NO864956L - Fremgangsmaate for styring av regioselektiviteten for glykosidbindinger. - Google Patents
Fremgangsmaate for styring av regioselektiviteten for glykosidbindinger.Info
- Publication number
- NO864956L NO864956L NO864956A NO864956A NO864956L NO 864956 L NO864956 L NO 864956L NO 864956 A NO864956 A NO 864956A NO 864956 A NO864956 A NO 864956A NO 864956 L NO864956 L NO 864956L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- gal
- substance
- aglycone
- enzyme
- oligosaccharide
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 53
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 56
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 46
- 108090000790 Enzymes Chemical group 0.000 claims description 42
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 42
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 42
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 36
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 33
- -1 oligosaccharide compound Chemical class 0.000 claims description 30
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 claims description 26
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims description 20
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000000386 donor Substances 0.000 claims description 18
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 17
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 claims description 14
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 claims description 14
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 claims description 8
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 7
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Chemical group 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 claims description 6
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 claims description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 claims description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000937 glycosyl acceptor Substances 0.000 claims description 3
- 239000000348 glycosyl donor Substances 0.000 claims description 3
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 108010054377 Mannosidases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000001696 Mannosidases Human genes 0.000 claims description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 2
- QLTSDROPCWIKKY-PMCTYKHCSA-N beta-D-glucosaminyl-(1->4)-beta-D-glucosamine Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 QLTSDROPCWIKKY-PMCTYKHCSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 claims description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 1
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 claims 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 claims 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 55
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 42
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 38
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 35
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 35
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 16
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000533293 Sesbania emerus Species 0.000 description 9
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 9
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 9
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 8
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 8
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 4
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100026277 Alpha-galactosidase A Human genes 0.000 description 3
- 244000045232 Canavalia ensiformis Species 0.000 description 3
- 235000010520 Canavalia ensiformis Nutrition 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 3
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 125000000555 isopropenyl group Chemical group [H]\C([H])=C(\*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 3
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102100023164 Epididymis-specific alpha-mannosidase Human genes 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N N-acetylneuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 229940060155 neuac Drugs 0.000 description 2
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-GCHJQGSQSA-N (2r,3s,4s,5s,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-(4-nitrophenoxy)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-GCHJQGSQSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl prop-2-enoate Chemical compound OCCOC(=O)C=C OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-2h-chromen-2-one Chemical group C1=CC=CC2=C1OC(=O)C=C2C PSGQCCSGKGJLRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 4-nitrophenyl-α-d-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000220451 Canavalia Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LXBIFEVIBLOUGU-UHFFFAOYSA-N Deoxymannojirimycin Natural products OCC1NCC(O)C(O)C1O LXBIFEVIBLOUGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108010000540 Hexosaminidases Proteins 0.000 description 1
- 102000002268 Hexosaminidases Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 150000008493 L-fucopyranosides Chemical class 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 241000948268 Meda Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229930182475 S-glycoside Natural products 0.000 description 1
- 241001474728 Satyrodes eurydice Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- HIWPGCMGAMJNRG-JZSVMVJISA-N alpha-D-Galp-(1->2)-D-Galp Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HIWPGCMGAMJNRG-JZSVMVJISA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- LXBIFEVIBLOUGU-JGWLITMVSA-N duvoglustat Chemical compound OC[C@H]1NC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LXBIFEVIBLOUGU-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 244000013123 dwarf bean Species 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- ZLHYDRXTDZFRDZ-UHFFFAOYSA-N epsilon-aminocaproamide Chemical compound NCCCCCC(N)=O ZLHYDRXTDZFRDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJIDOLBZYSCZRX-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl prop-2-enoate Chemical compound OCOC(=O)C=C GJIDOLBZYSCZRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 1
- ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N isothiocyanate group Chemical group [N-]=C=S ZBKFYXZXZJPWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N methylidenecarbene Chemical group C=[C] SNVLJLYUUXKWOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001209 o-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(C([H])=C1[H])[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000962 organic group Chemical group 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N phosphamidon Chemical compound CCN(CC)C(=O)C(\Cl)=C(/C)OP(=O)(OC)OC RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
- C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til styr-
ing av regioselektiviteten for den dannede glykosidbindingen mellom glykosyldonator og glykosylakseptor ved en skjematisk fremstilling av en oligosakkaridforbindelse, som enten ut-
gjør eller er et fragment eller en analog av karbohydratdelen i et glykokonjugat, ved omvendt hydrolyse eller transglykosidering. Videre vedrører oppfinnelsen anvendelsen av det ved fremgangsmåte fremstilte produkt.
Det er i de senere år funnet at oligosakkariddelen av forskjellige glykokonjugater (spesielt glykoproteiner og glykolipider) utøver en mengde viktige funksjoner in vivo. ("Biology. of Carbohydrates", bind 2, Ginsburg et al, Wiley, New York (1984);
S. Hakomori, Ann. Rev. Biochem., bind 50, side 733-64). Det
er blant annet funnet at:
- karbohydratstrukturene har betydning for glykoproteinstabili-tet, aktivitet, lokalisering og nedbrytning;
- visse oligosakkaridstrukturer aktiveres veksters utsondring
av antimikrobielle stoffer;
- glykokonjugater finnes ofte igjen på forskjellige celles overflater, og er der blant annet viktige for cellens interaksjon med omgivelsene, idet de: - fungerer som reseptorer eller regulatorer ved binding til celleoverflate av f. eks. peptider, hormoner, toksiner, vir-us, bakterier, og ved celle-celle interaksjoner. - utgjør antigeniske determinanter (f. eks. blodgruppeantigener); - fungerer som celledifferensieringsantigen ved normal vevs-utvikling; - har betydning ved onkogener i det spesielle oligosakkarider finnes igjen som kreftassosierto antigeniske determinanter; - har betydning ved spermie-egg interaksjon og ved befruktning.
Et stort antall olisosakkaridstrukturer som inngår i forskjellige glykokonjugater er idag fastlagte. Likeså er den minste enheten (ofte et di- eller trisakkarid) som er nødvendig for den biologiske aktiviteten av et kjent oligosakkarid bestemt i mange tilfeller. Som en følge av dette pågår det i dag et intensivt arbeid innenfor universiteter og industri for å utvikle anvendelsen av biologiske aktive oligosakkarider innenfor en rekke forskjellige områder. Som eksempler kan nevnes:
- utvikling av nye diagnostika og blodbestemmelsesreagenser,
- syntese av høyspesifikke materialer for affinitetskromatografi ,
- tilveiebringelse av monoklonale antistoffer,
- fremstilling av cellespesifikk agglutineringsreagens r
- utvikling av nye terapeutiske fremgangsmåter ved hjelp av såkalt legemiddel-"targeting" hvor det utnyttes mikrosfærer (mindre enn 1 mikrometer) med innesluttet legemiddel og spesifikt oligosakkarid på mikro;sfærens overflate, - utvikling av en ny type terapi, som alternativt til anti-biotika, basert på inhibering av bakterier og viruser ved-heng på celleflater ved hjelp av spesiefikke oligosakkarider, - stimuleringer av veksters vekst og beskyttelse mot pato-gener.
For uten de ovenfor nevnte områdene regner man med et stort fremtidig marked for finkjemikalier basert på biologiske aktive karbohydrater.
Bare et titalls foskjellige monosakkarider inngår i glykokonju-gatenes karbohydratdel, nemlig D-glukose (Gle), D-galaktose (Gal), D-mannose, (Man), L-fukose (Fic), N-acetyl-D-galaktosamin (GalNAc), N-acetyl-D-glukosamin (GlcNAc), N-acetyl-D-neuraminsyre (NeuAc), D-arabinose (Ara) og D-xylose (Xyl)
(forkortelsene i parantes følger IUPAC-IUB's forkortede termi-nologi for monosakkarider, J. Biol. Chem, bind 257, s 3347-3354
(1982)). Antallet kombinasjonsmuligheter blir imidlertid til-nærmet uendelig stort fordi både anomer konfigurasjon (a-eller £-) i og posisjonen for den 0-glykosidiske bindingen kan varieres. Dette medfører store problemer ved syntese av oligo sakkarider ved konvensjonell organisk-kjemisk syntese. De organisk-kjemiske fremgangsmåtene som anvendes krever en omfattende beskyttelsesgruppekjemi med mange syntesetrinn, og derav følgende ofte lave totalutbytter. Fremstilling i indu-striell målestokk med denne teknikken er derfor vanligvis uhensiktsmessig i denne sammenheng.
Enzymer er naturens egne katalysatorer. De oppviser mange tiltrekkende egenskaper, som f. eks. høy regio- og stereo-selektivitet, samt høy katalytisk effektivitet ved milde betingelser. Man har i dag derfor store forhåpninger om å kunne utnytte enzymer for storskala selektiv syntese av oligosakkarider med færre syntesetrinn og dermed høyere samlede utbytter enn ved organisk-kjemisk metodikk.
I litteraturen finnes et stort antall enzymkatalyserte oligo-sakkaridsynteser beskrevet (K. Nisizawa et al, i "The Carbohydrates, Chemistry and Biochemistry, 2nd Ed. vol. IIA, pp 242-290, Academic Press New York (1970)). Både hydrolaser (glykosidaser EC nummer 3.2) og transferaser (EC nummer 2.4) har vært anvendt. Av disse har fremfor alt hydrolase vært anvendt for oligosakkaridsyntese. For å få i stand en glyko-sidsyntese med denne typen enzym har to fremgangsmåter vært anvendt: Omvendt hydrolyse (kondensasjons- eller likevekts-metode) samt transglykosidering (kinetisk fremgangsmåte).
(DOH er donatorsakkarid, DOR er donatorsakkarid med a- eller 6-glykosidisk bundet aglykon (=R), HOA er akseptorsakkarid og EH er enzym).
Omvendt hydrolyse kan gi høye utbytter dersom produktene er uoppløselige eller dersom reaksjonen kan utføres med organiske oppløsningsmidler for å senke vannkonsentrasjonen. Ved transglykosideringer har den høye enzymatiske aktiviteten overfor donatorstoffer som f. eks. fenyl- eller nitrofenylglykosider (R = fenyl, nitrofenyl i ligning 2), utnyttet for å få et høyt produktutbytte.
Selv om disse fremgangsmåter har vist seg fullt ut anvendelige i mange situasjoner har problemet vært å styre reaksjonene slik at donatorstoffene bindes O-glykosidisk til den ønskede posisjonen på akseptorstoffene. Vanligvis har 1-6-bindinger (eller bindinger til primære hydroksylgrupper på akseptorsakkaridene) blitt dannet, mens 1-2-, 1-3- og 1-4-bindinger, som oftest forekommer i glykonjugater, ikke har blitt dannet eller blitt dannet i mindre grad. Videre dannes ved tidligere kjente fremgangsmåter ofte isomere produktblandinger, som er vanskelig å rense, fordi den reduserte enden ikke er glyko-sidert og dermed foreligger i produktoppløsningen som både a- og 3-anomere. Videre har tidligere fremgangsmåter krevet ytterligere kjemisk modifisering av produktene før de har kunnet kobles til proteinet, lipider, osv.
Hensikten med foreliggende oppfinnelse er blant annet å eli-minere eller redusere ulempene ved kjente enzymatiske fremgangsmåter og krever spesielt rettet mot å gjøre en styring av regioselektiviteten ved enzymatisk karbohydratsyntese mulig, slik at den ønskede bindingen mellom donatorstoff og akseptorstoff dannes i høyere grad enn dersom ingen slik styring finner sted. Andre spesielle formål med oppfinnelsen er å lette rensningen av produktene og å muliggjøre direkte syntese av interessante glykosider og oligosakkarider.
Foreliggende fremgangsmåte vedrører følgelig en fremgangsmåte for styring av reqioselektiviteten for den dannede glykosidbindingen mellom glykosyldonator og glykosylakseptor ved enzymatisk fremstilling av den oligqsakkaride forbindelse, som enten utgjør eller er et fragment eller en analog av karbohydratdelen i et glykokonjugat ved omvendt hydrolyse eller transglykosidering. Fremgangsmåten er inntegnet ved at et donatorstoff, som utgjøres av et monosakkarid eller oligosakkarid eller et glykosid eller et monosakkarid eller oligosakkarid, bringes til å reagere med et akseptorstoff, som er et 0- , N-, C- eller S-glykosid, bestående av et monosakkarid, oligosakkarid eller en sakkaridanalog og i det minste en i 1- posisjonen 0-, N-, C- eller S-glykosidisk bundet aglykon,
i nærvær av en glykosidase, hvorved oc- eller -konfigurasjon velges på glykosidbindingen mellom glykosylgruppen og aglykonen i akseptorstof fet, og at oligosakkaridf orbindelse.n separeres fra reaksjonsblandingen.
Ved fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse anvender man som akseptorstoff et glykosid av et mono- eller oligosakkarid eller en analog derav med formel H0AR2, hvor R2er et glykosidisk bundet uorganisk eller organisk stoff (R2er en aglykon, dvs. ikke et karbohydrat). Produktene ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen betegnes med D0AR2, som symbo-liserer forbindelser av typen D (al-X) -A ( a) R2 , D ( al-X) A ( 3) R2 , D( 3l-X)A(a)R2 og D ( 3I-X) A ( 3) R2 (D står for mono- eller oligosakkarid; A står for mono- eller oligosakkarid eller en analog derav; X står for 2, 3, 4 eller 6; a henholdsvis3, beteg-ner konfigurasjonen på den 0-glykosidiske binding mellom D og A, samt på den 0-, N-, S- eller C-glykosidiske bindingen mellom A og R2). Eksempler på stoffer av denne typen er Gal(al-3)Gal(a)-0Me, Gal(al-3(Gal(3)-OMe, GlcNAc(3I-6)Man(a)-OMe og Man(al-2)Man(a)-0Me (forkortningene følger IUPAC-IUB's anbefalinger for forkortet oligosakkaridterminologi, J. Biol. Chem. bind 257, s. 3347-3354 (1982)).
Reaksjonsskjemaene for omvendt hydrolyse henholdsvis transglykosidering blir følgelig for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen :
Forskjellen mellom de tidligere nevnte reaksjoner og reaksjonen ifølge oppfinnelsen er at man i reaksjonene (1) og (2) som akseptorstoffer anvender stoffer av typen HOA, dvs. stoffer som ikke er derivatiserte i 1-posisjonen, mens man i foreliggende oppfinnelse anvender akseptorstoffer som' er derivatiserte i 1-posisjonen, dvs. av typen HOAR2. De tidligere produktene ble altså av typen DOA, mens produktene med fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen blir av typen DOAR2.
Donatorstoffene velges derimot avhengig av typen oligosakkarid som skal syntetiseres og om syntesen ønskes utført ved omvendt hydrolyse eller ved transglykosidering. Donatoren kan følgelig være et mono- eller oligosakkarid som er uderi-vatisert eller som er derivatisert i sin reduserte ende med et glykosidisk bundet organisk stoff. Det organiske stoffet kan være alifatisk, aromatisk, heterocyklisk, osv, og kan være glykosidisk bundet til D's i 1-posisjon (DOR, kfr. ligning 2) ia- eller g-konfigurasjon. Som eksempler på derivatiserte donatorstoffer som kan anvendes ifølge oppfinnelsen kan nevnes metyl-, CH0(CH7) -(n>0), fenyl-, p-nitrofenyl-, o-nitrofenyl-, 4-metylumbelliferylglykosider. Et stort antall donatorstoffer av denne typen er kommersielt tilgjengelige. Om så ikke er tilfelle er de lett å syntetisere ved organisk eller enzymatiske synteser og begrenser derfor ikke anvendelsen av oppfinnelsen. Eksempler på oligosakkar.ider som kan anvendes er laktose, raffinose, chitobiose og dimannosid. I litteraturen finnes godt beskrevet forskjellige glykosidaser med aktivitet overfor forskjellige typer alkyl-eller arylglykosider. Fagmannen kan derfor uten problemer velge egnet gruppe R med hensyn til behovene i den enkelte
situasjon.
Enzymet velges med hensyn til ønskene i den aktuelle situa-sjonen, først og fremst under hensyntagen til hvilket oligosakkarid som skal syntetiseres. F. eks. er en a-glykosidase påkrevet ved syntese av en ct-giykosidisk binding og en g-glykosidase ved syntese av en g-glykosidisk binding. Fore-trukne enzymer er endoglykosidaser og eksoglykosidaser fra gruppen EC 3.2. Eksempler på enzymer som kan anvendes ved oppfinnelsen er følgenge a- og 3-glykosidaser: D-mannosida-ser, D-galaktosidaser, L-fukosidaser, neuraminidaser, N-acetyl-D-glykosaminidaser, N-acety1-D-galaktosaminidase, xylosi-dase, heksosaminidase og øvrige glykosidaser i gruppen EC 3,2.
("Enzyme Nomenclature", Academic Press, side 1-606, New-York
(1979); "Enzymes", tredje opplag, Dixon et al, Longman, (1979)).
Renhetsgraden av det anvendte enzymet er ikke kritisk. Enzymet kan anvendes in situ, eller etter fullstendig eller delvis isolering fra sitt naturlige biologiske miljø. Intakte eller frysetørkede celler, såvel som mer eller mindre rensede enzymer, kan anvendes. Enzymet kan foreligge i krystallinsk form eller være innesluttet i miceller. Et meget stort antall glykosidaser fra forskjellige typer celler er kommersielt tilgjengelige. For øvrig er den biokjemiske litteraturen meget rik på detaljert informasjon om rensning og isolering av interessante glykosidaser.
Enzymene kan anvendes i oppløselig form, eller være immobilisert ved utfelling,.adsorpsjon, inneslutning, chelatering eller kovalent binding til en fast fase, så som et polymert stoff, eller derivat derav som er uoppløselig i protiske eller aprotiske cppløsningsmidler ("Methods in Enzymology", bind 44, Academic Press, 1976)). Hvilken form som velges er ikke kritisk for oppfinnelsen. Om enzymet anvendes i oppløselig form kan det først være modifisert kjemisk på en egnet måte for f. eks. å øke stabiliteten overfor forhøyede temperaturer eller organiske ko-oppløsningsmidler.Enzymer som er immobil isert til en uoppløselig polymer omfattende f. eks. agarose, cellulose, hydroksyetylakrylat, glass, silisiumoksyd, polyakrylamid, polyakrylat baserte plaster, osv, kan lett separeres fra produktblandingen og enzymet kan derved benyttes på nytt. Som ekstra fordel oppnås ofte en viss stabilisering overfor forhøyede temperaturer og organiske ko-oppløsnings-midler.
Valget av akseptorstoff bestemmes av hvilken typen oligosakkarid som ønskes syntetisert. Samme typer av monosakkarider som anvendes i donatorstoffene kan inngå i akseptorene, dvs. fortrinnsvis et eller flere av: Gle, Gal, Man, Fuc, Xyl, Ara, GlcNAc, GalNAc og NeuAc (forkortninger ifølge IUPAC-IUB's anbefalinger, se ovenfor). Akseptorstoffet skal være derivatisert minst en i 1-posisjonen 0-, N-, C- eller S-glykosidisk bundet aglykon.
Dessuten kan akseptorstoffet ifølge oppfinnelsen utgjøres
av sakkaridet som er derivatisert i en eller flere posisjoner ut over 1-posisjonen. En slik derivatisering kan f. eks. bestå i at en eller flere hydroksylgrupper er erstattet med hydrogen eller en organisk gruppe. Eksempel på en slik akseptorstoff er p-nitrofenyl-2-deoksy-a-D-galaktopyranosid.
En annen viktig sakkaridderivat utgjøres av stoffer der ring-oksygenet (dvs. C-5-oksygen i heksoser), er erstattet med hydrogen, svovel, osv. Eksempel på et slikt derivat er glukoseanalogen moranolin, hvor C-5-oksygen er erstattet med nitrogen. Oligosakkaridanaloger som er effektive inhibitorer overfor enzymer eller karbohydratdannende proteiner kan på denne måte syntetiseres ifølge oppfinnelsen.
Aglykonen R2i HOAR2 kan være av varierende typer, og valget avgjøres av behovene og ønskene i den aktuelle situasjonen^.
R2kan utgjøres av et uorganisk stoff, men fremfor alt kan
R2utgjøres av et organisk stoff av varierende type (alifatisk, aromatisk, heterocyklisk, heteroaromatisk eller varia-sjoner derav). R2kan være 0-, N-, S- eller C-glykosidisk bundet til akseptorsakkaridene. Som eksempel på egnede or ganiske aglykoner kan nevnes CH^(CH2)n~grupper, så som metyl- eller etylgrupper; fenyl-, p-nitrofenyl- og o-nitrofenyl-grupper; 2-brometyl-, trimetylsilyl- etyl- eller CH2=C(CH3)-C(0)-CH2CH2~grupper. Aglykonen kan videre være
en amino-, nitro- eller amidgruppe eller et fluoxigert stoff, eller den kan inneholde en fosfat-, sulfat- eller karboksylgruppe eller et derivat derav.
Produkter som er oppnådd med alkylglykosider (f. eks. metyl-, oktyl-, dodecylglykosider) som akseptorstoffer kan anvendes som inhibitorer ved agglutineringsforsøk eller ved affinitetskromatografi, anvendes ved inhiberingsbasert .terapi eller for legemiddel-"targeting", utnyttes som byggestener for fortsatt enzymatisk eller organisk syntese, osv. Nitrofenylglykosider kan enkelt reduseres ved f. eks. Pd/C til aminofenylglyko-sider, som direkte kommer eller etter kjemisk modifisering, kan kobles kovalent til forskjellige polymerer (dextran, polyetylenglykol, agarose, cellulose, silisiumoksyd, osv.), samt til peptider, proteiner, enzymer, lipider eller analoger derav, og ("Methods in Enzymology", Academic Press, bind 34, 44, 50 og 104). Dessuten kan aminogruppen lett omvandles til et flertall andre reaktive grupper, så som isotiocyanat, diazo, N-bromacetat, osv. Andre grupper som direkte eller etter kjemisk modifisering kan anvendes som såkalt avstands-giverarm ("Methods in Enzymology", bind 34, Academic Press) som beskrevet ovenfor for aminofenylgruppen og som anvendes som aglykon (R2~gruppen) ifølge oppfinnelsen er f. eks. 2-brometyl-, 2-(2-karbometoksyetyltio)-etyl, 2-aminoetyl- og 6-aminoheksylgrupper eller derivater derav. Som akseptorstof f er kan det også anvendes glykosider med polymeriserbar aglykon, f. eks. 2-hydroksyetylmetakrylat. Som eksempel på N-glykosidisk bundet aglykon kan nevnes 6-aminokaprorsyreamid (-NHCO(CH2)NH2).
En annen type glykosider er trimetylsilyletylglykosider som er interessante idet de tillater utskiftning av trimetylsily1-gruppen med en acetylgruppe med opprettholdt anomer konfigura sjon (K. Jansson et al,Tetrahedron, Lett., 27 (1986) 753-756). Et enkelt enzymatisk trinn kan derved muliggjøre syntesen av et stort antall glykosider av samme oligosakkarid-sekvens. Allyl- og benzylglykosider er lette å konvertere til fritt sukker. Allylgruppen tas av med f. eks. KotBu/DMSO 70°C etterfulgt av HgC^ .HgO/aceton. Benzylgruppen tas lett av med Pd/C. Oligosakkaridsekvenser med en fri reduserende ende kan dermed syntetiseres. Allylglykosider kan konvert-eres til tilsvarende 2,3-epoksypropylglykosider (R. Falent-Kwast, et al, Carbohydrate Res. 145 (1986) 332-340).
Andre aglykoner av spesiell interesse er aminosyrer (serin, treonin, hydroksyprolin, hydroksylysin, asparagin, osv), peptider, lipider samt derivater eller analoger av stoffer innenfor disse tre grupper. Aminosyre- og peptidglykosidene kan være beskyttet på sine amino- og/eller karboksylfunksjoner med vanlige grupper som anvendes innenfor peptidsyntesen (FMPC, CBZ, BOC, etc.) Med disse aglykonene kan det ifølge oppfinnelsen syntetiseres fragmenter eller analoger av glykokonjugater .
Som nevnt ovenfor er en viktig fordel med syntesefremgangsmåten ifølge oppfinnelsen at man styrer syntesen slik at den ønskede posisjonen på akseptorstoffet blir glykosidisk sub-stituert. Den ønskede oligosakkaridisomeren dannes derved i større grad enn tilfellet er med tidligere kjente fremgangsmåter. En annen fordel er at det samme enzymet kan kataly-sere syntesen av forskjellige isomerer i forskjellig grad avhengig av valget av aglykon og konfigurasjonen på dens glykosidiske binding til sakkariddelen i akseptorstoffet.
Rensningen av produktene kan også lettes i betydelig grad i de fleste tilfeller idet man ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen unngår problemet med isomerisering på det anomere karbonet i produktets reduserte ende.
Nok en fordel er at interessante finkjemikalier kan syntetiseres ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen. Stoffet som direkte kommer eller etter kjemisk modifisering, kan anvendes for f. eks. polymerisering, for immobilisering til faste bærere eller for binding til enzymer eller proteiner kan oppnås. Syntesen av glykopeptider og glykolipider og analoger derav, kan også lettes i betydelig grad ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, etter som aminosyre-,
peptid- eller lipidderivatet kan anvendes som aglykoner.
Syntesefremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan utføres ved svært forskjellige betingelser hva angår f. eks. temperatur, pH-verdi, buffer og konsentrasjon av reaktanter. Forskjellige ko-oppløsningsmidler (N,N-dimetylformamid, acetonitril, di-metylsulfoksyd, dioksan, pyridin, metanol, etanol, etylen-glykol, osv.) kan anvendes i varierende konsentrasjon sammen med vann. Dessuten kan reaksjonene utføres i to fasesys-temer, vann-organisk oppløsningsmiddel (cykloheksan, kloroform, metylenklorid, osv.). Enzymet kan bare være innesluttet i omvendte miceller (P. Luisi, Angew. Chem. bind 97, s-449-60 (1985)). Reaksjonene kan også utføres i rent organisk oppløsningsmiddel med utfelt enzym (Kazandjian et al, J. Amer. Chem. Soc., bind 107, (1985)). Reaksjonsbetingelsene
er ikke kritiske, men velges først og fremst med utgangspunkt i de i den aktuelle syntesen anvendte reaktantenes egenskaper og med tanke på praktiske hensyn. Som eksempel kan det nevnes at det med enzymet ofte er hensiktsmessig å arbeide ved romtemperatur, og dersom vannholdig medium benyttes ved en pH-verdi som ligger i intervallet 4-11. Det har vist seg at et høyere utbytte av produkt ofte oppnås ved anvendelse av en pH-verdi som ligger noe høyere enn den optimale pH-verdien for enzymet. Følgelig har pH 6,5-7,5 vært anvendt for oc-galaktosidase for kaffebønne og for a-mannosidase for snitte-bønne, mens en noe høyere pH-verdi er fordelaktig for 3-galaktosidase fra E. coli. Som buffersalter kan f. eks. na-triumacetat, kaliumacetat, kaliumfosfat eller natriumfosfat anvendes.
Organiske ko-oppløsningsmidler kan anvendes for å minimali- sere hydrolysereaksjonen. Av samme grunn kan tofasesysternet anvendes. Det har imidlertid vist seg at i visse tilfeller blir utbyttet betydelig høyere dersom bare vann anvendes.som oppløsningsmiddel. Dette gjelder for syntese av f. eks. Gal(al-3)Gal(a)-OMe og Gal(al-3(Gal(a)-OC6H4-N02-P med a-galaktosidase fra kaffebønner.
Temperaturen kan også varieres for å påvirke produktutbyttet og enzymets stabilitet. Den temperatur som ofte anvendes ligger i intervallet 5-55°C, men høyere temperaturer kan anvendes med termostabile glykosidaser, og med enzymer som er stabilisert mot varme-denaturering med f. eks. høy substrat-konsentrasjon (E. Johansson et al, Biotechnol. Lett. 8 (1986) 421-424) . Fordeler med høy temperatur er blant annet at høye substratkonsentrasjoner kan anvendes, dette reduserer vannaktiviteten og øker følgelig utbyttet av produktet. En annen fordel er at enzymaktiviteten øker, hvilket medfører kortere reaksjonstider ved høyere temperaturer. Dette har blant annet den fordelen at glykosider som hydrolyseres rela-tivt langsomt ved romtemperatur, f. eks. metyl- eller etyl-glykosider, med fordel kan anvendes som glykosyldonatorer ved høyere temperaturer (50-60°C). Grensen for hvor høy temperatur som kan anvendes utgjøres av enzymets termostabilitet i reaksjonsmediet. En lavere temperatur har i visse transglykosideringer vist seg å gi enøkning av utbyttet av pro-duktglykosid. Følgelig oppnås høyere utbytte ved 20°C av Gal(al-3)Gal(a)-OMe med 0,15 M innledende konsentrasjon av donator og 0,45 M konsentrasjon av akseptor meda~galaktosidase fra kaffebønner når reaksjonen utføres ved 20, 40 henholdsvis 50°C.
Normalt anvendes mettede oppløsningen av donator- og akseptorstof f er for å oppnå maksimale utbytter av produktglykosider. Dette medfører 0,05-0,2 molare oppløsninger av p-nitrofeny1-glykosider og 0,3-0,6 molare oppløsninger av metylglykosider ved romtemperatur og med vann som oppløsningsmiddel. Ko-oppløsningsmidler, som metanol,N,N-dimetylformamid, kan anvendes for å øke oppløseligheten av glykosider med hydrofob aglykon, f. eks. p-nitrofenylglykosider. Reaksjonen kan følges ved TLC, HPLC eller med spektrofotometrisk bestemmel-se av frigjort aglykon (f. eks. p-nitrofenol, 400 nm). Når maksimalt utbytte av produktet glykosidet er oppnådd avbryt-es reaksjonen ved denaturering av av anzymet ved pH-forandring, temperaturforhøyelse og/eller tilsats av organisk ko-oppløs-ningsmiddel (f. eks. etanol). Vanligvis er oppvarming til 80-85°C i 3-5 minutter etterfulgt av tilsats av etanol til en konsentrasjon på ca. 80 % tilstrekkelig.
Rensning av produktet kan skje ved anvendelse av forskjellige teknikker. Det kan f. eks. anvendes søylekromatografi. med f. eks. med metylenklorid:metanol:vann (f. eks. 6:4:1 v/v/v) som elueringsmiddel og silisiumoksyd som fast fase, hvor etter det delvis rensede produkt glykosidet etter tørkning ved lavt trykk acetyleres med eddiksyreanhydrid og pyridin, (f. eks. 1:1 v/v). Et nytt søylekromatografisk trinn (silisiumoksyd, elueringsmiddel, f. eks. etylacetat:isooktan) gir vanligvis rent acetylert produkt. Deacetylering i tørt MeOH med en katalytisk mengde natriummetoksyd gir ofte krystallinsk pro-duktglykosid. Rensning av produkter med markert hydrofobe aglykoner (f. eks. Gal(al-3)Gal(a)-0Cb ,H 4 .N0 Z„-p) kan ofte finne sted i et trinn med HPLC-apparatur og C-^g-silisiumoksyd.
Syntesefremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan generelt anvendes for syntese av oligosakkaridsekvenser som inngår i glykoproteiner eller glykolipider ("Biology of Carbohydrates", bind 2 (1984), V. Ginsburg og P.W.Robbins, red. Wiley&
Sons, Neew York; "The Glycoconjugates" bind I-V, Academic Press, New York; S. Hakomori, Ann. Rev. Biochem. bind 50,
side 733-64 (1981)).
Spesielt interessante er disse strukturenes minste fragment som er tilstrekkelig til å overføre biologisk informasjon.
Som eksempler på viktiqe slike strukturer kan nevnes blod-gruppedeterminantene, spesifikke reseptorer for mikroorganis-mer (Gal(al-3)Gala-, E. coli K88, GlcNaC(81-3)Gal 3-, S. pneumoniae, Gal(al-4)GalB-, p-fimbrierte E. coli, osv), diff- erensieringantigenene i, I, CO 514, 38.13, osv (se tabell 1 og 2 i oversiktsartikkelen av T. Feizu, Nature, bind 314, side 53-57 (1985)).
F. eks. kan det fremstilles oligosakkaridsekvensen som inngår i følgende N-bundne oligosakkarider, som er representa-tive for tre klasser av modne asparaginbundne oligosakkarider, nemlig (a) høyere mannosetype, (b) kompleks type, (c) hybrid-type, (se "Biology of Carbohydrates11, bind 2 , (1984), V. Ginsburg og P.W. Robbins, red. Wiley&Sons, New York):
Oligosakkaridsekvenser som inngår i følgende O-bundne oligosakkaridstrukturer kan fremstilles (se "Biology of Carbohydrates", bind 2, (1984), Wilev, New York): Ytterligere strukturer eller fragmenter derav som kan fremstilles ifølge oppfinnelsen er følgende (se S. Hakomori, Ann. Rev. Biochem. bind 50, s. 739 (1981)): Gangl io-ser ien<a>Gal31-»3GalNAc31-*4Gal<b>Bl-MGlcBl-»lCer GalNAc.31-*4Galb8143GalNAc31->4Galb31-*4Glc31->lCer Globo-serien cGalNAc 31->3Galal-»4Gal 31-»4Glc 31-»lCer GalNAc 81-»3Gal 31+3Gal 31-»4Glc 31->lCer Lakto-serien dGal31->4GlcNA31-^3Gal61-*4Glc31-»lCer Gal 81->3GlcNAc 31+3Gal 31->4Glc 31*lCer dGal ei-*4GlcNAc 31-*3Gal 31-»4GlcNAc 31-»3Gal 31*4Glc 31-»lCer
Muk o-serien<e>Gal 31->3Gal 31->4Glc 31^1Cer
eGal 31^3Gal 31^3Galf 31 *4Glc 31^1Cer Gal-serien Galal-*4Gal81-lCer
Nedenstående tabell viser noen foreslåtte reseptorstrukturer for mikroorganismen og toksiner som helt eller delvis kan fremstilles ifølge oppfinnelsen:
a) N. Firon, 1. Ofek og W. Sharon, Infect, Immun., 43, 1984,
S 1088, E.H. Beachey (red) Bact. Adherence, Receptors and
Recognition, Bind 8, Chapman and Hall, N.Y. 1980.
b) H. Leffler og C. Svanborg-Ed'en, FEMS Microbiol. Letters 8, 1980, s. 127, G. Kallenius, R. Mollby, S.B. Svensson,
J. Winberg. A. Lundblad, S. Svensson, og B. Cedergren, FEMS Microbiol. Letters 71 1980, s 297. c) 0. Parkkinen, J. Finne, M. Achtman, V, Vaisanen, og T.K. Korhonen, Biochem, Biophys. Res. Commun. 111, 1983, s. 456. d) V. Vaisånen-Rhen, T.K. Korhonen, og J. Finne, FEBD Lett. 159, 1983, s. 233. e) M.J. Anderson, J.S. Whitehead, og Y.S. Kim, Infect. and Immun. 29, 1980, s. 897. f) M. Bertolini og W. Pigman, Carbohydr. Res. 14, 1978, s. 53.
g) J.E. Brown. K.-A. Karlsson, A. Lindberg, N. Stromberg,
og J. Thurin i M.A. Chester, D. Heinegård, A. Lundblad, og
S. Svensson (red.), Proe. 7th Int, Symp. Glycoconjugates, Lund 1983, s. 678. h) A. Gunnarssom. P.-A. Mårdh, A. Lundblad, S. Svensson, Infect. Immun, 45, 1984, s. 41.
i) C. Svanborg-Edén, B. Andersson, L.Hageberg, H. Leffler,
G. Magnusson, G. Moori, J. Dahmén og T. Soderstrom, Ann.
N.Y. Acad. Sei. 409, 1983, s. 560.
j) T. Feizi og R.A. Childs, Trends. Biochem. Sei., 10, 1985, s. 24 .
k) G.F. Springer og R.R. Desai. Ann. Clin. Lab. Sei., 1985,
s. 294.
1) J. Holmgren, Nature, 292, 1981, s. 431.
Av stor interresse er også det store antallet forskjellige oligosakkaridsekvenser i glykokonjugat som forekommer i forskjellige humane tumorer, og som fungerer som tumorassosierte antigener (se bl.a. Feizi, Nature, 314 (1985)), hvor følgende strukturer beskrives:
Oligosakkaridsekvenser inneholder monosakkarid-analoger,
f. eks. fluor-, fosfor-, amino- eller tioanaloger, er av stor interesse for studier av glykokonjugatmetabolisme, og potensielt for kemoterapi ved kreft. ("The Glycoconjugates" bind IV, 1982) Academic Press). Visse oligosakkaridanaloger har vist seg å ha en høyere assosiasjonskonstant til lektiner enn den naturlige reseptor. Dette er av stor interesse for utviklingen av følsomme diagnostika og effektive tera-peutika basert på karbohydratstrukturer.
Som tidligere nevnt kan et stort antall aglykoner anvendes
Ved f. eks. å velge allyl-, benzyl- eller trimetylsilylglyko-sider som akseptorer kan det frie sukkeret lettere oppnås fra produktglykosider i høyt utbytte. Enzymatisk syntese av frie oligosakkaridstrukturer som tidligere ikke kunne syntetiseres med glykosidaser kan dermed fremstilles med fremgangsmåten
ifølge oppfinnelsen.
Enkle glykosider (f. eks. metylglykosider) kan anvendes ved inhiberingsstudier med antistoffer (Slama et al, Biochemistry, (1980) 19(20), 4595-4600) og lektiner (Sharon og Lis, Science, (1972), 177, 949-959). Glykosider med kromofora eller fluorescenta aglykoner (f. eks. p-nitrofenyl, 4-metyl-umbelliferyl) kan anvendes for analyse av enzymer (D.E. Sykes et al, Carbohydrate Res., 116 (1983) 127-138). Glykosider som er egnede for kovalent binding til peptider, proteiner, lipider, bærere for kromatografi, osv. kan også syntetiseres ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
Noen eksempler på hvordan oppfinnelsen kan komme til praktisk anvendelse er beskrevet i de etterfølgende eksempler, som på ingen måte er ment å begrense oppfinnelsens omfang (forkortelsene i eksemplene følges lUPAC-IUB's anbefalinger, J.Biol. Chem., bind 257, s 3347-3354 (1982)).
Eksempel 1
Syntese av Gal(a 1-3)Gal(a)-OMe (metyl-3-O-a-D-galaktopyra-nosyl- g- D- galaktopyranosid)
A: 1,8 g p-nitrofenyl-a-D-galaktopyranosid (Gal(a)-OPhN02~
p, og 18 g 1-0-me ty l-a--D-galaktopyranosid (Gal ( )-OMe) ble oppløst i 110 ml 0,05 M vannoppløsning av natriumfosfat (pH 6,5), og 40 ml N,N-dimetylformamid. a-galaktosidase (a-D-galaktosid galaktohydrolase; EC 3.2.1.22, 0,2 ml, 10 enheter Boehringer) fra kaffebønne ble tilsatt. Etter 7 døgn ved romtemperatur ble reaksjonsblandingen oppvarmet til 80°C i 5 minutter, og produktet ble renset ved søylekromatografi (silisiumoksyd, "Kiselgel 60", 230-400 mesh, Merck, kloroform: MeOH:H20, 6:4:0,5 v/v) og ble peracetylert med eddiksyreanhyd-drid og pyridin. Etter ytterligere søylekromatografisk trinn (silisiumoksyd, isooktan:etyl,cetat, 1:1 v/v) og deacetylering i MeOH med katalytiske mengder natriummetoksyd ble oppnådd ved krystallinsk Gal(al-3)Gal(a)-OMe. Produktet ble analysert med NMR, HPLC, (>99 % renhet) ,og metyleringsanalyse.
B. 0,31 g Gal(a)-OPhN02~p og 0,91 g Gal(a)-OMe oppløses i 10
ml buffer (se eksempel IA ovenfor). a-galaktosidase (kaffe-bønne, Boehringer, EC 3,2,1,22, 5 enheter) ble tilsatt og reaksjonen fikk fortsette ved romtemperatur i 72 timer. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 80°C i 5 minutter og produktet ble isolert som beskrevet i eksempel IA ovenfor. Utbyttet av Gal(al-3)Gal(a)-OMe var 180 mg eller 39 % av tilsatt Gal(a)-OPhN02-p.
Eksempel 2
Syntese av Gal( al- 3) Gal( B)- OMe og Gal( gl- 6) Gal( B)- OMe
0,6 g Gal(a)-OPhN02~p qg 4 g Gal(B)-OMe ble oppløst i 22 ml 0,05 M vannoppløsning av natriumfosfat (pH 6,5) og 9 ml N,N-dimetylformamid. a-galaktosidase fra kaffebønne (EC 3.2.1.
22; 0,2 ml, 10 enheter) tilsettes og reaksjonen fikk foregå ved romtemperatur i 90 timer. Produktene ble renset ved søyle-
kromatografi p.s.s som beskrevet i eksempel 1. Acetylerte produkter ble analysert med 300 MHz NMR (<1>H,<13>C). Utbyttet av Gal(a1-6(Gal(3)-OMe var 125 mg og av Gal(al-3)Gal(6)-OMe 65 mg eller 16 henholdsvis 8 % av den tilsatte mengde Gal (a) - 0PhN02-p.
Eksempel 3
Syntese av Gal(al-3)Gal(a)-OPhN02~p og Gal(al-3)Gal(a)-OPhN02-p
A. 0,9 g Gal(a)-OPhN02~p oppløses i 24 ml 0,05 M vannoppløs-ning av natriumfosfat (pH 6,5) og 8 ml N,N-dimetylformamid. a-galaktosidase fra kaffebønne (EC 3.2.1.22; 0,2 ml; 10 enheter) tilsettes og reaksjonen fikk foregå i 38 timer ved romtemperatur. Produktene ble separert ved søylekromatografi (silisiumoksyd, "Sephadex G10") og ble analysert ved UV (305 nm), 200 MHz NMR ("""H,<13>C) og med mety leringsanalyse. Utbyttet av Gal(al-3)Gal(a)-OPhN02-p var 150 mg og av Gal(al-2)Gal(a)-OPhN02-p 25 mg, dvs. 13 henholdsvis 1,7 % av den anvendte mengden Gal(a)-OpNP.
B. 1,35 g Gal(a)-OPhN02-p ble oppløst i 10 ml buffer (se eksem-pl 3A ovenfor) og 5 enheter a-galaktosidase fra kaffebønne (se eksempel 3A ovenfor) ble tilsatt. Reaksjonen fikk foregå
i 76 timer ved 50°C. Reaksjonen ble avbrutt ved oppvarming av blandingen til 80°C i 5 minutter. Produktene ble isolert ved søylekromatografi, ("Sephadex G10", Pharmacia, og silisiumoksyd, Merck, "Kieselgel"60", 23-400 mesh, etylacetat:iso-propanol:vann 6:2:1, v/v/v.) som beskrevet i eksempel 3A ovenfor. Utbyttet av Gal(al-3)Gal(a)-OPhN02og av Gal(al-2)Gal(a)-0PhN02~p var 23 % (236 mg) henholdsvis 3,5 % (36 mg).
C. Dette forsøket ble gjennomført som beskrevet i eksempel
3A, under anvendelse av a-galaktosidase fra kaffebønner, som var immobilisert med tresylkloridaktivert agarose (Pharmacia)
(K. Nilssom et al, Biochem. Biophys, Res. Comm. 102 (1981) 449-457). 0,5 g 11 enhetera~galaktosidase-agarose ble tilsatt til 1,5 g Gal(a)-OPhN02~p oppløst i 23 ml buffer og 10 ml
DMF. Reaksjonen fikk forløpe under mild omrøring i 12 dager ved romtemperatur. Avslutning og isolering av produktene som beskrevet ovenfor ga 16 0 mg Gal( al-3)Gal( a) -OPhN02~p eller 14 % av det teoretiske utbyttet. Den immobiliserte a-galaktosidase kunne anvendes for gjentatt syntese med bare noen prosent nedsatt katalytisk aktivitet.
Eksempel. 4
Syntese av Gal(al-2)Gal(a)-OPhN02-o
2 g Gal(a)-OPhN02~o oppløses i 30 ml buffer (se eksempel IA) og 14 ml DMF. a-galaktosidase (se eksempel IA, 20 enheter) ble tilsatt og reaksjonen fikk fortsette i 53 timer ved romtemperatur. Reaksjonen ble avsluttet og produktene ble isolert og analysert som beskrevet i eksempel IA. Utbyttet av ren krystallinsk Gal(al-2)Gal(a)-OPhN02~o var 60 mg eller 4 % av det teoretiske utbyttet.
Eksempel 5
Syntese av Gal(al-2)Gal(a)-OPhN02~p med a-galaktosidase
fra Aspergillus niger.
Syntesen ble utført som overstående p.s.s. som beskrevet
i eksempel 3 men med a-galaktosidase (EC 3.2.1.22) fra Aspergillus niger. I dette tilfellet ble det oppnådd 40 mg Gal(al-3)Gal(a)-OPhN02~p og 4 mg av et isomert produkt (sann-synligvis (al-2)-isomeren) samt spor (ca. 1 mg) av ytterligere et isomer produkt. Disse isomerene ble separert i "Sephadex G10"-trinnet ifølge eksempel 3A.
Eksempel 6
Syntese av Man (4 1+2)Man(a)-OPhN02~p (p-nitrofenyl-2-0-a-D- mannopyranosyl- a- D- mannopyranosid)
0,63 g Man(a)-OPhN02~p ble oppløst i 33 ml 0,05 M natriumfosfat (pH 6,5) med 10 yM ZnCl2.lO ml N,N-dimetylformamid ble tilsatt, a-mannosidase (a-D-mannosid mannohydrolase; EC 3,2,1.24; 0,3 ml; 10 enheter, Boehringer-Mannheim) fra Canavalia ensiformis ble tilsatt og reaksjonen fikk foregå i 6
timer ved romtemperatur og 36 timer i et kjølerom (4°C). Produktene ble isolert ved søylekromatografi (silikagel)
og analysert med NMR og metylenanalyse) . Utbyttet av Man (et 1-2)Man(a)-OPhN02~p var 36 mg. Produktet var mer enn 95% ren ifølge NMR og øvrige isomere ble dannet i neglisjerbar grad.
Eksempel 7A
Syntese av Man(al-2Man(a)-OMe (mety1-2-0-a-D-mannopyranosy1-a-D-mannopyranosid) og av Man(a 1-6)Man(a)-OMe (mety1-6-0-g- D- mannopyranosy1- a- D- mannopyranosid)
0,6 g p-nitrofenyl-a-D-mannopyranosid (Man(a)-0PhN02~p) og 6 g 1-0-metyl-a-D-mannopyranosid (Man(a)-OMe) oppløses i
38 ml 0,05 M vannoppløsning av natriumfosfat (pH 6,5) méd
10 yM ZnCl2. N,N-dimetylformamid ble tilført, a-mannosidase (EC 3.2.1.24; 0,3 ml; 15 enheter) fra Canavalia ensiformis ble tilsatt og reaksjonen fikk foregå ved romtemperatur i 14 timer. Produktene ble renset på silisiumoksydsøyler tilsvarende syntesen i eksempel 1 og 2. Produktene ble analysert med NMR, metyleringsanalyse og HPLC. Det ble oppnådd 180
mg av Man(al-2)Man(a)-OMe qg 28 mg av Man(al-6(Man(a)-OMe, dvs. 20 henholdsvis 3 % av anvendt mengde Man(a)-OPhN02~p.
Eksempel 7B
Syntese av Man( gl- 2) Man( g)- OMe og Man( al- 6) Man( a)- OMe
20 g Man(a)-OMe oppløses i 45 ml buffer (se eksempel 7A) og
5 ml MeOH. a-mannosidase (se eksempel 7A, 50 enheter) tilsettes og reaksjonen fikk fortsette i 3 dager ved 55°C. Reaksjonen ble avsluttet og produktene isolert som beskrevet i eksempel 7A.
Eksempel 8
Syntese av Man(al-2)Man(a)-OEtBr ( 2-brometyl-2-0-a- mannopyran-osy1- a- D- mannopyranosid
0,9 g Man(a)-OPhN02~p og 2,7 g 2-bromety1-a-D-mannopyranosid (Man(a)-OEtBr) oppløses i 20 ml 0,05 M vannoppløsning av na-
triumfosfat. (pH 7,5). 7 ml N,N-dimetylformamid blir tilsatt, a -mannosidase (EC 3,2,1,24, 0,3 ml, 15 enheter) fra Canavalia ensiformis ble tilsatt og reaksjonen foregår ved romtemperatur i 72 timer. Produktet ble renset analogt beskrivelsen i eksempel 7A. Produktet ble analysert med NMR (200 MHz,<1>!!, 13C) . 200 mg Man ( al-2) Man ( g) -OetBr oppnås
og ca. 30 mg av et uidentifisert isomerprodukt (sannsynlig-vis ( al-6) isomeren) .
EksempeJ 9
Syntese av Man ( al- 2) Man ( al- 2) Man ( g)- OMe
Dette stoff ble dannet som et biprodukt ved storskalasyn-tese av Man ( cd-2) Man ( g) -OMe og Man ( gl-6) Man-( o) -OMe fra 20
g Man ( a)-OPhN02-p og 45 g Man ( g)-OMe med 1 ml (50 enheter)
av g<->mannosidase fra Canavalia ensformis (EC 3.2.1.24) og betingelser forøvrig ifølge eksempel 7A. Produktet ble separert fra disakkaridfraksjonene ved søylekromatografi ("Sephadex G10", silisiumoksyd). Det acetylerte produkt ble separert fra isomere produkter (ca. 35 % av den samlede mengde) ved søylekromatografi (silisiumoksyd). 250 mg acetylert Man(<g>l-2)-Man(<g>l-2)Man(<g>)-OMe ble oppnådd. Produktet ble
1 13
analysert ved NMR (200 MHz, h,C) og med metyleringsanalyse.
Eksempel 10
Syntese av Gal(81-3)Gal(8)-OMe (metyl-3-(0-8~D-galaktopyra-nosyl- B- D- galaktopyranosid)
A. 2,7 g o-nitrofenyl-B-D-galaktopyranosid (Gal(8)-OPhN02~o) og 5 g Gal(8)-OMe ble oppløst i 35 ml 0,05 M vannoppløsning av natriumfosfat (pH 6,8) med 1 mMMgCl2og 10 mM merkapto-etanol. 15 ml N,N-dimetylformamid ble tilsatr. 8-galaktosidase (8-D-galaktosid galaktohydrolase,EC3.2.1.23, 100 enheter, Sigma Laboratories) fra Escherischia coli ble tilsatt og reaksjonen fikk foregå i romtemperatur i 24 timer. Produktene ble separert ved søylekromatografi (silisiumoksyd og "Sephadex G10"). Etter acetylering og kromatografi på silis- iumoksydsøyler ble det oppnådd 1,3 g acetylert Gal(81-3)Gal (8)-OMe og 16 0 mg Gal( 1-6)Gal(8)-Orne (acetylert). Analyse med 200 MHz NMR (<1>H,<13>C).
B. Dette forsøket var analogt eksempel 10A men det ble anvendt 9,0 g Gal(8)-OPhN02-o, 15 g Gal(8)-OMe og 8-galaktosidase fra E. coli, immobilisert på tresyl-agarose. (se eksempel 3C). Glykosidasen ble oppløst i 105 ml buffer (se eksempel 10A) og 45 ml DMF. 8-galaktosidase-agarose (0,2 g, 300 enheter) tilsettes, og reaksjonen fikk fortsette i 4 dager ved romtemperatur under svak omrøring. Produktene ble isolert og analysert som beskrevet i 10A. Utbyttet av Gal(81-3)Gal(8)-OMe, omkrystallisert fra MeOH, var 4 g (29 %) og av Gal(81-6)Gal(8)-OMe 400 mg(3 %).
Eksempel 11
Fremstilling av Gal( 81- 6) Gal( 8)- OMe
Dette forsøket fra analogt med eksempel 10A, men det ble anvendt 2,7 g Gal(8)-OPhN02~o, 5 g Gal(a)-OMe og 1,0 mg 8~galaktosidase fra E.coli (se eksempel 10A) oppløst i 35 ml buffer (se eksempel 10A) og 15 ml DMF. Etter reaksjonen i 5 timer ved romtemperatur ble produktet isolert og analysert som beskrevet i eksempel 10. Utbyttet av krystallinsk Gal(81-6) Gal (3)-OMe var 450 mg. Andre isomerer ble dannet i negli-sjerbare mengder.
Eksempel 12
Enbeholdersyntese av Gal(81-3)Gal-OCH2OC(O)C(CH3)=CH2og Gal(8)-OCH2CH2OC(0)C(CH3)=CH2
Dette eksempel viser fremstillingen in situ av akesptorglyko-sider. 18 g laktose ble oppløst i en blanding av 160 ml buffer (se eksempel 10A), 75 ml DMF, og 15 ml hydroksymetyl-akrylat. 8-galaktosidase-agarose (1,5 g, 2250 enheter, se eksempel 10B) ble tilsatt og reaksjonen fikk foregå ved romtemperatur under svak omrøring. Etter 6 dager ble de immo biliserte enzymet filtrert fra, og produktene ble isolert ved søylekromatografi. Det ble oppnådd 2,6 g Gal($)-OCH2CH2OC (0) C (CH3) =CH2 og 110 mg Gal ( $1-3) GalOCH2CH2OC (0) C (CH-j) = CH2.
Eksempel 13
Syntese av Gal($1-3)GlcNAc($)-OCH2CH2Si(Me) 3
6 g Gal($)-0PhN02-o og 1 g GlcNAc($)-0(CH2)2~Si(CH3) blir suspendert i 30 ml 0,1 M natriumfosfat. pH 7,0, inneholdende den ovenstående væske av et ekstrakt oppnådd av 10 g okse-testikler. Reaksjonen fikk fortsette i 2 dager ved 40°C. Reaksjonen ble avsluttet og produktet ble isolert ved søyle-kromatograf i som beskrevet i eksempel 10A. Utbyttet av Gal($l-3)GlcNAc-($)-0-(CH2)2Si(CH3)3var 200 mg etter deacetylering.
Eksempel 14
Syntese av GlcNac($ 1- 6) Man( g)- OMe.
3 g GlcNAc($)-0PhN02~p (p-nitrofenyl-N-acetyl-$-D-glukosaminid) og 16 g Man(g)-OMe oppløses i 88 ml buffer (se eksempel IA) og 12 ml DMF. N-acetyl-$-D-glukosaminidase (snittebønner; EC 3.2.1.30, 20 enheter, 0,3 ml, Sigma Laboratories) ble tilsatt og reaksjonen fikk fortsette i 3 dager ved romtemperatur. Reaksjonen ble avsluttet og produktet isolert og analysert
som beskrevet i eksempel IA. Utbyttet av ren krystallinsk GlcNAc($1-6)Man(<g>)-OMe var 35 0 mg.
Eksempel 15
Syntese av Fuc( gl- 3) Gal( g)- OMe
0,31 g p-nitrofeny1-g<->L-fukopyranosid (Fuc(a)-0PhN02) og 3 g Gal(<g>)-OMe opløses i 25 ml buffer (0,05 M natriumfosfat, pH 6,2), g<->L-fukosidase (oksenyre; EC 3.2.1.51. 0,3 ml, 1 enhet, Sigma Laboratories) ble tilsatt og reaksjonen fikk fortsette ved 37°C i 2 dager. Reaksjonen ble avbrutt og produktet ble isolert og analysert som beskrevet i eksempel IA. Utbyttet av peracetylert Fuc(gl^4)Gal(a)-OMe var 35 mg.
Claims (25)
1. Fremgangsmåten for styring av regioselektiviteten for den dannede glykosidbindingen mellom glykosyldonator og glykosylakseptor ved enzymatisk fremstilling av en oligosakkaridforbindelse, som enten utgjør eller er et fragment eller en analog av karbohydratdelen i et glykokonjugat,
ved omvendt hydrolyse eller transglykosidering, karakterisert ved at et donatorstoff, som utgjøres av et monosakkarid eller oligosakkarid eller et glykosid av et monosakkarid eller oligosakkarid, bringes til å reagere med et akseptorstoff, som er et 0-, N-, C- eller S-glykosid, bestående av et monosakkarid, oligosakkarid eller en sakkarid-analog og i det minste en i 1-posisjonen 0-, N-,
C- eller S-glykosidisk bundet aglykon, i nærvær av en glykosidase, hvorved a- eller $-konfigurasjon velges på glykosidbindingen mellom glykosylgruppen og aglykonen i akseptorstoffet, og at oligosakkaridforbindelsen separeres fra reaksjonsblandingen.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at det i donator- og akseptorstoffet karbohydratdel inngår et eller flere av monosakkaridene L-fukose, D-galaktose, D-mannose, N-acetylneuraminsyre, N-acetyl-D-galaktosamin og N-acety1-D-glykosamin.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at det i akseptorstoffet inngår en analog av noen av monosakkaridene L-fukose, D-galaktose, D-mannose, N-acetyl-D-galaktosamin og N-acetyl-D-glukoksamin.
4. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-3, karakterisert ved at aglykonen er et alifatisk eller aromatisk stoff.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,
karakterisert ved at aglykonen utgjøres av en glykosidisk bundet metyl-, CH3 (CH2 )n~ , fenyl-, p-nitrofenyl-, o-nitrofenyl-, 2-brometyl-, trimetylsilyletyl- eller en CH2 =C(CHg)-C(0)-OCH2 CH2 -gruppe.
6. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-4, karakterisert ved at aglykonen utgjøres av et fluorert stoff.
7. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-4, karakterisert ved at aglykonen er en amino-, nitril- eller amidgruppe eller inneholder en slik gruppe.
8. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-4, karakterisert ved at aglykonen inneholder en fosfat-, sulfat- eller karboksylgruppe, eller et derivat derav.
9. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-4, karakterisert ved at aglykonen. er et organisk stoff som direkte eller etter kjemisk modifisering, kan bindes kovalent til lipider, peptider, proteiner, enzymer eller til bærematerialer som anvendes i affinitetsfordelingssystem-er, ved affinitetskromatografi, ved diagnostikk eller terapi.
10. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at aglykonen er polymeriserbar.
11. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-6, karakterisert ved at aglykonen er en aminosyre, peptid, lipid eller et derivat eller en analog derav.
12. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at donatoren er laktose, raffinose, chitobiose eller dimannosid.
13. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av kravene 1-11, karakterisert ved at donatorstoffet er et mono- eller oligosakkarid med et cx- eller g-glykosidisk bundet organisk stoff.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 13,
karakterisert ved at det organiske stoffet er en metyl-, CH^C CI^ ) -/ fenyl-, p-nitrof enyl-, o-nitrofenyl- eller 4-mety1-umbellifenylgruppen.
15. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved enzymet er en endoglykosi-dase og/eller en eksoglykosidase tilhørende gruppen EC 3.2.
16. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at enzymet er en galaktosidase, mannosidase, N-acetyl-heksosaminidase, N-acetylgalaktO' saminidase, N-acetylglykosaminidase, sialidase eller fukosi-dase.
17. Fremgangsmåten ifølge et eller flere av de foregående krav karakterisert ved at det anvendte enzymet er termostabilt.
18. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at enzymet anvendes in situ eller etter først å være helt eller delvis isolert fra sitt naturlige biologiske miljø.
19. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at enzymet er krystallinsk form.
20. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at enzymet er innesluttet i miceller.
21. Fremgansg.småte ifølge et eller flere av de foregående kra karakterisert ved at emzymet er kovalent modi fisert med et organisk stoff.
22. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at enzymet er immobilisert ved utfelling, absorbsjon, inneslutning, relatering eller kovalent binding, til et polymert stoff eller derivat derav, som er uoppløselig i protiske eller aprotiske oppløsningsmidler.
23. Fremgangsmåte ifølge krav 22,
karakterisert ved at det polymere stoffet utgjøres av agarose, cellulose, silisiumoksyd, polyakrylamid eller polyakrylatbaserte plaster.
24. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at en oligosakkaridforbindelse med biospesifikk affinitet til et annet stoff syntetiseres og isoleres.
25. Anvendelse av et produkt oppnådd ifølge krav 1, direkte eller etter kjemisk modifisering, for affinitetskromatografi, affinitetsfordeling i tofasesystem, diagnostikk, terapi, immunisering, immunologisk karakterisering, endring av enzymer/ proteiners egenskaper, måling av enzymaktivitet, påvirkning av kjønnsceller, eller modifisering av forsvar/tilvekstmeka-nismer hos vekster.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8505842A SE451849B (sv) | 1985-12-11 | 1985-12-11 | Sett att syntetisera glykosidiska bindningar samt anvendning av pa detta sett erhallna produkter |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO864956D0 NO864956D0 (no) | 1986-12-09 |
| NO864956L true NO864956L (no) | 1987-06-12 |
Family
ID=20362418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO864956A NO864956L (no) | 1985-12-11 | 1986-12-09 | Fremgangsmaate for styring av regioselektiviteten for glykosidbindinger. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4918009A (no) |
| EP (1) | EP0226563A1 (no) |
| JP (1) | JP2716117B2 (no) |
| CA (1) | CA1339112C (no) |
| DK (1) | DK589386A (no) |
| NO (1) | NO864956L (no) |
| SE (1) | SE451849B (no) |
Families Citing this family (68)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2605185B1 (fr) * | 1986-10-17 | 1993-08-20 | Meiji Seika Kaisha | Procede de culture des plantes |
| DE3722812A1 (de) * | 1987-07-10 | 1989-01-19 | Hoechst Ag | Disaccharidfluoride, verfahren zur enzymatischen herstellung mit(alpha)-glycosylfluoriden als substraten |
| SE466403B (sv) * | 1988-03-24 | 1992-02-10 | Kurt G I Nilsson | Saett att syntetisera oligosackarider |
| US5874261A (en) * | 1988-09-02 | 1999-02-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for the purification of glycosyltransferases |
| SE466521B (sv) * | 1988-10-03 | 1992-02-24 | Kurt G I Nilsson | Reagens vid analys bestaaende av ett enzym och en annan ligand, vilka aer kovalent bundna till en vattenoloeslig partikel med en diameter paa mindre aen 500 aa |
| SE465516B (sv) * | 1989-08-18 | 1991-09-23 | Kurt G I Nilsson | Saett att framstaella en oligosackaridfoerening varvid glykosidas fraan en mollusk anvaendes |
| AU7153991A (en) * | 1989-12-13 | 1991-07-18 | Glycomed Incorporated | Synthesis of rotavirus receptor saccharides |
| WO1991008747A1 (en) * | 1989-12-13 | 1991-06-27 | Glycomed Incorporated | Synthetic receptor molecules recognizable by a rotavirus |
| US5583042A (en) * | 1990-04-16 | 1996-12-10 | Neose Pharmaceuticals, Inc. | Apparatus for the synthesis of saccharide compositions |
| WO1991016449A1 (en) * | 1990-04-16 | 1991-10-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Saccharide compositions, methods and apparatus for their synthesis |
| BR9106345A (pt) | 1990-04-16 | 1993-04-20 | Univ Pennsylvania | Composicoes de sacarideos,processos e aparelhos para sua sintese |
| DE4013077A1 (de) * | 1990-04-25 | 1991-10-31 | Hoechst Ag | Verfahren zur glycosidasekatalysierten synthese von glycokonjugaten |
| DE69231127D1 (de) | 1991-03-18 | 2000-07-06 | Scripps Research Inst La Jolla | Oligosaccharide als enzymsubstrate und -inhibitoren: verfahren und zusammensetzungen |
| US5461143A (en) * | 1991-03-18 | 1995-10-24 | The Scripps Research Institute | Oligosaccharide enzyme substrates and inhibitors: methods and compositions |
| US5278299A (en) * | 1991-03-18 | 1994-01-11 | Scripps Clinic And Research Foundation | Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds |
| US6518051B1 (en) | 1991-04-11 | 2003-02-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Saccharide compositions, methods and apparatus for their synthesis |
| JP2782563B2 (ja) * | 1991-05-15 | 1998-08-06 | 寳酒造株式会社 | 新規糖質加水分解酵素 |
| US5403726A (en) * | 1991-07-30 | 1995-04-04 | The Scripps Research Institute | Enzymatic process for producing a galactosylβ1,3glycal disaccaride using β-galactosidase |
| SE9102292L (sv) * | 1991-08-06 | 1993-02-07 | Kurt G I Nilsson | Enzymatisk metod |
| WO1993005076A1 (en) * | 1991-08-30 | 1993-03-18 | Glyko, Inc. | Fluorophore assisted derivatization analysis of carbohydrates |
| EP0551107A2 (de) * | 1992-01-09 | 1993-07-14 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur beta-Galactosidase-katalysierten Transglycosidierung mit unphysiologischen Glycosyldonoren |
| EP0649427B1 (en) * | 1992-06-01 | 1998-01-28 | The Biomembrane Institute | Sequential removal of monosaccharides from the reducing end of oligosaccharides and uses thereof |
| SE9301270D0 (sv) * | 1993-04-19 | 1993-04-17 | Biosensor | |
| US5374541A (en) * | 1993-05-04 | 1994-12-20 | The Scripps Research Institute | Combined use of β-galactosidase and sialyltransferase coupled with in situ regeneration of CMP-sialic acid for one pot synthesis of oligosaccharides |
| US5409817A (en) * | 1993-05-04 | 1995-04-25 | Cytel, Inc. | Use of trans-sialidase and sialyltransferase for synthesis of sialylα2→3βgalactosides |
| SE9301677L (sv) * | 1993-05-14 | 1994-11-18 | Kurt G I Nilsson | Syntesmetod |
| US5936075A (en) * | 1994-05-17 | 1999-08-10 | Bioflexin Ab | Amino-deoxy-disaccharides and amino-deoxy-oligosaccharides |
| US6183994B1 (en) | 1993-05-14 | 2001-02-06 | Bioflexin Ab | N-containing saccharides and method for the synthesis of N-containing saccharides from amino-deoxy-disaccharides and amino-deoxy-oligosaccharides |
| JP3020811B2 (ja) * | 1993-08-23 | 2000-03-15 | 寳酒造株式会社 | 糖鎖構造決定方法 |
| SE9304316D0 (sv) * | 1993-12-24 | 1993-12-24 | Kurt Nilsson | Aminosyra-konjugat |
| SE9400034D0 (sv) * | 1994-01-06 | 1994-01-06 | Glycorex Ab | Laktosaminderivat |
| DE69521074T2 (de) * | 1994-03-30 | 2001-09-13 | Takara Shuzo Co | Transglykosylierungsverfahren zur Herstellung eines Kohlenhydrats oder eines Glykokonjugates |
| EP0779932B1 (en) * | 1994-09-06 | 2000-08-02 | Ab Bioflexin | Amino acid conjugate |
| US6127153A (en) | 1995-06-07 | 2000-10-03 | Neose Technologies, Inc. | Method of transferring at least two saccharide units with a polyglycosyltransferase, a polyglycosyltransferase and gene encoding a polyglycosyltransferase |
| US5716812A (en) * | 1995-12-12 | 1998-02-10 | The University Of British Columbia | Methods and compositions for synthesis of oligosaccharides, and the products formed thereby |
| CA2165041C (en) * | 1995-12-12 | 2005-07-05 | The University Of British Columbia | Methods and compositions for synthesis of oligosaccharides, and the products formed thereby |
| WO1997021822A2 (en) * | 1995-12-12 | 1997-06-19 | The University Of British Columbia | Methods and compositions for synthesis of oligosaccharides using mutant glycosidase enzymes |
| US6284494B1 (en) | 1995-12-12 | 2001-09-04 | The University Of British Columbia | Methods and compositions for synthesis of oligosaccharides using mutant glycosidase enzymes |
| AU1404597A (en) * | 1995-12-21 | 1997-07-17 | Procur Ab | Galactopyranosides and their use |
| US7014049B2 (en) * | 1996-12-23 | 2006-03-21 | Glycorex Transplantation Ab | Device for bio-affinity material |
| JP4544663B2 (ja) * | 1999-06-21 | 2010-09-15 | 生化学工業株式会社 | デアミノノイラミン酸誘導体、デアミノノイラミニダーゼの精製方法及びデアミノノイラミン酸結合性物質の検出方法 |
| ES2381530T3 (es) * | 2000-03-31 | 2012-05-29 | Opentv, Inc. | Sistema y método para la inserción de metadatos locales |
| EP1205555A1 (de) * | 2000-11-08 | 2002-05-15 | Solvent Innovation GmbH | Enzymkatalyse in Gegenwart ionischer Flüssigkeiten |
| US7214660B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
| US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
| WO2004033502A1 (ja) * | 2002-10-08 | 2004-04-22 | Ricom Corporation | キトサン含有多糖、その製造方法及び用途 |
| PL1615945T3 (pl) | 2003-04-09 | 2012-03-30 | Ratiopharm Gmbh | Sposoby glikopegylacji i białka/peptydy wytwarzane tymi sposobami |
| WO2007022512A2 (en) * | 2005-08-19 | 2007-02-22 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor vii and factor viia |
| US9005625B2 (en) | 2003-07-25 | 2015-04-14 | Novo Nordisk A/S | Antibody toxin conjugates |
| US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| US7137903B2 (en) | 2004-04-21 | 2006-11-21 | Acushnet Company | Transitioning hollow golf clubs |
| JP2005334648A (ja) | 2004-04-21 | 2005-12-08 | Acushnet Co | 変移する中空タイプのゴルフクラブ |
| EP1771066A2 (en) | 2004-07-13 | 2007-04-11 | Neose Technologies, Inc. | Branched peg remodeling and glycosylation of glucagon-like peptide-1 glp-1 |
| WO2006050247A2 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-11 | Neose Technologies, Inc. | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
| NZ556436A (en) * | 2005-01-10 | 2010-11-26 | Biogenerix Ag | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
| EP2386571B1 (en) * | 2005-04-08 | 2016-06-01 | ratiopharm GmbH | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
| US20070105755A1 (en) * | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
| US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
| ES2516694T3 (es) * | 2006-07-21 | 2014-10-31 | Ratiopharm Gmbh | Glicosilación de péptidos a través de secuencias de glicosilación con unión en O |
| WO2008057683A2 (en) * | 2006-10-03 | 2008-05-15 | Novo Nordisk A/S | Methods for the purification of polypeptide conjugates |
| LT2068907T (lt) * | 2006-10-04 | 2018-01-10 | Novo Nordisk A/S | Glicerolio sujungti pegilinti sacharidai ir glikopeptidai |
| BRPI0809670A8 (pt) * | 2007-04-03 | 2018-12-18 | Biogenerix Ag | métodos para aumentar a produção de célula tronco, para aumentar o número de granulócitos em um indivíduo, para prevenir, tratar e aliviar a mielossupressão que resulta de uma terapia contra o câncer, para tratar uma condição em um indivíduo, para tratar neutropenia e trombocitopenia em um mamífero, para expandir células tronco hematopoiéticas em cultura, para aumentar a hematopoiese em um indivíduo, para aumentar o número de célulars progenitoras hematopoiéticas em um indivíduo, e para fornecer enxerto estável da medula óssea, e, forma de dosagem oral. |
| CN101778859B (zh) | 2007-06-12 | 2014-03-26 | 诺和诺德公司 | 改良的用于生产核苷酸糖的方法 |
| US20100286067A1 (en) * | 2008-01-08 | 2010-11-11 | Biogenerix Ag | Glycoconjugation of polypeptides using oligosaccharyltransferases |
| CN103497246B (zh) | 2008-02-27 | 2016-08-10 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 缀合的因子viii分子 |
| EP2138586A1 (en) * | 2008-06-24 | 2009-12-30 | Cognis IP Management GmbH | Process for the regioselective preparation of disaccharides or oligosaccharides |
| US8580538B2 (en) | 2010-07-29 | 2013-11-12 | Basf Se | Enzymatic production of an ethylenically unsaturated glycoside |
| CA2805360A1 (en) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Basf Se | Process for producing glycosides of acrylate derivatives employing saccharides and glycosidases |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5432073B2 (no) * | 1971-10-14 | 1979-10-11 | ||
| FR2263747B1 (no) * | 1974-03-12 | 1977-12-02 | Roussel Uclaf | |
| JPS545070A (en) * | 1977-06-13 | 1979-01-16 | Hayashibara Biochem Lab | Production of sweetening agent |
| AT362526B (de) * | 1977-09-13 | 1981-05-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha- -amylase |
| US4225672A (en) * | 1979-02-27 | 1980-09-30 | Hall Leo M | Method for producing maltooligosaccharide glycosides |
| DE3000292A1 (de) * | 1980-01-05 | 1981-07-09 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Indoxylmaltodextrine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| SE8203925D0 (sv) * | 1982-06-23 | 1982-06-23 | Svenska Sockerfabriks Ab | New and novel glycosides, glycoconjugates and processes for their preparation |
| JPS5939268A (ja) * | 1982-08-30 | 1984-03-03 | Sanyo Kokusaku Pulp Co Ltd | 甘味料の製造法 |
| GB8316790D0 (en) * | 1983-06-21 | 1983-07-27 | Tate & Lyle Plc | Chemical process |
| JPS6183195A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-04-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 |
-
1985
- 1985-12-11 SE SE8505842A patent/SE451849B/sv not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-12-02 EP EP86850414A patent/EP0226563A1/en not_active Withdrawn
- 1986-12-04 US US07/938,703 patent/US4918009A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-08 DK DK589386A patent/DK589386A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-12-09 NO NO864956A patent/NO864956L/no unknown
- 1986-12-10 CA CA000524898A patent/CA1339112C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-12-11 JP JP61295689A patent/JP2716117B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1339112C (en) | 1997-07-29 |
| DK589386A (da) | 1987-06-12 |
| EP0226563A1 (en) | 1987-06-24 |
| SE8505842L (sv) | 1987-06-12 |
| JPS62240695A (ja) | 1987-10-21 |
| SE8505842D0 (sv) | 1985-12-11 |
| NO864956D0 (no) | 1986-12-09 |
| JP2716117B2 (ja) | 1998-02-18 |
| DK589386D0 (da) | 1986-12-08 |
| SE451849B (sv) | 1987-11-02 |
| US4918009A (en) | 1990-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO864956L (no) | Fremgangsmaate for styring av regioselektiviteten for glykosidbindinger. | |
| JP3723208B2 (ja) | アミノデオキシ二糖類及びアミノデオキシオリゴ糖の合成方法 | |
| Nilsson | A simple strategy for changing the regioselectivity of glycosidase-catalysed formation of disaccharides | |
| EP0577580A2 (en) | Synthesis of sialoconjugates | |
| US5599694A (en) | Process for producing an oligosaccharide compound by using glycosidases from a mollusc | |
| EP0598051B1 (en) | Enzymatic method for synthesis of carbohydrates | |
| Seibel et al. | Biocatalytic and chemical investigations in the synthesis of sucrose analogues | |
| WO1997023637A1 (en) | Galactopyranosides and their use | |
| EP0839210B1 (en) | Method of producing derivatives of glc-beta 1-4glc-n-acetyl | |
| US6183994B1 (en) | N-containing saccharides and method for the synthesis of N-containing saccharides from amino-deoxy-disaccharides and amino-deoxy-oligosaccharides | |
| US5936075A (en) | Amino-deoxy-disaccharides and amino-deoxy-oligosaccharides | |
| Kéry et al. | Immobilisation of β-d-galactosidase from Escherichia coli on cellulose beads and its use for the synthesis of disaccharide derivatives | |
| JPH10502068A (ja) | 新規オリゴシド誘導体、その調製方法およびその利用 | |
| Tramice et al. | Hydrosoluble antioxidants by enzymatic glucosylation of a vitamin E derivative using marine α-D-Glucosidase from Aplysia fasciata | |
| JP3105306B2 (ja) | 糖質又は複合糖質の製造方法 | |
| EP0517766B1 (en) | Biochemical process to produce oligosaccharides | |
| JPH1033194A (ja) | 糖質又は複合糖質の製造方法 |