JP2001258593A - 糖化アルブミンの測定方法 - Google Patents
糖化アルブミンの測定方法Info
- Publication number
- JP2001258593A JP2001258593A JP2000080883A JP2000080883A JP2001258593A JP 2001258593 A JP2001258593 A JP 2001258593A JP 2000080883 A JP2000080883 A JP 2000080883A JP 2000080883 A JP2000080883 A JP 2000080883A JP 2001258593 A JP2001258593 A JP 2001258593A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- albumin
- concentration
- ratio
- blood
- measured
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6842—Proteomic analysis of subsets of protein mixtures with reduced complexity, e.g. membrane proteins, phosphoproteins, organelle proteins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】特殊な装置を使用することなく、試料中の糖化
アルブミンを簡易に測定することができる糖化アルブミ
ンの測定方法を提供する。 【解決手段】試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用
いて測定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの濃
度に対する比率を求めることを特徴とする糖化アルブミ
ンの測定方法。
アルブミンを簡易に測定することができる糖化アルブミ
ンの測定方法を提供する。 【解決手段】試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用
いて測定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの濃
度に対する比率を求めることを特徴とする糖化アルブミ
ンの測定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、糖化アルブミンの
測定方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、特殊な
装置を使用することなく、試料中の糖化アルブミンを簡
易に測定することができる糖化アルブミンの測定方法に
関する。
測定方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、特殊な
装置を使用することなく、試料中の糖化アルブミンを簡
易に測定することができる糖化アルブミンの測定方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】血液中のグルコースは血清タンパクと反
応し、非酵素的糖化タンパクを生成する。糖化タンパク
は、グルコースのカルボニル基に対し、タンパク上の遊
離アミノ基の求核反応によりシッフ塩基を生じ、さらに
アマドリ転移を受けてケトアミン構造を形成することに
より安定化される。タンパクの主な糖化部位は、リジン
残基のε−アミノ基とタンパクの末端アミノ酸のα−ア
ミノ基である。アルブミンには、糖化に関与するリジン
残基が４個所存在すると報告されている。糖尿病患者の
治療では、血糖値の管理が最も重要であり、血糖値を管
理することにより、重篤な合併症に罹患する可能性を低
減することができる。そのためには、随時血糖値を測定
することも重要であるが、随時血糖値は食事や運動の影
響を受けて変動するので、過去の平均血糖値を反映する
指標である糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ1c）と糖化アルブ
ミン（ＧＡ）が臨床的に重要視されている。糖化ヘモグ
ロビンは、過去１〜２カ月間の平均的な血糖値を反映
し、一方、糖化アルブミンは、過去１〜２週間の平均血
糖値を反映する。このように糖化アルブミンの測定によ
れば、糖化ヘモグロビンの測定では診断し得ない短期的
な血糖値の変動を把握することができ、治療開始時、治
療法の変更時、不安定型糖尿病などの治療状態が急激に
変化する場合に対応することができ、また糖尿病妊婦の
厳密な血糖コントロールを行うことも可能になる。血液
中の糖化アルブミンの測定方法として、アルブミンを加
水分解して糖結合リジン由来の生成物を定量する方法、
アミノフェニルボロン酸を用いて糖化アルブミンを分離
する方法などが開発されたが、測定操作が複雑で、測定
精度も高くなかったために、臨床的な検査には適用され
なかった。近年にいたって、高速液体クロマトグラフィ
ーによる糖化アルブミンの測定方法が開発され、測定装
置も市販されるようになった。この測定原理は、まず血
清試料からアルブミンをイオン交換クロマトグラフィー
により分離し、次いでアルブミン分画に存在する糖化ア
ルブミンを、糖化部分にあるシスジオール構造がホウ酸
と可逆的に結合することを利用し、アフィニティークロ
マトグラフィーによりアミノフェニルボロン酸ゲルから
なるカラムに吸着し、Ｄ−ソルビトールを主成分とする
溶離液を用いて糖化アルブミンを溶離させ、トリプトフ
ァンにもとづく蛍光強度を測定するものである。糖化ア
ルブミンの値は、アフィニティークロマトグラフィーに
よる分離された糖化アルブミンと非糖化アルブミンのピ
ーク面積から、試料中の総アルブミンに対する糖化アル
ブミンの比率（％）として表わされる。この方法によれ
ば、比較的短時間で、自動的に精度のよい測定値が得ら
れるが、専用の高価な測定装置が必要であり、広く普及
するには至っていない。このために、特殊な装置を必要
とせず、簡易に糖化アルブミンを精度よく測定すること
ができる糖化アルブミンの測定方法が求められていた。
応し、非酵素的糖化タンパクを生成する。糖化タンパク
は、グルコースのカルボニル基に対し、タンパク上の遊
離アミノ基の求核反応によりシッフ塩基を生じ、さらに
アマドリ転移を受けてケトアミン構造を形成することに
より安定化される。タンパクの主な糖化部位は、リジン
残基のε−アミノ基とタンパクの末端アミノ酸のα−ア
ミノ基である。アルブミンには、糖化に関与するリジン
残基が４個所存在すると報告されている。糖尿病患者の
治療では、血糖値の管理が最も重要であり、血糖値を管
理することにより、重篤な合併症に罹患する可能性を低
減することができる。そのためには、随時血糖値を測定
することも重要であるが、随時血糖値は食事や運動の影
響を受けて変動するので、過去の平均血糖値を反映する
指標である糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ1c）と糖化アルブ
ミン（ＧＡ）が臨床的に重要視されている。糖化ヘモグ
ロビンは、過去１〜２カ月間の平均的な血糖値を反映
し、一方、糖化アルブミンは、過去１〜２週間の平均血
糖値を反映する。このように糖化アルブミンの測定によ
れば、糖化ヘモグロビンの測定では診断し得ない短期的
な血糖値の変動を把握することができ、治療開始時、治
療法の変更時、不安定型糖尿病などの治療状態が急激に
変化する場合に対応することができ、また糖尿病妊婦の
厳密な血糖コントロールを行うことも可能になる。血液
中の糖化アルブミンの測定方法として、アルブミンを加
水分解して糖結合リジン由来の生成物を定量する方法、
アミノフェニルボロン酸を用いて糖化アルブミンを分離
する方法などが開発されたが、測定操作が複雑で、測定
精度も高くなかったために、臨床的な検査には適用され
なかった。近年にいたって、高速液体クロマトグラフィ
ーによる糖化アルブミンの測定方法が開発され、測定装
置も市販されるようになった。この測定原理は、まず血
清試料からアルブミンをイオン交換クロマトグラフィー
により分離し、次いでアルブミン分画に存在する糖化ア
ルブミンを、糖化部分にあるシスジオール構造がホウ酸
と可逆的に結合することを利用し、アフィニティークロ
マトグラフィーによりアミノフェニルボロン酸ゲルから
なるカラムに吸着し、Ｄ−ソルビトールを主成分とする
溶離液を用いて糖化アルブミンを溶離させ、トリプトフ
ァンにもとづく蛍光強度を測定するものである。糖化ア
ルブミンの値は、アフィニティークロマトグラフィーに
よる分離された糖化アルブミンと非糖化アルブミンのピ
ーク面積から、試料中の総アルブミンに対する糖化アル
ブミンの比率（％）として表わされる。この方法によれ
ば、比較的短時間で、自動的に精度のよい測定値が得ら
れるが、専用の高価な測定装置が必要であり、広く普及
するには至っていない。このために、特殊な装置を必要
とせず、簡易に糖化アルブミンを精度よく測定すること
ができる糖化アルブミンの測定方法が求められていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、特殊な装置
を使用することなく、試料中の糖化アルブミンを簡易に
測定することができる糖化アルブミンの測定方法を提供
することを目的としてなされたものである。
を使用することなく、試料中の糖化アルブミンを簡易に
測定することができる糖化アルブミンの測定方法を提供
することを目的としてなされたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、試料中の糖化ア
ルブミンの濃度を酵素を用いて測定し、別途に測定した
試料中の総アルブミンの濃度に対する比を求めることに
より、容易に試料中の総アルブミンに対する糖化アルブ
ミンの比率を求め得ることを見いだし、この知見に基づ
いて本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、
（１）試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用いて測
定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの濃度に対
する比率を求めることを特徴とする糖化アルブミンの測
定方法、（２）試料が、血液である第１項記載の糖化ア
ルブミンの測定方法、（３）血液中の糖化アルブミンの
濃度を酵素を用いて測定する方法が、血清又は血漿をプ
ロテアーゼで処理し、プロテアーゼ処理試料をケトアミ
ンオキシダーゼで処理し、その反応生成物を測定する第
２項記載の糖化アルブミンの測定方法、及び、（４）反
応生成物が、過酸化水素である第３項記載の糖化アルブ
ミンの測定方法、を提供するものである。
題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、試料中の糖化ア
ルブミンの濃度を酵素を用いて測定し、別途に測定した
試料中の総アルブミンの濃度に対する比を求めることに
より、容易に試料中の総アルブミンに対する糖化アルブ
ミンの比率を求め得ることを見いだし、この知見に基づ
いて本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、
（１）試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用いて測
定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの濃度に対
する比率を求めることを特徴とする糖化アルブミンの測
定方法、（２）試料が、血液である第１項記載の糖化ア
ルブミンの測定方法、（３）血液中の糖化アルブミンの
濃度を酵素を用いて測定する方法が、血清又は血漿をプ
ロテアーゼで処理し、プロテアーゼ処理試料をケトアミ
ンオキシダーゼで処理し、その反応生成物を測定する第
２項記載の糖化アルブミンの測定方法、及び、（４）反
応生成物が、過酸化水素である第３項記載の糖化アルブ
ミンの測定方法、を提供するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明の糖化アルブミンの測定方
法においては、試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を
用いて測定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの
濃度に対する比率を求める。本発明方法を適用する試料
に特に制限はなく、例えば、血液、尿、唾液、汗、涙な
どの体液及び分泌物を挙げることができる。本発明方法
は、これらの中で、血液に特に好適に適用することがで
きる。本発明方法において、血液中の糖化アルブミンの
濃度を酵素を測定するためには、血液から血清又は血漿
を分離して試料とすることが好ましい。血清は、受診者
から静脈穿刺により採血し、血液を凝固させたのち、遠
心分離することにより得ることができる。血漿は、受診
者の血液をＥＤＴＡ管又はヘパリン管に採取し、遠心分
離することにより得ることができる。これらの処理と測
定は、採血後３時間以内に行うことが好ましいが、試料
を２〜８℃の低温に保つことにより、３日間は保存する
ことができる。本発明方法において、血液中の糖化アル
ブミンの濃度を酵素を用いて測定する方法に特に制限は
ないが、血清又は血漿をプロテアーゼを用いて処理し、
プロテアーゼ処理試料をケトアミンオキシダーゼで処理
し、その反応生成物を測定することが好ましい。血液中
のアルブミンは、血液中に存在するグルコースと式
［１］で表されるように反応し、非酵素的に反応して糖
化アルブミンとなる。
法においては、試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を
用いて測定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの
濃度に対する比率を求める。本発明方法を適用する試料
に特に制限はなく、例えば、血液、尿、唾液、汗、涙な
どの体液及び分泌物を挙げることができる。本発明方法
は、これらの中で、血液に特に好適に適用することがで
きる。本発明方法において、血液中の糖化アルブミンの
濃度を酵素を測定するためには、血液から血清又は血漿
を分離して試料とすることが好ましい。血清は、受診者
から静脈穿刺により採血し、血液を凝固させたのち、遠
心分離することにより得ることができる。血漿は、受診
者の血液をＥＤＴＡ管又はヘパリン管に採取し、遠心分
離することにより得ることができる。これらの処理と測
定は、採血後３時間以内に行うことが好ましいが、試料
を２〜８℃の低温に保つことにより、３日間は保存する
ことができる。本発明方法において、血液中の糖化アル
ブミンの濃度を酵素を用いて測定する方法に特に制限は
ないが、血清又は血漿をプロテアーゼを用いて処理し、
プロテアーゼ処理試料をケトアミンオキシダーゼで処理
し、その反応生成物を測定することが好ましい。血液中
のアルブミンは、血液中に存在するグルコースと式
［１］で表されるように反応し、非酵素的に反応して糖
化アルブミンとなる。
【化１】 すなわち、グルコースのアルデヒド基とアルブミンのア
ミノ基の反応により不安定型糖化アルブミンであるシッ
フ塩基が形成され、シッフ塩基のアマドリ反応により安
定型糖化アルブミンであるケトアミンが形成される。ア
ルブミンにおいて、この反応に関与するアミノ基は、Ｌ
ｙｓ−５２５、Ｌｙｓ−１９９、Ｌｙｓ−２８１及びＬ
ｙｓ−４３９であるとされている。この反応は非酵素的
な糖化反応であり、質量作用の法則のみに支配され、ケ
トアミンの生成量はアルブミンとグルコースの血中濃度
に比例する。したがって、受診者の血液中の糖化アルブ
ミンの濃度と、総アルブミンの濃度を測定することによ
り、受診者の血液中のグルコースの濃度を推定すること
ができる。また、血液中のアルブミンの半減期は約３週
間なので、血液中の糖化アルブミンを測定することによ
り、過去１〜２週間の平均血糖値を推定することができ
る。
ミノ基の反応により不安定型糖化アルブミンであるシッ
フ塩基が形成され、シッフ塩基のアマドリ反応により安
定型糖化アルブミンであるケトアミンが形成される。ア
ルブミンにおいて、この反応に関与するアミノ基は、Ｌ
ｙｓ−５２５、Ｌｙｓ−１９９、Ｌｙｓ−２８１及びＬ
ｙｓ−４３９であるとされている。この反応は非酵素的
な糖化反応であり、質量作用の法則のみに支配され、ケ
トアミンの生成量はアルブミンとグルコースの血中濃度
に比例する。したがって、受診者の血液中の糖化アルブ
ミンの濃度と、総アルブミンの濃度を測定することによ
り、受診者の血液中のグルコースの濃度を推定すること
ができる。また、血液中のアルブミンの半減期は約３週
間なので、血液中の糖化アルブミンを測定することによ
り、過去１〜２週間の平均血糖値を推定することができ
る。
【０００６】本発明方法において、血清又は血漿をプロ
テアーゼで処理することにより、糖化アルブミンが分解
され、糖化されたままの状態でより低分子量のタンパク
質分解物ないしアミノ酸となる。本発明方法に用いるプ
ロテアーゼに特に制限はなく、例えば、プロテイナーゼ
Ｋ、プロナーゼＥ、アナナイン、サーモシリン、ズブチ
リシン、ウシ膵臓プロテアーゼなどを挙げることができ
る。これらのプロテアーゼは、１種を単独で用いること
ができ、あるいは、２種以上を組み合わせて用いること
もできる。本発明方法においては、プロテアーゼ処理試
料をケトアミンオキシダーゼで処理し、その反応生成物
を測定する。本発明方法に用いるケトアミンオキシダー
ゼに特に制限はなく、例えば、クレブシエラ属の細菌、
フザリウム属又はアクレモニウム属の真菌、デバリオマ
イセス属の酵母から得られるケトアミンオキシダーゼな
どを挙げることができる。測定する反応生成物に特に制
限はなく、例えば、発生する過酸化水素、グルコソンな
どのほかに、負の反応生成物である消費される酸素を測
定することもできる。これらの中で、過酸化水素は、発
色原の存在下にペルオキシダーゼで処理して発色させる
ことにより、比色分析することができるので、容易に測
定することができる。本発明方法においては、別途に血
液中の総アルブミンの濃度を測定し、酵素を用いて測定
した糖化アルブミンの濃度と総アルブミンの濃度の比率
を求める。血液中の総アルブミンの濃度の測定方法に特
に制限はなく、例えば、ブロモクレゾールグリーン（Ｂ
ＣＧ）やブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）を用いて
色素−アルブミン複合体による呈色を測定する方法や、
抗アルブミン抗体を用いる免疫比濁法などにより測定す
ることができる。
テアーゼで処理することにより、糖化アルブミンが分解
され、糖化されたままの状態でより低分子量のタンパク
質分解物ないしアミノ酸となる。本発明方法に用いるプ
ロテアーゼに特に制限はなく、例えば、プロテイナーゼ
Ｋ、プロナーゼＥ、アナナイン、サーモシリン、ズブチ
リシン、ウシ膵臓プロテアーゼなどを挙げることができ
る。これらのプロテアーゼは、１種を単独で用いること
ができ、あるいは、２種以上を組み合わせて用いること
もできる。本発明方法においては、プロテアーゼ処理試
料をケトアミンオキシダーゼで処理し、その反応生成物
を測定する。本発明方法に用いるケトアミンオキシダー
ゼに特に制限はなく、例えば、クレブシエラ属の細菌、
フザリウム属又はアクレモニウム属の真菌、デバリオマ
イセス属の酵母から得られるケトアミンオキシダーゼな
どを挙げることができる。測定する反応生成物に特に制
限はなく、例えば、発生する過酸化水素、グルコソンな
どのほかに、負の反応生成物である消費される酸素を測
定することもできる。これらの中で、過酸化水素は、発
色原の存在下にペルオキシダーゼで処理して発色させる
ことにより、比色分析することができるので、容易に測
定することができる。本発明方法においては、別途に血
液中の総アルブミンの濃度を測定し、酵素を用いて測定
した糖化アルブミンの濃度と総アルブミンの濃度の比率
を求める。血液中の総アルブミンの濃度の測定方法に特
に制限はなく、例えば、ブロモクレゾールグリーン（Ｂ
ＣＧ）やブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）を用いて
色素−アルブミン複合体による呈色を測定する方法や、
抗アルブミン抗体を用いる免疫比濁法などにより測定す
ることができる。
【０００７】図１は、高速液体クロマトグラフィーによ
り測定した血液中の糖化アルブミンの総アルブミンに対
する比率（％）と、酵素を用いて測定した血液中のケト
アミンの濃度（μmol／Ｌ）の関係を示すグラフの一例
である。両者の間の相関係数はそれほど大きくはなく、
酵素を用いて測定した血液中のケトアミンの濃度によ
り、高速液体クロマトグラフィーにより測定した血液中
の糖化アルブミンの総アルブミンに対する比率を代用す
ることは困難である。血液中の総アルブミン濃度は個体
差があり、通常は２〜５ｇ／dLの間に分布している。本
発明方法においては、まず酵素を用いて測定したケトア
ミンの濃度と、別途に測定した血液中の総アルブミンの
濃度との比率を求める。ケトアミンの濃度は通常μmol
／Ｌ単位で測定され、総アルブミンの濃度は通常ｇ／dL
単位で測定されるので、ケトアミンの総アルブミンに対
する比率は下記の式［２］により計算することができ
る。
り測定した血液中の糖化アルブミンの総アルブミンに対
する比率（％）と、酵素を用いて測定した血液中のケト
アミンの濃度（μmol／Ｌ）の関係を示すグラフの一例
である。両者の間の相関係数はそれほど大きくはなく、
酵素を用いて測定した血液中のケトアミンの濃度によ
り、高速液体クロマトグラフィーにより測定した血液中
の糖化アルブミンの総アルブミンに対する比率を代用す
ることは困難である。血液中の総アルブミン濃度は個体
差があり、通常は２〜５ｇ／dLの間に分布している。本
発明方法においては、まず酵素を用いて測定したケトア
ミンの濃度と、別途に測定した血液中の総アルブミンの
濃度との比率を求める。ケトアミンの濃度は通常μmol
／Ｌ単位で測定され、総アルブミンの濃度は通常ｇ／dL
単位で測定されるので、ケトアミンの総アルブミンに対
する比率は下記の式［２］により計算することができ
る。
【数１】 図２は、このようにして計算したケトアミンの比率を、
高速液体クロマトグラフィーにより測定した糖化アルブ
ミンの比率に対してプロットしたグラフの一例である。
両者の間には、強い相関関係が認められる。しかし、こ
の図に見られるように、式［２］より計算したケトアミ
ンの比率は、高速液体クロマトグラフィーにより測定し
た糖化アルブミンの比率の約３倍の値である。これは、
アルブミン１分子にグルコース約３分子が結合している
ためと推定される。高速液体クロマトグラフィーによる
糖化アルブミンの測定方法は、すでに定着しているの
で、過去の測定値や異なる医療機関における測定値と対
比する上で、高速液体クロマトグラフィーによる測定値
との間に整合性がある数値とすることが好ましい。そこ
で、式［２］より求めたケトアミンの比率より、次のよ
うにして糖化アルブミンの比率を求める。すなわち、高
速液体クロマトグラフィーによる糖化アルブミンの比率
が既知である標準血清について、ケトアミンの濃度と総
アルブミン濃度を測定し、（ケトアミン濃度／総アルブ
ミン濃度）を算出する。次に、測定対象の試料につい
て、同様に（ケトアミン濃度／総アルブミン濃度）を求
め、標準血清から得られた糖化アルブミンの比率と（ケ
トアミン濃度／総アルブミン濃度）の比に基づいて、試
料の糖化アルブミンの比率を算出する。図３は、このよ
うにして計算した糖化アルブミンの比率を、高速液体ク
ロマトグラフィーにより測定した糖化アルブミンの比率
に対してプロットしたグラフの一例である。両者の間に
は強い相関関係が認められ、回帰直線は勾配がほぼ１
で、かつほぼ原点を通る直線となっている。本発明方法
により求めた糖化アルブミンの比率は、従来の高速液体
クロマトグラフィーにより測定した糖化アルブミンの比
率と整合性があり、測定時期、測定医療機関などが異な
っても、共通して支障なく診断に利用することができ
る。
高速液体クロマトグラフィーにより測定した糖化アルブ
ミンの比率に対してプロットしたグラフの一例である。
両者の間には、強い相関関係が認められる。しかし、こ
の図に見られるように、式［２］より計算したケトアミ
ンの比率は、高速液体クロマトグラフィーにより測定し
た糖化アルブミンの比率の約３倍の値である。これは、
アルブミン１分子にグルコース約３分子が結合している
ためと推定される。高速液体クロマトグラフィーによる
糖化アルブミンの測定方法は、すでに定着しているの
で、過去の測定値や異なる医療機関における測定値と対
比する上で、高速液体クロマトグラフィーによる測定値
との間に整合性がある数値とすることが好ましい。そこ
で、式［２］より求めたケトアミンの比率より、次のよ
うにして糖化アルブミンの比率を求める。すなわち、高
速液体クロマトグラフィーによる糖化アルブミンの比率
が既知である標準血清について、ケトアミンの濃度と総
アルブミン濃度を測定し、（ケトアミン濃度／総アルブ
ミン濃度）を算出する。次に、測定対象の試料につい
て、同様に（ケトアミン濃度／総アルブミン濃度）を求
め、標準血清から得られた糖化アルブミンの比率と（ケ
トアミン濃度／総アルブミン濃度）の比に基づいて、試
料の糖化アルブミンの比率を算出する。図３は、このよ
うにして計算した糖化アルブミンの比率を、高速液体ク
ロマトグラフィーにより測定した糖化アルブミンの比率
に対してプロットしたグラフの一例である。両者の間に
は強い相関関係が認められ、回帰直線は勾配がほぼ１
で、かつほぼ原点を通る直線となっている。本発明方法
により求めた糖化アルブミンの比率は、従来の高速液体
クロマトグラフィーにより測定した糖化アルブミンの比
率と整合性があり、測定時期、測定医療機関などが異な
っても、共通して支障なく診断に利用することができ
る。
【０００８】
【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細
に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限
定されるものではない。 実施例１ Ｇｅｎｚｙｍｅ社のＧｌｙＰｒｏを用いて、血液中の糖
化アルブミンの濃度を測定した。ＧｌｙＰｒｏは、試薬
(１)と試薬(２)からなり、試薬(１)は、プロテイナーゼ
Ｋ、ペルオキシダーゼ、ＥＰＰＳ緩衝剤、酢酸カルシウ
ム、フェロシアン化カリウム、酢酸銅、バトフェナント
ロリンジスルホン酸、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホヒドロキ
シプロピル−ｍ−トルイジンのナトリウム塩、コール酸
ナトリウム及びポリオキシエチレン(１０)トリデシルエ
ーテルを含有する。試薬(２)は、ケトアミンオキシダー
ゼ、ＥＰＰＳ緩衝剤、マンニトール、ＥＤＴＡ及び４−
アミノアンチピリンを含有する。試薬(１)及び試薬(２)
を、それぞれ所定量の脱イオン水に溶解して、試薬溶液
(１)と試薬溶液(２)を調製した。糖尿病患者から静脈穿
刺により血液を採取し、血清を分離した。自動分析装置
［(株)日立製作所、ＨＩＴＡＣＨＩ ７０７０］を用い
て、血清２０μＬ、希釈液３０μＬ及び試薬溶液(１)２
８０μＬを混合し、３７℃に５分間保ったのち、５４６
ｎｍにおける吸光度Ａ1を測定し、さらに試薬溶液(２)
６０μＬと希釈液１０μＬを添加して、３７℃に５分間
保ったのち、５４６ｎｍにおける吸光度Ａ 2を測定し
た。自動分析装置は、Ａ2−Ａ1の値からケトアミンの濃
度を計算し、ケトアミンの濃度として４４７.１μmol／
Ｌが得られた。上記の血液中の総アルブミンの濃度を、
別途にブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧ）を用いて色
素−アルブミン複合体の呈色により測定したところ、
４.０ｇ／dLであった。この結果、総アルブミンに対す
るケトアミンの比率は、 （４４７.１／４.０）× ０.６５ ＝ ７２.６５（％） と算出された。高速液体クロマトグラフィーにより求め
た糖化アルブミンの比率が２３.３０％である標準血清
を、同様にして分析したところ、ケトアミンの総アルブ
ミンに対する比率は６３.９２％であった。この結果か
ら、上記の血清の糖化アルブミンの比率は、 ７２.６５ ×（２３.３０／６３.９２）＝ ２６.４８
（％） と算出された。また、上記の血液について、高速液体ク
ロマトグラフ［京都第一科学(株)、ＧＡＡ−２０００］
を用いて糖化アルブミンの比率を求めたところ、２７.
１％であり、上記の酵素法により求めた糖化アルブミン
の比率とよく一致していた。さらに、合計９９名の糖尿
病患者と健常者について採血を行い、ＧｌｙＰｒｏを用
いるケトアミン濃度の測定、呈色法による総アルブミン
濃度の測定、ケトアミンの比率の計算、糖化アルブミン
の比率の計算を行うとともに、併せて高速液体クロマト
グラフィーによる糖化アルブミンの比率の測定を行っ
た。結果を第１表に示す。
に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限
定されるものではない。 実施例１ Ｇｅｎｚｙｍｅ社のＧｌｙＰｒｏを用いて、血液中の糖
化アルブミンの濃度を測定した。ＧｌｙＰｒｏは、試薬
(１)と試薬(２)からなり、試薬(１)は、プロテイナーゼ
Ｋ、ペルオキシダーゼ、ＥＰＰＳ緩衝剤、酢酸カルシウ
ム、フェロシアン化カリウム、酢酸銅、バトフェナント
ロリンジスルホン酸、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホヒドロキ
シプロピル−ｍ−トルイジンのナトリウム塩、コール酸
ナトリウム及びポリオキシエチレン(１０)トリデシルエ
ーテルを含有する。試薬(２)は、ケトアミンオキシダー
ゼ、ＥＰＰＳ緩衝剤、マンニトール、ＥＤＴＡ及び４−
アミノアンチピリンを含有する。試薬(１)及び試薬(２)
を、それぞれ所定量の脱イオン水に溶解して、試薬溶液
(１)と試薬溶液(２)を調製した。糖尿病患者から静脈穿
刺により血液を採取し、血清を分離した。自動分析装置
［(株)日立製作所、ＨＩＴＡＣＨＩ ７０７０］を用い
て、血清２０μＬ、希釈液３０μＬ及び試薬溶液(１)２
８０μＬを混合し、３７℃に５分間保ったのち、５４６
ｎｍにおける吸光度Ａ1を測定し、さらに試薬溶液(２)
６０μＬと希釈液１０μＬを添加して、３７℃に５分間
保ったのち、５４６ｎｍにおける吸光度Ａ 2を測定し
た。自動分析装置は、Ａ2−Ａ1の値からケトアミンの濃
度を計算し、ケトアミンの濃度として４４７.１μmol／
Ｌが得られた。上記の血液中の総アルブミンの濃度を、
別途にブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧ）を用いて色
素−アルブミン複合体の呈色により測定したところ、
４.０ｇ／dLであった。この結果、総アルブミンに対す
るケトアミンの比率は、 （４４７.１／４.０）× ０.６５ ＝ ７２.６５（％） と算出された。高速液体クロマトグラフィーにより求め
た糖化アルブミンの比率が２３.３０％である標準血清
を、同様にして分析したところ、ケトアミンの総アルブ
ミンに対する比率は６３.９２％であった。この結果か
ら、上記の血清の糖化アルブミンの比率は、 ７２.６５ ×（２３.３０／６３.９２）＝ ２６.４８
（％） と算出された。また、上記の血液について、高速液体ク
ロマトグラフ［京都第一科学(株)、ＧＡＡ−２０００］
を用いて糖化アルブミンの比率を求めたところ、２７.
１％であり、上記の酵素法により求めた糖化アルブミン
の比率とよく一致していた。さらに、合計９９名の糖尿
病患者と健常者について採血を行い、ＧｌｙＰｒｏを用
いるケトアミン濃度の測定、呈色法による総アルブミン
濃度の測定、ケトアミンの比率の計算、糖化アルブミン
の比率の計算を行うとともに、併せて高速液体クロマト
グラフィーによる糖化アルブミンの比率の測定を行っ
た。結果を第１表に示す。
【０００９】
【表１】
【００１０】
【表２】
【００１１】
【表３】
【００１２】
【表４】
【００１３】第１表に見られるように、本発明方法によ
り求めた糖化アルブミンの比率と、高速液体クロマトグ
ラフィーにより求めた糖化アルブミンの比率はよい一致
を示し、医療現場において、本発明方法により求めた数
値を従来の高速液体クロマトグラフィーにより求めた数
値となんら区別することなく、診断に使用し得ることが
分かる。さらに、上記の測定データを、グラフを用いて
整理する。図１は、高速液体クロマトグラフィーにより
求めた糖化アルブミンの比率（ｘ）と、ＧｌｙＰｒｏに
より求めたケトアミンの濃度（ｙ1）の関係を示すグラ
フである。本図において、回帰直線と相関係数は下記の
式により表される。グラフからも、相関係数の値から
も、ｘとｙ1の間に十分に高い相関係数があるとは言い
難い。 ｙ1＝１７.２２７ｘ−６５.３１４ Ｒ2＝０.７１４９ 図２は、高速液体クロマトグラフィーにより求めた糖化
アルブミンの比率（ｘ）と、ＧｌｙＰｒｏにより求めた
ケトアミンの濃度と別途に測定した血液中の総アルブミ
ンの濃度との比率（ｙ2）の相関関係を示すグラフであ
る。本図において、回帰直線と相関係数は下記の式によ
り表される。グラフからも、相関係数の値からも、ｘと
ｙ2の間に十分に高い相関係数が認められる。 ｙ2＝２.９７３３ｘ−１１.５５ Ｒ2＝０.９４３２ しかし、図２の回帰直線の勾配は約３であり、このまま
では医療現場においてｙ2の値をｘの値と同等に取り扱
うことができない。そこで、ｙ2の値より糖化アルブミ
ンの総アルブミンに対する比率（ｙ3）を求め、図３に
示すように、高速液体クロマトグラフィーにより求めた
糖化アルブミンの比率（ｘ）に対してプロットしグラフ
化する。本図において、回帰直線と相関係数は下記の式
により表される。グラフからも、相関係数の値からも、
ｘとｙ3の間に十分に高い相関係数が認められ、かつｘ
とｙ3はほぼ同じ値となり、従来の高速液体クロマトグ
ラフィーにより求めた数値となんら区別することなく、
診断に使用することができる。 ｙ3＝０.９３０３ｘ＋０.１３７２ Ｒ2＝０.９４３２
り求めた糖化アルブミンの比率と、高速液体クロマトグ
ラフィーにより求めた糖化アルブミンの比率はよい一致
を示し、医療現場において、本発明方法により求めた数
値を従来の高速液体クロマトグラフィーにより求めた数
値となんら区別することなく、診断に使用し得ることが
分かる。さらに、上記の測定データを、グラフを用いて
整理する。図１は、高速液体クロマトグラフィーにより
求めた糖化アルブミンの比率（ｘ）と、ＧｌｙＰｒｏに
より求めたケトアミンの濃度（ｙ1）の関係を示すグラ
フである。本図において、回帰直線と相関係数は下記の
式により表される。グラフからも、相関係数の値から
も、ｘとｙ1の間に十分に高い相関係数があるとは言い
難い。 ｙ1＝１７.２２７ｘ−６５.３１４ Ｒ2＝０.７１４９ 図２は、高速液体クロマトグラフィーにより求めた糖化
アルブミンの比率（ｘ）と、ＧｌｙＰｒｏにより求めた
ケトアミンの濃度と別途に測定した血液中の総アルブミ
ンの濃度との比率（ｙ2）の相関関係を示すグラフであ
る。本図において、回帰直線と相関係数は下記の式によ
り表される。グラフからも、相関係数の値からも、ｘと
ｙ2の間に十分に高い相関係数が認められる。 ｙ2＝２.９７３３ｘ−１１.５５ Ｒ2＝０.９４３２ しかし、図２の回帰直線の勾配は約３であり、このまま
では医療現場においてｙ2の値をｘの値と同等に取り扱
うことができない。そこで、ｙ2の値より糖化アルブミ
ンの総アルブミンに対する比率（ｙ3）を求め、図３に
示すように、高速液体クロマトグラフィーにより求めた
糖化アルブミンの比率（ｘ）に対してプロットしグラフ
化する。本図において、回帰直線と相関係数は下記の式
により表される。グラフからも、相関係数の値からも、
ｘとｙ3の間に十分に高い相関係数が認められ、かつｘ
とｙ3はほぼ同じ値となり、従来の高速液体クロマトグ
ラフィーにより求めた数値となんら区別することなく、
診断に使用することができる。 ｙ3＝０.９３０３ｘ＋０.１３７２ Ｒ2＝０.９４３２
【００１４】
【発明の効果】本発明の糖化アルブミンの測定方法によ
れば、特殊な専用機器を使用することなく、汎用の自動
分析装置を用いて、試料中の糖化アルブミンを簡易に測
定することができ、本発明方法により得られた糖化アル
ブミンの総アルブミンに対する比率は、従来の高速液体
クロマトグラフィーにより得られた比率と整合性を有
し、同様に取り扱うことができる。
れば、特殊な専用機器を使用することなく、汎用の自動
分析装置を用いて、試料中の糖化アルブミンを簡易に測
定することができ、本発明方法により得られた糖化アル
ブミンの総アルブミンに対する比率は、従来の高速液体
クロマトグラフィーにより得られた比率と整合性を有
し、同様に取り扱うことができる。
【図１】図１は、高速液体クロマトグラフィーにより測
定した血液中の糖化アルブミンの総アルブミンに対する
比率（％）と、酵素を用いて測定した血液中のケトアミ
ンの濃度（μmol／Ｌ）の関係を示すグラフの一例であ
る。
定した血液中の糖化アルブミンの総アルブミンに対する
比率（％）と、酵素を用いて測定した血液中のケトアミ
ンの濃度（μmol／Ｌ）の関係を示すグラフの一例であ
る。
【図２】図２は、高速液体クロマトグラフィーにより測
定した糖化アルブミンの比率（％）と、酵素を用いて測
定したケトアミンの濃度の別途に測定した総アルブミン
の濃度に対する比率（％）の関係を示すグラフの一例で
ある。
定した糖化アルブミンの比率（％）と、酵素を用いて測
定したケトアミンの濃度の別途に測定した総アルブミン
の濃度に対する比率（％）の関係を示すグラフの一例で
ある。
【図３】図３は、高速液体クロマトグラフィーにより測
定した糖化アルブミンの比率（％）と、本発明方法によ
り求めた糖化アルブミンの比率（％）の関係を示すグラ
フの一例である。
定した糖化アルブミンの比率（％）と、本発明方法によ
り求めた糖化アルブミンの比率（％）の関係を示すグラ
フの一例である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 591083336 株式会社ビー・エム・エル 東京都渋谷区千駄ヶ谷５丁目21番３号 (71)出願人 500128181 ゼンザイム コーポレーション アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02139−1562、ケンブリッジ、ワン ケン ドール スクエアー (72)発明者 坂本 久 京都府京都市南区東九条西明田町57 株式 会社京都第一科学内 (72)発明者 坪井 五三美 埼玉県川越市的場1361−１ 株式会社ビ ー・エム・エル総合研究所内 (72)発明者 トレンス、デビッド・ジョン イギリス、エムシー14・２ ビーイー、ケ ント、メイドストーン、ボックスリー・ロ ード 104番 Ｆターム(参考） 2G045 AA01 BB41 BB51 CA25 CA26 DA36 DA44 FA26 FA29 FB01 GC10 4B063 QA01 QA18 QA19 QQ67 QQ79 QR03 QR16 QS13 QS28 QS36 QX01
Claims (4)
- 【請求項１】試料中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用
いて測定し、別途に測定した試料中の総アルブミンの濃
度に対する比率を求めることを特徴とする糖化アルブミ
ンの測定方法。 - 【請求項２】試料が、血液である請求項１記載の糖化ア
ルブミンの測定方法。 - 【請求項３】血液中の糖化アルブミンの濃度を酵素を用
いて測定する方法が、血清又は血漿をプロテアーゼで処
理し、プロテアーゼ処理試料をケトアミンオキシダーゼ
で処理し、その反応生成物を測定する請求項２記載の糖
化アルブミンの測定方法。 - 【請求項４】反応生成物が、過酸化水素である請求項３
記載の糖化アルブミンの測定方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000080883A JP2001258593A (ja) | 2000-03-22 | 2000-03-22 | 糖化アルブミンの測定方法 |
| PCT/JP2001/002253 WO2001071024A1 (fr) | 2000-03-22 | 2001-03-22 | Procede de dosage de l'albumine glyquee |
| AU2001242741A AU2001242741A1 (en) | 2000-03-22 | 2001-03-22 | Method of assaying glycated albumin |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000080883A JP2001258593A (ja) | 2000-03-22 | 2000-03-22 | 糖化アルブミンの測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001258593A true JP2001258593A (ja) | 2001-09-25 |
Family
ID=18597913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000080883A Pending JP2001258593A (ja) | 2000-03-22 | 2000-03-22 | 糖化アルブミンの測定方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001258593A (ja) |
| AU (1) | AU2001242741A1 (ja) |
| WO (1) | WO2001071024A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002061119A1 (fr) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Compositions pour analyse de glycoproteines |
| JP2010048791A (ja) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Pico Device:Kk | 汗よりのグリコアルブミン判定方法、および測定方法およびキット |
| EP2639586A1 (en) | 2012-03-15 | 2013-09-18 | ARKRAY, Inc. | Measurement method using enzymes |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0658936A (ja) * | 1992-08-11 | 1994-03-04 | Sekisui Chem Co Ltd | 糖化蛋白の測定方法 |
| JPH11504808A (ja) * | 1995-05-05 | 1999-05-11 | ジェンザイム・リミテッド | 糖化タンパク質の測定 |
-
2000
- 2000-03-22 JP JP2000080883A patent/JP2001258593A/ja active Pending
-
2001
- 2001-03-22 AU AU2001242741A patent/AU2001242741A1/en not_active Abandoned
- 2001-03-22 WO PCT/JP2001/002253 patent/WO2001071024A1/ja active Application Filing
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0658936A (ja) * | 1992-08-11 | 1994-03-04 | Sekisui Chem Co Ltd | 糖化蛋白の測定方法 |
| JPH11504808A (ja) * | 1995-05-05 | 1999-05-11 | ジェンザイム・リミテッド | 糖化タンパク質の測定 |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002061119A1 (fr) * | 2001-01-31 | 2002-08-08 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | Compositions pour analyse de glycoproteines |
| JPWO2002061119A1 (ja) * | 2001-01-31 | 2004-06-03 | 旭化成ファーマ株式会社 | 糖化蛋白質測定用組成物 |
| US7250269B2 (en) | 2001-01-31 | 2007-07-31 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Composition for assaying glycoprotein |
| JP2008278898A (ja) * | 2001-01-31 | 2008-11-20 | Asahi Kasei Pharma Kk | 糖化蛋白質測定用組成物 |
| JP2009034110A (ja) * | 2001-01-31 | 2009-02-19 | Asahi Kasei Pharma Kk | 糖化蛋白質測定用組成物 |
| US8105800B2 (en) | 2001-01-31 | 2012-01-31 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Composition for assaying glycated proteins |
| CN102505042A (zh) * | 2001-01-31 | 2012-06-20 | 旭化成制药株式会社 | 测定糖化蛋白质的组合物 |
| JP2010048791A (ja) * | 2008-08-25 | 2010-03-04 | Pico Device:Kk | 汗よりのグリコアルブミン判定方法、および測定方法およびキット |
| EP2639586A1 (en) | 2012-03-15 | 2013-09-18 | ARKRAY, Inc. | Measurement method using enzymes |
| US8802366B2 (en) | 2012-03-15 | 2014-08-12 | Arkray, Inc. | Measurement method using enzyme |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2001242741A1 (en) | 2001-10-03 |
| WO2001071024A1 (fr) | 2001-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5829766B2 (ja) | 酵素法を利用したヘモグロビンＡ１ｃ定量分析のための溶血試薬組成物 | |
| Hindle et al. | The estimation of serum fructosamine: an alternative measurement to glycated haemoglobin | |
| CN109239059B (zh) | 一种糖化血清蛋白测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| US20040030228A1 (en) | Method and kit for the transderaml determinaton of analyte concentration in blood | |
| Mosca et al. | Plasma protein glycation as measured by fructosamine assay. | |
| JP3159451B2 (ja) | 糖化タンパク質の測定 | |
| EP2319937B1 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| CN107870170B (zh) | 一种酶化学发光法测定糖化血清白蛋白的试剂盒 | |
| Lammers et al. | Immunonephelometric quantification of free haemoglobin | |
| Suhonen et al. | Correlation of HbA1C, glycated serum proteins and albumin, and fructosamine with the 24-h glucose profile of insulin-dependent pregnant diabetics. | |
| CN109212238B (zh) | 一种糖化白蛋白测定试剂盒 | |
| JP2001258593A (ja) | 糖化アルブミンの測定方法 | |
| CN110988165A (zh) | 一种1,5-脱水葡萄糖醇的唾液无创检测方法及其应用 | |
| Stivers et al. | A miniaturized self-contained single-use disposable quantitative test for hemoglobin A1c in blood at the point of care | |
| JP2001264336A (ja) | 自己血糖検査手段 | |
| JP3516069B2 (ja) | グルコース濃度の測定方法 | |
| Megerssa et al. | Glycated proteins: Clinical utility and analytical approaches | |
| Chowdhry et al. | Study of glycaemic biomarkers in the patients of thyroid disorders | |
| CN111398606A (zh) | 一种试剂盒以及检测系统 | |
| Taş et al. | Automated fructosamine assay with improved accuracy used to quantify nonenzymatic glycation of serum proteins in diabetes mellitus and chronic renal failure | |
| US20220163542A1 (en) | Methods of blood sample suspension | |
| JP2004333455A (ja) | 高分子中のケトアミンの測定方法 | |
| CN113214386B (zh) | 一种糖尿病早期诊断多肽标志物及其应用 | |
| JPH02122267A (ja) | ヘモグロビン定量試薬キット及びそれを用いるヘモグロビン定量方法 | |
| Lahiri | REINVENTION OF CLINICAL USE OF URINE GLUCOSE TEST AS A PREDICTOR OF GLUCOSE LOWERING EFFICACY OF SGLT2 INHIBITOR THERAPY AS ORAL HYPOGLYCEMIC AGENT IN TYPE 2 DIABETES MELLITUS |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050228 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050517 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20050801 |