PL103104B1 - Sposob hodowli glebinowej podstawczakow - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób hodowli glebinowej podstawczaków w rodzaju Coriolus, nalezacego do Polyporaceae.

W ostatnich latach gwaltownie wzrostlo wykorzystanie podstawczaków jako surowca podstawowego przy wytwarzaniu leków, w tym czynników przeciwnowotworowych, jak równiez odzywek stalych i plynnych.

Wzmagajacy sie popyt na podstawczaki pobudzal do szeroko zakrojonych badan nad hodowla tych grzybów, prowadzona w sztucznych warunkach. Ogloszono tez wiele prac, podajacych wyniki badan, odnoszacych sie do tego przedmiotu. Tym niemniej, hodowla podstawczaków wymaga dlugiego czasu w porównaniu z hodowla takich mikroorganizmów, jak bakterie czy drozdze. Stalo sie to powaznym problemem w przemyslowej produkqi tych grzybów. Istnieje szereg czynnikó*/, takich jak sklad podloza, temperatura hodowli, pH podloza, wielkosc napowietrzania i intensywnosc mieszania, które musz-j byc brane pod uwage przy skracaniu okresu hodowli glebinowej podstawczaków, ale wazna jest pod tym wzgledem równiez ilosc hodowli posiewowej;uzytej do zaszczepienia podloza. Ogólnie, im wieksza jest ilosc hodowli posiewowej,uzytej do zaszczepienia podloza, tym bardziej skraca sie czas hodowli. Oczywiscie istnieje pewna górna granica ilosci hodowli posiewowej do zaszczepienia podloza, gdyz szczególnie w przypadku zastosowania duzego fermentora typu tanku niezbedne jest uzycie do zaszczepienia wiekszej objetosci hodowli posiewowej, co staje sie niekorzystne pod wzgledem ekonomicznym.

Przedmiotem wynalazku jest sposób prowadzenia hodowli glebinowej podstawczaków, umozliwiajacy skrócenie czasu koniecznego do hodowli. Uzyty wnieniejszym opisie termin „hodowla glebinowa" oznacza hodowle wstrzasana lub hodowle napowietrzana i mieszana. Hodowle wstrzasana stosuje sie zwykle do otrzymania hodowli posiewowej w poczatkowej fazie procesu, albo w procesie,prowadzonym w niewielkiej skali, podczas gdy hodowle na powietrzna i mieszana stosuje sie zwykle w procesie prowadzonym we wzglednie duzej skali, przy uzyciu fermentora typu tanku.

Stwierdzono, ze przy prowadzeniu hodowli glebinowej podstawczaków, szczególnie z rodzaju Coriolus, nalezacego do Polyporaceae, rrib|na znacznie skrócic czas hodowli, poddajac hodowle posiewowa, homogenizacji2 103 104 z otrzymaniem zawiesiny jednorodnej, nie zawierajacej optycznie grudek grzybni, a nastepnie zaszczepiajac podloze otrzymana zawiesina. Toodkrycie stalo sie podstawa sposobu wedlug wynalazku.

Przedmiotem wynalazku jest sposób prowadzenia hodowli glebinowej podstawczaków z rodzaju Coriolus, umozliwiajacy zwiekszenie szybkosci wzrostu hodowli i skrócenie czasu koniecznego do hodowli, w porównaniu z metodami, dotychczas stosowanymi. Dalsze cechy znamienne wynalazku stana sie oczywiste po zaznajomieniu sie z nastepujacym szczególowym opisem wynalazku.

Na rysunku fig. 1 przedstawiono wykres który w odniesieniu do porównawczego przykladu wykazuje zmniejszenie objetosci hodowli posiewowej, uzytej do zaszczepienia podloza i skrócenia czasu, koniecznego do hodowli, w przypadku uzycia jednorodnej zawiesiny, otrzymanej przez poddanie homogenizacji sposobem wedlug wynalazku hodowli posiewowej do zaszczepienia. Na wykresie, os rzednych wskazuje podane w godzinach, wartosci czasu hodowli, koniecznego do uzyskania ilosci grzybni na poziomie 11 g/litr, a os odcietych wskazuje podane w g/litr wartosci stezenia hodowli posiewowej, która zaszczepiono podloze. Wyniki, otrzymane sposobem wedlug wynalazku, przedstawiono za pomoca krzywej (I), awyniH, otrzymane w przykladzie porównawczym, przedstawiono za pomoca krzywej (II).

W sposobie wedlug wynalazku uzyto podstawczaków z rodzaju Coriolus, nalezacych do Polyporaceae.

Wlasciwosci mykologiczne tych podstawczaków opisano w „Colored Illustration of Fungi of Japan", Rokuja Imazeki i Tsuguo Hango, tomy: I (1975) i II (1974) oraz „Fungi in Japan", Seiya Itoh. Typowymi przedstawicielami tych podstawczaków sa: Coriolus versicolor (Fr) Q,uel., Co-iolus consors (Berk.) Imaz., Coriolus hirsutus (Fr.)QucL Coriolus pargamenus (Fr.)Pat., Coriolus pubesens (Fr.)Qufl. i Coriolus conchifer (Schw.)Pat, Wedlug wynalazku, hodowli posiewowej tych podstawczaków, przeznaczonej do zaszczepienia podloza, uzywa sie nie bezposrednio po jej przygotowaniu, ale w formie jednorodnej zaviesiny, otrzymanej przez poddanie uprzednio przygotowanej hodowli posiewowej homogenizacji. Hodowla posiewowa, otrzymana przez prowadzenie hodowli jednego z podstawczaków, sklada sie z nitkowatej grzybni, która w wiekszosci wystepuje w formie sklaczkowanej lub w formie grudek albo skupien, zasadniczo wielkosci ziaren fasoli, tworzac niejednorodna mieszanine. Grudki te w dalszym ciagu opisu beda dla udoguienia nazywane kulkami.

^Homogenizacja" takiej hodowli posiewowej polega na poddaniu kujek dzialaniu sil scinajacyehtz rozbiciem kulek. Pozwala to na jednorodne rozproszenie pojedynczych nitek grzybni. Wystepujace przy tym w nieznacznym stopniu przecinanie grzybni na krótsze odcinki nie powoduje szkodliwych skutków w zastosowaniach podstawczaków, hodowanych wedlug wynalazku. Przez takie postepowanie mozna otrzymac zawiesine grzybni, jednorodnie rozproszonej przez sily scinajace. Nalezy przy tym rozumiec, ze wedlug wynalazku homogenizacje hodowli posiewowej prowadzi sie az do otrzymania zawiesiny jednorodnej w tym stopniu, ze patrzac z zewnatrz nie zauwaza sie skupien grzybni. Korzystnie wielkosc skupien wynosi od 50 ii do 1000/i % Zazwyczaj homogenizacji hodowli posiewowej dokonuje sie w sposób znany, taki jak uzycie homogenizatora, haomoblendera, miksera rozpraszajacego wzglednie miksera do oti^ymywania soków lub slimakowego. Czas potrzebny do wytworzenia za pomoca tych sposobów homogenizacji zawiesiny hodowli posiewowej jednorodnej w tym stopniu#ze patrzac z zewnatrz nie zauwaza sie skupien grzybni, jak to wyzej wspomniano, chociaz rózni sie w zaleznosci od uzytego podstavczaka i warunków hodowli w której przygotowywano hodowle posiewowa, wynosi zazwyczaj od 30 sekund do okolo 10 minut. Nalezy tu zauwazyc, ze jesli przy homogenizacji hodowli posiewowej uzywa sie nadmiernych sil scinajacych, powodujac zmniejszenie wielkosci skupien grzybni do 2-3 /i X 10—50 /i, grzybnia moze zostac rozdrobniona w takim stopniu, ze wywola to niekorzystny wplyw na rozmnazanie sie grzybka w pózniejszym stadium hodowli.

Ilosc hodowli posiewowej, stosowanej do zaszczepienia podloza w glównym stadium procesu, w postaci wyzej wspomnianej jednorodnej zawiesiny zhemogenizowanej hodowii posiewowej, wynosi zazwyczaj od 0,01 g do 0,2 g korzystnie od 0,05 g do 0,15 g/litr podloza. Kiedy porówna sie to z ilosciami, wymaganami w przypadku uzycia zwyklej, nie homogenizowanej hodowli posiewowej, wynoszacymi 0,3 g do 1,0 g/litr, staje sie widoczne, ze sposobem wedlug wynalazku mozna znacznie zmniejszyc ilosc hodowli posiewowej, przeznaczonej do zaszczepienia podloza.

Podlozem, stosowanym do prowadzenia hodowli podstawczaków, poddawanym zaszczepieniu hodowla posiewowa sposobem wedlug wynalazku, jest wodne podloze, przeznaczone do hodowli podstawczaków i nie zachodzi potrzeba szczególowego jego okreslenia. Wynalazek nie obejmuje swoim zakresem takze warunków hodowli, takich jak temperatura, wielkosc napowietrzania i intensywnosc mieszania. W sposobie wedlug wynalazku moga byc zastosowane zwykle warunki hodowli.

Wynalazek objasniaja, nie ograniczajac jego zakresu, nastepujace przyklady.103 104 3 Przyklad I Do fermentora o objetosci 200 litrów wprowadzono 120 litrów podloza o nastepujacym skladzie: glikoza 50 g ekstrakt drozdzowy 7,5 g woda 1 litr pH = 6,5 i poddano je sterylizaqi w 120°C w zwykly sposób. Nastepnie, grzybnie Coriolus versicolor (Fr.) Gluel. uprzednio hodowanego w 30-litrowym fermentorze szklanym, poddano homogenizacji przy uzyciu homoblendera produkcji Sakuma Seisakujo Ltd., w ciagu okresu czasu, podanego w tablicy az do momentu, kiedy kulki staly sie niedostrzegalne okiem nieuzbrojonym. Zhomogenizowana grzybnia zaszczepiono podloze w 200-litrowym fermentorze, uzywajac do zaszczepienia zawiesiny w ilosci, podanej w tablicy, po czym przez 150 godzin prowadzono hodowle w temperaturze 25°G, oraz przy napowietrzaniu 0,5 ogj./obj. podloza/min. i mieszaniu 250 obrotów/min. Grzybnie z otrzymanej hodowli wyodrebniono, przemyto woda, alkoholem etylowym i acetonem, a nastepnie wysuszono w 80°C. Otrzymane wyniki zamieszczono w tablicy.

Czas trwania homogenizacji w min. 0 2 7 0 Tabl Ilosc hodowli posiewowej uzytej do zaszczepienia w g/litr podloza 0,011 0,011 0,031 0,100 ica Wyglad zewnetrzny gi udki grzybni obecne grudki grzybni w niewielkiej ilosci grudki grzybni zasadniczo rozbite grudki grzybni obecne *¦ Wydajnosc grzybni w g/litr podloza . 5,5 ,9 12,9 11,6 Jak to uwidoczniono w tablicy, w przypadku prowadzenia hodowli zuzyciem hodowli posiewowej w postaci jednorodnej zawiesiny po zhomogenizowaniu, mozna otrzymac te sama ilosc grzybni przy uzyciu do zaszczepiania ilosci, wynoszacej okolo 1/10 ilosci, wymaganej w przypadku uzywania hodowli posiewowej, nie poddanej homogenizacji.

Fig. 2, 3 i 4 przedstawiaja zdjecia grzybni, odpowiadajace obróbce podanej w tablicy punkt 1, 2 i 3 odpowiednio.

Przyklad TT. W przykladzie tym, wjednym prz>padku prowadzono hodowle przy uzyciu homogeni¬ zowanej hodowli posiewowej wedlug wynalazku, a w drugim przypadku pie homogenizowanej hodowli posiewo¬ wej, porównujac czas konieczny do uzyskania grzybni w ilosci okolo 11 g/litr podloza.

Uzyto hodowli posiewowej, otrzymanej przez zastosowanie tego samego gatunku grzyba, co w przykladzie I i homogenizowana w taki sam sposób, jak w przykladzie J. Hodowla posiewowa zaszczepiono takie same jak w przykladzie I, podloze, po czym prowadzono dalsza hodowle. Tak postepowano w pierwszym przypadku, podczas gdy w drugim do hodowli uzyto tego san^go wyzej wspomnianego gatunku grzyba, ale nie homogenizowano hodowli posiewowej. Zaszczepienie i dalsza hodowle prowadzono w podobny sposób.

Otrzymane wyniki uwidoczniono w postaci zalaczonego rysunku (fig. 1). Ja1: widac z rysunku, w przypadku uzycia jednorodnej zawiesiny homogenizowanej hodowli posiewowej; czas prowadzenia hodowli wymagany do osiagniecia ilosci grzybni na poziomie 11 g/litr jest znacznie skrócony, i to przy mniejszej ilosci hodowli posiewowej, stosowanej do zaszczepienia, w porównaniu z czasem koniecznym w przypadku uzycia nie homogenizowanej hodowli posiewowej.

Claims (4)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób hodowli glebinowej podstawczaka, z rodzaju Coriolus nalezacego do Polyporaceae, znamienny tym, ze hodowle posiewowa przeznaczona do zaszczepienia podloza poddaje sie homogenizacji z otrzymaniem zawiesiny jednorodnej nie zawierajacej optycznie grudek grzybni, a nastepnie tak zhomogenizowana zawiesina hodowli posiewowej zaszczepia sie podloze, w którym prowadzi sie hodowe.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze homogenizacji dokonuje sie z uzyciem homogenizatora, homoblendera, miksera rozpraszajacego wzglednie miksera do otrzymywania skoków lub slimakowego.4 103 104

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze do zaszczepienia stosuje sie homogenizowana hodowle posiewowa w postaci zawiesiny w ilosci od 0,01 g- 0,2 g korzystnie 5,05 g - 0,15 g/litr podloza.

4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze hodowle posiewowa homogenizuje sie w takim stopniu, ze wielkosc grudek grzybni wynosi 50 yt - 1000 /i. (Nr) o ai 03 03 mj OJ 06 (I/, ) JjJh«K«~ J FIG. 2 2 Hc*«^c%. 2. *»•*. Fl<*3 Prac. Poligraf. UP PRL naklad 120+18 Cena 45 zl