NO841665L - Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive prolinderivater. - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive prolinderivater.

Info

Publication number
NO841665L
NO841665L NO841665A NO841665A NO841665L NO 841665 L NO841665 L NO 841665L NO 841665 A NO841665 A NO 841665A NO 841665 A NO841665 A NO 841665A NO 841665 L NO841665 L NO 841665L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
product
epsilon
valyl
valinal
Prior art date
Application number
NO841665A
Other languages
English (en)
Inventor
Anand Swaroop Dutta
Ross Lee Stein
Diane Amy Trainor
Richard Alan Wildonger
Original Assignee
Ici America Inc
Ici Plc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB838311423A external-priority patent/GB8311423D0/en
Priority claimed from GB838314708A external-priority patent/GB8314708D0/en
Application filed by Ici America Inc, Ici Plc filed Critical Ici America Inc
Publication of NO841665L publication Critical patent/NO841665L/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder fremgangsmåte for fremstilling av visse prolinderivater som er anvendbare som human leukocytt elastase inhibitorer, f.eks. ved behandling av vev-degenerative sykdommer som f.eks. pulmonalt emfysem, eteroskle-rode og reumatoid og osteo artritt hos mennesker.
Peptid-aldehyd-inhibitorer av både svine-pankreas-elastase (PPE) og human leukocytt-elastase (HLE) er tidligere omtalt.
For eksempel har Thompson, Biochemistry, 1973, vol. 12, sider
47-51 beskrevet syntesen av to peptid-aldehyd-inhibitorer av svine pankreas-elastase. En av disse var N-acetyl-L-alanyl-L-prolyl-L-alaninal.
Szabo et al., Acta Biochimica et Biophysica Academiae Scientiarum Hungaricae, 1982, vol. 17 (1-2), side 98, rapporterer syntesen av fem peptid-aldehyd-forbindelser, som alle viste seg å være inhibitorer for pankreas-elastase og human-leukocytt-elastase. Den kraftigste HLE-inhibitor som ble rapportert var N-succinyl-D-fenylalanyl-L-prolyl-L-valinal, denne forbindelse
ga 10-100 ganger sterkere inhibering (K^ 4x10 _5) enn de fire andre aldehydene.
Selv om forskjellige peptid-aldehyder er omtalt i littera-turen, er ingen til dags dato funnet å være klinisk anvendbare ved behandling av noen vev-degenerative sykdommer.
Det er generelt akseptert at proteolyse av lunge-elsatin
ved hjelp av elastaser, som f.eks. human leukocytt-elastase (HLE) og katepsin G, som frigjøres fra den granulære fraksjonen av polymorfonukleære leukocytter, er ansvarlig for en hoveddel av vevnedbrytningen som kan sees ved pulmonalt emfysem. Det antas også at elastaser på lignende måte er involvert ved initie-ring og fortsettelse av forskjellige andre vev-degenerative sykdommer, som f.eks. eterosklerose, osteo-artritt og reumatoid-artritt. De kraftige elastase-inhibitorene som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse kan således anvendes ved behandling og/eller forebyggelse av én eller flere av de ovenfor nevnte sykdommer. De kan også anvendes som forskningsverktøy i farma-kologiske og beslektede undersøkelser.
Prolin-derivatene som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse, har følgende formler (I), (II) eller (III):
hvor
R 1, R 5 og R 9 er lavere alkylgrupper med fra 3 til 6 karbonatomer,
2 3 (5 7 TO
R , R , R , R og R er alkylgrupper med 1 til 10 karbonatomer som eventuelt kan være substituert med en monocyklisk arylgruppe eller med en amid-, urea- eller karbamat-gruppe via nitrogenet i disse,
4 11
R og R er lavere alkyl-, substituerte lavere alkyl-,
lavere alkoksy- eller substituerte lavere alkoksygrupper hvor alkyl eller alkoksy inneholder 1 til 6 karbonatomer, eller monocykliske eller bicykliske arylgrupper, og
R g er hydroksy, en lavere alkoksygruppe medl til 6 karbonatomer eller en aralkoksygruppe med 7 til 12 karbonatomer ,
O *3C\ "7 1 n
og hvor -CHR -CHR -, CHR -, CHR -, -CHR - og prolingruppen har L-konfigurasjon,
eller et farmasøytisk godtagbart syre- eller base-addisjonssalt derav eller en likevekts addisjonsforbindelse av aldehydgruppen deri.
Forbindelsene som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse med formlene (I), (II) og (III) er meget kraftige, reversible, selektive, konkurransedyktige inhibitorer for human leukocytt- elastase (HLE). Disse forbindelser er opp til 40.000 ganger kraftigere enn de kraftigste aldehyd-HLE-inhibitorer som er beskrevet tidligere på fagområdet, se Szabo et al., som er sitert ovenfor når det gjelder dette, og er anvendbare ved behandling og/eller forebyggelse av vev-degenrative sykdommer som f.eks. emfysem, eterosklerose, osteo-artritt og reumatoid artritt.
Forbindelsene med formlene (I) og (II) er tetrapeptidalde-hyder, og forbindelsene med formelen (III) er tripeptidaldehyder.
15 9
R , R og R kan være lavere alkyl med 3 til 6 karbonatomer med lineær eller forgrenet kjede. Spesifikke eksempler omfatter n-propyl, iso-propyl, sek-butyl og iso-butyl. Foretrukne grupper
1 5 9
R , R og R er lavere alkylgrupper med 3 eller 4 karbonatomer med a-forgrenet kjede som f.eks. isopropyl og sek-butyl.
R 2 , R 3 , R 6 , R 7 og R<10>kan være alkylgrupper med 1 til 10 karbonatomer, f.eks. 3 til 6 karbonatomer, med lineære eller forgrende kjeder, som kan være substituert, f.eks. ved avslut-ningen av en rettkjedet alkyl, med en monocyklisk arylgruppe eller med en amid-, urea- eller karbamat-gruppe via nitrogenatomet deri7 Eksempler omfatter n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sek-butyl eller isobutyl med substitusjoner omfattende benzyl, benzyloksykarbonylamino, fenylaminokarbonylamino og pyriåyl-karbonylamino, f.eks. 2-pyridylkarbonylamino.
Foretrukne grupper R^, R^ og R^ er lavere alkylradikaler med 3 til 6 karbonatomer med a-forgrenet kjede som f.eks. iso-propyl eller sek-butyl, eller et atalkyl radikal med 7 til 12 karbonatomer som f.eks. benzyl.
Foretrukne grupper R 3 er (a) lavere alkylradikaler med 3 til 6 karbonatomer med lineær eller forgrenet kjede som f.eks. n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek-butyl eller isobutyl, (b) aralkylradikaler med 7 til 12 karbonatomer som f.eks. benzyl, eller (c) alkylgrupper med 1 til 8 karbonatomer med lineær kjede som er substituert med en amid-, karbamat- eller urea-gruppe via nitrogenatomet deri. Substituerte alkylradikaler (c) kan representeres ved formelen
hvor Alk er et lavere alkylenradikal med 1 til ca. 8 karbonatomer,
Y er en direkte binding, -0- eller -NH- (tilsvarende henholdsvis amid-, karbamat- og urea-substituenter), og R 1 3 er lavere alkyl, aryl, aralkyl eller pyridyl. Eksempler på substituerte alkylradikaler (c) omfatter benzyloksykarbonylamino, fenylaminokarbonylamino (det vil si fenylureido) og 2-pyridylkarbonylamino.
Enten R<2>eller R<3>(og på o lignende måo te R 6 og R 7) men fortrinnsvis ikke begge, kan være amid-, karbamat-. eller urea-substituert lavere alkyl.
R 4 og R<11>kan være: (a) lavere alkyl som f.eks. metyl eller tert.-butyl, (b) substituert lavere alkyl, som f.eks. 2-karboksyetyl, 2-metoksykarbonyletyl, acetamidometyl og 3-metansulfon-amidokarbonyletyl, (c) lavere alkoksy, som f.eks. tert. butoksy, (d) substituert lavere alkoksy, som f.eks. benzyloksy, 2-(2-pyridyl)etoksy og 2-metansulfonyletyloksy, og (e) aryl, som f.eks. fenyl, 2,4-diklorfenyl, 2-karboksyfenyl og 4-bifenylyl. De lavere alkyl- eller lavere alkoksy-gruppene kan ha 1 til 6 karbonatomer, og substituerte lavere alkyl- eller lavere alkoksy-grupper kan ha 1 til 6 karbonatomer fraregnet de i substituentene.
R kan være hydroksyl, lavere alkoksy med 1 til 6 karbonatomer, eller aralkoksy med 7 til 12 karbonatomer.
Den foretrukne substituent R i forbindelser med formelen (II) er lavere alkoksy, som f.eks. metoksy.
Den foretrukne substituent R 11 i forbindelser med formelen (III) er substituert lavere alkyl, spesielt karboksyalkyl som f.eks. 2-karboksyetyl eller alkyloksykarbonylalkyl som f.eks. metoksykarbonyletyl eller alkoksy som f.eks. tert.butoksy eller aralkoksy som f.eks. benzyloksy.
Likevekt-addisjonsforbindelsene av aldehydgruppen med formlene (i), (II) eller (III) omfatter bisulfittene, hemiacetalene og hemiaminalene, så vel som andre maskerte aldehyder som beskrevet i "The Chemistry of the Carbonyl Group", Vol. 2 i serien "The Chemistry of Functional Groups", utgitt av S. Patai, Inter-science Publishers, en avdeling av John Wiley & Sons, New York (1 970) .
Bisulfitt-addisjonsproduktene er de i hvilke -CHO-gruppen omdannes til en -CHOHSO^H, f.eks. ved reaksjon med et sulfitt, f.eks. natriumhydrogensulfitt med formelen NaHSO^. Reaksjonen kan gjennomføres ved å oppløse aldehydet i et løsningsmiddel som f.eks. vandig metanol, tilsette et overskudd, f.eks. en dobbelt molar mengde, av natriumhydrogensulfitt og fjerne løs-ningsmidlet .
Hemiacetalene dannes ved tilsetning av et mol av en enverdig alkohol som f.eks. dodekanol til -CHO-gruppen.
Hemiaminalene dannes ved tilsetning av et mol av primært amin som f.eks. lysin, eller et sekundært amin som f.eks. sarko-sin (som er N-metylglycin) til -CHO-gruppen. Tilsetningen kan utføres ved å oppløse aldehydet i et passende løsningsmiddel som f.eks. metanol, tilsette aminet og fjerne løsningsmidlet.
Saltene av forbindelsene med formlene (I), (II) og (III)
omfatter farmasøytisk godtagbare base- eller syre-addisjonssalter som f.eks. med en mineralsyre, f.eks. saltsyre, eller en organisk syre som f.eks. sitron-, malein-, fumar- eller eddik-syre. Base-addisjonssalter omfatter de med alkalimetallhydroksyder som f.eks. natriumhydroksyd, jordalkalimetallhydroksyder og organiske amin-salter. Slike salter kan fremstilles ved å oppløse prolinderiva-tet i en blanding av vann og et vann-blandbart organisk løsnings-middel, tilsette en vandig løsning av basen og utvinne saltet fra den vandige løsningen.
Forbindelsene som fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse har alle L-konfigurasjon ved alle chiral-sentre bortsett fra
15 9
eventuelt tilknytningspunktet for R -, R - eller R -gruppen.
15 9
Konfigurasjonen ved R , R og R kan være D, L eller en blanding derav. Fortrinnsvis har forbindelsene som fremstilles ifølge oppfinnelsen L-konfigurasjonen ved alle Chiral-sentre inkludert
15 9
tilknytningspunktet for R -, R - eller R -gruppen. L-konfigurasjonen ved festepunktet for R 2 , R 6 eller R 10 er spesielt viktig, siden forbindelsene som fremstilles ifølge oppfinnelsen, som har denne konfigurasjon, er meget mere aktiv (ca. 110 ganger mere aktiv) enn isomerene med D-konfigurasjonen på dette sted. Uttrykket "L-konfigurasjon" betegner her en sterisk konfigurasjon som er den samme somden i de nærmeste naturlig forekommende L-aminosyrer.
Forbindelser med formel (I) og deres farmasøytisk godtagbare syre- og base-addisjonssalter og aldehydaddukter utgjør en foretrukken gruppe forbindelser. Spesielt ønskelige er forbindelser med formel (I) som har L-konfigurasjonen ved alle chiral-sentra.
Foretrukne forbindelser, som alle har formelen (I), og med
L-konfigurasjonen ved alle chiral-sentra, er følgende:
(a) N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-propyl-L-valinal, (b) N-acetylglycyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-propyl-L-valinal, (c) N-benzyloksykarbonyl-L-norleucyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, (d) N-alfa- 3-(metylsulfonylaminokarbonyl)propionyl -N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valy1-L-propyl-L-valinal, (e) N-alfa-succinyl-M-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-f enylalanyl-L-propyl-L-valinal , (f) N-alfa-(2,4-diklorbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-propyl-L-valinal, (g) N-alfa-glutaryl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-propyl-L-valinal, (h) N-alfa-succinyl-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl-L-propyl-L-valinal, og (i) N-alfa-(4-fenylbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-propyl-L-valinal,
og de farmasøytisk godtagbare syre- og base-addisjonssalter derav og de farmasøytisk godtagbare likevektsaddisjonsforbindelser med aldehydgruppen deri. Forbindelser (b) til (f) er spesielt foretrukne, og forbindelse (a) er den mest foretrukne.
Aldehydene med formlene (I), (II) eller (III) kan fremstilles ved oksydasjon av den tilsvarende alkohol eller ved hydrolyse eller transacetalisering av den tilsvarende acetal (eller bredere ved fjerning av en aldehydbeskyttende gruppe fra et aldehydderi-vat med en slik gruppe). Alkoholene og acetalene (eller andre derivater med en aldehydbeskyttende gruppe) kan i sin tur fremstilles ifølge peptidsynteseteknikker som er kjent på fagområdet.
Alkoholene er forbindelser med følgende formler (I-A), (II-A) og (III-A):
o 1 11
nar R til R er som definert tidligere.
Aldehydderivater av forbindelsene med formlene (I), (II) og (III) hvor -CHO-gruppen erstattes med en aldehydbeskyttende gruppe er forbindelser med følgende formler (I-B), (II-B) og (Ill-B):
1 11
hvor Q er en aldehydbeskyttende gruppe og R til R er som definert tidligere. Den foretrukne aldehydbeskyttende gruppe
12 12
Q er acetalen, i hvilket tilfelle Q er (OR )^ hvor R er lavere alkyl med 1 til 6 karbonatomer eller (i tilfelle av en acetal dannet fra en diol som f.eks. etylenglykol eller propylen-glykol) danner de to gruppene R 1 2 smamen med de nærliggende oksygenatomer og det karbonatom som de er festet til, en 5-eller 6-leddet heterocyklisk (det vil si alkylendioksy)ring. Alternativt kan den beskyttende gruppen være en tioacetal, i
12 12
hvilket tilfelle Q er (SR )2 hvor R har de betydninger som er angitt ovenfor.
Acetalene er forbindelser med følgende formler (I-C), (II-C9 og (III-C):
hvor R 1 til R 12 er som definert tidligere.
Forbindelsene med formlene (I), (II) og (III) kan fremstilles ved oksydasjon av den tilsvarende alkohol med formelen (I-A), (II-A) eller (III-A). Denne oksydasjon kan utføres ved en hvilken som helst av flere fremgangsmåter omfattende: (a) Swern-modifikasjon av en Moffatt-oksydasjon i hvilken alkoholen omsettes ved en lav temperatur (-78° til -20°C) med et reagens fremstilt in situ ved omsetning av dimetylsulfoksyd (DMSO) med et aktiveringsmiddel som f.eks. oksalylklorid eller trifluoreddiksyreanhydrid ved lav temperatur i et løsningsmiddel som f.eks. diklormetan (CF^C^). Denne fremgangsmåte er for eksempel beskrevet av A.J. Mancuso et al., i Journal of Organic Chemistry, vol. 43, nr. 12, sider 2480-2482 (1978) og vol. 44, nr. 23, sider 4148-4150 (1979). (b) en Collins-oksydasjon i hvilken alkoholen omsettes med en blanding av kromtrioksyd (CrO^) og pyridin ved lav temperatur (-40 til -20°C) i et løsningsmiddel som f.eks. diklormetan. (c) oksydasjon ved hjelp av andre kromreagenser som f.eks. pyridiniumklorkromat ved temperaturer fra -20° til 25°C i løs-ningsmidler som f.eks. diklormetan.
Alternativt kan forbindelsene med formlene (I), (II) og (III) fremstilles ved å fjerne beskyttelsesgruppen Q fra en tilsvarende beskyttet forbindelse med formlene (I-B), II-B) eller (III-B). Således kan f.eks. forbindelser med formlene (I), (II) og (III) fremstilles ved hydrolyse av den tilsvarende acetal med formelen (I-C), (II-C) eller (III-C). Denne hydrolyse kan utføres i nærvær av en syre i et blandet vandig-organisk løsningsmiddelmedium. Mediet kan være en blanding av vann og én eller flere vann-blandbare organiske løsningsmidler som f.eks. metanol, tetrahydrofuran (THF), eller aceton.
Mediet kan surgjøres med en syre som f.eks. saltsyre, p-toluensulfonsyre eller en sterkt sur ionevekslerharpiks som f.eks. Dowex 50Wx8-H (Dowex er et registrert varemerke for The Dow Chemical Company, Midland, Michigan, U.S.A.). Alternativt kan acetalen fjernes i en trans-acetaliseringsreaksjon i nærvær av overskudd aceton eller andre ketoner med lav molekylvekt i nærvær av en sur katalysator som f.eks. p-toluensulfonsyre eller en sterkt sur ionevekslerharpiks som f.eks. Dowex ® 50W8-H.
Forbindelser med formlene (I-A), (Il-A), (III-A), (I-B), (II-B), (III-B), (I-C), (II-C) og (III-C) er nye mellomprodukter.
Både alkoholene med formlene (I-A), (II-A) og (III-A) og aldehyd-derivatene (det vil si acetalene) med formlene (I-B), (II-B) og (III-B) kan fremstilles fra lett tilgjengelig materiale ved peptidsyntesemetoder som er kjent på fagområdet.
Disse består i hovedsak av peptidkoblings- og beskyttelses-
og debeskyttelse-reaksjoner (for å beskytte og debeskytte amino-og karboksy-grupper), arrangert i en sekvens som vil gi den ønskede peptidforbindelse.
Peptidkobling kan generelt representeres ved ligningen (1) nedenfor:
hvor ^ og r"* ^ er aminosyre- eller peptid-rester. Med andre ord representerer både (V) og (VI) aminosyrer eller peptider. Når de anvendes i foreliggende oppfinnelse er det maksimale antall peptidenheter i forbindelse (VII) enten 3 eller 4.
Disse peptid-koblings-fremgangsmåter kan utføres ved hjelp av en av de mange fremgangsmåter som er kjente på fagområdet.
For eksempel kan koblingen gjennomføres i nærvær av dicykloheksylkarbodiimid eller 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbo-diimid-hydroklorid og 1-hydroksybenzotriazol og en base som f.eks. trietylamin eller N-metylmorfolin i et løsningsmiddel som f.eks. tetrahydrofuran eller dimetylformamid. Fortrinnsvis utføres koblingen ved en temperatur fra 0°C til romtemperatur.
Alternativt er et annet eksempel på koblingsfremgangsmåten reaksjonen i ligning (1) i hvilken karboksylsyrereaktanten først aktiveres ved dannelse av et blandet anhydrid, f.eks. et blandet karbonisk anhydrid. Dette anhydrid kan fremstilles ved omsetning av en karboksylsyre med eksempelvis isobutylklorformiat eller etylklorformiat i nærvær av et amin som f-eks- trietylamin eller N-metylmorfolin i et løsningsmiddel som f.eks. tetrahydrofuran eller diklormetan ved en temperatur fra -20 til 0°C. Det blandede anhydridet omsettes så med aminbestanddelen i ligning (1) i det samme løsningsmiddel i nærvær av det samme amin ved temperaturer fra -40°C til romtemperatur for å tilveiebringe det koblete produktet.
I noen tilfeller kan syren (V) i ligning (1) omsettes i form av dets syrehalogenid- eller syreanhydrid-derivat med aminet (VI) i nærvær av et tertiært amin som f.eks. N-metylmorfolin eller trietylamin i løsningsmidler som f.eks. tetrahydrofuran eller diklormetan ved en temperatur fra -20°C til romtemperatur. ALternativt kan syrekloridet omsettes med aminet i en vandig løsning inneholdende natriumhydroksyd. I noen tilfeller er et vann-ublandbart løsningsmiddel som f.eks. eter eller diklormetan til stede. Reaksjonen gjennomføres ved temperaturer fra -10°C til romtemperatur.
Andre frie aminogrupper eller frie karboksylsyregrupper i de reagerende forbindelsene (V) og (VI) må noen ganger midler-tidig beskyttes under koblingsreaksjonen for at koblingen skal gå på ønsket måte. Disse beskyttelsesgruppene, fremgangsmåter for innføring av dem og fremgangsmåter for fjerning av dem er kjent på fagområdet. Beskyttelsesgruppene velges slik at de selektivt kan innføres og fjernes under betingelser som ikke påvirker andre reaktive grupper i forbindelsene.
Eksempler på aminobeskyttelsesgrupper er tert-butyloksykarbonyl, som kan fjernes ved hjelp av vannfrie syrer som f.eks. trifluoreddiksyre eller hydrogenklorid i et løsningsmiddel som f.eks. eter, etylacetat eller diklormetan, benzyloksykarbonyl, som kan fjernes ved katalytisk hydrogenolyse i nærvær av en katalysator som f.eks. palladium-på-karbon i et løsningsmiddel som f.eks. etanol eller etylacetat og metylsulfonyletyloksy-karbonyl, som kan fjernes ved behandling med en base som f.eks. natriumhydroksyd i et løsningsmiddel som f.eks. vandig metanol eller tetrahydrofuran.
Syrebeskyttelsesgrupper omfatter metylesteren, som kan fjernes ved basisk hydrolyse i nærvær av natriumhydroksyd eller natriumkarbonat i et løsningsmiddel som f.eks. vandig tetrahydrofuran eller metanol, tert-butylesteren, som kan fjernes i nærvær av syrer som f.eks. hydrogenklorid eller trifluoreddiksyre i et løsningsmiddel som f.eks. eter, etylacetat eller diklormetan og benzylesteren, som kan fjernes ved basisk hydrolyse som ovenfor eller ved katalytisk hydrogenolyse som beskrevet ovenfor. Disse beskyttelsesgrupper kan fjernes like etter koblingsreaksjonen eller får være til stede inntil et senere trinn i syntesen og fjernes ved dette tidspunkt.
Forskjellige Fremgangsmåter kan anvendes for å fremstille alkoholer med formelen (I-A). Det følgende er illustrerende.
En første fremgangsmåte for fremstilling av alkoholer med formelen (I-A) omfatter å omsette forbindelser med følgende formler (VIII) og (IX) for å fremstille (X):
16 17 hvor R og R er arylalkyl- eller alkyl-grupper, f.eks. benzyl, metyl eller tert-butyl. Koblingen gjennomføres eksempelvis i nærvær av koblingsfremmere som f.eks. dicykloheksylkarbodiimid (DCC) og 1-hydroksybenzotriazol (HOBT) eller ved hjelp av den blandede anhydrid-fremgangsmåten med isobutylklorformiat. Om ikke annet er angitt, er definisjonene av de forskjellige R-gruppene i beskrivelsen som definert tidligere. -COOR 1 6-beskyttelsesgruppen fjernes så ved katalytisk hydrogenolyse eller syrekatalysert debeskyttelse med konsentrert mineralsyre eller en sterk organisk syre som f.eks. trifluoreddiksyre, og den frie basen eller saltet omsettes med en syre med formelen (XI) for å fremstille en forbindelse med formel (XII):
ved ca. 0°C til romtemperatur. Fra esteren med formel (XII) erstattes OR 17 -gruppen med -0H ved forsåopning med NaOH ved ca. romtemperatur eller ved hjelp av katalytisk hydrogenolyse og denne karboksylsyre omsettes med en aminoalkohol med formelen
(XIII) for å fremstille forbindelsen med den følgende formel
(I-A):
ved en temperatur på ca. -40 til -23°C. I koblingsreaksjonen for å fremstille (I-A), anvendes isobutylklorformiat for å fremstille et blandet katbonisk anhydrid av karboksylsyren fra esteren (XII) i nærvær av N-metylmorfolin. Forbindelser med formelen (XIII) kan fremstilles fra den tilsvarende aminosyre med formelen H2N-CHR<1->COOH ved først å forestre syren med en alkohol som f.eks. metanol eller etanol, for å fremstille amino-1 1 R 1 R
esteren med formelen r^N-CHR -COOR hvor R er en alkylgruppe med 1 til 2 karbonatomer, og redusere aminoesteren med et
reduksjonsmiddel som f.eks. litiumaluminiumhydrid for å gi (XIII), H2N-CHR<5->CH2OH eller H2N-CHR<9->CH2OH. Alkoholen med formelen (I-A) kan oksyderes for å fremstille en forbindelse med formel (I) som beskrevet ovenfor.
En andre metode for fremstilling av forbindelser med formelen (I-A) omfatter å omsette syren med formel (XI) med et amin med formel (XIV) for å fremstille en forbindelse med formel (XV):
hvor R 1 9er en alkyl- eller arylalkyl-gruppe, f.eks. metyl, ved en temperatur på ca. -40 til -20°C, f.eks. ved å bruke N-metylmorfolin og isobutyl-klorformiat som beskrevet tidligere. Esteren med formel (XV) forsåpes så ved reaksjon med et alkali-metallhydroksyd ved ca. romtemperatur og syren omsettes med en forbindelse med formel (IX) for å gi formel (XII) som så kan føres videre til (I-A) og (I) som beskrevet ovenfor.
En tredje metode for fremstilling av forbindelser med formelen (I-A) omfatter å forandre substitusjonen og alkylgruppene R 2 eller R 3 . Det skal bemerkes at en slik forandring også o kan finne sted ved fremstilling av forbindelsene med formlene (II-A) og (III-A). Således kan en forbindelse med formel (XII) hvor minst én av R eller R er substituert med alkyl, omsettes for å gi det tilsvarende amin med formelen (XVI):
hvor minst é■» n av R 20 og R<21>er en alkylgruppe med 1 til 10 karbonatomer substituert med en -NH2under betingelser som beskrevet her for fjerning av en -COOR 1 fi-gruppe, spesielt dersom substitusjonen er et karbamat. Aminet (XVI) kan så enten omsettes med en karboksylsyre for å fremstille en forbindelse med formel (XII) hvor R 2 og/eller R 3 som hadde vært alkyl substituert med
karbamat omdannes til en alkyl substituert med et amid, eller omsettes med et isocyanat for å fremstille en forbindelse med formel (XII) hvor R 2 og/eller R 3 som hadde vært alkyl substituert med karbamat omdannes til en alkyl substituert med en urea-del. Begge slike forbindelser med formel (XII) kan forsåpes og så kondenseres med en forbindelse med formel (XIII) for å fremstille en forbindelse (I-A).
I noen tilfeller omfatter de syntetiske fremgangsmåtene
som brukes for å fremstille forbindelsene (i), (II) og (III)
4 8 11
erstatning av en R -, R - eller R -gruppe med en annen i forbindelsene (I-A), (II-A) og (III-A). Når det eksempelvis er ønsket å erstatte en tert-butoksygruppe i forbindelser med formlene (I-A) og (II-A), med en karboksyalkylgruppe, fjernes tert-butoksygruppen ved syrekatalysert debeskyttelse, f.eks. med trifluoreddiksyre, og det resulterende amin omsettes med et monoester-syreklorid eller anhydrid som f.eks. ravsyre-, glutar-eller adipinsyre-anhydrid (f.eks. ved romtemperatur i acetonitril) for å fremstille en annen forbindelse med formelen (I-A) eller
4 11
(III-A), i hvilke R eller R er karboksyalkyl (f.eks. karboksyetyl), alkoksykarbonylalkyl, aryloksykarbonylalkyl eller aral-koksykarbonylalkyl. Den andre forbindelsen (I-A), (II-A) eller (III-A) kan så oksyderes til den tilsvarende forbindelse (I),
(II) eller (III).
Forbindelser med formelen (II-A) kan fremstilles ved fremstilling av en forbindelse med formel (X) fra forbindelser med formlene (VIII) og (IX) som forklart ovenfor, ved å fjerne
-COOR 1 6-beskyttelsesgruppen og omsette den frie basen eller saltet med et isocyanat med formelen (XVII) for å fremstille urea-forbindelsen med den følgende formel (XVIII):
ved reaksjon ved 0°C til romtemperatur. Isocyanatet med formel (XVII) kan fremstilles fra den tilsvarende aminosyreester med formelen R 8 -CO-CHR 7-NH3+ci" ved reaksjon med fosgen ved en tem-
peratur på 115°C. Ureaforbindelsen (XVIII) omdannes så til den tilsvarende karboksylsyre, ved å o erstatte OR<17>hvor R 17 er benzyl med OH ved katalytisk hydrogenolyse med et edelmetall som katalysator og hydrogen. Den således fremstilte karboksylsyre kondenseres sa o med en aminoalkohol med formelen r^N-CHR 5-CH2OH, som
beskrevet ovenfor for reaksjonen for forbindelsen (XIII) for å fremstille (I-A), for å fremstille forbindelsen med formelen (II-A). Forbindelsen med formelen (II-A) oksyderes så til det ønskede produkt med formel (II) som beskrevet ovenfor.
Forbindelser med formelen (III-A) kan fremstilles ved å
3 4 kondensere en forbindelse med formelen (XI), hvor R og R er verdier for henholdsvis R 10 og R 11, med en forbindelse med formelen (IX) for å gi en forbindelse med den følgende formel (XIX):
med DCC og HOBT som beskrevet for koblingen av (VIII) og (IX) for å fremstille (X). Esteren med formel (XIX) kan så spaltes ved forsåpning eller hydrogenolyse som beskrevet ovenfor for reaksjonen for (XII) for å gi den tilsvarende syre. Syren kondenseres så med en aminoalkohol med formelen H2N-CHR<9->CH2OH, som beskrevet ovenfor for fremstillingen av forbindelse (I-A) fra (XII), for å fremstille forbindelsen med formelen (III-A). Forbindelsen med formelen (III-A) oksyderes så til det ønskede produkt med formel (III) som beskrevet ovenfor.
Forbindelser med formlene (I-B), (II-B) og (III-B) kan også fremstilles ifølge kjente peptidsynteseteknikker. En foretrukken fremgangsmåte for fremstilling av acetaler med formelen (I-C) skal nå beskrives som en illustrasjon.
Ifølge en foretrukken fremgangsmåte for fremstilling av en acetal med formelen (I-C), omsettes en forbindelse med formelen (VIII) med en forbindelse (IX) for å danne en forbindelse (X) som beskrevet tidligere. Spesielt kan R^ i formlene (VIII) og (X) være benzyl. -COOR 1 fi-beskyttelsesgruppen fjernes, f.eks. ved katalytisk hydrogenolyse, som beskrevet tidligere. Det resulterende frie aminet eller saltet omsettes så med en forbindelse med formelen (XI) under kjente koblingsbetingelser, f.eks. ved 0°C til romtemperatur i nærvær av koblingsfremmere som f.eks. DCC og HOBT, for å fremstille en forbindelse med 4 17 formelen (XII). Fortrinnsvis er R tert-butyloksy og R tert-butyl i formelen (XII). I dette tilfelle resulterer reaksjon 1 7 mellom (XII) og trifluoreddiksyre i erstatning av -OR med -0H og fjerning av R 4C0-. Det resulterende amin eller syre-addisjonssalt omsettes med et passende acyleringsmiddel inneholdende R^, f.eks. et monoester-syreklorid av ravsyre, for å gi en forbindelse med den følgende formel (XX):
hvor R 4 eksempelvis er karboksyalkyl, alkyloksykarbonylalkyl eller aralkyloksykarbonylalkyl.
En aminoalkohol med formelen (XIII) (f.eks. L-valinol) kobles med benzylklorformiat ved 0 til 25°C for å beskytte amino-gruppen. Det amino-beskyttede derivatet av (XIII) oksyderes så ved hjelp av midler som er beskrevet tidligere i denne søknad, f.eks. ved hjelp av en Stern-modifikasjon av en Moffatt-oksydasjon, for å gi et aldehyd med den følgende formel (XXI): hvor R 22er lavere alkyl eller aralkyl, f.eks. benzyl. Syrekatalysert acetalisering, f.eks. med trietylortoformiat i absolutt alkohol surgjort med p-toluensulfonsyre ved romtemperatur, gir en acetal (f.eks. dietylacetalen) av (XXI). Den amin-beskyttende gruppen kan fjernes, f.eks. ved katalytisk hydrogenolyse nå» r R 2 2 er benzyl, for å o gi en aminoacetal med den følgende formel (XXII):
Forbindelsene (XX) og (XXII) kobles under passende koblings betingelser, f.eks. i nærvær av isobutyl klorformiat ved en temperatur på -40°C til romtemperatur, for å gi en forbindelse med formel (I-C). Når R<4>er hydrolyserbar under basiske betin-
° 4 4 geiser, som f.eks. nar R er alkoksykarbonylalkyl, kan R -gruppen omdannes til en alternativ R 4-gruppe ved basisk hydrolyse, f.eks. omdannelsen av metoksykarbonyletyl til karboksyetyl. Hydrolyse eller transacetalisering av (I-C) gir den ønskede forbindelse (I) •
Den ovenstående syntese er spesielt anverdbar for fremstilling av N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, som er en meget foretrukken forbindelse med formel (I).
Andre reaktanter og sekvenser av trinn kan anvendes når det er ønskelig å fremstille andre forbindelser med formelen (I), (II) eller (III) via de tilsvarende acetaler.
Farmasøytiske preparater kan omfatte en farmasøytisk effek-tiv mengde av minst ett prolinderivat med formelen (I), (II) eller (III), hvor R<1>, R<2>, R<3>, R<4>, R<5>, R<6>, R<7>,R<8>,R<9>,R<10>og R 11 er som definert ovenfor, eller et farmasøytisk godtagbart syre- eller base-addisjons- eller metall-salt derav, eller en farmasøytisk godtagbar likevektsaddisjons-forbindelse av aldehyd-gruppen derav, og en farmasøytisk godtagbar fortynner eller bærer.
Styrken for forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse til å opptre som elastase-inhibitorer ble bestemt ved avnen hos en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen til å inhibere virkningen av human leukocyttelastase (HLE) på et peptidsubstrat med lav molekylvekt. Styrken til en inhibitor vurderes ved å oppnå en kinetisk bestemmelse av dissosiasjons-konstanten, , av komplekset som dannet ved innvirkning av inhibitoren på HLE. Det substrat som ble brukt var anilidet metoksysuccinyl-alanyl-alanyl-prolyl-valin-p-nitroanilid som beskrevet av K.Nakajima et al., i The Journal of Biological Chemistry, vol. 254, sider 4027-4032 (1979) og av T.Teshima et al., i The Journal of Biological Chemistry, vol. 257, nr. 9, sider 5085-5091 (1982). Dey HLE-enzymet som ble brukt i disse forsøk kan oppnås ifølge B.R. Viscarello et al., i Preparative Biochemistry, vol. 13 (1983).
Fra HLE-enzym oppnådd som beskrevet i Viscarello et al- referansen, ble det målt en standard hastighet for produksjon av p-nitroanilin ved romtemperatur sektrofotometrisk i det syn-lige spektrum ved 410 nanometer, med automatisk dataoppnåelse i et Cary 210-Apple III Plus mikrokomputersystem oppnådd fra Varian Associates. Reaksjoner ble startet ved injeksjon av en liten alikvot (50 eller 100 mikroliter) av en lagerløsning av anilid-substratet i DMSO i en kuvette inneholdende buffer og HLE-enzym. Den mengde HLE som brukes er tilstrekkelig til å frembringe en starthastighet på på ca. 0,01 OD (optisk densitet) pr. minutt. Sluttvolumet var 3 ml. Starthastigheter for produksjon av p-nitroanilin ble bestemt fra lineær regressjons-analyse av minst 30 datapunkter (0D41Qmot tid) som var opptatt under den første, lineære delen av reaksjonen. Starthastigheten for HLE-prøven uten noen inhibitor til stede ble oppnådd og brukt som en standard for den etterfølgende bestemmelse av starthastigheten for reaksjonen i nærvær av en inhibitor som skal testes. K^-verdien for en spesiell inhibitor ble bestemt som følger. Til en 3 ml kuvette ble det tilsatt 2,78 ml av en buffer (9 millimolar natriumfosfat, 10% DMSO (volum/volum),
pH = 7,9), 100 mikroliter av inhibitorløsning i DMSO og 20 mikroliter av HLE-lagerløsning ved samme konsentrasjon som ble brukt i kontrollen. Etter at inhibitoren og enzymløsningen var kommet i likevekt ble reaksjonen startet ved tilsetning av 100 mikroliter av lagersubstratløsningen i DMSO. Sluttløsningen hadde 16,6% (volum/volum) av DMSO, og pH 8,1. Substratet hadde en startkonsentrasjon på 1,6 x 10<-4>mol pr. liter. Dobbelte eller tredobbelte forsøk ble gjort ved null inhibitorkonsentrasjon som kontroller og minst tre inhibitorkonsentrasjoner som ikke var null typisk fra 1 x 10 M til 1x10 M. En Dixon-avsetning (resiprok hastighet mot inhibitorkonsentrasjon) ble brukt for å bestemme slik det beskrives av I.H. Segal i "Enzyme Kinetics", sider 109-111, John Wiley and Sons, New York
(1975). Variasjon i prosent DMSO vil resultere i små forand-ringer i K.-verdiene. K.-verdien for produktet fra eksempel
1 -8 1 -8 32g var 9,4 x 10 mol pr. liter, eksempel 1f var 1,5 x 10
— R
mol pr. liter, eksempel 5b var 3,0 x 10 mol pr. liter og eksempel 8b var 6x10 mol pr. liter. Foretrukne forbindelser fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse har K^-verdier i om-rådet 10~<9>mol prTliter til 10~<7>mol pr. liter.
Farmakokinetikk: Syriske hanhamstere (80 til 120 g) inji-seres subkutant med testforbindelsen. Før injeksjonen og ved varierende tidsperioder deretter bedøves de lett med eter og blodprøver på hver ca. 0,2 ml tas ut ved hjertepunktur. Blodet presses så ut i 2 ml sentrifugerør og får koagulere i en time. Prøven sentrifugeres så og serumet fjernes. Blodprøver tas ut før (tid 0) og 15, 30, 60, 90 og 120 minutter etter subkutan administrasjon av testforbindelsen i et passende løsningsmiddel.
Medisinnivåer bestemmes ved først å inaktivere endogene elastaseinhibitorer ved inkubering av 50 mikroliter serum med et like stort volum buffer inneholdende 5 mg/ml oksepankreastrypsin i 5 minutter. Det trypsin inaktiverte serum (40 mikroliter) tilsettes så til en 3 ml kuvette inneholdende buffer som er gjort 20 nM når det gjelder human leukocytt elastase. Etter ytterligere 2 minutters inkubering startes reaksjonen ved tilsetning av substrat (100 mikroliter) (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA, 1,6 nM) og reaksjonen følges spektrofotometrisk ved en bølgelengde på 410 nm. Serumkonsentrasjoner av testforbindelsene bestemmes ved hjelp av følgende ligning:
hvor [ l\, \ e] og £s] er forsøkskonsentrasjonene for respektive inhibitorenzym og substrat, K. er inhibisjonskonstanten til den inhibitor som skal undersøkes, Km er Michaelis-konstanten til substratet, Vo er reaksjonshastigheten til uinhibert kontroll og Vi er den inhiberte reaksjonshastigheten. Hastigheten for serumreaksjonen ved tiden 0 tas som V. Data er uttrykt som den molare konsentrasjonen av inhibitor i serum mot tiden etter inhibitor-administrasjon. En omtrentlig serum halvtid (t1/2) beregnes fra kurven.
Forbindelsen N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valinal (forbindelsen fra eksemplene 5 og 6) er meget foretrukket fordi denne forbindelse i tillegg til stor styrke slik det måles ved hjelp av dens Ki-verdi, har god akti-vitet hos dyr slik det måles ved hjelp av den ovenstående test.
Ingen av de nye forbindelsene som er testet in vivo oppviste noen tegn på toksisitet ved de konsentrasjoner som ble admini-strert (ca. 30 mg/kg kroppsvekt).
Forbindelsene som fremstilles ifølge oppfinnelsen kan administreres til et dyr, spesielt et menneske som har behov for det, forlindring av betingelser omfattende pulmonalt emfysem, eterosklerose og osteo- og reumatiod artritt, spesielt for emfysem. Administrasjonsmåten kan være parenteral, inkludert subkutan avsetning av en osmotisk pumpe, eller via en pulverformig eller flytende aerosol. Dor parenteral administrasjon vil det gis en 1 til 10 ml intravenøs, intramuskulær eller subkutan injeksjon som inneholder ca. 0,02 til 10 mg/kg kroppsvekt av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen 3 eller 4 ganger daglig. Injeksjonen vil inneholde en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen i en vandig isotonisk steril løsning eller suspensjon, eventuelt med et konserveringsmiddel som f.eks. fenol eller et solubiliseringsmiddel som f.eks. etylendiamin-tetraeddiksyre (EDTA). I en pulverformig aerosol kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen administreres på samme måte som cromolynnatrium via en Spinhaler turbo-inhaleringsanordning oppnådd fra Fisons Corp. i Bedford, Massachusetts med en hastighet på ca. 0,1 til 50 mg/kapsel, ved 1 til 8 kapsler administreres daglig til et gjennomsnittsmenneske. Hver kapsel som skal anvendes i Spinhaler inneholder den nødvendige mengde av en forbindelse fremstilt ifølge oppfinnelsen idet resten av kapselen er en farmasøytisk godtagbar bærer som f.eks. laktose. I en flytende aerosol administreres forbindelsene som fremstilles ifølge oppfinnelsen i en mengde av ca. 100 til 1000 mikrogram pr. "puff" eller aktivert frigjøring av et standard volum driv-middel. Den flytende aerosolen vil gis i en mengde av 1 til 8 "puff" pr. dag med variasjon i doseringene avhengig av alvoret av den tilstand som behandles, vekten av pasienten og partikkel-størrelsesfordelingen av aerosolen, siden mindre partikler vil oppnå større lungeinntrengning. Drivmidler, f.eks. et fluorert hydrokarbon eller isobutan, beholdere, ventiler og utløsere for flytende aerosoler er beskrevet av L. Lachman et al. i "The Theory and Practice of Industrial Pharmacy", Lea and Febiger, Philadelphia (1976).
I de følgende eksemplene og gjennom beskrivelsen brukes følgende forkortelser: atm (atmosfærer), kp (kokepunkt), °C,
g (gram), t (timer), mg (milligram), min (minutter), ml (milli-liter, mmol (millimol), smp (smeltepunkt), N (normal), nm (nano-
meter), nM (nanomolar), Rf (relativ mobilitet i TLC), TLC (tynn-skiktskromatografi, DCC (dicykloheksylkarbodiimid), DMF (dimetylformamid, DMSO (dimetylsulfoksyd), Et20 (dietyleter), EtOAc (etylacetat), HOAc (eddiksyre), HOBT (hydrobenzotriazol), MeOH (metylalkohol), Pd/C (palladium-på-kull-katalysator), pNA (para-nitroanilid), og THF (tetrahydrofuran). I tillegg anvendes C, H, N, osv. (de konvensjonelle symbolene for elementene). L-konfigurasjonen er angitt i de følgende eksemplene og i beskrivelsen i alle tilfeller hvor det foreligger chiralitet og konfigurasjonen ikke er spesifisert.
Eksempel 1
N- alfa- t- butyloksykarbonyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L-lysyl- L- valyl - L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R1 = -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2; R<3>= -(CH2)4NH_
COOCH-C,!^; R<4>= -OC(CH,),.
a. N-alfa-t-butoksykarbonyl-L-valyl-L-prolinmetylester
1-hydroksybenzotriazol (65,4 g, 0,484 mol) ble tilsatt til en løsning av N-t-butyloksykarbonyl-L-valin (52,5 g, 0,242 mol) i 600 ml tørt DMF ved 0°C under en nitrogenatmosfære og omrørt i 15 min. Til den resulterende løsning ble det tilsatt en suspensjon av L-prolinmetylesterhydroklorid (40,0 g, 0,242 mol) med TEA (36 ml, 0,25 mol) i tørt DMF fulgt av DCC (55,0 g, 0,266 mol). Blandingen ble omrørt i 3 timer ved 0°C og så ved romtemperatur i 4 dager. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble blandet med 1,0 1 EtOAc og filtrert. Filtratet ble vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre, saltløsning, mettet vandig NaHCO^og saltløsning. Den organiske fase ble tørket over Na2SO^, filtrert og konsentrert for å gi 80,7 g av produktet som en tykk gul sirup, TLC, Rf=0,4, silikagel, EtOAc:CHCl3(15:85).
b. L-valy1-L-prolinmetylesterhydroklorid
En løsning av 6N HCl/EtOAc (200 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 1a i EtOAc (300 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til romtemperatur og omrørt over natten. Den resulterende løsning ble konsentrert under vakuum. Det gjenværende faststoffet ble utgnidd med Et20 for å gi 33,9 g av produktet som et hvitt faststoff.
c. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valy1-L-prolinmetylester
Isobutylklorformiat (16,7 g 0,122 mol) ble tilsatt til- en løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lisin (46,4 g, 0,122 mol), N-metylmorfolin (13,2 g, 0,13 mol) i tørt THF (300 ml) ved -25°C under en nitrogenatmosfære. Det dannet seg straks et hvitt bunnfall. Reaksjonsblandingen
ble omrørt i 1 time og så avkjølt til -60°C. En forhåndsavkjølt (-78°C) suspensjon av produktet fra eksempel 1b (33,0 g, 0,122 mol) med N-metylmorfolin (13,2 g, 0,13 mol) i tørt THF (300 ml) ble tilsatt i én porsjon. Reaksjonsblandingen ble varmet langsomt opp til romtemperatur og omrørt over natten. Den resulterende blanding ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum for å gi en rest som ble oppløst i EtOAc og vasket i rekkefølge med vandig 1N HC1, mettet vandig NaHCO^ og saltløsning. Den organiske fase ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (82,0 g) som en lys gul olje, TLC, Rf=0,65, silikagel, EtOAc.
d. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
En løsning av NaOH (0,75 g, 18,75 mmol) i H20 (10 ml) ble tilsatt til en omrørt løsning av produktet fra eksempel 1c
(10,1 g) i MeOH (50 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten og så konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble oppløst i H20 og løsningen ekstrahert med Et20. Det vandige skiktet ble surgjort med 5%-ig vandig sitronsyre og ekstrahert med EtOAc. Den organiske fase ble tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (9,27 g) som et hvitt faststoff, TLC, Rf=0,55, silikagel, MeOH:CHCl3:HOAc (9,5:90:0,5).
e. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzy1oksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-proly1-L-val inoi
En løsning av produktet fra eksempel 1d i tørt THF (100 ml) under en nitrogenatmosfære ble avkjølt til -20°C. N-metylmorfolin (1,6 ml, 14,8 mmol) ble tilsatt fulgt av isobutylklorformiat (1,9 ml, 14,8 mmol). Blandingen ble omrørt i 10 min. og så av-kjølt til -40°C. En løsning av L-valinol (1,5 g, 14,8 mmol)
i tørt THF (50 ml) ble tilsatt dråpevis. Løsningen fikk varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert, filtratet konsentrert under vakuum og resten oppløst i EtOAc. EtOAc-løsningen ble vasket i rekkefølge med vandig 1N HC1, mettet vandig NaHCO^ og saltløs-ning. Den organiske fasen ble tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert i vakuum for å gi 9,06 g av den rå alkoholen. Alkoholen ble renset ved kromatografering på silikagel med MeOH:EtOAc (3,97) som elueringsmiddel for å gi produktet, TLC, Rf=0,25, silikagel, MeOH:EtOAc (5,95).
Elementær analyse
Beregnet for<C>34H55<N>5<0>8-<H>2<0:>C, 60,07; H, 8,45; N, 10,30 Funnet: C, 60,00; H, 8,22; N, 10,55
f. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
En løsning av DMSO (85 mikroliter) i tørt CH2C12(1 ml) ble tilsatt dråpevis med en sprøyte til en omrørt løsning av oksalyl-klorid (52 mikroliter, 0,6 mmmol) i tørt CH2C12(1 ml) avkjølt til -23°C under en nitrogenatmosfære. En løsning av produktet fra eksempel 1e (0,20 g, 0,3 mmol) i CH2Cl2(1,5 ml) ble tilsatt på samme måte. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 min. og TEA (166 mikroliter, 1,2 mmol) tilsatt dråpevis med en sprøyte. Reaksjonsblandingen fikk langsomt varme seg opp til romtemperatur og ble så fortynnet med CH2C12og vasket i rekkefølge med 10%-ig vandig eddiksyre, 5%-ig vandig NaHCO^ og saltløsning.
Den organiske fasen ble tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi det rå aldehydet. Aldehydet ble renset ved bruk av to påfølgende flash-kromatograferinger med silikagel og elueringsmidler av henholdsvis CH2Cl2:EtOAc (3:7) og MeOH:CHCl3(3:97) for å gi produktet (90 mg), TLC, Rf=0,45, silikagel, MeOH:Et20 (5:95).
Elementær analyse
Beregnet for<C>34H53<N>5<Og>.<H>2<0:>C, 60,24, H, 8,18, N, 10,33 Funnet: C, 60,01, H, 7,84, N, 10,09
Fremstillingen av bisulfittaddukter av dette og andre aldehyder med formel (I) er beskrevet i eksempel 31.
Eksempel 2
N- alfa- t- butyloksykarbonyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L-lysy1- N- epsilon- benzyloksykarbony1- L- lysy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I):R<1>=-CH(CH0)«; R<2>= -(CH_).NHCOOCH„C,Hc;
ti Å/. 4 zoo
R = -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R = -OC(CH3)3.
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysinmetylester
En løsning av isobutyl klorformiat (0,79 g, 5,79 mmol) i CH2C12(10 ml) ble tilsatt dråpevis til en omrørt løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysin (2,00 g, 5,26 mmol) og N-metylmorfolin (1,33 g, 13,15 mmol) i CH2C12(50 ml) avkjølt til -23°C under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble omrørt i ytterligere 15 min. og N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin-metyl-ester-hydroklorid (1,74 g, 5,26 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Blandingen ble vasket i rekkefølge med 5%-ig vandig NaHC03, to ganger med 5%-ig vandig sitronsyre og saltløsning. Den organiske fase ble tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum. Produktet ble renset ved flash-kromatografi på silikagel med MeOH:CHCl3(3:97) som elueringsmiddel for å gi produktet
(2,20 g) som en klar sirup. Forbindelsen ble utgnidd med Et,,0 for å gi produktet som et hvitt bunnfall, smp = 108-110°C, TLC,<R>f=0,59, silikagel, MeOH:CHCl3(3:97).
b. N-alfa-t-butoksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysin
Produktet fra eksempel 2a (0,12 g, 3,05 mmol) ble blandet med NaOH (0,12 g, 3,05 mmol) og MeOH (50 ml) og omrørt over natten ved romtemperatur. Løsningen ble konsentrert under vakuum ved romtemperatur og den resulterende rest oppløst i H20 (40 ml). HOAc (3,36 mmol) ble tilsatt og det faste produktet ble isolert ved dekantering. Produktet ble oppløst i CH2C12, vasket i rekkefølge med 5%-ig vandig sitronsyre og saltløsning,
og tørket med Na2S04. Løsningen ble filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (1,62 g) som en klar sirup,
TLC, Rf = 0,10, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
c. N-alfa-t-butoksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysy1-L-prolinmetylester
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 2a, ved
bruk av produktet fra eksempel 2b (1,51 g, 2,35 mmol) og N-metylmorfolin (0,59 g, 5,88 mmol) i CH2CL2(50 ml) og tilsetning av isobutyl klorformiat (0,35 g, 2,59 mmol) og L-prolin-metyl-ester-hydroklorid (0,39 g, 2,35 mmol) for å gi produktet (0,95 g), TLC, Rf = 0,95, silikagel, MeOH:CHCl3(3:97).
d. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysy1-L-prolin
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 2b ved bruk av produktet fra eksempel 2c (0,95 g, 1,26 mmol), NaOH (0,56 g, 1,4 mmol) og MeOH (50 ml). Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHC13*.HOAc (4,5:95:0,5) for å gi produktet (0,75 g), TLC, Rf = 0,50, silikagel, MeOH: CHCl3:HOAc (4,5:95:0,5).
e. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysy1-L-prolyl-L-valinol
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 2a ved bruk av produktet fra eksempel 2d (0,42 g, 0,568 mmol) og N-metylmorfolin (0,06 g, 0,568 mmol) i CH2C12(25 ml) og tilsetning av isobutyl klorformiat (0,08 g, 0,568 mmol) og L-valinol (0,06 g, 0,568 mmol). Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel ved bruk av MeOHiCHCl^(3.97) som elueringsmiddel for å gi tittelforbindelsen (0,18 g), TLC, Rf = 0,48, silikagel, MeOH:CHCl3(3:97).
f. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-propyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f ved bruk av oksalyl klorid (0,03 g, 0,213 mmol) i CH2C12(2 ml) og tilsetning av DMSO (0,03 g, 0,380 mmol) i CH2C12(2 ml), produktet fra eksempel 2e (0,16 g, 0,194 mmol) i CH2C12(2 ml) og TEA (0,10 g, 1 mmol) i CH2C12(2 ml). Den rå blandingen ble separert ved hjelp av flash-kromatografering for å gi produktet (0,022 g), TLC, Rf = 0,47, silikagel, MeOH:CHCl3(3:97).
Elementær-analyse
Beregnet for C43H62N6°10<:>C, 62,75, H, 7,59; N, 10, 21 Funnet: C, 62,54; H, 7,45; N, 10,41
Eksempel 3
N- alfa- t- butyloksykarbonyl- N- epsilon- pikolinyl- L- lysyl- L-valyl- L- proly1- L- valinal
Formel (I): R1 = -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2; R<3>= -(CH2)4-NHCO-2-pyridyl; R<4>= -OC(CH3)3.
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolinmetylester
Produktet fra eksempel 1c (5,88 g, 9,95 mmol) ble blandet med 10% Pd/C (1,25 g) og MeOH (100 ml) og plassert i en Parr-rystemaskin (3 atm. H2). Reaksjonen ble stanset etter at den teoretiske mengde H_ var forbrukt. Blandingen ble filtrert gjennom diatome-jord (Celite ®) og konsentrert under vakuum for å gi produktet (4,46 g), TLC, Rf = 0,10, silikagel, MeOHrCHCl, (3:97). (Celite ®) er et registrert varemerke for Manville Corporation, Denver, Colorado, U.S.A.).
b. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-pikolinyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin-metylester
En løsning av pikolinsyre (0,65 g, 5,32 mmol), HOBT (1,44 g, 10,64 mmol) og N-metylmorfolin (0,54 g, 5,32 mmol) i DMF (100 ml) ble avkjølt til 0°C og DCC (1,21 g, 5,85 mmol) tilsatt. Blandingen ble omrørt i ytterligere 15 min. og produktet fra eksempel 3a (2,43 g, 5,32 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen fikk lov å varme seg opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Blandingen ble filtrert og konsentrert under vakuum. Resten
ble oppløst i CH-jCl-j, vasket i rekkefølge med H.,0, tre ganger med 5%-ig vandig NaHCO^ og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet, som ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(5:95) som elueringsmiddel for å gi produktet (1,45 g) som et brunt hygroskopisk skum, TLC,
Rf = 0,35, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
c. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-pikolinyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 2b, ved bruk av produktet fra eksempel 3b (1,05 g, 1,87 mmol) og NaOH (0,1 1g, 2,8 mmol) i MeOH (50 ml) for å gi produktet (0,87 g), TLC, Rf = 0,80, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
d. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-pikolinyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 2a ved
bruk av produktet fra eksempel 3c (1,17 g, 2,14 mmol) og N-metylmorfolin (0,24 g, 2,35 mmol) i CH2C12(40 ml) og tilsetning av isobutyl klorformiat (0,29 g, 2,14 mmol) i CH2C12
(20 ml) fulgt av L-valinol (0,22 g, 2,14 mmol) for å gi produktet (1,07 g) som et hvitt skum, TLC, Rf = 0,35, silikagel, MeOH:CHCl3(3:97).
e. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-pikolinyl-L-lysyl-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f ved bruk av oksalylklorid (0,92 g, 7,25 mmol) i CH2C12(20 ml) og tilsetning av DMSO (1,13 g, 14,5 mmol) i CH2C12(5 ml), produktet fra eksempel 3d (0,92 g, 1,45 mmol) i CH2C12 (5 ml) og TEA (7,34 g, 72,5 mmol) i CH2C12(5 ml). Den rå blandingen ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(5:95) for å gi produktet (0,23 g), TLC, Rf = 0,66, silikagel, MeOH:CHCl3, (5:95) .
Elementær-analyse
Beregnet for C,oHi:r.Nc0_.2H_0: C, 57,64; H, 8,16; N, 12,61 Funnet: C, 57,57; H, 7,96; N, 12,51
Eksempel 4
N- alfa- t- butyloksykarbonyl- N- epsilon- fenylkarbamoy1- L-lysy1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2; R<3>= -(CH2)4~
NHCONHC6H5; R<4>= -OC(CH3)3.
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-fenylkarbamoy1-L-lysyl-L-valyl-L-prolin-metylester
En løsning av produktet fra eksempel 3a (1,02 g, 2,0 mmol) og fenyl isocyanat (0,23 ml, 2,1 mmol) i CHCl3(15 ml) ble om-rørt ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, resten oppløst i EtOAc, og løsningen vasket i rekkefølge med vandig 1N HC1, mettet vandig NaHC03og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket over Na-jSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (1,25 g) som et hvitt skum, TLC, Rf = 0,36, silikagel, EtOAc.
b. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-fenylkarbamoy1-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1d, ved å bruke produktet fra eksempel 4a (0,75 g, 1,25 mmol), 1N NaOH (1,4 ml, 1,4 mmol) og MeOH (5 ml) for å gi produktet (0,76 g).
c. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-fenylkarbamoyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinoi
En løsning av produktet fra eksempel 4b (0,76 g, 1,3 mmol) i tørt THF (10 ml) ble avkjølt til -20°C under en nitrogenatmosfære. N-metylmorfolin (0,15 ml, 1,3 mmol) ble tilsatt fulgt av isobutyl klorformiat (0,17 ml, 1,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 10 min. og temperaturen senket til -45°C. En løs-ning av L-valinol (0,135 g, 1,3 mmol) i tørt THF (5 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen fikk varme seg opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert, konsentrert under vakuum og resten renset ved hjelp av flash-kromatografering på silikagel med MeOH:EtOAc (10:90) for å gi produktet (0,68 g), TLC, Rf = 0,41, silikagel, MeOH:EtOAc (1:9).
d. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-fenylkarbamoy1-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f, ved bruk av aksalyl klorid (0,12 ml, 1,78 mmol) i CH2C12(0,5 ml) og tilsetning av DMSO (0,32 ml, 3,56 mmol) i CH2Cl2 (0,5 ml), produktet fra eksempel 4c (0,6 g, 0,89 mmol) i CH2C12(1 ml)
og TEA (0,49 ml, 3,56 mmol). Råproduktet ble renset ved flash-kromatograf ering på silikagel med MeOH:Et20 (10:90) for å gi produktet (0,41 g) som et hvitt skum, TLC, R^ = 0,43, silikagel, MeOH:Et20 (1:9).
Eksempel 5
N- alfa- succinyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L- lysyl- L-valyl - L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH_ ) .NHCOOCH„C,H,- ; R4 = -CHnCH_COOH.
A42. b 5Z/.
a. N-alfa-succiny1-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
En løsning av produktet fra eksempel 1e (3,57 g, 5,4 mmol)
og trifluoreddiksyre (4,2 ml, 54 mmol) i CH2C12(10 ml) ble om-rørt ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, resten ble oppløst i CH3CN (90 ml), og N-metylmorfolin (6,0 ml, 54 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og en løsning av ravsyreanhydrid (0,59 g, 5,9 mmol) i CH3CN (10 ml) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble holdt ved 5°C i 72 timer og så konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc, vasket i rekkefølge med vandig 1N HC1 og saltløsning, tørket over Na2S04og filtrert. EtOAc-løsningen ble konsentrert under vakuum for å gi produktet som en viskøs gul olje, TLC, R^ = 0,4, silikagel, MeOH:CHCl3(1:9). Den oppnådde gule olje vil, ved henstand, langsomt omdannes til et uidentifisert sekundært produkt (TLC, R^ = 0,6, silikagel, MeOH:CHCl3(1:9)) som kan gjenomdannes til det ønskede produkt med behandling med vandig MeOH inneholdende 1,1 ekvivalenter NaOH.
b. N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl -L-prolyl -L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i eksempel
1f ved bruk av oksalyl klorid (0,175 ml, 2,0 mmol) i tørt CH2C12(1 ml) og tilsetning av DMSO (0,28 ml, 4,0 mmol) i CH2C12(0,5 ml), produktet fra eksempel 5a (0,7 g, 1,06 mmol) i CH2C12
(2 ml) og TEA (0,55 ml, 4,0 mmol) for å gi råproduktet (0,66 g) som et blekgult skum. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel (Baker, surt) ved bruk av et elueringsmiddel av
MeOH:CHCl3(5:95) ga produktet (0,188 g), TLC, Rf = 0,45, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (9,5:90:0,5).
Elementær-analyse:
Beregnet for C33<H>49<N>5<0>9.<1/>2H20: C, 59,26; H, 7,53; N, 10,47 Funnet: C, 59,48; H, 7,27; N, 10,31
<1>H-NMR (dimetylsulfoksyd-d6): delta 9,45 (1H, s), 8,16
(1H, d), 7,98 (1H, d), 7,82 (1H, d), 7,34 (5H, m), 7,22 (1H, dd), 5,0 (2H, s), 4,44 (1H, m), 4,26 (2H, m), 4,07 (1H, m), 3,74
(1H, m), 3,56 (1H, m), 2,96 (2H, m), 2,4 (4H, m), 2,26-1,16 (1 2H, m), 0,86 (12H, m).
Eksempel 6
N- alfa- succinyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L- lysyl- L-valyl- L- prolyl- L- valinal - Alternativ syntese
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R<4>= -(CH2)2C02H
a. N-benzyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolin-t-butyl-ester
En løsning av N-benzyloksykarbonyl-L-valin (56,25 g,
0,244 mol) og HOBT (60,67 g, 0,45 mol) i DMF (565 ml) ble av-kjølt til 5°C. DCC (50,89 g, 0,247 mol) ble tilsatt i én porsjon. Blandingen ble omrørt i ytterligere 15 min. ved 5°C
og så ble L-prolin-t-butyl-ester (38,36 g, 0,224 mol) tilsatt. Blandingen ble omrørt i ytterligere 2 timer ved 5°C og så i 48 timer ved romtemperatur. Blandingen ble filtrert og konsentrert under vakuum. Den oljeaktige resten ble oppløst i EtOAc (1 liter) og vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre, mettet vandig NaHC03og saltløsning. Den organiske fasen ble tørket over Na,,S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (92 g) som et hvitt skum, TLC, R^ = 0,9, silikagel, CHCl3/EtOAc (85:15).
b. L-valyl-L-prolin-t-butyl-ester
En blanding av produktet fra eksempel 6a (92 g, 0,227 mol) og 10% Pd/C (10 g) i EtOH (1 liter) ble hydrogenert på en Parr-rystemaskin i 6 timer ved 4,2 kg/cm 2 ved romtemperatur. Blandingen ble filtrert gjennom Celite<®>og konsentrert under vakuum for å gi produktet (62 g) som en viskøs gul olje, TLC, R f = 0,3, silikagel,MeOH/CHCl3(10:90).
c. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin-t-butyl-ester
HOBT (8,55 g, 0,06 mol) og DCC (7,35 g, 0,036 mol) ble tilsatt til en løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin (12,0 g, 0,03 mol) i tørt THF (200 ml) ved 5°C. Blandingen ble omrørt i 15 min. ved 5°C. Produktet fra eksempel 6b (9,16 g, 0,03 mol) ble så tilsatt til blandingen. Den resulterende løsning fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt i 24 timer. Blandingen ble filtrert og konsentrert under vakuum. Den oljeaktige resten ble oppløst i EtOAc (500 ml) og vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre, mettet vandig NaHCO^ og saltløsning. Den organiske fasen
ble tørket over Na2SO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (20 g) som et gult skum, TLC, Rf = 0,6, silikagel,
CHCl3:MeOH (95:5).
d. N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valy1-L-prolin-tr i f luoracetat-salt
Trifluoreddiksyre (25 ml, 0,32 mol) ble tilsatt til en løs-ning av produktet fra eksempel 6c (10,38 g, 16,4 mol) i CH2CI2(25 ml) ved romtemperatur og den resulterende blanding ble om-rørt i 5 timer. Løsningen ble konsentrert under vakuum og resten utgnidd med Et20. Produktet ble isolert ved filtrering og tør-ket under vakuum for å gi et hvitt fast-stoff (7,4 g).
e. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl -L-lysyl-L-valyl -L-prol in
Vandig 1N NaOH (460 ml, 0,46 mol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av produktet fra eksempel 6d (136,5 g, 0,23 mol) i CH2CI2 (1,5 liter) ved romtemperatur. Blandingen ble avkjølt til 0°C og 3-karbometoksypropionyl-klorid (34,6 g, 0,23 mol) ble tilsatt dråpevis. Den resulterende løsning ble omrørt karftig i 12 min. Løsningen ble fjernet fra isbadet, fortynnet med H20 (800 ml), og justert til pH 2,0 ved dråpevis tilsetning av vandig 1N HC1 (40 ml). Den organiske fase ble separert og det vandige skiktet ble ekstrahert med CH2C12(2 x 500 ml). De organiske skiktene ble kombinert, vasket i rekkefølge med H20
(2 x 500 ml) og saltløsning (500 ml), tørket over Na2S04og, filtrert. Filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi råproduktet (126,4 g), TLC, Rf = 0,25, silikagel, MeOH/CHCl3/HOAC (5:94,5:0,5).
f. N-benzyloksykarbonyl-L-valinol
Benzyl klorformiat (91,0 g, 0,532 mol, 95% renhet) ble tilsatt dråpevis over en periode på 1 time til en forhåndskjølt (0°C) løsning av L-valinol (50,0 g, 0,484 mol) og trietylamin (60,0 g, 0,6 mol) i CHC13(1500 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og fikk lov å varme seg opp til romtemperatur i løpet av 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum. EtOAc (1500 ml) ble tilsatt til den resulterende rest og den organiske løsningen ble vasket med vandig 1N NaOH
og saltløsning. Den organiske fasen ble tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble renset ved flash-kromatografering på en kolonne av silikagel (6 cm x 30 cm) ved bruk av en trinnvis gradient av Et20:heksan (1:5) fulgt av ren Et20 for å gi produktet (91,4 g) som et hvitt voksaktig fast-stoff, TLC, R^ = 0,23, silikagel, heksan:Et20 (50:50) .
g. N-benzyloksykarbonyl-L-valinal
En løsning av DMSO (107,2 g, 1,372 mol) i CH2C12(150 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 0,5 time til en forhåndskjølt (-60°C), omrørt løsning av oksalyl klorid (87,1 g, 0,686 mol) i<CH>2C12(800 ml) under en nitrogenatmosfære. Temperaturen i blandingen steg til -45°C. Reaksjonsblandingen ble så varmet opp til -30°C. En løsning av produktet fra eksempel 6f (81,5 g, 0,343 mol) i CH2C12(300 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 45 min. ved -30°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 50 min. ved -25°C, vakjølt til -40°C og en løsning av diisopropyletylamin (177,4 g, 1,372 mol) i CH2C12(250 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 45 min. ved -40°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time mens den varmet seg opp til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2C12(1500 ml) og den organiske fasen ble vasket med vandig 1N HC1 og så konsentrert under vakuum for å gi produktet (98 g) som en grønn olje som ble brukt umiddelbart uten ytterligere rensing, TLC, R^ = 0,48, silikagel, heksan:Et20 (50:50).
h. N-benzyloksykarbony1-L-valinal-dietylacetal
Trietyl ortoformiat (700 g, 4,723 mol), absolutt EtOH
(800 ml) og p-toluensulfonstre monohydrat (5,0 g, 0,026 mol) ble tilsatt til produktet fra eksempel 6g (81 g, 0,343 mol). Blandingen ble omrørt i 10 min. ved romtemperatur og så konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble oppløst i Et20 og vasket med mettet vandig NaHCO^. Den organiske fasen ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet. Dette produkt ble renset ved flash-kromatografering med silikagel ved bruk av en trinnvis gradient av heksan til blandinger av CH2C12-.heksan til EtOAc:CH2Cl2(30:70) for å gi produktet som en blekgul olje, TLC, R^ = 0,21, silikagel, CH2C12:petroleter (50:50).
i. L-valinal-dietylacetal
En blanding av produktet fra eksempel 6h (147,8 g, 0,478 mol) og 10% Pd/C (10 g) i EtOAc (1500 ml) ble omrørt under H2
(1 atm.) inntil 2500 ml H2var forbrukt. To ganger under denne tid ble reaksjonen avbrutt og 10% Pd/C (10 g) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble så filtrert gjennom en pute av Celite<®>10% Pd/C (10 g) ble tilsa'tt og reaksjonsblandingen omrørt inntil 10,92 liter H2var forbrukt. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®>og filtratet konsentrert under vakuum for
0 r l 2 5
å gi produktet /78,8 g) som en blekgul olje, |_alf aj D " + 7,8.
j . N-alf a- ( 3-karbornetoksypropionyl) -N-epsilon-benzyloksy-karbony1-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Isobutyl klorformiat (27,32 g, 0,20 mol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 6e (118 g, 0,20 mol) og N-metylmorfolin (20,23 g, 0,20 mol) i tørt THF (1500 ml) ved -15°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,5 time ved -15°C og så avkjølt til -40°C. En løsning av produktet fra eksempel 6i (35,05 g, 0,20 mol) i tørt THF (250 ml) ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blanding fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum. Resten ble delvis renset ved flash-kromatografering på silikagel med en trinnvis gardient fra ren Et20 til MeOH:Et20 (10:90).
Endelig rensing på en Waters Prep 500<®>Liquid Chromatograph utstyrt med silikagel-kolonner ved bruk av MeOH:Et20:CH2C12(2,5:40:60) som elueringsmiddel ga produktet (87,5 g, 58%).
k. N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
En løsning av vandig 1N NaOH (14 ml, 14 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 6j (10,0 g, 13,4 mmol) 1 MeOH/H20 (1:1, 280 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble om-rørt i 2-4 timer. MeOH ble fjernet under vakuum for å gi en vandig løsning.
Dowex<®>50WX8-H harpiks (500 g), H20 (1000 ml) og aceton (120 ml) ble tilsatt til denne vandige løsning. Denne blanding ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton (1,0 liter). Filtratet og vaskingene ble kombinert og acetonet ble fjernet under vakuum. H20 ble fjernet ved bruk av en lyofilisator for å gi produktet (7,8 g, 11,8 mmol) som et hvitt, dunaktig fast-stoff, TLC,
Rf = 0,3, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (5:95:0,5).
1. Natriumsaltet av N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksy-karbony1-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
En løsning av produktet fra eksempel 6k (100 mg, 0,150 mmol) i vann (100 ml) ble behandlet med vandig 1N NaOH (0,15 ml) og så omrørt i 10 min. ved romtemperatur. Vannet ble fjernet med en lyofilisator for å gi natriumsaltet som et hvitt pulver.
<1>H-NMR (dimetylsulfoksyd-dg): delta 9,43 (1H, s), 8,57
(1H, d, J=7,5 Hz), 8,20 (1H, d, J=7,6 Hz), 8,03 (1H, d, J=7,6 Hz), 7,34 (6H, m), 4,99 (2H, s), 4,44 (1H, m), 4,29 (1H, m),
4,13 (1H, m), 4,02 (1H, m), 3,68 (1H, m), 3,51 (1H, m), 2,95
(2H, m), 2,36-1,16 (16H, m), 0,86 (12H, m).
Andre syrer som fremstilles ifølge oppfinnelsen kan også omdannes til de tilsvarende natriumsalter ved hjelp av denne fremgangsmåten.
m. Dilysin-adduktet av N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
L-lysin (113 mg, 0,778 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 6k (250 mg, 0,389 mmol) i MeOH:H20
(1:1, 10 ml). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 10 min. Metanolen ble fjernet under vakuum og den vandige løsningen ble lyofilisert for å gi produktet (370 mg) som et hvitt fast-stoff.
Elementær-analyse:
Beregnet for C45H76<Ng0>13.2H20: C, 54,75, H, 8,16; N, 12,77 Funnet: C, 54,64; H, 8,08; N, 12,58
Addukter av andre forbindelser fremstilt ifølge oppfinnelsen kan fremstilles på lignende måte. Dersom en karboksylsyre-gruppe ikke er til stede i molekylet, anvendes bare én ekvivalent av aminet.
Dette eksempel 6 illustrerer den foretrukne fremgangsmåten for fremstilling av tittelforbindelsen.
Eksempel 7
N- alf a- succinyl- N- eps i lon- benzy loksykarbonyl- L- ly syl - li-va ly 1- L- prolyl - D- val ina 1
Formel I: R<1>= (D)-CH(CH^)2; R2 = -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4-NHCOOCH2C6H5; R<4>= -(CH^COOH
a. N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-D-valinal dietylacetal
HOBT (1,85 g, 13,68 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 6e (4,04 g, 6,84 mmol) og D-valinal dietylacetal (1,2 g, 6,85 mmol) i tørt THF (70 ml) ved 0°C
under en nitrogenatmosfære og blandingen ble omrørt i 15 min.
Til den resulterende løsning ble det tilsatt 1 -(3-dimetylamino-propyl)-3-etylkarbodiimid hydroklorid (1,44 g, 7,52 mmol) fulgt av N-metylmorfolin (1,03 g, 10,26 mmol). Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og så i 48 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble fordelt mellom EtOAc og H20. Det organiske skiktet ble isolert og vasket i rekkefølge med vandig 1N HC1, saltløsning, mettet vandig NaHCO^ og saltløsning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi en gul olje. Denne olje ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:Et20:MeOH (60:40:3) for å gi et hvitt skum (2,3 g), TLC, R^ = 0,4, silikagel, CH2C12:Et20:MeOH (60:40:3).
b. N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valy1-L-prolyl-D-valinal
1N NaOH (3,31 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 7a (2,3 g, 3,01 mmol) i MeOH:H20 (1:1, 40 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære og blandingen ble om-rørt i 2,5 timer. MeOH ble fjernet i vakuum og den resulterende vandige løsningen ble fortynnet med ytterligere H20 (160 ml)
og aceton (20 ml), behandlet med Dowex<®>50 WX8-H harpiks (120 ml) og omrørt i 24 timer. Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton. De kombinerte filtratene ble konsentrert for
å fjerne acetonet og P^O ble lyofilisert for å gi et dunaktig hvitt fast-stoff (1,3 g), TLC, Rf = 0,7, revers-fase C^ Q (dvs. oktadecylsilan), MeOH:H20 (75:25).
Elementær-analyse:
Beregnet for C33H4gN5Og.0,25H20: C, 59,66; H, 7,51; N, 10,54 Funnet: C, 59,51; H, 7,24; N, 10,54
Eksempel 8
N- alfa- metoksysucciny1- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L-lysy1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3>2;
R3 = -(CH~) .-NHCOOCH_C,Hc; R4 = -(CH-)„-COOCH,
a. N-alfa-metoksysuccinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
En løsning av produktet fra eksempel 1e (3,2 g, 4,84 mmol) og trifluoreddiksyre (3,7 ml, 48 mmol) i CH2C12(4 ml) ble om-rørt ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, resten oppløst i THF (60 ml) og avkjølt til 0°C under en atmosfære av tørt N,,. N-metylmorf olin (8,2 ml, 75 mmol) ble tilsatt, og så ble en løsning av 3-karbometoksypropionylklorid (0,620 ml, 5,0 mmol) i 10 ml THF tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time, så filtrert og konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc, vasket i rekkefølge med H20, vandig 1N HC1, mettet vandig NaHC03 og saltløsning, tørket over vannfritt Na2S04 og filtrert. Filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi 3,1 g av et hvitaktig skum. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:EtOAc (5:95 - 10:90) ga det ønskede produkt (0,95 g), TLC, Rf = 0,35, silikagel,MeOH:EtOAc (1:9).
b. N-alfa-metoksysuccinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1f
ved bruk av oksalylklorid (0,22 ml, 2,54 mmol) i tørt CH2C12
(5 ml) og tilsetning av DMSO (0,36 ml, 5,08 mmol) i tørt CH2C12(2 ml), produktet fra eksempel 8a (0,86 g, 1,27 mmol) i tørt CH2C12(3 ml) og TEA (0,7 ml, 5,08 mmol) for å gi råproduktet som et blekgult skum. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:EtOAc (5:95) ga produktet (0,73 g), TLC,
Rf = 0,58, silikagel, MeOH:CHCl3(1:9).
Eksempel 9
N- alfa-( 4- karboksybutyryl)- N- epsilon- benzyloksykarbonyl-L- lysyl- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2<;><R2>-CH(CH ) 2',
R3 = -(CH2)4NHC02CH2C6H5; R = -(CH^CO^.
a. N-alfa-(4-karbometoksybutyryl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl -L-lysyl-L-valyl -L-prol in
Vandig 1N NaOH (11,86 ml) ble tilsatt dråpevis til en om-rørt løsning av produktet fra eksempel 6d (3,5 g, 5,93 mmol) i CH2C12(70 ml) ved romtemperatur. Blandingen ble avkjølt til 0 C og 4-karbometoksybutyrylklorid (0,82 ml, 5,93 mmol) ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blanding ble omrørt kraftig i 12 min. Løsningen ble fortynnet med H20 (30 ml), og justert til pH 2,0 ved dråpevis tilsetning av vandig 1N HC1. Det organiske skiktet ble oppsamlet og det vandige skiktet ble ekstrahert med to ganger med CH2C12. De kombinerte organiske skiktene ble vasket i rekkefølge med H20 og saltløsning, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (3,23 g), TLC, Rf = 0,25, silikagel, MeOH:CHC13:HOAC (0,45:9,5:0,1).
b. N-alfa-(4-karbometoksybutyryl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl -L-lysyl-L-valyl -L-prolyl -L-valinal -dietylacetal
Isobutyl-klorformiat (0,702 ml, 5,42 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 9a (3,2 g, 5,42 mmol) og N-metylmorfolin (0,595 ml, 5,42 mmol) i tørt THF (50 ml) ved
-15°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 0,5 time ved -15°C
og så avkjølt til -40°C. En løsning av L-valinal-dietylacetal (0,948 g, 5,42 mmol) i tørt THF (7 ml) ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blanding fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Løsningen ble filtrert, filtratet ble konsentrert under- vakuum og produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagelagel med Et20:CH2Cl2:MeOH (4:6:3) for å gi et skum (1,5 g).
Elementær-analyse:
Beregnet for ^gH^N^ 0 •0' 5H2°: C'60'76*' H'8>36'' N'9'08 Funnet: C, 60,92; H, 8,25; N, 9,04
c. N-alfa-(4-karboksybutyryl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
En blanding av produktet fra eksempel 9b (0,75 g, 0,985 mmol) i CH3OH:H20 (1:1, 20 ml) og vandig 1N NaOH (1,1 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer. Metanolen ble fjernet under vakuum for å gi en vandig løsning av produktet. Dowex<®>50WX8-H harpiks (38 ml), H20 (100 ml), aceton (25 ml) ble tilsatt og den resulterende blanding ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer.
Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton
(100 ml). Filtratene ble kombinert og konsentrert under vakuum for å gi en vandig løsning som ble lyofilisert for å gi råproduktet. Produktet ble renset på en revers-fase-kolonne (C-jg) med MeOH:H20 (60:40) for å gi et hvitt fast-stoff (0,4 g); TLC, Rf = 0,5, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (0,45, 9,5, 0,1).
Eksempel 10
N- alfa- N- epsilon- bis- benzyloksykarbonyl- L- lysy1- L- valy1-L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CHn)y1NHCOOCHnCrHc; R4 = -0CH„CrHc . z 4Åbozbb
a. N-alfa-N-epsilon-bis-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl -L-prol in -t-buty le ster
HOBT (5,0 g, 0,037 mol) ble tilsatt til en løsning av N-alfa-N-epsilon-bis-benzyloksykarbonyl-L-lysin (7,66 g, 0,0185: mol) og produktet fra eksempel 6b (5,0 g, 0,0185 mol) i 75 ml tørt THF ved 0° C under en nitrogenatmosfære. Denne blanding ble omrørt i 15 min. og DCC (4,19 g, 0,0203 mol) ble så tilsatt. Blandingen ble omrørt i 30 min. ved 0°C og så ved romtemperatur
i 3 dager. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble fordelt mellom EtOAc (200 ml) og 20%-ig vandig sitronsyre (75 ml). Det organiske skiktet ble isolert og vasket med 20%-ig vandig sitronsyre (2 x 75 ml), saltløsning, mettet vandig NaHCO^og saltløs-ning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert. Resten ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:THF: HOAc (90:10:1) for å gi et hvitt skum (8,93 g), TLC, Rf = 0,60, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
b. N-alfa-N-epsilon-bis-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl -L-prol in
Trifluoreddiksyre (15 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 10a (8,93 g) i CH2C12(50 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 timer, så fortynnet med toluen (200 ml) og konsentrert i vakuum for å gi et skum (5,73 g).
c. N-alfa-N-epsilon-bis-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl -L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
HOBT (1,29 g, 9,56 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 10b (3,0 g, 4,78 mmol) og L-valinal dietylacetal (0,84 g, 4,78 mmol) i tørt THF (65 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Etter at denne blanding var omrørt i 15 min. ble 1 - ( 3-dimetylaminopropyl)-3-ety.lkarbodiimid-hydroklorid (1,0 g, 5,26 mmol) og N-metylmorfolin (0,72 g, 7,17 mmol) tilsatt. Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og så
ved romtemperatur i 20 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble fordelt mellom EtOAc (100 ml) og H20 (50 ml). Det isolerte organiske skiktet ble vasket med 20%-ig vandig sitronsyre, saltsyre, mettet vandig
NaHCO^og saltløsning, så tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert. Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:Et20:MeOH (60:40:2) for å gi et hvitt skum (2,2 g), TLC, Rf = 0,45, silikagel, CH2C12:Et20:MeOH (60:40:2).
d. N-alfa-N-epsilon-bis-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl -L-prolyl-L-valinal
En blanding av p-toluensulfonsyre (0,07 g, 0,37 mmol) og produktet fra eksempel 10c i aceton (100 ml) ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble konsentrert i vakuum og resten ble oppløst i EtOAc (50 ml). Denne løsning ble vasket med 5%-ig vandig NaHC03og saltløsning, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi et hvitt skum (0,82 g), TLC, R = 0,46, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
Elementær-analyse:
Beregnet for C3y<H>51N5<0>R.<0>,4H20: C, 63,39; H, 7,44; N, 9,89 Funnet: C, 63,43; H, 7,43; N, 9,77
Eksempel 11
N- succinyl- L- leucyl- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -CH2CH(CH3)2; R4 = -(CH^COOH
a. N-t-butyloksykarbonyl-L-leucy1-L-valy1-L-prolin-t-butylester
HOBT (3,10 g, 0,0229 mol) ble tilsatt til en løsning av N-t-butyloksykarbonyl-L-leucin (2,65 g, 0,0115 mol) i tørt THF (75 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære og reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min. Til den resulterende løsning ble det tilsatt en suspensjon av produktet fra eksempel 6b (5,10 g, 0,0115 mol) i tørt THF fulgt av DCC (2,60 g, 0,0126 mol). Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og så ved romtemperatur
i 4 dager. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble blandet med
kald CHC13(500 ml) og filtrert. Filtratet ble vasket i rekke-følge med 5%-ig vandig NaHCO^, 20%-ig vandig sitronsyre, og saltløsning, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert for å
gi 3,72 g av råproduktet. Dette materiale ble renset ved flash-kromatograf ering på silikagel med CHCl^ for å gi produktet (2,19 g) som et hvitt voksaktig fast-stoff, TLC, Rf = 0,50, silikagel,MeOH:CHCl3(5:95).
b. L-leucyl-L-valy1-L-prolin-trifluoreddiksyresalt
Trifluoreddiksyre (18,59 g, 22 ml, 0,163 mol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 11a (3,94 g, 8,2 mol) i tørt CH2C12(22 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 5 timer. Den resulterende løsning ble konsentrert under vakuum og den gjenværende ravfar-vede oljen ble utgnidd med Et20 for å gi produktet (3,07 g) som et hvitt fast-stoff.
c. N- (3-karbometoksypropionyl)-L-leucyl-L-valyl-L-prolin
En løsning av produktet fra eksempel 11b (3,06 g, 6,9 mmol) i tørt CH2C12(60 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære ble behandlet med vandig 1N NaOH (15 ml). Løsningen ble avkjølt til 0°C, 3-karbometoksypropionylklorid (1,04 g, 6,9 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt kraftig i 15 min. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med H20 (50 ml) og justert til pH 2 med vandig 1N HC1. Den organiske fasen ble separert og den vandige fase ble ekstrahert med CH2C12. De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na-jSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet (2,58 g). Dette materialet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH: CHC13 (5:95) for å gi produktet (1,30 g) som et hvitt skum, TLC, Rf = 0,35, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (5:94,5:0,5).
d. N-(3-karbometoksypropionyl)-L-leucyl-L-valyl-L-prolyl-L-valina1-dietylacetal
Isobutyl-klorformiat (0,38 g, 2,8 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 11c (1,16 g, 2,6 mmol) og
N-metylmorfolin (0,40 g, 3,9 mmol) i tørt THF (75 ml) ved -10°C under en nitrogenatmosfære. Det dannet seg straks et hvitt bunnfall. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 20 min. og så av-kjølt til -40°C. L-valinal dietylacetal (0,46 g, 2,6 mmol) i tørt THF (8 ml) ble tilsatt i én porsjon. Reaksjonsblandingen ble varmet langsomt opp til romtemperatur og omrørt over natten. Den resulterende blanding ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum for å gi en blekgul olje (1,77 g). Det rå materialet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:Et20:MeOH (60:37:3) som elueringsmiddel for å gi produktet (1,03 g) som et hvitt skum, TLC, Rf = 0,52, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
e. N-succinyl-L-leucy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal-natriumsalt
En omrørt løsning av produktet fra eksempel 11d (0,98 g, 1,6 mmol) i MeOH:H20 (1:1, 30 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære ble behandlet med vandig 1N NaOH (1,72 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer og så konsentrert under vakuum for å gi en vandig løsning av produktet, TLC, R^= 0,14, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
f. N-succinyl-L-leucyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Dowex<®>50WX8-H harpiks (50 ml) ble tilsatt til en omrørt løsning av produktet fra eksmepel 11e (1,6 mmol) i H,,0 (100 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 dager. Reaksjonsblandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton (50 ml). Filtratet og vaskingene ble konsentrert under vakuum for å fjerne acetonet. Den vandige blandingen ble lyofilisert for å gi produktet (0,78 g) som et hvitt pulver, TLC, Rf = 0,24, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (5:94,5:0,5) .
Eksempel 12
N- alfa- t- butyloksykarbonyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl-L- lysy1- L- valy1- L- prolyl- L- leueina1
Formel (I): R<1>= -CH2CH(CH3) ; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2 )4NHCOOCH2C6H5; R4 = -OC(C.H3)3
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-leucinol
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1e bortsett fra at en løsning av produktet fra eksempel 1d (2,2 g, 3,8 mmol) og N-metylmorfolin (0,39 g, 3,8 mmol) i tørt THF (20 ml) ble brukt og isobutyl klorformiat (0,525 g, 3,8 mmol) ble tilsatt fulgt av en løsning av L-leucinol (0,44 g, 3,8 mmol) i tørt THF (20 ml). Råproduktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH/Et20 (2,5:97,5) fulgt av MeOH/Et20 (5:95) for å gi produktet (2,16 g), TLC, Rf = 0,29, silikagel, MeOH:Et20 (5:95) .
b. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-leucinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f, bortsett fra at oksalyl klorid (0,614 g, 4,8 mmol) i CH2C12 (8,0 ml) ble brukt. DMSO (0,75 g, 9,6 mmol) i CH2C12 (4,0 ml), en løsning av produktet fra eksempel 12a (1,63 g, 2,4 mmol) i CH2Cl2(4,0 ml) og TEA (1,29 g, 9,6 mmol) i CH2C12(4,0 ml) ble tilsatt i rekke-følge for å gi råproduktet, som ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(2,5:97,5) for å gi produktet (1,44 g), TLC, Rf = 0,53, silikagel, MeOH:CHCl3(10:90).
Eksempel 13
N-( 3- karbometoksypropionyl)- L- norleucyl- L- valyl- L- prolyl-L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)3CH3; R<4>= -(CH2)2COOCH3
a. N-benzyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolin
Trifluoreddiksyre (70 ml, 0,90 mol) ble tilsatt til en løs-ning av produktet fra eksempel 6a (16,5 g, 39,2 mmol) i CH2C12(100 ml) ved romtemperatur og den resulterende blanding ble om-rørt i 3 timer. Løsningen ble fortynnet med toluen (100 ml)
og konsentrert under vakuum. Resten ble tatt opp i toluen og rekonsentrert 5 ganger for til slutt å gi produktet (12,85 g) som et brunt fast-stoff, TLC, Rf = 0,45, silikagel, MeOH:CH2Cl2(5:95) .
b. N-benzyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietyl-acetal
HOBT (4,21 g, 31,1 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 13a (5,17 g, 15,55 mmol) og L-valinal dietylacetal (2,73 g, 15,55 mmol) i tørt THF (75 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Denne løsning ble omrørt i 15 min. og 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl karbodiimid hydroklorid (3,28 g, 17,1 mmol) ble tilsatt, fulgt av N-metylmorfolin (2,36 g, 23,3 mmol). Så ble blandingen omrørt i 1 time ved 0°C og 3 dager ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og resten ble fordelt mellom EtOAc og H20. Det organiske skiktet ble isolert og vasket med vandig 1N HCl, saltløsning, mettet vandig NaHC03og saltløsning, så tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi en viskøs olje. Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:Et20:MeOH (75:25:5) for å gi en farveløs olje (4,4 g), TLC, Rf = 0,55, silikagel, CH2C12:Et20:MeOH (75:25:1).
c. L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Produktet fra eksempel 13b (3,63 g, 7,18 mmol) og 10% Pd/C (0,5 g) i EtOH (75 ml) ble hydrogenert på en Parr-rystemaskin (3 atm H2). Når den teoretiske mengde H2var forbrukt ble blandingen filtrert gjennom Celite<®>og konsentrert under vakuum for å gi produktet (2,5 g), TLC, Rf = 0,3, silikagel, MeOH:CH2Cl2(1:9).
d. N-benzyloksykarbonyl-L-norleucy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
HOBT (2,48 g, 18,3 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksmepel 13c (3,4 g, 9,15 mmol) og N-benzyloksykarbonyl-L-norleucin (2,43 g, 9,15 mmol) i tørt THF (75 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Denne blanding ble omrørt i 15 min. og 1 -(3-dimetylaminoprolyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid (1,93 g, 10,06 mmol) fulgt av N-metylmorfolin (1,39 g, 13,73 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i 1 time ved 0°C og så 24 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble fordelt mellom EtOAc og H20. Det isolerte organiske skiktet ble vasket med vandig 1N HC1, saltløsning, mettet vandig NaHCO^ og saltløsning, så tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi råproduktet. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:MeOH (95:5) ga produktet som et hvitt skum (4,76 g),
TLC, Rf = 0,65, silikagel, CH2C12:MeOH (9:1).
Elementær-analyse:
Beregnet for C^H^N^: C, 64,05; H, 8,79; N, 9,05 Funnet: C, 63,74; H, 8,78; N, 9,00
e. L-norleucyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Produktet fra eksempel 13d (3,70 g, 5,98 mmol) og 10% Pd på karbon (0,25 g) i EtOH (50 ml) ble hydrogenert på en Parr-rystemaskin (3 atm H2). Etter at den teoretiske mengde H2var forbrukt, ble blandingen filtrert gjennom Celite<®>og konsentrert under vakuum for å gi produktet (3,2 g), TLC, R^ = 0,25, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
f. N-(3-karbometoksypropionyl)-L-norleucyl-L-valyl-L-proly1-L-valinal-dietylacetal
En blanding av vandig 1N NaOH (6,2 ml) og produktet fra eksempel 13e (3,0 g, 6,19 mmol) i CH2C12(30 ml) ble kraftig omrørt ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Etter tilsetning av 3-karbometoksypropionyl klorid (0,93 g, 6,19 mmol) i én sats, ble reaksjonsblandingen omrørt i 15 min. og så fortynnet med H20 (25 ml) og justert til pH 2 med vandig 1N HC1. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc. De kombinerte ekstraktene ble vasket med saltløsning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi et skum. Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C1 :Et20:MeOH (60:40:2) for å gi et hvitt skum (2,41 g), TLC, Rf = 0,45, silikagel, CH2C12:Et20:MeOH (60:40:3).
Elementær-analyse:
Beregnet for C30<H>54N4<O>8<:>C, 60,18; H, 9,09; N, 9,36
Funnet: C, 60,00; H, 8,91; N, 9,22
g. N-(3-karbometoksypropionyl)-L-norleucyl-L-valyl-L-proly1-L-valinal
En blanding av produktet fra eksempel 13f (0,50 g, 0,835 mmol) og p-toluensulfonsyre (0,039 g, 0,208 mmol) i aceton (50 ml) ble omrørt i 3 timer under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble ekstrahert med EtOAc. Denne løsning ble vasket i rekkefølge med 5%-ig vandig NaHCO^og saltløsning, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi et skum (0,39 g), TLC, R f = 0,5, silikagel, CH2Cl2:EtOAc (1:1).
Eksempel 14
N- acetylglycyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L- lysyl- L-valyl - L- prolyl - L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH„) .NHC00CHoCcHc ; R4= -CH_NHCOCH_.
a. N-alfa-(2-metylsulfonyletyloksykarbonyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin
Til en suspensjon av N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin (20,3 g, 72,25 mmol) i DMF (300 ml) ble det tilsatt (2-metyl-sulfonyletyl p-nitrofenyl karbonat (20,85 g, 72,25 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur,
TEA (10,0 ml, 72,25 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt
i ytterligere 24 timer og filtrert. Filtratet ble konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc (300 ml) og vasket med vandig 1N HC1 og saltløsning. Den organiske fasen ble tør-ket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi en viskøs gul olje. Det rå produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CHCl^, MeOHiCHCl^(2:98) og endelig MeOH:CHCl3(5:95) for å gi produktet (20,67 g), TLC,
Rf = 0,29, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (9,5:90:0,5).
b. N-alfa-(2-metylsulfonyletylkarbonyl)-N-epsilon-benzy loksykarbonyl -L-ly sy 1 -L-valyl -L-prol in- t-butylester
En løsning av produktet fra eksempel 14a (2,00 g, 4,65 mmol) i tørt THF (25 ml) under en nitrogenatmosfære ble avkjølt til
-20"C. N -metylmorfolin (0,51 ml, 4,65 mmol) ble tilsatt fulgt av isobutyl klorformiat (0,6 ml, 4,65 mmol). Blandingen ble omrørt i 10 min. og så avkjølt til -50°C. En løsning av produktet fra eksmepel 6b (1,25 g, 4,65 mmol) i tørt (THF (25 ml) ble tilsatt dråpevis. Løsningen fikk langsomt varme seg opp til rimtemperatur og ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum. Råproduktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH: CHC13(5:95) for å gi produktet (2,47 g), TLC, Rf = 0,25, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95). c. N-alfa-(2-metylsulfonyletylkarbonyl)-N-epsilon-,
benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
Trifluoreddiksyre (2,5 ml, 32,5 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksmepel 14b (1,0 g, 1,47 mmol) i CH2CI2(2,5 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3,5 timer
og så konsentrert under vakuum. Den resulterende sirup ble utgnidd gjentatte ganger med Et20 for å gi produktet (0,96 g).
d. N-alfa-(2-metylsulfonyletylkarbonyl)-N-epsilon-benzy loksykarbonyl -L-ly sy 1-L- va ly 1-L-prolyl -L-valinal - dietylacetal
Tittelfornbindelsen ble fremstilt som i eksempel 6j bortsett fra at produktet fra eksmepel 14c (0,96 g, 1,53 mmol) i TKF (10 ml) ble brukt, og N-metylmorfolin (0,17 ml, 1,53 mmol), isobutyl-klorf ormiat (0,20 ml, 1,53 mmol) og L-valinal dietylacetal (0,27 g, 1,53 mmol) i THF (10 ml) ble tilsatt i rekkefølge. Råproduktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(2,5:97,5) og så MeOH:CHCl3(5:95) for å gi produktet (0,65 g), TLC, Rf = 0,40, silikagel, MeOH:CHCl3(10:90).
e. N-alfa-(2-metylsulfonyletyloksykarbonyl)-N-epsilon-benzy loksykarbonyl -L-ly syl -L-valyl -L-prolyl -L-valinal dietylacetal (alternativ syntese)
1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid (1,74 g, 8,88 mmol) og N-metylmorfolin (1,34 ml, 12,12 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 13c (3,0 g, 8,08 mmol) og produktet fra eksempel 14a (3,48 g, 8,08 mmol) og HOBT (2,18 g, 16,16 mmol) i CH2C12(60 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og så ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum og resten tatt opp i EtOAc, vasket med H20, vandig 1N HC1, saltløsning, 5%-ig vandig NaHC03og saltløs-ning, tørket over MgSO^. Denne løsning ble filtrert og konsentrert for å gi råproduktet som ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CH2Cl2(5:95) for å gi produktet (5,0 g), TLC, Rf = 0,60 g, silikagel, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
f. N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Vandig 4N NaOH (0,315 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 14d (0,495 g, 0,63 mmol) i MeOH (6 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 5 min. Vandig 1N HCl (1,89 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc (30 ml), vasket med vandig 5%-ig NaHCO^og saltløsning, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,395 g), TLC, Rf = 0,5, silikagel, MeOH:CHCl3(10:90).
g. N-acetylglycyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
N-acetylglycin (0,073 g, 0,64 mmol) og DCC (0,14 g, 0,68 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksmepel 14f (0,395 g, 0,62 mmol) i DMF (2 ml). Reaksjonsblandingen ble om-rørt over natten ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble filtrert og konsentrert i vakuum. Resten ble oppløst i CHCl^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet som ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(5:95) for å gi produktet (0,37 g), TLC, Rf = 0,44, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (9,5/90/0,5).
h. N-acetylglycyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Dowex<®>50WX8-H harpiks (2 ml) ble tilsatt til en løsning
av produktet fra eksmepel 14g (0,30 g, 0,41 mmol) i aceton:H20 (1:4, 10 ml) og reaksjonsblandingen ble omrørt i 48 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,13 g), TLC, R^= 0,35, silikagel, MeOH/CHCl3(10:90).
Eksempel 15
N- alfa-( 2- metylsulfonyletyloksykarbonyl)- N- epsilon-benzyloksykarbonyl- L- lysyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel I: R<1>= -CH(CH3)2<;><R2>-CH(CH_)2;
R3 = -(CH2)4NHC02CH2C6H5; R = -0(CH2)2S02CH3
p-toluensulfonsyre (0,42 g, 2,2 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 14d i aceton (450 ml) og reaksjonsblandingen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc (100 ml),
vasket med vandig 5%-ig NaHCO^ og saltløsning, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,90 g), TLC, Rf = 0,43, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for C33H51N^ QS. 0, 5H20: C, 55,14; H, 7,29; N, 9,74 Funnet: C, 55,21; H, 7,41; N, 9,24
Eksempel 16
N- benzyloksykarbonyl- L- norleucy1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2<;>R<2>= -CrHCH^;
R<3>= - (CH~ ) -,CH-, ; R<4>= -0CHoC,Hc
Z i i Z 0 D
En blanding av produktet fra eksempel 13d (0,75 g, 1,21 mmol) og p-toluensulfonsyre (0,066 g, 0,35 mmol) i aceton (100
ml) ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under vakuum og resten ble oppløst i EtOAc. Denne løs-ning ble vasket i rekkefølge med 5%-ig vandig NaHC03og saltløs-ning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi et
glass. Rensing ved motsatt fase flash-kromatografering med MeOH_H20 (7:3) ga et hvitt pulver (0,414 g), TLC, Rf = 0,5,
C1Qrevers-fase, MeOH:H20 (7:3).
Eksempel 17
N- succinyl- L- norleucyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)3CH3; R<4>= -(C^^COOH
En blanding av produktet fra eksempel 13f (1,81 g, 3,02 mmol) og vandig 1N NaOH (3,13 ml) i MeOH:H20 (1:1, 56 ml) ble omrørt i 2 timer ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. MeOH ble fjernet under vakuum. Aceton (30 ml), H20 (200 ml)
og Dowex<®>50WX8-H harpiks (120 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 24 timer. Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton. De kombinerte filtratene ble konsentrert
for å fjerne acetonet og den vandige løsningen ble lyofilisert for å gi et dunaktig hvitt fast-stoff (1,41 g).
Elementær-analyse:
Beregnet for C25<H>42<N>4°7<:><C>' 58'8°; H'8,29; N, 10,97 Funnet: C, 58,48; H, 8,29; N, 10,67
Eksempel 18
N- alfa- trimetylacetyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L- lysyl-L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R<4>= -C(CH3)3
a. N-alfa-trimetylacetyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
En blanding av produktet fra eksmepel 6d (3,54 g, 5,99 mmol) i CH2C12(35 ml) og vandig 1N NaOH (12 ml) ble kraftig omrørt ved 0°C. Trimetylacetylklorid (0,73 g, 5,92 mmol) ble tilsatt i én sats. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min. ved 0°C, så fortynnet med H20 (25 ml) og pH justert til 2 med vandig 1N HC1. Blandingen ble så ekstrahert med EtOAc. De kombinerte organiske skiktene ble vasket med saltløsning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi produktet som et hvitaktig skum (3,39 g), TLC, Rf = 0,35, silikagel, MeOH:CH2Cl2_HOAc (5:95:1).
b. N-alfa-trimetylacetyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
HOBT (1,63 g, 12,09 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksmepel 18a (3,39 g, 6,04 mmol) og L-valinal-dietylacetal (1,06, 6,04 mmol) i tørt THF (65 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære og blandingen ble omrørt i 15 min. Til den resulterende løsning ble det tilsatt 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid (1,39 g, 7,25 mmol) fulgt av N-metylmorfolin (0,92 g, 9,06 mmol). Blandingen ble omrørt i
1 time ved 0°C og så i 24 timer ved romtemperatur. Reaksjons blandingen ble konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble fordelt mellom EtOAc og ^O. Det organiske skiktet ble isolert og vasket med vandig 1N HC1, saltløsning, mettet vandig NaHCO^og saltløsning og så tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi et rått skum. Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:Et20:MeOH (60:40:2) for å gi et hvitt skum (2,40 g), TLC, Rf = 0,45, silikagel, CH2C12:Et20:MeOH (60:40:2).
c. N-alfa-trimety1acetyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
p-toluensulfonsyre (0,25 g, 1,3 mm) ble tilsatt til en løs-ning av produktet fra eksempel 18b (2,3 g, 3,2 mmol) i aceton (100 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære og blandingen ble omrørt i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble så konsentrert i vakuum og den resulterende rest ble oppløst i EtOAc. Denne løsning ble vasket med 5%-ig vandig NaHCO^ og saltløsning, tør-ket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi et hvitt skum. Produktet ble renset ved revers-fase-flash-kromatografering med MeOH:H20 (7:3) for å gi et hvitt pulver (1,78 g), TLC, Rf = 0,60, revers-fase C1Q, MeOH:H20 (7:3).
Elementær-analyse:
Beregnet for C34H53N507•0 t5H20: C, 62,55; H, 8,33; N, 10,72 Funnet: C, 62,17; H, 8,52; N, 10,41
Ekseempel 19
N- alfa-( 3- karbometoksypropionyl)- N- epsilon- benzyloksykarbonyl-L- lysy1- L- fenylalany1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2;<R2>= -CH2C6H5;
R<3>= -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R<4>= -(CH2)2C02CH3
a. N-benzyloksykarbony1-L-fenylalanyl-L-prolin-t-buty1-ester
HOBT (2,70 g, 20 mmol) ble tilsatt til en løsning av
N-benzyloksykarbonyl-L-fenylalanin (2,99 g, 10 mmol) i tørt DMF (100 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære og blandingen ble omrørt i 15 min. En løsning av DCC (2,26 g, 11 mmol) i tørt DMF (20 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i 5 min. ved 0°C. En løsning av L-prolin-t-butylester (1,71 g, 10 mmol)
i tørt DMF (30 ml) ble så tilsatt. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og ved romtemperatur i ytterligere 48 timer. Reak-sj onsblandingen ble filtrert og filtratet konsentrert under vakuum. Den resulterende rest ble blandet med kald EtOAc (50 ml) og filtrert. Filtratet ble vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre, saltløsning, 5%-ig vandig NaHCO^, og salt-løsning. Den organiske fasen ble tørket over Na-^SO^, filtrert og konsentrert for å gi produktet (3,96 g) som en tykk gul sirup, TLC, Rf 0,60, silikagel, EtOAc:CHCl3(15,85).
b. L-fenylalanyl-L-prolin-t-buty1-ester
En blanding av produktet fra eksempel 19a (3,80 g, 11,9 mmol) og 10% Pd/C (1 g) i EtOH (150 ml) ble plassert på et Parr-apparat under H2(4,2 kg/cm") og rystet i 9 timer ved romtemperatur. Blandingen ble filtrert gjennom Celite<®>og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi produktet (2,47 g).
c. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-fenylalanyl-L-prolin-t-butyl-ester
HOBT (3,16 g, 23,4 mmol) ble tilsatt til en løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin (4,45 g, 11,7 mmol) i tørt THF (50 ml) ved 0° C under nitrogen-atmosf ære og blandingen ble omrørt i 15 min. En løsning av produktet fra eksmepel 19b (3,16 g, 11,7 mmol) i tørt THF (30 ml) ble så tilsatt og blandingen ble omrørt i ytterligere 5 min. Så ble DCC (2,66 g, 12,87 mmol) tilsatt og blandingen ble om-rørt i 1 time ved 0°C og så ved romtemperatur i 36 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum. Resten ble tatt opp i CHC13(75 ml) og denne løs-ning ble avkjølt til 0°C og filtrert. Filtratet ble vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre, 5%-ig vandig NaHC03,
og saltløsning. Den organiske fase ble tørket over Na2S04,
filtrert, og konsentrert for å gi råproduktet (5,95 g). Rensing ved f lash-kromatograf ering på silikagel med MeOH:CH2Cl2(2,5: 97,5) ga produktet (4,63 g), TLC, Rf = 0,7, silikagel, MeOH: CH2C12(5:95).
d. N-epsilon-benzyloksykarbony1-L-lysy1-L-fenylalany1-L-prolin-trifluoreddiksyre-salt
Trifluoreddiksyre (30 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksmepel 19c (4,42 g, 8,74 mmol) i tørt CH2C12
(30 ml) under nitrogen. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 5 timer. Toluen (30 ml) ble tilsatt og den resulterende blanding ble konsentrert under vakuum for å gi produktet (3,96 g), TLC, Rf = 0,1, silikagel, MeOH:CH2Cl2:HOAc (5:95:0,5).
e. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-benzyloksy-karbony 1-L -ly sy 1-L- f enylalanyl -L-prol in
En blanding av produktet fra eksempel 19d (3,75 g, 6,36 mmol) i CH2C12(43 ml) og vandig 1N NaOH (12,7 ml) ble omrørt kraftig ved 0°C mens 3-karbometoksypropionylklorid (0,783 ml, 6,36 mmol) ble tilsatt i én Porsjon. Den resulterende blanding ble omrørt kraftig ved 0°C i 12 min. Blandingen ble så fortynnet med vann og justert til pH 2 med 1N HC1. Det organiske skiktet ble oppsamlet og det vandige skiktet ble ekstrahert to ganger med CH2C12. De organiske ekstraktene ble kombinert, tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert for å gi produktet (3,46 g), TLC, Rf = 0,5, silikagel, CH^OH:CH2C12:HOAc (5:95:0,5).
f. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-benzyloksy-karbony 1-L- ly sy 1-L- f enylalany 1-L-prolyl -L-valinal - dietylacetal
Isobutyl-klorformiat (0,66 ml, 5,15 mmol) ble tilsatt til
en løsning av produktet fra eksempel 19e (3,41 g, 5,15 mmol) og N-metylmoroflin (0,563 ml, 5,15 mmol) i tørt THF (46 ml) ved -15°C under en N2-atmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -15°C i 30 min. og så avkjølt til -40°C. En løsning av L-valinal-
dietylacetal (0,904 g, 5,15 mmol) i tørt THF (4 ml) ble tilsatt dråpevis. Den resulterende blanding fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert under vakuum for å gi en rest som ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:MeOH (97:3) for å gi produktet (2,51 g), TLC, Rf = 0,45, MeOH:CH2Cl2 (5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for c42H60N5O10 *0'5H20:C'62'75'H'7'65'N'8'71 Funnet: C, 62,82; H, 7,50; N, 8,48
g. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-benzyloksy-karbony 1-L- ly sy 1-L- f enylalany 1-L-prolyl -L-valinal
En blanding av produktet fra eksempel 19f (0,5 g, 0,628 mmol), aceton (100 ml) og p-toluensulfonsyre-monohydrat (0,026 g, 0,125 mmol) ble omrørt ved romtemperatur under nitrogen i 5 timer. Blandingen ble konsentrert under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc og vasket med 5%-ig vandig NaHCO^. Det organiske skiktet ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,45 g), TLC, Rf = 0,31, silikagel, MeOH:CH2Cl2(5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for C3gH51<N>5<Og>.<0,5>H20: C, 62,45; H, 7,17; N, 9,58 Funnet: C, 62,37; H, 7,10; N, 9,42
Eksempel 20
N- alfa-[ 3-( metylsulfonylaminokarbonyl) propionyl]- N- epsilon-benzy loksykarbonyl - L- valyl - L- ly sy 1- L- prolyl - L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3>2; R<2>= -CH(CH3>2;
R<3>= -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R<4>= -(CH2)2C0NHS02CH3
a. N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
En blanding av produktet fra eksempel 6j (3,0 g, 4,0 mmol)
i MeOH:H20 (1:1, 40 ml) og vandig 1N NaOH (4,4 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 1,5 time. Løsningen ble surgjort med vandig 1N HC1 (5 ml) og ekstrahert med EtOAc. Den organiske løsningen ble tørket over Na-^SO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (2,66 g, 0,36 mmol), TLC, Rf = 0,55, MeOH:CHCl3: HOAc (9,5/90/0,5).
b.. N-alfa-[3-(metylsulfonylaminokarbonyl)propionyl] -N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
En løsning av produktet fra eksempel 20a (0,5 g, 0,682 mmol), metansulfonamid (65 mg, 0,682 mmol), dicykloheksyl-karbodiimid (140 mg, 0,68 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (83 mg, 0,68 mmol) i tørt CH2C12(15 ml) ble omrørt over natten ved romtemperatur. Dicyklosheksylurea ble fjernet ved filtrering og filtratet konsentrert under vakuum for å gi råproduktet (0,73 g). Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(3:97) for å gi et hvitt fast-stoff (0,33 g), TLC, Rf = 0,4, silikagel, CH30H:CHC13(3:97).
c. N-alf a-[j3-metylsulf onylaminokarbonyl) propionylj -N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
En blanding av produktet fra eksempel 20b (0,3 g, 0,37 mmol) og Dowex<®>50WX8-H harpiks (12,8 ml) i aceton/vann (1:5, 24 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Harpiksen ble fjernet ved filtrering og filtratet konsentrert under vakuum for å gi en vandig løsning som ble lyofilisert for å gi produktet (0,18 g) som et hvitt fast-stoff, TLC, Rf = 0,2, silikagel, CH30H:H20 (5:95) .
Eksempel 21
N- alfa- succinyl- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L- lysyl- L-fenylalany1- L- proly1- L- valina1
Formel I: R1 = -CH(CH_)_; R2 = -CH_C,HC;
tj Z Zb .D
R = -(CH2)4NHCOOCH2C6H5; R = -(CH2)2COOH
En blanding av produktet fra eksempel 19f (1,0 g, 1,25 mmol) i CH3OH:H20 (1:1, 26 ml) og vandig 1N NaOH (1,31 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer. Metanolen ble fjernet under vakuum for å gi en vandig løsning (13 ml) av N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-fenyl-alany1-L-prolyl-L-valinal dietylacetal som straks ble tilsatt til en omrørt blanding av Dowex<®>50WX8-H harpiks (46,3 g) i vann (94 ml) og aceton (11,8 ml). Denne blanding ble omrørt i 48 timer ved romtemperatur. Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton. Filtratet og vaskingene ble kombinert, fortynnet med vann (50 ml) og konsentrert under vakuum for å gi av vandig løsning (100 ml) som ble lyofilisert for å gi produktet (0,54 g) som et hvitt fast-stoff, TLC, Rf = 0,27, silikagel, MeOH:CH2Cl2(5:95).
Eksempel 22
N- alfa- succinyl- N- epsilon-( 2, 4- diklorbenzoyl)- L- lysyl- L-valyl - L- prolyl- L- valinal
Formel I: R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4NHC0C6H3C12; R<4>= -(CH^COOH
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valyl-L-prolin-t-butyl-ester
En blanding av produktet fra eksempel 6c (5,0 g, 7,9 mmol) og 10% Pd/C (1 g) i etanol (50 ml) ble rystet på et Parr-apparat under hydrogen (4,2 kg/cm 2i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet.
Dette produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(10:90) for å gi et hvitt skum (4,5 g), TLC, Rf = 0,3, silikagel, CHCl3:MeOH (90:10).
b. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl-L-prolin-t-butyl-ester
2,4-diklorbenzylklorid (1,87 g, 8,9 mmol) ble tilsatt til
en løsning av produktet fra eksempel 22a (4,52 g, 8,9 mmol) og N-metylmorfolin (1,0 g, 10 mmol) i CH2C12(50 ml) ved 5°C. Den resulterende blanding ble omrørt i 1 time ved 5°C og over natten ved romtemperatur. Blandingen ble fortynnet med CH2C12(200 ml) og vasket i rekkefølge med 20%-ig sitronsyre, mettet NaHCO^ og saltløsnig. Det organiske skiktet ble tørket over Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum og produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOHiCHCl^(5:95)
for å gi et hvitt skum (2,2 g), TLC, R f = 0,6, silikagel, MeOH:CHCl3 (5:95).
c. N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl-L-prolin-trifluoreddiksyre-salt
En blanding av trifluoreddiksyre (7,3 g, 6,4 mmol) og produktet fra eksempel 22b (2,2 g, 3,7 mmol) i CH2C12(5 ml) ble omrørt i 5 timer ved romtemperatur. Blandingen ble konsentrert under vakuum og resten ble utgnidd med Et20. Det faste produktet ble isolert ved filtrering og tørket under vakuum for å gi et hvitt fast-stoff (1,73 g).
d. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl-L-prolin
En kraftig omrørt løsning av produktet fra eksempel 22 c (1,73 g, 2,7 mmol) i CH2C12(10 ml) ved 5°C ble behandlet med vandig 1N NaOH (2,7 ml). 3-karbometoksypropionylklorid (0,41 g, 2,7 mmol) ble tilsatt og løsningen omrørt i ytterligere 15 min. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med H20 (50 ml) og pH ble justert til 2 med vandig 1N HC1. Den organiske fase ble separert og den vandige fase ble ekstrahert to ganger med CH2C12.
De kombinerte organiske fasene ble tørket over Na2S04og konsentrert under vakuum for å gi produktet (1,32 g) som et blekgult skum, TLC, Rf = 0,10, silikagel, MeOH:CHCl3, (5:95).
e. N-alfa-(3-karbometoksypropionyl)-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Isobutylklorformiat (0,29 g, 2,0 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 22d (1,32 g, 2,0 mmol) og N-metylmorfolin (0,210 g, 2,0 mmol) i CU2C12(15 ml) ved -10°C under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -10°C i 30 min. og så avkjølt til -40° C og L-valinal dietylacetal (0,37 g, 2,0 mmol) ble tilsatt i én porsjon. Blandingen ble omrørt ved -40°C i 1 time og så ved romtemperatur i 2 timer. Blandingen ble konsentrert under vakuum og produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHCl3(3:97) for å gi et hvitt fast-stoff (980 mg), TLC, Rf = 0,7, silikagel,MeOH:CHCl3(5:95).
f. N-alfa-succinyl-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysyl-L-valyl -L-prolyl -L- va li nal
En blanding av produktet fra eksempel 22e (970 mg, 1,2 mmol) i H20:MeOH (1:1, 30 ml) og vandig 1N NaOH (1,2 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 1,5 time. Metanolen ble fjernet under vakuum Dowex<®>50WX8-H harpiks (50 ml), H20 (100 ml) og aceton (20 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton. De kombinerte filtrater ble konsentrert under vakuum for å fjerne aceton og den vandige løsning ble lyofilisert for å gi produktet (700 mg) som et hvitt fast-stoff, TLC Rf = 0,4, silikagel, HOAc:MeOH:CHC13(0,25:10:89,75).
Eksempel 23
N- alfa-( 2, 4- diklorbenzoyl)- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L-lysyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH2)4NHC02CH2C6H5; R4 = -C^C^
a. N-alfa-(2,4-diklorbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
2,4-diklorbenzoylklorid (0,132 g, 0,632 mmol) ble tilsatt til en omrørt blanding av produktet fra eksempel 14f (0,40 g,
0,632 mmol) i CH2C12 (15 ml) og N-metylmorfolin (0,5 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 30 min. og så helt i vandig 1N HC1 og ekstrahert med EtOAc.
De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltløsning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi produktet. Denne olje ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CH2Cl2(3:97) for å gi en farveløs olje (0,41 g),
TLC, Rf = 0,60, silikagel, MeOH:CH2Cl2(5:95).
b. N-alfa-2,4-diklorbenzoyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
Produktet fra eksempel 23a ble behandlet med p-toluensulfonsyre som beskrevet i eksempel 10d for å gi et hvitt skum (0,34 g), TLC, Rf = 0,5, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
Elementær-analyse:
Beregnet for C36H47N5C1207.H20: C, 57,59; H, 6,57; N, 9,32 Funnet: C, 57,75; H, 6,50; N, 9,06
Eksempel 24
N- alfa-( 4- karboksybenzoyl)- N- epsilon- benzoylkarbonyl- L-lysy1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH„)„NHCOCH,,C,H.-; R4 = -CcH.C0oH 24 265' 642
a. N-alfa-(4-karbornetoksybenzoyl)-N-epsilon-benzyloksy-karbony 1-L- ly sy 1-L- va ly 1-L-prolyl -L-valinal -dietylacetal
1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydroklorid (0,133 g, 0,69 mmol) og N-metylmorfolin (0,1 ml, 0,95 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 14f (0,40 g, 0,632 mmol), p-karbometoksybenzosyre (0,114 g, 0,632 mmol) og HOBT (0,17 g, 1,26 mmol) i tørt THF (20 ml) ved 0°C under en N2~atmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og så ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble kon-
sentrert under vakuum. Resten ble tatt opp i EtOAc, vasket med vandig 1N HC1, saltløsning, 5%-ig vandig NaHCO^og saltløsning, tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi råproduktet. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:MeOH (95:5) ga et hvitt skum (0,32 g), TLC, Rf = 0,6, silikagel, CH2C1 :;eOH (95:5).
b. N-alfa-(4-karboksybenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-val inal
1N NaOH (0,5 mmol) ble tilsatt til produktet fra eksempel 24a (0,32 g, 0,40 mmol) i MeOH (5 ml) og H20 (3 ml) ved romtemperatur under N2 og blandingen ble omrørt over natten. MeOH ble fjernet i vakuum, aceton (10 ml) og 1N HC1 (10 ml) ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natten. Acetonet ble fjernet under vakuum og det vandige skiktet ble ekstrahert gjentatte ganger med EtOAc. De kombinerte organiske ekstraktene ble vasket med saltløsning, tørket over MgSO^og konsentrert for å gi det rå produktet. Rensing ved flash-kromatografering på silika-med MeOH:CH2Cl2:HOAc (5:95:0,5) ga et hvitt skum (0,210 g),
TLC, Rf = 0,65, silikagel, MeOH:CH2C12:HOAc (10:90:1).
Eksempel 25
N- alfa-( 2- karboksybenzoyl)- N- epsilon- benzyloksykarbonyl-L- lysy1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3>2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH2)4NHCOCH2C6H5; R4 = -C^CO^
a. N-alfa-(2-karboksybenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Ftalsyreanhydrid (0,117 g, 0,79 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 14f (0,50 g, 0,79 mmol) i
acetonitril (10 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur og så konsentrert under vakuum for å gi det rå produktet. Denne forbindelse ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH^ ?ci2_:MeOH:HOAc (95:5:1) for å gi en olje
(0,42 g), TLC, Rf = 0,5, silikagel, CH2C12:MeOH:HOAc (95:5:1).
b. N-alfa-(2-karboksybenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
Produktet fra eksempel 25a ble omsatt med p-toluensulfonsyre som beskrevet i eksmepel 10d. Produktet ved renset ved flash-kromatografering på en revers-fase-C^g-kolonne med THF:H20 for å gi et hvitt skum (0,15 g), TLC, Rf = 0,75, revers-fase (C1Q), THF:H20 (1:1).
Eksempel 26
N- alfa-( 4- fenylbenzoyl)- N- epsilon- benzyloksykarbonyl- L-lysyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4NHC02CH2C6H5; R<4>= -C6H4C6H5
a. N-alfa-(4-fenylbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid (0,133 g), 0,69 mmol) og N-metylmorfolin (0,1 ml, 0,95 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 14f (0,40 g, 0,63 mmol), 4-fenylbenzosyre (0,125 g, 0,63 mmol) og HOBT (0,171 g, 1,26 mmol) i CH2C12(20 ml) ved 0°C under en N2-atmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og så ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble helt i vandig 1N HC1 og det organiske skiktet ble isolert og vasket med salt-løsning, 5%-ig vandig NaHC03og saltløsning, tørket over MgS04, filtrert, så konsentrert for å gi råproduktet. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:MeOH (95:5) ga et hvitt skum (0,37 g), TLC, Rf = 0,55, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5) .
b. N-alfa-4-fenylbenzoyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
Produktet fra eksempel 26a ble behandlet med p-toluensulfonsyre som beskrevet i eksmepel 1 Od for å gi et hvitt skum (0,31 g), TLC, Rf = 0,35, silikagel, MeOH:CH2Cl2(5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for C42H53N5°7•0/5H2°: C'67/35?H>7*26; N, 9,35 Funnet: C, 67,11; H, 7,43; N, 9,16
Eksempel 27
N- alfa- L2-( 2- pyridyl)- etoksykarbonyl] - N- epsilon- benzyloksy-karbony1- L- lysyl- L- valyl l- prolyl- L- valinal
Formel I: R<1>= -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R<3>= -(CH2)4NHC02CH2CgH5; R<4>= -0(CH2)2C5<H4N>
a. N-alfa- [2-( 2-pyridyl)-etyloksykarbonyl] -N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Til en omrørt løsning av produktet fra eksempel 14f (400 mg, 0,63 mmol) i acetonitril:H20 (40 ml, 1:1) ble det tilsatt 2-(2-pyridyl)-etyl-p-nitrofenyl-karbonat-hydroklorid (208 mg, 0,64 mmol). Når oppløsningen var fullstendig ble trietylamin (127 mg, 1,27 mmol) tilsatt og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Acetonitrilen ble fjernet under vakuum og den vandige fase ble fortynnet med vann (20 ml) og ekstrahert med EtOAc (2 x 200 ml). De kombinerte ekstraktene ble tørket (Na-pSO^) og konsentrert for å gi råproduktet. Rensing ved f lash-kromatograf ering på silikagel med MeOH:CHCl3(5:95) ga tittelforbindelsen (250 mg) som et hvitt skum.
Elementær-analyse:
Beregnet for C41H62<N>6°9<:><c>>62,89; H, 7,98; N, 10,73
Funnet: C, 63,01; H, 8,07; N, 10,70
b. N-alf a-\_ 2-( 2-pyridyl) -etoksykarbonyl] -N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal
En blanding av produktet fra eksempel 27a (240 mg, 0,31
mmol) og p-toluensulfonsyre (117 mg, 0,62 mmol) i aceton (20 ml) ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum og resten ble oppløst i EtOAc. Denne løs-ning ble vasket med vandig 1N NaHCO^ og tørket (Na2S04). For-damping av løsningsmidlet ga et hvitt skum (226 mg), TLC, R f = 0,30, silikagel, MeOH:CHCl3(6:94).
Elementær-analyse:
Beregnet for C37H52N608'H2°: C'61'14'H'7'48'N'11'56 Funnet: C, 60,71; H, 7,44; N, 11,43
Eksempel 28
N- alfa- N- epsilon- dibenzoyl- L- lysyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2<;>R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH_ ) .NHCOC,H.-; R4 = -C,H,-2 4 6 5 6 5
a. N-alfa-N-epsilon-dibenzoyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid
(0,225 g, 1,18 mmol) og N-metylmorfolin (0,17 ml, 1,6 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 13c (0,40 g,
1,07 mmol), N-alfa-N-epsilon-dibenzoyl-L-lysin (0,388 g, 1,07
mmol) og HOBT (0,289 g, 2,14 mmol) i CH2C12(25 ml) ved 0°C
under N2-atmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time og så ved romtemperatur over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og den oljeaktige rest ble oppløst i EtOAc,
vasket med vandig 1N HC1, saltløsning, 5%-ig vandig NaHC03 og saltløsning, tørket over MgSO^og konsentrert for å gi råproduktet. Dette materiale ble renset flash-kromatografering på silikagel med CH2C12:MeOH (95:5) for å gi et hvitt skum (0,58 g) , TLC, R = 0,55, silikagel, CH2Cl2:Me0H (95:5).
b. N-alfa-N-epsilon-dibenzoyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Produktet fra eksempel 28a ble omsatt med p-toluensulfonsyre som beskrevet i eksempel 10d for å gi et hvitt skum (0,56 g), TLC, Rf = 0,45, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
Elementær-analyse:
Beregnet for C35H47N5°6•0 t5H2°: C'65,39; H, 7,52; N, 10,89 Funnet: C, 65,27; H, 7,58; N, 10,71
Eksempel 29
N- alfa- N- epsilon- diacety1- L- lysyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R1 = -CH(CH3)2; R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -(CH2)4NHCOCH3; R4 = -CH3
a. N-alfa-N-epsilon-diacety1-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 28a, ved bruk av 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl-karbodiimid-hydroklorid (0,285 g, 1,5 mmol), N-metylmorfolin (0,22 ml, 2,03 mmol), produktet fra eksempel 13c )0,50 g, 1,35 mmol), N-alfa-N-epsilon-diacetyl-L-lysin (0,308 g, 1,35 mmol) og HOBT (0,365 g, 2,7 mmol) i THF (15 ml) og DMF (7 ml). Produktet ble renset ved hjelp av flash-kromatografering med CH2Cl2:Me0H (9:1) for å gi et hvitaktig skum (0,38 g), TLC, Rf = 0,6, silikagel, CH2Cl2:MeOH (9:1).
b. N-alfa-N-epsilon-diacety1-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Produktet fra eksmepel 29a ble behandlet med p-toluensulfonsyre som beskrevet i eksempel 10d for å gi et hvitaktig skum (0,29 g), TLC, R = 0,5, silikagel, CH2Cl2:MeOH (85:15).
Elementær-analyse:
Beregnet for C25H43N5°6 ■1 '25H20: C'56»42"/ H/8,61; N, 13,16 Funnet: C, 56,42; H, 8,51; N, 12,86
Eksempel 30
N- benzy1oksykarbony1- L- fenylalany1- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (I): R<1>= -CH(CH3)2, R<2>= -CH(CH3)2;
R3 = -CH_C,HC; R4 = -OCH„C,Hc
Zo 5Z6 5
a. N-benzyloksykarbony1-L-fenylalany1-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1e, ved bruk av en løsning av N-benzyloksykarbonyl-L-fenylalanin (0,40 g, 1,35 mmol) og N-metylmorfolin (0,15 ml, 1,35 mmol) i tørt THF
(10 ml) og tilsetning av isobutylklorformiat (0,17 ml, 1,35 mmol) fulgt av en løsning av produktet fra eksempel 13c (0,50 g,
1,35 mmol) i tørt THF (10 ml). Råproduktet ble renset ved flash-kromatograf ering på silikagel med MeOH:CHCl3(2:98) for å gi produktet (0,78 g), TLC, Rf = 0,41, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
b. N-benzyloksykarbonyl-L-fenylalanyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
p-toluensulfonsyre (160 mg, 0,84 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 30a (0,38 g, 0,58 mmol) i aceton (100 ml) og reaksjonen ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum og resten ble oppløst i EtOAc (50 ml). Denne løsning ble vasket med vandig 5%-ig NaHC03og saltløsning, tørket over Na^O^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,29 g), TLC, R^ = 0,29, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for C32H42N4°6'0' 5H2°: C'65'40; H'7>31'' N'9'53 Funnet: C, 65,76; H, 7,46; N, 9,22
Eksempel 31
Fremstilling av bisulfit-addukter av aldehyder med formel (I) som er fremstilt ifølge oppfinnelsen.
En løsning av en aldehyd fremstilt ifølge oppfinnelsen i MeOH:H20 (2:1 til 1:1, 5-10 ml/g aldehyd) ble behandlet med 2 ekvivalenter NaHSO^og omrørt inntil oppløsningen var fullstendig. MeOH ble fjernet under vakuum og den resulterende vandige løsningen ble lysofilisert for å gi produktet som et Nhvitt fast-stoff.
Bisulfit-addukter av aldehyder med formel (I) fremstilt på denne måten er vist i tabell I.
Merknader:
a -R<3>= -(CH2)4NHCONHC6H5
b -R<3>= -(CH2)4NHC02CH2C6<H>5
c -R<3>= -CH2CH(CH3)2
d -R<3>= -(CH2)3CH3
e -R<3>= -(CH2)ANHCOC6H5
Eksempel 32
N- pl ( S)- karbometoksy- 3- metylbutyl] karbamoyl- L- valyl- L-prolyl- L- valinal
Formel (II): R<5>= -CH(CH3)2; R<6>= -CH(CH3)2;
R7 = -CH2CH(CH3)2; R8 = -OCH3
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolin-benzylester
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1a, ved bruk av en løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-L-valin (5,0 g, 23 mmol) i DMF (80 ml) avkjølt til 0°C og tilsetning i rekke-følge av DCC (5,15 g, 25 mmol), HOBT (6,21 g, 46 mmol) og en oppslemming av L-prolin-benzyl-ester (5,65 g, 23 mmol) i TEA (3,4 ml, 23 mmol) og DMF (20 ml). Den rå gule oljen ble oppløst i EtOAc (200 ml) og løsningen vasket i rekkefølge med 20%-ig vandig sitronsyre (200 ml), mettet vandig NaHC03, vandig 1N HC1 og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket over Na-jSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi det rå produktet som en gul olje. Rensing ved flash-kromatografering på silikagel med EtOAc:CH2Cl2(5:95) fulgt av EtOAc:CH2Cl2(1:9) ga produktet (7,36 g), TLC, Rf = 0,57, silikagel, EtOAc:CH2Cl2(1:4).
b. L-valy1-L-prolin-benzy1-ester-hydroklorid
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1b ved bruk av en løsning av produktet fra eksempel 32a (5,0 g, 12,4 mmol) i EtOAc (20 ml) og tilsetning av 6N HCl/EtOAc (20 ml) for å gi en fast rest som ble utgnidd med petroleter og filtrert under N2for å gi det rensede produkt (4,1 g) som et hvitt fast-stoff.
c. L-leucin-metyl-ester-isocyanat
En 1 liters tre-halset rundkolbe utstyrt med gassinnløp, mekanisk omrører, tilbakeløpskjøler og gassutløp forbundet med en 30%-ig vandig NaOH-felle ble tilført L-leucin-metyl-ester- hydroklorid (61,0 g, 0,336 mmol) og tørt toluen (250 ml). Blandingen ble oppvarmet til forsiktig tilbakeløp i 0,5 time mens en kraftig strøm av fosgen ble innført kontinuerlig. Etter oppløsning av fast-stoffene (0,5 time) ble fosgen innført i ytterligere 15 min. Produktet ble isolert ved først å fjerne toluenet under vakuum og fraksjonert destillasjon av den gjenværende rest under vakuum for å gi produktet (48,0 g),
kp = 71-73°C ved 0,8 torr.
d. N-{j(S)-karbometoksy-3-metylbutyl] karbamoyl-L-valyl-L-prolin-benzyl-ester
N-metylmorfolin (6,0 ml, 54,5 mmol) og en løsning av produktet fra eksempel 32c (10,0 g, 58,5 mmol) i CHC13(50 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 32b (18,57 g, 54,5 mmol) i CHC13(250 ml) avkjølt til 0°C. Løsningen ble omrørt i 2 timer og løsningsmidlet fjernet under vakuum. Resten ble oppløst i EtOAc (200 ml) og vasket i rekkefølge med mettet vandig NaHC03, H,,0, vandig 1N HC1 og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket med Na-jSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi det rå produktet (27,54 g) som et hvitt skum. Rensing ved bruk av en Waters Prep 500<®>Liquid Chromatograph med heksan:Et20 (1:3) som elueringsmiddel ga det ønskede produkt (20,87 g), TLC, Rf = 0,57, silikagel, Et20.
Elementær-analyse:
Beregnet for<C>25<H>37<N>3°6<:><C>' 63'14?H'7/84?N*8/84 Funnet: C, 63,32; H, 7,99; N, 8,59
e. N-£l(S)-karbometoksy-3-metylbutyl]karbamoyl-L-valyl-L-prolin
En løsning av produktet fra eksempel 32d (5,16 g) og 10% Pd/C (1,0 g) i etanol (100 ml) ble hydrogenert ved bruk av en Parr-rystemaskin (3 atm. H2) i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®>og filtratet konsentrert under vakuum for å gi en gummiaktig rest som ble utgnidd med heksan for å gi produktet (3,54 g) som et hvitt fast-stoff.
Elementær-analyse:
Beregnet for ci8H3iN306: C'56/09; H/8,11; N, 10,90
Funnet: C, 55,51; H, 7,91; N, 10,68
f. N-[l(S)-karbometoksy-3-metylbutyl]karbamoyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1e vedbruk av en løsning av produktet fra eksempel 32e (2,0 g, 5,2 mmol)
i tørt THF (30 ml) og tilsetning av N-metylmorfolin (0,57 ml,
5,2 mmol), isobutyl-klorformiat (0,68 ml, 5,2 mmol) og en løsning av L-valinol (0,535 g, 5,2 mmol) i tørt THF (10 ml) for å gi råproduktet (2,38 g) som ble brukt uten ytterligere rensing, TLC,
Rf = 0,44, silikagel, MeOH:CHCl3(1:9).
g. N- [j (S)-karbometoksy-3-metylbutyl]karbamoyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f ved bruk av oksalyl-klorid (0,25 ml, 2,85 mmol) i CH2C12(4 ml) og tilsetning av DMSO (0,4 ml, 5,7 mmol) i CH2C12 (1 ml), produktet fra eksempel 32f (0,9 g, 1,9 mmol) i CH2C12 (2 ml) og TEA (0,8 ml, 5,7 mmol). Den rå blandingen ble renset ved bruk av tre påfølgende flash-kolonne-kromattograferinger på silikagel med henholdsvis MeOH:CHCl3(5:95), MeOH:CHCl3(2,5:97,5) og EtOAc:Et20 (1:1) som elueringsmidler for å gi produktet (0,625 g), TLC; Rf = 0,37, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
Elementær-analyse:
Beregnet for<C>23<H>40<N>4°6<:><C>' 58'95'H'8'60J N'11 f 96
Funnet: C, 58,79; H, 8,77; N, 12,14
h. N-jj (S)-karbometoksy-3-metylbutyl]karbamoyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-bisulfitt
En løsning av produktet fra eksempel 32g (0,55 g, 1,1 mmol) og NaS03 (0,229 g, 2,2 mmol) i MeOH:H20 (1:1) (10 ml) ble omrørt ved romtemperatur inntil oppløsningen var fullstendig. Produktet (0,7 g) ble isolert ved å fjerne MeOH under vakuum og H20
ved bruk av en lyofilisator.
Elementær-analyse:
Beregnet for C23<H>40<N>4°6<*2>NaHS03•3H2°; C'39'76?H'6,38,
N, 8,07
Funnet: C, 39,89; H, 6,22,
N, 8,06
Eksempler 33 - 35
Formel (II): R<5>= se tabell; R<6>=.-CH(CH3)2;
R<7>= CH2CH(CH3)2; R<8>= -OCH3.
På en måte som er analog med den som er beskrevet i eksempel 32, trinnene f og g, ble produktet fra eksempel 32e Omdannet til forbindelsene i tabell II ved bruk av den passende aminoalkohol inneholdende substituenten R 5.
Alle R^-verdier i tabell II ble oppnådd med TLC på silikagel ved bruk av EtOAc som elueringsmiddel.
Eksempel 36
N- alfa- t- butyloksykarbony1- N- epsilon- benzyloksykarbonyl-L- lysy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (III): R<9>= -CH(CH3)2; R<10>= -(CH2)4<N>HCOOCH2C6H5;
R<11>= -OC(CH3)3
a. N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-prolin-metyl-ester
Isobutyl-klorformiat (0,13 ml, 1,0 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av N-alfa-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysin og N-metylmorfolin (0,12 ml), 1,1 mmol) i THF (8,0 ml) avkjølt til -23°C under N2- Reaksjonsblandingen ble omrørt i 20 min. og løsningen avkjølt til -50 C. En løsning av L-prolin-metyl-ester-hydroklorid og N-metylmorfolin (0,12 ml, 1,1 mmol) i DMF (2 ml) ble tilsatt i én porsjon og reaksjonsblandingen fikk lov å varme seg langsomt opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Løsningen ble filtrert, konsentrert under vakuum og resten oppløst i EtOAc (100 ml). EtOAc-løsningen ble vasket med 1N vandig HC1, mettet NaHC03,
og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket over Na-jSO^, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi råproduktet som ble renset ved f lash-kromatograf ering ved bruk av Et-,0 som elueringsmiddel for å gi sluttproduktet (0,36 g), TLC, R^ = 0,44, silikagel, Et20.
b. N-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-prolin
En løsning av produktet fra eksempel 36a (0,36 g, 0,73 mmol) i MeOH (2,5 ml) og 1N vandig NaOH (1,0 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 5 timer. Løsningen ble konsentrert under vakuum og resten oppløst i H20 (10 ml) og ekstrahert med Et20. Det vandige skiktet ble surgjort med 10%-ig sitronsyre hvorpå det falt ut et hvitt fast-stoff. Fast-stoffet ble ekstrahert med EtOAc og det organiske skiktet tørket med Na2S04 og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,25 g), TLC, Rf = 0,7, silikagel,
MeOH:CHC13:HOAc (9,5:90:0,5).
c. N-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valinol
Isobutyl-klorformiat (70 ml, 0,52 mmol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av produktet fra eksempel 36b (0,25 g, 0,52 mmol) og N-metylmorfolin (60 ml, 0,55 mmol) i THF (6 ml) avkjølt til -20°C under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min. og løsningen avkjølt til -45°C. En løsning av L-valinol (0,054 g, 0,52 mmol) i THF (2 ml) ble tilsatt, reak-sj onsblandingen omrørt i 2 timer og løsningen fikk lov å varme seg opp til romtemperatur og ble omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum og resten oppløst i EtOAc. Løsningen ble vasket i rekkefølge med 1N vandig HC1, mettet NaHCO^og saltløsning. Det organiske skiktet ble tørket med Na2S04, filtrert og konsentrert under vakuum for å gi produktet (0,26 g) som et hvitt skum, TLC, Rf = 0,45, silikagel, MeOH:CHCl3(5:95).
d. N-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-prolyl-L-valinal
Tittelforbindelsen ble fremstilt som i eksempel 1f ved: bruk av oksalyl-klorid (0,44 g, 3,5 mmol) i CH2C12 (40 ml) og i rekke-følge tilsette DMSO (0,68 g, 8,75 mmol) i CH2C12(7 ml), produktet fra eksempel 36c (0,90 g, 1,6 mmol) i CH2C12(7 ml) og TEA (0,68 g, 6,73 mmol) for å gi råproduktet. Rensing ved hjelp av flash-kromatografering på silikagel med MeOH:Et20 (4:96) ga produktet (1,50 g), TLC, Rf = 0,54, silikagel, MeOH:Et20 (4:96).
Elementær-analyse:
Beregnet for C29H44N407.H20: C, 60,19; H, 8,01; N, 9,68 Funnet: C, 60,40; H, 7,68; N, 9,60
e. N-t-butyloksykarbonyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-prolyl-L-valinal-bisulfitt
En løsning av produktet fra eksempel 36d (1,51 g, 2,69 mmol) og NaHS03(0,59 g, 5,65 mmol) i MeOH (15 ml) og H20 (8 ml) ble omrørt inntil oppløsningen var fullstendig. MeOH ble fjernet under vakuum of H,,0 fjernet med en lyofilisator for å gi produktet (1,75 g).
Elementær-analyse:
Beregnet for C29H44<N>4°7•2NaHS03: C, 45,31; H, 6,03; N, 7,29 Funnet: C, 45,45; H, 5,87; N, 7,30
Eksempel 37
N- t- butyloksykarbonyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (III): R<9>= -CH(CH3)2; R<10>= -CH(CH3)2;
R<11>= .OC(CH3)3
a. N-t-butyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolin
En blanding av produktet fra eksempel 32a (7,25 g, 17,9 mmol) og 10% Pd/C (1,4 g) i etanol (150 ml) ble omrørt under 3 atmosfærer H2ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite<®>og filtratet konsentrert under vakuum for å gi det ønskede produkt (5,68 g).
b. N-t-butyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
Isobutyl-klorformiat (1,25 ml, 9,6 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 37a (3,0 g, 9,6 mmol) og N-metylmorfolin (1,05 g, 9,6 mmol) i THF (40 ml). En løsning av L-valinol (0,99 g, 9,6 mmol) i THF (40 ml) ble tilsatt for å gi tittelproduktet (3,16 g), TLC, Rf = 0,33, silikagel, EtOAc.
c. N-t-butyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
En løsning av produktet fra eksempel 37b (0,5 g, 0,78 mmol) i CH2C12(1 ml) ble tilsatt til en løsning av pyridinium klor-kromat (0,445 g, 2,2 mmol) i tørt CH2C12(3 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur inntil reaksjonen var fullstendig ved TLC (Rf = 0,8, silikagel, EtOAc). Tørr Et20 ble tilsatt til reaksjonsblandingen og løsningen dekantert.
Den sorte tjæreaktige resten ble utgnidd med Et,,0 og løsnin-gene kombinert og filtrert gjennom en Florisil<®->kolonne for å gi tittelproduktet (0,100 g). (Florisil<®>er et registrert varemerke fra Floridin Co., Berkeley Springs, West Virginia, U.S.A., for aktivert magnesiumsilikat i form av harde porøse stabile hvite granuler. Dette materiale er anvendbart som et analytisk reagent, adsorberingsmiddel og katalysator).
Elementær-analyse:
Beregnet for<c>2o<H>35<N>3°5■<0>'5H20:C'59'09; H'8/92; N, 10,33 Funnet: C, 59,13; H, 8,77; N, 9,98
Eksempel 38
N- succinyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel (III): R<9>= -CH(CH3)2; R<10>= -CH(CH3)2;
R<11>=.-(CH2)2COOH
a. L-valyl-L-prolyl-L-valinol
Trifluoreddiksyre (3,4 ml, 44 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 37b (1,76 g, 4,4 mmol) i CH2C12(3,4 mmol) ved romtemperatur og blandingen ble omrørt i
1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C og en løsning
av Na2C03(2,6 g, 50 mmol) i H20 (10 ml) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2C12og det organiske skiktet fraskilt, tørket over Na2S04og filtrert for å gi tittelproduktet (0,93 g) som et hygroskopisk fast-stoff.
b. N-succinyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinol
En løsning av ravsyre anhydrid (0,31 g, 3,1 mmol) i CH3CN ble tilsatt til en løsning av produktet i eksempel 38a (0,83 g, 2,8 mmol) i CH3CN (30 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten og løsningen konsentrert under vakuum for å gi råproduktet. Rensing ved flash-kromatografering på silika gel med MeOH:CHC12:HOAc (4,5:95:0,5) ga produktet (0,620 g) som et hvitt fast-stoff, TLC, Rf = 0,24, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (4,5:95:0,5) .
c. N-succinyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
En løsning av DMSO (0,35 ml, 5,0 mmol) i CH2C12(1,0 ml)
ble tilsatt til en løsning av oksalyl klorid (0,22 ml, 2,5 mmol)
i CH2C12 avkjølt til -23°C under en nitrogenatmosfære. En løs-ning av produktet fra eksempel 38b (0,5 g, 1,25 mmol) i CH2C12
(3 ml) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 15 min. og TEA (0,69 ml, 5,0 mmol) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen fikk lov å varme seg opp til romtemperatur og ble fortynnet med CH2C12. Løsningen ble vasket med 10%-ig vandig AcOH og saltløsning, tørket over Na-pSO^, filtrert og konsentrert for å gi råproduktet (0,750 g) som en gul olje.
Oljen ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med MeOH:CHC13:HOAc (4,5:95:0,5) for å gi sluttproduktet (0,042 g), TLC, Rf = 0,33, silikagel, MeOH:CHC13:HOAc (9,5:90:0,5).
Eksempel 39
N- acety1- L- valy1- L- prolyl- L- valinal
Formel (III): R<9>= CH(CH3)2; R<10>= -CH(CH3)2; R<11>= -CH3
a. N-acety1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal-dietylacetal
Acetylklorid (0,41 g, 5,19 mmol) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 13c (1,91 g, 5,19 mmol) i CH2C12(50 ml) og N-metylmorfolin (3 ml) ved 0°C under en nitrogenatmosfære. Reaksjonsblnadingen ble omrørt i 15 min. og så varmet opp til romtemperatur. Vann (20 ml) ble tilsatt. Det organiske skiktet ble vasket i rekkefølge med 20%-ig sitronsyre, saltløsning, mettet vandig NaHC03og saltløsning og tørket over MgSO^, filtrert og konsentrert for å gi en viskøs olje. Produktet ble renset ved flash-kromatografering på silikagel med CH2Cl2:MeOH (98:2) for å gi en olje (1,3 g). TLC, Rf = 0,5, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5) .
Elementær-analyse:
Beregnet for C21<H>39<N>3<0>5<:><C>' 60,99; H, 9,50; N, 10,16 Funnet: C, 60,55; H, 9,42; N, 10,17
b. N-acetyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
Dowex<®>50WX-H-harpiks (40 ml) ble tilsatt til en løsning av produktet fra eksempel 39a (1,15 g, 2,78 mmol) i H20 (40 ml) og aceton (5 ml) ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære og blandingen ble omrørt i 20 timer. Blandingen ble filtrert og harpiksen ble vasket med aceton. Filtratet og vasking ble kombinert og konsentrert i vakuum for å fjerne acetonet. Vann ble fjernet med en lyofilisator for å gi produktet som et hvitt pulver (0,757 g).
Elementær-analyse:
Beregnet for 7H29N304.0,4H20: C, 58,90; H, 8,66; N, 12,10 Funnet: C, 58,93; H, 8,44; N, 11,97
Eksempel 40
N- benzyloksykarbonyl- L- valyl- L- prolyl- L- valinal
Formel III: R<9>= .CH(CH3)2; R<10>= -CH(CH3)2; R<11>= -OCH2C6H5
a. N-benzyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal
En blanding av p-toluensulfonsyre (150 mg) og produktet fra eksempel 13b (500 mg, 0,988 mmol) i aceton (70 ml) ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Blandingen ble konsentrert under vakuum og resten ble oppløst i EtOAc. Denne løsning ble vasket med 5%-ig vandig NaHC03og saltløsning, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert for å gi et glass (410 mg), TLC,
Rf = 0,60, silikagel, CH2Cl2:MeOH (95:5).
b. N-benzyloksykarbonyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal-bisulfitt-addukt
Produktet fra eksempel 40a ble behandlet som beskrevet i eksempel 32h for å tilveiebringe et hvitt pulver.
Elementær-analyse:
Beregnet for C23H33N3°5•2NaHS03: .C, 43,18; H, 5,52; N, 6,56 Funnet: C, 42,85; H, 5,64; N, 6,43

Claims (2)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et prolinderivat med følgende formel (I), (II) eller (III):
hvor 1 5 9 R , R og R er lavere alkylgrupper med fra 3 til 6 karbon atomer , 2 3 6 7 10 R , R , R , R og R er alkylgrupper med 1 til 10 karbon atomer som eventuelt kan være substituert med en monocyklisk arylgruppe eller med en amid-, urea- eller karbamat-gruppe via nitrogenet derav, og 4 1 1 R og R er lavere alkyl-, substituerte lavere alkyl-, lavere alkoksy- eller substituerte lavere alkoksygrupper hvor alkyl eller alkoksy inneholder 1 til 6 karbonatomer, eller monocykliske eller bicykliske arylgrupper, og R g er hydroksy, en lavere alkoksygruppe med 1 til 6 karbon atomer eller en aralkoksygruppe inneholdende 7 til 12 karbonatomer, og hvor -CHR <2-> , -CHR <3-> , CHR <6-> , CHR <7> ., CHR <10-> og prolingruppen har L-konfigurasjonen, eller et farmasøytisk godtagbart syre- eller base-addisjonssalt derav eller en farmasøytisk godtagbar likevekts-addisjonsforbindelse av aldehydgruppen derav, karakterisert ved at(a) den tilsvarende alkohol med den følgende formel (I-A), (II-A) eller (III-A) oksyderes:
eller(b) beskyttelsegruppen Q fjernes fra en tilsvarende beskyttet forbindelse med den følgende formel (I-B), (II-B) eller (III-B):
2. Fremgangsmåte for fremstilling av et prolinderivat ifølge krav 1 , karakterisert ved at det fremstilles en forbindelse valgt fra gruppen bestående av: (a) N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal, (b) N-acetylglycyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal, (c) N-benzyloksykarbonyl-L-norleucyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, (d) N-alfa-[3-(metylsulfonylaminokarbonyl)-propionyl]-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-valyl-L-prolyl-L-valinal (e) N-alfa-succinyl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysy1-L-fenylalany1-L-prolyl-L-valinal, (f) N-alfa-(2,4-diklorbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, (g) N-alfa-glutaryl-N-epsilon-benzyloksykarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, (h) N-alfa-succinyl-N-epsilon-(2,4-diklorbenzoyl)-L-lysy1-L-valy1-L-prolyl-L-valinal, og (i) N-alfa-(4-fenylbenzoyl)-N-epsilon-benzyloksykarbony1- L-lysyl-L-valyl-L-prolyl-L-valinal, eller et farmasøytisk godtagbart base-addisjonssalt derav eller en farmasøytisk godtagbar likevekts-addisjons-forbindelse av aldehyd-gruppen derav.
NO841665A 1983-04-27 1984-04-26 Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive prolinderivater. NO841665L (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB838311423A GB8311423D0 (en) 1983-04-27 1983-04-27 Proline derivatives
GB838314708A GB8314708D0 (en) 1983-05-27 1983-05-27 Proline derivatives

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO841665L true NO841665L (no) 1984-10-29

Family

ID=26285956

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO841665A NO841665L (no) 1983-04-27 1984-04-26 Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive prolinderivater.

Country Status (15)

Country Link
US (2) US4596789A (no)
EP (1) EP0124317B1 (no)
AU (1) AU580955B2 (no)
CA (1) CA1253297A (no)
DE (1) DE3481913D1 (no)
DK (1) DK209784A (no)
ES (2) ES8701154A1 (no)
FI (1) FI841601A (no)
GR (1) GR81937B (no)
HU (1) HUT34041A (no)
IE (1) IE57350B1 (no)
IL (1) IL71614A0 (no)
NO (1) NO841665L (no)
NZ (1) NZ207965A (no)
PT (1) PT78502B (no)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1267499A (en) * 1983-07-12 1990-04-03 Cedric H. Hassall Peptide amides and aldehydes
DD248961A1 (de) * 1984-05-22 1987-08-26 Akad Wissenschaften Ddr Verfahren zur herstellung wundheilungsfoerdernder praeparationen
US5194588A (en) * 1985-01-22 1993-03-16 Ici Americas Inc. Aminoalcohol intermediates for peptide derivatives
GB8600263D0 (en) * 1985-01-22 1986-02-12 Ici America Inc Peptide derivatives
US5055450A (en) * 1985-01-22 1991-10-08 Ici Americas Inc. Peptide derivatives
DE3683541D1 (de) * 1985-06-07 1992-03-05 Ici America Inc Selektionierte difluorverbindungen.
GB8613704D0 (en) * 1986-06-05 1986-07-09 Ici America Inc Difluoro keto compounds
EP0249349B1 (en) * 1986-06-05 1992-10-14 Ici Americas Inc. Difluoroketo compounds
DE3751570T2 (de) * 1986-06-05 1996-04-18 Zeneca Inc Difluoro-Peptid-Verbindungen.
GB8809316D0 (en) * 1987-05-11 1988-05-25 Ici America Inc Heterocyclic ketones
JPH075634B2 (ja) * 1987-10-30 1995-01-25 日東紡績株式会社 トリペプチド類及びこれを含有する抗プラスミン剤
FR2622581B1 (fr) * 1987-11-03 1990-02-16 Inorgan Sa Rech Develop Pharm Nouveaux derives de l-proline, leur preparation et leurs applications biologiques
US5736520A (en) * 1988-10-07 1998-04-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ZA897514B (en) * 1988-10-07 1990-06-27 Merrell Dow Pharma Novel peptidase inhibitors
EP0396709A4 (en) * 1988-10-27 1991-05-22 University Of Kentucky Research Foundation Human leukocyte elastase inhibitors and methods of producing and using same
EP0490379A3 (de) * 1990-12-13 1992-06-24 BERLIN-CHEMIE Aktiengesellschaft Diaminosäurederivate und pharmazeutische Zusammensetzungen
CA2071621C (en) * 1991-06-19 1996-08-06 Ahihiko Hosoda Aldehyde derivatives
IL108031A0 (en) * 1992-12-22 1994-04-12 Procter & Gamble Difluoro pentapeptide derivatives and pharmaceutical compositions containing them
FR2700166B1 (fr) * 1993-01-07 1995-02-17 Rhone Poulenc Rorer Sa Dérivés de pyrrolidine, leur préparation et les médicaments les contenant.
FR2700165B1 (fr) * 1993-01-07 1995-02-17 Rhone Poulenc Rorer Sa Dérivés de pyrrolidine, leur préparation et les médicaments les contenant.
US5436229A (en) * 1994-03-04 1995-07-25 Eli Lilly And Company Bisulfite adducts of arginine aldehydes
GB9502152D0 (en) * 1995-02-03 1995-03-29 Zeneca Ltd Proline derivatives
KR100490807B1 (ko) * 1995-11-28 2005-10-14 세파론, 인코포레이티드 시스테인및세린프로테아제의d-아미노산함유억제제
ATE309264T1 (de) 1997-04-18 2005-11-15 Cephalon Inc Peptidyl-2-amino-1hydroxyalkansulfonsäuren als cystein-protease-inhibitoren
US6143715A (en) * 1997-08-11 2000-11-07 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptide analogues
AU2001276988B2 (en) * 2000-07-21 2007-01-25 Dendreon Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
EP2902501B1 (en) 2002-01-28 2020-04-15 Life Technologies Corporation Preparing crude biological extracts using protease, suitable for preparing cDNA
CN103204903A (zh) * 2003-05-21 2013-07-17 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 丙型肝炎抑制剂化合物
WO2006007708A1 (en) * 2004-07-20 2006-01-26 Boehringer Engelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
UY29016A1 (es) * 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
AR064235A1 (es) * 2006-07-24 2009-03-25 Tetralogic Pharmaceuticals Cor Dipeptidos antagonistas de iap, una composicion farmaceutica que los comprende y el uso de los mismos para el tratamiento del cancer
US7964350B1 (en) 2007-05-18 2011-06-21 Applied Biosystems, Llc Sample preparation for in situ nucleic acid analysis
US20080319221A1 (en) * 2007-06-22 2008-12-25 Bernd Junker Esters of Pentahydroxyhexylcarbamoyl Alkanoic Acids
DE102007054497B3 (de) * 2007-11-13 2009-07-23 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue kristalline Diphenylazetidinonhydrate und Verfahren zu deren Herstellung
US8211637B2 (en) 2008-12-19 2012-07-03 Life Technologies Corporation Proteinase K inhibitors, methods and compositions therefor
RU2635355C2 (ru) 2011-07-01 2017-11-13 Новозимс А/С Композиция со стабилизированным субтилизином
CN110799193B (zh) 2017-03-21 2023-12-12 斯克利普斯研究院 铜和镍催化的脱羧硼化反应
EP3994148A1 (en) 2019-07-01 2022-05-11 Basf Se Peptide acetals for stabilising enzymes

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE629254C (de) * 1934-06-28 1936-04-25 Fried Krupp Grusonwerk Akt Ges Vorrichtung zum Glaetten der Arbeitswalzen eines Walzwerks waehrend des Betriebes
US3867364A (en) * 1968-11-21 1975-02-18 Microbial Chem Res Found Process for the synthesis of leupeptins and their analogues
US3935280A (en) * 1975-01-10 1976-01-27 Aldrich-Boranes, Inc. Reduction of amino acids in the presence of boron trifluoride
CH629254A5 (en) * 1976-10-14 1982-04-15 Nippon Kayaku Kk Process for preparing L-leupeptins
HU177098B (en) * 1979-01-04 1981-07-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing new peptidyl-n-carboxy-l-arginin-a
HU184368B (en) * 1981-01-13 1984-08-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for preparing d-phenyl-alanyl-l-propyl-l-arginine-ald ehyde-shulphate
CS226907B1 (en) * 1981-08-07 1984-04-16 Kasafirek Evzen Alkylamides of carboxyalkanoylpeptides
FR2546164B1 (fr) * 1983-05-16 1987-07-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de peptides, leur preparation et leur application comme inhibiteurs de l'elastase
CA1267499A (en) * 1983-07-12 1990-04-03 Cedric H. Hassall Peptide amides and aldehydes

Also Published As

Publication number Publication date
DK209784D0 (da) 1984-04-26
PT78502A (en) 1984-05-01
NZ207965A (en) 1987-08-31
DK209784A (da) 1984-10-28
US4596789A (en) 1986-06-24
AU580955B2 (en) 1989-02-09
ES532007A0 (es) 1986-11-16
FI841601A (fi) 1984-10-28
AU2744484A (en) 1984-11-01
GR81937B (no) 1984-12-12
ES8701154A1 (es) 1986-11-16
EP0124317A2 (en) 1984-11-07
US4691007A (en) 1987-09-01
EP0124317A3 (en) 1987-01-14
ES8705465A1 (es) 1987-05-01
CA1253297A (en) 1989-04-25
IE57350B1 (en) 1992-08-12
HUT34041A (en) 1985-01-28
FI841601A0 (fi) 1984-04-24
EP0124317B1 (en) 1990-04-11
PT78502B (en) 1986-07-22
DE3481913D1 (de) 1990-05-17
ES540029A0 (es) 1987-05-01
IL71614A0 (en) 1984-07-31
IE840985L (en) 1984-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO841665L (no) Fremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk aktive prolinderivater.
AU685465B2 (en) New peptides derivatives
CA1258948A (en) Hydroxy substituted peptide compounds
EP0354583B1 (en) DC-88A derivatives
EP0272671B1 (en) Aryloxy and arylacyloxy methyl ketones as thiol protease inhibitors
US5008245A (en) Novel peptidyl carbamate inhibitors of the enzyme elastase
KR910007576B1 (ko) 레닌 억제 펩타이드의 제조방법
IE60128B1 (en) Hydroxylamine derivatives,their preparation and use as medicaments
WO1994025051A1 (en) Thrombin inhibitors
JPS60252495A (ja) スタチンまたはその誘導体を含有するレニン阻害剤
SK279706B6 (sk) Ýroby, ako aj medziproduktyna ich výrobu
US4623639A (en) Peptide derivatives
CA2005340A1 (en) Retroviral protease inhibitors
EP0173441B1 (en) Amino acid derivatives having anti-tumor activity and compositions containing them
EP0276101A2 (en) Substituted peptide derivatives
US4420490A (en) Substituted phenylacetic acid amide compounds
AU629259B2 (en) Human leukocyte elastase inhibitors and methods of producing and using same
KR900003515B1 (ko) 헵타노일-glu-asp-ala-아미노산 면역자극물질
CA2043603A1 (en) Hiv protease inhibitors and processes for their preparation
AU628075B2 (en) Novel peptidase inhibitors
EP0080283B1 (en) N-carboxyalkylproline-containing tripeptides
US4456594A (en) N-Carboxyalkylproline-containing tripeptides
EP0158947A2 (en) Amino thiol dipeptides
US5972897A (en) Acylated enol derivatives as prodrugs of elastase inhibitors
CZ54194A3 (en) Derivatives of acylhexanoic acid, process of their preparation, pharmaceutical preparations in which they are comprised and their pharmaceutical use