PL183819B1 - Sposób analizy DNA, para primerów i zestaw do wykrywania allelu Ep - Google Patents
Sposób analizy DNA, para primerów i zestaw do wykrywania allelu EpInfo
- Publication number
- PL183819B1 PL183819B1 PL96323178A PL32317896A PL183819B1 PL 183819 B1 PL183819 B1 PL 183819B1 PL 96323178 A PL96323178 A PL 96323178A PL 32317896 A PL32317896 A PL 32317896A PL 183819 B1 PL183819 B1 PL 183819B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- dna
- allele
- pair
- seq
- primers
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 108091092878 Microsatellite Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 42
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 24
- 101150076211 TH gene Proteins 0.000 claims description 16
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 15
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 11
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 6
- 101000829171 Hypocrea virens (strain Gv29-8 / FGSC 10586) Effector TSP1 Proteins 0.000 claims description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 10
- 230000000698 schizophrenic effect Effects 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 7
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 5
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 208000036752 Schizophrenia, paranoid type Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000002851 paranoid schizophrenia Diseases 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- NLIVDORGVGAOOJ-MAHBNPEESA-M xylene cyanol Chemical compound [Na+].C1=C(C)C(NCC)=CC=C1C(\C=1C(=CC(OS([O-])=O)=CC=1)OS([O-])=O)=C\1C=C(C)\C(=[NH+]/CC)\C=C/1 NLIVDORGVGAOOJ-MAHBNPEESA-M 0.000 description 2
- BZSALXKCVOJCJJ-IPEMHBBOSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-acetamido-3-methylbutanoyl]amino]-5-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-amino-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCC)C(=O)N[C@@H](CCCC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(N)=O)CC1=CC=CC=C1 BZSALXKCVOJCJJ-IPEMHBBOSA-N 0.000 description 1
- 125000001731 2-cyanoethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C([H])([H])C#N 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000020925 Bipolar disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 208000001495 Disorganized Schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 208000034826 Genetic Predisposition to Disease Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108700010674 N-acetylVal-Nle(7,8)- allatotropin (5-13) Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 101710136739 Teichoic acid poly(glycerol phosphate) polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000028683 bipolar I disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- -1 lauryl sarcosyl Chemical group 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N meglumine amidotrizoate Chemical compound C[NH2+]C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CC(=O)NC1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I MIKKOBKEXMRYFQ-WZTVWXICSA-N 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 108091035233 repetitive DNA sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000053632 repetitive DNA sequence Human genes 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/34—Polynucleotides, e.g. nucleic acids, oligoribonucleotides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
1. SPOSÓB ANALIZY DNA OSOBNIKA DO DIAGNOZOWANIA SCHIZOFRENII, ZNAMIENNY TYM, ZE POBIERA SIE PRÓBKE DNA, WYKRYWA SIE IN VITRO OBECNOSC ALLELU EP MIKROSATELITY HUMTH01 W GENIE TH, PRZY CZYM WYKRYWANIE ALLELU EP ODBYWA SIE DROGASEKWENCJONOWANIA I EWEN- TUALNIE ROZDZIELANIA NA ZELU I EWENTUALNIE DROGA SSCP. PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są: sposób analizy DNA, para primerów i zestaw do wykrywania allelu Ep. Sposób ten jest przeznaczony do diagnozowania schizofrenii, a zwłaszcza do wykrywania zmian w powtarzającej się sekwencji DNA obecnej w genie TH, którego niektóre postacie wydają się być specyficzne u schizofreników. Przedmiotem wynalazku są również primery użyteczne przy wykrywaniu związanych ze schizofrenią specyficznych alleli tej powtarzającej się sekwencji.
Obecność mutacji we wszystkich klasach powtarzających się sekwencji DNA jest zjawiskiem znanym, natomiast znaczenie funkcji tych mutacji nie jest określone. W ten sposób mikrosatelity stanowią obszerną klasę powtarzających się sekwencji DNA, które stanowią wielki polimorfizm związany z zmianami liczby powtarzających się motywów (odnośnik 1) i ewentualnie sekwencji tych motywów. Takie mikrosatelity zostały z tego powodu wykorzystane jako znaczniki genetyczne dla zestawiania map genetycznych oraz dla identyfikacji centrów związanych z patologiami (odnośnik 2). Wielkość różnych alleli mikrosatelity zależy od zmian liczby powtarzających się motywów. Doświadczenia z sekwencj onowaniem powtarzających się dimerów pozwalają na wykazanie jakiejś zmiany liczby powtarzających się motywów i ich sekwencji.
183 819
Zmiany te mogą odpowiadać mianowicie “doskonałym” powtórzeniom, to jest bez przerwy w sekwencji zasad, lub “niedoskonałym” powtórzeniom, zawierającym jedną lub więcej niż jednąprzerwę w sekwencjach motywów, które dotycządelecji lub insercji (odnośnik 3). W taki sam sposób zmiany długości i ewentualnie sekwencji zaobserwowano w powtarzających się motywach trymetrycznych i tetrametrycznych. Podobnie zmiany tego typu zaobserwowano w mikrosatelitach HUMHPRTB (odnośnik 4) i HUMTH01 (odnośnik 5).
Przedmiotem analiz były zwłaszcza badaniem zmian genetycznych związanych ze schizofrenią. W związku z tym przeprowadzono badania związku pomiędzy genem hydroksylazy tyrozynowej (TH) i schizofrenią, skierowane zwłaszcza na mikrosatelitę HUMTH01. Hydroksylaza tyrozynowajest enzymem ograniczającym drogę biosyntezy katecholamin. Różne badania genetyczne patologii psychiatrycznych i neurologicznych wykonano wykorzystując znaczniki zlokalizowane w genie TH (odnośnik 6 i 7). Jednakże aż do chwili obecnej nie ma w literaturze żadnego dowodu związku genetycznego ze schizofrenią.
Mikrosatelita HUMTHO1 zlokalizowany jest w pierwszym intronie genu hydrolazy tyrozynowej. Ten mikrosatelita utworzony jest z powtarzających się motywów tetrametrycznych TCAT. Stanowi on pewien polimorfizm, przy czym opisano różne allele mające pewne liczby powtarzających się zmiennych motywów. Najczęściej spotykany allel zawiera 10 powtarzających się motywów orazjednądelecję pary zasad w piątym powtarzającym się motywie, zawierającym sekwencję CAT.
Zbadano także związek genu TH ze schizofrenią, badając obecność zmian sekwencji i długości w mikrosatelicie HUMTH01. Uzyskane wyniki pozwoliły wykazać, że allel doskonały jest bardzo rzadki i występuję tylko u schizofreników. Wyniki te odtworzono na populacjach pacjentów różnego pochodzenia etnicznego. W ten sposób w populacji francuskiej 239 osobników, w tym 94 schizofreników, wykryto 6 różnych alleli, oznaczonych literami A, B, C, D, Ei i Ep. Allele te różnią się między sobą 4 parami zasad (1 motyw całkowity), z wyjątkiem dwóch dłuższych, które różnią się tylko jedną parą zasad. Sekwencjonowanie tych różnych alleli pozwoliło wykazać, że powtarzający się motywmikrosatelity HUMTH01 o sekwencji TCAT doskonale powtarza się w allelach A, B, C i D, zawierających odpowiednio 6,7,8 i 9 powtarzających się motywów. Natomiast allel E, który zawiera 10 powtarzających się motywów, zawiera w większości tych przypadków tę samą delecję tymidyny w piątym powtarzającym się motywie. Delecja ta prowadzi do niedoskonałego allelu o sekwencji (TCAT)4(CAT)(TCAT)5, oznaczonego jako Ei (niedoskonały). Allel Ei jest najczęstszym allelem w populacji kaukazkiej (odnośnik 5). I odwrotnie, doskonały allel E o sekwencji (TCAT) 10 (oznaczonyjako Ep)jest bardzo rzadki. W ten sposób w całej badanej populacji schizofreników tylko 6 pacjentów miało allel doskonały. Uzyskane wyniki wskazują w sposób nieoczekiwany, że wszystkie podmioty mające allel Ep sąschizofrenikami, podczas gdy allel ten niejest obecny u 145 osobników zdrowych (patrz tabela 1). Wyniki te wskazująna wysoko znaczący związek pomiędzy obecnościąallelu Ep i schizofrenią. Poza tym 5 schizofreników nosicieli allelu Ep - są sporadycznymi przypadkami schizofrenii, której podtyp kliniczny jest schizofrenią paranoidową w jednym przypadku, schizofrenią indyferentną w trzech przypadkach i schizofrenią zdezorganizowaną w jednym przypadku.
Badania te rozszerzono te badania na inną populację o różnym pochodzeniu etnicznym. W ten sposób podjęto podobne badania na populacji 90 Tunezyjczyków. Uzyskane wyniki wskazują że częstość różnych alleli A-E występujących w badanej populacji tunezyjskiej różni się znacznie od częstości występowania obserwowanej w populacji francuskiej (patrz tabela 1). Tymczasem tylko 4 osobniki sprawdziły się jako nosiciele allelu doskonałego Ep, przy czym wszyscy byli schizofrenikami (1 schizofrenia paranoidowa i 3 schizofrenie indyferentne), przy czym postacie schizofrenii były także postaciami sporadycznymi.
Wyniki te stanowią pierwszy dowód związku pomiędzy TH i schizofrenią. Wskazują one wyraźnie, że allel doskonały Ep mikrosatelity HUMTH01 o sekwencji (TCAT) 10 może być związany w sposób znaczący ze schizofremąi dzięki temu stanowi narzędzie genetyczne dla śledzenia patologii tego typu.
183 819
Specyfika związku tego allelu ze schizofrenią została poza tym potwierdzona przez badania na populacji 100 pacjentów cierpiących na sporadyczną psychozę maniakalno-depresyjną. Obecność allelu Ep nie została wykryta u żadnego z tych pacjentów.
Stwierdzenie związku pomiędzy tym allelem i schizofrenią otwiera możliwość licznych zastosowań w dziedzinie diagnostyki i terapeutyki. W ten sposób niniejszy wynalazek otwiera po raz pierwszy możliwość diagnozowania schizofrenii drogą testu biologicznego in vitro, a nie tylko na podstawie objawów klinicznych.
Przedmiotem niniejszego wynalazkujest sposób analizy DNA osobnika do diagnozowania schizofrenii polegający na wykrywaniu obecności allelu Ep mikrosatelity HUMTH01 w genie TH. Sposób ten nadaje się również do diagnostyki patologii całego spektrum schizofrenii, takich jak mianowicie schizotypia, indywidua schizoidowe i tym podobne. Wynalazek umożliwia również uściślenie kryteriów diagnostycznych tych patologii, które dzisiaj sątylko natury klinicznej. Ponadto wynalazek umożliwia również ujawnienie predyspozycji do tego typu zaburzeń psychiatrycznych przez identyfikację podatności genetycznej w rodzinie pacjenta-nosiciela tego allelu Ep. Z punktu widzenia terapeutycznego wynalazek umożliwia korzystnie ustalenie bardziej właściwego leczenia w zależności od typu schizofrenii. Potwierdzając hipotezę związku z drogą katecholamin, wynalazek pozwala na korzystanie z terapii bardziej ukierunkowanych. Ponadto, jeżeli związki funkcyjne obecności allelu Ep nie sądefmitywnie ustalone, to należy mieć na uwadze, że mikrosatelita HUMTH01 jest zlokalizowany w pierwszym intronie genu TH, obszarze, w którym wykazano alternatywne splatanie prowadzące do 4 izoform TH (odnośnik 8). Zatem możliwe jest, że zmiany genetyczne w tym obszarze mająwpływ na regulację ekspresji genu TH oraz że byłoby to związane z pojawieniem się schizofrenii.
Zgodnie z pierwszym aspektem przedmiotem wynalazkujest sposób analizy DNA osobnika do diagnozowania schizofrenii, polegający na tym, że pobiera się próbkę DNA, wykrywa się in vitro obecność allelu Ep mikrosatelity HUMTH01 w genie TH, przy czym wykrywanie allelu Ep odbywa się drogą sekwencjonowania i ewentualnie rozdzielania na żelu i ewentualnie drogą SSCP.
Ujawnienie tego allelu o sekwencji (TCAT)10 jest charakterystyczne dla niektórych schizofrenii. Brak tego allelu nie wyklucza istnienia schizofrenii, przy czym allel ten spotyka się w około 5% przypadków. Sposób według wynalazku nadaje się również do charakterystyki genetycznej schizofrenii oraz do ustalania podtypów schizofrenii. Jak już wskazano uprzednio, allel Ep wydaje się być obecny tylko w schizofreniach sporadycznych. Sposób według wynalazku nadaje się również do ujawniania skłonności do schizofrenii.
W sposobie według wynalazku wykrywanie allelu Ep można zrealizować różnymi technikami. Spośród użytecznych technik można korzystnie wymienić sekwencjonowanie, rozdzielanie na żelu oraz technikę SSCP. Co się tyczy sekwencjonowania, to użyteczna jest każda technika znana specjalistom. Korzystne jest mianowicie wykorzystanie automatycznego sekwenatora DNA. Sekwencjonowanie prowadzi się korzystnie na matrycach dwuniciowych sposobem zakończania łańcuchów wykorzystując primery fluorescencyjne. Odpowiednim instrumentem do tego celu jest instrument do sekwencjonowania Tag Dye Primer Kit dostępny w Applied Biosystem (Applied Biosystem, Foster CityCA). Sekwencjonowanie mikrosatelity HUMTH01, lub dokładniej wyizolowanego fragmentu zawierającego tego mikrosatelitę, umożliwia bezpośrednie rozpoznanie allelu obecnego u pacjenta, jak również ujawnienie obecności lub braku allelu Ep o sekwencji (TCAT) 10. Wyniki uzyskane przez sekwencjonowanie przedstawiono przykładowo na fig. 2.
Korzystnątechnikąujawniania allelu Epjest rozdzielanie na żelu. Technika ta daje korzyść polegającą na dyskryminacji pomiędzy różnymi allelami w zależności od ich wielkości, bez konieczności sekwencjonowania fragmentów DNA. Technika ta opiera się na migracji, w warunkach denaturacj i, poddanych denaturacj i fragmentów DNA w żelu akryloamidowym (korzystnie w żelu 6%-owym). Wywołanie prążków można dokonać każdym sposobem znanym specjalistom, w oparciu przykładowo o wykorzystanie primerów znaczonych (mianowicie promienie gamma na fosforze), wprowadzenie a-dCTP do badanych fragmentów, wykorzystanie promieni
183 819 alfa zimnych sond, wywołanie bromkiem etydyny lub wreszcie przez hybrydyzację (odcisk) sondą znaczoną promieniotwórcze. Dokładny protokół rozdzielania na żelu podany jest tytułem ilustracji w przykładach. Jak przedstawiono na fig. 3, ta technika umożliwia szybkie i bez sekwencjonowania rozróżnienie pomiędzy allelami A, B, C, D, Ei i Ep mikrosatelity.
Co się tyczy techniki identyfikacji za pomocąSSCP, to również chodzi tu o sposób rozdzielania na żelu akryloamidowym, lecz nie w warunkach denaturacji. Technika ta umożliwia dyskryminację różnych fragmentów w zależności od ich konformacji (patrz Przykłady).
Sposób według wynalazku realizuje się na próbce DNA pacjenta. Próbka powinna zawierać przynajmniej mikrosatelitę HUMTH01, który zawiera korzystnie całość lub część pierwszego intronu genu TH. Jeszcze korzystniej zawiera on fragment genu TH zawierającego mikrosatelitę HUMTH01 ograniczonego sekwencjami oskrzydlającymi. Próbkę DNA do badań można uzyskać z komórek pobranych od pacjenta. Korzystnie chodzi o komórki krwi (na przykład komórki jednojądrowe), które uzyskuje się łatwo przez proste pobranie krwi. Można wykorzystać także i inne typy komórek, takie jak fibroblasty, komórki śródbłonkowe, keratynocyty i tym podobne. Następnie DNA ekstrahuje się z komórek i wykorzystuje do wykrywania allelu Ep. W tym celu genomiczny uzyskany DNA można trawić za pomocąenzymów restrykcyjnych, klonować w odpowiednie wektory, selekcjonować na przykład pod względem TH albo przez hybrydyzację sondą odpowiadającą pierwszemu intronowi TH, a na koniec poddać analizie, jak opisano wyżej. Najkorzystniej, gdy wyesktrahowany DNA podda się uprzednio jednej lub kilku reakcjom powielania w celu uzyskania większej ilości materiału odpowiadającego obszarowi zawierającemu mikrosatelitę HUMTH01. Powielanie można przeprowadzić każdątechniką znaną specjalistom, a mianowicie techniką zwanąPCR (Reakcja łańcuchowa katalizowana polimerazą, Saiki R.K. etal. Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. et Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350). Pod tym względem powielanie można przeprowadzić korzystając z urządzenia “DNA thermal cycler) (Perkin Elmer Cetus) zgodnie z instrukcją producenta. Warunki temperaturowe oraz środowiskowe stosowane przy powielaniu są w ogólności warunkami opisanymi przykładowo przez Maniatisa et al., 1989. W przykładach podane sąrównież warunki specyficzne. Przy korzystaniu z niniejszego wynalazku korzystne jest wykorzystanie fragmentu DnA zawierającego mikrosatelitę HUMTH01 dostatecznie małego. Pozwala to korzystnie na dyskryminację pomiędzy allelami bez konieczności odwołania się do sekwencjonowania. Poza tym, jeżeli przeprowadzane są doświadczenia kontrolne sekwencjonowania, to korzystne jest również sekwencjonowanie tylko fragmentów o ograniczonej wielkości. Korzystnie jest, gdy wykorzystywany fragment DNA jest fragmentem powielonym zawierającym mniej niż 300 par zasad. Taki fragment zawiera mikrosatelitę HUMTH01 oraz sekwencje oskrzydlające genu TH, takie jak przedstawiono na fig. 1. Jeszcze korzystniej, gdy powielony fragment zawiera mniej niż 200 par zasad. Szczególnie znaczące wyniki uzyskano z powielonymi fragmentami zawierającymi mniej niż 160 par zasad, a zwłaszcza mniej niż 100 par zasad.
Przedmiotem wynalazku jest także para primerów składająca się z pary A zawierająca primery SEQ ID nr 1i 2, pary B zawierającej primery SEQ ID nr 3 i 4 oraz pary C zawierającej primery SEQ IN nr 5, umożliwiająca powielanie fragmentu zawierającego mniej niż 200 par zasad i przynajmniej mikrosatelitę HUMTH01 oraz obszar oskrzydlający.
Niniejszy wynalazek opisuje również specyficzne primery umożliwiające powielanie małych fragmentów DNA, zawierający mikrosatelitę HUMTH01. Wynalazek opisuje zwłaszcza 3 pary primerów umożliwiających odpowiednio powielanie fragmentów zawierających 192,156 i 77 par zasad. Sekwencja tych primerów, jak również sekwencja i położenie w genie TH powielonego fragmentu, podanajest w przykładach. Każdy inny primer umożliwiający powielenie fragmentu zawierającego mniej niż 300 par zasad i przynajmniej mikrosatelitę HUMTH01 i obszar oskrzydlający, pochodzący od sekwencji przedstawionej na fig. 1, stanowi również część niniejszego wynalazku. Korzystnie, gdy primery według wynalazku mają długość od 10 do 40 merów, a zwłaszcza od 15 do 30 merów. Sekwencję tych primerów można określić wychodząc z sekwencji przedstawionej na fig. 1, w zależności od wielkości powielonego fragmentu, jego lokalizacji wokół mikrosatelity oraz wybranej długości primerów.
183 819
Primery według wynalazku można zsyntetyzować jakimkolwiek sposobem znanym specjalistom, a mianowicie korzystając z chemii fosfoamidynianów, ewentualnie zabezpieczonych w położeniu β przez ugrupowanie cyjanoetylowe (Sinha et al., 1984, Giles 1985), za pomocą automatycznego syntezatora DNA, takiego jak syntezator Applied Biosystem, model 394 (Apllied Biosystem, Foster City CA), zgodnie z zaleceniami producenta. Primery można również znakować jakąkolwiek techniką znaną specjalistom.
Próbka DNA do badań może być DNA genomowym, DNAc oraz również RNA. Korzystnie chodzi o produkt powielenia DNA genomowego powielonego za pomocą primerów specyficznych, takich jak opisanych wyżej.
Innym przedmiotem wynalazkujest zestaw do wykrywania allelu Ep, zawierający parę primerów, takich jak określono wyżej. Taki zestawjest wykorzystywany jest w procesie diagnostycznym schizofrenii.
Jak wskazano uprzednio, niniejszy wynalazek podaje po raz pierwszy genetyczny sposób wykrywania i charakterystyki genetycznej chorób schizofrenicznych. Poza podanymi zastosowaniami diagnostycznymi sposób według wynalazku daje również ważne potencjalne możliwości terapeutyczne związane mianowicie z lepszym ustawieniem leczenia w zależności od dolegliwości.
Niniejszy wynalazek będzie opisany bardziej szczegółowo w następujących przykładach, które mają tylko charakter ilustracyjny, a nie ograniczający.
Wynalazek został zilustrowany następującymi rysunkami:
Figura 1: Sekwencja części pierwszego intronu genu TH zawierającego mikrosatelitę HUMTH01. Wskazano położenie primerów powielania.
Figura 2: Ujawnienie drogą sekwencjonowania allelu Ep mikrosatelity HUMTH01.
Figura 3: Ujawnienie przez rozdzielenie na żelu allelu Ep mikrosatelity HUMTH01.
Tabela 1: Rozkład allelów mikrosatelity HUMTH01 w badanych populacjach, dotkniętych lub niedotkniętych schizofrenią.
Przykłady
1. Przygotowanie DNA
Próbki krwi pobrano do heparyny i wydzielono komórki jednojądrowe na gradiencie Ficoll hypaąue (Pharmacia, Upsala, Szwecja), a następnie techniką standardową wyekstrahowano DNA. Do bezpośredniej ekstrakcji DNA wykorzystano następujący protokół:
Zebraną krew umieszczono w probówkach 50 ml i dodano roztwarzający roztwór buforowy w celu rozkładu czerwonych ciałek krwi (= 40 ml TRIS 1N HCl, pH 7,5, + 20 ml 0,5M EDTA + +H2O milliQ qsp 21); objętość końcowa: 50 ml. Zawiesinę wirowano następnie w temperaturze 4°C w ciągu 15 minut z prędkością 2500 obrotów na minutę. Ciecz klarowną odrzucono, a do pastylki dodano 50 ml roztwarzającego roztworu buforowego. Tę samą operację (wirowanie, usunięcie klarownej cieczy, potraktowanie pastylki roztwarzającym roztworem buforowym) powtórzono dwukrotnie, odzyskując pastylkę pod koniec trzeciego wirowania. Następnie dodaje się:
ml roztwarzającego roztworu buforowego (na 5 ml krwi wyjściowej),
125 pl 20% laurylosarkozylu, pl proteinazy K (20 ng/ml)
Otrzymany roztwór wymieszano i umieszczono na odpowiednio dobranej łaźni mieszając w temperaturze 55C w ciągu nocy.
Na następny dzień z rana dodaje się 2 objętości 95% etanolu (jeżeli 5 ml, to razem 15 ml), po czym roztwór poddaje się strącaniu przez inwersję, aż do utworzenia się kłaczków. Wtedy DNA przenosi się do 5 ml probówki za pomocą pipety P1000 (z końcówką w kształcie stożka ściętego). Następnie dodaje się 80% etanol i umieszcza mieszaninę w chłodziarce. Na następny dzień rano etanol wymienia się, a wieczorem alkohol odciąga się pozostawiając kłaczki do wyschnięcia (odwróconą probówkę stawia się na bibule celulozowej).
DNA podejmuje się następnie za pomocąTE IX; w zależności od wielkości kłaczków ilość TE zmienia się od 200 pl do 1 ml. Z kolei całość pozostawia się na noc na maszynie rotacyjnej w temperaturze 37°C, a stężenia DNA mierzy się spektrometrycznie.
183 819
2. Populacja francuska:
Badano 94 pacjentów różnego pochodzenia, dotkniętych chroniczną schizofrenią(62 mężczyzn i 32 kobiety, średni wiek 42+/-12,3), włącznie z 21 przypadkami rodzinnymi. Diagnozę postawiono według kryterium DSM III (odnośnik 9) korzystając z danych pochodzących bezpośrednio z tablic medycznych i wywiadu według tłumaczenia francuskiego Tableau des Desordres Affectifs et de l’Anxiete Schizophrenigue (SADS-LA, odnośnik 10). Każdego pacjenta przydzielono do podtypu klinicznego zgodnie z opisanym postępowaniem. Zbadano 145 świadków niewidocznych (84 mężczyzn i 61 kobiet, średni wiek 48+/-8,3), nie wykazujących żadnego schorzenia psychiatrycznego.
3. Populacja tunezyjska:
Badano 44 pacjentów różnego pochodzenia, dotkniętych chroniczną schizofrenią(33 mężczyzn i 11 kobiet, średni wiek 37+/-8,2), włącznie z 13 przypadkami rodzinnymi. Diagnozę postawiono według kryterium DSM III (odnośnik 11) korzystając z danych pochodzących bezpośrednio z tablic medycznych. Pacjentów tych porównano z 44 pacjentami kontrolnymi, bez żadnych związków między nimi (37 mężczyzn i 7 kobiet, średni wiek 35+/-5,9), nie wykazującymi żadnego schorzenia psychiatrycznego.
4. Primery wykorzystywane do reakcji powielania
Ukierunkowana matryca dla reakcji powielania złożona jest z allelu Ep mikrosatelity HUMTH01, którego sekwencja jest (TCAT)4TCA(TCAT)5. Mikrosatelita jest zlokalizowany w położeniu 1070 sekwencji genu TH, jak opublikowano i jest dostępne w Banku Genów (nr D00269).
Do powielania drogą PCR wykorzystano różne pary primerów. Pary te oraz wielkość powielonego fragmentu podane są niżej. Położenie tych primerów w sekwencji genu TH przedstawione jest na Fig. 1 (patrz również SEQ ID nr 1).
Para A:
15’ GGC AAATAG GGG GCA AAA 3’ (sens) (SEQ ID nr 1) oraz
2) 5’ TTA TTCAACCCG GCC CAC 3 ’ (imtysens) ) SEQIDnr 2 )
Przewidywana długość powielenia wynosi 192 pary zasad.
ParaB:
3) 5’ GC AAA TAG GGG GCA AAA 3’ (sensowny) (SEG ID nr 3) oraz
4) 5’ GGC TTC CGA GTG CAG GTC 3’ (antysensowny) (SEQ ID nr 4).
Przewidywana długość powielenia wynosi 156 par zasad,
Para C:
5) 5’ GTT CCT CCC TTA TTT CCC 3’ (sensowny) (SEQ ID nr 5) oraz
6) 5’ AGG GAA CAC AGA CTC CAT 3’ (antysensowny) (SEQ ID nr 6).
Przewidywana długość powielenia wynosi 77 par zasad.
5. Protokół reakcji powielania
Mieszanina stosowana do reakcji PCR zawiera: 40 ng genomowego DNA przygotowanego według przykładu 1,200 mM każdego z dATP, dCTP, dGTP i dTTP, 18 pikomoli (100 ng) każdego z primerów, 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8,5), 1,5 mM MgCl2 i 1,0 mCi (a-32P)dCTP (Amersham, UK) o objętości końcowej 15 ml.
Po początkowej 3-minutowej denaturacji w temperaturze 96°C dodano w temperaturze 92°C do każdej próbki (DNA + mieszanina) 0,75 jednostki,polimerazy Tag, po czym po tym etapie następowało 30 cykli obejmujących hybrydyzację w ciągu 30 w temperaturze 56°C, wydłużenie w ciągu 30 w temperaturze 72°C i denaturację w ciągu 30 w temperaturze 92°C.
6. Rozdzielanie na żelu
Trzy mikrolitry produktu z reakcji PCR zmieszano z 3 mikrolitrami “roztworu przerywającego” (0,025 błękitu bromofenolowego i 0,025 ksylenocyjanolu, 0,95 odjonizowanego formamidu) i umieszczono w żelu denaturującym (6% akryloamid/bisakryloamid, 19:1). Po migracji elektroforetycznej (2500 woltów, 55 mA) żel wyjmuje się i suszy. Następnie wkłada się go do kasety (bez ekranu powielającego) z błoną XOMAT (Kodak) dla wykonania zdjęcia autoradiograficznego i naświetla w ciągu nocy w temperaturze otoczenia.
183 819
7. Protokół dla reakcji PCR-SSCP
Reakcję tę przeprowadzono w kilku etapach według następującego protokołu:
- Powielanie drogą PCR (reakcja łańcuchowa polimeryzacji) sekwencji docelowej DNA (150-200 par zasad) ze znakowaniem promieniotwórczym dwóch nici (wykorzystanie a32P-ATP) lub tylko jednej nici (kinacja jednego z primerów za pomocą y^P-ATP).
Jeden ml produktu reakcji PCR miesza się z 2,5 ml roztworu buforowego (80% odjonizowanego formamidu, 50 mM TBE, 1 mM EDTA, 0,5% ksylenocyjanolu, 0,5% błękitu bromofenolowego).
- Denaturacja DNA w temperaturze 96°C w ciągu 3-5 minut.
- Szybkie ochłodzenie próbek w topniejącym lodzie.
- Szybkie umieszczenie w niedenaturującym żelu poliakryloamidowym (6%o akryloamid/bisakryloamid, 37,5:1, 0,5X TBE) .
- Migracja elektroforetyczna w temperaturze 4°C przy mocy 50 W lub w temperaturze otoczenia i przy mocy 10 W (z 10% gliceryny w żelu).
- Autoradiografia suchego żelu.
Tabela 1
| Francja | Tunezja | |||
| Allele | Kontrole1 | Schizofrenicyb | Kontrole’ | Schizofrenicyb |
| A (tcat) 6 | 54 (18,6%) | 40 (21,3%) | 20 (22,7%) | 18(20,5%) |
| B (teat) 7 | 54(18,6%) | 43 (22,9%) | 20 (22,7%) | 20 (22,7%) |
| C (teat) 8 | 38(131J%) | 18(9,6%) | 14(15,9%) | 8 (9,1%) |
| D (teat) 9 | 52 (17,9%) | 23 (12,2%) | 21(23,9%) | 26 (29,5%) |
| Ei (teat) 4 cat (teat) 5 | 92(31,8%) | 58 (30,8%) | 13(14,8%) | 12 (13,6%) |
| Ep (teat) 10 | 0 (0%) | 6** (03,2%) | 0 (0%) | 0 (0%) |
Spis odnośników
1. Weber i wsp.,., Am.J.Hum.Genet. 44 (1989) 388
2. Heame i wsp.,., Trends Genet. 8 (1992) 288
3. Weber i wsp.,., Genomics 7 (1990) 524
4. Edwards i wsp.,., Genomics 12 (1992) 241
5. Puers i wsp.,., Am.J.Hum.Genet. 53 (1993) 953
6. Craddock i wsp.,., Ann. of Medicine 25 (1993) 317
7. Leboyer i wsp.,.. Lancet 335 (1990) 1219
8. Grima i wsp.,.. Naturę 326 (1987) 707
9. American Psychiatric Association, Diagnostic and Statistical Manuał of mental disorders (3-wydanie) - Washington, DC = APA (1980)
10. Fyer i wsp.,., Anxiety Disorders clinic, New York:
New-York State Psychiatric Institute (1985)
11. American Psychiatric Association, Diagnostic and Statistical Manual of mental disorders (3-wydanie) - Washington, DC = APA (1987)
183 819
Lista sekwencji (1) Informacje ogóine (i) Wnioskodawca:
(A) Nazwa: RHONE-POULENC RORER S.A.
(B) Uiica: 20, Avenue Raymond Aron (C) Miasto: Antony (E) Kraj: Francj a (f) Kod pocztowy: 92165 (ii) Tytuł wynaiazku: Sposób diagnozowania schizofrenii (iii) Liczba sekwencji: 7 (iv) Sposób odczytywania na komputerze:
(A) Rodzaj nośnika: taśma (B) Komputer: kompatybiiny z IBM PC (C) System operacyjny: PC-DOS/MS-DOS (D) Oprogramowanie: Patentin Reiease #1,0, wersja #1.30 (OEB) (2) Informacje dia SEQ ID nr: 1 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (B) Typ: nukieotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: iiniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 1
GGCAAATAGG GGGCAAAA 18 (2) Informacje dia SEQ ID nr: 2 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (B) Typ: nukieotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: iiniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 2
TTATCCAGCC TGGCCCAC 18 (2) Informacje dia SEQ ID nr: 3 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (b) Typ: nukieotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: iiniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 3
GGCAAATAGG GGGCAAAA 18
183 819 (2) Informacje dla SEQ ID nr: 4 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (B) Typ: nukleotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 4
GGCTTCCGAG TGCAGGTC (2) Informacje dla SEQ ID nr: 5 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (B) Typ: nukleotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 5
GTTCCTCCCT TATTTCCC (2) Informacje dla SEQ ID nr: 6 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 18 par zasad (B) Typ: nukleotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 6
AGGGAACACA GACTCCAT (2) Informacje dla SEQ ID nr: 7 (i) Charakterystyka sekwencji:
(A) Długość: 636 par zasad (B) Typ: nukleotydowy (C) Liczba nici: dwie (D) Konfiguracja: liniowa (ii) Typ cząsteczki: DNA (iii) Hipotetyczny: nie (iv) Antysensywny: nie (xi) Opis sekwencji: SEQ ID nr : 7
CTTGAATCTT AACGATCGGA ATGTGGAAAC AAATCCATCC ACACACTCCA
AGATGGCCAG
AGGTCCCCGG CTGCTGCACC CAGCCCCCAC CCTACTCCCA CCTGCCCCTG
CCTCCCTCTG
120
183 819
| CCCCAGCTGC | CCTAGTCAGC | ACCCCAACCA | GCCTGCCTGC | TTGGGGAGGC |
| AGCCCCAAGG | 180 | |||
| CCCTTCCCCG | GCTCTAGCAG | CAGCTCATGG | TGGGGGGTCC | TGGGCAAATA |
| GGGGGCAAAA | 240 | |||
| TTCCCCGGGT | ATCTGGGCTC | TGGGGTGATT | CCCATTGGCC | TGTTCCTCCC |
| TTCTTTCCCT | 300 | |||
| CAT T CAT T CA | TTCATTCATT | CAT T CAT T CA | TTCATTCACC | ATGGAGTCTG |
| TGTTCCCTGT | 360 | |||
| GACCTGCACT | CGGAAGCCCT | GTGTACAGGG | GACTGTGTGG | GCCAGGCTGG |
| ATCATCGGGC | 420 | |||
| GCTTTTCAGC | CCACAGGAGG | GGTCTTCGGT | GCCTCCTTGG | GCACTCAGAA |
| CCTTGGGCTC | 480 | |||
| CCTGGCACAT | TTAAAATGGG | TTTTTATTTA | TGGACCTTGA | TTGAAATGTG |
| GTGTGAGTTG | 540 | |||
| TAGCAGTGTC | ATTTCCAGGT | ACCTTCTCAG | GGACACAGGG | CGCCCTCCCC |
| CGTCCTCCCC | 600 |
CGCCCTCCCC TACCCTCCCC CACCAGGCTC CCCATC
6
183 819
CTTGAATCTT AACGATCGGA ATGTGGAAAC AAATCCATCC AAAAAATCCA AGATGGCCAG AGGTCCCCGG CTGCTGCACC CAGCCCCCAC CCTACTCCCA CCTGCCCCTG CCTCCCTCTG CCCCAGCTGC CCTAGTCAGC ACCCCAACCA GCCTGCCTGC TTGGGGAGGC AGCCCCAAGG CCCTTCCCAG GCTCTAGCAG CAGCTCATGG TGGGGGGTCC TG1 ' 3GGCAAATA GGGGGCAAAA TTCAAAGGGT ATCTGGGCTC TGGGGTGATT CCCATTGGCC T5GTTCCTCCC TTATTTCCCT
CATTCATTCA TTCATTCATT CATTCATTCA TTCATTCAcc
ATGGAGTCTG TGTTCCCT6GT GACCTGCACT CGGAAGCC4CT
GTGTACAGGG GACTGTGTGG GCCAGGCTGG ATAA2TCGGGA GCTTTTCAGC CCACAGGAGG GGTCTTCGGT GCCTCCTTGG GCACTCAGAA CCTTGGGCTC CCTGGCACAT TTAAAATGGG TTTTTATTTA TGGACCTTGA TTGAAATGTG GTGTGAGTTG TAGCAGTGTC ATTTCCAGGT ACCTTCTCAG GGACACAGGG CGCCCTCCCC CGTCCTCCCC CGCCCTCCCC TACCCTCCCC CACCAGGCTC CCCATC
Fig· 1
183 819
ACGT A C G T
Η Π > Η Η Π > Η Η Ω > H t Ll L 11 1 1 1
Er allele EP allele
Fig- 2
183 819 _ΕΡ
-B
Fig. 3
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz Cena 4,00 zł.
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób analizy DNA osobnika do diagnozowania schizofrenii, znamienny tym, że pobiera się próbkę DNA, wykrywa się in vitro obecność allelu Ep mikrosatelity HUMTH01 w genie TH, przy czym wykrywanie allelu Ep odbywa się drogą sekwencjonowania i ewentualnie rozdzielania na żelu i ewentualnie drogą SSCP.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wykrywanie allelu Ep przeprowadza się na żelu.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że DNA pobiera się z komórek jednojądrowych.
- 4. Sposób według zastrz. 2 albo 3, znamienny tym, że przed wykrywaniem DNA powiela się.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że powielony DNA zawiera całość lub część intronu genu TH.
- 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że powielony DNA jest fragmentem mającym mniej niż 300 par 25 zasad i zawierającym mikrosatelitę HUMTH01 oraz sekwencje oskrzydlające.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że powielony DNA jest fragmentem zawierającym mniej niż 200 par zasad, a zwłaszcza mniej niż 160 par zasad.
- 8. Para primerów składająca się z pary A zawierająca primery SEQ ID nr 1i 2, pary B zawierającej primery SEQ ID nr 3 i 4 oraz pary C zawierającej primery SEQ IN nr 5, umożliwiająca powielanie fragmentu zawierającego mniej niż 200 par zasad i przynajmniej mikrosatelitę HUMTH01 oraz obszar oskrzydlający.
- 9. Para primerów według zastrz. 8, znamienna tym, że primery mają długość od 10 do 40 merów, a zwłaszcza od 15 do 30 merów'.
- 10. Zestaw do wykrywania allelu Ep mikrosatelity HUMTH01 w procesie diagnozowania schizofrenii, znamienny tym, że zawiera parę primerów składającą się z pary A zawierająca primery SEQ ID nr 1i 2, pary B zawierającej primery SEQ ID nr 3 i 4 oraz pary C zawierającej primery SEQ IN nr 5, umożliwiającą powielanie fragmentu zawierającego mniej niż 200 par zasad i przynajmniej mikrosatelitę HUMTH01 oraz obszar oskrzydlający.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9505264A FR2733766B1 (fr) | 1995-05-03 | 1995-05-03 | Methode de diagnostic de la schizophrenie |
| PCT/FR1996/000650 WO1996034980A1 (fr) | 1995-05-03 | 1996-04-29 | Methode de diagnostic de la schizophrenie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL323178A1 PL323178A1 (en) | 1998-03-16 |
| PL183819B1 true PL183819B1 (pl) | 2002-07-31 |
Family
ID=9478648
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96323178A PL183819B1 (pl) | 1995-05-03 | 1997-11-03 | Sposób analizy DNA, para primerów i zestaw do wykrywania allelu Ep |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6210879B1 (pl) |
| EP (1) | EP0826068B1 (pl) |
| JP (1) | JPH11504809A (pl) |
| KR (1) | KR19990008221A (pl) |
| CN (1) | CN1125881C (pl) |
| AP (1) | AP770A (pl) |
| AT (1) | ATE193559T1 (pl) |
| AU (1) | AU715264B2 (pl) |
| BG (1) | BG63017B1 (pl) |
| BR (1) | BR9608432A (pl) |
| CA (1) | CA2217332A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ291234B6 (pl) |
| DE (1) | DE69608682T2 (pl) |
| DK (1) | DK0826068T3 (pl) |
| EA (1) | EA001037B1 (pl) |
| ES (1) | ES2148760T3 (pl) |
| FR (1) | FR2733766B1 (pl) |
| GR (1) | GR3033592T3 (pl) |
| HU (1) | HUP9802918A3 (pl) |
| NO (1) | NO974974L (pl) |
| NZ (1) | NZ308132A (pl) |
| OA (1) | OA10534A (pl) |
| PL (1) | PL183819B1 (pl) |
| PT (1) | PT826068E (pl) |
| RO (1) | RO116731B1 (pl) |
| SI (1) | SI0826068T1 (pl) |
| SK (1) | SK282119B6 (pl) |
| UA (1) | UA49827C2 (pl) |
| WO (1) | WO1996034980A1 (pl) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6566065B1 (en) * | 1994-05-26 | 2003-05-20 | Mcgill University | Method of diagnosing schizophrenia by detecting a mutation in the (MTHFR) gene |
| US6395524B2 (en) | 1996-11-27 | 2002-05-28 | University Of Washington | Thermostable polymerases having altered fidelity and method of identifying and using same |
| WO2002016653A2 (en) | 2000-08-24 | 2002-02-28 | University Of Pittsburgh | Methods and systems for facilitating the diagnosis and treatment of schizophrenia |
| US20020106794A1 (en) * | 2000-08-30 | 2002-08-08 | Lorraine Iacovitti | Tyrosine hydroxylase 5' control elements and uses thereof |
| US20070072233A1 (en) * | 2001-05-01 | 2007-03-29 | Levitt Pat R | Methods and systems for facilitating the diagnosis and treatment of schizophrenia |
| DE10141464A1 (de) * | 2001-08-23 | 2004-03-04 | Genprofile Ag I.Ins. | Sequenzvarianten des für neuropsychiatrische Krankheiten verantwortlichen Gens 22444 und deren Verwendung |
| US6764824B2 (en) * | 2002-03-21 | 2004-07-20 | Council Of Scientific And Industrial Research | Primers for screening schizophrenia and a method thereof |
| AU2003231562A1 (en) * | 2003-05-19 | 2004-12-03 | Institute Of Mental Health, Peking University | Detecting method of the schizophrenia susceptible gene and use |
| US8633015B2 (en) * | 2008-09-23 | 2014-01-21 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Flow-based thermocycling system with thermoelectric cooler |
| US9764322B2 (en) | 2008-09-23 | 2017-09-19 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for generating droplets with pressure monitoring |
| US9417190B2 (en) | 2008-09-23 | 2016-08-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Calibrations and controls for droplet-based assays |
| US8951939B2 (en) | 2011-07-12 | 2015-02-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital assays with multiplexed detection of two or more targets in the same optical channel |
| US9156010B2 (en) | 2008-09-23 | 2015-10-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet-based assay system |
| US9598725B2 (en) | 2010-03-02 | 2017-03-21 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Emulsion chemistry for encapsulated droplets |
| US9132394B2 (en) | 2008-09-23 | 2015-09-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for detection of spaced droplets |
| US8709762B2 (en) | 2010-03-02 | 2014-04-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for hot-start amplification via a multiple emulsion |
| US11130128B2 (en) | 2008-09-23 | 2021-09-28 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Detection method for a target nucleic acid |
| WO2011120024A1 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Quantalife, Inc. | Droplet generation for droplet-based assays |
| US9492797B2 (en) | 2008-09-23 | 2016-11-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for detection of spaced droplets |
| WO2011120006A1 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Auantalife, Inc. A Delaware Corporation | Detection system for droplet-based assays |
| US12090480B2 (en) | 2008-09-23 | 2024-09-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Partition-based method of analysis |
| US10512910B2 (en) | 2008-09-23 | 2019-12-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet-based analysis method |
| WO2011028539A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Quantalife, Inc. | System for mixing fluids by coalescence of multiple emulsions |
| JP6155419B2 (ja) | 2010-03-25 | 2017-07-05 | バイオ−ラッド・ラボラトリーズ・インコーポレーテッド | 検出用の液滴輸送システム |
| EP2635840B1 (en) | 2010-11-01 | 2017-01-04 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for forming emulsions |
| AU2012231098B2 (en) | 2011-03-18 | 2016-09-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Multiplexed digital assays with combinatorial use of signals |
| US9347059B2 (en) | 2011-04-25 | 2016-05-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Methods and compositions for nucleic acid analysis |
| EP2737089B1 (en) | 2011-07-29 | 2017-09-06 | Bio-rad Laboratories, Inc. | Library characterization by digital assay |
| WO2013155531A2 (en) | 2012-04-13 | 2013-10-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Sample holder with a well having a wicking promoter |
| CN107677831A (zh) * | 2017-06-28 | 2018-02-09 | 深圳市龙岗中心医院 | 测定用于评估精神分裂症病人的诊断标志物的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5861504A (en) * | 1991-05-29 | 1999-01-19 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Eleven highly informative microsatelite repeat polymorphic DNA markers |
-
1995
- 1995-05-03 FR FR9505264A patent/FR2733766B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-04-29 AP APAP/P/1997/001126A patent/AP770A/en active
- 1996-04-29 DK DK96914258T patent/DK0826068T3/da active
- 1996-04-29 AT AT96914258T patent/ATE193559T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-04-29 UA UA97105318A patent/UA49827C2/uk unknown
- 1996-04-29 DE DE69608682T patent/DE69608682T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-29 SI SI9630174T patent/SI0826068T1/xx unknown
- 1996-04-29 HU HU9802918A patent/HUP9802918A3/hu unknown
- 1996-04-29 SK SK1479-97A patent/SK282119B6/sk unknown
- 1996-04-29 CN CN96193673A patent/CN1125881C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-29 EA EA199700355A patent/EA001037B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-04-29 WO PCT/FR1996/000650 patent/WO1996034980A1/fr not_active Application Discontinuation
- 1996-04-29 US US08/930,117 patent/US6210879B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-04-29 RO RO97-02043A patent/RO116731B1/ro unknown
- 1996-04-29 NZ NZ308132A patent/NZ308132A/en unknown
- 1996-04-29 JP JP8533069A patent/JPH11504809A/ja not_active Ceased
- 1996-04-29 BR BR9608432A patent/BR9608432A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-04-29 CZ CZ19973467A patent/CZ291234B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-04-29 EP EP96914258A patent/EP0826068B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-29 ES ES96914258T patent/ES2148760T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-04-29 PT PT96914258T patent/PT826068E/pt unknown
- 1996-04-29 CA CA002217332A patent/CA2217332A1/fr not_active Abandoned
- 1996-04-29 AU AU57678/96A patent/AU715264B2/en not_active Ceased
- 1996-04-29 KR KR1019970707747A patent/KR19990008221A/ko not_active Application Discontinuation
-
1997
- 1997-10-28 NO NO974974A patent/NO974974L/no not_active Application Discontinuation
- 1997-11-03 PL PL96323178A patent/PL183819B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-11-03 BG BG102016A patent/BG63017B1/bg unknown
- 1997-11-03 OA OA70124A patent/OA10534A/fr unknown
-
2000
- 2000-06-01 GR GR20000400502T patent/GR3033592T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL183819B1 (pl) | Sposób analizy DNA, para primerów i zestaw do wykrywania allelu Ep | |
| US5545527A (en) | Method for testing for mutations in DNA from a patient sample | |
| US5846710A (en) | Method for the detection of genetic diseases and gene sequence variations by single nucleotide primer extension | |
| AU769035B2 (en) | Detection of neoplasia by analysis of saliva | |
| US20030077592A1 (en) | Methods for analyzing LTC4 synthase polymorphisms and diagnostic use | |
| CA2435917A1 (en) | Highly sensitive method for the detection of cytosine methylation patterns | |
| JP2009544283A (ja) | 血液試料中ｅｇｆｒ変異の検出のための方法 | |
| WO2005106026B1 (en) | Use of genes as molecular markers in diagnosis of schizophrenia and diagnostic kit for the same | |
| CA2312273A1 (en) | Cancer susceptibility mutations of brca1 | |
| WO1999028506A2 (en) | Cancer susceptibility mutations of brca2 | |
| CN113308544A (zh) | 用于dna甲基化检测的试剂及食管癌检测试剂盒 | |
| US6063567A (en) | Method, reagents and kit for diagnosis and targeted screening for retinoblastoma | |
| Scholl et al. | Rapid screening and sensitive detection of NPM1 (nucleophosmin) exon 12 mutations in acute myeloid leukaemia | |
| EP1285090A1 (en) | Detection of nucleotide sequence variations via the proofreading activity of polymerases | |
| Crisan et al. | Polymerase chain reaction: amplification of DNA from fixed tissue | |
| RU2003130071A (ru) | Количественный диагностический анализ гипертензии | |
| WO2003102236A1 (en) | Method for determing ethnic origin by means of str profile | |
| EP1721005A1 (en) | Method for detecting the risk of cancer, coronary heart disease, and stroke by analysing a catalase gene | |
| JP4111481B2 (ja) | 心筋梗塞の遺伝的要因を判定するための方法及びこれに使用されるオリゴヌクレオチド | |
| JP2003517147A (ja) | ヒトの解毒能力を検定するための診断キット、方法およびマイクロアレイ | |
| RU2396354C2 (ru) | Способ идентификации мутаций s65c, h63d, c282y и полиморфизма 2 ex + 4t>c в гене hfe | |
| MXPA97008251A (en) | Method of detection of the gene associated with the schizofre | |
| JP2004000128A (ja) | 造血器腫瘍細胞検出方法および造血器腫瘍細胞検出キット | |
| JPWO2006068111A1 (ja) | ＰＰＡＲγ遺伝子の遺伝子多型に関連する表現型の判定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20060429 |