad pobiera się w minimalnej objętości bufora (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Tę zatężoną zawiesinę wirusa traktuje się proteinaząK (100 pg/ml objętości końcowej) w obecności soli sodowej siarczanu dodecylu (SDS) (0,5%) przez 2 godziny w 47°C. Wirusowy DNA ekstrahuje się mieszaniną fenol/chloroform i precypituje 2 objętościami absolutnego etanolu. Po pozostawieniu przez noc w -20°C, DNA wiruje się przy 10000 g przez 15 minut w 4°C. Osad DNA suszy się i pobiera w minimalnej objętości sterylnej, ultraczystej wody. Następnie można go trawić enzymami restrykcyjnymi.
Przykład 4: Izolacja wirusowych genomowych RNA
Wirusy RNA oczyszczono według technik znanych specjalistom. Następnie, genomowy wirusowy RNa każdego z wirusów izolowano stosując technikę ekstrakcji „tiocyjanian guanidyny/fenol-chloroform” opisaną przez Chomczynski i Sacchi (Anal. Biochem., 1987, 162:156-159).
Przykład 5: Techniki biologii molekularnej
Wszystkie konstrukcje plazmidów przeprowadzono stosując standardowe techniki biologii molekularnej, opisane przez Sambrook i in., (Molecular Cloning: A Laboratory Manuał, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Wszystkie fragmenty restrykcyjne zastosowane do wynalazku wyizolowano stosując zestaw „Geneclean” (BIO 101 Inc., La Jolla, CA).
Przykład 6: TechnikaRT-PCR
Swoiste oligonukleotydy (obejmujące miejsca restrykcyjne na końcach 5' w celu ułatwienia klonowania amplifikowanych fragmentów) syntetyzowano w taki sposób, że pokrywały w całości regiony kodujące genów, które miały być amplifikowane (patrz, konkretne
188 409 przykłady). Reakcję odwrotnej transkrypcji (RT) i reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) przeprowadzono technikami standardowymi (Sambrook i in., 1989). Każdą z reakcji RT-PCR przeprowadzono z parą swoistych starterów amplifikacji z ekstrahowanym genomowym wirusowym RNA jako matrycą. Amplifikowany komplementarny DNA ekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform/alkohol izoamylowy (25:24:1), po czym trawiono enzymami restrykcyjnymi.
Przykład 7: plazmidpVR1012
Plazmid pVR1012 (figura 1) otrzymano z Vical Inc., San Diego, CA, USA. Jego konstrukcję opisano w Hartikka i in. (Human Gene Therapy, 1996, 7:1205-1217).
Przykład 8: Konstruowanie plazmidu pAB042 (gen gB EHV-1)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA końskiego wirusa herpes typu 1 (EHV-1) (szczep Kentucky D) (Guo i in., J. Virol. 1990, 64:2399-2406) i następujących oligonukleotydów:
AB013 (32-mer) (Id. Sekw. nr 1)
5'AAAACTGCAGCCGTCATGTCCTCTGGTTGCCG3'
AB014 (39-mer) (Id. Sekw. nr 2)
5'ATAAGAAGCGGCCGCTAAACATGTTTAAACCATTTTTTC3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę gB (EHV-1 gB) w postaci fragmentu Pstl/Notl. Po oczyszczeniu, produkt PCR 2981 bp trawiono PstI i Notl w celu wyizolowania fragmentu Pstl/Notl wielkości 2959 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio PstI i Notl, w celu otrzymania plazmidu pAB042 (7841 bp) (figura 2).
Przykład 9: Konstruowanie plazmidu pAB031 (gen gB EHV-4)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA końskiego wirusa herpes typu 4 (EHV-4) (szczep 1942) (Riggio i in., J. Virol. 1989, 63:1123-1133) i następujących oligonukleotydów:
AB071 (38-mer) (Id. Sekw. nr 3)
5'AAAACTGCAGACATGTCCACTTGTTGCCGTGCTATTTG3’
AB074 (36-mer) (Id. Sekw. nr 4)
5'CTAGTCTAGATTAAACCATTTTTTCGCTTTCCATGG3' w celu wyizolowania fragmentu zawierającego gen kodujący glikoproteinę gB (EHV-4 gB) w postaci fragmentu Pstl/Xbal. Po oczyszczeniu, produkt PCR trawiono PstI i Xbal w celu wyizolowania fragmentu Pstl/Xbal wielkości 2931 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio PstI i Xbal, w celu otrzymania plazmidu pAB031 (7806 bp) (figura 3).
Przykład 10: Konstruowanie plazmidu pABO 13 (gen gD EHV-1)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA końskiego wirusa herpes typu 1 (EHV-1) (szczep Kentucky D) (Audonet i in., J. Virol. 1990, 71:2969-2978) i następujących oligonukleotydów:
AB030 (32-mer) (Id. Sekw. nr 5)
5AAAACTGCAGCATGTCTACCTTCAAGCTTATG3'
AB031 (37-mer) (Id. Sekw. nr 6)
5'CGCGGATCCTTACGGAAGCTGGGTATATTTAACATCC3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę gD (gD EHV-1) w postaci fragmentu Pstl/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt PCR 1228 bp trawiono PstI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 1211 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio PstI BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB042 (6070 bp) (figura 4).
Przykład 11: Konstruowanie plazmidu pAB032 (gen gD EHV-4)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA końskiego wirusa herpes typu 4 (EHV-4) (Cullinane i in., J. Gen. Virol. 1993, 74:1959-1964) i następujących oligonukleotydów:
AB075 (33-mer) (Id. Sekw. nr 7)
5'AAAACTGCAGATATGTCTACCTTCAAGCCTATG3'
AB076 (33-mer) (Id. Sekw. nr 8)
188 409 ' CGCGGATCCTTACGGAAGCTGAGTATATTTGAC3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę gD EHV-4 (gD EHV-4) w postaci fragmentu Pstl/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt PCR 1230 bp trawiono Pstl i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 1212 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio PstI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB032 (6071 bp) (figura 5).
Przykład 12: Konstruowanie plazmidu pAB043 (gen HA wirusa końskiej grypy Prague)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA końskiego wirusa grypy (EIV) ((szczep H7N7 Prague) (McCauley, numer dostępu GeneBank Χ62552) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB015 (36-mer) (Id. Sekw. nr 9)
5'ACGCGTCGACATGAACACTCAAATTCTAATATTAGC'
ABO 16 (35-mer) (Id. Sekw. nr 10) 'CGCGGATCCCTTATATACAAATAGTGCACCGCATG3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA z końskiego wirusa grypy w postaci fragmentu SalI/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1733 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu SalI/BamHI wielkości 1720 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB043 (6588 bp) (figura 6).
Przykład 13: Konstruowanie plazmidu pAB033 (gen HA wirusa końskiej grypy Suffolk)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA końskiego wirusa grypy (EIV) (szczep Suffolk) (Binns, numer dostępu GeneBank Χ68437) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB077 (33-mer) (Id. Sekw. nr 11) 'ACGCGTC GACGCATGAAGACAACCATTATTTTG3'
AB078 (34-mer) (Id. Sekw. nr 12)
5'CGCGGATCCTCAAATGCAAATGTTGCATCTGATG3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA z końskiego wirusa grypy w postaci fragmentu SalI/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1729 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 1717 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB033 (6584 bp) (figura 7).
Przykład 14: Konstruowanie plazmidu pAB099 (gen HA wirusa końskiej grypy Fontainebleu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA końskiego wirusa grypy (EIV) (szczep Fontainebleu) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB 186 (32-mer) (Id. Sekw. nr 13)
5'TTTGCGGCCGCATGAAGACAACCATTATTTTG3'
AB 187 (35-mer) (Id. Sekw. nr 14)
5'TTTGCGGCCGCTTACTCAAATGCAAATGTTGCATC3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA z końskiego wirusa grypy (szczep Fontainebleu) (Fig. 8 i Id. Sekw. nr 15) w postaci fragmentu NotI/NotI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1724 bp poddano trawieniu NotI w celu wyizolowania fragmentu Notl/Notl wielkości 1710 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVRi0i2 (przykład 7), który uprzednio trawiono Notl, w celu otrzymania plazmidu pAB099 (6625 bp), który zawierał gen HA (szczep wirusa końskiej grypy Fontainebleu) w prawidłowej orientacji względem promotora (figura 9).
188 409
Przykład 15: Konstruowanie plazmidu pAB085 (gen NP wirusa końskiej grypy Prague)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA końskiego wirusa grypy (EIV) (szczep H7N7 Prague) (Gorman i in., J. Virol. 1991, 65:37043714) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB156 (32-mer) (Id.. Sekw. nr 16)
5'CCGGTCGACATGGCGTCTCAAGGCACCAAACG'
AB159 (34-mer) (Id. Sekw. nr 17)
5'CGCGGATCCTTAATTGTCAAACTCTTCTGCATTG3' w celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę NP z końskiego wirusa grypy w postaci fragmentu Sall/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1515 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu SalI/BamHI wielkości 1503 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono Sali i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB085 (6371 bp) (figura 10).
Przykład 16: Konstruowanie plazmidu pAB084 (gen NP wirusa końskiej grypy Jillin)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym rNa końskiego wirusa grypy (EIV) (szczep h3n8 Jillin) (Gorman i in., J. Virol. 1991, 65:37043714) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB 156 (32-mer) (Id. Sekw. nr 16)
5'CCGGTCGACATGGCGTCTCAAGGCACCAAACG3'
AB 157 (34-mer) (Id. Sekw. nr 18) 'CGCGGATCCTTAATTGTCATATTCCTTCTGCATTG3' w celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę NP z końskiego wirusa grypy w postaci fragmentu Sall/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1515 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 1503 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono Sali i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB084 (6371 bp) (figura 11).
Przykład 17: Konstruowanie plazmidu pAB070 (gen podjednostki C toksyny tężcowej)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA Clostridium tetani (szczep CN3911) (Fairweather i in., J. Bact. 1986, 165:21-27), który wytworzono techniką według przykładu 2 i następujących oligonukleotydów:
AB 128 (34-mer) (Id. Sekw. nr 19) 'AAACTGCAGATGAAAAATCTGGATTGTTGGGTTG3'
AB 129 (30-mer) (Id. Sekw. nr 20) .TTTGGATCCTTAATCATTTGTCCATCCTTC w celu wyizolowania genu kodującego podjednostkę C toksyny Clostridium tetani w postaci fragmentu PstI/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt PCR 1377 bp trawiono PstI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 1361 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio PstI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB070 (6219 bp) (figura 12).
Przykład 18: Konstruowanie plazmidu pAB017 (gen ospA Borrelia burgdorferi)
Reakcję PCR przeprowadzono przy użyciu genomowego DNA Borrelia burgdorferi (szczep B31) (Bergstrom i in., Mol. Microbiol. 1989, 3:479-486), który wytworzono techniką według przykładu 2 i następujących oligonukleotydów:
AB038 (37-mer) (Id. Sekw. nr 21)
5'ACGCGTCGACTATGAAAAAATATTTATTGGGAATAGG3'
AB039 (34-mer) (Id. Sekw. nr 22) .CGCGGATCCCTTATTTTAAAGCGTTTTTAATTTC3' w celu wyizolowania genu kodującego białko błonowe ospA w postaci fragmentu Sall/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt PCR 842 bp trawiono SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 829 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który trawiono uprzednio SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB017 (5698 bp) (figura 13).
188 409
Przykład 19: Konstruowanie plazmidu pAB094 (gen E2 wirusa wschodniego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa wschodniego zapalenia mózgu (EEV) (szczep North America 82V2137) (Weaver i in., Virol. 1993, 197:375-390) wytworzonym techniką. według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB 176 (34-mer) (Id. Sekw. nr 23)
5'AAACTGCAGATGGATTTGGACACTCATTTCACCC3'
AB 177 (44-mer) (Id. Sekw. nr 24)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCATGCCCTCGTCGGCTTAATGCAG3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę E2 EEV w postaci fragmentu Pstl/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1294 bp poddano trawieniu Pstl i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 1278 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono Pstl i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB094 (6136 bp) (figura 14).
Przykład 20: Konstruowanie plazmidu pAB093 (gen C wirusa wschodniego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa wschodniego zapalenia mózgu (EEV) (szczep North America 82V2137) (Weaver i in., Virol. 1993, 197:375-390) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB174 (33-mer) (Id. Sekw. nr 25)
5'AAACTGCAGATGTTCCCATACCCTACACTTAAC3'
AB 175 (45-mer) (Id. Sekw. nr 26) 'TGAAGATCTTCAATCCCCCTCACCATGGCTCTGACCCCTCTGGTG3' w celu wyizolowania genu kodującego białko C kapsydu (EEV C) w postaci fragmentu PstI/BglI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 801 bp poddano trawieniu PstI i BglI w celu wyizolowania fragmentu PstI/BglI wielkości 785 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono PstI i BglI, w celu otrzymania plazmidu pAB093 (5650 bp) (figura 15).
Przykład 21: Konstruowanie plazmidu pAB096 (gen E2 wirusa zachodniego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa zachodniego zapalenia mózgu (WEV) (szczep BSF 1703) (Hahn i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85:5997-6001) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB180 (35-mer) (Id. Sekw. nr 27)
5'ACGCGTCGACATGAGCATTACCGATGACTTCACAC3'
AB181 (44-mer) (ld. Sekw. nr 28)
5' CGCGGATCCTCAATAAAAATCAAGCGTTGGTTGGCCGAATACAG3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę E2 WEV w postaci fragmentu
SalI/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1304 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 1291 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB096 (6159 bp) (figura 16).
Przykład 22: Konstruowanie plazmidu pAB096 (gen C wirusa zachodniego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa zachodniego zapalenia mózgu (WEV) (szczep BSF 1703) (Hahn i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85:5997-6001) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB 178 (34-mer) (Id. Sekw. nr 29) 'ACGCGTCGACATGTTTCCATACCCTCAGCTGAAC3'
AB 179 (44-mer) (Id. Sekw. nr 30)
188 409
5' CGCGGATCCTCAATAAAAATCACCACGGTTCAGAACCTTCGGGG3' w celu wyizolowania genu kodującego białko kapsydu C WEV w postaci fragmentu
Sall/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 809 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 796 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB095 (5664 bp) (figura 17).
Przykład 23: Konstruowanie plazmidu pAB098 (gen E2 wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu (VEV) (szczep P676 (typ IC) ) (Kinney i in., Virol. 1992, 191:569-580) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB184 (35-mer) (Id. Sekw. nr 31)
5'ACGCGTCGACATGTCCACCGAGGAGCTGTTTAAGG3'
AB 185 (44-mer) (Id. Sekw. nr 32)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCAGGCCCGGGCAGTGCGGGCGCAG3' w celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę E2 VEV w postaci fragmentu
SalI/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 1304 bp poddano trawieniu SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Sall/BamHI wielkości 1291 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono SalI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB098 (6159 bp) (figura 18).
Przykład 24: Konstruowanie plazmidu pAB097 (gen C wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu (VEV) (szczep P676 (typ IC)) (Kinney i in., Virol. 1992, 191:569-580) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB 182 (30-mer) (Id. Sekw. nr 33)
5AAACTGCAGATGTTCCCGTTCCAGCCAATG3'
AB 183 (45-mer) (ld. Sekw. nr 34)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCACCATTGCTCGCAGTTCTCCGGAG3' w celu wyizolowania genu kodującego białko C kapsydu VEV w postaci fragmentu
Pstl/BamHI. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR o wielkości 856 bp poddano trawieniu Pstl i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 839 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono PstI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB097 (5698 bp) (figura 19).
Przykład 25: Konstruowanie plazmidu pAB041 (gen G wirusa wścieklizny)
Reakcję RT-PCR techniką według przykładu 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa wścieklizny (szczep ERA) (Anilionis i in., Nature, 1981, 294:275-278) wytworzonym techniką według przykładu 4 z następującymi oligonukleotydami:
AB011 (33-mer) (Id. Sekw. nr 35)
5'AAAACTGCAGAGATGGTTCCTCAGGCTCTCCTG3'
AB012 (34-mer) (Id. Sekw. nr 36)
5'CGCGGATCCTCACAGTCTGGTCTCACCCCCACTC3' w celu wyizolowania fragmentu wielkości 1589 bp zawierającego gen kodujący białko G wirusa wścieklizny. Po oczyszczeniu, produkt RT-PCR poddano trawieniu PstI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu Pstl/BamHI wielkości 1578 bp. Fragment ten poddano ligacji z wektorem pVR1012 (przykład 7), który uprzednio trawiono PstI i BamHI, w celu otrzymania plazmidu pAB041 (6437 bp) (figura 20).
Przykład 26: Wytwarzanie i oczyszczanie plazmidów
Do wytwarzania plazmidów przeznaczonych do szczepienia zwierząt, można zastosować dowolną technikę, która umożliwia otrzymanie zawiesiny oczyszczonych plazmidów, głównie w postaci super-skręconej. Techniki te znane są specjalistom. W szczególności można wymienić technikę lizy alkalicznej, a następnie dwa kolejne ultrawirowania na gradiencie
188 409 chlorku cezu, w obecności bromku etydyny, jak to opisano w Sambrook i in., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989). Można również powołać zgłoszenie patentowe PCT WO 95/21250 i PCT WO 96/02658 opisujące metodę wytwarzania, na skalę przemysłową, plazmidów, które można zastosować do szczepienia. W celu wytwarzania szczepionek (patrz, przykład 17), oczyszczone plazmidy zawiesza się w celu otrzymania zawiesin o wysokim stężeniu (> 2 mg/ml), które są możliwe do przechowywania. W tym celu, plazmidy zawiesza się w ultraczystej wodzie albo w buforze TE (10 mM Tris; 1 mM EDTA, pH 8,0).
Przykład 27: Wytwarzanie szczepionek skojarzonych
Różne plazmidy konieczne do wytwarzania szczepionek skojarzonych miesza się wychodząc z ich stężonych roztworów (przykład 16). Mieszaniny wytwarza się w taki sposób, że stężenie końcowe każdego z plazmidów odpowiada skutecznej dawce każdego z nich. Roztwory, które można zastosować do ustalenia stężenia końcowego szczepionki mogą być roztworami 0,9% NaCl albo buforem PBS.
Przykład 28: Szczepienie koni
Konie szczepi się dawkami 100 |ig, 250 pg albo 500 jig na plazmid.
Wstrzykiwanie można przeprowadzić igłą, drogą domięśniową w mięśnie szyi. W tym przypadku, dawkę szczepiennąpodaje się w objętości 2 ml.
Wstrzyknięcia można przeprowadzić drogą śródskórną, stosując urządzenie do strugowego wstrzykiwania płynu (bez igły), dostarczające dawkę 0,32 ml w 5 punktach (0,04 ml na punkt wstrzyknięcia) (przykładowo, urządzenie „Pigjet”). W tym przypadku, dawki szczepienne podaje się w objętości 0,2 albo 0,4 ml, co odpowiada jednemu albo dwóm podaniom. Gdy przeprowadza się dwa kolejne podania przy użyciu urządzenia Pigjet, oddzielone są one od siebie odstępem około 1 do 2 centymetrów.
188 409
N* 3
188 409
N* 5
188 409
Bgfll
Ν Τ’
188 409
ATGAAGACAACCATTATTTTGATACTACTGACCCATTGGGTCTACAGTCAAAACCCAACCAGT lF MetLysThrThrIlelleLemleleuLeuTlirHieTrpValTyrSerGlnAinProThrSer
GGCAACAACACAGCCACACTATGTCTGGGACACCATGCAGTAGCAAATGGAACATTGGTAAAA SZ^ClyAsnAsnThrALaThrLeuCysLeuClyHijHieAlayaniaAsnGlyThrLeuyalLye
127 ACAATAACTGACGACCAAATTGAGGTGACAAATGCTACTGAATTAGTTCAGAGCACTTCAATA 43 ►ThrIleThrAapAepGlaIleeluValThlAenAlaThrQluLeuValGlnSerThrSarne
190 GGGAAAATATGCAACAACCCATATAGGGTTCTAGATGGAAGAAACTGCACATTAATAGATGCA 64^GlyLysIleCysABnAenProTyrArgValLeuA«pGlyArgAsnCysThrLeuIleAapAla
253 ATGCTAGGAGATCCCCACTGTGATGTTTTTCAGTATGAGAATTGGGACCTCTTCATAGAAAGA 85 ► MetLeuClyAspProHieCyaAapiZalPheGlnTyrGluAanTrpAapLeuPhelleGluArg
316 AGCAGCGCTTTCAGCAATTGCTACCCATATGACATCCCTGACTATGCATCGCTCCGGTCTATT 106 ►SerSerAlaPheSerAsnCysTyrProTyrAspIleProAepTyrAlaSerLeuArgSerIle
379 GTGGCATCTTCAGGAACATTAGAATTCACAGCAGAGGGATTCACATGGACAGGTGTCACTCAA 127►ValAlaSerSarGlyThrŁeuGluPhaThrAlaGluGlyPheThrTrpThrGlyValThrGln
442 AACGGAAGAAGTGGCGCCTGCAGAAGGGGATCAGCCGATAGTTTCTTTAGCCGACTGAATTGG 148^ AanGlyArgSerClyAlaCyaArgArgOlySerAlaAapSerPhePheSerArglieuAanTrp
505 CTAACAGAATCTGGAAATTCTTACCCCACATTGAATGTAACAATGCCTAACAATAACAATTTC
169^ ŁeuThiGluSerClyABnSerTyrirothrŁeuABnValThtlletPtoA0nA«nAanAanPhe
568 GATAAACTATACATCTGGGGGATCCATCACCCGAGCACAAACAATGAGCAGACAAAATTGTAT 190^ AapLysŁeuTyrIleTrpGlyllaHisHiaProSerThrAsnAsnCluClnThrLyeLeuTyr
631 GTCCAAGAATTAGGGCGAGTAACAGTCTCAACAAAAAGAAGTCAACAAACAATAATCCCCAAC 21lF ValGlnGluLauGlyArgVa1ThrValSerThrLyeArgSerOInGinThrIlaI1eProAen
694 ATCGGATCTAGACCGGGGGTCAGGGGTCAATCAGGCAGGATAAGCATATATTGGACCATTGTG 232FIleGlySerArgProGlyValArgGlyGlnSerGlyArgIleSerIlaTyrTrpThrIlaVal
757 AAACCTGGAGATATCCTAATGATAAACAGTAATGGCAACTTAGTTGCACCGCGGGGATATTTC 253> LysProGlyAepIlaLeuMetHeAenSerA8nClyA8nLeuValAlaProArgGlyTyrPhe
820 AAAATGCGAACAGGAAAAAGCTCTATAATGAGATCAGATGCACCCATAGACACTTGTGTGTCC 274^ LyeMetArgThrGlyŁyeSarSerlleMatArgSarAspAlaProIleAepThrCysValSer
883 GAGTGTATTACACCAAATGGAAGCATCCCCAACGACAAACCATTTCAAAATGTGAACAAAGTT 295F GluCyellaThrProAenGlySerlleProAenAepLy8ProPheGlnA8nValA8nŁyeVal
946 ACATATGGAAAATGCCCCAAGTATATCAAGCAGAATACTTTGAAGCTGGCCACTGGGATGAGG 316 ►ThrTyrGlyLyeCysProLysTyrlleLyeGlnAsnThrLeuLysLeuAlaThrGlyMatArg
1009 AATGTACCAGAAAAGCAAATCAGAGGAATCTTTGGAGCAATAGCGGGATTCATAGAAAATGGC
337>AenValProGluLysGlnIleArgClyIlePheGlyAlaIleAlaGlyPheIleGluAenGly
1072 TGGGAGGGAATGGTTC-ATGGGTGGTATGGATTCCGATATCAGAATTCGGAAGGAACAGGACAA
358^ TrpCluGlyMetValAspGlyTrpTyrGlyPheArgTyrGlnABnSerGluGlyThrClyGln
1135 GCTGCAGATCTAAAGAGCACTCAAGCAGCCATCGACCAGATCAATGGAAAATTGAACAGAGTG
379 ►AlaAlaAspLeuLysSerThrGlnAlaAlaIleAapGlηIIeAenGlyLysLeuAenArgVal
188 409
1198 ATTGAG AGGACC AATGAG AAATTCC ATCAAATAGAGAAGGAATTCTC AGAAGTAGAAGGGAGA 400► IleGluArgThrAanGluLyePheHi 8GlnIlaGluLyaCluPheSarCluValGluGlyArg
1261 ATCCAGGACTTGGAGAAGTATGTAGAAGACACCAAAATAGACCTATGGTCCTACAATGCAGAG 421> HeGlnABpLauGluLysTyrValGluAepThrLyeIleAspi<euTrpSei:TyrAsnAlaGlu
1324 TTACTGGTGGCTCTAGAAAATCAACATACGATTGACTTAACAGATGCAGAGATGAATAAATTA 442^ LeuLeuValAlaLeuGluAsnClnHi aThr IleAapLeuThrABpAlaCluMetAsnLy a Leu
1387 TTCGAGAAGACTAGGCGCCAGTTAAGAGAAAACGCGGAAGACATGGGGGGTGGATGTTTCAAG 463 ► PhaGluLyaThrArgAr gGlnLeuAzgGluAanAlaOluAspHetGlyGlyGlyCy 8 Phe Lys
1450 ATTTATC ACAAATGTGATAATGCATGC ATTGGATCAATAAGAAATGGG ACATATGACCATTAC 484►ZlaTyrKleLyaCyeAepAsaAlaCysIleGlySerllaArgAsnGlyThrTyrAapHiaTyc
1513 ATATACAGAGATGAAGCATTAAACAACCGATTTCAAATTAAAGGTGTTGAGTTGAAATCAGGC 505 ►IleTyrArgAspGluAlaLeuAsnA8nArgPhoOlnIlaLyaGlyValGluLeuLyeSerGly
1576 TACAAAGATTGGATACTGTGGATTTCATTCGCCATATCATGCTTCTTAATTTGCGTTGTTCTA 526►TyrLyeAepTrpIleLauTrpIleSerPheAlaIleSarCyePheLauIleCyeValValLeu
1639 TTGGGTTTCATTATGTGGGCTTGCCAAAAAOGCAAC ATCAGATGCAAC ATTTGCATTTGA 547►LeuGlyPhelleMetTrpAlaCyeOlaLyaOlyAenlleArgcyeAenlleCyalle ° ° ° (
188 409
Γλ
188 409
Fi* U
EJglll
Ν' U
188 409
FU * 13
188 409
N r |5
BglII i
188 409
Μ · \
H · U
188 409
Μβ i a
188 409
Bglll
M‘°o
188 409
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 4,00 zł.

Claims (48)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Szczepionka do leczenia koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej:
    (i) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące gB, gC lub gB i gD końskiego wirusa zapalenia nosa i płuc (EHV);
    (ii) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące HA, NP, N lub HA i NP końskiego wirusa grupy (EIV);
    (iii) plazmid lub plazmidy, które zawierają i wyrażają in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące podjednostkę C toksyny tężca; i (iv) farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę.
  2. 2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje plazmid(y) zawierające i wyrażające sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące gB lub gD EHV-4 i/lub EHV-1.
  3. 3. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje plazmid(y) zawierający(e) i wyrażający(e) sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące gB i gD EHV-4 i/lub EHV-1.
  4. 4. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje plazmid(y) zawierający(e) i wyrażający(e) sekwencję nukleotydową lub sekwencje nukleotydowe kodujące HA lub HA i NP EIV.
  5. 5. Szczepionka według dowolnego z zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienna tym, że dalej obejmuje przynajmniej jeden plazmid zawierający i wyrażający in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową kodującą antygen wirusa wschodniego zapalenia mózgu (EEV), antygen wirusa zachodniego zapalenia mózgu (WEV), antygen wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu(VEV), antygen B. burgdorferi antygen końskiego wirusa zapalenia tętnic lub antygen wirusa wścieklizny.
  6. 6. Szczepionka według zastrz. 5, znamienna tym, że obejmuje plazmid(y) zawierające C lub C i E2 EEV, C lub C i E2 WEV, C lub C i E2 VEV, lub C lub C i E2 EEV, WEV i VEV.
  7. 7. Szczepionka według zastrz. 5, znamienna tym, że obejmuje plazmid(y) zawierające i wyrażające OspA B. burgdorferi.
  8. 8. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje od 10 ng do lmg każdego plazmidu.
  9. 9. Szczepionka według zastrz. 8, znamienna tym, że obejmuje od 100 ng do 500 |ig każdego plazmidu.
  10. 10. Szczepionka według zastrz. 8, znamienna tym, że obejmuje od 1 |ig do 250 pg każdego plazmidu.
  11. 11. Zastosowanie jednego lub więcej plazmidów opisanych w dowolnym z zastrz. 1 do 10 do wytwarzania szczepionki (B), która jest przeznaczona do szczepienia koni, które początkowo zaszczepiono pierwszą szczepionką (A) wybraną z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym ta pierwsza szczepionka A zawiera antygen lub antygeny kodowane przez plazmid lub plazmidy, lub antygen(y), które zapewniają odporność krzyżową.
  12. 12. Zestaw do szczepienia koni, znamienny tym, że obejmuje szczepionkę (B) zawierającą przynajmniej jeden plazmid określony w dowolnym z zastrz. 1 do 10 i szczepionkę (A), wybraną z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym szczepionka A zawiera antygen(y), który jest(są) kodowany(e) przez plazmid(y) lub antygen(y) zapewniający(e)
    188 409 odporność krzyżową, i szczepionka (A) przeznaczona jest do pierwszego szczepienia a do szczepienia przypominającego szczepionka (B).
  13. 13. Szczepionka według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienna tym, że towarzyszy jej ulotka wskazująca, że ta szczepionka może być użyta jako przypominająca dla pierwszej szczepionki dla koni, wybranej z grupy składającej się z całej żywej szczepionki, całej inaktywowanej szczepionki, szczepionki podjednostkowej i szczepionki rekombinowanej, przy czym pierwsza szczepionka A zawiera antygen(y), kodowany(e) przez plazmid(y) lub antygen(y) zapewniający(e) odporność krzyżową.
  14. 14. Szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce gospodarza końskiego sekwencję nukleotydową kodującą gB, gD, lub gB i gD końskiego wirusa zapalenia nosa i płuc (EHV) i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę.
  15. 15. Szczepionka według zastrz. 14, znamienna tym, że plazmid zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą gB i gD EHV.
  16. 16. Szczepionka według zastrz. 14, znamienna tym, że obejmuje pierwszy plazmid zawierający i wyrażający sekwencję nukleotydową kodującągB EHV i drugi plazmid zawierający i wyrażający sekwencję nukleotydową kodującą gD EHV.
  17. 17. Szczepionka według zastrz. 14 albo 15, albo 16, znamienna tym, że EHV jest EHV-1.
  18. 18. Szczepionka według zastrz. 14 albo 15, albo 16, znamienna tym, że EHV jest EHV-4.
  19. 19. Szczepionka według zastrz. 14 albo 15, albo 16, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej sekwencję nukleotydową z EHV-1 i przynajmniej sekwencję nukleotydową z EHV-4.
  20. 20. Szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą HA, NP, N EIV lub ich kombinację i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę.
  21. 21. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że plazmid zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą HA EIV.
  22. 22. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że plazmid zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą NP EIV.
  23. 23. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że plazmid zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą HA i NP EIV.
  24. 24. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że obejmuje pierwszy plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą HA EIV i drugi plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową NP EIV.
  25. 25. Szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą C, E2 lub C i E2 końskiego wirusa zapalenia mózgu i dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę.
  26. 26. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że obejmuje plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą C i E2.
  27. 27. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że obejmuje pierwszy plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą C i drugi plazmid, który zawiera i wyraża sekwencję nukleotydową kodującą E2.
  28. 28. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że wirus końskiego zapalenia mózgu jest wirusem wenezuelskiego zapalenia mózgu (VEV).
  29. 29. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że wirus końskiego zapalenia mózgu jest wirusem wschodniego zapalenia mózgu (EEV).
  30. 30. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że wirus końskiego zapalenia mózgu jest wirusem zachodniego zapalenia mózgu (WEV).
  31. 31. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że obejmuje sekwencje nukleotydowe z VEV i WEV, VEV i EEV, WEV i EEV lub WEV, VEV i EEV.
  32. 32. Szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodująca G wirusa wścieklizny i farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę.
    188 409
  33. 33. Szczepionka dla koni, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jeden plazmid, który zawiera i wyraża in vivo w komórce końskiego gospodarza sekwencję nukleotydową kodującą E, M, N, lub ich kombinacje wirusa końskiego zapalenia tętnic.
  34. 34. Szczepionka według zastrz. 14, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE.
  35. 35. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE.
  36. 36. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE. *
  37. 37. Szczepionka według zastrz. 32, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE.
  38. 38. Szczepionka według zastrz. 33, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuj e(ją) promotor wirusa cytomegalii CMV-IE.
  39. 39. Szczepionka według zastrz. 14, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor LTR wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu.
  40. 40. Szczepionka według zastrz. 39, znamienna tym, że promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
  41. 41. Szczepionka według zastrz. 20, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuj e(ją) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor LTR wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu.
  42. 42. Szczepionka według zastrz. 41, znamienna tym, że promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
  43. 43. Szczepionka według zastrz. 25, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor LTR wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu.
  44. 44. Szczepionka według zastrz. 43, znamienna tym, że promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
  45. 45. Szczepionka według zastrz. 32, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuje(ją) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor LTR wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu.
  46. 46. Szczepionka według zastrz. 45, znamienna tym, że promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
  47. 47. Szczepionka według zastrz. 33, znamienna tym, że jako promotor do kontroli ekspresji sekwencji nukleotydowej (wych) plazmid(y) obejmuj e(ą) późny promotor wirusa SV40 i wczesny promotor wirusa SV40, promotor lTr wirusa mięsaka Rousa oraz promotor cytoszkieletu.
  48. 48. Szczepionka według zastrz. 47, znamienna tym, że promotorem cytoszkieletu jest promotor desminy lub aktyny.
PL97331202A 1996-07-19 1997-07-15 Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni PL188409B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609400A FR2751226B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
PCT/FR1997/001314 WO1998003198A1 (fr) 1996-07-19 1997-07-15 Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL331202A1 PL331202A1 (en) 1999-07-05
PL188409B1 true PL188409B1 (pl) 2005-01-31

Family

ID=9494494

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97331202A PL188409B1 (pl) 1996-07-19 1997-07-15 Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni

Country Status (13)

Country Link
US (2) US6207166B1 (pl)
EP (2) EP1647281A3 (pl)
JP (2) JP2000516199A (pl)
AR (2) AR009947A1 (pl)
AU (1) AU735372B2 (pl)
BR (1) BR9710502A (pl)
CA (2) CA2260858C (pl)
CZ (2) CZ301365B6 (pl)
DE (1) DE69734778T2 (pl)
FR (1) FR2751226B1 (pl)
NZ (1) NZ333754A (pl)
PL (1) PL188409B1 (pl)
WO (1) WO1998003198A1 (pl)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751226B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
FR2775601B1 (fr) 1998-03-03 2001-09-21 Merial Sas Vaccins vivants recombines et adjuves
FR2776928B1 (fr) * 1998-04-03 2000-06-23 Merial Sas Vaccins adn adjuves
FR2794648B1 (fr) * 1999-06-10 2003-03-07 Merial Sas Vaccins adn pour animaux de compagnie et de sport
US6645740B1 (en) 1999-06-10 2003-11-11 Merial Limited Nucleic acids encodings equine GM-CSF
AU782154C (en) * 1999-06-10 2006-02-09 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. DNA vaccines for pets and sport animals
AU2001252390A1 (en) * 2000-05-01 2001-11-12 Powderject Vaccines, Inc. Nucleic acid immunization
US6803041B2 (en) * 2001-03-20 2004-10-12 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Equine herpesvirus vaccine
FR2823222B1 (fr) 2001-04-06 2004-02-06 Merial Sas Vaccin contre le virus de la fievre du nil
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
MXPA06005424A (es) 2003-11-13 2007-01-25 Univ Georgia Res Found Metodos para caracterizar virus de enfermedad bursal infecciosa.
CA2556911C (en) 2004-02-19 2013-07-30 The Governors Of The University Of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
US11865172B2 (en) 2005-04-21 2024-01-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
US7959929B2 (en) 2005-04-21 2011-06-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
HRP20100314T1 (hr) 2005-04-25 2010-08-31 Merial Ltd. Cjepivo protiv nipah virusa
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
EP3147296A1 (en) 2005-11-14 2017-03-29 Merial, Inc. Gene therapy for renal failure
US7682619B2 (en) 2006-04-06 2010-03-23 Cornell Research Foundation, Inc. Canine influenza virus
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
KR101445903B1 (ko) 2007-05-02 2014-09-29 메리얼 리미티드 향상된 발현 및 안정성을 갖는 ｄｎａ 플라스미드
US8394384B2 (en) 2008-11-28 2013-03-12 Merial Limited Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof
CN102428099B (zh) 2009-04-03 2016-03-16 梅里亚有限公司 运载新城疫病毒的禽疫苗
CN103260643A (zh) 2009-12-28 2013-08-21 梅里亚有限公司 重组ndv抗原及其用途
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
ES2795148T3 (es) 2010-03-12 2020-11-20 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas recombinantes contra el virus de la fiebre aftosa y usos de las mismas
MX344103B (es) 2010-08-31 2016-12-05 Merial Ltd Vacunas de virus herpes vectorizado con virus de enfermedad de newcastle.
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
US20140287931A1 (en) 2011-04-04 2014-09-25 Stichting Het Nederlands Kanker Instituut - Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US20140296248A1 (en) 2011-04-04 2014-10-02 Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
WO2012145577A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Merial Limited Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
EP2701736A1 (en) 2011-04-25 2014-03-05 Advanced Bioscience Laboratories, Inc. Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto
NZ618125A (en) 2011-05-27 2016-03-31 Merial Ltd Genetic vaccines against hendra virus and nipah virus
CA2837375C (en) 2011-06-01 2019-07-16 Merial Limited Needle-free administration of prrsv vaccines
EP2741740B1 (en) 2011-08-12 2017-05-03 Merial, Inc. Vacuum-assisted preservation of biological products, in particular of vaccines
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
ES2866108T3 (es) 2012-02-14 2021-10-19 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vectores poxvirales recombinantes que expresan proteínas de la rabia y OX40 y vacunas fabricadas a partir de los mismos
WO2013123219A1 (en) 2012-02-14 2013-08-22 Merial Limited Rotavirus subunit vaccines and methods of making and use thereof
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
KR101490292B1 (ko) 2012-04-16 2015-02-04 한국생명공학연구원 신규한 ｈ3ｎ8 말 인플루엔자 바이러스
ES2664069T3 (es) 2012-06-13 2018-04-18 Merial, Inc. Vacunas contra BTV y AHSV de genoma reordenado
US9556419B2 (en) 2013-03-12 2017-01-31 Merial Inc. Reverse genetics Schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
CA2966191A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
EP3889166B1 (en) 2015-06-23 2025-08-06 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
AU2016308630B2 (en) 2015-08-20 2019-09-19 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. FCV recombinant vaccines and uses thereof
FI3355915T3 (fi) 2015-09-29 2024-01-12 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Koirien parvoviruksen (CPV) viruksen kaltaisten hiukkasten (VLP) rokotteet ja niiden käytöt
US9913891B2 (en) 2015-11-23 2018-03-13 Merial Inc. FMDV and E2 fusion proteins and uses thereof
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109136264B (zh) * 2018-09-19 2022-07-29 天康制药(苏州)有限公司 马疱疹病毒1型gB-gD融合蛋白、重组载体和真核细胞株及其制备方法和疫苗

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4631191A (en) * 1985-06-20 1986-12-23 Biotechnology Research Partners, Ltd. Methods and compositions useful in preventing equine influenza
US4944942A (en) * 1987-08-27 1990-07-31 Mobay Corporation Intranasal vaccination of horses with inactivated microorganisms or antigenic material
SU1671688A1 (ru) * 1989-01-27 1991-08-23 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Молекулярной Биологии Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к гликопротеиду Е1 вируса восточного энцефаломиелита лошадей
US5185440A (en) * 1989-06-20 1993-02-09 North Carolina State University cDNA clone coding for Venezuelan equine encephalitis virus and attenuating mutations thereof
FR2659349B1 (fr) * 1990-03-12 1993-12-24 Rhone Merieux Virus herpes recombinants notamment pour la realisation de vaccins, leur procede de preparation, les plasmides realises au cours de ce procede et les vaccins obtenus.
US5643578A (en) * 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
US5243121A (en) 1992-03-19 1993-09-07 Engelhard Corporation Fluid catalytic cracking process for increased formation of isobutylene and isoamylenes
US5925358A (en) * 1993-02-26 1999-07-20 Syntro Corporation Recombinant fowlpox viruses and uses thereof
EP0740704A1 (en) * 1994-01-27 1996-11-06 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
FR2751226B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
EP1064305B1 (en) * 1998-03-27 2004-09-15 The Secretary of State for Defence Recombinant virus

Also Published As

Publication number Publication date
US6558674B1 (en) 2003-05-06
AU735372B2 (en) 2001-07-05
AR059828A2 (es) 2008-04-30
DE69734778D1 (de) 2006-01-05
CA2660355C (en) 2012-05-22
FR2751226A1 (fr) 1998-01-23
DE69734778T2 (de) 2006-09-07
EP0936922B1 (fr) 2005-11-30
CA2260858A1 (en) 1998-01-29
CZ300593B6 (cs) 2009-06-24
US6207166B1 (en) 2001-03-27
CZ17499A3 (cs) 1999-05-12
EP1647281A2 (fr) 2006-04-19
EP0936922A1 (fr) 1999-08-25
EP1647281A3 (fr) 2009-08-05
AR009947A1 (es) 2000-05-17
FR2751226B1 (fr) 1998-11-27
PL331202A1 (en) 1999-07-05
AU3772797A (en) 1998-02-10
JP2008143900A (ja) 2008-06-26
NZ333754A (en) 2001-03-30
CA2260858C (en) 2011-01-18
CA2660355A1 (en) 1998-01-29
JP2000516199A (ja) 2000-12-05
CZ301365B6 (cs) 2010-01-27
BR9710502A (pt) 1999-08-17
WO1998003198A1 (fr) 1998-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL188409B1 (pl) Szczepionki do leczenia koni, zastosowanie plazmidu do wytwarzania szczepionki i zestaw do szczepienia koni
US6228846B1 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies
US6376473B1 (en) Polynucleotide vaccine formula in particular against bovine respiratory pathology
CN1329513C (zh) 抗猪生殖和呼吸疾病的多核苷酸疫苗制剂
KR100687509B1 (ko) 고양이과 동물의 폴리뉴클레오티드 백신 제제
KR20000065258A (ko) 조류 폴리뉴클레오티드 백신 제제
AU2844899A (en) Adjuvant-containing vaccines
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU765539B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases
AU776827B2 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease
HK1083763A (zh) 针对马科动物病变的多核苷酸疫苗配方
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter