NO338398B1 - Anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR) og en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR). - Google Patents

Anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR) og en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR). Download PDF

Info

Publication number
NO338398B1
NO338398B1 NO20060906A NO20060906A NO338398B1 NO 338398 B1 NO338398 B1 NO 338398B1 NO 20060906 A NO20060906 A NO 20060906A NO 20060906 A NO20060906 A NO 20060906A NO 338398 B1 NO338398 B1 NO 338398B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
parp
use according
cancer cells
inhibitor
cells
Prior art date
Application number
NO20060906A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20060906L (no
Inventor
Thomas Helleday
Original Assignee
Univ Sheffield
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27772701&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO338398(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Sheffield filed Critical Univ Sheffield
Publication of NO20060906L publication Critical patent/NO20060906L/no
Publication of NO338398B1 publication Critical patent/NO338398B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
    • A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
    • A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/005—Enzyme inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/06—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/02—Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C12Y204/0203—NAD+ ADP-ribosyltransferase (2.4.2.30), i.e. tankyrase or poly(ADP-ribose) polymerase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Lubricants (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller, i særdeleshet brystcancerceller, som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR). Oppfinnelsen angår videre en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller, i særdeleshet brystcancerceller, som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR).
Homolog rekombinasjon (HR) er vist å spille en viktig rolle ved reparasjon av skader som oppstår ved DNA-replikasjonsforgrening i pattedyrceller (2). Celler som mangler HR viser følgelig forsinket vekst og viser høyere nivå av genetisk ustabilitet. Det antas at genetisk ustabilitet på grunn av tap av HR-reparasjon ved humane cancere bidrar betydelig til utvikling av cancer i disse celler (1).
Post transkripsjonen modifisering av nukleære proteiner ved poly(ADP-ribosyl)lering (PARP) som respons på brudd på DNA-tråden spiller en viktig rolle ved DNA-reparasjon, regulering av apoptose og opprettholdelse av genetisk stabilitet.
Poly(ADP-ribose)-polymerase (PARP-l) er et vanlig nukleærprotein i pattedyrceller som katalyserer dannelsen av poly(ADP-ribose) (PAR)-polymere ved anvendelse av NAD<+>som substrat. Ved DNA-skade bindes PARP-l raskt til et DNA-trådbrudd (enkelttrådet eller dobbelttrådet) og katalyserer tilførsel av negativt ladede PAR-kjeder til seg selv (automodifisering) og andre proteiner (se [3, 4] for en oversikt). Bindingen av PARP-l til DNA-trådbrudd antas å beskytte DNA-skadene for videre prosessering inntil PARP-l er dissosiert fra bruddet ved akkumulering av negativ ladning som et resultat av PAR-polymerer (5,6).
Selv om PARP-l er innblandet i flere kjerneprosesser, slik som modifisering av kromatinstrukturen, DNA-replikasjon, DNA-reparasjon og -transkripsjon, utvikles PARP-l-knockout mus normalt (7). Celler isolert fra disse mus har en hyperrekombinasjonsfenotype og genetisk ustabilitet i form av økte nivåer av SCE, mikronukleus og tetraploiditet (8-10). Genetisk ustabilitet kan også forekomme i disse PARP-l knockout mus ved telomer forkorting, økt frekvens av kromosomfusjon og aneuploiditet (11), selv om alle disse resultater ikke kan repeteres i et annet sett av PARP-l-knockout mus (12). I de første knockout mus, reddet PARP-l-null mutasjonen den svekkede V(D)J-rekombinasjonen i SCID-mus (13).
Disse resultater støtter det syn som ble antydet av Lindahl og samarbeidspartnere at PARP-l har en beskyttende rolle mot rekombinasjon (5). De foreslo at binding av PARP-l til DNA-brudd forhindret rekombinasjonsmaskineriet fra å gjenkjenne og prosessere DNA-lesjoner eller, alternativt, at de negative ladningene akkumulert etter poly-ADP-ribosylering frastøter naboliggende rekombinasjonsvillige DNA-sekvenser. Kun den siste modellen er i samsvar med at inhibisjonen av PARP-l selv og ekspresjon av en dominant negativ mutant av PARP-l som induserer SCE, genamplifisering og homolog rekombinasjon (HR [14-18]).
Studier basert på behandling av celler med PARP-inhibitorer eller celler avledet fra PARP-l eller PARP-2 knockout mus indikerer at undertrykking av PARP-l-aktivitet øker cellenes mottakelighet for DNA-skadelige stoffer og inhiberer gjenforening av DNA-trådbrudd (3, 4, 8-11,19, 20, 47).
Inhibitorer av PARP-l-aktivitet er blitt anvendt i kombinasjon med tradisjonelle anti-cancermidler slik som radioterapi og kjemoterapi (21). Inhibitorene ble anvendt i kombinasjon med metyleringsmidler, topoisomerasegifter og ioniserende stråling og ble funnet å øke effektiviteten til disse behandlingsformene. Slike behandlinger er imidlertid kjent for å medføre skade og død på ikke-cancerceller eller friske celler og er forbundet med uønskede bivirkninger.
Kjent teknikk slik som den beskrevet i dokumentene MASSUDA E. ET AL. GPI 6150, a PARP inhibitor, down-regulates metastasis associated S100A4 (Mtsl) and suppresses invasion of breast cancer cells in vitro. Prodceedings of the american association for cancer research annual Meeting, 2003, vol. 44, side 867-868;XP001181719 & 94th annual Meeting of the american Association for cancer Research; Washington, DC, USA, July 11-14, 2003 IS SN: 0197-016X; WO 0212239 A; WO 9524379 A; and Weltin D. ET AL. Effect of 6(5H)-phenanthridinone, an inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerase, on cultured tumor cells. Oncol Res. 1994, vol. 6, no. 9, side 399-403 beskriver beslektet teknologi, men beskriver ikke foreliggende oppfinnelse definert ved dens krav.
Det er derfor et behov for en behandling mot cancer som både er effektiv og selektiv til å drepe cancerceller og som ikke trenger å bli administrert i kombinasjon med radioterapeutisk eller kjemoterapeutisk behandling.
Foreliggende oppfinnere har overraskende funnet at celler som mangler homolog rekombinasjon (HR) er hypersensitive overfor PARP-inhibitorer sammenlignet med villtypeceller. Dette er overraskende siden PARP-l-knowout mus lever normalt og dermed antyder at PARP-l ikke er essensielt for levedyktighet. Følgelig bør det ikke forventes at celler vil være sensitive overfor PARP-inhibisjon.
Ifølge et første aspekt ifølge oppfinnelsen frembringes anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR), der cancercellene har en defekt i genet utvalgt fra gruppen bestående av XRCC1, CTPS RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chkl, chk2, FANCA,
FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RADI, RAD9,
FEN-1, Mus81, Emel, DDS1 og BARD.
I en utførelsesform frembringer oppfinnelsen anvendelse der cancercellene som er defekte med hensyn på HR er delvis defekte med hensyn på HR.
Fortrinnsvis er medikamentet en farmasøytisk sammensetning bestående av PARP-inhibitoren i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer eller fortynningsmiddel.
Den spesifikke sensitivitet til HR-defekte tumorer for PARP-l-inhibisjon betyr at normalt delende celler hos pasienten vil være uaffektert av behandlingen. Behandling av HR-defekte cancerceller ved anvendelse av en PARP-inhibitor har også den fordel at den ikke trenger å administreres som en kombinasjonsterapi sammen med konvensjonelle radioterapeutiske eller kjemoterapeutiske behandlinger og dermed unngå bivirkningene forbundet med disse konvensjonelle behandlingsformer.
En genetisk defekt i et gen som medierer homolog rekombinasjon kan være forårsaket av en mutasjon i, fravær av eller uregelmessighet i ekspresjon, av et gen som koder for et protein som er involvert i HR.
I en utførelsesform frembringer oppfinnelse anvendelse av en PARP-inhibitor for fremstilling av et medikament for indusering av apoptose i HR-defekte celler.
Videre beskrives en fremgangsmåte for å indusere apoptose i HR-defekte celler hos et pattedyr der fremgangsmåten omfatter administrering til pattedyret av en terapeutisk effektiv mengde av en PARP-inhibitor.
Ved å forårsake apoptose i HR-defekte celler bør det være mulig å redusere eller arrestere veksten av en tumor hos pattedyret.
Fortrinnsvis er de HR-defekte cellene cancerceller.
Cancerceller som er defekte i HR kan delvis eller totalt mangle HR. Fortrinnsvis er cancercellene totalt defisiente for HR
Betegnelsen "cancer" eller "tumor" inkluderer lunge, kolon, pankreas, mage, ovarie-, cervix-, bryst- eller prostatacancer. Canceren kan også inkludere hud-, nyre-, lever-, blære- eller cerebralcancer. I et foretrukket aspekt er canceren i et pattedyr, fortrinnsvis menneske.
Cancercellene som skal behandles kan være en arvelig cancercelleform der pasienten som skal behandles har en familiær predisposisjon for cancercellen. Fortrinnsvis er cancercellene som skal behandles en arvelig genkoplet cancercelle. I en foretrukket utførelsesform ifølge oppfinnelsen er cancercellene genkoplet arvelig brystcancer.
I et foretrukket aspekt er PARP-inhibitoren nyttig ved behandling av cancerceller som er defekte i ekspresjonen av et gen som er involvert i HR. Genene med den antydede funksjon i HR inkluderer XRCCI, ADPRT (PARP-l), ADPRTL2, (PARP-2), CTPS RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chkl, chk2, FANCA, FANCB,
FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RADI, RAD9, FEN-1,
Mus81, Emel, DDS1, BARD (se 2, 3, 5, 22-28 for en oversikt).
Et gen involvert i HR kan være et tumorsuppressorgen. Oppfinnelsen frembringer således behandling av cancerceller som defekte i ekspresjon av et tumorsuppressorgen. Fortrinnsvis er tumorsuppressorgenet BRCA1 eller BRCA2.
Brystcancer er den mest vanlige cancersykdom blant kvinner i Vesten i dag. Visse familier har sterk predisposisjon for brystcancer, som ofte er forårsaket av en arvelig mutasjon i et allel av enten BRCA1 eller BRCA2. Disse pasientene bibeholder imidlertid fortsatt et funksjonelt allel. Følgelig utvikles disse pasientene normalt og har ingen fenotypiske konsekvenser av denne mutasjon. I en celle, kan imidlertid det funksjonelle allelet tapes hvilket gjør denne cellen til en cancercelle og på samme tid defisient for homolog rekombinasjon (HR). Dette trinnet er kritisk for starten på en tumor (1).
Foreliggende oppfinnelse har overraskende funnet at BRCA2 defisiente celler er 100 ganger mer sensitive overfor cytotoksisitet forårsaket av PARP-inhibitoren NU1025, enn villtypeceller.
I et foretrukket aspekt frembringes følgelig anvendelse av en PARP-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller defekte med hensyn på HR, for eksempel på grunn av tap av BRCA1- og/eller BRCA2-ekspresjon.
Cancercellene som skal behandles kan være delvis eller totalt defisiente med hensyn på BRCA1- eller BRCA2-ekspresjon. BRCA1- og BRCA2-mutasjoner kan identifiseres ved hjelp av multipleks PCR-teknikker, matriseteknikker (29, 30) eller andre screeningssystemer kjent for fagpersoner innen teknikken.
PARP-inhibitorer nyttige ifølge foreliggende oppfinnelse kan utvelges fra inhibitorer av PARP-l, PARP-2, PARP-3, PARP-4, tankyrase 1 eller tankyrase 2 (se 31 for en oversikt). I en foretrukket utførelsesform er PARP-inhibitoren nyttig ifølge oppfinnelsen en inhibitor av PARP-l aktiviteten.
PARP-inhibitorer nyttige ifølge foreliggende oppfinnelse inkluderer benzimidazol-karboksamider, quinazolin-4-[3H]-oner og isoquinolinderivater (for eksempel 2-(4-hydroksyfenyl)benzimidazol-4-karboksamid (NU1085), 8-hydroksy-2-metylquinazolin-4-[3H]-on (NU1025); 6(5H)fenantridinon; 3 aminobenzamid; benzimidazol-4-karboksamider (BZ1-6) og tricyklisk laktamindoler (TII-5) [32]. Andre inhibitorer av PARP kan identifiseres enten ved design [33] eller den nye "FlashPlate" analysen [34].
PARP-inhibitoren formulert som en farmasøytisk sammensetning kan administreres på en hvilken som helst effektiv, vanlig måte som er effektivt for målsøking av cancerceller inkludert, for eksempel oral administrering, intravenøs, intramuskulær, intradermal, intranasal og topiske administreringer blant annet. Bærere eller fortynningsmidler nyttige i den farmasøytiske sammensetningen kan inkludere, men er ikke begrenset til, saltvann, bufiret saltvann, dekstrose, vann, glyserol, etanol og kombinasjoner av disse.
Innen terapi eller som profylakse kan det aktive stoffet administreres til et individ som en injiserbar sammensetning, for eksempel som en steril vandig dispersjon. Inhibitoren kan administreres direkte til en tumorcelle eller kan målsøkes til tumorcellen via systemisk administrering.
En terapeutisk effektiv mengde av inhibitoren er typisk en som er tilstrekkelig for å oppnå den ønskede effekten og kan variere i henhold til egenskapene og alvorlighetsgraden av sykdommen og styrken til inhibitoren. Det vil forstås at ulike konsentrasjoner kan anvendes ved profylakse enn for behandling av en aktiv sykdom.
For administrering til pattedyr, og spesielt menneske, er det forventet at det daglige dosenivå av det aktive middel vil være opptil 100 mg/kg, for eksempel fra 0,01 mg/kg til 50 mg/kg kroppsvekt, typisk opptil 0,1, 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10, 15, 20 eller 30 mg/kg kroppsvekt. Til syvende og sist bestemmes imidlertid mengden av inhibitoren som administreres og ved hvilken hyppighet midlet skal administreres av den behandlende lege.
En terapeutisk fordel ved anvendelse av PARP-inhibitorer for behandling av cancerceller er at kun svært små doser er nødvendig for å gi en terapeutisk effekt ved behandling av cancercellene og dermed reduseres den systemiske akkumulering av inhibitoren og de toksiske bivirkningene som er forbundet med denne.
Et foretrukket aspekt ifølge oppfinnelsen frembringer anvendelse av en PARP-inhibitor der PARP-inhibitoren er et inhibitorisk RNA (RNAi) molekyl.
En teknikk for spesifikt å fjerne genfunksjonen er ved å introdusere dobbeltrådet RNA, også betegnet som inhibitorisk RNA (RNAi) inn i cellene hvilket resulterer i destruksjon av mRNA som er komplementært med sekvensen inkludert i RNAi-molekylet. RNAi-molekylet omfatter to komplementære tråder av RNA (en senstråd og antisenstråd) annealet til hverandre for å danne et dobbelttrådet RNA-molekyl. RNAi- molekylet er typisk avledet fra eksonsekvenser eller kodende sekvenser i genet som skal fjernes.
Fortrinnsvis er nevnte RNAi-molekyl avledet fra nukleinsyremolekylet omfattende en nukleinsyresekvens utvalgt fra gruppen bestående av: a) en nukleinsyresekvens ifølge sekvensen gjengitt i figur 9, 10, 11, 12, 13 eller 14 eller fragmenter av disse; b) en nukleinsyresekvens som hybridiserer med nukleinsyresekvensen vist i figur 9, 10, 11, 12 eller 13 og som koder for et PARP-gen; c) en nukleinsyresekvens som omfatter sekvensene som er degenerert som et resultat av den genetiske kode til nukleinsyresekvensen definert i (a) og (b).
Nylige studier antyder at RNAi-molekyler varierende fra 100-1000 bp avledet fra kodende sekvenser er effektive inhibitorer for genekspresjon. Overraskende ble det funnet at kun noen få RNAi-molekyler er nødvendig for å blokkere genekspresjon hvilket innebærer at mekanismen er katalytisk. Virkningsstedet synes å være nukleært da lite, hvis i det hele tatt noen, RNAi er detekterbart i cytoplasma til cellene hvilket antyder at RNAi utøver sin effekt under mRNA-syntesen eller -prosesseringen.
Videre er det foretrukket at nevnte RNAi-molekyler ifølge oppfinnelsen har en lengde på mellom 10 nukleotidbaser (nb) - lOOOnb. Mer foretrukket er at nevnte RNAi-molekyl har en lengde på 10nb, 20nb, 30nb, 40nb, 50nb, 60nb, 70nb, 80nb, 90nb eller lOOnb. Enda mer foretrukket er at RNAi-molekylet er 21nb langt.
Enda mer foretrukket er at RNAi-molekylet omfatter nukleinsyresekvensen aaa age eau ggu gga gua uga (PARP-l).
Mer foretrukket er at RNAi-molekylet består av nukleinsyresekvensen aag acc aau cuc ucc agu uca ac (PARP-2).
Mer foretrukket er at RNAi-molekylet består av nukleinsyresekvensen aag acc aac aue gag aac aac (PARP-3).
RNAi-molekylet kan omfatte modifiserte nukleotidbaser.
Foretrukne trekk for hvert aspekt ifølge oppfinnelsen er som for hver av de andre aspektene mutatis mutandis.
Foreliggende oppfinnelse vil nå bli beskrevet ved eksemplene og med henvisning til de følgende figurer, der: Figur 1 er en kurve som viser at HR-defisiente celler er hypersensitive overfor den toksiske effekt forårsaket av inhibisjonen av PARP-l. Kolonifremvekst av kinesiske hamstercellelinjer AA8 (villtype), irslSF (defisient i HR[4]), CXR3 (irslSF tilført XRCC3 [2]), V79 (villtype), irsl (defisient i HR[5]) eller irslX2.2 (irsl tilført XRCC2
[1] ved eksponering for 3-AB (A), ISQ (B) eller NU1025 (C). Gjennomsnittsverdier (symbolene) og standard avvik (søylene) for minst tre eksperimenter er vist. Kolonifremvekstanalysen ble anvendt. Figur 2 er en kurve som viser celleoverlevelse i nærvær av PARP-inhibitoren NU1025 i villtype V79 celler, BRCA2-defisiente VC-8-celler og VC-8-celler tilført funksjonelt BRCA2-gen (VC-8#13, VC-8+B2). Kolonifremvekstanalysen ble anvendt. Figur 3 et histogram som viser prosentandel celler i apoptose etter en 72 timers inkubering med NU1025. Figur 4 (a) Western blottanalyse av proteinlysat isolert fra MCF-7 (P53™<1>) eller MDA-MB-231 (P53™<1>) brystcancerceller etter 48 timers transfeksjon med siRNA. (b) Kolonifremvekst av siRNA-behandlede MCF-7-celler eller (c) MDA-MB-231 -celler etter eksponering for PARP-inhibitoren NU1025. Gjennomsnitt (symboler) og standard avvik (søyler) for minst tre eksperimenter er vist. Figur 5 BRCA2-defisiente celler lykkes ikke med å reparere en rekombinasjonslesjon dannes ved replikasjonsforgreningen ved inhibitorer av PARP. (a) Visualisering av dobbelttrådede brudd (DBSs) i BRCA2-funksjonelle eller defisiente celler etter en 24 timers behandling med NU1025 (0,1 mm) med pulsfelt gelelektroforese. Hydroksyurea 2 mm ble anvendt som en positiv kontroll, (b) Visualisering av yH2Ax foci hos ubehandlede V-C8+B2- og V-C8-celler. Antall celler inneholdende yH2Ax foci (c) eller RAD51 foci (d) visualisert i V-C8+B2- og V-C8-celler etter en 24 timers behandling med NU1025 (10 um). Gjennomsnitt (symboler) og standardfeil (søyler) for tre til ni eksperimenter er vist. (e) En foreslått modell for celledød indusert i BRCA2-defisiente celler. Figur 6 PARP-l og ikke PARP-2 er viktig ved å forhindre dannelse av en rekombinogen lesjon, hvilket fører til død i fravær av BRCA2. (a) RT-PCR på RNA isolert fra SW480SN.3-celler behandlet med BRCA2, PARP-l og PARP-2 siRNA i kombinasjon som vist i 48 timer, (b) Klonogen overlevelse etter 48 timers mangel på BRCA2, PARP-l og PARP-2. Gjennomsnitt (symboler) og standard avvik (søyler) for minst tre eksperimenter er vist. To og tre stjerner viser statistisk signifikans i t- test på henholdsvis p<0,01 og p<0,001. (c) Western blott for PAPR-1 i SW480SN.3-celler behandlet med ulike siRNA. Figur 7. (a) Visualisering av PAR-polymerer i ubehandlede og (b) tymidinbehandlede V79-celler (5 mm i 24 timer), (c) Prosentandel celler inneholdende >10 seter for PAPR-aktivitet etter behandling med hydroksyurea (0,2 mm) og tymidin (5 mm). Minst 300 kjerner ble telt for hver behandling og eksperiment, (d) Overlevelse av V-C8+B2-celler etter samtidig behandling med hydroksyurea eller (e) tymidin og NU1025 (10 um). (f) Aktiviteten til PARP ble målt ved nivået av fri NAD(P)H, etterbehandling med MMS, hydroksyurea (0,5 mm) eller tymidin (10 mm). Gjennomsnitt (symbol) og standardavvik (søyler) fra minst tre eksperimenter vises. Figur 8. (a) Visualisering av PAR-polymerer i ubehandlede V-C8- og (b) V-C8+B2-celler. (c) Kvantifisering av prosentandel celler inneholdende >10 seter for PARP-aktivitet i ubehandlede V-C8- og V-C8+B2-celler. (d) Nivå av NAD(P)H målt i ubehandlede V-C8- og V-C8+B2-celler. Tre stjerner angir p<0,001 i t-test. (e) Visualisering av RAD51 og seter for PARP-aktivitet i V79-celler etter en 24-timers tymidinbehandling (5 mm), (f) En modell for rollen til PARP og HR ved "stalled" replikasj onsforgr eninger.
Figur 9 viser den humane cDNA-sekvensen til PARP-l.
Figur 10 viser den humane cDNA-sekvensen til PARP-2.
Figur 11 viser den humane cDNA-sekvensen til PARP-3.
Figur 12 viser den humane gDNA-sekvensen til tankyrase 1.
Figur 13 viser den humane mRNA-sekvensen til tankyrase 2.
Figur 14 viser den humane mRNA-sekvensen til VPARP.
Materialer og metoder
Cvtotoksisitet til PARP- inhibitorer overfor HR- defekte celler; XRCC2. XRCC3 eller BRCA2
Cellekultur
irs-, irslX2.1- og V79-4-cellelinjer ble gitt av John Tacker [40] og AA8-, irslSF- og CXR3-cellelinjene ble gitt av Larry Thompson [41]. VC-8, VC-8+B2, VC-8#13 var en gave fra Malgorzata Zdzienicka [42]. Alle cellelinjene i denne studien ble dyrket i Dulbecco's modifiserte Eagle's medium (DMEM) tilsatt 10% føtalt bovinserum og penicillin (100 U/ml) og streptomycin sulfat (100 ug/ml) ved 37°C under en atmosfære inneholdende 5% CO2.
Toksisitetsanalyse - kolonifremvekstanalyse
500 celler suspendert i mediet ble sådd ut på Petri-skåler 4 timer før tilsetning av 3-AB, ISQ eller NU1025. ISQ og NI 025 ble oppløst i DMSO til en sluttkonsentrasjon på 0,2% i behandlingsmedium. 7-12 dager senere, når kolonier kunne observeres, ble disse koloniene fiksert og farget med metylen blått i metanol (4 g/l). Koloniene som besto av mer enn 50 celler ble deretter telt.
Apoptoseeksperimenter
0,25x106 celler ble sådd ut på Petri-skåler og dyrket i fire timer før behandling med NU1025. Etter 72 timer ble cellene trypsinert og resuspendert med medium inneholdende eventuelle flytende celler fra den prøven. Cellene ble sentrifugert og resuspendert for apoptoseanalyse med FITC-konjugert anneksin-V og propidiumjodid (PI) (ApoTarget, Biosource International) ifølge produsentens retningslinjer. Prøvene ble analysert ved flowcytometri (Becton-Dickenson FACSort, 488 nm laser) og prosentandel apoptotiske celler ble bestemt ved den fraksjon av levende celler (PI-negative) som var bundet til FITC-konjugert anneksin-V.
Immunfluoresens
Celler ble sådd ut på dekkglass 4 timer før 24-timers behandlingen som antydet. Etter behandlingen ble mediet fjernet og dekkglasset skylt en gang i PBS ved 37°C og fiksert som beskrevet på annet hold [2]. De primære antistoffene og fortynningene som ble anvendt i denne studien var; kanin polyklonalt anti-PAR (Trevigen; 1:500), geit polyklonalt anti-Rad51 (C-20, Santa Cruz; 1:200) og kanin polyklonal anti-Rad51 (H-92, Santa Cruz; 1:1000). De sekundære antistoffene var Cy-3-konjugert geit anti-kanin IgG-antistoff (Zymed; 1:500), Alexa 555 geit-anti-kanin F(ab')2IgG antistoff (Molecular Probes; 1:500) Alexa 546 esel anti-geit IgG antistoff (Molecular Probes; 1:500) og Alexa 488 esel anti-kanin IgG antistoff (Molecular Probes; 1:500). Antistoffene ble fortynnet i PBS inneholdende 3% bovint serumalbumin. DNA ble farget med en ug/ml To Pro (Molecular Probes). Bilder ble oppnådd med et Zeiss LSM 510 inverts konfokalt mikroskop ved anvendelse av planapokromat 63X/NA 1,4 olje immersjonsobjektiv og eksiteringsbølgelengde 488, 546 og 630 nm. Gjennom fokusering ble maksimale projeksjonsbilder frembrakt fra optiske snitt 0,50 um fra hverandre og med en snittykkelse på 1,0 um. Bildene ble prosessert ved hjelp av Adobe PhotoShop (Abacus Inc.). Minst 300 kjerner ble telt på hvert objekts glass og de som inneholdt mer enn 10 RAD51 foci eller seter for PARP-aktivitet ble klassifisert som positive.
PARP- aktivitetsanalvse
Et vannløselig tetrazoliumsalt (5 mm WST-8) ble anvendt for å følge mengden av NAD(P)H gjennom sin reduksjon til et gulfarget formazanfargestoff [43]. 5000 celler ble sådd ut i minst triplikater til brønner i 96 plater og dyrket i 100 ul normalt vekstmedium i 4 timer ved 37°C. CK8-buffer (Dojindo Molecular Technology, Gaithersburg, USA) inneholdende WST-8, ble deretter tilsett enten med eller uten behandling med DNA-skadelige midler med de angitte konsentrasjoner. Reduksjon av WST-8 i nærvær av NAD(P)H ble bestemt ved å måle synlig absorbans (OD450) hvert 30. minutt. En blank mediumprøve ble også tilberedt inneholdende kun medium og CK8-buffer. Endringer i NAD(P)H-nivåene ble beregnet ved å sammenligne absorbansen i brønner inneholdende celler behandlet med DNA-skadelige midler og de som var behandlet med DMSO alene. Relative nivåer av NAD(P)H i ulike cellelinjer ble beregnet etter 4 timer inkubering i CK8-buffer.
Evnen NU1025 har til å inhibere PARP-l-aktiviteten ble også analysert i permeabiliserte celler ved anvendelse av en modifisering av fremgangsmåten ifølge Halldorsson et al. [44], og beskrevet i detalj annensteds [45]. I korthet: 300 ul NU1025- behandlede (15 min) permeabiliserte celler ble inkubert ved 26°C med oligonukleotid (sluttkonsentrasjon 2,5 ug/ml), 75 um NAD + [<32>P] NAD (Amersham Pharmacia, Amersham, UK) i et totalvolum på 400 ul. Reaksjonen ble terminert etter 5 minutter ved å tilsette iskald 10% TC A 10% Na Ppi i 60 minutter før filtrering gjennom et Whatman GF/C-filter (LabSales, Maidstone, UK), skylt 6 ganger med 1% TCA 1% NaPPi, satt til tørking og inkorporert radioaktivitet ble målt for å bestemme PARP-l-aktiviteten. Data uttrykkes som pmol NAD inkorporert /l 0 6 celler i forhold til [ 32 P] NAD-standarder.
Puls- felt gelelektroforese
l,5xl0<6>celler ble sådd ut på 100 mm skåler og hensatt i 4 timer for å feste seg. Eksponering for medikament var i 18 timer, deretter ble cellene trypsinert og IO<6>celler ble smeltet inn i 1% agarose innsatser. Disse innsatsene ble inkubert som beskrevet annensteds (8) og separert ved puls-felt gelelektroforese i 24 timer (BioRad; 120° vinkel, 60 til 240 sekunder switch-tid, 4 V/cm). Gelen ble deretter farget med etidium-bromid for analyse.
siRNA- behandling
En på forhånd designet BRCA2 SMARTpool og "scrambled" siRNA ble skaffet (Dharmacon, Lafayette, CO). 10000 celler ble sådd ut på 6 brønns plater og hensatt over natten før transfeksjon med 100 nm siRNA ved anvendelse av oligofectaminreagens (Jjivitrogen) ifølge produsentens instruksjoner. Cellene ble deretter dyrket i normalt vekstmedium i 48 timer før trypsinering og sådd ut igjen for toksisitetsanalyser. Suppresjon av BRCA2 ble bekreftet ved Western blott (som beskrevet tidligere [46] av proteinekstrakter behandlet med siRNA med et antistoff mot BRCA2 (Oncogen, Nottingham, UK).
EKSEMPLER
Homolog rekombinasjonsdefisiente celler er hvpersensitive overfor PARP- l- inhibision
For å undersøke betydningen av HR i den cellulære responsen ved inhibisjon av PARP-1, ble effektene av PARP-l-inhibitorer på overlevelse av HR-reparasjonsdefisiente cellelinjer studert. Det ble funnet at celler defisiente i HR (dvs. irsl SF som er defekte i XRCC3 eller irsl som er defekte i XRCC2 [se tabell 1] var svært sensitive overfor den toksiske effekten av 3-aminobenzamid (3-AB) og overfor to mer potente inhibitorer av PARP-l: 1,5-dihydroksyisoquinolin (ISQ; [37]) eller 8-hydroksy-2-metylquinazolinon (NU1025 [38, 39]) (figur 1). Sensitiviteten i irslSF-celler overfor 3-AB, ISQ eller NU1025 ble korrigert ved introduksjon av et kosmid inneholdende et funksjonelt XRCC3-gen (CXR3). Tilsvarende ble sensitiviteten i irsl-celler overfor 3-AB, ISQ eller NU1025 korrigert ved introduksjon av et kosmid inneholdende et funksjonelt XRCC2-gen (irslX2.2).
BRCA2- defisiente celler er hvpersensitive overfor PARP- l- inhibisjon
Overlevelsen av BRCA2-defisiente celler (VC8) og villtypeceller (V79Z) i nærvær av inhibitorer av PARP-l ble studert. Det ble funnet at VC8-celler er svært sensitive overfor den toksiske effekten av NU1025 (fig. 2). Sensitiviteten i VC8-cellene ble korrigert ved introduksjon av et funksjonelt BRCA2-gen enten på kromosom 13 (VC8#13) eller på en overekspresjonsvektor (VC8+B2). Dette resultatet viser at sensitiviteten overfor PARP-l-inhibitorer er en direkte konsekvens av tapet av BRCA2-funksjonen.
For å undersøke om inhibisjonen av PARP-l trigger apoptose i BRCA2-defisiente celler, ble nivået av apoptose 72 timer etter eksponering for NU1025 undersøkt. Det ble funnet at NU1025 startet apoptosen kun i VC8-celler, hvilket viser at tap av PARP-1-aktivitet i BRCA2-defisiente celler starter denne form for celledød (fig. 3).
BRCA2- defisiente brystcancerceller er hvpersensitive overfor PARP- l- inhibisjon
Det ble undersøkt om MCF7 (villtype p53) og MDA-MB-231 (mutert p53) brystcancercellelinjer viste en tilsvarende sensitivitet overfor NU1025 ved mangel på BRCA2. Det ble funnet at PARP-l-inhibitorer betydelig reduserte overlevelsen av MCF7- og MDA-MB-231-celler kun når BRCA2 manglet med en blanding av BRCA2 siRNA (fig. 4). Dette viser at BRA2 manglende brystcancerceller er sensitive overfor BARP-inhibitorer uavhengig av p53-statusen.
BRCA2- defisiente celler dør av PARP- l- inhibisjon i fravær av dobbelttrådede DNA bruddpunkt( DSB) men i nærvær av yH2Ax
HR er vist å være involvert i reparasjonen av DSB og andre lesjoner som forekommer under DNA-replikasjon [2]. For å bestemme om sensitiviteten til BRCA2-defisiente celler er resultatet av en manglende evne til å reparere DSB etter NU1025-behandling, ble akkumulering av DSB i V79- og V-C8-celler målt etter behandling med svært toksiske nivåer av NU1025. Det ble funnet at ikke noe DSB var påvisbart ved pulsfelt gelelektroforeseanalyse av DNA oppnådd fra de behandlede cellene (fig. 5A), hvilket antyder at lave nivåer av DSB eller andre rekombinogene substrater akkumulerer etter PARP-inhibisjon i HR-defisiente celler, hvilket trigger yH2Ax (fig. 5B). Årsaken til hvorfor BRCA2-defisiente celler dør etter induksjon av disse rekombinogene lesjoner er sannsynligvis forårsaket av en manglende evne til å reparere slike lesjoner. For å teste dette ble evnen BRCA2-defisiente V-C8-celler og BRCA2-komplimenterte celler har til å danne RAD51-foci som respons på NU1025 bestemt. Det ble funnet at RAD51-foci virkelig ble indusert i V-C8+B2-celler etter behandling med NU1025 (statistisk signifikans i t-test p<0,05; figur 5D). Dette antyder at de rekombinogene lesjoner trigger HR-reparasjon i disse celler hvilket muliggjør at disse overlever. I motsetning var BRCA2-defisiente V-C8-celler ikke i stand til å danne RAD51-foci som respons på NU1025-behandling (figur 5D) hvilket antyder null HR, som igjen vil føre til at de rekominogene lesjoner ikke repareres og følgelig føre til celledød.
PARP- l og ikke PARP- 2 er viktig ved å forhindre dannelse av en rekominogen lesjon
Det er to hoved PARP tilstede i kjernen i pattedyrceller, PARP-l og PARP-2 og alle rapporterte PARP-inhibitorer inhiberer begge. For å skille hvilken PARP som var ansvarlig for denne effekten, ble det undersøkt om å fravær av PARP-l og/eller PARP-2 resulterer i akkumulering av toksiske lesjoner, ved depresjon av disse og BRCA2 med siRNA i humane celler (figur 6a). Det ble funnet at den klonogene overlevelse var betydelig redusert når både PARP-l- og BRCA2-proteiner manglet samtidig i humane celler (figur 6b). Mangel på PARP-2 med BRCA2 hadde ingen effekt på den klonogene overlevelsen og mangel på PARP-2 i PARP-l og BRCA2-manglende celler førte til ikke ytterligere toksisitet. Disse resultater antyder at PARP-l og ikke PARP-2 er ansvarlig for reduksjon av toksiske rekombinogene lesjoner i humane celler. Kloningseffektiviteten ble kun redusert til 60% i forhold til kontrollen i celler som både manglet PARP-l og BRCA2, mens ingen HR-defisiente celler overlevde behandlingen med PARP-inhibitorer. Dette henger sannsynligvis sammen med ufullstendig depresjon av det riktig forekommende PARP-l-protein ved siRNA (figur 6c), hvilket kan være tilstrekkelig for å opprettholde PARP-l-funksjon i noen av cellene.
PARP- l aktiveres ved replikasjonsinhibitorer
HR er også involvert i reparasjon av lesjoner som forekommer ved "stalled" replikasjonsforgreninger, som ikke trenger å involvere detekterbart DSB [2]. For å teste om PARP har en rolle ved replikasjonsforgreninger, ble PARP-aktivering i celler behandlet med stoffer (tymidin eller hydroksyurea) som retarderer eller stopper progresjonen av DNA-replikasjonsforgreningen undersøkt. Tymidin depleterer celler for dCTP og reduserer replikasjonsforgreningen uten å forårsake DSB. Hydroksyurea repleterer flere dNTP og blokkerer replikasjonsforgreningen, hvilket er forbundet med dannelse av DSB ved replikasjonsforgreningen [2]. Begge disse midlene induserer potensielt HR [2]. V79-hamsterceller behandlet i 24 timer med tymidin eller hydroksyurea ble farget på for PAR-polymeraser. Dette ga en betydelig økning i antall celler inneholdende seter for PARP-aktivitet (figur 7C). Dette resultat antyder en funksjon for PARP ved "stalled" replikasjonsforgreninger. Det ble også vist at inhibisjon av PARP med NU1025 økte sensitiviteten overfor tymidin eller hydroksyurea i V-C8+B2-celler (figur 7D,E). Dette resultat antyder at PARP-aktiviteten er viktig ved reparasjon av "stalled" replikasjonsforgreninger eller alternativt at det forhindrer induksjon av celledød i celler med "stalled" replikasjonsforgreninger.
PARP aktiveres raskt ved DNA-enkelttrådede brudd (SSB) og tiltrekker DNA-reparasjonsenzymer [3-6]. Metylmetansulfonat (MMS) medfører alkylering av DNA, hvilket repareres ved basefjerningsreparasjon. PARP aktiveres raskt ved SSB-intermediatet dannet under denne reparasjon, hvilket reduserer NAD(P)H-nivåene (figur 7F). Det ble funnet at aktivering av PARP og reduksjon av NAD(P)H-nivåene er mye langsommere etter tymidin eller hydroksyureabehandling. Denne langsomme PARP-aktivering kan forklares ved den indirekte virkning av tymidin og hydroksyurea og den tiden som er nødvendig for å akkumulere "stalled" replikasjonsforgreninger ettersom celler trer inn i S-fasen av cellesyklusen.
PARP- l og HR spiller ulike roller ved " stalled" replikasjonsforgreninger
Antall PARP-aktivitetsseter i ubehandlede BRCA2- defisiente V-C8-celler ble bestemt. Det ble funnet at flere V-C8-celler inneholdt seter for PARP-aktivitet sammenlignet med V-C8+B2-celler (figur 8A,B,C). V-C8-celler hadde også lavere fri NAD(P)H-nivåer enn de korrigerte celler (figur 8D), hvilket er et sannsynlig resultat av den økte PARP-aktivitet. Viktig er at disse setene for PARP-aktivitet ikke overlapper med RAD51-foci (figur 8E).
Resultatene her i dokumentet antyder at PARP og HR spiller forskjellige roller ved beskyttelse eller bergingen av "stalled" replikasjonsforgreninger (figur 8F). Tap av PARP-aktivitet kan kompenseres ved økt HR mens et tap av HR kan kompenseres ved økt PARP-aktivitet. Imidlertid fører tap av begge disse reaksjonsveier til akkumulering av "stalled" replikasjonsforgreninger og celledød, som vist i det tilfellet at PARP inhiberte BRCA2-defisiente celler.
Slik det vises i modellen skissert i figur 8F spiller PARP og HR komplementære roller ved "stalled" replikasjonsforgreninger. (i) Replikasjonsforgreningene kan holdes tilbake når den møter på en veisperring på DNA-templaten. I tillegg kan den også holdes tilbake midlertidig, på grunn av mangel på dNTP eller andre replikasjonsko-faktorer.
(ii) PARP-binder tilbakeholdte replikasjonsforgreninger eller andre replikasjonsassosierte skader, hvilket trigger PAR-polymerisering. De dannede negativt ladede PAR-polymerer kan beskytte de tilbakeholdte replikasjonsforgreninger, ved å frastøte proteiner som normalt ville bearbeide replikasjonsforgreningene (for eksempel resolvaser), inntil replikasjonsforgreningen kan gjenopprettes sponant når dNTP eller andre ko-faktorer blir tilgjengelige. Alternativt kan PAR-polymerer eller PARP tiltrekke proteiner for å løse opp replikasjonsblokkeringen på andre, (iii) I fravær av PARP-aktivitet kan HR anvendes som en alternativ reaksjonsvei for å reparere tilbakeholdte replikasjonsforgreninger. Denne kompensasjonsmodellen forklarer det økte nivå av HR og RAD51-foci funnet i PARP-defisiente celler og den høye PARP-aktivitet funnet i HR-defisiente celler (dvs. V-C8). Spontan replikasjonsblokkering/lesjoner er kun letale i fravær av både PARP og HR.
REFERANSER:
[1] A.R. Venkitaraman Cancer susceptibility and the functions of BRCA1 and
BRCA2, Cell 108 (2002) 171-182.
[2] C. Lundin, K. Erixon, C. Amaudeau, N. Schultz, D. Jenssen, M. Meuth and T. Helleday Different roles for nonhomologous end joining and homologous recombination following replication arrest in mammalian cells, Mol Cell Biol 22 (2002) 5869-5878.
[3] D. D'Amours, S. Desnoyers, I. D'Silva and G.G. Poirier Poly(ADP-ribosyl)ation reactions in the regulation of nuclear functions, Biochem J 342
(1999) 249-268.
[4] Z. Herceg and Z.Q. Wang Functions of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) in DNA repair, genomic integrity and cell death, Mutat Res 477 (2001) 97-110.
[5] T. Lindahl M.S. Satoh, G.G. Poirier and A. Klungland Post-translationaJ modification of poly(ADP-ribose) polymerase induced by DNA strand breaks, Trends Biochem Sei 20 (1995) 405-411.
[6] M.S. Satoh and T. Lindahl Role of poly(ADP-ribose) formation in DNA
repair, Nature 356 (1992) 356-358.
[7] S. Shall and G. de Murcia Poly(ADP-ribose) polymerase-1: what have we
learned from the deficient mouse model?, Mutat Res 460 (2000) 1-15.
[8] Z.Q. Wang, L. Stingi, C. Morrisen, M. Jantsch, M. Los, K. Schulze-Osthoff and E.F. Wagner PARP is important for genomic stability but dispensable in apoptosis, Genes Dev 11 (1997) 2347-2358.
[9] CM. Simbulan-Rosenthal, B.R. Haddad, D.S. Rosenthal, Z. Weaver, A. Coleman, R. Luo, H.M. Young, Z.Q. Wang, T. Ried and M.E. Smulson Chromosomal aberrations in PARP(-/-) mice: genome stabilization in immortalized cells by reintroduction of poly(ADP-ribose) polymerase cDNA, Proe Nati Acad Sei U S A 96 (1999) 13191-13196.
[10] J.M. de Murcia, C. Niedergang, C. Trucco, M. Ricoul, B. Dutrillaux, M. Mark, FJ. Oliver, M. Masson, A. Dierich, M. LeMeur, C. Walztinger, P. Chambon and G. de Murcia Requirement of poly(ADP-ribose) polymerase in recovery from DNA damage in mice and in cells, Proe Nati Acad Sei U S A 94 (1997) 7303-7307.
[11] F. d'Adda di Fagagna, Mi<»>. Hande, W.M. Tong, P.M. Lansdorp, Z.Q. Wang and S.P. Jackson Functions of poly(ADP-ribose) polymerase in controlling telomere length and chromosomal stability, Nat Genet 23 (1999) 76-80.
[12] E. Samper, F.A. Goytisolo, J. Menissier-*de Murcia, E. Gonzalez-Suarez, J.C. Cigudosa, G. de Murcia and M.A. Blasco Normal telomere length and chromosomal end capping in poly(ADP-ribose) polymerase-deficient mice and primary cells despite increased chromosomal instabiliry, J Cell Biol 154 ;(2001) 49-60. ;[13] C. Morrison, G.C. Smith, L. Stingi, S.P. Jackson, E.F. Wagner and Z.Q. Wang Genetic interaction between PARP and DNA-PK in V(D)J recombination and turnorigenesis, Nat Genet 17 (1997) 479-482. ;[14] V. Schreiber, D. Hunting, C. Trucco, B. Gowans, D. Grunwald, G. De Murcia and J.M. De Murcia A dominant-negative mutant of human polyfADP-ribose) polymerase affects cell recovery, apoptosis, and sister chromatid exchange following DNA damage, Proe Nati Acad Sei U S A 92 (1995) 4753-4757. ;[15] J.H. Kupper, M. Muller and A. Burkle Trans-dominant inhibition of poly(ADP-ribosyl)ation potentiates carcinogen induced gene amplification in SV40-transformed Chinese hamster cells, Cancer Res 56 (1996) 2715-2717. ;[16] J. Magnusson and C. Ramel Inhibitor of poly(ADP-ribose)transferase potentiates the recombinogenic but not the mutagenic action of alkylating agents in somatic cells in vivo in Drosophila melanogaster, Mutagenesis 5 ;(1990)511-514. ;[17] AS. Waldman and B.C. Waldman Stimulation of intrachromosomal homologous recombination in mammaltan cells by an inhibitor of polyCADP-ribosylation), Nucleic Acids Res 19 (1991) 5943-5947. ;[18] A. Semionov, D. Coumoyer and T.Y. Chow Inhibition of poly(ADP-ribose)polymerase stimulates extrachromosomal homologous recombination in mouse Ltk-fibroblasts, Nucleic Acids Res 27 (1999) 4526-4531. ;[19] F. Dantzer, V. Schreiber, C. Niedergang, C. Trucco, E. Flatter, G. De La Rubia, J. Oliver, V. Rolli, J. Menissier-de Murcia and G. de Murcia Involvement of poly(ADP-ribose) polymerase in base excision repair, Biochimie 81 (1999) 69-75. ;[20] F. Dantzer, G. de La Rubia, J. Menissier-De Murcia, Z. Hostomsky, G. de Murcia and V. Schreiber Base excision repair is impaired in mamrnalian cells lacking Poly(ADP-ribose) polymerase-1, Biochemistry 39 (2000) 7559-7569. ;[21] L. Tentori, I. Portarena and G. Graziani Potential clinical applications of poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitors, Pharmacol Res 45 (2002) 73-85. ;[22] T. Lindahl and R.D. Wood Quality control by DNA repair, Science 286 (1999) ;1897-1905. ;[23] K.W. Caldecott DNA single-strand break repair and spinocerebellar ataxia, ;Cell 112(2003)7-10. ;[24] D. D'Amours and SJ<*>. Jackson The Mrell complex: at the crossroads of dna
repair and checkpoint signalling, Nat Rev Mol Cell Biol 3 (2002) 317-327.
[25] A.D. D'Andrea and M. Grompe The Fanconi anaemia/BRCA pathway, Nat
Rev Cancer 3 (2003) 23-34.
[26] S.P. Jackson Sensing and repairing DNA double-strand breaks, Carcinogenesis 23 (2002) 687-696.
[27] R. Karmar, JU. Hoeijmakers and D.C. van Gent Molecular mechanisms of
DNA double strand break repair, Trends Cell Biol 8 (1998) 483-489.
[28] D.C. van Gent, JJH. Hoeijmakers and R. Kanaar Chromosomal stability and
the DNA double-stranded break connection, Nat Rev Genet 2 (2001) 196-206.
[29] S.L. Neuhausen and E.A. Ostrander Mutation testing of early-onset breast
cancer genes BRCA1 and BRCA2, Genet Test 1 (1997) 75-83.
[30] G. Kuperstein, W.D. Foulkes, P. Ghadirian, J. Hakimi and S.A. Narod A rapid fluorescent multiplexed-PCR analysis (FMPA) for founder mutations in the BRCA1 and BRCA2 genes, Clin Genet 57 (2000) 213-220.
[31] A. Chiarugi PolyfADP-ribose) polymerase: killer or conspirator? The 'suicide
hypothesis' revisited, Trends Pharmacol Sei 23 (2002) 122-129.
[32] CR. Calabrese, MA. Batey, H.D. Thomas, B.W. Durkacz, L.Z. Wang, S. Kyle, D. Skalitzky, J. Li, C. Zhang, T. Boritzki, K. Maegley, AH. Calvert, Z. Hostomsky, D.R. Newell and N.J. Curtin Identification of Potent Nontoxic Poly(ADP-Ribose) Polymerase-1 Inhibitors: Chemopotentiation and Pharmacologjcal Studies, Clin Cancer Res 9 (2003) 2711-2718.
[33] D. Ferraris, Y.S. Ko, T. Pahutski, R.P. Ficco, L. Serdyuk, C Alemu, C. Bradford, T. Chiou, R. Hoover, S. Huang, S. Lautar, S. Liang, Q. Lin, M.X. Lu, M. Mooney, L. Morgan, Y. Qian, S. Tran, L.R. Williams, Q.Y. Wu, J. Zhang, Y. Zou and V. Kalish Design and synthesis of poly ADP-ribose polymerase-1 inhibitors. 2. Biological evaluation of aza-5|Ti]-phenanthridin-6-ones as potent, aqueous-soluble compounds for the treatment of ischemic injuries, J Med Chem 46 (2003) 3138-3151.
[34] K.J. Dillon, G.C. Smith and N.M. Martin A FlashPlate assay for the
identification of PARP-l inhibitors, J Biomol Screen 8 (2003) 347-352.
[35] AJ. Pierce, RJ). Johnson, L.H. Thompson and M. Jasin XRCC3 promotes homology-directed repair of DNA damage in mammalian cells, Genes Dev 13
(1999)2633-2638.
[36] R.D. Johnson, N. Liu and M. Jasin Mammalian XRCC2 promotes the repair of DNA double-strand breaks by homologous recombination, Nature 401 (1999) 397-399.
[37] G.M. Shah, D. Poirier, S. Desnoyers, S. Saint-Martin, J.C. Hoflack, P. Rong, M. ApSimon, J.B. Kirkland and G.G. Poirier Complete inhibition of poly(ADP-ribose) polymerase activity prevents the rccovcry of C3H10T1/2 cells from oxidative stress, Biochim Biophys Acta 1312 (1996) 1-7.
[38] RJ. Griffm, S. Srimvasan, K. Bowman, A.H. Calvert, N.J. Curtin, D.R. Newell, L.C. Pemberton and B.T. Golding Resistance-modifying agents. 5. Synthesis and biological properties of quinazolinone inhibitors of the DNA repair enzyme poly(ADP-ribose) polymerase (PARP), J Med Chem 41 (1998) 5247-5256.
[39] S. Boulton, L.C. Pemberton, J.K. Porteous, N.J. Curtin, RJ. Griffin, B.T. Golding and B.W. Durkacz Potentiation of temozolomide-induced cytotoxicity: a comparative study of the biological effects of poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors, Br J Cancer 72 (1995) 849-856.
[40] C.S. Griffin, P.J. Simpson, CR Wilson and J. Thacker Mammalian recombination-repair genes XRCC2 and XRCC3 promote correct chromosome segregation, Nat Cell Biol 2 (2000) 757-761.
[41] R.S. Tebbs, Y. Zhao, J.D. Tucker, J.B. Scheerer, M.J. Siciliano, M. Hwang, N. Liu, R.J. Legerski and L.H. Thompson Correction of chromosomal instability and sensitivity to diverse mutagens by a cloned cDNA of the XRCC3 DNA repair gene, Proe Nati Acad Sei U S A 92 (1995) 6354-6358.
[42] M. Kraakman-van der Zwet, WJ. Overkamp, R.E. van Lange, J. Essers, A. van Duijn-Goedhart, I. Wiggers, S. Swaminathan, P.P. van Buul, A. Errami, R.T. Tan, N.G. Jaspers, S.K. Sharan, R. Kanaar and M.Z. Zdzienicka Brca2 (XRCC11) deficiency results in radioresistant DNA synthesis and a higher frequency of spontaneous deletions, Mol Cell Biol 22 (2002) 669-679.
[43] J. Nakamura, S. Asakura, S J). Hester, G. de Murcia, K.W. Caldecott and J.A. Swenberg Quantitation of intracellular NAD(P)H can monitor an imbalance of DNA single strand break repair in base excision repair deficient cells in real time, Nucleic Acids Res 31 (2003) el04.
[44] H. Halldorsson, D.A. Gray and S. Shall Poly (ADP-ribose) polymerase
activity in nucleotide permeable cells, FEBS Lett 85 (1978) 349-352.
[45] K. Grube, J.H. Kupper and A. Burkle Direct stimulation of poly(ADP ribose) polymerase in permeabilized cells by double-stranded DNA oligomers, Anal Biochem 193 (1991) 236-239.
[46] C. Lundin, N. Schultz, C. Arnaudeau, A. Mohindra, L.T. Hansen and T. Helleday RAD51 is Involved in Repair of Damage Associated with DNA Replication in Mammalian Cells, J Mol Biol 328 (2003) 521-535.
[47] Schreider et al., Journal of Biological Chemistry 277:23028-23036 (2002).

Claims (37)

1. Anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR), der cancercellene har en defekt i genet utvalgt fra gruppen bestående av XRCC1, CTPS RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chkl, chk2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RADI, RAD9, FEN-1, Mus81, Emel, DDS1 og BARD.
2. Anvendelse ifølge krav 1, der PARP-inhibitoren er utvalgt fra gruppen bestående av PARP-l-, PARP-2-, PARP-3-, PARP-4-, tankyrase 1- og tankyrase 2-inhibitor.
3. Anvendelse ifølge krav 2, der PARP-inhibitoren er en PARP-l-inhibitor.
4. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 -3, der PARP-inhibitoren er utvalgt fra gruppen bestående av benzimidazol-karboksamider, quinazolin-4-[3H]-oner og isoquinolinderivater.
5. Anvendelse ifølge krav 4, der PARP-inhibitoren er utvalgt fra gruppen bestående av 2-(4-hydroksyfenyl)benzimidazol-4-karboksamid, 8-hydroksy-2-metylquinazolin-4-[3H]-on; 6(5H)fenantridinon, 3 aminobenzamid; benzimidazol-4-karboksamider og tricyklisk laktamindoler.
6. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 -3, der PARP-inhibitoren er et RNAi-molekyl spesifikt for et PARP-gen.
7. Anvendelse ifølge krav 6, der RNAi-molekylet er avledet fra et nukleinsyremolekyl omfattende en nukleinsyresekvens utvalgt fra gruppen bestående av: a) en nukleinsyresekvens ifølge sekvensen gjengitt i figur 9, 10, 11, 12, 13 eller 14 eller fragmenter av disse; b) en nukleinsyresekvens som hybridiserer med nukleinsyresekvensen vist i figur 9, 10, 11, 12 eller 13 og som koder for et PARP-gen; eller c) en nukleinsyresekvens som omfatter sekvensene som er degenerert som et resultat av den genetiske kode til nukleinsyresekvensene definert i (a) og (b).
8. Anvendelse ifølge krav 6 eller 7, der RNAi-molekylet omfatter nukleinsyresekvensen aaa age eau ggu gga gua uga.
9. Anvendelse ifølge krav 6 eller 7, der RNAi-molekylet består av nukleinsyresekvensen aag acc aau cuc ucc agu uca ac.
10. Anvendelse ifølge krav 6 eller 7, der RNAi-molekylet består av nukleinsyresekvensen aag acc aac aue gag aac aac.
11. Anvendelse ifølge de foregående kravene, der cancercellene som er defekte med hensyn på HR er delvis defekte med hensyn på HR.
12. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 10, der cancercellene som er defekte med hensyn på HR er totalt defekte med hensyn på HR.
13. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der defekten er en mutasjon i genet.
14. Anvendelse ifølge et hvilket som de foregående kravene, der defekten er fravær av genet.
15. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der defekten er i ekspresjonen av genet.
16. Anvendelse ifølge et hvilket som de foregående kravene, der cancercellene som skal behandles er utvalgt fra gruppen bestående av lunge-, kolon-, pankreas-, mage-, ovarie-, cervikal-, bryst- og prostatacancer.
17. Anvendelse ifølge et hvilket som de foregående kravene, der cancercellene er i et menneske.
18. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der cancercellene som skal behandles er en genkoplet arvelig cancercelle.
19. Anvendelse ifølge krav 18, der cancercellene som skal behandles er brystcancerceller.
20. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der cancercellene som skal behandles er defekte med hensyn på BRCAl-ekspresjon.
21. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der cancercellene som skal behandles er defekte med hensyn på BRCA2-ekspresjon.
22. Anvendelse ifølge krav 20 eller 21, der cancercellene er delvis defisiente med hensyn på BRCA1- og/eller BRCA-2-ekspresjon.
23. Anvendelse ifølge krav 20 eller 21, der cancercellene er totalt defisiente med hensyn på BRCA1- og/eller BRCA-2-ekspresjon.
24. Anvendelse ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, der genet som medierer HR er et tumorsuppressorgen.
25. Anvendelse ifølge krav 24, der tumorsuppressorgenet er BRCA1.
26. Anvendelse ifølge krav 24, der tumorsuppressorgenet er BRCA2.
27. Poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR), der cancercellene har en defekt i genet utvalgt fra gruppen bestående av XRCC1, CTPS RPA, RPA1, RPA2, RPA3, XPD, ERCC1, XPF, MMS19, RAD51, RAD51B, RAD51C, RAD51D, DMC1, XRCC2, XRCC3, BRCA1, BRCA2, RAD52, RAD54, RAD50, MRE11, NBS1, WRN, BLM, Ku70, Ku80, ATM, ATR, chkl, chk2, FANCA, FANCB, FANCC, FANCD1, FANCD2, FANCE, FANCF, FANCG, RADI, RAD9, FEN-1, Mus81, Emel, DDS1 og BARD.
28. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge krav 27, der PARP-inhibitorern er utvalgt fra gruppen bestående av PARP-l-, PARP-2-, PARP-3-, PARP-4-, tankyrase 1- og tankyrase 2-inhibitor.
29. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge krav 28, der PARP-inhibitoren er en PARP-1-inhibitor.
30. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-29, der PARP-inhibitoren er utvalgt fra gruppen bestående av benzimidazol-karboksamider, quinazolin-4-[3H]-oner og isoquinolinderivater.
31. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge krav 30, der PARP-inhibitoren er utvalgt fra gruppen bestående av 2-(4-hydroksyfenyl)benzimidazol-4-karboksamid, 8-hydroksy-2-metylquinazolin-4-[3H]-on; 6(5H)fenantridinon, 3 aminobenzamid; benzimidazol-4-karboksamider og tricyklisk laktamindoler
32. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-31, der cancercellene som er defekte i HR er partielt defisiente i HR.
33. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-31, der cancercellene som er defekte i HR er totalt defisiente i HR.
34. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-33, der cancercellene som skal behandles er utvalgt fra gruppen bestående av lunge-, kolon-, pankreas-, mage-, ovarie-, cervikal-, bryst- og prostatacancer.
35. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-34, der cancercellene som skal behandles er en genkoplet arvelig cancercelle.
36. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge krav 35, der cancercellene som skal behandles er brystcancerceller.
37. PARP-inhibitor for anvendelse ifølge et hvilket som helst av kravene 27-36, der cancercellene som skal behandles er defekte med hensyn på BRCA1- eller BRCA2-ekspresjon.
NO20060906A 2003-07-25 2006-02-24 Anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR) og en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR). NO338398B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0317466.1A GB0317466D0 (en) 2003-07-25 2003-07-25 Use
PCT/GB2004/003235 WO2005012524A1 (en) 2003-07-25 2004-07-23 Use of rnai inhibiting parp activtiy for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20060906L NO20060906L (no) 2006-04-25
NO338398B1 true NO338398B1 (no) 2016-08-15

Family

ID=27772701

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20060906A NO338398B1 (no) 2003-07-25 2006-02-24 Anvendelse av en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for fremstilling av et medikament for behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR) og en poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-inhibitor for anvendelse ved behandling av cancerceller som er defekte med hensyn på homolog rekombinasjon (HR).

Country Status (19)

Country Link
US (5) US8859562B2 (no)
EP (1) EP1649017B2 (no)
JP (3) JP5519097B2 (no)
KR (1) KR101136702B1 (no)
CN (3) CN1856572B (no)
AT (1) ATE516353T1 (no)
AU (1) AU2004261779B2 (no)
BR (1) BRPI0412909B1 (no)
CA (1) CA2533423C (no)
DK (1) DK1649017T4 (no)
ES (1) ES2367433T5 (no)
GB (2) GB0317466D0 (no)
HK (2) HK1094006A1 (no)
NO (1) NO338398B1 (no)
NZ (1) NZ545307A (no)
PL (1) PL1649017T5 (no)
PT (1) PT1649017E (no)
WO (1) WO2005012524A1 (no)
ZA (1) ZA200601386B (no)

Families Citing this family (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6956035B2 (en) 2001-08-31 2005-10-18 Inotek Pharmaceuticals Corporation Isoquinoline derivatives and methods of use thereof
BRPI0407757A (pt) 2003-02-28 2006-02-14 Inotek Pharmaceuticals Corp derivados de benzamida tetracìclica e métodos de uso dos mesmos
DK1660095T3 (da) 2003-07-25 2010-05-25 Cancer Rec Tech Ltd Tricykliske PARP-inhibitorer
GB0317466D0 (en) * 2003-07-25 2003-08-27 Univ Sheffield Use
NZ547984A (en) * 2003-12-01 2009-03-31 Kudos Pharm Ltd DNA damage repair inhibitors for treatment of cancer
CA2594234A1 (en) * 2005-01-07 2006-07-27 Arqule, Inc. Compositions for modulation of parp and methods for screening for same
WO2006078711A2 (en) 2005-01-19 2006-07-27 Mgi Gp, Inc. Diazabenzo[de]anthracen-3-one compounds and methods for inhibiting parp
CA2598647A1 (en) 2005-02-25 2006-09-08 Inotek Pharmaceuticals Corporation Tetracyclic amino and carboxamido compounds and methods of use thereof
BRPI0615096A2 (pt) 2005-08-24 2009-07-14 Inotek Pharmaceuticals Corp análogos de indenoisoquinolinona e métodos de uso dos mesmos
ES2361566T3 (es) * 2005-11-25 2011-06-20 Pharma Mar S.A., Sociedad Unipersonal Uso de inhibidores de parp-1.
WO2008066624A2 (en) * 2006-10-20 2008-06-05 Dana-Farber Cancer Institute Dna damage repair inhibitors and methods for treating cancer
AU2007340129B2 (en) * 2006-12-26 2012-02-02 Pharmacyclics Llc Method of using histone deacetylase inhibitors and monitoring biomarkers in combination therapy
MX2009009183A (es) 2007-02-28 2009-09-07 Inotek Pharmaceuticals Corp Analogos de indenoisoquinolinona y metodos de utilizacion de los mismos.
GB0707556D0 (en) * 2007-04-19 2007-05-30 Isis Innovation Treatment for cancer
JP5335673B2 (ja) 2007-06-20 2013-11-06 学校法人 埼玉医科大学 子宮癌、乳癌、及び膀胱癌の予防乃至治療に好適な二本鎖核酸分子、癌細胞増殖抑制剤、並びに医薬
WO2009027650A1 (en) * 2007-08-24 2009-03-05 The Institute Of Cancer: Royal Cancer Hospital Materials and methods for exploiting synthetic lethality in brca-associated cancers
KR101596526B1 (ko) 2007-10-03 2016-02-22 에이자이 아이엔씨. Ｐａｒｐ 억제제 화합물, 조성물 및 사용 방법
WO2009113579A1 (ja) 2008-03-11 2009-09-17 学校法人埼玉医科大学 癌の予防乃至治療に好適な二本鎖核酸分子、癌細胞増殖抑制剤、並びに医薬
US8501431B2 (en) * 2008-10-24 2013-08-06 Magnachem International Laboratories, Inc. Method for screening for compounds selectively interacting with RAD9
WO2010151664A2 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for treating cancer and modulating stress granule formation
US8268550B2 (en) * 2009-06-26 2012-09-18 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for identification of PARP function, inhibitors, and activators
US8435961B2 (en) * 2009-06-26 2013-05-07 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for increasing the activity of inhibitory RNA
WO2011058367A2 (en) 2009-11-13 2011-05-19 Astrazeneca Ab Diagnostic test for predicting responsiveness to treatment with poly(adp-ribose) polymerase (parp) inhibitor
AU2011293635B2 (en) 2010-08-24 2015-11-26 Children's Medical Center Corporation Methods for predicting anti-cancer response
US20140315973A1 (en) * 2010-10-07 2014-10-23 Agency For Science, Technology And Research Parp-1 inhibitors
EP2734199B1 (en) 2011-07-22 2022-11-16 Pacylex Pharmaceuticals Inc. Synthetic lethality and the treatment of cancer
WO2013130347A1 (en) 2012-02-23 2013-09-06 The Children's Hospital Corporation Methods for predicting anti-cancer response
IN2015MN00002A (no) 2012-07-09 2015-10-16 Lupin Ltd
EP2986709A4 (en) * 2013-04-16 2017-03-15 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Activating an alternative pathway for homology-directed repair to stimulate targeted gene correction and genome engineering
CN105793437B (zh) * 2013-09-23 2020-12-15 芝加哥大学 关于dna损伤制剂用于癌症治疗的方法和组合物
USRE48856E1 (en) 2014-02-07 2021-12-21 Vib Vzw Inhibition of NEAT1 for treatment of solid tumors
US9889141B2 (en) 2014-10-14 2018-02-13 Institute For Cancer Research Combined inhibition of the vitamin D receptor and poly(ADP) ribose polymerase (PARP) in the treatment of cancer
MA41867A (fr) 2015-04-01 2018-02-06 Anaptysbio Inc Anticorps dirigés contre l'immunoglobuline de cellule t et protéine 3 de mucine (tim-3)
DK3325662T3 (da) 2015-07-17 2023-11-27 Pacylex Pharmaceuticals Inc Epigenetisk inaktivering af nmt2
AU2016332352A1 (en) 2015-10-02 2018-04-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Small molecules blocking histone reader domains
EP3420080B1 (en) 2016-02-22 2019-08-21 Caribou Biosciences, Inc. Methods for modulating dna repair outcomes
CN110062885A (zh) * 2016-11-01 2019-07-26 安奈普泰斯生物有限公司 针对t细胞免疫球蛋白和粘蛋白3（tim-3）的抗体
AU2018205401A1 (en) 2017-01-09 2019-07-25 Tesaro, Inc. Methods of treating cancer with anti-TIM-3 antibodies
CN107058233A (zh) * 2017-05-03 2017-08-18 上海长海医院 一种减小肿瘤细胞对抗肿瘤药物的耐药性的方法
CN108048465A (zh) * 2017-12-20 2018-05-18 李风玲 一种抑制PARP基因用于治疗乳腺癌的siRNA
WO2019133864A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 Accutar Biotechnology DUAL INHIBITORS OF PARP1 and CDK
CR20200334A (es) 2018-01-05 2021-03-09 Cybrexa 1 Inc Compuestos, composiciones y métodos para tratar enfermedades que involucren tejidos con enfermedades ácidas o hipóxicas
CA3133005A1 (en) * 2019-03-25 2020-10-01 Cyteir Therapeutics, Inc. Combinations of rad51 and parp inhibitors
MX2022000449A (es) 2019-07-10 2022-04-25 Cybrexa 2 Inc Conjugados peptídicos de citotoxinas como terapéuticos.
JP2022541747A (ja) 2019-07-10 2022-09-27 サイブレクサ ３，インコーポレイテッド 治療薬としての微小管標的化剤のペプチドコンジュゲート
JP2023508357A (ja) 2019-12-23 2023-03-02 アキュター バイオテクノロジー インコーポレイテッド エストロゲン受容体分解剤とサイクリン依存性キナーゼ阻害剤との癌治療用組み合わせ
CA3176206A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Debnath Bhuniya Novel compounds useful as poly(adp-ribose) polymerase (parp) inhibitors
WO2022090938A1 (en) 2020-10-31 2022-05-05 Rhizen Pharmaceuticals Ag Phthalazinone derivatives useful as parp inhibitors
CN114836472A (zh) * 2021-02-01 2022-08-02 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 PARP-1shRNA重组慢病毒载体、该载体稳定转染HaCaT的细胞系及其应用
AU2022255809A1 (en) 2021-04-08 2023-10-26 Incozen Therapeutics Pvt. Ltd. Inhibitors of poly(adp-ribose) polymerase
IL308325A (en) 2021-05-18 2024-01-01 Onconic Therapeutics Inc A PARP-resistant cancer therapeutic agent
WO2023089032A1 (en) * 2021-11-19 2023-05-25 Institut Curie Methods for the treatment of hrd cancer and brca-associated cancer
WO2023201338A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Ideaya Biosciences, Inc. Combination therapy comprising a mat2a inhibitor and a parp inhibitor
WO2023233295A1 (en) 2022-06-01 2023-12-07 Ideaya Biosciences, Inc. Thiadiazolyl derivatives as dna polymerase theta inhibitors and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995024379A1 (en) * 1994-03-09 1995-09-14 Newcastle University Ventures Limited Benzamide analogs, useful as parp (adp-ribosyltransferase, adprt) dna repair enzyme inhibitors
WO2002012239A1 (fr) * 2000-08-08 2002-02-14 Sanofi-Synthelabo Derives de benzimidazole, leur preparation et leur application en therapeutique

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5484951A (en) 1990-10-19 1996-01-16 Octamer, Incorporated 5-iodo-6-amino-6-nitroso-1,2-benzopyrones useful as cytostatic and antiviral agents
US5098861A (en) 1991-01-08 1992-03-24 Unitrode Corporation Method of processing a semiconductor substrate including silicide bonding
US5464871A (en) 1993-05-12 1995-11-07 Octamer, Inc. Aromatic nitro and nitroso compounds and their metabolites useful as anti-viral and anti-tumor agents
EP0600831A1 (de) 1992-11-27 1994-06-08 Ciba-Geigy Ag Phthalazinonderivate
WO1999008680A1 (en) * 1997-08-15 1999-02-25 The Johns Hopkins University Method of using selective parp inhibitors to prevent or treat neurotoxicity
CZ302941B6 (cs) * 1999-01-11 2012-01-25 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Tricyklická sloucenina a farmaceutický prostredek s jejím obsahem
US6635677B2 (en) 1999-08-13 2003-10-21 Case Western Reserve University Methoxyamine combinations in the treatment of cancer
ECSP003637A (es) * 1999-08-31 2002-03-25 Agouron Pharma Inhibidores triciclicos de poli (adp-ribosa) polimerasas
DE10022925A1 (de) 2000-05-11 2001-11-15 Basf Ag Substituierte Indole als PARP-Inhibitoren
AU2001295789B2 (en) 2000-10-30 2006-05-11 Kudos Pharmaceuticals Ltd Phthalazinone derivatives
CA2444531A1 (en) 2001-05-08 2002-11-14 Kudos Pharmaceuticals Limited Isoquinolinone derivatives as parp inhibitors
US7072771B2 (en) * 2001-06-07 2006-07-04 University Of Kentucky Research Foundation Selective PARP-1 targeting for designing chemo/radio sensitizing agents
US20030073692A1 (en) 2001-08-07 2003-04-17 Pharmacia & Upjohn S.P.A. Amino-phthalazinone derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
AUPS019702A0 (en) 2002-01-29 2002-02-21 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Condensed heterocyclic compounds
US20030229004A1 (en) 2002-03-20 2003-12-11 Pangene Corporation Modulation of tumor cells using BER inhibitors in combination with a sensitizing agent and DSBR inhibitors
CA2482806A1 (en) 2002-04-30 2003-11-13 Kudos Pharmaceuticals Limited Phthalazinone derivatives
AU2003253906A1 (en) 2002-07-19 2004-02-09 Osteotech, Inc. Chisels and procedure for insertion of spinal implant in a spinal disc space
CA2517629C (en) * 2003-03-12 2011-07-12 Kudos Pharmaceuticals Limited Phthalazinone derivatives
US7176188B2 (en) 2003-05-07 2007-02-13 UniversitéLaval Method of lethally sensitizing human and animal cells
DK1660095T3 (da) * 2003-07-25 2010-05-25 Cancer Rec Tech Ltd Tricykliske PARP-inhibitorer
GB0317466D0 (en) * 2003-07-25 2003-08-27 Univ Sheffield Use
NZ547984A (en) 2003-12-01 2009-03-31 Kudos Pharm Ltd DNA damage repair inhibitors for treatment of cancer

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995024379A1 (en) * 1994-03-09 1995-09-14 Newcastle University Ventures Limited Benzamide analogs, useful as parp (adp-ribosyltransferase, adprt) dna repair enzyme inhibitors
WO2002012239A1 (fr) * 2000-08-08 2002-02-14 Sanofi-Synthelabo Derives de benzimidazole, leur preparation et leur application en therapeutique

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MASSUDA E, ZHANG J: "GPI 6150, A PARP INHIBITOR, DOWN-REGULATES METASTASIS ASSOCIATED S100A4 (MTS1) AND SUPPRESSES INVASION OF BREAST CANCER CELLS IN VITRO", AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH. PROCEEDINGS OF THE ANNUAL MEETING, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 44, no. 02ND ED, 1 July 2003 (2003-07-01), US, pages 867/868, XP001181719, ISSN: 0197-016X *
Weltin D. ET AL. Effect of 6(5H)-phenanthridinone, an inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerase, on cultured tumor cells. Oncol Res. 1994, vol. 6, no. 9, side 399-403. , Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
GB0317466D0 (en) 2003-08-27
KR20060052877A (ko) 2006-05-19
DK1649017T4 (da) 2014-12-01
BRPI0412909B1 (pt) 2022-04-12
EP1649017A1 (en) 2006-04-26
WO2005012524A1 (en) 2005-02-10
NO20060906L (no) 2006-04-25
KR101136702B1 (ko) 2012-04-20
BRPI0412909A (pt) 2006-09-26
US20200237762A1 (en) 2020-07-30
CA2533423C (en) 2014-07-22
US20150005327A1 (en) 2015-01-01
EP1649017B2 (en) 2014-08-27
JP2006528618A (ja) 2006-12-21
US20220062286A1 (en) 2022-03-03
DK1649017T3 (da) 2011-10-17
JP5519097B2 (ja) 2014-06-11
US20180000822A1 (en) 2018-01-04
AU2004261779B2 (en) 2008-07-24
GB0603874D0 (en) 2006-04-05
ES2367433T5 (es) 2014-11-03
GB2419882A (en) 2006-05-10
CN102935230B (zh) 2016-08-10
JP5547164B2 (ja) 2014-07-09
AU2004261779A1 (en) 2005-02-10
ZA200601386B (en) 2007-04-25
CN1856572A (zh) 2006-11-01
US8859562B2 (en) 2014-10-14
NZ545307A (en) 2009-08-28
PL1649017T5 (pl) 2015-02-27
CA2533423A1 (en) 2005-02-10
ES2367433T3 (es) 2011-11-03
HK1182016A1 (zh) 2013-11-22
US20070179160A1 (en) 2007-08-02
JP2014001210A (ja) 2014-01-09
GB2419882B (en) 2008-04-09
CN1856572B (zh) 2013-11-06
PT1649017E (pt) 2011-09-30
HK1094006A1 (en) 2007-03-16
JP5848728B2 (ja) 2016-01-27
PL1649017T3 (pl) 2011-12-30
EP1649017B1 (en) 2011-07-13
CN102935230A (zh) 2013-02-20
CN1856313B (zh) 2011-01-12
CN1856313A (zh) 2006-11-01
JP2012102099A (ja) 2012-05-31
ATE516353T1 (de) 2011-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220062286A1 (en) Use of rnai inhibiting parp activity for the manufacture of a medicament for the treatment of cancer
JP5580280B2 (ja) 治療用化合物
Fathers et al. Inhibition of poly (ADP-ribose) glycohydrolase (PARG) specifically kills BRCA2-deficient tumor cells
Harvey et al. PARP1 is required for preserving telomeric integrity but is dispensable for A-NHEJ
MXPA06000953A (es) Uso de arni que inhibe la actividad de parp para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cancer