PL169952B1 - Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents

Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin PL PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL169952B1
PL169952B1 PL92295727A PL29572792A PL169952B1 PL 169952 B1 PL169952 B1 PL 169952B1 PL 92295727 A PL92295727 A PL 92295727A PL 29572792 A PL29572792 A PL 29572792A PL 169952 B1 PL169952 B1 PL 169952B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
virus
cells
atcc
tissue
disease
Prior art date
Application number
PL92295727A
Other languages
English (en)
Other versions
PL295727A1 (en
Inventor
Danny W Chladek
David E Gorcyca
Louis L Harris
Original Assignee
Boehringer Animal Health Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27419390&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL169952(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Animal Health Inc filed Critical Boehringer Animal Health Inc
Publication of PL295727A1 publication Critical patent/PL295727A1/xx
Publication of PL169952B1 publication Critical patent/PL169952B1/pl

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/02Recovery or purification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12Viral antigens
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525Virus
    • A61K2039/5254Virus avirulent or attenuated
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552Veterinary vaccine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011Details
    • C12N2770/10011Arteriviridae
    • C12N2770/10034Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011Details
    • C12N2770/10011Arteriviridae
    • C12N2770/10051Methods of production or purification of viral material

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1 Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin (wirus PRRS), znamienny tym, ze tkanke otrzymana z zakazonego prosiecia czynnikiem wiru- sowym PRRS ATCC-VR2332, kontaktuje sie z pelna albo czesciowa warstwa komórek malpiej linii komórkowej M A-104, komórki hoduje sie w obecnosci surowicy w odpowiednim podlozu hodowlanym w temperaturze okolo 34-37°C az do wystapienia cytopatycznego efektu i odzyskuje sie wirus. PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób namnazania i izolacji wirusa zespołu niepłodności i oddechowego świń.
Wyraźnie nowa choroba świń, powodująca ciężkie straty w stadach hodowlanych, pojawiła się ostatnio w Stanach Zjednoczonych i w niektórych regionach Kanady. Keffaber K.K, “Reproductive Failure of Unknown Etiology” (Niepowodzenia hodowlane o nieznanej eitologii) America Associaton of Swine Practitionere Newsletter, 1:109 (1989). Podobna choroba została także opisana w niektórych regionach Niemiec, w Holandii oraz w Zjednoczonym Królestwie i Hiszpanii Wensvoort C, i in, “Blue Ear Disease of Pigs” (Choroba niebieskich uszu świń) Vet.Rec., 128:574 (1991). Najważniejszym objawem klinicznym choroby jest rodzenie się nieżywych lub chorych prosiąt, przy czym niektóre prosięta wyglądająjak zdrowe ale następnie żywią się słabo albo rozwijają się w nich zaburzenia w oddychaniu, objawy ze strony ośrodkowego układu nerwowego i zdychają. W niektórych stadach dotkniętych chorobą straty osiągają75% wszystkich prosiąt. Następstwa ekonomiczne choroby są więc rujnujące. Nazwano ją “tajemniczą chorobą świń”, zespołem niepłodności i oddechowym świń (SIRS), “chorobą niebieskich uszu” i zespołem reprodukcji 11 oddechowym świń.
SIRS jest najwyraźniej chorobą zakaźną, którą charakteryzuje niepowodzenie reprodukcji, zaburzenia oddechowe i zmienne objawy kliniczne takie jak brak łaknienia, gorączka, duszność i lekkie objawy neurologiczne. Choroba atakuje wszystkie rodzaje zakładów produkcji świń i jest być może najkosztowniejszą z chorób obecnie zagrażających przemysłowi produkcji świń. Poison D.P. i in, “Financial Implications od Mystery Swine Disease” (Finansowe następstwa tajemniczej choroby świń) Proceedings, Livestock Conservation Institute, Denver, CO(October 6, 1990).
Zakażenie macior może przebiegać niezauważone, albo może się przejawiać gorszą ogólną kondycją przez jeden lub kilka dni. Na przykład maciory mogą nie jeść i wykazują temperaturę ciała powyżej lub poniżej prawidłowej. W okresie rodzenia objawy choroby obejmują depresję, śpiączkę, gorączkę, czasem wymioty, poronienia, rodzenie martwych i/lub zmumifikowanych płodów. Najczęstszym objawem klinicznym jest dramatyczny wzrost liczby martwo urodzonych
169 952 prosiąt. Liczba martwych urodzeń może sięgać 25 do 30 procent wszystkich urodzeń w zakażonym stadzie. Wiele z płodów martwo urodzonych jest zmacerowanych. wskazując ze byty .·_______ ~ _ι '-'Λ j _ λο___i rnczywc uu 24 uu 40 gouz.ni.
Jak powiedziano wyżej, głównym składnikiem SIRS jest załamanie się reprodukcji, które przejawia się jako przedwczesne urodzenia, późne poronienia, rodzenie się słabych prosiąt, wzrost liczby martwo urodzonych, zmumifikowane płody, mniej sza liczebność porodów i opóźniony powrót do cyklu rujowego. Te objawy kliniczne obserwuje się w stadzie typowo przez 4 do 16 tygodni, lub nawet dłużej. Martwo urodzone płody w zakażonym miocie często są we wczesnych stadiach mumifikacji, co widać po brunatno-brązowym przebarwieniu skóry i autolizie pośmiertnej. Czasem obserwuje się kopulaste zniekształcenie czaszki płodów.
Kliniczne objawy choroby oddechowej są wyrażone najbardziej u prosiąt poniżej 3 tygodnia życia, ale w zakażonych stadach opisano je u prosiąt w każdym wieku. Chore prosięta rosną wolno mają szorstką szczecinę, trudności oddechowe (“ciężki oddech”) i wykazują wyższą śmiertelność (do około 80 procent śmiertelności przed odstawieniem od ssania).
Wyniki wstępnych badań zmian makro- i mikroskopowych u świń chorych na SIRS sugerują^, że zmiany mikroskopowe w płucach są ważnym objawem klinicznym tej choroby. Mimo wyraźnych objawów oddechowych, płuca bez powikłania następowym zakażeniem bakteryjnym są albo makroskopowo prawidłowe albo wykazujądelikatne, rozproszone przebarwienie brunatno-szare powierzchni. Jednak badanie mikroskopowe tkanki płucnej prosiąt chorych na SIRS wykazuje charakterystyczny obraz zapalenia śródmiąższowego Colins J.E. i in. “Respiratory Disease in a Swine Herd Experiencing a Reproductive Failure Syndrome” (Choroba oddechowa w stadzie świń dotkniętym zespołem niepowodzenia reprodukcji) Proceedings, Minnesota Swine Conference for Veterinarians, str. 254, St.Paul, MN (September 10-18 1990).
SIRS albo “tajemnicza choroba świń” występuje szeroko w Stanach Zjednoczonych, doniesiono o niej z co najmniej 11 stanów Jak doniesiono w literaturze, wśród badanych pierwotnych czynników przyczynowych są wirus zapalenia mózgu i mięśnia sercowego (encephalomyocarditis - EMC), wirus grupy świń (SIV), mykotoksyny i chlamydie.
Zadaniem wynalazku jest opracowanie sposobu namnazania i izolacji wirusa zespołu niepłodności i oddechowego świń.
Homogenat tkankowy otrzymany z prosiąt w stadach zakażonych SIRS, podany donosowo gnotobiotycznym prosiętom i ciężarnym maciorom, stale odtwarzał oddechowe i reprodukcyjne postacie SIRS. Prosięta gnotobiotyczne, którym w ten sposób podano inokulum niesączone lub sączone (0,45, 0,22 lub 0,1 pm) traciły łaknienie i rozwijały się u nich mikroskopowe zmiany w płucach podobne do obserwowanych w stadach zakażonych SIRS. To samo inkulum wywoływało także efekty reprodukcyjne identyczne z tymi, które są obserwowane w stadach zakażonych SIRS. Z homogenatu tkankowego uzyskano czynnik wirusowy. Ten czynnik wirusowy powoduje chorobę, która naśladuje SIRS u prosiąt i ciężarnych macior. Czynnik wirusowy zdeponowano 18 lipca 1991 w American Type Culture Collection (Amerykańska Kolekcja Szczepów i Hodowli). Rockville, Maryland pod numerem ATCC-VR2332. Ten czynnik wirusowy jest wymagającym, nie hemaglutynującym wirusem RNA posiadającym otoczkę.
Szczegółowo wynalazek dotyczy sposobu namnazania i izolacji wirusa zespołu niepłodności i oddechowego świń ATCC-VR2332, który obejmuje zaszczepienie wirusem pełnej lub częściowej warstwy komórek małpiej linii komórkowej w obecności surowicy w odpowiednim położeniu wzrostowym, oraz inkubację zaszczepionej warstwy komórek w temperaturze około 34-37°C aż do wystąpienia cytopatycznego działania. W tym sposobie stosuje się linię komórek małpich MA 104. W sposobie tym stosuje się podłoże hodowlane zawierające około 10% płodowej surowicy cielęcej, a wymienione komórki MA-104 inkubuje się przez około 7 dni. Otrzymanątkankę homogenizuje się, ajako tkankę stosuje się płuca, mózg, śledzionę, wątrobę i nerki. W sposobie po odzyskaniu wirusa szczepi się nim nową pełną albo częściową warstwę komórek MA-104, hoduje aż do wystąpienia cytopatycznego efektu i odzyskuje wirus. Korzystnie hodowlę wirusa MA-104 w obecności wirusa powtarza się więcej niż dwukrotnie.
169 952
Przykład I. Izolacja. Tkanka płuc oraz połączone tkanki mózgu- śledziony-wątroby-nerki, otrzymane z zakazonego prosięcia w stadzie zakażonym SIRS, homogenizowano oddzielnie. Poszczególne homogenaty zmieszano z modyfikowanym podłożem nagle (mem) zawierającym około 100 pg/ml gentamycyny. Obie próby wirowano przez około 25 minut przy około 4000 x g. Nadsącz zebrano i sączono przez filtr 0,45 mikrometra. Homogenaty płuc i tkanek połączono i połączony materiał użyto do zakażenia różnych hodowli tkanek w butelkach.
Przeprowadzono dwa doświadczenia, używając butelek plastikowych 75 cm2. W doświadczeniu 1 połączony materiał zaszczepiono do dwu butelek zawieraj ących pełną warstwę komórek jednej z podanych niżej linii komórkowych. Ponadto do jednej butelki z każdą z linii komórkowych dodano około 2,5 mg trypsyny. Wszystkie pozostałe warunki były takie same dla każdej butelki z hodowlą linii komórkowej. Podłoże hodowlane nie zawierało surowicy. Inkulum wynosiło około 1 ml. Wszystkie butelki inkubowano przez około 7 dni w temperaturze w przybliżeniu 34°C. Wyniki odczytywano pod koniec okresu około 7 dni. Po zamrożeniu i odmrożeniu pobierano próbkę do drugiego pasażu na tej samej linii komórek. Pozostały materiał zamrażano i przechowywano w około -60°C.
W doświadczeniu 2 połączonym materiałem zaszczepiono butelki z tymi samymi liniami komórek jak w doświadczeniu 1. Jednak w momencie zaszczepiania warstwy komórek były pełne tylko w 20-40%. Podłoża hodowlane zawierały około 10% płodowej surowicy cielęcej. Inkulum wynosiło znów 1 ml, a hodowle inkubowano przez około 7 dni w temperaturze około 34°C. Wyniki doświadczeń 1 i 2 są podsumowane niżej:
Użyta linia komórkowa Doświadczenie 1 Doświadczenie 2
Małżowina bydlęca (BT) -
Nerka kota (CRFK) - -
Nerka małpy (Vero) - -
Płuco małpy (Vero) - -
Nerka psa (MDCk) - -
Nerka świnki (PK2a) - -
Płuco norki - -
Płuco fretki - -
Płuco bydlęce - -
Płuco byka - -
Nerka bydlęca (MDBK) - -
Jądro świni (sT) - -
Nerka małpy (MA-104) - -
Guz odbytu człowieka (HRT-18) - NT
Płuco człowieka ET -
+ = CPE (efekt cytopatyczny) - = brak CPE NT = nie badano
Nie obserwowano efektu cytopatycznego w doświadczeniu 1 w żadnej z ocenianych linii komórkowych. W doświadczeniu 2 natomiast małe skupienia komórek MA-104 zaczęły pęcznieć i tworzyć “dziury” w jednolitej warstwie komórek przy krawędziach butelki. Płyn pobrano z butelki i przeniesiono do nowej butelki z komórkami MA-104 (znów 20-40% jednolitej warstwy komórek), a następnie pasażowano po raz trzeci. Efekt cytopatyczny (CPE) nasilał się z każdym pasażem. Opisane postępowanie powtórzono z linią komórek MA-104, używając pełnej warstwy komórek. CPE obserwowano również. Dalsze badanie wykazało, ze czynnik wirusowy namnaża się także w temperaturze około 37°C. Obecność surowicy może być pomocna w początkowej izolacji czynnika wirusowego. W dalszych pasażach czynnika wirusowego na komórkach linii MA-104 CPE występuje bez obecności surowicy. Jednak bardziej nasilony CPE obserwuje się przy użyciu surowicy w podłożu wzrostowym dla komórek linii MA-104.
169 952
Stwierdzono również, ze czynnik wirusowy jest częściowo oporny na ogrzewanie w około 56°C przez około 50 minut. W wyniku takiego traktowania ciepłem miano wirusa spadło o około 3 logarytmy. Czynnik wirusowy pasażowano ośmiokrotnie na komórkach 'miii MA-104 z dobrym CPE rozwijającym się w ciągu 3 dni w pasażu piątym i następnych. Otrzymywane miano wynosiło w przybliżeniu 5.05 log (10J,i). Czynnik wirusowy namnaża się także na innych małpich liniach komórkowych. Jest zatem sprawą indywidualnego doświadczenia w tej dziedzinie aby namnażać wirus SIRS ATCC-2332, lub jego mutanty, na innych liniach komórkowych przy pomocy modyfikacji warunków wzrostu, podłoży wzrostowych itd.
Przykład II. Badanie in vivo. Zbiór z trzeciego pasażu użyto do zaszczepienia dwu. trzydniowych prosiąt gnotobiotycznych. Obu podano donosowo odpowiednio 1 i 2 ml. Prosięta obserwowano 7 dni następnie zabito.
Pobrano próbki tkanek do histopatologii i do izolacji czynnika wirusowego, badanie histopatologiczne potwierdziło, że zmiany w płucach zakażonych prosiąt były identyczne ze zmianami w płucach prosiąt z SIRS. Próbki tkanek opracowano jak poprzednio, następnie podano do hodowli 20-40% i 100% ν/arstwy komórek linii MA-104 z płodowa surowicą bydlęcą. Czynnik wirusowy ponownie izolowano.
Zbiór z trzeciego pasażu użyto także do zaszczepienia macior, celem weryfikacji, ze efekty reprodukcyjne choroby można odtworzyć i potwierdzić. Dwie maciory rodzące po kilka młodych zaszczepiono donosowo około 93 dnia ciąży. Odpowiednio 112 i 114 dnia ciąży maciory wydały mioty, w których było 50 procent martwo urodzonych (8/13 i 6/14 martwych/żywych). Siedem z martwo urodzonych prosiąt było częściowo zmumifikowanych, a żywe prosięta były słabe i nie ssały prawidłowo. Z tkanek martwo urodzonych prosiąt izolowano czynnik wirusowy.
Czynnik wirusowy izolowano w trzech stadach, w których znane było SIRS. W tych samych stadach stwierdzono miana przeciwciał dla czynnika ATCC-VR2332.
Chociaż występują pewne różnice w klinicznych objawach, to jest sinica skóry uszu, ogona i wymienia u krów europejskich, przeważa pogląd, ze chorobą północnoamerykańską i europejską wywołuje ten sam wirus.
Przykład III. Charakterystyka wirusa. ATCC-VR2332 stale wywoływał objawy kliniczne i zmiany w płucach u gnotobiotycznych świń i dawał ujemne wyniki immunofluorescencji (ImF), wykazujące, ze wirus nie posiada antygenu grupowego, antygenowo podobnego do wirusów aktualnie znanych rodzajów togawirusów (Togavirideae). Zatem wirus ATCCVR2332 może reprezentować niezidentyfikowany rodzaj togawirusów (Togaviridae). Wirus ATCC-VR2332 nie jest także znanym patogenem świń, ponieważ swoiste antysurowice przeciw znanym wirusowym patogenom świń nie neutralizowały wirusa ani nie wykazywały antygenów w zakażonych komórkach.
ATCC-VR2332 jest to wymagający, nie hemaglutynujący wirus RNA posiadający otoczkę. Namnaża się w linii ciągłej komórek, w szczególności MA-104 i innych małpich liniach komórkowych. Wirus ATCC-VR232 namnaża się do wysokich mian (107 TCIDwml) w handlowej linii komórek MA-104.
Wirus ATCC-VR2332 posiada otoczkę lipidową, na co wskazuje utrata zakaźności po traktowaniu chloroformem. Otoczkę lipidową można także uwidocznić jako elektronowo przejrzysty pierścień otaczający puste cząstki. Morfologia wirusa SIRS nie jest wyraźna w bezpośredniej mikroskopii elektronowej (DEM) i jest niezwykle trudna do identyfikacji w preparatach zawierających resztki komórkowe. Wiriony ATCC-VR2332 można zidentyfikować po oczyszczeniu w gradientach CsCl i następnie wyznakowaniu wirionów koniugatem złota i hyperimmunizowanej surowicy anty ATCC-VR2332. Gęstość pływakowa wirionów ATCCVR2332 w gradientach CsCl wynosi 1,18 - 1,19 g/ml. Gradienty sacharozy stale powodowały straty miana wirusa i zostały zaniechane jako gradienty do oczyszczania. Morfologia oczyszczonych w gradiencie cząstek ATCC-VR2332 oraz przeciętna średnica 62 nm są bardzo podobne do wirionów wirusów zapalenia tętnic koni i dehydrogenazy mlekowej. Wirus zapalenia tętnic koni ma opisaną wielkość 50-73 nm, podobną do wielkości 48-84 nm wirusa ATCCVR2332. W niektórych cząstkach ATCC-VR2332 obserwowano rdzenie 30-35 nm, które
169 952 przypominają nukleokapsydowe rdzenie opisane u wirusa zapalenia tętnic koni. Tak więc morfologicznie ATCC-VR2332 najbardziej przypomina grupę wirusów zapalenia tętnic.
Obecność genomu RNA ATCC-VR2332 została potwierdzona przez zdolność wirusa do kontynuowania replikacji w obecności 5-brono-2-dezoksyurydyny i mitomycyny C. które są znane jako inhibitory replikacji DNA i jednej rodziny wirusów RNA (retrowu^Sów - Retroviridae) ale nie innych wirusów RNA. Jednak tymczasem klasyfikacja ATCC-VR2332 jako wirusa RNA jest zgodna z obserwacją, ze wirus ten replikuje się w cytoplazmie komórki, na co wskazuje obecność antygenów wirusa wykrywanych ImF. Również antynomycyna D, która interferuje z tanskrypcją RNA zalezą od DNA, nie wpływa na replikację wirusa ATCC-VR2332. Wyniki badań wskazują, ze wirus ATCC-VR2332 nie wymaga funkcji jadra dla swojej replikacji.
Wirus ATCC-VR2332 jest termolabilny w 37°C i 56°C, ale jest trwały przez długi czas w 4°C i -70°C. Termolabilność w 37°C może sugerować, ze wirus jest stosunkowo nietrwały w ciepłych warunkach otoczenia. Ma to również praktyczne zastosowanie dla namnażania wirusa, sugerując, ze wzrost w temperaturach niższych niż 37°C będzie dawał wyższą wydajność wirusa ATCC-VR2332. Chłodzenie powinno wystarczać dla przechowania próbek diagnostycznych do izolacji wirusa przez krótki czas, w innym przypadku próbkę należy przechowywać w stanie zamrożenia.
Podsumowując, wielkość morfologia, obecność genomu RNA oraz inne cechy biologiczne prowizorycznie lokują wirus ATCC-VR2332 w rodzinie togawirusów (Togaviridae). Jednak ATCC-VR2332 nie może być definitywnie umieszczony w jednym ze znanych rodzajów tej rodziny Aczkolwiek morfologicznie wirus ATCC-VR2332 bardzo przypomina arteriwirusy, nie należy go umieszczać w określonym rodzaju dopóki nie będą dostępne dodatkowe dane co do struktury DNA i białka.
I. Podłoża i płyny:
a. Podłoże minimalne Eagle'a (MEM), JRH Biosciences, 200-2041
b. Płodowa surowica cielęca, FCS JHR Biosciences c Podłoże wzrostowe do hodowli komórek - MEM + 10% płodowa surowica cielęca
d. Podłoże utrzymujące - MEM + 4% płodowa surowica cielęca
e. Trypsyna _ WersaneIX
f. Dwuwęglan sodu 5% lub nasycony
II. Hodowla tkanek:
Zastosowana linia komórkowa: MA-104 (komórki nerki zielonej małpy afiykańskiej, utrzymywana na poziomie 20 pasaży (pasaż komórek 58-78).
III. Wyposażenie:
butelki 75 cm do hodowli tkanek zestaw do inkubacji w 35-3 7°C zestaw do inkubacji w 31°C wirówka
Departament Wydawnictw UP RP Nakład 90 egz Cena 2.00 zł

Claims (6)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób otrzymywania wirusa zespołu niepłodności i oddechowego świń (wirus PRRS), znamienny tym, ze tkankę otrzymaną z zakazonego prosięcia czynnikiem wirusowym PRRS ATCC-VR2332, kontaktuje się z pełną albo częściową warstwą komórek małpiej linii komórkowej MA-104, komórki hoduje się w obecności surowicy w odpowiednim podłożu hodowlanym w temperaturze około 34-37°C aż do wystąpienia cytopatycznego efektu i odzyskuje się wirus.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze stosuje się podłoże hodowlane zawierające około 10% płodowej surowicy cielęcej, a komórki AM-104 inkubuje się przez około 7 dni.
  3. 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, ze otrzymaną tkankę homogenizuje się
  4. 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, ze jako tkankę stosuje się płuca, mózg, śledzionę, wątrobę i nerki.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, ze po odzyskaniu wirusa szczepi się nim nową pełną albo częściową warstwę komórek MA-104, hoduje się aż do wystąpienia cytopatycznego efektu i odzyskuje się powyższy wirus.
  6. 6. Sposób według jednego z zastrz. 1, albo 2, albo 5, znamienny tym, ze hodowlę komórek MA-104 w obecności wirusa powtarza się więcej niż dwukrotnie.
PL92295727A 1991-08-26 1992-08-25 Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin PL PL PL PL PL PL PL PL169952B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US74983991A 1991-08-26 1991-08-26
US84169292A 1992-02-26 1992-02-26
US92189192A 1992-08-05 1992-08-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL295727A1 PL295727A1 (en) 1993-05-17
PL169952B1 true PL169952B1 (pl) 1996-09-30

Family

ID=27419390

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL92295727A PL169952B1 (pl) 1991-08-26 1992-08-25 Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin PL PL PL PL PL PL PL

Country Status (15)

Country Link
US (1) US5476778A (pl)
EP (1) EP0529584B1 (pl)
JP (2) JP2750557B2 (pl)
KR (1) KR0138092B1 (pl)
AT (1) ATE140238T1 (pl)
CA (1) CA2076744C (pl)
DE (1) DE59206730D1 (pl)
DK (1) DK0529584T3 (pl)
ES (1) ES2089316T3 (pl)
GR (1) GR3020603T3 (pl)
HU (1) HU216311B (pl)
MX (1) MX9204885A (pl)
PL (1) PL169952B1 (pl)
SG (1) SG45288A1 (pl)
TW (1) TW289050B (pl)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2103460C (en) * 1991-06-06 2000-09-26 Gert Wensvoort Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits
US6080570A (en) * 1991-08-26 2000-06-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome
US6042830A (en) * 1992-08-05 2000-03-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Viral agent associated with mystery swine disease
US5846805A (en) 1991-08-26 1998-12-08 Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells
US6982160B2 (en) * 1991-08-26 2006-01-03 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions that include SIRS virus
AU2684792A (en) * 1991-10-14 1993-05-21 Akzo Nobel N.V. Porcine reproductive respiratory syndrome vaccine and diagnostic
FR2686097B1 (fr) * 1992-01-14 1994-12-30 Rhone Merieux Preparation d'antigenes et de vaccins de virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie.
US6592873B1 (en) 1992-10-30 2003-07-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids
US6251397B1 (en) 1992-10-30 2001-06-26 Iowa State University Research Foundation, Inc. Proteins encoded by polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus and immunogenic compositions containing the same
US6380376B1 (en) 1992-10-30 2002-04-30 Iowa State University Research Foundation Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
US6773908B1 (en) 1992-10-30 2004-08-10 Iowa State University Research Foundation, Inc. Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
ATE197314T1 (de) * 1993-02-08 2000-11-15 Bayer Ag Verfahren zum vermehren des das reproduktions- und atemwegs-syndrom verursachenden schweinevirus und dessen verwendung als impfstoff.
EP0676467B1 (en) * 1994-04-11 2001-10-04 Akzo Nobel N.V. European vaccine strains of the porcine reproductive respiratory syndrome virus (PRRSV)
GB2289279B (en) * 1994-05-13 1998-09-16 Iberica Cyanamid Diagnostic kits and vaccines containing recombinant PRRSV proteins
ES2102971B1 (es) * 1996-01-25 1998-03-01 Hipra Lab Sa Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.
US5866401A (en) * 1996-03-01 1999-02-02 Schering Corporation Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US5976537A (en) * 1996-07-02 1999-11-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
EP0839912A1 (en) 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
ATE365746T1 (de) 1997-05-06 2007-07-15 Boehringer Ingelheim Vetmed Prrsv-antigene, die auf peptidsequenzen des prrs- virus basieren, für die verwendung als impfstoff und für diagnostische tests
NZ513289A (en) 1998-12-22 2003-04-29 Pfizer Prod Inc Infectious cDNA clone of north american procine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof
CA2366072C (en) 1999-03-08 2007-07-10 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. Prrsv vaccines
ES2348159T3 (es) 1999-04-22 2010-11-30 United States Department Of Agriculture Vacuna contra el sindrome respiratorio y reproductivo porcino basada en el aislado ja-142.
US6841364B2 (en) * 2002-01-22 2005-01-11 Protatek International, Inc. Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof
US7906311B2 (en) * 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
RU2007101725A (ru) 2004-06-18 2008-07-27 Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Миннесота (Us) Идентификация инфицированных вирусом и вакцинированных вирусом организмов
US7632636B2 (en) 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
WO2006053061A2 (en) * 2004-11-10 2006-05-18 Kansas State University Research Foundation Porcine reproductive and respiratory syndrome virus receptor components and uses thereof
UA95602C2 (ru) 2004-12-30 2011-08-25 Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции
CA2894069C (en) 2005-06-24 2019-02-26 Regents Of The University Of Minnesota Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use
EP2275132B1 (en) 2005-12-29 2021-03-03 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Multivalent PCV2 immunogenic compositions and methods of producing them
EP2275130A3 (en) 2005-12-29 2011-03-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 ORF2 immunogenic composition
MX2009006066A (es) 2006-12-15 2009-06-17 Boehringer Ingelheim Vetmed Tratamiento de cerdos con el antigeno pcv.
EP1941903A1 (en) 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
US8202717B2 (en) 2007-01-12 2012-06-19 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Non-simian cells for growth of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus
US8563313B2 (en) * 2007-02-13 2013-10-22 Washington State University Research Foundation Macrophage cell-lines for propagation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
US7666585B2 (en) * 2007-06-15 2010-02-23 Protatek International, Inc. Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations
CA2691755A1 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 South Dakota State University Recombinant north american type 1 porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of use
RU2561595C2 (ru) * 2008-08-25 2015-08-27 Бёрингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Вакцина против высокопатогенного репродуктивно-респираторного синдрома свиней (hp prrs)
JP5306943B2 (ja) * 2009-08-24 2013-10-02 全国農業協同組合連合会 弱毒ウイルスの作出方法
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低pcv-2組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之pcv-2組合物
KR200452417Y1 (ko) * 2011-01-21 2011-02-25 임진재 원통형 쿠션 벨트를 이용한 소파 쿠션장치
SG192821A1 (en) 2011-02-17 2013-09-30 Boehringer Ingelheim Vetmed Commercial scale process for production of prrsv
EA038012B1 (ru) 2011-02-17 2021-06-23 Бёрингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх Композиция на основе нового штамма prrsv или его белков, продукт, их применение, вирус prrsv, выделенная нк и рекомбинантный вектор экспрессии для получения этого вируса
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
EP2737058A1 (en) 2011-07-29 2014-06-04 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH INFECTIOUS cDNA CLONE OF EUROPEAN PRRS VIRUS AND USES THEREOF
JP6386999B2 (ja) * 2012-05-17 2018-09-05 ゾエティス・エルエルシー ブタ生殖および呼吸症候群(prrs)ウイルスに対する離乳前の効果的なワクチン接種
MX366051B (es) 2012-12-07 2019-06-26 Univ Illinois Composiciones del virus del síndrome reproductor y respiratorio de porcino y sus usos.
US9579373B2 (en) 2013-03-15 2017-02-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
AU2014329524B2 (en) 2013-10-02 2019-01-17 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. PCV2 ORF2 protein variant and virus like particles composed thereof
WO2018099889A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 Intervet International B.V. Swine vaccine
CN110072547B (zh) 2016-12-14 2024-04-30 硕腾服务有限责任公司 断奶前对抗欧洲猪繁殖与呼吸综合征(prrs)病毒株的有效疫苗接种

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62198626A (ja) * 1986-02-26 1987-09-02 Biseibutsu Kagaku Kenkyusho:Kk 血球凝集性脳脊髄炎ウイルス感染症予防ワクチン
FR2602791B1 (fr) * 1986-08-18 1988-11-10 Ministere Agri Direction Quali Procede de culture du virus de la rhinotracheite infectieuse de la dinde, et vaccin prepare a partir du virus ainsi obtenu

Also Published As

Publication number Publication date
JPH05276940A (ja) 1993-10-26
US5476778A (en) 1995-12-19
HU216311B (hu) 1999-06-28
HUT62323A (en) 1993-04-28
ATE140238T1 (de) 1996-07-15
EP0529584A3 (en) 1993-04-14
ES2089316T3 (es) 1996-10-01
EP0529584A2 (de) 1993-03-03
TW289050B (pl) 1996-10-21
SG45288A1 (en) 1998-01-16
EP0529584B1 (de) 1996-07-10
GR3020603T3 (en) 1996-10-31
KR0138092B1 (ko) 1998-04-30
CA2076744C (en) 2000-06-27
MX9204885A (es) 1994-05-31
DK0529584T3 (da) 1996-08-12
CA2076744A1 (en) 1993-02-27
DE59206730D1 (de) 1996-08-14
JP2750557B2 (ja) 1998-05-13
KR930004459A (ko) 1993-03-22
PL295727A1 (en) 1993-05-17
JPH08295636A (ja) 1996-11-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL169952B1 (pl) Sposób otrzymywania wirusa zespolu nieplodnosci i oddechowego swin PL PL PL PL PL PL PL
US5840563A (en) Method for growing swine infertility and respiratory syndrome virus
CA2116348C (en) Sirs vaccine and diagnosis method
US7264804B2 (en) Kits for detecting anti-SIRS antibodies
US6080570A (en) Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome
PL184973B1 (pl) Kompozycja szczepionkiĆ sposób uodporniania świńĆ oraz sposób wytwarzania szczepionki PRRS
PL169932B1 (pl) Sposób atenuacji wirusa zespołu niepłodności i oddechowego świń
KR0138068B1 (ko) 미확인(Mystery) 돼지 질병 관련 바이러스제
Christianson Clinical, etiologic, and pathogenic investigation of an emergent porcine reproductive disease
MXPA97007302A (en) New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc
MXPA98007083A (en) Vaccine against the reproductive and respiratory syndrome porc