PL132002B1 - Process for preparing novel analogs of clindamycin - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych analogów klindamycyny o wzorach 2 i 4 oraz ich izomerów. Sposób wytwarzania zwiazku o wzorze 2 polega na katalitycznej redukcji zwiazku o wzorze 3, w którym Ri oznacza rodnik etylowy, a X oznacza 7/S/ lub 7/R/ -chloro-metylo 1-tio-JG-linkozaminid, a sposób wytwarzania zwiazku o wzorze 4 polega na katalitycznej redukcji zwiazku o wzorze 3, w którym Rx oznacza rodnik butylowy, a X ma wyzej podane znaczenie.Synteze nowych analogów o wzorze 8, izomeru zwiazku o wzorze 2, ilustruje schemat 1 na rysunku. Linie faliste oznaczaja izomery D-cis, Lcis, D-trans i L-trans.W pierwszym etapie na schemacie 1 przedstawiono reakcje aminokwasu o wzorze 5 z amina o wzorze 6.Produktem jest zwiazek o wzorze 7, który zgodnie ze sposobem wedlug wynalazku redukuje sie katalitycznie do zwiazku o wzorze 8.W tescie laboratoryjnym na myszach stwierdzono, ze zwiazek o wzorze 9, posiadajacy strukture L-cis, jest 5 do 10-krotnie bardziej aktywny niz klindamycyna, wobec S. aureus i S. hemolyticus.Izomer zwiazku o wzorze 9 mozna wyodrebnic z produktów powyzszej reakcji i zaklada sie, ze jest to izomer D-cis o wzorze 10. Zwiazek o strukturze D-cis nie jest tak silnym srodkiem przeciwbakteryjnym, jak zwiazek L-cis.W procesie prowadzonym sposobem wedlug wynalazku zwiazek wyjsciowy redukuje sie uzyskujac mieszani¬ ne odpowiednich zwiazków nasyconych, z których jeden jest izomerem L-cis. Moga byc obecne inne zwiazki, takie jak izomery L-trans, D-cis i D-trans. Zazwyczaj, w przypadku kazdego zwiazku tu opisanego, zwiazek nasycony jest aktywniejszy wobec bakterii niz jego nienasycony prekursor, a izomer L-cis jest aktywniejszy wobec bakterii od pozostalych izomerów.Sposób wytwarzania nowych zwiazków wyjsciowych jest dobrze znany i polega na sprzezeniu odpowiednie¬ go kwasu z odpowiednia pochodna aminowa cukru („Mixed Carboxylio Acid Anhydride Procedure/, Chemistry2 132002 ot the Amino Acids, t.2, str. 970, John Wiley and Sons, Inc., 1961). ptrzymany nienasycony analog redukuje sie katalitycznie zgodnie ze sposobem wedlug wynalazku w standardoWch -warunkach w celu uzyskania wytwarza¬ nego analogu nasyconego. Redukcje mozna przeprowadzic, na przyklad, w nastepujacych warunkach: H2 pod cisnieniem 35-350 kfti, katalizator - tlenek platyny (Pt02), rozpuszczalnik- H20 lub H20 + CH3OH lub H20 ¦+ (^ H5 OH, HC1 - nadmiar 10%, czas - 24-48 godzin.Jak to opisano dokladniej ponizej zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku mozna fosforylowac uzyskujac 2-fosforany i acylowac uzyskujac 2-palmityniany, które to estry sa aktywne wobec bakterii in vivo.Jako zródla wiadomosci o aminokwasach stosowanych tu jako substraty mozna przykladowo wymienic. 1. Heterocyclic, tom 1, John Wiley and Sons, Inc., 1950. W zródle tym opisano sposób wytwarzania aminokwa¬ sów podstawionych chlorowcem i rodnikiem alkilowym. 2. Chem Abstracts, gdzie opisano wiele aminokwasów i zwiazków wyjsciowych uzywanych do wytwarzania aminokwasów. 3. Jour. Chem Soc, 1969, 2134, gdzie opisano rózne pirydyny podstawione rodnikiem alkilowym (R we wzo¬ rach) otrzymane zgodnie ze sposobem ilustrowanym na schemacie 2 na rysunku. 4. Jour. Chem Soc, 1969, 954. Schemat 3 na rysunku przedstawia sposób wytwarzania wyjsciowych pochod¬ nych uzytecznych w sposobie wedlug wynalazku.Poniewaz zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku sa aktywne wobec róznych mikrobów Gram dodatnich i Gram ujemnych mozna je uzywac w róznych srodowiskach do zahamowania wzrostu tych mikrobów.Na przyklad, moga byc stosowane jako srodki dezynfekujace w celu zahamowania wzrostu S. aureus na umytych i przechowywanych naczyniach spozywczych zanieczyszczonych ta bakteria. Mozna je równiez stosowac jako srodki dezynfekujace do róznych narzedzi dentystycznych i lekarskich zanieczyszczonych S. aureus. Ponadto, zwiazki wytworzone sposobem wedlug wynalazku mozna uzyc jako bakteriostatyczne kapiele pluczace do pranej odziezy, impregnowanych papierów i tkanin, oraz moga byc uzyteczne jako srodki zmniejszajace wzrost wrazliwych organizmów w próbkach na plytkach i innych pozywkach mikrobiologicznych. Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalazku istnieja w postaci protonowanej lub nieprotonowanej, zaleznie od pH srodowiska.Jezeli ma byc forma protonowana, zwiazki istnieja w postaci dopuszczalnych w lecznictwie soli addycyjnych z kwasami, natomiast jezeli ma byc forma nieprotonowana, zwiazki istnieja jako wolna zasada. Wolne zasady mozna przeprowadzic w trwale sole addycyjne z kwasami w drodze zobojetniania wolnej zasady odpowiednim kwasem do wartosci pH okolo 7, korzystnie do wartosci pH od okolo 2 do 6. Odpowiednim kwasem do tego cehi jest kwas chlorowodorowy, siarkowy, fosforowy, tiocyjanowy, szesciofluorokrzemowy, szesciofluoroarseno- wy, szesciofluorofosforowy, octowy, bursztynowy, cytrynowy, mlekowy, maleinowy, fumarowy, 4,4'-metyleno- dwu/3-hydroksy/- naftalenokarboksylowy-2, cholowy, palmitynowy, sluzowy, kamforowy, glutarowy, glikolowy, ftalowy, winowy, laurynowy, stearynowy, salicylowy, 3-fenylosalicylowy, 5-fenylosalicylowy, 3-metyloglutaro- wy, o-sulfobenzoesowy, cykloheksanoamidosulfonowy, cyklopentanppropionowy, cykloheksanodwukarboksylo- wy-1,2, cykloheksanokarboksylowy, oktadecenylobursztynowy, oktenylobursztynowy, metanosulfonowy, hel- iantynowy, kwas Reinecke'a, dwumetylodwutiokarbaminowy, heksadekanoamidosulfonowy, oktadekanoamido- sulfonowy, sorbowy, monochlorooctowy, undecylenowy, 4'-hydroksyazobenzosulfonowy-4, oktadecylosiarko- wy, pikrynowy, benzoesowy, cynamonowy itp.Sole addycyjne z kwasami mozna stosowac do tych samych celów, jak wolne zasady lub tez sole moga byc stosowane do poprawienia jakosci tych zasad. Na przyklad, wolna zasade mozna przeprowadzic w sól nierozpusz¬ czalna w wodzie, taka jak pikrynian, która to sól mozna poddac oczyszczaniu, na przyklad, ekstrakcji rozpusz¬ czalnikami i myciu, chromatografii, ekstrakcji frakcyjnej ciecz-ciecz i krystalizacji, a nastepnie zregenerowac wolna zasada w wyniku reakcji z alkoholami badz tez wytworzyc inna sól droga reakcji podwójnej wymiany.Mozna tez wolna zasade przeprowadzic w sól rozpuszczalna w wodzie, taka jak chlorowodorek lub siarczan i wodny roztwór soli ekstrahowac róznymi nie mieszajacymi sie z woda rozpuszczalnikami przed zregenerowa¬ niem wolnej zasady droga obróbki tak wyekstrahowanego roztworu kwasnego lub tez przeprowadzic w inna sól droga reakcji podwójnej wymiany.Poza zastosowaniem przeciwbakteryjnym, opisanym powyzej, wolne zasady mozna uzyc jako bufory lub srodki zobojetniajace kwasy. Sól addycyjna z kwasem tiocyjanowym skondensowana z materialami zywicznymi formaldehydowymi jest uzyteczna jako inhibitor trawienia, zgodnie z opisami patentowymi Stanów Zjednoczo¬ nych Ameryki nr nr 2 425 320 i 2 606 155.Wolne zasady sa równiez dobrymi nosnikami toksycznych kwasów. Na przyklad, sole addycyjne z kwasem /szescio/fluorokrzemowym sa uzyteczne jako srodki przeciwmolowe, zgodnie z opisami patentowymi Stanów Zjednoczonych Ameryki nr nr 1915 334 i 2 075 359, a sole addycyjne z kwasem /szescio/fluoroarsenowym i /szescio/fluorofosforowym sa uzyteczne jako srodki pasozytobójcze, zgodnie z opisami patentowymi Stanów Zjednoczonych Ameryki nr nr 3 122 536 i 3 122 552.Zwiazki otrzymane sposobem wedlug wynalazku sa uzyteczne jako srodki przeciwbakteryjne w odpowied¬ nich kompozycjach. Kompozycje te korzystnie jest formowac w postac jednostkowych dawek do podawania132002 3 ludziom i zwierzetom, takich jak tabletki, kapsulki, pigulki, proszki, granulki, sterylne zawiesiny lub roztwory do podawania pozajelitowego, zawiesiny lub roztwory do podawania doustnego, oraz emulsje olej-woda zawiera¬ jace odpowiednia ilosc skladnika aktywnego w postaci wolnej zasady badz tez jej dopuszczalnej w lecznictwie soli.Do podawania doustnego mozna przygotowac dawki jednostkowe w postaci stalej lub cieklej, w celu przygo¬ towania kompozycji w postaci stalej takiej, jak tabletki, podstawowy skladnik aktywny miesza sie z konwencjo¬ nalnymi skladnikami takimi jak talk, stearynian magnezowy, fosforan dwuwapniowy, glinokrzemian magnezowy, siarczan wapniowy, skrobia, laktoza, guma arabska, metyloceluloza i funkcjonalnie podobnymi materialami jako farmaceutycznymi rozcienczalnikami lub nosnikami. Tabletkimoga byc laminowane lub inaczej przygotowywane w celu nadania formie dawki jednostkowej korzysci z przedluzonego lub opóznionego dzialania lub okreslonego wczesniej, sukcesywnego dzialania otoczkowego lekarstwa. Na przyklad, tabletka moze sie sklada- z wewnetrz¬ nego i zewnetrznego skladnika dawki, przy czym ten ostatni sluzy jako koperta dla tego pierwszego. Dwa skladniki mozna rozdzielic warstwa posrednia, która sluzy do zapobiezenia rozkladowi w zoladku i pozwala na przejscie skladnika wewnetrznego w stanie nienaruszonym do dwunastnicy lub tez na opóznienie w uwalnianiu sie skladnika. Do takich warstw posrednich lub powlok mozna uzyc rozmaite materialy, takie jak liczne kwasy polimeryczne lub mieszanine tych kwasów z takimi materialami jak szelak, alkohol etylowy, ftalan octanu celulozy, kopolimer styrenu i kwasu maleinowego itp. Alternatywnie, mozna zastosowac uklad dwóch skladni¬ ków do otrzymywania tabletek zawierajacych dwa lub wiecej aktywnych skladników niezgodnych ze soba.Oplatki przygotowuje sie w ten sam sposób co tabletki, a róznica Wystepuje jedynie w ksztalcie i w dodaniu cukru trzcinowego lub innego srodka slodzacego oraz srodka zapachowego. W najprostszej odmianie kapsulki takiej jak tabletki, przygotowuje sie je przez zmieszanie skladnika kompozycji z obojetnym rozcienczalnikiem farmaceutycznym i napelnienie mieszanina twardych kapsulek zelatynowych o odpowiednim rozmiarze. W innej wersji kapsulki przygotowuje sie przez napelnianie twardych kapsulek zelatynowych ziarnkami pokrytymi kwasem polimerycznym zawierajacymi zwiazek aktywny. Miekkie kapsulki zelatynowe przygotowuje sie droga mechanicznego kapsulkowania zawiesiny skladnika aktywnego w odpowiednim oleju roslinnym, lekkiej, cieklej wazelinie lub innym oleju obojetnym Mozna tez otrzymac jednostkowe dawki w postaci cieklej do podawania doustnego, takiej jak syropy, eliksiry i zawiesiny. Rozpuszczalna w wodzie forme skladnika aktywnego mozna rozpuscic w wodnej zaróbce razem z cukrem, srodkami aromatycznymi i konserwujacymi w celu otrzymania syropu. Eliksir otrzymuje sie stosujac nosnik wodno-alkoholowy z odpowiednimi srodkami slodzacymi, takimi jak cukier trzcinowy oraz ze srodkiem aromatycznym Zawiesiny mozna otrzymac z form nierozpuszczalnych i nosnika syropowego z dodat¬ kiem srodka dyspergujacego takiego jak guma arabska, tragakant, metyloceluloza, itp.Mascie do stosowania miejscowego mozna otrzymac przez zdyspergowanie zwiazku aktywnego w odpowied¬ niej bazie takiej jak wazelina, lanolina, glikole poli/oksyetylenowe/, ich mieszaniny, itp. Korzystnie jest zwiazek rozdrobnic w mlynku koloidalnym stosujac lekka, ciekla wazeline jako srodek do ucierania, a nastepnie zdysper- gowac w bazie. Kremy do miejscowego stosowania i plyny otrzymuje sie przez zdyspergowanie zwiazku w fazie olejowej, a nastepnie zemilgowanie fazy olejowej w wodzie.Plynne formy dawek jednostkowych do stosowania pozajelitowego otrzymuje sie stosujac zwiazek aktywny i sterylna zaróbke, korzystnie wode. Zwiazek aktywny, w zaleznosci od stosowanej postaci i stezenia moze byc albo zawieszony albo rozpuszczony w zaróbce. Przygotowujac roztwory, rozpusczalna w wodzie postac zwiazku aktywnego mozna rozpuscic w wodzie do iniekcji i sterylizowac przez filtracje, przed napelnieniem odpowied¬ niej fiolki lub ampulki i szczelnym zamknieciem. Korzystnie mozna rozpuscic w zaróbce srodki pomocnicze takie, jak srodki lokalnie znieczulajace, konserwujace i buforujace. W celu zwiekszenia trwalosci kompozycji mozna ja zamrozic po napelnieniu fiolki i usunac wode pod zmniejszonym cisnieniem. Suchy zliofilizowany proszek zamyka sie nastepnie szczelnie w fiolce i dolacza do niej fiolke z woda do iniekcji potrzebna do rozpro¬ wadzenia proszku przed uzyciem. Zawiesiny do stosowania pozajelitowego przygotowuje sie zasadniczo tak samo, z ta róznica, ze zwiazek aktywny zawiesza sie w zaróbce zamiast go rozpuscic i nie mozna przeprowadzic sterylizacji przez filtracje. Zwiazek aktywny mozna wysterylizowac przez poddanie dzialaniu tlenku etylenu przed zawieszeniem go w sterylnej zaróbce. Korzystnie jest wprowadzic do kompozycji srodek powierzchniowo- czynny lub zwilzajacy w celu ulatwienia równomiernego rozprowadzania aktywnego zwiazku.Okreslenie postaci dawki jednostkowej, stosowane w opisie odpowiada fizycznie odrebnym jednostkom od¬ powiednim jako dawki jednostkowe dla ludzi i zwierzat, przy czym kazdajednostka zawiera z góry przewidziana ilosc aktywnego materialu obliczonego tak, by zapewnic pozadany skutek leczniczy oraz wymagany farmaceuty¬ czny nosnik lub zaróbke. Opis szczególowy form nowych dawek jednostkowych zwiazków wytworzonych sposobem wedlug wynalazku jest podyktowany i bezposrednio zalezy od unikalnej charakterystyki materialu aktywnego i szczególowego efektu leczniczego do osiagniecia oraz od ograniczen nierozerwalnie zwiazanych ze sztuka przystosowywania takiego materialu aktywnego do uzycia leczniczego dla ludzi i zwierzat, co zostalo szczególowo omówione w tym opisie. Przykladami odpowiednich form dawek jednostkowych sa tabletki, pigul-4 132002 ki, kolaczyki, czopki, pakiety proszkowe, granulki, oplatki, kapsulki, lyzeczki do herbaty, lyzki, kroplomierze, anculki fiolki.Poza podawaniem zwiazku aktywnego jako podstawowego skladnika aktywnego kompozycji dla leczenia stanów tu opisanych, zwiazki te mozna laczyc z innymi rodzajami zwiazków w celu uzyskania korzystnej kombi¬ nacji wlasciwosci. Kombinacje takie obejmuja zwiazek aktywny i antybiotyki takie jak spektynomycyna, chloro- mycetyna, nowobiocyna, dihydronowobiocyna, tetracykliny (na przyklad tetracyklina, oksytetracyklina i chlo- rotetracyklina), penicyliny, erytromycyna, kanamycyna, streptomycyna, neomycyna, polimyksyna, bacytracyna, nystatyna, filipina, fumagilina ienodmycyna w celu rozszerzenia zakresu dzialania kompozycji w celu spowodo¬ wania dzialania synergicznego przeciwko poszczególnym bakteriom. Obejmuja tez zwiazek aktywny i sterydy 0 dzialaniu przeciwzapalnym takie jak hydrokortizon, prednisolon, 6C-metyloprednisolon, 6£-fluoroprednisolon itp., srodki przeciwgoraczkowe, takie jak aspiryna, salicylan sodowy (kwas acetylosalicylowy) - bezwodnik, N^acetylo- p-aminofenylo i salicylamid, antyhistaminy takie, jak maleinian chlorfeniraminy, difenylohydramina, prometazyna, pyratiazyna, itp., pochodne siarkowe takie, jak sulfadiazyna, sulfametazyna, sulfacetamid, sulfadi- metyloksazol, sulfametizol itp., srodki przeciwgrzybiezne, takie jak kwas undecylenowy, propionian sodowy, salicylanilid, kaprylan sodowy i heksetydyna i witaminy.Dawka zwiazku aktywnego zalezy od sposobu podawania, wieku, wagi i stanu pacjenta oraz choroby, która ma byc leczona. Dawki mieszcza sie w granicach od okolo 15 do 500 mg, 1 do 4 razy dziennie (co szesc godzin), obejmujacych zakres skutecznego leczenia wiekszosci stanów, w których kompozycje dzialaja efektywnie. Dla dzieci dawke oblicza sie na podstawie 15 do 30 mg/kg/dzien, do podawania co 6 godzin.Dla wygodnego i skutecznego podawania leku zwiazek aktywny miesza sie z odpowiednim nosnikiem farma¬ ceutycznym w postac dawki jednostkowej. Dawki jednostkowe korzystnie zawieraja zwiazek w ilosci 15,30, 50, 125, 250 i 500 mig do leczenia systemicznego, 0,25, 0,5, 1, 2 i 5% do leczenia zewnetrznego i 5 io 65% wago¬ wo/objetosciowych do leczenia pozajelitowego. Dawke kompozycji zawierajacej zwiazek aktywny i jeden lub wiecej innych skladników aktywnych powinno sie obliczac w odniesieniu do zwykle stosowanych dawek kazde¬ go skladnika tej kompozycji.Ponizej podano przyklady ilustrujace najlepszy sposób przygotowania kompozycji zawierajacej zwiazek wytwarzany sposobem wedlug wynalazku.W przykladach stosowano jako skladnik aktywny amid kwasu 4-cis-etylo-L- pipekolowego i 7/S/-deoksy- -7-chloro-metylo-l-tio- 'jpinkozaminid (U-57950 E)lub amid kwasu 4-cis-n-butylo-L-pipekolowego i 7/S/-deoksy- -7-chloro- metyle 1-tio-jflinkozaminid (U-60970 E). W dalszej czesci zamiast pelnych nazw tych zwiazków beda stosowane ich symbole w nawiasach.Tysiac dwuczlonowych kapsulek z twardej zelatyny do podawania doustnego, kazda zawierajaca 250 mg U-57950 E lub U-60970 E, otrzymuje sie z 250 g U-57950 E lub U-60970 E, 100 g skrobi kukurydzianej, 75 g talku i 25 g stearynianu magnezowego.Skladniki miesza sie dokladnie i kapsulkuje w zwykly sposób.Kapsulki takie sa uzyteczne dla leczenia systemicznego infekcji u doroslych ludzi, droga podawania doustne¬ go 1 kapsulki co 4 godziny.Stosujac powyzszy sposóo otrzymuje sie kapsulki zawierajace U-57950 E lub U-60970 w ilosci 15,30, 50, 125 i 500 g, stosujac zamiast 250 g U-57950 Elub U-60970 E, odpowiednio 15, 30, 50,125 i 500 mg.Kapsulki Tysiac dwuczlonowych kapsulek z twardej zelatyny do stosowania doustnego, kazda zawierajaca 200 mg U-57930 E lub U-60970 E i 250 mg chlorowodorku tetracykliny, otrzymuje sie dokladnie mieszajac i kapsul- kujac w zwykly sposób 200 g U-57 930 E lub U-60970 E, 250 g chlorowodorku tetracykliny, 73 g talku i 25 g stearynianu magnezowego.Kapsulki takie sa uzyteczne w leczeniu systemicznym infekcji u doroslych ludzi droga podawania doustnego 1 kapsulki co 6 godzin Stosujac powyzszy sposób otrzymuje sie kapsulki zawierajace U-57930 E lub U-60970 E i nastepujace antybiotyki w ilosci 250 g w miejsce tetracykliny: chloromycetyne, ok$ytetracykline, chlorotetracykline, fumagi- line, erytromycyne, streptomycyne, dihydronowobiocyne inowobiocyne. Jezeli zamiast tetracykliny stosuje sie penicyline, taka jak sól potasowa penicyliny C, uzywa sie ja w ilosci 250 000 jednostek na 1 kapsulke.Takakombinacja produktów jest uzyteczna w leczeniu systemicznym mieszanych infekcji u ludzi doroslych, droga podawania doustnego 1 kapsulki co 6 godzin.Tabletki Tysiac tabletek do stosowania doustnego, kazda zawierajaca 500 mg U-57930 E lub U-60970 E, otrzymuje sie z 500 g U-57930 E lub U-60970 E, 125 g laktozy, 65 g skrobi kukurydzianej, 25 g stearynianu m^nezpwe- go i 3 g lekkiej cieklej wazeliny.Skladniki miesza sie dokladnie i formuje paleczki. Paleczki lamie sie przeciskajac je przez sito numer szesnascie. Otrzymane granulki prasuje sie w tabletki zawierajace po 250 g U-57930 E lub U-60970 E oraz po 250 mg (po 83,3 mg) sulfadiazyny, sulfamerazyny i sulfametazyny.132002 5 Tabletki takie sa uzyteczne w systemicznym leczeniu infekcji droga podawania doustnego 4 tabletek za pierwszym razym, a nastepnie po 1 tabletce co 6 godzin.Przy leczeniu infekcji moczowych, korzystniejest zastapic trzy pochodne siarkowe w powyzszej kompozycji 250 g sulfametylotiadiazolu lub 250 g sulfacetamidu.Syrop do podawania doustnego Tysiac cm3 wodnej zawiesiny do stosowania doustnego, zawierajacej w kazdych 5 cm3 0,5 grama pochod¬ nych siarkewych otrzymuje sie z 50 g U-57930 E lub U-60970 E, 33,3 g sulfadiazyny, 33,3 g culfamerazyny, 33,3 g sulfametazyny, 2 g kwasu cytrynowego, 1 g kwasu benzoesowego, 700 g cukru trzcinowego, 5 g tragakan- tu, 2 cm3 olejku cytrynowego i zdemineralizowanej wody do 1000 cm3.Kwas cytrynowy, kwas benzoesowy, cukier, tragakant i olejek cytrynowy, dysperguje sie w wystarczajacej ilosci wody do uzyskania 850 cm3 roztworu. Nastepnie dodaje sie U-57930 E lub U-60970 oraz rozdrobnione pochodne siarkowe i miesza z syropem do momentu uzyskania jednorodnej mieszaniny. Na koncu uzupelnia sie calosc woda do 1000 cm3.Tak otrzymana kompozycja jest uzyteczna w systemicznym leczeniu zapalenia pluc u doroslych ludzi w dawce 1 pelna lyzeczka od herb a ty 4 razy dziennie.Roztwór do podawania pozajelitowego Sterylny wodny roztwór do iniekcji domiesniowych, zawierajacy wiem3 200 mg U-57930 E lub U-60970 E otrzymuje sie z 200 g U-57930 E lub U-60970 E, 4 g chlorowodorku lidokainy, 2,5 g metylopara- benu i wody do iniekcji do 1000 cm3.Skladniki rozpuszcza sie w wodzie i roztwór sterylizuje przez filtracje. Sterylnym roztworem napelnia sie fiolki i szczelnie zamyka.Preparat do stosowania pozajelitowego Sterylny roztwór wodny do iniekcji domiesniowej zawierajacy w 1 cm3 200 mg U-57930 E lub U-60970 E i 400 wg siarczanu spektynomycyny otrzymuje sie z 200 g U-57930 E lub U-60970 E, 400 g siarczanu spekty- nomycyny, 50 g laktozy i wody do iniekcji do 1000 cm3.U-57930 E lub U-60970 E, siarczan spektynomycyny i laktoze rozpuszcza sie w wodzie i roztwór steryli¬ zuje pizez saczenie. Sterylnym roztworem, w ilosci po 2 cm3, napelnia sie aseptycznie wysterylizowane fiolki i zamraza. Wode usuwa sie pod zmniejszonym cisnieniem i szczelnie zamyka fiolki zawierajace liofilizowany proszek. Tuz przed uzyciem do fiolki dodaje sie sterylna wode do iniekcji w ilosci wystarczajacej do uzyskania 2 cm3 roztworu.Masc do miejscowego stosowania Tysiac g 0,25% masci otrzymuje sie z 2,5 g U-57930 E lub U-60970 E, 50 g tlenku cynku, 50 g galmenu, 250 g cieklej wazeliny (ciezkiej), 200 g tluszczu z welny i bialej wazeliny do 1000 g.Biala wazeline i tluszcz z welny topi sie i dodaje do tego 100 g wazeliny cieklej. Do pozostalej ilosci cieklej wazeliny dodaje sie U-57930 E lub U-60970 E, tlenek cynku i galman i calosc miele sie, az proszki sie rozdrob* nia i równomiernie zdysperguja. Nastepnie proszki te dodaje sie do mieszaniny bialej wazeliny i calosc miesza sie do momentu, gdy masc stezeje.Masc taka mozna z pozytkiem stosowac miejscowo na skóre ssaków w leczeniu infekcji.Masc taka mozna przygotowac bez tlenku cynku i galmanu.Postepujac powyzszym sposobem mozna otrzymac masci zawierajace U—57930 E lub U-60970 E w ilosci 0,5,1, 2 i 5%, o ile zamiast 2,5 g U-57930 E lub U-60970 E zastosuje sie, odpowiednio, 5,10, 20 i 50 g.Krem Tysiac gramów dopochwowego kremu otrzymuje sie z 50 g U-57930 E lub U-60970 E, 150 g Tegacid Regular (samoregulujacy sie monostearynian gliceryny firmy Goldschmidt Chemical Corporation, Nowy Jork, N.Y.), 100 g spermaceti, 50 g glikolu propylenowego, 5 g Polysorbatu 80,1 g metyloparabenu i wody zdeminera¬ lizowanej do 1000 g.Tegacid i spermaceti topi sie razem w temperaturze 70-80°C. Metyloparaben rozpuszcza sie w okolo 500 g wody i dodaje kolejno glikol propylenowy. Polysorbate 80 i U-57930 E lub U-60970 E utrzymujac temperatu¬ re 75-80°C. Calosc dodaje sie powoli mieszajac, do stopu Tegacidu i spermaceti. Dodawanie kontynuuje sie mieszajac, az temperatura opadnie do 40—45°C. Wartosc pH koncowego kremu ustala sie na 3,5 przez dodanie 2,5g kwasu cytrynowego i0,2g dwuzasadowego fosforanu sodowego rozpuszczonych wokolo 50g wody.W koncu dodaje sie wode do 1000 g i calosc miesza dla utrzymaniajednorodnosci az do momentu oziebienia sie iskrzepniecia. , Kompozycja takajest uzyteczna w leczeniu infekcji pochwowych u ludzi.Masc do oczu Tysiac gramów masci do oczu zawierajacej 0,5% U-57930 E lub U-60970 E otrzymuje sie z 5 g U-57930 E lub U-60970 E, 12,2g bacitracyny il£ siarczanu Polimyksyny B (1000jednostek/mg), 250g lekkiej cieklej wazeliny, 200 g tluszczu z welny i bialej wazeliny do 1000 g.6 132002 Skladniki stale rozdrabnia sie przy uzyciu mikroczasteczkowego rozdrabniacza powietrznego i dodaje do cieklej bialej wazeliny. Mieszanine rozpuszcza sie przez mlynek koloidalny w celu równomiernego rozprowadze¬ nia mikroczasteczek. Tluszcz z welny i biala wazeline topi sie razem, cedzi i doprowadza temperature do 45-50°C. Do mieszaniny dodaje sie zawiesine w cieklej wazelinie i calosc miesza, az do stezenia. Dobrze jest zapakowac masc w tubki jednogramowe (3,888 g).Masc jest uzyteczna w leczeniu lokalnych infekcji ocznych u ludzi i innych zwierzat.Przy leczeniu stanów zapalnych korzystnie jest, gdy masc ta zawiera 5 g (0,5%) metyloprednisolonu i wtedy mozna, alternatywnie, nie stosowac bacintracyny i siarczanu polimyksyny B.Krople do oczu i uszu Tysiac cm3 sterylnego, wodnego roztworu do oczu lub uszu zawierajacego w kazdym cm3 10 mg U-57930 E lub U-60970 E i 5 mg metyloprednisolonu otrzymuje sie z 10 mg U-57930 E lub U-60970E soli sodowej fosforanu metyloprednisolonu, 4,5 g cytrynianu sodowego, 1 g kwasnego siarczynu sodowego, 120 g glikoli poli- /oksyetylenowego/ 4000, 0,2g chlorku mirystylo- 7-pikoliniowegó, 1 g poliwinylopirolidonu i zdemineralizowa- nej wody do lOOOg.Skladniki rozpuszcza sie w wodzie i roztwór sterylizuje sie przez saczenie. Roztworem napelnia sie aseptycz- nie sterylny pojemnik z kroplomierzem.Tak otrzymana kompozycja jest uzyteczna do miejscowego leczenia stanu zapalenia i infekcji oczu i uszu oraz innych wrazliwych tkanek ciala zwierzecego.Kolaczyki Dziesiec tysiecy kolaczyków otrzymuje sie ze 100 g U-57930 E lub U-60970 E, 50 g siarczanu neomycy¬ ny, 1 g siarczanu polimyksyny B (10000 jednostek/mg), 50 g aminobenzoesanu etylu, 150 g stearynianu wapnio¬ wego i sproszkowanego cukru trzcinowego do 5000 g.Sproszkowane skladniki miesza sie dokladnie i prasuje w 0,5 g kolaczyki zwykla technika do przygotowania prasowanych tabletek.Kolaczyki trzyma sie w jamie ustnej pozwalajac, zeby sie powoli rozpuszczaly w celu leczenia jamy ustnej i gardla u ludzi.Czopki doodbytnicze Tysiac czopków, kazdy wazacy 2,5 g i zawierajacy 100 g U-57930 E lub U-60970 E otrzymuje sie ze 100 g U-57930 E lub U-60970 E, 1,25 siarczanu polimyksyny B (10000 jednostek/mg), 1 g metyloprednisolonu, 75 g aminobenzoesanu etylu, 62,5 g tlenku cynku, 162,5 g glikolu propylenowego i glikolu poli/oksyetylenowego/ 4000 do 2500 g.U-57930 E lub U-60970 E, siarczan polimyksyny B, metyloprednisolon, aminobenzoesan etylu i tlenek cynku dodaje sie do glikolu propylenowego i calosc miele do momentu rozdrobnienia sie proszków i równomier¬ nego ich zdyspergowania. Glikol poli/oksyetylenowy/4000 topi sie i dodaje do niego powoli, mieszajac dyspersje w glikolu propylenowym. Zawiesine wlewa sie do nieziebionej matrycy w temperatuize 40°C.Kompozycje pozostawia sie do oziebienia i zestalenia, wyjmuje sie z matrycy i kazdy czopek owija w folie.Takie czopki wprowadza sie doodbytniczo w celu miejscowego leczenia stanu zapalnego i infekcji.Alternatywnie, czopki mozna przygotowac bez sterydów.Masc na zapalenie gruczolu sutkowego Tysiac gramów masci leczacej zapalenie gruczolu sutkowego u bydla mlecznego otrzymuje sie z 25 g U-57930 E lub U-60970 E, 0,5 g octanu metyloprednisolonu, 300 g lekkiej cieklej wazeliny, 5 g bezwodnego chlorobutanolu, 5 g Polysrobatu 80, 400 g 2% zelu monostearynianu glinowego w oleju arachidowym i bialej wazeliny do 1000 g.U-57930 E lub U—60970 E i octan metyloprednisolonu miele sie z lekka ciekla wazelina az beda rozdrob¬ nione i równomiernie zdyspergowane. Chlorobutanol, polisorbat 80, zel oleju arachidowego i bialej wazeliny ogrzewa sie do temperatury okolo 49° C wcelu utworzenia stopu i dodaje sie do niego zawiesine w cieklej wazelinie. Caly czas mieszajac dyspersje pozostawia sie do schlodzenia (i stezenia) do temperatury pokojowej i napelnia tym strzykawki nadajace sie do leczenia mastitis, a zawierajace dawki 10 g.Tysiac gramów mieszanki paszowej otrzymuje sie z 10 g U-57930 E lub U-60970 E, 400 g maczki sojowej, 400 g maczki rybnej, 50lg oleju z kielkówpszenicy i 140 g melasy z sorga.Skladniki miesza sie razem i prasuje w peletki. Kompozycja mozna karmic zwierzeta laboratoryjne takie, jak szczury, myszy, swinki morskie i chomiki w celach profilaktycznych podczas przewozu.Innym zwierzetom, takim jak drób, na przyklad kurczeta, kaczki, indyki i gesi mozna podawac kompozycje w regularnej karmie w ilosciach obliczonych tak, by byla odpowiednia dawka U-57930 E lub U-60970 E.Podobnie, k£zdy z powyzszych zwiazków w postaci wolnej zasady moze byc uzyty w postaci dopuszczalnej w lecznictwie soli addycyjnej z kwasami, na przyklad w postaci chlorowodorku, siarczanu, azotanu, fosforanu, cytrynianu, mleczanu, octanu, winianu i bursztynianu.Ponadto, do uzyskania kompozycji o wlasciwosciach leczniczych jako skladnik aktywny mozna uzyc 2-fos- forany i/lub 2-palmityniany kazdego z powyzszych zwiazków o dzialaniu przeciwbakteryjnym.132002 7 Ponizej podane przyklady ilustruja sposób wedlug wynalazku. Wszystkie procenty sa procentami wagowymi i wszystkie proporcje mieszanin rozpuszczalników sa proporcjami objetosciowymi, o ile nie zaznaczono tego inaczej.Przyklad 1. Amid otrzymany z kwasu 4-cis-etylo-L-pipekolowego i 7/S/-7-deoksy-7-chloro- metylo- -1-tio-JC-linkozaminidu (7-C1-MTL.HC1) (U-57930 E - zwiazek o wzorze 9).Czesc 1. Reakcja przebiega zgodnie ze schematem 4. Roztwór 67 g (0,357 mola) chlorowodorku aminokwasu (C.A.51. lo43a, 1957) (wzór 5) i 71,5 g (0.714 mola) trójetyloaminy rozpuszczonych w 2,5 litra acetonitrylu oziebia sie do temperatury 10°C i dodaje jednorazowo 47,6 g (0,354 mola) chloromrówczanu izobutylu. Calosc (roztwór A) miesza sie w temperaturze 10°C w ciagu 1 godziny. Roztwór B przygotowuje sie przez rozpuszczenie 97,7 g (0.357 mola) 7-C1-MTL (J.Med.Chem., 12 - 780, 1969, B.J.Magerlein i F.Kagan)w cieplej mieszaninie 1500 ml acetonu i 1500 ml H20. Roztwór B oziebia sie do temperatury 30°C i dodaje jednorazowo do roztworu A. Calosc miesza sie w temperaturze 25° C wciagu 18 godzin i usuwa aceton iacetonitryl pod zmniejszonym cisnieniem Nastepnie biala papkowata pozostalosc odsacza sie, a krystaliczny material zbiera i suszy uzyskujac 95 g czystego produktu (wzór 7). Obróbka przesaczu (chromatograficzna) daje dodatkowo 10 g produktu. Suma¬ ryczna wydajnosc reakcji wynosi 73%.Dla wzoru Cj 7 H2 5 C1N2 O5 S obliczono: C-^042, H-6,22, N^6,92, S-7,92, Cl-8,76, a znaleziono: C-60,67, H-6,40, N-6,64, S-7,90, Cl-8,70 t% 3 (C, 1,0) + 293°.Czesc II. Reakcja przebiega zgodnie ze schematem 5. Mieszanine 4,05 g (0,01 mola) materialu wyjsciowego (wzór 7) 40 ml wody, 60 ml metanolu, 1,0 ml 37% HC1 i 8,0 g katalizatora Pt02 redukowano w aparacie Parra v pod cisnieniem 350 kPa w ciagu 3 godzin. Na podstawie analizy mieszaniny reakcyjnej przy uzyciu chromatogra¬ fii cienkowarstwowej na plytkach pokrytych zelem krzemionkowym a rozwijanych mieszanina CHC13 i metanolu w stosunku 6:1 mozna bylo stwierdzic, ze caly material wyjsciowy zostal zuzyty, i ze sa obecnie dwa bardziej polarne produkty w stosunku okolo 1:1.. Mieszanine reakcyjna saczono w celu usuniecia katalizatora, a przesacz zatezono pod zmniejszonym cisnieniem otrzymujac biala krystaliczna papke. Papke te saczono i przesacz zacho¬ wano. Biale cialo stale bardziej polarne z dwóch produktów obserwowanych w analizie chromatograficznej zredukowanej mieszaniny, krystalizowano z wody otrzymujac pozadany produkt (wzór 9), U- 57930E, o tempe¬ raturze topnienia 222-224°C, z wydajnoscia od 25 do 35%.Dla wzoru Cx 7 H32 Cl2N2 05 S obliczono: C-45,63, H-7,21, N-6,26, S-7,17, Cl—15,85, a znaleziono C-45,77, H-7,44, N-6,39, S-7,21, Cl-16,17 [£]{J2°(C,l,0) + 176o Absolutna konfiguracje i stereochemie zwiazku o wzorze 9 ustalono przy uzyciu krystalografii rentgenow¬ skiej.U-57930 E, badano w porównaniu z klindamycyna na zakres dzialania przeciwbakteryjnego. Wyniki podano w tablicy 1.Tablica 1 Minimalne stezenie U-57930 E i klindamycyny i hamujace wzrost /MIC/ bakterii aerobowych Organizm 1 Staphylococcus aureus UC 2 6685 6686 6687 6688 6689 6690 6691 6692 MIC 0ig/ml) Klindamycyna 3 ' 25 0,05 0,025 25 0,05 0,025 0,10 25 U-57930 E 4 25 0,20 0,20 25 0,78 0,20 0,20 25 , ciag dalszy tablicy 1 na str.88 132002 ciag dalszy tablicy 1 Staphylococcus 1 epidermidis Streptococcus 1 faecalis Streptococcus 1 pyogenes Streptococcus 1 viridans Diplococcus 1 pneumoniae I Diplococcus 1 pneumoniae II 1 Escherichia coli ( Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae Salmonella schottmielleri Pseudomonas aeruginosa 2 6693 6694 6695 6696 6675 76 746 571 570 719 3389 694 152 153 871 41 3213 45 93 58 126 _95 | 0,05 25 0,10 0,10 0,05 ! 0,05 <0,05 0,20 0,20 0,10 0,10 25 <0,012 <0,012 <0,012 <0,012 <0,012 50 50 6,25 50 50 4 0,78 25 0,39 0,39 0,39 0,10 0,5 0,78 0,39 0,20 0,20 6,25 <0,012 | 0,05 <0,012 1 <0,012 <0,012 50 50 50 50 50 Podane wyniki uzyskano w tescie przeprowadzonym nastepujaco: Minimalne stezenie hamujace wzrost (MIC) obu zwiazków wobec bakterii aerobowych oznaczono stosujac standardowa metode plytkowa z zastosowaniem bulionu do rozcienczania. Uzyto pozywke z wyciagu mózgowo- -sercowego (BHI-Difco) i plytki inkubowane w temperaturze 37°C w ciagu 20 godzin.S. aureus UC 6685-6696, wyodrebnione klinicznie, byly odporne najeden lub wiecej handlowych antybio¬ tyków.„UC jest zarejestrowanym znakiem towarowym The Upjon Company Culture Collection. Te hodowle mozna otrzymac na zamówienie z The Upjon Company w Kalazazoo, Michigan.Tablica 2 Minimalne stezenie klindamycyny i U-57930 E hamujace wzrost Gram-dodatnich i Gram-ujemnych bakterii anaerobowych Organizm 1 Bacteroides | fragilis UC 2 6513 6428 MIC (jug/ml) Klindamycyna 3 0,06 0,06 U-57930 E 1 4 0,12 0,25 ciag dalszy tablicy 2 na str. 9ciag dalszy tablicy 132002 9 1 Bacteroides theteiotaomioron Bacteroides distasonis Bacteroides melaninogenicus Clostridium perfringens Clostridium novyi B Clostridium tertium Clostridium cadaveris Clostridium sordellii Clostridium tentani Clostridium 1 botulinum A Clostridium | bifermentans Clostridium difficile Propionibacterium 1 acnes Eubacterium 1 limosum Eubacterium lentum | Actinomyces | naeslindii | Fusobacterium nucleatum | Fusobacterium varium | Fusobacterium ! necrophorum j 2 6864 6862 6512 6518 6326 247 6509 6329 6508 6510 6505 6521 6506 6507 6834 6857 6858 6860 6861 6564 6575 6515 6522 5920 6516 6324 6052 6568 J 3 3,9 7,8 2,0 0,12 0,06 0,06 0,06 0,06 7,8 0,03 2,0 0,03 0,25 0,50 7,8 250 3,9 500 3,9 0,06 0,03 2,0 0,50 0,25 0,12 0,06 ' 15,6 0,06 4 2,0 15,6 0,5 <0,03 0,06 0,12 0,12 0,12 '< 7,8 0,06 0,5 0,03 0,03 0,06 3,9 125 3,9 1 500 2,0 1 0,12 0,06 1 2,0 1,0 0,25 0,12 1 0,06 3,9 ciag dalszy tablicy 2 na str. 1010 1 Peptococcus asaccharolyticus 1 Peptococcus magnus Peptococcus aerogenes Peptostreptococcus anaerobius 132002 '2 6214 6258 6319 6321 3 0,56 0,06 <0,03 0,12 ciag dalszy tablicy 4 0,25 0,06 0,06 0,12 J Wyniki podane w tablicy 2 uzyskano w nastepujacym tescie. Przygotowano serie dwukrotnych rozcienczen leku w 1,0 ml objetosciowych bulionu Scheedlera i dodano do 9,0 ml stopionej (47°C) pozywki agarowej Wilken- sa-Chalgrans. Po wymieszaniu z antybiotykiem agar wlano do szalek Patriego o wymiarach 100 mmx 20 nim.Przed zaszczepieniem szalki pozostawiono na noc na stole.Hodowle umieszczono na agarze Wilkensa-Chalgrana i hodowano wciagu 48 godzin w temperaturze 37°C w naczyniu anaerobowym BBL. Wyrosnieta hodowle zebrano i przygotowano zawiesine komórek w pozywce Schaedlera tak, by zmetnienie wynosilo 0,5 wg standardu McFarlanda (108 komórek/ml). Zawiesine odpipeto- wano do replikatora Steersa i okolo 1-2 /ii podano na powierzchnie plytek agarowych. Na kilka minut pozosta¬ wiono inokulum do wyschniecia, a nastepnie plytki umieszczono w naczyniu anaerobowym BBL (w atmosferze zawierajacej 85% N2, 10% N2 i 5% C02) iinkubowano w temperatuize 37°C wciagu 72 godzin. Minimalne stezenie hamujace wzrost (MIC) oceniono jako najmniejsza ilosc leku hamujaca wzrost.Bardzo slaba warstwe wzrostu lub obecnosc 3 kolonii uznano za wynik ujemny.Pozywka agarowa Wilkinsa—Chalgrena Przygotowuje sie nastepujace skladniki i rozpuszcza w 1000 ml wody. Wartosc pH powinna sie miescic w zakresie 7,0-7,2. tryptykaza' 10 g Celyzat 10 g Ekstraktdrozdzy 5 g Glukoza 1 g NaCl 5g L-arginina w postaci wolnejzasady 1 g Sól sodowa kwasu pirogronowego 1 g Agar 15 g Nastepnie dodaje sie Hem i roztwór + Witaminy Ki tak, by koncowe stezenie wynosilo 5 figfml Heminy i 0,5 g/ml Ki. Calosc ogrzewa sie w autoklawie w temperatuize 121°C w ciagu 15 minut aerobowo.Zapas Hemu - 0,5 g Heminy + 10 ml In roztworu NaOH + 990 ml H20, ogrzewa sie w autoklawie w temperaturze 121°C wciagu 12 minut. Dodaje sie 10 ml zapasu na 1 litr pozywki. Zapas + witaminy K - 0,05 ml roztworu witaminy Kt + 20 ml 95% etanolu. Sterylizuje sie przez saczenie i dodaje 0,2 ml zapasu na 1 litr pozywki.Stwierdzono, ze LP. LD50 dla U-57930 E wobec myszy wynosi 592 mg/kg. Wartosc ta jest wartoscia srednia z dwóch oddzielnych i identycznych oznaczen LD50. Wartosc ta jest okolo dwukrotnie wieksza od LDS0 dla chlorowodorku klindamycyny, co nalezy interpretowac, ze ostra toksycznosc LP. dla U—57930 E jest okolo polowe mniejsza od toksycznosci chlorowodorku klindamycyny.Tablica 3 Testochrony na myszach in vivo Organizm + sposób podania S.aureus Podskórnie Doustnie S.Hemolyticus Podskórnie Podskórnie Doustnie K.pneumoniae Klindamycyna 5,7(4,2-7,8)* 12,3(8,8-17,3) 2,3(1,6-3,3) 3,3 (2,6-4,2) 12,3(10,2-14,8) 320 U-57930 A <5 1-5 0,25 0,25(0,2-0,33) 2,9 (2,0-4,1) 320 Stosunek ok.10 ok.10 13 4,2 -132002 11 Podane wyniki uzyskano w nastepujacym tescie. ¦ ¦ .Test ochrony na myszach. Grupe 10 standardowych myszy laboratoryjnych (CF-1) wazacych 18-20g zainfekowano okolo 100 LD50 zawiesina standaryzowanych komórek bakterii, które utrzymywano zamrozone w temperaturze -170°C. Tuz przed uzyciem zawiesine szybko odmrazano i odpowiednio rozcienczano. Myszy zainfekowano dootrzewnowo (I.P.).Zainfekowane grupy zaczeto leczyc natychmiast i kontynuowano leczenie raz dziennie w ciagu 4 dni (pierw¬ sze 24 godziny - 1). Grupa nieleczonych zainfekowanych myszy sluzyla jako grupa kontrolna na szkodliwosc hodowli.Siedem dni po rozpoczeciu leczenia zywe zwierzeta usmiercono i obliczono medialna dawke ochronna antybiotyku na podstawie stosunku smiertelnosci wleczonych grupach. Medialna dawke ochronna i95% prze¬ dzial ufnosci obliczono metoda Spearmana i Karbera wg programu na maszyne cyfrowa IBM 360.Z mieszaniny reakcyjnej z czesci II przykladu I wyodrebniono zwiazek o wzorze 10 w nastepujacy sposób.Przechowany przesacz z czesci II zatezono do sucha pod zmniejszonym cisnieniem. Pozostalosc przeprowa¬ dzono w wolna zasade i poddano chromatografii na zelu krzemionkowym przy uzyciu, jako eluenta, mieszaniny CHC13 i metanolu w stosunku 6:1. Tym sposobem otrzymano mniej polarny produkt wspomniany w czesci II.Nastepnie przeprowadzono go w chlorowodorek i rekrystalizowano z acetonu i wody. Temu izomerowi przypisa*- no próbnie strukture zwiazku o wzorze 10.Epimeryzacje grupy karbonylowej przylaczonej do pierscienia piperydynowego zwiazków o wzorach 9 i 10 mozna przeprowadzic dobrze znanymi sposobami. Izomery trans o wzorach 19 i 20 otrzymane w wyniku epime- ryzacji (zgodnie ze schematem 6 i 7) mozna wyodrebnic znanymi sposobami takimi, jak krystalizacja lub chroma¬ tografia.Alternatywnie, zwiazek o wzorze 9 i 10 mozna zhydrolizowac uzyskujac aminokwasy o wzorach 21 i 23, które z kolei mozna poddac epimeryzacji znanymi sposobami otrzymujac, odpowiednio, zwiazki o wzorach 22 i 24 (zgodnie ze schematem 8 i 9).D-cis izomer (o wzorze 10) U-57930 £ ma pewien zakres dzialania przeciwbakteryjnego, co wynika z testów na pozywce BHI, przedstawiony w nastepujacej tablicy 4.Tablica 4 1 Organizm S.aureus | S.fecalis 1 S.pyogenes | D.pneumoniae E.coli K.pneumoniae S.schottmuelleri Ps.aeruginosa NrUC 76 570 746 694 152 41 45 58 126 95 MIC (Mg/ml) ! 250 1000 125 1000 I 62,5 1 62,5 1 1000 I 1000 1000 I 1000 ] Przyklad II. Analog epi-7-Cl-MTL zwiazku o wzorze 2 Postepujac zasadniczo w sposób opisany w przykladzie I, lecz stosujac aminokwas o wzorze 5 iepi-7-Cl- -MTL, czyli 7/R/-7-deoksy-7-chloro-metylo-l- tio-jMinkozaminid, zamiast 7-C1-MTL, czyli 7/S/-7-deoksy-7- chloro-metylo-1- tio-iMinkozaminidu, otrzymuje sie odpowiedni nowy analog o dzialaniu przeciwbakteryjnym.Epi-7-Cl-MTL mozna wiec otrzymac sposobem stosowanym do otrzymywania 7-C1-MTL, stosujac jako substrat epi-MTL, zamiast MTL.Przyklad III. Amid otrzymany z kwasu 4-cis-n-butylo-Lr pipekolowego i 7/SA7-deok$y-7-chloro- me* tylo-l-tio-£- linkozaminidu (7-C1-MTL) (U-60970 E- zwiazek o wzorze 26) Zwiazek o wzorze 26 otrzymuje sie zgodnie ze schematem 10. Mieszanine 4,0 g (0,0093 mola) substratu o wzorze 25, 40 ml wody, 40 ml metanolu, 2 ml 37% roztworu HG i 8,0 g katalizatora Pt03 zredukowano w aparacie Parra pod cisnieniem 350 kPa w ciagu 18 godzin. Mieszanine reakcyjna przesaczono w celu usuniecia katalizatora i przesacz zatezono pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac bursztynowy olej. Olej rozpuszczono w 20 ml mieszaniny CHC13 i metanolu w stosunku 2:1 i dodano trójetyloamine w ilosci wystarczajacej do zoboje¬ tnienia obecnego HC1. Ten roztwór poddano chromatografii na zelu krzemionkowym stosujac mieszanine CHG312 132002 i metanolu w stosunku 2:1. Otrzymano dwie glówne frakcje produktu. Frakcje zawierajace szybszy produkt zebrano i zatezono pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac biale cialo stale stanowiace frakcje A. Frakcje zawierajace wolniejszy skladnik zebrano i zatezono pod zmniejszonym cisnieniem uzyskujac biale cialo stale stanowiace frakcje B. Frakcje B rozpuszczono w malej ilosci H20 i dodano 37% roztwór HC1 w ilosci wystarcza¬ jacej do uzyskania pH 2. Zachodzila krystalizacja. Cialo stale zebrano i rekrystalizowano z wody otrzymujac biale krysztaly produktu, U-60970 E o wzorze 26, o temperaturze topnienia 224-226°, z wydajnoscia 25-35%.Dla wzoru Ci 7 H32 Cl2 N2 05 S obliczono: C-47,99, H-7,63, N-5,89, S-6,75, Cl-14,92, a znaleziono: C-41,97, H-7,42, N-6,23, S-6,90, Cl-14,87.[JC]MeOH+178°(C, 1,0).Analiza NMR potwierdza te strukture.Minimalne stezenie hamujace wzrost (MIC) w/ig/ml dla U-60970 E wobec róznych bakterii przedstawia sie nastepujaco: Tablica 5 | Organizm S.aureus [ S.faecalis S.pyogenes D.pneumoniae E.coli K..pneumoniae S.schottrruelleri Ps.aeruginosa UC 76 570 746 694 152 41 45 58 126 95 MIC 0,125 OM 0,062 0,25 0,008 0,016 31,2 7,8 31,2 125 Wyniki uzyskano w tescie opisanym w przykladzie I.U—60970 E badano równiez in vivo na standardowych myszach laboratoryjnych, które eksperymentalnie zainfekowano bakteriami. Test prowadzono podobnie, jak to opisano przy badaniu U-57930 E. Podane nizej wyniki pokazuja, ze U-60970 E jest znacznie aktywniejszy in vivo wobec D.pneumoniae I i III niz U-57930 E.Natomiast wobec S.aureus i S.hemolyticus U-60970 E wykazuje zasadnicza taka sama aktywnosc, jak U-57930 E.Srednie dawki podano w tablicy 6.Tablica 6 Srednia dawka ochronna (CD5 0 w mg/kg) Organizm Szczep | S. homolyticus 0203 & aureus UC 76 | D. pneumoniae I Felton I i D. pneumoniae III MPI III U-57930 E-HO ^ domiesniowo 0,38(0,28-0,51) 1,07 (0,72-1,59) 1,54(1,12-241) 2,68 (1,88-3,81) 2,5 (1,69-3,69) doustnie 3,79 <2,74-5,29) 8,12(5,78-11,41) 15,39 (10,57-22,4) 14,36 (9,68-21,31) 16,49(10,51-25,88) U-60979 E-HC1 domiesniowo 0,35 1,32(1,05-1,66) 0,67 (0,52-0,86) 0,44 (0,36-0,54) 0,29 (0,21-0,41) doustnie 2,18(1,5-3,16) 8,12 (6,75-9,77) 4,42(3,15-6,21) 3,13(2,26-4,32) 4,12 (2,93-5,81) Przyklad IV. Amid otrzymany z kwasu 4-cis-n-butylo-D- pipekolowego i7/S/-7-deoksy-7-chloro- metylo- 1-tio-Mnkozaminidu (7-C1-MTL) (U-61734 E - zwiazek o wzorze 27) Zwiazek otrzymuje sie zgodnie ze schematem 11. Frakcje A z poprzedniego przykladu przeprowadzono w chlorowodorek sposobem opisanym dla frakcji B. Otrzymano produkt o wzorze 27 z wydajnoscia 25-35%, którego widmo NMR bylo zasadniczo identyczne, jak widmo otrzymane dla frakcji B.132002 Zastrzezenia patentowe 13 1. Sposób wytwarzania nowego analogu klindamycyny o wzorze 2 i jego izomerów, znamienny tym, ze redukuje sie katalitycznie zwiazek o wzorze 3, w którym Ri oznacza rodnik etylowy, a X oznacza 7/S/ lub 7/R/-chloro-metylo- 1-tio-jC-linkozaminid. 2. Sposób wytwarzania nowego analogu klindamycyny o wzorze 4 i jego izomerów, znamienny t y ni, ze redukuje sie katalitycznie zwiazek o wzorze 3, w którym Rx oznacza rodnik butylowy, a X oznacza 7/S/lub 7/R/-chloro-metylo- l-tio-£-likozaminid. o H OH Wzor 1 Wzór 2 CH CH3 HC-CI OS ¦ VC-NH-CH H HO Wzor 10132 002 QHg 9 6: CH3 HC-Cl ISTC-NH-CH H HO m S-CH, Nzor 4 CH O CK i 3 HC-Cl Sj^C-OH^NK-CH HOygp *vzor 5 Atftfr Crt OH O HC-Cl NAC-NH-CH H HOJ-0, KOHJ WS-CH, OH uzor8 Schemat / S-CH, ON l*R-MgX Hzór 11 o I C-R CH,R //a?r f2 A/2Ór 13 Schemo/2 R fi */«»¦ # uzór f5 uxór 16 uzór f7 ugó? 18 Schemal 3 £H* -hci 9tHs C^ /i 9 - 7a-MTL^fS 9 HC"CI S/C-OH STC-NH-Ch uzór 5 Schemat 4 HOl-Q .«mt7 T^fs-CH, CH5 CH,W -S 0 HC-Cl ^C-TCl-MTL ^-NH-CH '{*Jn H HOJ-0 XH*U *zór7 . _ (OKS .SCh, OH QH5 A.0 Schemo/51""9 'H^CH,C,H. CH 132 002 '3 0 HC-Cl £H* u J-NH-CH fi P Tf&ch3 — * "*" * OH schemo/ 6 CtH5 CH, AO HC-Cl <£* VC-NH-CH - (\P H HOj-0, W7-CH OH H-._MTL ^"CHj uxór 20 OH "zor *° Schemat 7 Xn HC-a C* T" VcWh—&9—OJ1 H HO1-0 N C-OH TOK KOH **r *f mór 22 fS-CH "*[" OH S ScAemo/S \ 9 HC-Cl i* I2"5 N^C-NH-CH—fi P—fi P H HoJln } C-OH "N^f-OH WzOr9 1—Ts-CH I 3 Wzór 23 Wzor24 Schemat 9 W CM CH CX9 —- Ci9 H(r"a-Hci N C7-CI-MTL N C-NH-CH^0 H H Wzor25 V\feor 26 IISCH3 Schemat10 OH CAH, . CH CH ¦P --fS O HC-Cl . rl ^5-nh-ch (C17H32aNi05S-(XHO) OH C-7-a-MTL M - i, * H HO Wzdr25 Wz Schemat 11 PL PL PL PL

Claims (2)

1. Zastrzezenia patentowe 13 1. Sposób wytwarzania nowego analogu klindamycyny o wzorze 2 i jego izomerów, znamienny tym, ze redukuje sie katalitycznie zwiazek o wzorze 3, w którym Ri oznacza rodnik etylowy, a X oznacza 7/S/ lub 7/R/-chloro-metylo- 1-tio-jC-linkozaminid.

2. Sposób wytwarzania nowego analogu klindamycyny o wzorze 4 i jego izomerów, znamienny t y ni, ze redukuje sie katalitycznie zwiazek o wzorze 3, w którym Rx oznacza rodnik butylowy, a X oznacza 7/S/lub 7/R/-chloro-metylo- l-tio-£-likozaminid. o H OH Wzor 1 Wzór 2 CH CH3 HC-CI OS ¦ VC-NH-CH H HO Wzor 10132 002 QHg 9 6: CH3 HC-Cl ISTC-NH-CH H HO m S-CH, Nzor 4 CH O CK i 3 HC-Cl Sj^C-OH^NK-CH HOygp *vzor 5 Atftfr Crt OH O HC-Cl NAC-NH-CH H HOJ-0, KOHJ WS-CH, OH uzor8 Schemat / S-CH, ON l*R-MgX Hzór 11 o I C-R CH,R //a?r f2 A/2Ór 13 Schemo/2 R fi */«»¦ # uzór f5 uxór 16 uzór f7 ugó? 18 Schemal 3 £H* -hci 9tHs C^ /i 9 - 7a-MTL^fS 9 HC"CI S/C-OH STC-NH-Ch uzór 5 Schemat 4 HOl-Q .«mt7 T^fs-CH, CH5 CH,W -S 0 HC-Cl ^C-TCl-MTL ^-NH-CH '{*Jn H HOJ-0 XH*U *zór7 . _ (OKS .SCh, OH QH5 A.0 Schemo/51""9 'H^CH,C,H. CH 132 002 '3 0 HC-Cl £H* u J-NH-CH fi P Tf&ch3 — * "*" * OH schemo/ 6 CtH5 CH, AO HC-Cl <£* VC-NH-CH - (\P H HOj-0, W7-CH OH H-._MTL ^"CHj uxór 20 OH "zor *° Schemat 7 Xn HC-a C* T" VcWh—&9—OJ1 H HO1-0 N C-OH TOK KOH **r *f mór 22 fS-CH "*[" OH S ScAemo/S \ 9 HC-Cl i* I2"5 N^C-NH-CH—fi P—fi P H HoJln } C-OH "N^f-OH WzOr9 1—Ts-CH I 3 Wzór 23 Wzor24 Schemat 9 W CM CH CX9 —- Ci9 H(r"a-Hci N C7-CI-MTL N C-NH-CH^0 H H Wzor25 V\feor 26 IISCH3 Schemat10 OH CAH, . CH CH ¦P --fS O HC-Cl . rl ^5-nh-ch (C17H32aNi05S-(XHO) OH C-7-a-MTL M - i, * H HO Wzdr25 Wz Schemat 11 PL PL PL PL