CZ17499A3 - Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků jmenovitě koní - Google Patents

Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků jmenovitě koní Download PDF

Info

Publication number
CZ17499A3
CZ17499A3 CZ99174A CZ17499A CZ17499A3 CZ 17499 A3 CZ17499 A3 CZ 17499A3 CZ 99174 A CZ99174 A CZ 99174A CZ 17499 A CZ17499 A CZ 17499A CZ 17499 A3 CZ17499 A3 CZ 17499A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
vaccine
equine
plasmid
gene
genes
Prior art date
Application number
CZ99174A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ300593B6 (cs
Inventor
Jean-Christophe Audonnet
Annabelle Bouchardon
Michel Riviere
Original Assignee
Merial
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial filed Critical Merial
Publication of CZ17499A3 publication Critical patent/CZ17499A3/cs
Publication of CZ300593B6 publication Critical patent/CZ300593B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/27—Equine rhinopneumonitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků jmenovitě koní
Oblast techniky
Vynález se týká formulace vakciny umožňující vakcinaci lichokopytníků, jmenovitě koní. Vynález se týká také odpovídajícího způsobu vakcinace.
Dosavadní stav techniky
Patologie koní představuje dosti velkou rozmanitost. Vedle dobře známých dýchacích nemocí, jako je rhinopneumonie a chřipka, jsou koně náchylní, zejména na americkém kontinentě, na různé encefalitidy. Konečně trpí koně také různými jinými chorobami, mezi nimiž lze citovat zejména tetanus, lymfatické onemocnění, zánět tepny koní a v neposlední řadě virus vz t ek1iny.
Podmínky vystavení koní různým patogenním mikroorganismům jsou znásobeny četným převážením koní na velké vzdálenosti po zemi nebo vzduchem, takže riziko nákazy má stoupající tendenc i .
Nebo, vezme-li se v úvahu vysoká cena těchto zvířat zejména reproduktivních, jízdních a závodních koní, je z ekonomického hlediska významné kontrolovat co nejvíce rizika nákazy, která vedou k jejich dlouhodobé indispozici nebo ztrátě. Už existuje určité množství vakcin, jejichž účinnost je promění ivá
Na rhinopneumonii lichokopytníků, vyvolanou různými kmeny viru koňského oparu (EHV), byly vyvinuty inaktivované podjednotkové vakciny, které všechny představují určité množství omezení projevující se neúplnou ochranou krátkého trvání a případně problémyn škodnosti souvisejícími s použitými pomocnými
1átkami.
Koňská chřipka představuje také významné onemocnění, kterému se hodlá bránit vakcinaci. Používanými vakcinami jsou vakciny inaktivované nebo podjednotkové, které představují určitou účinnost avšak nejsou nicméně bez problémů, často není ochrana úplná a má zpravidla poměrně krátké trvání, vyžadující jako v případě rhinopneumonie revakcinaci. Jsou také problémy se škodlivostí vakcin.
Zavedeny jsou vakciny na základě protitetanového anatoxinu a představují nepopiratenou účinnost.
Existují také vakciny proti encefalitidám, encefalitidě západní, východní a venezuelské, jejichž účinnost je rovněž málo známá.
Z důvodů jednak ekonomických, jednak racionálnosti koňských vakcin byly už navrženy formulace vícečetných vakcin k prevenci vůči několika těmto nakažlivým nemocem.
Dosud vyvinuté úsilí se týkalo neaktivovaných vakcin nebo živých vakcin, případně směsí těchto vakcin. Jejich zavedení naráží na problémy vztahu účinnosti a stability. Ve skutečnosti jde o zajištění vztahu mezi různou účinností vakcin se zřetelem na různé použité antigeny nebo se zřetelem na samotné formulace jmenovitě v případech, kde se kombinují neaktivované vakciny s živými vakcinami. Je také zřejmý problém konzervace takových kombinovaných vakcin a rovněž problém jejich neškodnosti zejména ve spojení s pomocnými prostředky. Obecně jsou takové vakciny velmi drahé.
Tyto formulace ostatně neumožnily spojit tři hlavní účinky, totž účinek na koňskou chřipku, rhinopneumonii, zejména
RHV-1 a EHV-4 a tetanus. Bylo známo například spojení účinků
na chřipku a encefalitidu, nebo rhinopneumonii a encefalitidu.
Podle patentových spisů číslo W0-A-90/11092, WO-A-93/19183, WO-A-94/21797 a WO-A-95/2O66O se používá nedávno vyvinuté techniky polynukleotidních vakcin. Tvrdí se, že vakciny používají plasmidu schopného exprese antigenu začleněného do plasmidu v hostitelských buňkách. Navrhují se.všechny cesty podávání (například intraperitoneální, intravenosní, intramuskulární, transkutánní, intradermický a sliznicový). Použít lze rovněž různých vakcinačních prostředků, jako ADN uložených na povrchu částic zlata a určených k proniknutí do kůže zvířete (Tang a kol., Nátuře 356, str. 152 až 154, 1992) a injektáž tekutin umožňujících proniknutí do kůže, svalů, tukových tkání a tkání děložních (Furth a kol. Analytical Biochemistry 205, str. 365 až 368, 1992).
Polynukleotidové vakciny mohou vyžívat stejně dobře jak ADN jako takové, tak ADN formulované například na bázi liposomů nebo kationických lipidů.
Polynukleotidové vektory, zahrnující geny HA nebo NP, byly zkoumány na virus chřipky (influenza virus) u myší, u fretek a u kuřat. Žádného poznatku nelze použít u koní.
Pokud jde o tetanus, bylo nedávno oznámeno, že imunizace myši exprimujícím plasmidem s fragmentem C vyvolala koncová netoxická C-oblast tetanového toxinu výskyt seroprotekčních protilátek u myší.
Není dosud možno přenášet přímo poznatky výsledků, získaných u zvířat s malou životností, na ostatní savce a zejména na savce velkých postav.
Ochranu lichokopytníků a zejména koní proti infekčímu onemocnění je tudíž stále potřeba vylepšovat.
• ·· ·· · ·· ·· 44 4 · 4 4 44 · · · · ··· ·· · · · · 4 • 4 4 4 4 4 · · · 4 4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 · ••4 44 44 ·4· ·· ··
Vynález se také týká formulace několikaúčinné vakciny umožňující zajištění vakcinace proti určitému počtu patogenních virů uplatňujících se jmenovitě v dýchací patologii koní a rovněž zajištění účinné vakcinace proti této chorobě.
Vynález se dále týká formulace vakciny spojující různé účinnosti a všechna požadovaná kriteria kompatibility a stability účinnosti. Vynález dále týká formulace vakciny umožňující spojení různých účinností v jednom nosiči.
Vynález dále týká formulace vakciny 'snadno a levně vyrobitelné.
Vynález dále týká formulace vakciny a způsob vakcinace koní, která umožní získat multiúčinnou ochranu s vysokou účinností a dlouhodobě působící a zároveň neškodnou a bez vedlejších účinků.
Podstata vynálezu
Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků, jmenovitě koní, spočívá podle vynáleziu v tom, že obsahuje alespoň tři účinné polynukleotidové vakciny, z nichž každá zahrnuje integrující plasmid k expresi in vivo v hostitelských buňkách gen účinný proti nemocem lichokopytníků, přičemž jsou tyto účinnosti voleny ze souboru zahrnujícího virus rhinopneumonie lichokopytníků EHV, virus chřipky lichokopytníků EIV a tetanu, přičemž plasmidy mají pro každou účinnost jeden nebo několik genů volených ze souboru zahrnujícího gB a gD pro virus rhinopneumonie lichokopytníků, HA, NP, N pro virus chřipky lichokopytníků a gen kódující alespoň část podjednotky C tetanového toxinu.
Za účinnost se zde považuje alespoň jeden antigen zajištující ochranu proti uvažovanému patogennímu viru, přičemž ú• · · ·· 9 · · ·· · · · 9 · · · · 9 9 · • · · ·· · · · 9 9 • ··· · · · · · 999 ··· • 9 9 9 · · 9
999 99 99 999 99 99 činnost může zahrnovat jakožto subúčinnost jeden nebo několik přírodních nebo modifikovaných genů jednoho nebo několika kmenů uvažované choroby.
Za gen patogenního činidla se považuje nejenom úplný gen, ale také různé nukleotidní sekvence včetně fragmentů zachovávajících schopnost k vyvolání ochranné odezvy. Význam genu zahrnuje nukleotidové sekvence ekvivalentní se sekvencemi podrobně popsanými v příkladech, tedy různé sekvence, avšak kódující stejný protein. Zahrnuje také nukleotidové sekvence ostatních uvažovaných patogenních kmenů, zaručující příčnou ochranu nebo ochranu specifickou kmenu nebo skupiny kmenu. Zahrnuje také nukleotidové sekvence, které byly modifikovány k usnadnění exprese in vivo u hostitelského zvířete avšak kódující stejný protein.
S výhodou zahrnuje vakcina podle vynálezu účinnost v rhinopneumonii lichokopytníků, alespoň jeden antigen kmene EHV-1 a alespoň jeden antigen kmene EHV-4 a s výhodou stejný typ antigenu.
Terapeuticky účinné množství polynukleotidové účinnosti je obsaženo v nosičích o sobě známých pro podávání účinných látek zvířatům a s výhodou pro podávání intramuskulární. Výhodným nosičem pro podání je nosič vodný nebo olejový.
Pokud jde o účinnost proti rhinopneumonie lichokopytníků, dává se přednost dvěma genům gB s výhodou kmenů EHV, zejména kmenů 1 a 4.
Pokud jde o účinnost na chřipku lichokopytníků je výhodné použít gen kódující hemaglutidin HA nebo spojení genů kódujících HA a NP. S výhodou se v jedné vakcině spojuje sekvence HA chřipkového viru a obzvláště různých kmenů nacházejících se v terénu. Na oplátku zaručuje NP křížovou ochranu a bylo by • · • · možno spokojit se se sekvencí jednoho samotného virového kmene .
Pro účinnost proti tetanu se dává přednost podjednotce C, případně modifikované mutací nebo vypouštěním.
Spojení genů kódujících několik antigenů stejné účinnosti nebo stejného kmene v jedné účinnosti, se může uskutečnit smísením plasmidů exprimujících jeden samotný antigen nebo naopak začleněním několika genů do jednoho a téhož plasmidu.
Kombinace různých účinností vakciny podle vynálezu se může s výhodou uskutečnit smísením po 1ynuk1eotidových plasmidů exprimujících jeden nebo několik antigenů každé účinnosti, ale lze rovněž nechat exprimovat několik antigenů několika účinností stejným vektorem plasmidického typu.
V jiné výhodné formě vynálezu může formulace ještě přinášet jednu nebo několik jiných účinností vůči jiným nemocem lichokopytníků a jmenovitě účinností viru encefalitidy západní EEV, encefalitidy východní WEV a encefalitidy venezuelské VEV s výhodou vůči třem současně.
Mezi účinnostmi mohou rovněž figurovat s výhodou účinnost proti nemoci Lyme, B. burgdorferi tepenného zánětu lichokopytníků (EAV) a vztekliny.
Z genů shora citované encefalitidy se používá genů antigenů C a E2 a s výhodou genu E2 samotného nebo ve spojení obou genů E2 a C.
Se zřetelem na účinnost vůči nemoci Lyme se volí mezi geny OspA, OspB a plOO, s výhodou OspA.
Pro tepenný zánět lichokopytníků se volí geny E, M a N • ·· ·· · 99 ·· φφ φ Φ ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ • ΦΦ ΦΦ Φ ΦΦΦΦ • ΦΦΦΦΦ Φ Φ Φ ΦΦΦ ··· • ΦΦΦΦ φ Φ φφφ ·· ·· · · · ·· ·· samotné nebo spojené. Pro vzteklinu se volí gen G.
Pro formulace vakciny podle vynálezu lze volit objem dávek 0,1 až 10 ml a zejména 1 až 5 ml.
Dávka obvykle zahrnuje 10 ng až 1 mg, s výhodou 100 ng až 500 gg a výhodněji také 1 pg až 250 pg podle typu plasmidu.
S výhodou se používá prostých plasmidu jednoduše včleněných do vakcinačního nosiče, kterým je obecně například fyziologický roztok (0,9% roztok chloridu sodného), ultračistá voda a pufr TE. Lze ostatně použít všechny formy polynukleotiové vakciny popsané ve stavu techniky.
Každý plasmid obsahuje promotor schopný zajistit expresi genu začleněného v závislostí na hostitelských buňkách. Obecně je to eukaryotový silný promotor a zejména vyspělý promotor cytomegaloviru CMV-IE, lidského nebo myšího nebo případně jiného původu, jako krysího, prasečího, morčatového.
Obecněji by mohl být promotor bud virového nebo buněčného původu. Jako virový promotor kromě CMV-IE je možno uvést vyspělý nebo opožděný promotor viru SV40 nebo promotor LTR viru Rousova sarkomu. Může to také být promotor viru, jehož původcem je gen, například promotor genu.
Jako buněčný promotor se uvádí promotor genu cytokosterního, jako je například promotor desminu (Bolmont a kol. Journal of Submicroscopic Cytology and Pathology, 22, str. 117 až 122 1990 a Zhenlin a kol., Gene 78, str. 243 až 254 1989) nebo ještě promotor aktinu.
Jelikož ve stejném plasmidu je obsaženo několik genů, mohou být obsaženy ve stejné transkripční jednotce nebo ve dvou různých jednotkách.
• 4 · · · * · · · ·
4 4 4 4 444 · 44 4
444 44 · 4444 ·4 4 4 4 4 4 4 444 444
4 4 4 4 4 4 • 44 ·· 44 · 4 · ·· · 4
Vynález se také týká formulací jednoúčinkovéch vakcin obsahujících jeden nebo několik plasmidů kódujících jeden nebo několik genů, shora popsaných, jednoho z citovaných patologických činidel, jmenovitě rhinopneumonie nebo nemoci Lyme, koňského tepenného zánětu, encefalitidy západní, východní a encefalitidy venezuelské, přičemž geny jsou shora popsané. Tyto formulace mohou zaujímat shora uvedené charakteristiky, pokud jde o volbu genů téhož onemoocnění a jejich kombinaci, složení plasmidů, objemů dávky a dávek.
Vynález se také týká způsobu vakcinace lichokopytníků a jmenovitě koní proti infekčním chorobám, který spočívá v podávání účinné dávky formulace s více účinky nebo s jedním účinkem shora popsané vakciny.
Tento způsob vakcinace zahrnuje podávání jedné nebo několikan dávek formulace vakciny.
Formulace vakcin podle vynálezu se mohou podávat různými způsoby známými obecně k polynukleotidové vakcinaci a pomocí známých technik podávání. Dosud se dává přednost výhradně intramusku1árnímu podávání.
Vakcinaci lze také provádět intradermickou cestou pomocí injektoru tekutým nástřikem, s výhodou několika tryskami a zejména pomocí injektoru s injekční hlavicí opatřenou několika otvory nebo tryskami, jmenovitě s 5 až 6 otvory nebo tryskami například přístrojem PIGJET (vyráběný a obchodní produkt společnosti Endoscopic, Laons, Francie).
Objem dávky pro takový přístroj se s výhodou redukuje na
0,1 až 0,9 ml, zejména 0,2 až 0,6 ml a nejvýhodněji 0,4 až 0,5 ml, přičemž se objem může podávat v jedné nebo několika, s výhodou 2 aplikacích.
Shora uvedené jednoúčinkové vakciny mohou být použity zejména k přípravě víceúčinkových vakcin podle vynálezu.
Formulace jednoúčinkové vakciny mohou být využity také ve spojení s vakcinou jiného typu (zcela živou nebo inaktivovanou, nebo inaktivovanou, rekombinantní, podjednotkovou) se zřetelem na shora popsanou vakcinu.
Vynález se také týká použití různých plasmidů podle vynálezu k výrobě vakciny určené k vakcinaci prvně vakcinovaných koní alespoň první klasickou vakcinou (jednoúčinkovou nebo typu dosavadního stavu techniky volenou souboru zahrnujícího ví ceúčinkovou) jmenovitě ze dřívější inaktivovanou vakcinu dřívější živou vakcinu, podjednotkovou vakcinu, rekombinantní vakcinu, přičemž první vakcina obsahuje nebo může exprimovat alespoň jeden kódovaný antigen alespoň jedním plasmidem nebo alespoň ochranu.
jedním antigenem zajištujícím křížovou
Výrazně má po 1ynukleotidová vakcina účinek, který se dá vyjádřit zesílením imunitní odezvy a založení dlouhodobé imunity.
Obecně vakciny první vakcinace mohou být voleny z obchodně dostupných vakcin od výrobců veterinárních vakcin.
Při jednom výhodném způsobu podle vynálezu se podává zvířeti napřed účinná dávka vakciny klasického typu, jmenovitě neaktivované, živé, utlumené nebo rekombinantní, nebo také vakciny podjednotkové k zajištění primo-vakcinace a s výhodou s prodlením 2 až 4 týdnů se zajistí podání víceúčinkové nebo monoúčinkové podle vynálezu.
Vynález se týká také vakcinačního kitu obsahujícího vakcinu první vakcinace jak dále popsáno a formulaci vakciny
4 4 4 4 • 4 4 4 4 > 444 444
4 4
podle vynálezu pro porovnání. Pojednává také o formulaci vakciny podle vynálezu doprovázené poznámkou o použití této formulace jako porovnání se shora popsanou primo-vakcinací.
Vynález zahrnuje také způsob přípravy formulace vakciny podle tohoto vynálezu.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující pří-
klady praktického provedení pomocí přiložených obrázků.
Seznam obrázků
Obr. 1 : Plasmid pVR1012
Obr. 2: Plasmid PABO42
Obr. 3: Plasmid PAB031
Obr. 4: Plasmid pABO13
Obr. 5 : Plasmid pABO32
Obr. 6: Plasmid pABO43
Obr. 7 : Plasmid pABO33
Obr. 8: Sekvence genu HA chřipky lichokopytníků kmen Fontai
nebleau
Obr. 9 : Plasmid pABO99
Obr. 10: Plasmid pABO85
Obr. 11 : Plasmid pABO84
Obr. 12: Plasmid pAB070
Obr. 13: Plasmid pAB017
Obr. 14: Plasmid pABO94
Obr. 15 : Plasmid pABO93
Obr. 16: Plasmid pABO96
Obr. 17: Plasmid pABO95
Obr. 18: Plasmid pABO98
Obr. 19: Plasmid pABO97
Obr. 20: Plasmid pABO41
»9 fl * • fl flflfl flfl · ♦ flflflfl· · • flfl • »* flfl fl • fl • · • flfl fl • flfl ·
Φ ř»« flflfl • · • flfl flfl
Seznam
SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID
SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID sekvencí SEQ ID č.
č. 1: ol igonukleotid AB013
č. 2: oligonukleotid AB014
č. 3: o 1igonukleotid ABO71
č. 4; o 1 igonuk1eotid ABO74
č. 5: oligonukleotid AB030
č. 6: o 1 igonuk1eotid AB031
č. 7: o I igonuk1eotid ABO75
č. 8: o 1 igonuk1eotid ABO76
č. 9: o 1igonukleotid AB015 a
č. 10: oligonukleotid AB016
č. 11: oligonukleotid ABO77
č. 12: oligonukleotid ABO78
č. 13: oligonukleotid AB186
č. 14: o 1 igonuk1eotid AB187
č. 15: sekvence genu HA chřipky lichokopytníků (kmen Fontaineb1eau)
č. 16: o 1igonuk1eotid AB156
č. 17: o 1 igonuk1eotid AB159
č. 18: oligonukleotid AB157
č. 19: o 1 igonuk1eotid AB128
č. 20: oligonukleotid AB129
č. 21: oligonukleotid ABO38
č. 22: oligonukleotid ABO39
č. 23: oligonukleotid AB176
č. 24: oligonukleotid AB177
č. 25: oligonukleotid AB174
č. 26: o 1igonuk1eotid AB175
č. 27: oligonukleotid AB180
č. 28: oligonukleotid AB181
č. 29: oligonukleotid AB178
č. 30: o 1igonukleotid AB179
č. 31: o 1igonukleotid AB184
č. 32: oligonukleotid AB185 • ·· • ·· • 4 • · « 9 ·· • » 9 9 « · 1 t · · · ·♦* ··« • · · ·
SEQ ID č. 33: oligonukleot id AB182
SEQ ID č . 34: o 1igonukleot id AB183
SEQ ID č. 35 : oligonukleot id AB011
SEQ ID č. 36: oligonukleot id AB012
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 Kultivace virů
Viry se pěstují v buněčném syst ému·'využ i t ém až do získání cytopathického jevu. Buněčné systémy k použití pro každý virus jsou pracovníkům v oboru dobře známy. Stručně řečeno, buňky citlivé na použitý virus, pěstované v minimálně potřebném prostředí Eagle (prostředí MEM”) nebo v jiném vhodném prostředí, se očkují studovaným virovým kmenem za použití vícenásobku infekce 1. Infikované buňky se tedy inkubují při teplotě 37 °C po dobu potřebnou k výskytu úplného cytopathického jevu (nejméně 36 hodin).
Příklad 2
Kultivace bakterií
Tetanus .... Bakterie se kultivují ve vhodném prostředí a za podmínek dobře známých pracovníkům v oboru k získání bakteriální biomasy postačující k extrakci genetického materiálu. Tato extrakce se provádí technikami popsanými v literatuře (J. Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2. vydání. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1989).
Kmeny Borrelia burgdorferi se kultivují ve vhodném prostředí za podmínek dobře známých pracovníkům v oboru. Tyto podmínky a prostředí jsou popsány v literatuře (A. Barbour, J.
Biol. Med. 57, str. 71 až75, 1984). Extrakce bakteriové ADN se • 4 44
I 4 4 <
provádí za podmínek, které popsal W. Simpson a kol. (Infect. Immun. 58, str. 847 až 853, 1990). Použitá technika je popsána Sambrook a kol., Molecular Cloning: A Laboravydání. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold v literatuře (J tory Manual 2.
Spring Harbor, New York, 1989).
Příklad 3
Extrakce virových genomických ADN
Po kultivaci se supernatant a lýzované buňky shromáždí a celá virová suspense se odstředí při ÍOOO g během 10 minut při teplotě +4 °C k vyloučení buněčných úlomků. Pak se virové částice podrobí u1traodstředění při 400000 g po dobu jedné hodiny při teplotě + 4 “C. Sraženina se vyjme do minimálního množství pufru (Tris 10 mM, EDTA 1 mM). Tato koncentrovaná virová suspense se zpracuje proteinázou K (100 gg/ml konečný) v přítomnosti dodecylsul fátu sodného (SDS) (0,5% konečný) během dvou hodin při teplotě 37 °C. Virová ADN se pak extrahuje směsí fenol/chloroform a pak se vysráží se dvěma objemy absolutního ethanolu. Nechá se stát přes noc při teplotě -20 “C, ADN se odstředí při 10000 g během 15 minut při teplotě + 4 °C. Sraženina ADN se suší a vyjme se do minimálního množství sterilní ultračisté vody. Digeruje se s restrikčními enzymy.
Příklad 4
Izolování genomických virových ARN
Virus na ARN se čistí způsoby dobře známými pro pracovníky v oboru. Genonmické virové ARN se pak izolují za použití extrakční techniky thiokyanát guanidinu/fenol-chloroform, kterou popsal P. Chomczynski a N. Sacchi (Anal.Biochem. 162, str. 156 až 159, 1987) .
Příklad 5
Technika molekulární biologie
Všechny konstrukce plasmidů se uskutečnily standardní technikou molekulární biologie kterou popsal J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratora Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Všechny restrikční fragmenty pro tento vynález byly izolovány pomocí kitu Geneclean (BI0101 lne. La Jolla, CA) .
Příklad 6
Technika RT-PCR
Specifické oligonukleotidy (nesoucí na koncích 5' restrikční místa k usnadnění vnějšího klonování zesílených fragmentů) se syntetizují tak, že pokrývají úplně kódované oblasti genů před zesílením (viz specifické příklady). Transkripční inversní reakce (RT) a zesílení řetězce po 1ymerázou (PCR) se uskutečňuje standardními technikami (J.Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratora Manual, 2. vydání, nakladatel Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Každá reakce RT-PCR se provede dvojicí specifických zesilovačů a při použití matrice ARN genomického virového extraktu. Zesílené komplementární ADN se vyjmuou do isoamylové směsi fenol/chloroform/alkohol (25:24:1) před digerováním restrickčními enzymy.
Příklad 7
Plasmid pVR1012
Plasmid pVR10l2 (obr. 1) se získá podle Vical lne, San
Diego, CA, USA. Konstrukci popsal J. Hartikka a kol. (Human
Gene Therapy, 7, str. 1205 až 1217, 1996).
• · · · · · • · • · · ·
Příklad 8
Konstrukce plasmidu pABO42 (gen EHV-lgB)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN koňského oparového viru typu 1 (EHV-1) (kmen Kentucky D) (P. Guo a kol., J. Virol
64, str. 2399 až 2406, 1990) a s následujícími oligonukleotidy: AB013 (32 mer) (SEQ ID č.l)
5'AAAACTGCAGCCGTCATGTCCTCTGGTTGCCG 3'
AB014 (39 mer) (SEQ ID č.2) ' ATAAGAAGCGGCCGCTAAACATGTTTAAACCATTTTTTC 3' k izolaci genu kódujícího glykoprotein ·'gB (EHV-1 gB) ve formě fragmentu Pstl-Notl. Po vyčištění se produkt PCR 2981 pb digeruje v přítomnosti Pstl a Notl k izolování fragmentu Pstl-Notl 2959 pb. Tento fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předem digerovaným v přítomnosti Pstl a Notl, k získání plas midu pABO42 (7841 pb) (obr. 2).
Příklad 9
Konstrukce plasmidu pAB031 (gen EHV-4gB)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN koňského oparového viru typu 4 (EHV-4) (kmen 1942) (M. Riggio a kol., J. Virol.
63, str. 1123 až 1133, 1989) a s následujícími oligonukleotidy: AB071 (38 mer) (SEQ ID č.3)
5'AAAACTGCAGACATGTCCACTTGTTGCCGTGCTATTTG 3'
ABO74 (36 mer) (SEQ ID č.4)
5CTAGTCTAGATTAAACCATTTTTTCGCTTTCCATGG 3' k zesílení fragmentu 2949 pb obsahujícího gen kódující glykoprotein gB EHV-4 ve formě fragmentu Pstl-Xbal. Po vyčištění se produkt PCR digeruje v přítomnosti Pstl a Xbal k získání fragmentu Pstl-Xbal 2931 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným s Pstl a Xbal k získání plasmidu pAB031 (7806 pb) (obr. č.3).
• ·
Příklad 10
Konstrukce plasmidu pAB013 (gen EHV-lgD)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN koňského oparového viru typu 1 (EHV-1) (kmen Kentucky D) (J.C. Audonnet a kol.,
J. Gen. Virol. 71 str. 2969 až 2978, 1990) a s následujícími oligonukleotidy:
AB030 (32 mer) (SEQ ID č.5)
5'AAAACTGCAGCATGTCTACCTTCAAGCTTATG 3'
AB031 (37 mer) (SEQ ID. č.6) 'CGCGGATCCTTACGGAAGCTGGGTATATTTAACATCC· 3 ' k izolování genu kódujícího glykoprotein gD (EHV-lgD) ve formě fragmentu Pstl-BamHl. Po vyčištění se produkt PCR 1228 pb digeruje v přítomnosti Pstl a BamHI k izolování fragmentu PstlBamHl 1211 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným lichokopytníků Pstl a BamHI k získání plasmidu pAB013 (6070 pb) (obr. č.4).
Příklad 11
Konstrukce plasmidu pABO32 (gen EHV-4 gD)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN koňského oparového viru typu 4 (EHV-4) (A. Cullinane a kol., J. Gen. Virol. 74, str. 1959 až 1964, 1993) a s následujícími oligonukleot idy:
ABO75 (33 mer) (SEQ ID č.7)
5'AAAACTGCAGATATGTCTACCTTCAAGCCTATG 3
ABO76 (33 ner) (SEQ ID č.8)
5'CGCGGATCCTTACGGAAGCTGAGTATATTTGAC 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein gD EHV-4 (EHV-4gD) ve formě fragmentu Pstl-BamHl. Po vyčištění se produkt PCR 1230 pb digeruje v přítomnosti Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHl 1212 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Pstl a BamHI k získání plasmidu pABO32 (6071 pb) (obr. č.5).
Příklad 12
Konstrukce plasmidu pABO43 (chřipkový koňský gen HA kmen Praha)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ADN koňského viru chřipky (Equine influenza Virus nebo EIV) (kmen H7N7 Praha) (J. McCauley číslo dostupnosti sekvence v genové bance = X62552), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy;
AB015 (36 mer) (SEQ ID č.9)
5’ACGCGTCGACATGAACACTCAAATTCTAATATTAGC 3'
AB016 (35 mer) (SEQ ID č.10)
5'CGCGGATCCCTTATATACAAATAGTGCCACCGCATG 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein HA koňského viru chřipky ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt RT PCR 1733 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHl k izolování fragmentu Sall-BamHl 1720 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHl k získání plasmidu pABO43 (6588 pb) (obr.č. 6).
Příklad 13
Konstrukce plasmidu pABO33 (koňského chřipkový gen HA kmen Suf folk)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ADN koňského viru chřipky (EIV) (kmen Suffolk) (M. Binns číslo dostupnosti sekvence v genové bance = X68437), připraveného způsobem popsaným v příkladu Č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
ABO77 (33 mer) (SEQ ID č.11)
5' ACGCGTCGACGCATGAAGACAACCATTATTTTG 3'
ABO78 (34 mer) (SEQ ID č.12)
5'CGCGGATCCTCAAATGCAAATGTTGCATCTGATG 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein HA koňského viru chřipky ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt
RT PCR 1729 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHl k izolo18
vání fragmentu Sall-BamHl 1717 pb. Fragment se váže s vektorem PVR1O12 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHl k získání plasmidu pABO33 (6584 pb) (obr. č.7).
Příklad 14
Konstrukce plasmidu pABO99 (koňského chřipkový gen HA kmen Fontainebleau)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN koňského viru chřipky (EIV) (kmen Fontainebleau), připraveného podle příkladu 4 a^-s následujícími oligonuk1eot idy:
AB186 (32 mer) (SEQ ID č.13)
5'TTTGCGGCCGCATGAAGACAACCATTATTTTG 3'
AB187 (35 mer) (SEQ ID č.14)
5'TTTGCGGCCGCTTACTCAAATGCAAATGTTGCATC 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein HA viru koňské chřipky (kmen Fonatainebleau) (obr. č.8 a SEQ ID S. 15) ve formě fragmentu Notl-Notl. Po vyčištění se produkt RT PCR 1724 pb digeřuje v přítomnosti Not 1 k izolování fragmentu NotlNotl 1710 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Notl k získání plasmidu pABO99 (6625 pb), který obsahuje gen HA (chřipkový koňský kmen Fontainebleau) v dobré orientaci vůči promotoru (obr. č. 9).
Příklad 15
Konstrukce plasmidu pABO85 (chřipkový koňský gen NP kmen Praha)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ADN viru koňské chřipky (EIV) (kmen H7N7 Praha) (0. Gorman a kol., J. Virol. 65. str. 3704 až 3714, 1991), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB156 (32 mer) (SEQ ID č.16)
4 ··· · 4 · 44 444 444
4 4 4 · 4
5'CCGGTCGACATGGCGTCTCAAGGCACCAAACG 3'
AB159 (34 mer) (SEQ ID č.17)
5'CGCGGATCCTTAATTGTCAAACTCTTCTGCATTG 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein NP viru koňské chřipky ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt RT PCR 1515 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHl k izolování fragmentu Sall-BamHl 1503 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným' Sall a BamHlb k získání plasmidu pABO85 (6371 pb) (obr. č.10).
Příklad 16 ·--Konstrukce plasmidu pABO84 (chřipkový koňský gen NP kmen J i 11 i n )
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ADN viru koňské chřipky (EIV) (kmen H3N8 Ji 11in) (O. Gorman a kol., J. Virol. 65. str. 3704 až 3714, 1991), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB156 (32 mer) (SEQ ID č.16)
5'CCGGTCGACATGGCGTCTCAAGGCACCAAACG 3'
AB157 (34 mer) (SEQ ID č.18)
5'CGCGGATCCTTAATTGTCATATTCCTCTGCATTG 3' k izolování genu kódujícího glykoprotein NP viru koňské chřipky ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt RT PCR 1515 pb digeruje pomocí Sall a BamHl k izolování fragmentu Sall-BamHl 1503 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHl k získání plasmidu pABO84 (6371 pb) (obr. č.ll).
Příklad 17
Konstrukce plasmidu pAB070 (podjednotkový gen C tetanového tox inu)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN Clostridium ·· 4 · 4 ·· · 4 • 4 4444 444
4 4 4
444 44 tetani (kmen CN3911) (J. Fairweather a kol., J. Bact. 165, str 21 až 27, 1986), připravenou způsobem popsaným v příkladu č. 2 a s následujícími o 1 igonuk1eotidy:
AB128 (34 mer) (SEQ ID č.19)
5AAACTGCAGATGAAAAATCTGGATTGTTGGGTTG 3
AB129 (30 mer) (SEQ ID č.20)
5'TTTGGATCCTTAATCATTTGTCCATCCTTC 3' ' .
k izolování sekvence kódující podjednotku C tobiinu Clostridium tetani ve formě fragmentu Pstl-BamHl. Po vyčištění se produkt PCR 1377 pb digeruje y přítomnosti Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHl 1361 pb. Fragmetft se váže s vektorem PVR1O12 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Pstl a BamHI k získání plasmidu pAB070 (6219 pb) (obr. č.12).
Příklad 18
Konstrukce plasmidu pABO17 (gen ospA Borrelia burgdorferi)
Reakce PCR se provádí s genomickou ADN Borrelia burgdorferi (kmen B31) (S. Bergstrom a kol., Mol. Microbiol 3, str. 479 až 486, 1989), připravenou způsobem popsaným v příkladu č. 2 a s následujícími o 1 igonuk1eotidy:
ABO38 (37 mer) (SEQ ID č.21)
5'ACGCGTCGACTATGAAAAAATATTTATTGGGAATAGG 3'
ABO39 (34 mer) (SEQ ID č.22)
5'CGCGGATCCCTTATTTTAAAGCGTTTTTAATTTC 3' k izolování genu kódujícího protein membrány OspA ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt PCR 842 pb digeruje pomocí Sall a BamHI k izolování fragmentu Sall-BamHl 829 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7) předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHI k získání plasmidu pABO17 (5698 pb) (obr. č.13).
Příklad 19
Konstrukce plasmidu pABO94 (gen E2 viru východní encefalitidy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru východní encefalitidy (EEV) (kmen North America 82V2137) (S. Weaver a kol., Virology 197, str. 375 až 390, 1993), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB176 (34 mer) (SEQ ID č.23)
5'AAACTGCAGATGGATTTGGACACTCATTTCACCC 3'
AB177 (44 mer) (SEQ ID δ.24)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCATGCCCTCGTCGGCTTAATGCAG 3 ' k izolování genu kódujícího glykoprotein E2 EEV ve formě fragmentu Pstl-BamHl. Po vyčištění se produkt RT-PCR 1294 pb digeruje v přítomnosti Pstl a BamHI k izolování fragmentu PstlBamHl 1278 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Pstl a BamHI k získání plasmidu pABO94 (6136 pb) (obr. č.14).
Příklad 20
Konstrukce plasmidu pABO93 (gen C viru východní encefalitidy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru východní encefalitidy (EEV) (kmen North America 82V2137) (S.Weaver a kol., Virology 197, str. 375 až
390, 1993), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4a s následujícími oligonukleotidy:
AB174 (33 mer) (SEQ ID č.25)
5AAACTGCAGATGTTCCCATACCCTACACTTAAC 3'
AB175 (45 mer) (SEQ ID č.26)
5'TGAAGATCTTCAATAAAAATCACCATGGCTCTGACCCCTCTGGTG 3' k izolování genu kódujícího protein kapsidu C (EEV C) ve formě fragmentu Pstl-Bglll. Po vyčištění se produkt RT-PCR 801 pb digeruje v přítomnosti Pstl a Bglll k izolování fragmentu
Pstl-Bglll 785 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Pstl a Bglll k zí• · skáni plasmidu pABO93 (5650 pb) (obr. č.15).
Příklad 21
Konstrukce plasmidu pABO96 (gen E2 viru západní encefalitidy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru západní encefalitidy (WEV) (kmen BSF17O3) (C. Hahn a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. Sp. st. a., 85, str. 5997 až 6001, 1988), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB180 (35 mer) (SEQ ID č.27) ,...
5' ACGCGTCGACATGAGCATTACCGATGACTTCACAC 3'
AB181 (44 mer) (SEQ ID č.28)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCAAGCGTTGGTTGGCCGAATACAG 3 k izolování genu kódujícího glykoprotein E2 WEV ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt RT-PCR 1304 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHl k izolování fragmentu SallBamHl 1291 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad č. 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHl k získání plasmidu pABO96 (6159 pb) (obr. č.16).
Příklad 22
Konstrukce plasmidu pABO95 (gen C viru západní encefalitidy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladů 6 s genomickou ARN viru západní encefalitidy (WEV) (kmen BSF17O3) (C.Hahn a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. Sp. st. a. 85, str. 5997 až 6001, 1988), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB178 (34 mer) (SEQ ID č.29)
5'ACGCGTCGACATGTTTCCATACCCTCAGCTGAAC 3'
AB179 (44 mer) (SEQ ID č.30)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCACCACGGTTCAGAACCTTCGGGG 3' k izolování genu kódujícího protein kapsidu C viru WEV ve formě fragmentu Sall-BamHl. Po vyčištění se produkt RT-PCR 809 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHI k izolování fragmentu Sall-BamHI 796 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHI k získání plasmidu pABO95 (5664 pb) (obr. č.17).
Příklad 23
Konstrukce plasmidu pABO98 (gen E2 viru venezuelské encefalit idy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru venezuelské encefalitidy (VEV) (kmen P676 (typ IC)) (R. Kinney a kol., Virology 191, str. 569 až 580, 1992), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB184 (35 mer) (SEQ ID č.31)
5'ACGGGTCGACATGTCCACCGAGGAGCTGTTTAAGG 3'
AB185 (44 mer) (SEQ ID č.32)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCAGGCCCGGGCAGTGCGGGCGCAG 3' k izolování genu kódujícího glykoproteinprotein E2 viru VEV ve formě fragmentu Sall-BamHI. Po vyčištění se produkt RT-PCR 1304 pb digeruje v přítomnosti Sall a BamHI k izolování fragmentu Sall-BamHI 1291 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad č. 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Sall a BamHI k získání plasmidu pABO98 (6159 pb) (obr. č.18).
Příklad 24
Konstrukce plasmidu pABO97 (gen C viru venezuelské encefalitidy)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru venezuelské encefalitidy (VEV) (kmen P676 (typ IC)) (R. Kinney a kol., Virology 191, str. 569 až 580, 1992), připraveného způsobem popsaným v příkladu č. 4 a s následujícími oligonukleotidy:
AB182 (30 mer) (SEQ ID č.33)
• * ft ftft · • ftftftft • · ftftft ftftft • ftft
5'AAACTGCAGATGTTCCCGTTCCAGCCAATG 3'
AB183 (45 mer) (SEQ ID č.34)
5'CGCGGATCCTCAATAAAAATCACCATTGCTCGCAGTTCTCCGGAG 3' k izolování genu kódujícího protein kapsidu C viru VEV ve formě fragmentu Pstl-BamHl. Po vyčištění se produkt RT-PCR 856 pb digeruje v přítomnosti Pstl a BamHI k izolování fragmentu Pstl-BamHl 839 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad č. 7), předběžně digerovaným Pstl a BamHI k získání plasmidu pABO97 (5698 pb) (obr. č.19).
Příklad 25
Konstrukce plasmidu pABO41 (gen G viru vztekliny)
Reakce RT-PCR se provádí způsobem popsaným v příkladu 6 s genomickou ARN viru vztekliny (kmen ERA) (A. Anilionis a kol., Nátuře 294, str. 275 aaž 278, 1981), připraveného způsobem popsaným v příkladu č.4 a s následujícími oligonukleotidy:
ABO11 (33 mer) (SEQ ID č.35)
5'AAAACTGCAGAGATGGTTCCTCAGGCTCTCCTG 3'
AB012 (34 mer) (SEQ ID č.36)
5'CGCGGATCCTCACAGTCTGGTCTCACCCCCACTC 3' k zesílení fragmentu 1589 pb obsahujícího gen kódující protein G viru vztekliny. Po vyčištění se produkt RT-PCR digeruje v přítomnosti Pstl a BamHI k získání fragmentu Pstl-BamHl 1578 pb. Fragment se váže s vektorem pVR1012 (příklad č. 7), předběžně digerovaným v přítomnosti Pstl a BamHI k získání plasmidu pABO41 (6437 pb) (obr. č. 20).
Příklad 26
Příprava a čištění plasmidů
K přípravě plasmidů, určených k vakcinaci zvířat, je možno použít veškeré techniky dovolující získat suspensi vyčištěných plasmidů převážně ve formě superzavinuté. Tyto techniky jsou
4 4 4 · · 4 4 4 4
444 4 · 4 44 444 444
4 4 4 4 4 4
444 *4 44 444 44 44 pracovníkům v oboru dobře známy. Citovat lze zejména techniku alkalické lyse následované dvakrát po sobě následujícím ultraodstředěním pod gradientem chloridu česného v přítomnosti bromidu ethidia, jak je popsal J. Sambrook a kol. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York 1989). Lze se též orientovat na patentové spisy PCT WO 95/21250 a PCT WO 96/02658, které popisují způsoby průmyslové výroby plasmidů použitelných k vakcinaci. Pro účele výroby vakcin (viz příklad 17), jsou vyčištěné plasmidy resuspendovány způsobem k získání vysoce koncentrovaných roztoků (více než' 2 mg/ml) vhodných ke skladování. K tomu jsou plasmidy resuspendovány bud v ultraČisté vodě nebo v pufru TE (Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8).
Příklad 27
Výroba asociovaných vakcin
Různé plasmidy, potřebné k výrobě asociované vakciny, se smísí z jejich koncentrovaných roztoků (příklad 16). Smísení se provede tak, aby konečná koncentrace každého plasmidu odpovídala účinné dávce každého plasmidu. Použitelnými roztoky k nastavení konečné koncentrace vakciny mohou být bud 0,9%
roztok chloridu sodného, nebo pufr PBS, cházejí v úvahu také zvláštní formulace. kationtově lipidy. K výrobě vakcin při- i jako jsou liposomy a
Příklad 28 Vakcinace koní
Koně se vakcinují p1asmid. dávkami 100 pg, 250 pg nebo 500 gg na
Injektovat se dá intramuskulárně injekční stříkačkou do
krčních svalů. V torno případě jsou vakcinační dávky podávány ve množství 2 ml. Injektovat lze také intradermicky za použití ··· • ·© ·» ·* « · · « • · · · · • ··· ♦ · · • © · » «·· ©· ·· ©« ·· • · » · • · · ·
9© · ©· · • · ·· ·· tryskového kapalinového injekčního přístroje (bez injekční jehly) dodávajícího 0,2 ml v 5 místech (0,04 ml na jedno místo) (například přístrojem PIGJET). V tomto případě jsou dávky vakciny podávány v objemech 0,2 nebo 0,4 ml, což odpovídá jednomu nebo dvěma podáním. Pokud se provádějí dvě po sobě následující podání pomocí přístroje PIGJET, provádějí se posunutým způsobem tak, že dvě zóny injektáže jsou od sebe vzdáleny přibližně 1 až 2 cm.
Průmyslová využitelnost
Složení vakciny pro ošetřování koní napadených různým virovým onemocněním a k prevenci takových onemocnění.
w.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků, jmenovitě koní, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň tři účinné po 1ynuk1eotidové vakciny, z nichž každá zahrnuje integrující plasmid k expresi in vivo v hostitelských buňkách gen účinný proti nemocem lichokopytníků, přičemž jsou tyto účinnosti voleny ze souboru zahrnujícího virus rhinopneumonie lichokopytníků EHV, virus chřipky lichokopytníků EIV a tetanu, přičemž plasmidy mají pro každou účinnost jeden nebo několik genů volených ze souboru zahrnujícího gB a gD pro virus rhino- pneumonie lichokopytníků, HA, NP, N pro virus chřipky lichokopytníků a gen kódující alespoň část podjednotky C tetanového toxinu.
  2. 2. Formulace vakciny podle nároku 1, vyznačující se t í m, že vakcina obsahuje v účinnosti proti koňské rhinopneumonii alespoň jeden antigen kmene EHV-1 a alespoň jeden antigen kmene EHV-4, s výhodou stejného typu.
  3. 3. Formulace vakciny podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje geny gB a gD viru koňské rhinopneumonie.
  4. 4.
    s e soubor
    Formulace t í m, že vakciny podle obsahuje gen genů kódujících HA a NP nároku 1, vyznačuj í cí kódující hemaglutinin HA nebo viru koňské chřipky.
  5. 5. Formulace vakciny podle nároku 1 až 4, vyznačující se tím, že obsahuje jeden nebo nebo několik účinků na ostatní koňské choroby ze souboru zahrnujícího virus encefalitidy východní EEV, západní WEV a venezuelské VEV, s výhodou všech tří současně, účinost proti nemoci Lyme, viru koňského tepenného zánětu a viru vztekliny, přičemž plasmidy zahrnují pro každou účinnost jeden nebo několik genů volených ze souboru genů protigenů C a E2 encefalitid, OspA, OspB a • · • · plOO nemoci Lyme, Ε, M a N koňského tepenného zánětu a genu G pro vzteklinu.
  6. 6. Formulace vakciny podle nároku 5, vyznačující se t í m, že zahrnuje gen E2 nebo geny C a E2 encefalitidy.
  7. 7. Formulace vakciny podle nároku 5, vyznačuj i cí se t i m, že zahrnuje gen OspA viru nemoci' Lyme.
  8. 8. Formulace vakciny podle nároku 1 až 7, vyznačující se tím, že obsahuje 10 ng^až 1 mg, s výhodou 100 ng až 500 pg, výhodněji 1 pg až 250 gg každého plasmidu.
  9. 9.
    Použití alespoň jednoho plasmidu podle nároku 1 až 8 k výrobě vakciny určené k vakcinaci primovakcinovaných koní alespoň první vakcinou volenou ze souboru zahrnujícího plně živou vakcinu, vakcinu zcela inaktivovanou, vakcinu podjednotkovou, rekombinantní vakcinu, přičemž první vakcinou je alespoň jeden antigen kódovaný alespoň jedním plasmidem nebo antigenem k zaručení křížové ochrany.
  10. 10. Vakcinační kit obsahující formulaci vakciny podle nároku 1 až 8 volenou ze souboru zahrnujícího plně živou vakcinu, vakcinu zcela inaktivovanou, vakcinu podjednotkovou, rekombinantní vakcinu, přičemž první vakcinou je antigen kódovaný polynukleotidovou vakcinou nebo antigen zaručující křížovou ochranu pro podávání při primovakcinaci a s formulací vakciny.
  11. 11. Formulace vakciny podle nároku 1 až 8 doprovázená poznámkou poukazující na to, že je tato formulace použitelná k první vakcinaci koní volenou ze skupiny zahrnující plně živou vakcinu, vakcinu zcela inaktivovanou, vakcinu podjednotkovou, rekombinantní vakcinu přičemž tato první vakcina obsahuje jeden nebo několik antigenů kódovaných jednou polynukleotidovou vakcinou nebo antigen zaručujícími křížovou ochranu.
CZ0017499A 1996-07-19 1997-07-15 Vakcína proti viru chripky savcu celedi konovitých EIV, použití této vakcíny a souprava tuto vakcínu obsahující CZ300593B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609400A FR2751226B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ17499A3 true CZ17499A3 (cs) 1999-05-12
CZ300593B6 CZ300593B6 (cs) 2009-06-24

Family

ID=9494494

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0017499A CZ300593B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-15 Vakcína proti viru chripky savcu celedi konovitých EIV, použití této vakcíny a souprava tuto vakcínu obsahující
CZ20080390A CZ301365B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-15 Imunogenní kompozice pro vyvolání u savce celedi konovitých imunologické odezvy proti viru rinopneumonitidy, použití této kompozice pro výrobu léciva a souprava obsahující tuto kompozici

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20080390A CZ301365B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-15 Imunogenní kompozice pro vyvolání u savce celedi konovitých imunologické odezvy proti viru rinopneumonitidy, použití této kompozice pro výrobu léciva a souprava obsahující tuto kompozici

Country Status (13)

Country Link
US (2) US6207166B1 (cs)
EP (2) EP0936922B1 (cs)
JP (2) JP2000516199A (cs)
AR (2) AR009947A1 (cs)
AU (1) AU735372B2 (cs)
BR (1) BR9710502A (cs)
CA (2) CA2260858C (cs)
CZ (2) CZ300593B6 (cs)
DE (1) DE69734778T2 (cs)
FR (1) FR2751226B1 (cs)
NZ (1) NZ333754A (cs)
PL (1) PL188409B1 (cs)
WO (1) WO1998003198A1 (cs)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751226B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
FR2775601B1 (fr) * 1998-03-03 2001-09-21 Merial Sas Vaccins vivants recombines et adjuves
FR2776928B1 (fr) * 1998-04-03 2000-06-23 Merial Sas Vaccins adn adjuves
FR2794648B1 (fr) * 1999-06-10 2003-03-07 Merial Sas Vaccins adn pour animaux de compagnie et de sport
AU782154C (en) * 1999-06-10 2006-02-09 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. DNA vaccines for pets and sport animals
US6645740B1 (en) 1999-06-10 2003-11-11 Merial Limited Nucleic acids encodings equine GM-CSF
EP1282640A2 (en) * 2000-05-01 2003-02-12 Powderject Vaccines, Inc. Nucleic acid immunization
US6803041B2 (en) * 2001-03-20 2004-10-12 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Equine herpesvirus vaccine
FR2823222B1 (fr) 2001-04-06 2004-02-06 Merial Sas Vaccin contre le virus de la fievre du nil
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP1606419A1 (en) 2003-03-18 2005-12-21 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
MXPA06005424A (es) 2003-11-13 2007-01-25 Univ Georgia Res Found Metodos para caracterizar virus de enfermedad bursal infecciosa.
EP1718770B1 (en) 2004-02-19 2011-05-25 The Governors of the University of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
US7959929B2 (en) 2005-04-21 2011-06-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
US11865172B2 (en) 2005-04-21 2024-01-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
ATE461710T1 (de) 2005-04-25 2010-04-15 Merial Ltd Nipah-virus-impfstoffe
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
WO2007056614A1 (en) 2005-11-14 2007-05-18 Merial Limited Gene therapy for renal failure
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
US7682619B2 (en) 2006-04-06 2010-03-23 Cornell Research Foundation, Inc. Canine influenza virus
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
HRP20130643T1 (hr) 2007-05-02 2013-08-31 Merial Limited Dnk-plazmidi koji imaju poboljšanu ekspresiju i stabilnost
EP2367566B2 (en) 2008-11-28 2019-11-27 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant avian influenza vaccine and uses thereof
EP2414386B1 (en) 2009-04-03 2016-01-27 Merial Limited Newcastle disease virus vectored avian vaccines
AR079767A1 (es) 2009-12-28 2012-02-15 Merial Ltd Antigeno ndv (virus de la enfermedad de newcastle) recombinante y usos del mismo
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
BR112012023852B1 (pt) 2010-03-12 2020-11-10 Biolex Therapeutics vacinas recombinantes do vírus da língua azul e usos das mesmas
EP3156070A3 (en) 2010-08-31 2017-06-14 Merial Inc. Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
WO2012138783A2 (en) 2011-04-04 2012-10-11 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US20140287931A1 (en) 2011-04-04 2014-09-25 Stichting Het Nederlands Kanker Instituut - Antoni Van Leeuwenhoek Ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
US9216213B2 (en) 2011-04-20 2015-12-22 Merial, Inc. Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
HK1200329A1 (en) 2011-04-25 2015-08-07 先进生物学实验室股份有限公司 Truncated hiv envelope proteins (env), methods and compositions related thereto
CA2837582C (en) 2011-05-27 2021-03-02 Merial Limited Genetic vaccines against hendra virus and nipah virus
ES2674439T3 (es) 2011-06-01 2018-06-29 Merial, Inc. Administración sin aguja de vacunas contra el VSRRP
EA031229B1 (ru) 2011-08-12 2018-12-28 Мериал, Инк. Способ витрификации биологического материала
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
CN104203271B (zh) 2012-02-14 2017-08-25 梅里亚股份有限公司 表达狂犬病病毒和ox40蛋白的重组痘病毒载体及从其制造的疫苗
DK2814508T5 (da) 2012-02-14 2017-06-12 Merial Inc Rotavirus-underenhedsvacciner og fremgangsmåder til fremstilling og anvendelse deraf
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
KR101490292B1 (ko) 2012-04-16 2015-02-04 한국생명공학연구원 신규한 ｈ3ｎ8 말 인플루엔자 바이러스
RU2656187C2 (ru) 2012-06-13 2018-05-31 Мериал, Инк. Реассортантные btv и ahsv вакцины
HK1216006A1 (zh) 2013-03-12 2016-10-07 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. 反向遺傳學施馬倫貝格病毒疫苗組合物，和其使用方法
AU2015343369B2 (en) 2014-11-03 2018-11-22 Georgia Tech Research Corporation Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
CA2990643C (en) 2015-06-23 2023-10-17 Merial, Inc. Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
KR20180041724A (ko) 2015-08-20 2018-04-24 메리얼 인코포레이티드 Fcv 재조합 백신 및 그의 용도
US10080798B2 (en) 2015-09-29 2018-09-25 Merial Inc. Canine parvovirus (CPV) virus-like particle (VLP) vaccines and uses thereof
MA42640B1 (fr) 2015-11-23 2021-06-30 Merial Inc Protéines de fusion de dmdv et e2 et leurs utilisations
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途
CN109136264B (zh) * 2018-09-19 2022-07-29 天康制药(苏州)有限公司 马疱疹病毒1型gB-gD融合蛋白、重组载体和真核细胞株及其制备方法和疫苗

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4631191A (en) * 1985-06-20 1986-12-23 Biotechnology Research Partners, Ltd. Methods and compositions useful in preventing equine influenza
US4944942A (en) * 1987-08-27 1990-07-31 Mobay Corporation Intranasal vaccination of horses with inactivated microorganisms or antigenic material
SU1671688A1 (ru) * 1989-01-27 1991-08-23 Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Молекулярной Биологии Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к гликопротеиду Е1 вируса восточного энцефаломиелита лошадей
US5185440A (en) * 1989-06-20 1993-02-09 North Carolina State University cDNA clone coding for Venezuelan equine encephalitis virus and attenuating mutations thereof
FR2659349B1 (fr) * 1990-03-12 1993-12-24 Rhone Merieux Virus herpes recombinants notamment pour la realisation de vaccins, leur procede de preparation, les plasmides realises au cours de ce procede et les vaccins obtenus.
US5643578A (en) * 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
US5243121A (en) 1992-03-19 1993-09-07 Engelhard Corporation Fluid catalytic cracking process for increased formation of isobutylene and isoamylenes
US5925358A (en) * 1993-02-26 1999-07-20 Syntro Corporation Recombinant fowlpox viruses and uses thereof
EP0740704A1 (en) * 1994-01-27 1996-11-06 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit
FR2751226B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
WO1999050292A1 (en) * 1998-03-27 1999-10-07 The Secretary Of State For Defence Recombinant virus

Also Published As

Publication number Publication date
PL188409B1 (pl) 2005-01-31
EP1647281A3 (fr) 2009-08-05
JP2000516199A (ja) 2000-12-05
EP1647281A2 (fr) 2006-04-19
CA2260858A1 (en) 1998-01-29
BR9710502A (pt) 1999-08-17
AU735372B2 (en) 2001-07-05
CA2660355A1 (en) 1998-01-29
AR009947A1 (es) 2000-05-17
CZ300593B6 (cs) 2009-06-24
CA2660355C (en) 2012-05-22
JP2008143900A (ja) 2008-06-26
FR2751226B1 (fr) 1998-11-27
CA2260858C (en) 2011-01-18
EP0936922B1 (fr) 2005-11-30
DE69734778T2 (de) 2006-09-07
PL331202A1 (en) 1999-07-05
DE69734778D1 (de) 2006-01-05
CZ301365B6 (cs) 2010-01-27
AU3772797A (en) 1998-02-10
WO1998003198A1 (fr) 1998-01-29
FR2751226A1 (fr) 1998-01-23
US6558674B1 (en) 2003-05-06
US6207166B1 (en) 2001-03-27
AR059828A2 (es) 2008-04-30
EP0936922A1 (fr) 1999-08-25
NZ333754A (en) 2001-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ17499A3 (cs) Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků jmenovitě koní
KR100620302B1 (ko) 개 질병, 특히 호흡기 및 소화성 질병 치료용폴리뉴클레오티드 백신 제제
KR100687509B1 (ko) 고양이과 동물의 폴리뉴클레오티드 백신 제제
CZ17599A3 (cs) Formulace hovězí vakciny proti dýchacím nemocem hovězího dobytka
KR20000065258A (ko) 조류 폴리뉴클레오티드 백신 제제
AU732885B2 (en) Canine parvovirus DNA vaccines
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU765539B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating horse diseases
HK1083763A (zh) 针对马科动物病变的多核苷酸疫苗配方
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170715