CH641678A5 - Entzuendungshemmendes und zur behandlung der benignen prostatahypertrophie geeignetes arzneimittel. - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein entzündungshemmendes und zur Behandlung der benignen Prostatahypertrophie geeignetes Arzneimittel, das als Wirkstoffkomponente Spiroketa-line (3-ß-Hydroxy-5-en- oder 3-ß-hydroxy-5a-spiroketal-steroid-3-mono und 3-disaccharide), ihre Ester mit Mono-und Dicarbonsäuren oder ihre Halbester enthält. Das Arzneimittel eignet sich zur Bekämpfung menschlicher und tierischer Krankheiten.

Spiroketalsteroid-glycoside sind vom 16ß-26-Di-hydroxycholestan-22-on abgeleitete Steroidsaponine, die eine 16,22,26-Spiroketalgruppe tragen. Ausserdem verfügen sie über eine 3ß-Hydroxygruppe in glycosidischer Bindung und sie weisen eine Doppelbindung oder ein Alpha- oder Beta-Wasserstoffatom in der Stellung 5 auf. Die Aglycone dieser Verbindungen haben entweder eine Doppelbindung in Stellung 5 (6) oder ein 5a-Wasserstoffatom. Typische Verbindungen der ersten Gruppe sind Diosgenin, Yamogenin, Bo-togenin und Correlogenin, während Tigogenin, Neotigoge-nin, Hecogenin und Sisalogenin Beispiele der zweiten Gruppe darstellen (1.) M.H., Briggs und J. Brotherton in «Steroid Biochemistry and Pharmacology», Academic Press, 1970, Seiten 288-294 (2. R. Tschesche und G. Wulff in Fortschr. Chem. Org. Naturp., 973, 30,461-606).

In der Natur liegen die Aglycone der Saponine als Glyco-side vor, die meist 2 oder mehr Monosaccharideinheiten im Zuckeranteil enthalten. Aus diesem Grunde sind diese verhältnismässig zuckerreichen Verbindungen meist gut wasserlöslich und bilden häufig einen seifenähnlichen Schaum.

Es ist bereits bekannt, dass die intestinale Absorption der Saponine verhältnismässig niedrig ist und dass sie bei oraler Verabreichung als nicht toxisch bei Menschen und Tieren gelten. Allerdings können sie aufgrund ihrer schaumbildenden Fähigkeiten zu Schwellungen führen. Die meisten Sa-40 ponine sind bei Untersuchungen in vitro hämolytisch wirksam (2). Das Aglycon Diosgenin hat sich als nicht toxisch bei Tierexperimenten mit Ratten, Kaninchen und Hühnern erwiesen; es senkt den Serumcholesterolspiegel bei diesen Tieren (3.) J.L. Diaz-Zagoya et al: Biochem. Pharmacol, 451971,20, 3473-3480; 4.) J. Laguna et al: J. Atherosel, Res. 1962,2,459-470). Die Verwendung dieser Verbindung als cholesterolsenkendes Mittel wurde patentiert (5. DE-OS 2 348 176 und US-PS 3 890 438).

Therapeutische Eigenschaften sind für einige Saponine so beschrieben worden, niemals bisher aber spezifisch für Spi-roketalsteroidsaponine oder Spiroketaline.

Überraschenderweise wurde nunmehr festgestellt, dass bestimmte Spiroketaline, also die 3ß-Mono- oder 3ß-Bisac-charide-glycoside und ihre Ester mit Mono- und Dicarbon-55 säuren sowie ihre Halbester, und zwar sowohl der 5-En- als auch der 5a-Spiroketalsteroidsapogenine mit oder ohne einer zusätzlichen Ketogruppe in Stellung 12, aber ohne besondere freie Hydroxygruppen, unerwartete prophylaktische und arzneiliche Wirkungen in der Prävention und der Be-60 handlung verschiedener menschlicher und tierischer Krankheiten aufweisen. Einige dieser Verbindungen sind nach Kenntnis der Anmelderin bisher niemals in der Literatur beschrieben worden, so beispielsweise Hecogeninglukosid und die Maltoside und Lactoside des Tigogenin und Hecogenin. 65 Die Erfindung bezieht sich auf ein entzündungshemmendes und zur Behandlung der benignen Prostatahypertrophie geeignetes Arzneimittel, das dadurch gekennzeichnet ist,

dass es eine Verbindung der allgemeinen Formel

3

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enthält, in der C-5 entweder eine Doppelbindung oder ein a-Wasserstoffatom aufweist und Z eine Mono- oder Di-saccharidgruppe, die teilweise oder ganz mit Monocarbon-säuren verestert sein kann und R entweder zwei Wasserstoffatome oder eine Ketogruppe bedeuten.

Als Wirkstoffe werden vorzugsweise Glucoside eingesetzt, und die bevorzugt aktiven Verbindungen sind Diosge-nin-ß-D-glukosid, das auch unter dem Namen Trillin bekannt ist und Hecogenin-ß-D-glukosid sowie ihre Monocar-bonsäureester. Trotz der geringen Wasserlöslichkeit dieser Verbindungen - beispielsweise lösen sich etwa 6 mg Diosge-nin-glukosid in 11 Wasser bei Zimmertemperatur zu einer kolloidalen Lösung und Hecogeninglukosid scheint sogar noch eine etwas geringere Löslichkeit aufzuweisen - war es überraschend festzustellen, dass sie pharmazeutisch wirksam sind, ohne dabei die übliche in vitro hämolytische Aktivität aufzuweisen, die meist den Saponiden einschliesslich den Spiroketal-Steroidsaponinen eigen ist.

Die aktiven Verbindungen können in an sich bekannter Weise nach der Koenigs-Knorr-Synthese (7. W. Koenigs und E. Knorr, Chem. Ber., 1901, 34, 957-986) oder einer ihrer Modifikationen (8.) C. Meystre und K. Mioscher: Helv. Chim. Acta, 1944,27,231-236.9.) R.B. Courow und S. Berstein: Org. Chem., 1971, 36, 363-870.10.) J.J. Schneider: Cabohyd. Res., 1970,12, 369-389). 11.) G. Wulffund G. Roehle: Angew. Chemie, 1974, 86,173-87. 12.) N. Weber: Chem. Phys. Lipids, 1977,18,145-148) oder durch die Orthoester Methode (13.) N.I. Uvarova: Carbohyd. Res., 1973, 27, 79-87) hergestellt werden, und zwar bevorzugt durch Behandeln der 3ß-Hydroxyspiroketalsteroid-Aglykone mit entweder einem am C-l bromierten oder einem 1,2-Orthoester-mono- oder-disaccharid-acetat in Gegenwart von Silberoxyd oder Silbercarbonat oder einem anderen geeigneten Katalysator. Ausserdem können die Mono- oder Di-saccharid-glycoside durch kontrollierte Fermentation oder Säurehydrolyse der zuckerreicheren Spiroketalsteroid-Sa-ponine gewonnen werden.

Die genannten aktiven Verbindungen können in an sich bekannter Weise in Nahrunsmittel oder zu pharmazeutischen Spezialitäten wie Pulvern, Pillen, Tabletten, Kapseln, Dragees, Emulsionen oder Lösungen für Injektion, Infusion oder orale Verabreichung verarbeitet werden.

Da die Verbindungen verhältnismässig unlöslich sind (etwa 5 mg/11 Wasser bei 25 °C für Diosgenin- und Hecoge-ninglycosid) werden sie vorzugsweise in pharmazeutischen Zubereitungen in amorpher, hochdisperser Form verwendet. Die Überführung in hochdisperse Formen kann in an sich bekannter Weise erfolgen, beispielsweise durch Erhitzen, Mikronisieren, Fällung auf feinteiligen Trägern usw. Die festen pharmazeutischen Zubereitungen weisen vorzugsweise eine Teilchengrösse von etwa 0,1 mm und insbesondere von 0,06 mm oder kleiner auf.

Im allgemeinen werden die Spiroketaline, insbesondere Diosgenin-ß-D-glucosid und Hecogenin-ß-D-glucosid, in täglichen Dosen von etwa 0,01-100 mg oder mehr eingesetzt. 20 Untersuchungen haben gezeigt, dass die aktiven Spiroketaline wertvolle Verbindungen bei der Behandlung von Entzündungen verschiedener Genese sind. Hierbei ist es wichtig zu bedenken, dass die gegenwärtig verwendeten entzündungshemmenden Verbindungen wie beispielsweise Cortico-25 steroide, Phenylbutazon, Acetylosalicylsäure, Indomethacin und andere meist in hohen Dosen von 100 mg oder mehr täglich verwendet werden müssen, wodurch häufig Nebenwirkungen verschiedener Schwere ausgelöst werden, während die hier beschriebenen Spiroketaline, sowohl oral als 30 auch parenteral, keine solchen Nebenwirkungen zeigen und dass sie auch nicht in so hohen Dosen genommen werden müssen, sondern dass die Dosis meist weniger als 1 mg täglich beträgt. Allerdings ist auch zu berücksichtigen, dass die entzündungshemmende Reaktion nicht sehr stark ist und 35 erst nach einer gewissen Zeitspanne der Behandlung eintritt.

Die orale Wirksamkeit einer entzündungshemmenden Verbindung kann in einfacher Weise dadurch nachgewiesen werden, dass sie entweder oral oder parenteral an Tiere, wie beispielsweise Ratten verfüttert wird, bevor in eine der Hin-40 terpfoten eine Lösung oder Suspension einer Entzündungen hervorrufenden Verbindung wie Kaolin, Eiweiss, Formaldehyd, Carragenin oder Hefe injiziert wird. Die entzündungshemmende Wirkung der Spiroketaline wurde mit Hilfe einer Suspension von Hefe, einem der milderen entzün-45 dungsfördenden Mittel untersucht. In Abhängigkeit von der Dosis und der Zuführungsart wurden deutliche Verringerungen bei der Bildung des akuten Ödems von 10- etwa 40% beobachtet. Um diese Verringerung mit den Glucosiden des Diogenins, Hecogenins und Tigogenins zu erreichen, wurden 50 Dosen von 500-1000 mg/kg Körpergewicht oral oder 50-100 mg/kg intraperitoneal zugeführt, und zwar 24 Stunden bevor die Tiere mit einer frischen 2%igen Hefesuspension in physiologischer Kochsalzlösung behandelt wurden.

Die im erfindungsgemässen Arzneimittel enthaltenen 5 Verbindungen sind auch wirksam bei der Behandlung der Symptome der benignen Prostatahypertrophie.

Die geringste wirksame tägliche Spiroketalindosis beträgt für den Menschen vorzugsweise 0,03 mg, es können 60 aber bis 100 g gegeben werden. Meist werden die Verbindungen in täglichen Dosen von 0,3-0,75 mg in drei oder vier Einzeldosen oder einer einzigen Dosis mit protrahierter Abgabe verabreicht, die bevorzugte tägliche Dosis ist 0,30-0,45 mg in 3 täglichen Einzeldosen von jeweils 65 0,10-0,15 mg. Es wurde auch festgestellt, dass tägliche Dosen von weniger als 0,01 mg Spiroketaline keinen nachweisbaren Effekt bei der Behandlung der verschiedenen Krankheiten aufweisen.

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Bei der Behandlung von Tieren kann die benötigte tägliche Dosis auf Basis eines durchschnittlichen menschlichen Körpergewichtes von 75 kg berechnet werden.

Es muss auch beachtet werden, dass die Ester der Spiroketaline etwas weniger wirksam sind als diese selbst und dass bei ihrem Gebrauch daher etwas höhere Einzel- und Tagesdosen erforderlich sind.

Die Erfindung wird im folgenden anhand der Beispiele näher erläutert:

Beispiel 1

Gewinnung von Spiroketalsteroid-glycosiden

Die Synthese von Diosgenin-ß-D-glukosid und andere Spiroketaline wurde bereits von verschiedenen Autoren beschrieben (15.) E. A. Sofowora und R. Hardman: Lloydia, 1976,32,141-143. 16.) G. Wulff et al: Chem. Ber., 1972, 105, 1097-110. 10.) J.J. Schneider: Carbohyd. Res., 1970, 12, 369-389).

41,4 g Diosgenin und 55,2 g Silberkarbonat wurden in siedendes Toluol eingebracht, und die Mischung wurde unter Rühren so lange destilliert, bis das Destillat wasserfrei überging. Dann wurde in. die gerührte siedende Mischung eine Lösung aus 82,2 g Bromacetylglukose in 100 ml Toluol eingetropft. Die Mischung wird kontinuierlich weiter destilliert, um das sich bei der Reaktion bildende Wasser zu entfernen. Während dieser Zeit wird das Reaktionsgefäss vor Licht geschützt. Falls notwendig, wird das Volumen der Reaktionsmischung durch Zugabe von trockenem Toluol konstant gehalten. Nach der Zugabe der Acetobromglukose-lösung wird so lange weiter destilliert, bis das Destillat wasserfrei übergeht. Die Reaktionsmischung wird dann abge-s kühlt und filtriert. Der Rückstand wird mit frischem heissem Toluol ausgewaschen. Die vereinigten Filtrate und Waschflüssigkeiten werden unter vermindertem Druck zur Trockne eingeeingt. Der Rückstand wird aus Äthanol oder Hexan umkristallisiert. Die Ausbeute an Diosgenin-3-ß-D-gluko-lo sid-tetraacetat betrug 25,5 g oder 34,3%.

Fp. 201-203 °C (a)D-76° (C 1,19 CH Cl 3).

1 g Natrium wurde in 100 ml absoluten Äthanols gelöst. Von dieser Lösung wurden 15 ml unter Rühren schnell zu einer Lösung von 10 g Diosgenin-glukosid-tetraacetat in 15 600 ml Äthanol bei 45 °C zugegeben. Die Mischung wird eine Stunde gerührt, bevor 21 Wasser zugesetzt werden und die Mischung dann wiederum eine Stunde gerührt wird. Das ausgefallene Diosgenin-ß-D-glukosid wird abfiltriert und mit Wasser neutral gewaschen, bevor es im Vakuum 12 20 Stunden getrocknet wird. Die Ausbeute betrug 7 g oder 90%, Fp. 277-285 °C (kristallisiert bei etwa 250 °C).

Entsprechend können auch die Glykoside des Hecogenin, Tigogenin und Diosgenin hergestellt werden. Eine Übersicht der erfindungsgemäss beanspruchten Verbindun-25 gen, die aber nicht hierauf beschränkt ist, ist in der folgenden Tabelle gegeben:

Tabelle

Hecogenin-ß-D-glukosid-tetraacetat

Tigogenin-ß-D-glukosid-tetraacetat

Diosgenin-ß-D-galactosid-tetraacetat

Diosgenin-ß-D-maltosid-octaacetat

Diosgenin-ß-D-lactosid-tetraacetat

Tigogenin-ß-D-gälactosid-tetraacetat

Hecogenin-ß-D-glukosid

Tigogenin-ß-D-glukosid

Diosgenin-ß-D-galactosid

Diosgenin-ß-D-maltosid

Diosgenin-ß-D-lactosid

Tigogenin-ß-D-galactosid

Fp.

(a)ü

c

Lösungsmittel

250-251°

-10°

0,92

CHC13

204-205°

-50°

1,00

CHCI3

270°

-44°

1,0

CHCI3

283-286°

1

N>

o

1,43

C5H5N

krist. bei

ca. 260°

267-270°

224° dee.

236-238

-65°

0,9

CHC13

Beispiel 2

Herstellung pharmazeutischer Zubereitungen a) Herstellung von Lactose-Maisstärke-Pulvern mit einem Gehalt an Diosgenin-ß-glukosid 15 g Diosgenin-ß-glukosid werden in 3 1 einer siedenden Mischung aus Chloroform und Äthanol im Verhältnis 3 : 1 gelöst. Die Lösung wird dann zu 1 kg Lactose mit einer Teil-chengrösse von nicht über 0,15 mm zugegeben. Die so ent-stehénde Aufschlämmung wird unter ständigem Rühren zur Trockne eingedampft. Die trockene imprägnierte Lactose wird auf die ursprüngliche Teilchengrösse wieder zerkleinert und schliesslich mit 9 kg Maisstärke und 50 g Magnesium-sterat gemischt. Diese Mischung ist ausgezeichnet zur Abfüllung in Kapseln geeignet. Jede Kapsel kann beispielsweise 100 mg der Mischung enthalten, was einem Gehalt an 0,15 mg Diosgenin-ß-D-glukosid 10 mg Lactose, 90 mg Maisstärke und 0,5 mg Magnesiumsterat entspricht.

b) Herstellung von Lactosegranulaten mit einem Gehalt an Diosgenin-ß-D-glukosid

5 g Diosgenin-ß-D-glukosid werden in 51 siedenden Äthanols gelöst. Die Lösung wird dann zu 3,32 kg Lactose mit einer Teilchengrösse von nicht über 0,15 mm zugesetzt. Die Aufschlämmung wird unter ständigem Rühren zur Trockne eingeengt. Die trockene imprägnierte Lactose wird so auf die ursprüngliche Teilchengrösse zerkleinert, bevor sie zu Granulaten mit einer bevorzugten Teilchengrösse von etwa 0,7 bis 1,2 mm verarbeitet wird. Dieses granulierte Produkt ist ebenfalls besonders zur Weiterverarbeitung in Kapseln geeignet, wobei beispielsweise eine Kapsel mit 100 mg des 55 Granulates dann 0,15 mg Diosgenin-ß-D-glukosid enthält.

c) Herstellung von Tabletten mit einem Gehalt an Diosge-nin-ß-D-glukosid

1,250 g Diosgenin-ß-D-glukosid werden 11 Chloroform 60 gelöst und mit 900 g Lactose versetzt. Die Aufschlämmung wird unter vermindertem Druck und ständigem Rühren bei Raumtemperatur getrocknet. Dann wird die Mischung mit 2100 g Kartoffelstärke versetzt und erneut kräftig gemischt. Die imprägnierte Lactose-Stärke-Mischung wird mit es 2500 ml einer wässrigen Lösung aus 250 g Gelatine und 5 g Glyzerin versetzt und in an sich bekannter Weise granuliert. Diese Granulate werden unter vermindertem Druck bei Raumtemperatur getrocknet. Das Granulat wird dann in an

sich bekannter Weise zu Tabletten mit einem Gesamtgewicht von 400 mg verpresst. Jede Tablette enthält demnach 0,15 mg Diosgenin-ß-D-glukosid, 110,56 mg Lactose, 257,97 mg Kartoffelstärke, 30,31 mg Gelatine und 0,61 mg Glyzerin.

d) Herstellung von Dragées mit einem Gehalt an Hecoge-nin-ß-D-glukosid

Eine Lösung aus 450 mg Hecogenin-ß-D-glukosid in 21 Chloroform wird mit 1850 g Lactose und 300 g Saccharose versetzt. Die Aufschlämmung wird bei 30 °C unter vermindertem Druck getrocknet und dann in an sich bekannter Weise unter Zugabe von 1,61 einer wässrigen Gelatinelösung mit einem Gehalt an 40 g Gelatine granuliert. Das Granulat wird bei vermindertem Druck und einer Temperatur von 45 °C getrocknet. Dann wird das Granulat mit 10 g Ma-gnesiumsterat innig gemischt. Die so hergestellte Mischung (2200 g) wird zu etwa 3000 Kernen verpresst, die dann im üblichen Dragierverfahren mit einer, gegebenenfalls gefärbten, dünnen Dragéedecke überzogen werden. Jedes Dragée enthält demnach 0,15 mg Hecogenin-ß-D-glukosid, 616,67 mg Lactose, 100,00 mg Saccharose, 13,33 mg Gelatine und 3,33 mg Magnesiumsterat.

Produkte wie unter a) und b) können auch hergestellt werden unter Verwendung von i) Glykosiden der erwähnten 3-ß-Hydroxi-spiroketalsteroide und insbesondere der ß-D-Glukoside von Tigogenin und Hecogenin.

ii) Glukose, Ascorbinsäure, Talk oder Siliziumdioxid als Trägern für die Glykoside oder auch unter Verwendung anderer inerter pharmazeutisch unbedenklicher Träger.

iii) Der Gehalt aktiven Glykosidverbindungen in jeder Kapsel kann aufwerte zwischen 0,01 mg und mehr eingestellt werden.

iv) Die in a) und b) erwähnten Hilfssubstanzen können in Entsprechung der üblichen pharmazeutischen Herstellungsverfahren geändert werden.

v) In jedem Stadium der Herstellungsprozesse in a) oder b) können andere pharmazeutisch aktive Verbindungen eingearbeitet werden.

e) Herstellung einer Salbe mit einem Gehalt an Hecogenin-ß-D-glukosid

1 g Hecogenin-ß-D-glukosid werden in 90 g emulgieren-den Cetylstearylalkohol eingearbeitet. Nach Zugabe von 105 g dickflüssigen Paraffins und 105 g weisser Vaseline wird auf dem Wasserbad auf 60 °C aufgeschmolzen. Die Schmelze wird mit 699 g Wasser mit etwa der gleichen Temperatur in kleinen Anteilen versetzt. Die Mischung wird bis zum Erkalten gerührt und ergibt eine Salbe mit einem Gehalt an 0,1 % Glukosid.

f) Herstellung einer Creme mit einem Gehalt an Tigogenin-ß-D-glukosid

1 g Tigogenin-ß-D-glukosid wird in 500 g Wollwachsal-kohol eingetragen und auf dem Wasserbad auf etwa 50 °C erhitzt. Die Mischung wird dann mit 499 g Wasser von etwa gleicher Temperatur in kleinen Anteilen versetzt. Die Creme wird bis zum Erkalten gerührt, wobei verdampfte Wasseranteile ergänzt werden. Die Creme weist einen Gehalt an 0,1% Glukosid auf.

In entsprechender Weise können andere Spiroketaline, insbesondere die Verbindungen des Diosgenin, Hecogenin und Tigogenin in Cremes, Salben und Lotions eingearbeitet werden, die darüber hinaus auch andere pharmazeutisch aktive, unbedenkliche, gegebenenfalls auch alternativ wirkende Substanzen enthalten können.

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Beispiel 3

Herstellung einer Lösung mit einem Gehalt an Diosgenin-ß-D-glukosid

41 einer Lösung von Polyvinylpyrrolidon (PVP) in destilliertem Wasser wurde bei einer Temperatur von 65 °C mit einer siedenden Lösung von 600 mg Diosgenin-glukosid in 61 Äthanol gemischt. Die auf ± 22 °C abgekühlte 60% äthanolische Lösung wurde auf 250-ml-Flaschen abgefüllt und mit der Angabe für die Patienten versehen, dass Dosen von einem halben Teelöffel voll (d.h. also 3 x 2,5 ml täglich) einzunehmen sind. Die Mischung ergab 40 250-ml-Flaschen, die jeweils ungefähr 100 x 2,5 ml-Dosen enthièlt, also ausreichend für eine Behandlungszeit von 33 Tagen.

Die Dosis von einem halben Teelöffel enthält etwa 0,15 mg Spiroketaline, 2,5 mg PVP und 1,5 g Äthanol in dem Gesamtvolumen von 2,5 ml.

Um das Problem von instabilen Lösungen zu umgehen, ist es empfehlenswert, nicht die Konzentrationen von 7,5 mg Spiroketalinen und 100 mg PVP je 100 ml der Lösung zu überschreiten, d.h. dass in einer 2,5-ml-Dosis nicht mehr als 0,1875 mg Spiroketaline enthalten sein werden.

Nach dem obenbeschriebenen Verfahren können auch andere Spiroketaline in Lösung gebracht werden. Wegen der geringen Löslichkeit dieser Verbindungen sollten die Lösungen aber nicht einer niedrigen Temperatur ausgesetzt werden, um die Möglichkeit von Ausfallung oder Flockung zu unterbinden.

Test 1 Toxizitätsprüfungen a) Einzeln untergebrachte Gruppen von je 10 männlichen Sprague-Dawley-Ratten wurden oral mit Einzeldosen von Hecogenin-3-ß-D-glukosid oder Disogenin-3-ß-D-glukosid behandelt. Aus Gründen der Homogenität wurden die schlecht wasserlöslichen Verbindungen in eine wässrige Cel-lulosederivatsuspension (Tylose) eingearbeitet.

Unmittelbar vor der Änwendung wurden solche Konzentrationen hergestellt, die die Zuführung der relevanten Dosis mit etwa 1,0 ml/100 g Körpergewicht erlaubten. Dosen zwischen 125 mg/kg bis 1250 mg/kg der Verbindungen wurden untersucht. Die Beobachtungszeit betrug 14 Tage, nach der die Tiere getötet und eine makroskopische Untersuchung der Gewebe durchgeführt wurde. Den Tieren wurde Futter und Wasser ad libitum angeboten.

Keines der Tiere aus den Gruppen starb während der festgelegten Beobachtungszeit. Bei den Gruppen, welche die höchsten Dosierungen, d.h. also 1250 mg/kg erhielten, wurde während der ersten 72 Stunden eine leichte Abnahme des Körpergewichtes festgestellt. Nach Beendigung der Versuche zeigten aber alle Gruppen ein ähnliches Körpergewicht.

Auch die Nahrungsaufnahme war in der Gruppe mit der höchsten Dosierung während der ersten 2 Tage etwas niedriger, allerdings konnte keine Verringerung der Flüssigkeitsaufnahme festgestellt werden, im Gegenteil, es ergab sich sogar eine leichte, allerdings nicht signifikante Zunahme des täglichen Wasserverbrauchs.

In keiner der Gruppen konnten makroskopisch feststellbare Veränderungen beobachtet werden. Besondere Aufmerksamkeit wurde auf mögliche Läsionen im Gastro-inte-stinaltrakt gerichtet, bei der Autopsie wurde aber kein Hinweis auf aktive oder abheilende Geschwüre gefunden.

Es kann daher festgestellt werden, dass die beiden Testverbindungen, Hecogenin-3-ß-D-glukosid und Diosgenin-3-ß-D-glukosid von Sprague-Dawley-Ratten bei oralen Einzeldosen von 125,0; 312,5; 625,0 und 1250 mg/kg Körpergewicht gut vertragen werden.

b) Das Standardlaborfutter wurde sorgfaltig mit 0,1% Diosgenin- oder Hecogenin-glukosid gemischt und an Grup5

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60

65

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6

pen von 20 jungen männlichen Sprague-Dawley-Ratten mit einem Durchschnittsgewicht von 150 g verfüttert. Während der lOOtägigen Beobachtungszeit trat kein Todesfall auf. Die Wachstumskurven bei den behandelten Tieren waren ähnlich wie die in der Kontrollgruppe. 10 Ratten jeder Gruppe wurden getötet und einer Autopsie unterzogen. Die Organe und einige Körpergewebe wurden makroskopisch und mikroskopisch untersucht. In keinen Geweben konnten substanzbedingte pathologische Veränderungen festgestellt werden.

Test 2

Nach bisheriger Kenntnis spielen Prostanoide, also die verschiedenen Prostaglandine und einige nah verwandte Verbindungen und Vorläufer wie Arachidonsäure, Endoperoxide, Thromboxane, Prostacycline und ähnliche eine wichtige Rolle bei der Induktion oder Verhinderung von rheumatoider Arthritis. Die aktiven Verbindungen wurden daher mit Hilfe einer pharmakologischen Methode indirekt auf ihre möglichen prostanoidregulierenden Eigenschaften untersucht.

Bei einem Vergleich der Arthritis nach experimentellem Rotlauf beispielsweise bei der Ratte mit der rheumatischen Arthritis des Menschen lässt sich eine weitgehende Übereinstimmung der einzelnen morphologischen Veränderungen erkennen. Die Untersuchungen erfolgten nach den Angaben von Schulz et al. Beitr. Path. 154,1-26,27-51 (1975). Die rotlaufbedingte Arthritis bei Ratten lässt sich durch eine einmalige Injektion mit nahezu 100%iger Sicherheit reproduzieren. Bei der Rotlaufarthritis sind stets mehr als 6 Gelenke verändert, und zwar grosse und kleine Gliedmassengelenke in gleicher Ausprägung. Beim experimentellen Rotlauf weisen sämtliche Tiere noch nach 3 Monaten hochgradig proliferative Prozesse auf.

Zur Prüfung der Substanzen werden aus der Manifestationsphase folgende Parameter zur Beurteilung der Präparatwirksamkeit herangezogen:

Pfotenvolumen

Die Arthritis der Ratte ist klinisch bei Tieren mit 150 g Körpergewicht schon ab dem 3. Tag, bei etwa 200 g ab dem 5. Tag durch ein hochgradiges periartikuläres Ödem gekennzeichnet.

Niere (Eiweissausscheidung)

Durch Mikrothromben bedingte Nephrosen können bei ca. 30-40% der Tiere am 7.-8. Tag auftreten.

5 Auge

Entzündungen (Trübungen) der Cornea etwa am 8. Tag»

Äussere Geschlechtsorgane, Schwanzspitze

Durch Thromben bedingte Nekrosen ab 6.-8. Tag.

10

Aorta

Zwischen dem 6. und 11. Tag treten bei der Ratte fibrinreiche Thromben auf der Aortenintima auf. Die grösste flä-chenhafte Ausdehnung wird etwa am 8. Tag erreicht. 15 Für die Untersuchung wurden männliche Wistarratten mit Gewichten zwischen 150 und 180 g verwendet. Die Tiere wurden in Einzelkäfigen gehalten und erhielten eine Ratten-standarddiät (Ssniff R) und Wasser ad libitum.

Die Raumtemperatur betrug konstant 22 °C, die relative 2o Luftfeuchtigkeit zwischen 50 und 60%. Die tägliche Beleuchtungsdauer betrug 12 Stunden.

Vor Testbeginn hatten die Tiere eine Akklimatisionszeit von 10 Tagen.

Die Infektion erfolgte mit dem Rotlaufstamm T 28. Die 25 Dosierung betrug 2 ml subkutan (ca. 100-200 Millionen Keime). Die hier zu prüfenden Verbindungen wurden in steriler physiologischer Kochsalzlösung suspensiert und in einer Dosierung von 5 mg/kg i.P. appliziert. Die Behandlung lief vom Infektionstag ab bis zum Versuchsende oder dem 30 Tode der Tiere, 5 x pro Woche.

Bei diesen Untersuchungen wurden einige unerwartete Wirkungen festgestellt. Die wichtigsten Ergebnisse sind in den nachfolgenden Tabellen enthalten.

Die Parameter für die Aortathromben werden nach den 35 Angaben von Schulz et al., Beitrag. Path. 154,1-26 und 27-51,1975 ausgewertet.

Schlüssel für die Bewertung von Aortathromben:

0 = keine Änderung 40 I = geringfügige Veränderungen

2 = leichte bis mittlere Veränderungen

3 = mittlere bis schwere Veränderungen

4 = schwere Veränderungen

Aorthathromben

Verbindung

Schweregrad gefunden in % Ratten

Kontrolle Hecogeninglukosid Diosgeninglukosid Sitosterin-ß-D-glukosid

2,60 (±1,35) 1,38 (±1,51) 1,33 (±1,66) 2,00 (±1,63)

90 50 44 70

Cornealäsionen

Verbindung

Schweregrad gefunden in % Ratten

Tage 1

6

8

12

15

19

22

Kontrolle

2,34

0

100

100

100

100

100

100

Hecogeninglukosid

0,89

0

87,5

100

100

100

20

0

Diosgeninglukosid

1,05

0

85,7

100

100

50

25

0

Sitosterin-ß-D-glukosid

1,20

20

90

100

100

17

25

0

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Sowohl im Schweregrad wie auch im prozentualen Anteil der von Aortathromben und Cornealäsionen befallenen Tiere lässt sich eine deutliche Verringerung feststellen und kann aus den Tabellen entnommen werden.

Test 3

Nachweis der Wirksamkeit als Prostaglandin-synthetaseninhibitor Die Wirksamkeit der Verbindungen als Prostaglandin-synthetaseninhibitor wurde nach den Verfahren von A. L. Willis nachgewiesen. Entsprechende Versuchsbedingungen sind beispielsweise in Proceedings of a Workshop Held du-ring the Vlllth European Rheumatology Congress Helsinki 1975 beschrieben.

Silikonisierte Kuvetten des Aggregometers werden bei einer Temperatur von 37 °C als Inkubationsgefäss benutzt, in dem eine Arachidonatiösung schnell mit einem Prostaglan-dinsynthetaseenzymsystem, meist aus Schafsblase hergestellt, zugegeben und verrührt wird. Zu dieser Lösung in der Kuvette wird dann mit Antikoagulantien behandeltes blut-s plättchenreiches Plasma zugefügt, das ebenfalls auf 37 °C erwärmt wurde. Die Lichttransmission durch die Kuvette wird sofort nach Zugabe aufgezeichnet. In der Kontrollprobe zeigt sich nach 45 Sekunden Inkubationszeit ein deutlicher Peak in der Plättchenaggregation, der die Bildung von Pro-lo staglandinen PGE2 und PGF2 und die dadurch bedingte Plättchenaggregation anzeigt.

In den Untersuchungsproben mit einem Gehalt an 0,00001% Spiroketalsteroidglukoside trat keine Plättchenaggregation ein. Dies zeigt deutlich, dass die Bildung i5 von PGE2 über Endoperoxydverbindungen aus dem Ara-chidonat unterbunden war.

Claims (5)

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1. Entzündungshemmendes und zur Behandlung der be- durch gekennzeichnet, dass es eine Verbindung der allge-nignen Prostatahypertrophie geeignetes Arzneimittel, da- meinen Formel enthält, in der C-5 entweder eine Doppelbindung oder ein a-Wasserstoffatom aufweist und Z eine Mono- oder Di-saccharidgruppe, die teilweise oder ganz mit Monocarbon-säuren verestert sein kann und R entweder zwei Wasserstoffatome oder eine Ketogruppe bedeuten.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Diosgenin-ß-D-glukosid und/oder Hecogenin-ß-D-glukosid und/oder deren pharmazeutisch unbedenkliche Ester enthält.

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PATENTANSPRÜCHE

3. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich-20 net, dass es Hecogenin-ß-D-glukosid, -maltosid und -lac-

tosid oder deren pharmazeutisch unbedenkliche Ester enthält.

4. Arzneimittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Tigogenin-ß-D-glukosid, -maltosid und -lactosid

25 oder deren pharmazeutisch unbedenkliche Ester enthält.

5. Arzneimittel nach Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass es in der Dosierungseinheit 0,3-0,75 mg der Wirkstoffe enthält.