PL183162B1 - Sposób oznaczania glikoproteiny oraz zestaw do oznaczania glikoproteiny - Google Patents
Sposób oznaczania glikoproteiny oraz zestaw do oznaczania glikoproteinyInfo
- Publication number
- PL183162B1 PL183162B1 PL96323183A PL32318396A PL183162B1 PL 183162 B1 PL183162 B1 PL 183162B1 PL 96323183 A PL96323183 A PL 96323183A PL 32318396 A PL32318396 A PL 32318396A PL 183162 B1 PL183162 B1 PL 183162B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- reagent
- peroxidase
- proteinase
- liter
- glycoprotein
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 54
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 title claims description 39
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 title claims description 39
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 109
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 27
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 50
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 claims description 40
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 37
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 24
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 claims description 24
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 24
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 24
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims description 24
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 claims description 12
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 8
- -1 copper (II) compound Chemical class 0.000 claims description 8
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 7
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 7
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 7
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 7
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 6
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 241001523956 Parengyodontium album Species 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 241001019659 Acremonium <Plectosphaerellaceae> Species 0.000 claims description 2
- 241000235035 Debaryomyces Species 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 abstract description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract description 2
- 108091005996 glycated proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 39
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 23
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 230000008859 change Effects 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 11
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 10
- IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- YQHPCDPFXQXCMV-VIFPVBQESA-N (2s)-2-amino-6-[[2-(furan-2-yl)-2-oxoethyl]amino]hexanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNCC(=O)C1=CC=CO1 YQHPCDPFXQXCMV-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- ZOEGQXCAXOUFHN-UHFFFAOYSA-N Furosin Natural products OC1C2OC(=O)C(C=3C4C5(O)O)=CC(O)=C(O)C=3OC5(O)C(=O)C=C4C(=O)OC1C(CO)OC2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZOEGQXCAXOUFHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 3
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 3
- HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L 0.000 description 3
- 239000001433 sodium tartrate Substances 0.000 description 3
- 229960002167 sodium tartrate Drugs 0.000 description 3
- 235000011004 sodium tartrates Nutrition 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015428 Bilirubin oxidase Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- YZVWKHVRBDQPMQ-UHFFFAOYSA-N aminoantipyrene Natural products C1=C2C(N)=CC=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 YZVWKHVRBDQPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-UHFFFAOYSA-N billirubin-IXalpha Natural products N1C(=O)C(C)=C(C=C)C1=CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(C=C3C(=C(C=C)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- IXZISFNWUWKBOM-ARQDHWQXSA-N fructosamine Chemical compound NC[C@@]1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O IXZISFNWUWKBOM-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WDGFFVCWBZVLCE-UHFFFAOYSA-N purpurogallin Chemical compound C1=CC=C(O)C(=O)C2=C1C=C(O)C(O)=C2O WDGFFVCWBZVLCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 2-aminophenol Chemical class NC1=CC=CC=C1O CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTQGWROHRVYSPW-UHFFFAOYSA-N 3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 ZTQGWROHRVYSPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010059712 Pronase Proteins 0.000 description 1
- 230000010757 Reduction Activity Effects 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 238000000184 acid digestion Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 108010078123 amadoriase Proteins 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- RHMZKSWPMYAOAZ-UHFFFAOYSA-N diethyl peroxide Chemical class CCOOCC RHMZKSWPMYAOAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000005518 electrochemistry Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 150000008274 fructosamines Chemical class 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical group CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L nitro blue tetrazolium dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(6+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+6].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób oznaczania glikoproteiny w próbce, znamienny tym, ze miesza sie próbke z pierwszym odczynnikiem zawierajacym proteinaze i peroksydaze, tak aby wytworzyc sub- strat, który moze zostac utleniony przez oksydaze ketoaminowa; dodaje sie drugi odczynnik zawierajacy oksydaze ketoaminowa; oraz oznacza sie wydzielony nadtlenek wodoru lub zuzyty tlen, tak aby wykryc i/lub oznaczyc ilosciowo glikoproteine. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób oznaczania glikoproteiny oraz zestaw do oznaczania glikoproteiny; w szczególności wynalazek dotyczy sposobu obejmującego zastosowanie proteinazy w tym samym odczynniku, w którym znajduje się peroksydaza.
Peroksydaza chrzanowa jest oksydoreduktazą (dononoksyreduktaza nadtlenku wodoru; EC 1.11.1.7). Jest ona powszechnie stosowana w naukach przyrodniczych jako enzym wskaźnikowy (patrz np. Essays in Biochemistry, 1994; 28: 129-146) i stanowi jeden z członów rodziny enzymów peroksydazowych. Do konkretnych cech tego enzymu należy jego łatwość sprzęgania się z nośnikami, takimi jak przeciwciała lub inne enzymy, wysoka aktywność w stosunku do szeregu substratów oraz dobra stabilność termiczna. Stanowi on pojedynczy polipeptyd zawierający 308 aminokwasów, o względnej masie cząsteczkowej 44000 i zawiera prostetycznągrupę heminy nadającą brunatne zabarwienie. Enzym zawiera 4 mostki disulfidowe oraz dwa jony wapniowe, których usunięcie prowadzi do spadku stabilności.
183 162
Enzym ten katalizuje przenoszenie wodoru z donora wodoru do akceptora wodoru. Akceptorem wodoru jest zazwyczaj nadtlenek wodoru, choć mogą być również wykorzystywane nadtlenki metylu i etylu. Nadtlenek wodoru ulega redukcji zgodnie z następującą reakcją:
H2O2 + AH2 -> 2H2O + A
Wykorzystywać można wiele różnych donorów wodoru. Należą do nich fenole, aminofenole, indofenole, diaminy, leukobarwniki. W oksydacyjnym procesie usuwania wodoru z takich związków tworząsię produkty, które można wykryć wzrokiem lub określić ilościowo, zazwyczaj w spektrofotometrze. Do innych stosowanych metod wykrywania należy fluorymetria, luminometria i elektrochemia.
Enzym można fizycznie sprzęgać z innymi białkami, takimi jak przeciwciała lub ich fragmenty. Umożliwia to wykorzystanie specyficznych właściwości wiążących przeciwciała do pomiaru analitu lub do histologicznej identyfikacji lokalizacji antygenu. Można go także chemicznie połączyć z oksydazą w celu ilościowego oznaczenia substratu oksydazy. Istnieje wiele analitów, które można oznaczać z wykorzystaniem specyficznych oksydaz. Szereg spośród nich znajduje się w płynach biologicznych, a ich analiza może być przydatna z klinicznego punktu widzenia. Zastosowanie fenolu i aminoantypirenu jako chromogenów połączonych z układem oksydaza-peroksydazajest znane od dawna (patrz np. Ann. Clin. Biochem., 1969,6:24-27). Niedawno zaproponowano zamienniki fenolu, takie jak N-etylo-N-(2-hydroksy-3-sulfopropylo)-m-toluidyna (TOOS), bardziej czułe i barwiące się w szerokim zakresie pH (patrz np. Chem. Pharm. Buli., 1982; 30: 2492-2497).
Jednym z takich analitów jest glikoproteina lub fruktozamina. Jest to produkt nieenzymatycznej reakcji, w której glukoza lub inne cukry mogą tworzyć produkty kondensacji z wolnymi grupami aminowymi białka (patrz np. Clin. Chem., 1987; 33:2153-2163). We krwi do głównych glikozylowanych białek należy albumina, w której odsłonięte reszty lizyny zapewniają wolne grupy aminowe oraz hemoglobina, w której N-końcowy aminokwas, walina, może także reagować z glukozą. U diabetyków stężenia składników białkowych we krwi zmieniają się w stosunkowo wąskich granicach. Natomiast stężenie glukozy może zmieniać się znacząco w krótkim okresie czasu. Wiele zmian patologicznych występujących u diabetyków spowodowanych jest przedłużonym działaniem glukozy o podwyższonych stężeniach na białka. Z tego względu pomiar glikoprotein jest klinicznie przydatny w ocenie średniej ekspozycji na działanie glukozy w okresie życia białka.
Szereg metod zastosowano do oznaczania całkowitej glikoproteiny. Obecnie metodę wzorcową stanowi procedura furozynowa (patrz np. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 1981; 19: 81-87). Obejmuje ona trawienie białka w 6-molowym kwasie solnym w 95-100°C przez 18 godzin. Furozyna stanowi w tych warunkach produkt uzyskany z glikozylowanej lizyny, który można oznaczyć metodą HPLC. Jest to sposób zbyt złożony i czasochłonny do rutynowego wykorzystania. Nieznacznie prostszajest procedura z kwasem tiobarbiturowym, gdyż stosuje się krótsze trawienie kwasem (2-5 godzin), a uzyskany produkt, 5-hydroksymetylofurfuraldehyd można poddać reakcji z kwasem tiobarbiturowym uzyskując pochodną o maksimum absorbancji przy 443 nm. Inną metodę stanowi chromatografia powinowactwa fenyloboronianowego. W warunkach alkalicznych fenyloboronian tworzy kompleksy z cis-diolowymi grupami cukrów. Jednakże nawet przy dokładnej regulacji temperatury i wcześniejszym usunięciu glukozy dokładność tej metody jest niezadowalająca.
Najprostsza z wykorzystywanych w skali technicznej i najpowszechniej wykorzystywana metoda oznaczania glikoproteiny w surowicy opartajest na zdolności fruktozamin do redukowania w roztworze alkalicznym nitrobłękitu tetrazoliowego (NBT) z wytworzeniem błękitnego barwnika (patrz np. Clin. Chem. Acta, 1982; 127:87-95). Wielką zaletą takiej proceduryjest łatwość jej automatyzowania. Od tego czasu została ona zmodyfikowana tak, aby zmniejszyć zakłócenia spowodowane stężeniem białka, lipidów i kwasu moczowego (patrz np. Clin. Chem., 1991; 37: 552-556). Jednakże tylko około połowa zmierzonej aktywności redukcyjnej u normalnych
183 162 i będących pod ścisłą kontrolą diabetyków związana jest z glikoproteiną (patrz np. Clin. Chem., 1988; 320-323).
Aby wyeliminować problemy złej specyficzności zaobserwowanej w metodzie NBT opracowano metodę enzymatyczną (patrz np. EP-A-526150). W opracowanym dwuodczynnikowym układzie wykorzystuje się proteinazę do degradacji białka surowiczego, po czym stosuje się oksydazę ketoaminową, która działa na fragmenty glikozylowane. Oksydaza może być połączona z układem peroksydazy i chromogenu w końcowym punkcie oznaczenia, gdy ilość powstałej barwnej substancji jest proporcjonalna do ilości glikoproteiny w próbce. Opisano również podobny sposób z wykorzystaniem enzymu z innego źródła (patrz np. EP-A-576838). Jednakże wadą tych metod jest duże prawdopodobieństwo zakłóceń ze strony askorbinianu i bilirubiny, gdy stosuje się świeże próbki. Ponadto stosuje się w nich peroksydazę w drugim odczynniku, co wymaga przeprowadzenia korygującej ślepej próby z odczynnikiem.
Można również wspomnieć zgłoszenie EP-A-678576, które dotyczy oksydazy fruktozylo-aminokwasowej wytwarzanej przez hodowle szczepów Fusarium lub Gibberełla.
Proteinaza w pierwszym odczynniku musi wykazywać dużą aktywność w stosunku do glikoproteiny oraz zdolność uwalniania substratu dla oksydazy ketoaminowej. Zdolność do rozszczepiania różnych wiązań peptydowych jest bardzo korzystna z punktu widzenia szybkiego uwalniania substratu. Znanychjest szereg proteinaz niespecyficznych, takichjak pronaza i proteinaza K, a także wiele innych proteinaz o różnych specyficznościach, pochodzących z wielu różnych gatunków, stosowanych pojedynczo lub w kombinacji.
Z uwagi na wymaganą szeroko zakrojoną proteolizę białek krwi oraz niespecyficzny charakter proteinazy, zachowanie aktywności enzymu w roztworze, w którym znajduje się proteinaza, jest wysoce nieprawdopodobne. Z tego względu peroksydazę powinno się wprowadzać do drugiego spośród dwóch odczynników, tak aby proteinaza była narażona na działanie peroksydazy tylko przez stosunkowo krótki okres czasu w kuwecie po dodaniu drugiego odczynnika. Absorbancję kuwety mierzy się tuż przez dodaniem drugiego odczynnika i ponownie po wytworzeniu przez układ oksydaza ketoaminowa/peroksydaza barwnego produktu. Zmiana absorbancji pomiędzy tymi dwoma odczytami dla próbki związana jest nie tylko z ilością glikoproteiny w próbce, ale również z absorbancją samego drugiego odczynnika. Dlatego też musi się wykonać analizę ślepej próby w celu wprowadzenia korekty.
Aby metoda kliniczna została powszechnie zaakceptowana, bardzo ważne jest ograniczenie do minimum zakłóceń ze strony substancji innych niż pożądany analit. Do dwóch znanych związków zakłócających działanie układów oksydaza/peroksydaza należy bilirubina i askorbinian (patrz np. Ann. Clin. Biochem., 1984; 21: 398-404). Stężenie glikoproteiny w normalnej surowicy wynosi około 0,1 mmola/litr. Zakłócenia sąpoważniejsze w przypadku analitów obecnych w stosunkowo niskich stężeniach niż analitów takich jak glukoza i cholesterol, których normalne stężenia przekraczaaą3 mmole/litr. Wysoka doustna dawka witaminy C może spowodować poważne zakłócenia nawet w próbie cholesterolowej (patrz np. Clin. Chem., 1992; 38: 2160).
Różne rozwiązania zastosowano w celu zmniejszenia zakłóceń związanych z bilirubiną. Należy do nich obniżenie pH reakcji do 6,1 (patrz np. Clin. Chem., 1981; 27:375-379). Nie jest to odpowiednie rozwiązanie w przypadku enzymatycznej metody glikoproteinowej, gdyż niezbędny enzym wymaga wyższego pH. Można również na próbki podziałać wstępnie peroksydazą i nadtlenkiem wodoru, który utlenia bilirubinę (patrz np. Clin. Chem., 1992; 38: 2411-2413). Jednakże nie jest to dobry sposób, gdyż obejmuje stosowanie dodatkowego odczynnika, a ponadto jest wysoce prawdopodobne, że będzie on zakłócać przeprowadzaną następnie reakcję utleniania. Do usuwania bilirubiny zastosowano również oksydazę bilirubinową(patrz np. Clin. Chem., 1984; 30:1389-1392), z tym, że konieczne byłoby wówczas stosowanie dodatkowego odczynnika, gdyż jest raczej mało prawdopodobne, aby oksydaza bilirubinowa zachowała swoją aktywność w obecności proteinazy w pierwszym odczynniku do próby glikoproteinowej.
Żelazocyjanek potasu zastosowano do usuwania zakłócającej bilirubiny w stężeniu do 170 gmola/litrw próbie nakwas moczowy (patrz np. Clin. Chem., 1980; 26:227-231). Inni badacze wykazali nawet wyższy stopień usunięcia zakłócenia, z tym, że wprowadzenie żelazocyjan183 162 ku potasu do pierwszego odczynnika w układzie składającym się z dwóch odczynników powodowało niską stabilność odczynnika (patrz np. Euro. J. Clin. Chem., Clin. Biochem., 1993; 31:861 -868). Jak to zostanie opisane poniżej, stwierdzono, że zakłócenie w postaci bilirubiny w stężeniu do 400 pmoli/litr można usunąć za pomocą żelazocyjanku potasu dodanego do pierwszego odczynnika dwuodczynnikowej próby glikoproteinowej oraz, że ciekły odczynnik jest stabilny przez szereg tygodni w 4°C.
Zastosowano szereg metod w celu ochrony układów oksydaza/peroksydaza przed zakłóceniami ze strony askorbinianu. Najczęściej stosowanym środkiem jest oksydaza askorbinianowa (patrz np. Clin. Chem., 1980; 26:227-231), której nie możnajednak wprowadzać do odczynnika zawierającego proteinazę, gdyż zostanie ona wówczas szybko rozłożona. Wstępna obróbka węglem aktywnym (patrz np. Clin. Chem., 1989; 35: 2330-2333) jest niepraktyczna.
Opisano zakłócenia askorbinianowe za pomocą metali o potencjale redoksy równym lub wyższym od potencjału askorbinianu, ale niższym od potencjału redoksy substancji chromogenicznej. Metale takie, w tym miedź, mogąnależeć do grup VIII, I-B, II-B i IV-Aukładu okresowego (patrz np. US-A-3411887). Bardzo ważne jest aby potencjał redoksy jonu metalu był niższy od potencjału redoksy substancji chromogenicznej, gdyż w przeciwnym wypadku sam jon metalu będzie dawał zabarwienie w nieobecności oznaczonego analitu. Zbadano także zachowanie się miedzi w podobnym układzie oksydaza/peroksydaza, stwierdzając, że bardzo małe efekty można zaobserwować nawet przy wysokich stężeniach miedzi, rzędu 30 mmoli/litr (patrz np. Clin. Chem., 1982; 28: 578-588).
Według wynalazku okazało się, co zostanie opisane poniżej, że można usunąć zakłócenia askorbinianowe w metodzie oksydazowo/peroksydazowej oznaczania glikoproteiny poprzez zastosowanie miedzi w stężeniach poniżej 0,1 mmola/litr. Ponadto, jeśli w układzie takim zastosuje się wodę zamiast surowicy lub osocza, miedź będzie zdolna do bezpośredniego utleniania układu chromogenu. Wynika stąd, że potencjał redoksy miedzi musi być wyższy od potencjału układu chromogenu. Powód, dla którego miedź nie zakłóca analizy próbek surowicy lub osocza, może wynikać z wiązania miedzi przez produkty trawienia białek krwi przez proteinazę.
Celem wynalazku jest dostarczenie enzymatycznego sposobu oznaczania glikoproteiny w materiałach biologicznych, zgodnie z którym peroksydazę i proteinazę wprowadza się do tego samego odczynnika. Nieoczekiwanie proteinaza nie wpływa na aktywność peroksydazy. Inne składniki drugiego odczynnika nie przyczyniają się znacząco do absorbancji kuwety, tak że korygowanie poprzez wykonywanie ślepej próby nie jest konieczne. Zmianę absorbancji można po prostu porównać z absorbancją obserwowaną w przypadku wzorca zawierającego określoną ilość glikoproteiny.
Innym celem wynalazku jest zapewnienie ochrony działania glikoproteiny przed zakłóceniami ze strony askorbinianu lub bilirubiny, które mogą być obecne w próbce. Powodzenie w usuwaniu zakłócenia w postaci askorbinianu może również zależeć od wprowadzenia peroksydazy do pierwszego, a nie drugiego odczynnika.
Wynalazek może być także przydatny w szeregu procesach wymagających zastosowania peroksydazy w przypadku, gdy korzystne mogłoby być jej wymieszanie z proteazą. Do takich innych zastosowań należą przypadki, w których analit należy oddzielić od białka, aby umożliwić jego oznaczanie za pomocą oksydazy, albo takie, w których nie naruszone białka zakłócają oznaczenie. Sposób według wynalazku może być także przydatny do oznaczania określonych glikozylowanych składników w płynach biologicznych oraz do oznaczania glikozylowanej hemoglobiny.
Przedmiotem wynalazku jest sposób oznaczania glikoproteiny w próbce, charakteryzujący się tym, że miesza się próbkę z pierwszym odczynnikiem zawierającym proteinazę i peroksydazę, tak aby wytworzyć substrat, który może zostać utleniony przez oksydazę ketoaminową dodaje się drugi odczynnik zawierający oksydazę ketoaminową oraz oznacza się wydzielony nadtlenek wodoru lub zużyty tlen, tak aby wykryć i/lub oznaczyć ilościowo glikoproteinę.
Przedmiotem wynalazku jest również zestaw do oznaczania glikoproteiny, charakteryzujący się tym, że zawiera: pierwszy odczynnik zawierający proteinazę i peroksydazę; drugi od6
183 162 czynnik zawierający oksydazę ketoaminową; oraz ewentualnie środki do oznaczania powstałego nadtlenku wodoru lub zużytego tlenu.
Zazwyczaj sposób według wynalazku wykorzystuje się w odniesieniu do próbek biologicznych w postaci płynów ustrojowych, takich jak surowica lub osocze krwi.
Według wynalazku proteinazę stanowi zasadniczo proteinaza K, korzystnie z Tritirachium album, a peroksydazę stanowi peroksydaza chrzanowa. Korzystnie oksydazę ketoaminową otrzymuje się z grupy bakterii Klebsiella, z grzybów rodzaju Fusarium lub Acremonium albo z drożdży rodzajuDebaryomyces, korzystnie z Fusarium. (Oksydaza ketoaminowa katalizuje utlenianie atomu węgla w pozycji 1 grupy cukrowej glikoproteiny, co prowadzi do hydrolitycznego rozpadu wiązania aminowego i uwolnienia osonu cukrowego i nadtlenku wodoru z aminokwasu).
Zazwyczaj wykonywanie wymaganego pomiaru obejmuje wykorzystanie ewentualnie zmodyfikowanej reakcji Trinder (określanej niekiedy jako metoda „PAP”) lub elektrody tlenowej.
W korzystnym wykonaniu zakłóceniom ze strony askorbinianu przeciwdziała się wprowadzając w pierwszym odczynniku związek miedzi (II), korzystnie octan miedzi (II) oraz ewentualnie kwas żółciowy i/lub kwas batofenantrolinodisulfonowy; i/lub zakłóceniom ze strony bilirubiny przeciwdziała się wprowadzając w pierwszym i/lub odczynniku żelazocyjanek, korzystnie żelazocyjanek potasu. Ponadto w drugim odczynniku wprowadzić można kwas etylenodiaminotetraoctowy i/lub mannitol w celu utrzymania aktywności oksydazy ketoaminowej.
W obecnie korzystnym rozwiązaniu według wynalazku wykorzystuje się proteinazę K z Tritirachium album w stężeniu w kuwecie od 1do 10 g/litr wraz z peroksydazą chrzanową w kuwecie od 0,01 do 1 g/litr.
Wynalazek ilustrują następujące przykłady.
Przykład 1. Przygotowano dwie pary odczynników do oznaczania glikoproteiny. Jedna para zawierała peroksydazę w pierwszym odczynniku wraz z proteinazą, a druga para zawierała peroksydazę w drugim odczynniku. Pierwsza para zawierała 12 g/litr proteinazy K, 0,4 g/litr peroksydazy chrzanowej i 3,0 mmola/litr 4-aminoantypirenu w roztworze buforowym w postaci kwasu (N-2-hydroksyetyl)piperazyno-N/-(3-propanesulfoniowego) (EPPS) o stężeniu 100 mmoli/litr, pH 8,5 w pierwszym odczynniku oraz 10000jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 26,6 mmola/litr TOOS w buforze EPPS o stężeniu 100 mmoli/litr, pH 8,5 w drugim odczynniku. Druga para zawierała 12 g/litr proteinazy K i 3,0 mmola/litr 4-aminoantypirenu w buforze EPPS o stężeniu 100 mmoli/litr, pH 8,5 w pierwszym odczynniku oraz 10000jednostek/litr oksydazy ketoaminowej, 1,33 g/litr peroksydazy chrzanowej i 26,6 mmola/litr TOOS w buforze EPPS o stężeniu 100 mmoli/litr, pH 8,5 w drugim odczynniku.
Odczynniki zbadano z wykorzystaniem automatycznego analizatora Cobas Mira S. 100 (li odczynnika zawierającego proteinazę zmieszano w plastykowej kuwecie z 10jxl cukrzycowej ludzkiej surowicy i 40 jtl wody jako rozcieńczalnika w celu przepłukania wnętrza pojemnika z próbką. Po inkubowaniu przez 7 minut w 37°C, 30 jul drugiego odczynnika i 20 jil wody jako rozcieńczalnika zmieszano z zawartością tej samej kuwety. Absorbancję kuwety mierzono przy 550 nm w odstępach 25-sekundowych od rozpoczęcia pomiaru do 1,5 minuty po dodaniu drugiego odczynnika. Analizator automatycznie koryguje wyniki absorbancji uwzględniając rozcieńczenie zawartości kuwety w wyniku dodania drugiego odczynnika.
Wyniki dla kompozycji, w przypadku której peroksydaza chroniona była przed proteinazą poprzez dodawanie jej w drugim odczynniku przedstawiono na załączonej fig. 1. W celu wyliczenia zmian absorbancji spowodowanych przez glikoproteinę w próbce surowicy należy najpierw odjąć zmianę absorbancji próbki wody na skutek zmiany barwy spowodowanej dodaniem peroksydazy.
Załączona fig. 2 ilustruje wyniki dla kompozycji, w przypadku której peroksydaza dodana została jako część pierwszego odczynnika. Absorbancja próbki wody nie zmienia się w wyniku dodania drugiego odczynnika. Pomimo obecności proteinazy wraz z peroksydazą obserwowana zmiana absorbancji w próbce surowicy jest taka samajak zmiana przedstawiona na fig. 1 po odjęciu wyniku dla wody jako ślepej próby.
183 162
Przykład 2. Przygotowano odczynnik zawierający 0,2 g/litr peroksydazy chrzanowej i 2,25 mmola/litr 4-aminoantypirenu w buforze EPPS o stężeniu 100 mmoli/litr, pH 8,5, z dodatkiem i bez 12 g/litr proteinazy K. Odczynniki przechowywano w temperaturze pokojowej. Aktywność peroksydazy mierzono w każdym odczynniku po 0,5 i 24 godzinach od przygotowania odczynnika na podstawie jego zdolności do wytwarzania purpurogaliny z pirogalolu i nadtlenku wodoru. Wyniki przedstawiono poniżej.
| Czas (godziny) | Odczynnik z proteinazą K | Odczynnik bez proteinazy K |
| 0,5 | 43,9 kilojednostek/litr | 48,9 kilojednostek/litr |
| 24 | 47,1 kilojednostek/litr | 45,3 kilojednostek/litr |
Proteinaza K nie zmniejsza aktywności peroksydazy chrzanowej w roztworze w ciągu 24 godzin w temperaturze pokojowej.
Przykład3. Podwójny odczynnik do oznaczania glikoproteiny przygotowywano i przechowywano w 4°C. Pierwszy odczynnik zawierał 12 g/litr proteinazy K, 0,4 g/litr peroksydazy, 8 mmoli/litr TOOS, 100 pmoli/litr żelazocyjanku potasu, 300 pmoli/litr octanu miedzi i 1,2 mmola/litr winianu sodu w buforze z EPPS o stężeniu 75 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik zawierał 10000 jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 10 mmoli/litr 4-aminoantypirenu w buforze z EPPS o stężeniu 83 mmole/litr, pH 8,0.
Odczynniki zbadano na dwóch próbkach surowicy w aparacie Cobas Mira jak w przykładzie 1, przed i po przechowywaniu ciekłych odczynników przez 22 dni w 4°C. Próbki przechowywano w stanie zamrożonym stosując w każdej analizie świeżo odmrożoną porcję. Zmiany absorbancji spowodowane obecnością glikoproteiny wyliczano odejmując absorbancję tuż przed dodaniem drugiego odczynnika do absorbancj i zarejestrowanej po 2,1 minutach. Wyniki przedstawiono poniżej.
| Dni w 4°C | Zmiana absorbancji | |
| Surowica 1 | Surowica 2 | |
| 0 | 0,0282 | 0,1106 |
| 22 | 0,0310 | 0,1173 |
Z danych tych wynika, że przy wykonywaniu pełnej próby oksydazowo/peroksydazowej nie obserwuje się spadku sygnału na skutek degradacji peroksydazy chrzanowej przez proteinazę K po przechowywaniu odczynnika w 4°C przez 22 dni.
Przykład 4. Przygotowano 3 kompozycje do oznaczania glikoproteiny w celu zbadania wpływu peroksydazy na zdolność usuwania askorbinianu i bilirubiny, stanowiących zakłócenia. W kompozycji A pierwszy odczynnik zawierał 12 g/litr proteinazy K, 0,4 g/litr peroksydazy i 8 mmoli/litr TOOS w buforze z EPPS o stężeniu 75 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik zawierał 10000 jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 10 mmoli/litr 4-aminoantypirenu w buforze z EPPS o stężeniu 83 mmole/litr, pH 8,0. Kompozycja ta nie zawierała składników do eliminowania zakłóceń. Kompozycja B była podobna do A, z tym, że do pierwszego odczynnika dodano 100 pmoli/litr żelazocyj anku potasu, 300 pmoli/litr octanu miedzi i 1,2 mmola/litr winianu sodu. Dodatki te wprowadzono w celu zmniejszenia zakłóceń powodowanych przez bilirubinę i askorbinian. Kompozycja C była podobna do B, z tym, że pierwszy odczynnik nie zawierał peroksydazy. Drugi odczynnik zawierał peroksydazę w stężeniu 1,33 g/litr. Dzięki temu po zmieszaniu próbki, odczynników i rozcieńczalników a analizatorze, zgodnie z procedurą z przykładu 1, wszystkie trzy kompozycje zapewniały takie same stężenia peroksydazy w kuwecie.
183 162
Trzy kompozycje użyto do oznaczania glikoproteiny w czterech próbkach. Zastosowano (1) wodę, (2) rozcieńczoną surowicę kontrolną (1 część wody na 4 części surowicy), (3) surowicę rozcieńczonąw taki sam sposób podstawowym roztworem askorbinianu, tak że stężenie askorbinianu w surowicy wynosiło 400 gmoli/litr oraz (4) surowicę rozcieńczoną podstawowym roztworem nieskoniugowanej bilirubiny, tak że stężenie bilirubiny w surowicy wynosiło 400 pmoli/litr. Przy wyliczaniu wyników w przypadku kompozycji C zmianę absorbancji zmierzoną dla wody odejmowano od zmian absorbancji powodowanych przez próbki surowicy w celu skorygowania absorbancji spowodowanej obecnością peroksydazy w drugim odczynniku.
W poniższej tabeli wpływ askorbinianu i bilirubiny powodujących zakłócenia przedstawiono jako zmiany absorbancji obserwowane w obecności zakłóceń, wyrażone jako procent zmiany absorbancji dla surowicy kontrolnej.
| Kompozycja | Procent odzysku surowicy w obecności | |
| 400 pmoli/litr askorbinianu | 400 pmoli/litr bilirubiny | |
| A | 9 | 72 |
| B | 95 | 97 |
| C | 540 | 99 |
Bilirubina w stężeniu 400 jimoli/litr obniża zmianę absorbancji do wielkości stanowiącej 72% absorbancji próbki kontrolnej, gdy stosowana jest w kompozycji A. Jednakże kombinacja żelazocyjanku potasu, miedzi i winianu w pierwszym odczynniku całkowicie eliminuje zakłócenia w przypadku kompozycji B (z peroksydaząw pierwszym odczynniku) oraz kompozycji C (z peroksydaząw drugim odczynniku).
Zakłócenia powodowane przez askorbinian były szczególnie silne w przypadku kompozycji A, powodując ubytek ponad 90% sygnału. Dodatkowe składniki w kompozycji B zmniejszają ten wpływ do wielkości poniżej 5%. Jeśli jednak taką samą ilość peroksydazy doda się do drugiego odczynnika (kompozycja C), następuje zdecydowany wzrost zmiany absorbancji. Z tego względu w takim układzie usuwanie zakłóceń związanych z askorbinianem zależy od dodawania peroksydazy w pierwszym odczynniku.
Przykład 5.W celu zwiększenia do maksimum wydajności w laboratorium pożądane jest, aby czas wykonywania testu w automatycznym analizatorze był możliwie jak najkrótszy. W rzeczywistości w pewnych analizatorach nie można przeprowadzić procesów z dwoma odczynnikami, gdy pierwszy czas inkubacji przekracza 3 minuty. Szkodliwy wpływ skrócenia czasu inkubacji z pierwszym odczynnikiem na zdolność do usuwania zakłócenia w postaci askorbinianu ilustruje poniższa kompozycja A. Natomiast kompozycja B zawiera pewne dodatkowe składniki znacząco poprawiające usuwanie zakłócenia.
W kompozycji Apierwszy odczynnik zawierał 6 g/litr proteinazy K, 0,4 g/litr peroksydazy, 8 mmoli/litr TOOS, 20 gmoli/litr żelazocyjanku potasu, 250 ymoli/litr octanu miedzi i 1,0 mmola/litr winianu sodu w buforze z EPPS o stężeniu 75 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik zawierał 10000 jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 10 mmoli/litr 4-aminoantypirenu w buforze z EPPS o stężeniu 83 mmole/litr, pH 8,0. Kompozycję tą sprawdzono dla dwóch różnych czasów inkubacji, 2,9 i 7 minut.
W kompozycji B pierwszy odczynnik zawierał 6 g/litr proteinazy K, 0,4 g/litr peroksydazy, 8 mmoli/litr TOOS, 100 fmoli/litr żelazocyjanku potasu, 100 pmoli/litr octanu miedzi, 2% wagowo/objętościowe kwasu żółciowego, 1% wagowo/objętościowy eteru polioksyetyleno-tridecylowego zawierającego 10 merów oksyetylenowych i 175 gmoli/litr kwasu batofenantrolinodisulfonowego w buforze z EPPS o stężeniu 75 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik był taki sam jak w przypadku kompozycji A.
Dwie kompozycje wykorzystano w oznaczaniu glikoproteiny w 3 próbkach, a mianowicie stosując (1) rozcieńczoną surowicę kontrolną (1 część wody na 4 części surowicy), (2) surowicę
183 162 rozcieńczoną w taki sam sposób podstawowym roztworem askorbinianu, tak że stężenie askorbinianu w surowicy wynosiło 300 pmoli/litr oraz (3) surowicę rozcieńczoną podstawowym roztworem nieskoniugowanej bilirubiny, tak że stężenie bilirubiny w surowicy wynosiło 300 pmoli/litr.
Próbkę, odczynniki i rozcieńczalniki zmieszano w analizatorze zgodnie z procedurą z przykładu 1, z tym, że czas inkubacji z pierwszym odczynnikiem wynosił 2,9 lub 7 minut.
W poniższej tabeli wpływ askorbinianu i bilirubiny powodujących zakłócenia przedstawiono jako zmiany absorbancji obserwowane w obecności zakłóceń, wyrażone jako procent zmiany absorbancji dla surowicy kontrolnej.
| Kompozycja | Czas inkubacji 2,9 minuty % odzysku w surowicy z | Czas inkubacji 7 minut % odzysku w surowicy z | ||
| 400 pmoli/litr askorbinianu | 400 pmoli/litr bilirubiny | 400 pmoli/litr askorbinianu | 400 pmoli/litr bilirubiny | |
| A | 82 | 87 | 90 | 97 |
| B | 95 | 95 |
Przykład 6. Wadą krótkiego czasu inkubacji próbki z odczynnikiem 1 przy stosowaniu odczynników eliminujących zakłócenia wspomniane powyżej jest to, że daje się zaobserwować wpływ szybkości reakcji, gdy jako próbkę zastosuje się wodę. Choć taka reakcja w tle niejest wyraźna, gdy próbkę stanowi surowica, korzystne byłoby, gdyby sposób można było wykorzystać w przypadku próbek innych niż surowica.
W kompozycji A pierwszy odczynnik zawierał 4 g/litr proteinazy K, 0,28 g/litr peroksydazy, 5,6 mmola/litr TOOS, 90 pmoli/litr żelazocyjanku potasu, 90 pmoli/litr octanu miedzi, 1,8% wagowo/objętościowego kwasu żółciowego, 1,2% wagowo/objętościowego eteru polioksyetyleno-tridecylowego zawierającego 10 merów oksyetylenowych i 144 pmole/litr kwasu batofenantrolinodisulfonowego oraz 5 mmoli/litr octanu wapnia w buforze z EPPS o stężeniu 75 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik zawierał 13000 jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 10,5 mmola/litr 4-aminoantypirenu w buforze z EPPS o stężeniu 50 mmoli/litr, pH 8,0.
Kompozycja B była podobna do kompozycji A, z tym, że drugi odczynnik zawierał 30 mmoli/litr soli disodowej EDTA.
Dwie kompozycje wykorzystano w oznaczaniu glikoproteiny w trzech próbkach, to znaczy (1) w wodzie; (2) w surowicy od diabetyków; oraz (3) w osoczu od diabetyków.
Zbadano z wykorzystaniem automatycznego analizatora Cobas Mira S. Odczynnik zawierający proteinazę (250 pl) zmieszano w plastykowej kuwecie z 20 pl próbki i 30 pl wodyjako rozcieńczalnika w celu przepłukania wnętrza pojemnika z próbką. Po inkubowaniu przez 2,9 minuty w 37°C 50 pl drugiego odczynnika i 10 pl wody jako rozcieńczalnika zmieszano z zawartością tej samej kuwety. Absorbancję kuwety mierzono przy 550 nm w odstępach 25-sekundowych od rozpoczęcia pomiaru do 1,5 minuty po dodaniu drugiego odczynnika.
Profile absorbancji dla kompozycji A i B przedstawiono odpowiednio na załączonych fig. 3 i 4. Można stwierdzić, że obecność EDTA w drugim odczynniku zapobiega wzrostowi absorbancji obserwowanemu po dodaniu drugiego odczynnika, gdy próbkę stanowi woda. Sygnał wysyłany przez próbkę surowicy i osocza jest o 15% silniejszy, gdy drugi odczynnik zawiera EDTA. Obydwa te efekty mogą być spowodowane chelatowaniem miedzi przez EDTA. Miedź może wytwarzać sygnał z chromogenami oraz częściowo hamuje aktywność oksydazy ketoaminowej.
Przykład 7. Drugi odczynnik można stabilizować dodając do niego mannitol.
Przygotowano 2 kompozycje drugiego odczynnika. Kompozycja A zawierała 50 mmoli/litr buforu EPPS, pH 8,0; 10,5 mmola/litr aminoantypirenu; 30 mmoli/litr EDTA i 6000jednostek/litr oksydazy ketoaminowej. Kompozycja B była zbliżona, z tym, że zawierała 5%
183 162 mannitolu. Po liofilizacji i odtworzeniu wodą demineralizowaną każdą kompozycję przechowywano przez 21 dni w 25°C oraz w stanie zamrożonym w -20°C (w celach kontrolnych).
Stabilność kompozycji odczynników z dodatkiem i bez mannitolu zbadano stosując procedurę Cobas Mira z przykładu 6 oraz surowicę jako próbkę i pierwszy odczynnik zawierający 3 g/litr proteinazy K, 0,28 g/litr peroksydazy, 5,6 mmola/litr TOOS, 90 (imoli/litr żelazocyjanku potasu, 90 (moli/litr octanu miedzi, 1,8% kwasu żółciowego, 1,2% eteru polioksyetylenotridecylowego zawierającego 10 merów oksyetylenowych, 144 (imole/litr kwasu batofenantrolinodisulfonowego oraz 5 mmoli/litr octanu wapnia w buforze z EPPS o stężeniu 60 moli/litr, pH 8,0. Wyniki wyliczono odejmując absorbancję kuwety przy 550 nm tuż przed dodaniem drugiego odczynnika od absorbancji zmierzonej po 2,5 minutach od dodania drugiego odczynnika absorbancji po 21 dniach były następujące:
| Temperatura przechowywania | Kompozycja A zmiana absorbancji, % | Kompozycja B zmiana absorbancji, % |
| -20°C | 0,1036 | 0,1062 |
| +25°C | 0,0795 77 | 1,1040 98 |
W ciągu 3 tygodni w 25°C sygnał emitowany przy stosowaniu kompozycji A spadł do wielkości stanowiącej zaledwie 77% sygnału dla zamrożonego odczynnika kontrolnego. Natomiast kompozycja B, zawierająca mannitol, była stabilna.
Przykład 8. Zastosowanie enzymatycznej metody oznaczania glikoproteiny sprawdzono równolegle z dostępną w handlu metodą z nitrobłękitem tetrazoliowym (katalog Roche nr 0736694) przez porównanie z furozynową procedurą odniesienia. Obejmowała ona hydrolizę kwasową, a następnie oznaczanie ilościowe metodą HPLC specyficznej dla glikoproteiny. Jako wzorzec zastosowano fruktozylolizynę.
Zastosowano odczynniki enzymatyczne o następującym składzie:
Pierwszy odczynnik zawierał 4 g/litr proteinazy K, 0,28 g/litr peroksydazy, 5,6 mmola/litr TOOS, 90 |imoli/litr żelazocyjanku potasu, 30 (^moli/litr octanu miedzi, 1,8% kwasu żółciowego, 0,25% eteru polioksyetyleno-tridecylowego zawierającego 10 merów oksyetylenowych, 144 jimole/litr kwasu batofenantrolinodisulfonowego oraz 5 mmoli/litr octanu wapnia w buforze z EPPS o stężeniu 60 moli/litr, pH 8,0. Drugi odczynnik zawierał 10,5 mmola/litr 4-aminoantypirenu, 30 mmoli/litr EDTA, 9000 jednostek/litr oksydazy ketoaminowej i 3% mannitolu w buforze z EPPS o stężeniu 50 mmoli/litr, pH 8,0.
250 (tl pierwszego odczynnika zmieszano w plastykowej kuwecie z 20 μ1 próbki i 30 |il wody jako rozcieńczalnika w celu przepłukania wnętrza pojemnika z próbką. Po inkubowaniu przez 5 minut w 37°C 50(l drugiego odczynnika i 10 (il wody jako rozcieńczalnika zmieszano z zawartością tej samej kuwety. Absorbancję kuwety mierzono przy 550 nm w odstępach 25-sekundowych łącznie przez 10 minut. Zmiany absorbancji spowodowane obecnością glikoproteiny wyliczano odejmując absorbancję tuż przed dodaniem drugiego odczynnika od absorbancji zarejestrowanej po 5 minutach.
Obecność glikoproteiny w 56 próbkach surowicy od diabetyków zbadano każdąz 3 metod. W przypadku zarówno metody enzymatycznej, jak i NBT stwierdzono dobrą korelację z metodą odniesienia, z wielkościami r wynoszącymi odpowiednio 0,95 i 0,96 (patrz załączona fig. 5). Metoda NBT wykazywała dodatni błąd statystyczny 95 (moli/litr lub 34% podanej górnej granicy w metodzie odniesienia, podczas gdy w metodzie enzymatycznej linia regresji przebiegała bardzo blisko oryginału. Sugeruje to, że zarówno metodą enzymatyczną, jak i NBT oznacza się ten sam analit, z tym, że procedura enzymatyczna nie jest podatna na niespecyficzny spadek aktywności spowodowany przez tło obecne w surowicy.
183 162
183 162
Fig. 1. Peroksydaza dodana w drugim odczynniku
Czas (minuty) u
O
V( «Λ • —l
Λ
U
O t/5
183 162 cs
Ό
O o * ·“ CO i
Fig. 2. Peroksydaza dodana w pierwszym odczynniku ΐ
o'
183 162
Fig. 3. Odczynnik 2 bez EDTA
o>
<o t·» . co
CM
CM ó
| CM | O | 00 | CO | MT | CM | o | S |
| CM | CM | *— | ▼— | *r~ | 1— | o | |
| Ó | Ó | Ó | ó | ó | ó | ó | ó |
(0SSV) ebuBqjosqv
183 162
Q
W
N o4
Λ s
c
r - I-· ! |-1..... 1......! 1 1 < ł °
| to | ·<· | 04 | O | «0 | to | V | 04 | O | 2? |
| 04 | oi | 04 | 04 | Τ- | Ύ” | O | |||
| Ó | ó | Ó | Ó | Ο | ó | ó | Ó | ó | ó |
(0SSV) vbyBqJosqv
183 162
Enzymatyczne oznaczanie glikoproteiny
Absorbancja (d.A550/0,6 cm)
Fig. 5. Porównanie metody fruktozaminowej NBT i enzymatycznej oznaczania białka
(4)!l/3|0iuri) 18N Kuiiuezojtjiuj
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz.
Cena 4,00 zł.
Claims (10)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób oznaczania glikoproteiny w próbce, znamienny tym, że miesza się próbkę z pierwszym odczynnikiem zawierającym proteinazę i peroksydazę, tak aby wytworzyć substrat, który może zostać utleniony przez oksydazę ketoaminową; dodaje się drugi odczynnik zawierający oksydazę ketoaminową; oraz oznacza się wydzielony nadtlenek wodoru lub zużyty tlen, tak aby wykryć i/lub oznaczyć ilościowo glikoproteinę.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że próbkę stanowi płyn ustrojowy, korzystnie surowica lub osocze krwi.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proteinazę stanowi proteinaza K, korzystnie z Tritirachium album.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że peroksydazę stanowi peroksydaza chrzanowa.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że oksydaza ketoaminowa wytwarzana jest przez bakterie z grupy Klebsiella, z grzybów rodzaju Fusarium lub Acremonium albo z drożdży rodzaju Debaryomyces, korzystnie z Fusarium.
- 6. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienny tym, że pomiar obejmuje wykorzystanie ewentualnie zmodyfikowanej reakcji Trinder lub elektrody tlenowej.
- 7. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienny tym, że zakłóceniom ze strony askorbinianu przeciwdziała się wprowadzając w pierwszym odczynniku związek miedzi (II), korzystnie octan miedzi (II) oraz ewentualnie kwas żółciowy i/lub kwas batofenantrolinodisulfonowy.
- 8. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienny tym, że zakłóceniom ze strony bilirubiny przeciwdziała się wprowadzając w pierwszym i/lub odczynniku żelazocyjanek, korzystnie żelazocyjanek potasu.
- 9. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienny tym, że w drugim odczynniku wprowadza się kwas etylenodiaminotetraoctowy i/lub mannitol w celu utrzymania aktywności oksydazy ketoaminowej.
- 10. Zestaw do oznaczania glikoproteiny, znamienny tym, że zawiera pierwszy odczynnik zawierający proteinazę i peroksydazę; drugi odczynnik zawierający oksydazę ketoaminową; oraz ewentualnie środki do oznaczania powstałego nadtlenku wodoru lub zużytego tlenu.* * *
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9509248.2A GB9509248D0 (en) | 1995-05-05 | 1995-05-05 | Peroxidase/proteinase reagent and use thereof |
| GBGB9516757.3A GB9516757D0 (en) | 1995-08-16 | 1995-08-16 | Peroxidase/proteinase reagent and use thereof |
| PCT/EP1996/001912 WO1996034977A1 (en) | 1995-05-05 | 1996-05-03 | Determination of glycated proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL323183A1 PL323183A1 (en) | 1998-03-16 |
| PL183162B1 true PL183162B1 (pl) | 2002-05-31 |
Family
ID=26306995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96323183A PL183162B1 (pl) | 1995-05-05 | 1996-05-03 | Sposób oznaczania glikoproteiny oraz zestaw do oznaczania glikoproteiny |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6008006A (pl) |
| EP (1) | EP0823943B1 (pl) |
| JP (1) | JP3159451B2 (pl) |
| AT (1) | ATE182626T1 (pl) |
| AU (1) | AU694039B2 (pl) |
| CA (1) | CA2218982A1 (pl) |
| DE (1) | DE69603472T2 (pl) |
| DK (1) | DK0823943T3 (pl) |
| ES (1) | ES2136418T3 (pl) |
| GR (1) | GR3030874T3 (pl) |
| PL (1) | PL183162B1 (pl) |
| WO (1) | WO1996034977A1 (pl) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3987900B2 (ja) * | 1997-11-26 | 2007-10-10 | アークレイ株式会社 | 糖化タンパク質の測定方法 |
| JP3949854B2 (ja) | 1999-10-01 | 2007-07-25 | キッコーマン株式会社 | 糖化蛋白質の測定方法 |
| JP2001258593A (ja) * | 2000-03-22 | 2001-09-25 | Oriental Yeast Co Ltd | 糖化アルブミンの測定方法 |
| US20040048387A1 (en) * | 2000-06-07 | 2004-03-11 | Isami Tsuboi | Method of detecting saccharified albumin |
| CN102899388B (zh) * | 2001-01-31 | 2015-07-29 | 旭化成制药株式会社 | 测定糖化蛋白质的组合物 |
| EP1443115B1 (en) * | 2001-10-11 | 2010-05-26 | ARKRAY, Inc. | Method of pre-treating sample for measuring saccharified amine and method of measuring saccharified amine |
| USRE45074E1 (en) | 2001-10-11 | 2014-08-12 | Arkray, Inc. | Method of pre-treating sample for measuring saccharified amine and method of measuring saccharified amine |
| US6951728B2 (en) * | 2002-05-10 | 2005-10-04 | Lifescan, Inc. | Multilayer reagent test strips to quantify glycated protein in a physiological sample |
| JP4226341B2 (ja) * | 2003-01-14 | 2009-02-18 | 旭化成ファーマ株式会社 | 糖化リン脂質の分析方法および分析試薬 |
| US7153666B2 (en) * | 2003-07-17 | 2006-12-26 | General Atomics | Methods and compositions for determination of glycated proteins |
| EP1914315B1 (en) * | 2005-07-19 | 2013-02-27 | Kikkoman Corporation | Method for determination of glycosylated protein and determination kit |
| US7943385B2 (en) * | 2006-07-25 | 2011-05-17 | General Atomics | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin |
| WO2008013874A1 (en) * | 2006-07-25 | 2008-01-31 | General Atomics | Methods for assaying percentage of glycated hemoglobin |
| CN102076867A (zh) * | 2008-05-13 | 2011-05-25 | 通用原子公司 | 用于直接测定糖化血红蛋白百分比的电化学生物传感器 |
| TW201312119A (zh) * | 2011-09-15 | 2013-03-16 | Toyo Boseki | 糖化血紅素測量用多層試驗片、及使用它之測量方法 |
| CN104164473A (zh) * | 2013-05-16 | 2014-11-26 | 北京豪迈生物工程有限公司 | 糖化白蛋白酶法检测试剂盒及其检测方法 |
| JP6938964B2 (ja) * | 2017-02-28 | 2021-09-22 | 東洋紡株式会社 | 生体試料の前処理器具 |
| WO2019117586A1 (ko) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | 주식회사 딕스젠 | 생체지표 진단용 실리카 나노입자 및 이의 제조방법 |
| JP7314932B2 (ja) * | 2018-05-10 | 2023-07-26 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| JP7314931B2 (ja) * | 2018-05-10 | 2023-07-26 | 東洋紡株式会社 | 生体成分測定試薬キットの感度低下抑制方法 |
| CN111999352A (zh) * | 2019-05-26 | 2020-11-27 | 谢艳 | 一种过氧化氢的检测方法或试剂盒 |
| EP3995586B1 (en) * | 2019-07-01 | 2025-11-05 | Nagase Diagnostics Co., Ltd. | Glycosylated protein assay reagent containing protease stabilizer increasing redox potential of ferrocyanide, method for assaying glycosylated protein, method for preserving glycosylated protein assay reagent, and method for stabilizing glycosylated protein assay reagent |
| JP7328808B2 (ja) * | 2019-07-01 | 2023-08-17 | 旭化成ファーマ株式会社 | ジメチルスルホキシドを含む糖化タンパク質測定試薬、糖化タンパク質の測定方法、糖化タンパク質測定試薬の保存方法、及び糖化タンパク質測定試薬の安定化方法 |
| JPWO2022158548A1 (pl) * | 2021-01-23 | 2022-07-28 | ||
| EP4283301A4 (en) * | 2021-01-23 | 2024-11-13 | Provigate Inc. | METHOD AND DEVICE FOR ASSESSING THE LEVEL OF PROTEIN GLYCATION |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4657864A (en) * | 1985-06-18 | 1987-04-14 | Westvaco Corporation | Method for stabilizing peroxidase solutions |
| DE3620817A1 (de) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
| GB9116315D0 (en) * | 1991-07-29 | 1991-09-11 | Genzyme Ltd | Assay |
| JP3157622B2 (ja) * | 1992-06-05 | 2001-04-16 | 株式会社ミツカングループ本社 | フルクトシルアミンデグリカーゼ、その製造法及び該酵素を用いたアマドリ化合物の定量方法 |
| US5712138A (en) * | 1994-10-05 | 1998-01-27 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Fructosyl amino acid oxidase |
-
1996
- 1996-05-03 AU AU58152/96A patent/AU694039B2/en not_active Ceased
- 1996-05-03 DK DK96919704T patent/DK0823943T3/da active
- 1996-05-03 EP EP96919704A patent/EP0823943B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-03 CA CA002218982A patent/CA2218982A1/en not_active Abandoned
- 1996-05-03 US US08/945,724 patent/US6008006A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-03 PL PL96323183A patent/PL183162B1/pl unknown
- 1996-05-03 WO PCT/EP1996/001912 patent/WO1996034977A1/en not_active Ceased
- 1996-05-03 AT AT96919704T patent/ATE182626T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-05-03 ES ES96919704T patent/ES2136418T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-03 JP JP53302396A patent/JP3159451B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-05-03 DE DE69603472T patent/DE69603472T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-07-29 GR GR990401821T patent/GR3030874T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69603472D1 (de) | 1999-09-02 |
| ATE182626T1 (de) | 1999-08-15 |
| JP3159451B2 (ja) | 2001-04-23 |
| ES2136418T3 (es) | 1999-11-16 |
| CA2218982A1 (en) | 1996-11-07 |
| EP0823943A1 (en) | 1998-02-18 |
| PL323183A1 (en) | 1998-03-16 |
| JPH11504808A (ja) | 1999-05-11 |
| US6008006A (en) | 1999-12-28 |
| AU5815296A (en) | 1996-11-21 |
| DE69603472T2 (de) | 1999-12-30 |
| WO1996034977A1 (en) | 1996-11-07 |
| AU694039B2 (en) | 1998-07-09 |
| DK0823943T3 (da) | 1999-11-29 |
| EP0823943B1 (en) | 1999-07-28 |
| GR3030874T3 (en) | 1999-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL183162B1 (pl) | Sposób oznaczania glikoproteiny oraz zestaw do oznaczania glikoproteiny | |
| Fossati et al. | Use of 3, 5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid/4-aminophenazone chromogenic system in direct enzymic assay of uric acid in serum and urine. | |
| EP2336351A2 (en) | Method of selectively determining glycated hemoglobin | |
| CN109239059B (zh) | 一种糖化血清蛋白测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| EP2319937B1 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| US20040063213A1 (en) | Assay method with the use of redox reaction | |
| JPS61146196A (ja) | Ｈ↓２ｏ↓２の測色的測定を改善するための方法び試薬 | |
| Morin et al. | Single Glucose Oxidase—Peroxidase reagent for two-minute determination of serum glucose | |
| US8026078B2 (en) | Method of quantifying glycosylated protein using redox reaction and quantification kit | |
| JP5129572B2 (ja) | 生体試料中の２項目の測定対象物の同時分別定量方法 | |
| JP4889396B2 (ja) | ロイコ色素の安定化方法 | |
| JP4214648B2 (ja) | 糖化蛋白質測定試薬 | |
| CS227331B2 (en) | Method of glycerol determination | |
| JP2880209B2 (ja) | 総ビリルビンの定量法及びそれに用いる試薬 | |
| JP4260542B2 (ja) | 高分子中のケトアミンの測定方法 | |
| US7226790B2 (en) | Method for measurement using sodium azide | |
| JP2004113014A (ja) | 糖化アミノ酸の消去方法 | |
| TW202227639A (zh) | 降低測定誤差之方法 | |
| JP2643205B2 (ja) | 高感度比色定量法 | |
| JP3227486B2 (ja) | 銅の測定方法 | |
| JP2000097927A (ja) | 酸化剤による影響を排除する方法 | |
| JPH0772157A (ja) | 糖化蛋白の定量方法およびその定量用キット | |
| EP3461907A1 (en) | Measurement of glycoprotein | |
| JP3690754B2 (ja) | 試料中の成分の定量法 |