NO332926B1 - Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse - Google Patents
Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelseInfo
- Publication number
- NO332926B1 NO332926B1 NO20056055A NO20056055A NO332926B1 NO 332926 B1 NO332926 B1 NO 332926B1 NO 20056055 A NO20056055 A NO 20056055A NO 20056055 A NO20056055 A NO 20056055A NO 332926 B1 NO332926 B1 NO 332926B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- compound
- amino acid
- cys
- peptide
- contrast agent
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 60
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 6
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UQTZMGFTRHFAAM-ZETCQYMHSA-N 3-iodo-L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(I)=C1 UQTZMGFTRHFAAM-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- NMDDZEVVQDPECF-LURJTMIESA-N (2s)-2,7-diaminoheptanoic acid Chemical compound NCCCCC[C@H](N)C(O)=O NMDDZEVVQDPECF-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical group C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N Aspartic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 abstract description 23
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 12
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 9
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 9
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 9
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000001656 angiogenetic effect Effects 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010006195 arginyl-glycyl-aspartyl-cysteine Proteins 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- -1 fluorescein NHS ester Chemical class 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 3
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 3
- SFMMXKLNFMIUCH-UHFFFAOYSA-N 1-azido-2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethane Chemical compound [N-]=[N+]=NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] SFMMXKLNFMIUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNTIRRQEPHPUCI-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethoxy]acetic acid Chemical compound NCCOCCOCCOCCNC(=O)COCC(O)=O GNTIRRQEPHPUCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 101000781681 Protobothrops flavoviridis Disintegrin triflavin Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N n-heptadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O KEMQGTRYUADPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014399 negative regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNVPNXKRAUBJGW-UHFFFAOYSA-N (2-chloroacetyl) 2-chloroacetate Chemical compound ClCC(=O)OC(=O)CCl PNVPNXKRAUBJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- PIYNUZCGMLCXKJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,6-dione Chemical compound O=C1COCC(=O)O1 PIYNUZCGMLCXKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLBBKEHLEPNMMF-SSUNCQRMSA-N 129038-42-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=CC=C1 XLBBKEHLEPNMMF-SSUNCQRMSA-N 0.000 description 1
- FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethanamine Chemical compound NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] FPVCVHVTMPCZTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMGPNMGSGPPDFG-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-(2-azidoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethylamino]-2-oxoethoxy]acetic acid Chemical compound OC(=O)COCC(=O)NCCOCCOCCOCCN=[N+]=[N-] UMGPNMGSGPPDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 5-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C21OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C21 NJYVEMPWNAYQQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006332 Choriocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N L-lanthionine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSC[C@H](N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 239000012359 Methanesulfonyl chloride Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium on carbon Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 201000010208 Seminoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- GTDPSWPPOUPBNX-UHFFFAOYSA-N ac1mqpva Chemical compound CC12C(=O)OC(=O)C1(C)C1(C)C2(C)C(=O)OC1=O GTDPSWPPOUPBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000011122 anti-angiogenic therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 108010045325 cyclic arginine-glycine-aspartic acid peptide Proteins 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- 108010025752 echistatin Proteins 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002390 hyperplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 239000012216 imaging agent Substances 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N meso-lanthionine Natural products OC(=O)C(N)CSCC(N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N methanesulfonyl chloride Chemical compound CS(Cl)(=O)=O QARBMVPHQWIHKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N n-(9,10-dioxoanthracen-1-yl)-4-[4-[[4-[4-[(9,10-dioxoanthracen-1-yl)carbamoyl]phenyl]phenyl]diazenyl]phenyl]benzamide Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2NC(=O)C(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1N=NC(C=C1)=CC=C1C(C=C1)=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC2=C1C(=O)C1=CC=CC=C1C2=O AJDUTMFFZHIJEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000030613 peripheral artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 239000001043 yellow dye Substances 0.000 description 1
- AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N α-cyano-4-hydroxycinnamic acid Chemical compound OC(=O)C(C#N)=CC1=CC=C(O)C=C1 AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70546—Integrin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Oppfinnelsen gjelder nye, peptidbaserte forbindelser og deres bruk i diagnostisk optisk avbilding. Mer spesifikt er oppfinnelsen relatert til bruk av slike peptidbaserte forbindelser som målvektorer som binder seg til reseptorer assosiert med angiogenese. Forbindelsene er merket med fiuorescein og kan brukes som kontrastmidler ved optisk avbilding i diagnostikk av angiogeneserelaterte sykdommer.
Description
Oppfinnelsens område
Denne oppfinnelsen er relatert til nye peptidbaserte forbindelser og bruken av disse i diagnostisk optisk avbilding eller behandling av sykdom. Mer spesifikt er oppfinnelsen relatert til bruk av slike peptidbaserte forbindelser som målvektorer som binder seg til reseptorer assosiert med angiogenese. Forbindelsene kan brukes som kontrastmiddel ved diagnostisering av angiogeneserelaterte sykdommer.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Generelt sett kan nye blodkar dannes ved to ulike mekanismer: vaskulogenese eller angiogenese. Angiogenese er dannelsen av nye blodkar ved forgrening fra eksisterende blodkar. Den primære stimulansen for denne prosessen kan være inadekvat tilførsel av næringsstoffer og oksygen (hypoksi) til cellene i et vev. Cellene kan respondere ved å skille ut angiogenetiske faktorer, som det er mange av. Et eksempel som det ofte henvises til,
er vaskulær epitelvekstfaktor (VEGF). Disse faktorene initierer utskilling av proteolytiske enzymer som bryter ned proteinene i basalmembranen, såvel inhibitorer som begrenser disse potensielt farlige enzymenes virkning.
Den andre fremtredende effekten av angiogenetiske
faktorer er å få endotelceller til å migrere og dele seg. Endotelceller som er festet til basalmembranen, som danner et kontinuerlig dekke rundt blodkar på den kontralumenale siden, gjennomgår ikke mitose. Den kombinerte effekten av tap av adhesjon og signaler fra reseptorene for angiogenetiske faktorer er å få endotelcellene til å bevege seg, formere og omorganisere seg og til å syntetisere en basalmembran rundt de nye blodkarene.
Angiogenese er fremtredende i vekst og remodellering av vev, inkludert sårtilheling og inflammatoriske prosesser. Inhibering av angiogenese anses også å være en lovende strategi for antitumorterapi. Transformasjonene som ledsager angiogenese, er også svært lovende for diagnostikk, et åpenbart eksempel er ondartet sykdom, men konseptet virker også svært lovende ved inflammasjon og en rekke inflammasjonsrelaterte sykdommer, inkludert aterosklerose, siden makrofagene i tidlige aterosklerotiske lesjoner er potensielle kilder for angiogenetiske faktorer. Disse faktorene er også involvert i revaskularisering av infarkt områder i myokardium, som oppstår hvis en stenose frisettes i løpet av kort tid.
Ytterligere eksempler på uønskede forhold som er assosiert med nyvaskularisering eller angiogenese, utvikling eller proliferasjon av nye blodkar, er vist nedenfor. I denne sammenheng henvises det også til WO 98/47541.
Sykdommer og indikasjoner assosiert med angiogenese er f.eks. forskjellige former for kreft og metastaser, f.eks. brystkreft, hudkreft, kolorektal kreft, kreft i pancreas, prostatakreft, lunge- eller ovariekreft.
Andre sykdommer og indikasjoner er inflammasjon (f.eks. kroniske), aterosklerose, rheumatoid artritt og gingivitt.
Ytterligere sykdommer og indikasjoner som er assosiert med angiogenese, er arteriovenøs målformasjon, astrocytomer, choriokarcinomer, glioblastomer, gliomer, hemangiomer (barndom, kapillært), hepatomer, hyperplastisk endometrium, ischemisk myokard, endometriose, Kaposi sarcoma, melanom, neuroblastomer, okkluderende perifer arteriesykdom, osteoartritt, psoriasis, retinopati (diabetisk, proliferativ), sklerodermi, seminomer og ulcerøs kolitt.
Angiogenese involverer reseptorer som er unike for endotelceller og omliggende vev. Disse markørene inkluderer vekstfaktorreseptorer som VEGF og integrinfamilien av reseptorer. Immunhistokjemiske studier har vist at en sort integriner, kanskje viktigst klasse av, uttrykkes på den apikale overflaten av blodårene [Conforti, G., et al. (1992) Blood 80: 37-446] og er tilgjengelig for målretting av sirkulerende ligander [Pasqualini, R., et al. (1997) Nature Biotechnology 15: 542-546]. a5(31 er også et viktig integrin når det gjelder fremming av sammenføyning av fibronektinmatriks og initiering av cellenes adhesjon til fibronektin. Det spiller også en viktig rolle i cellemigreringen.
Integrin av(33 er en av reseptorene som er kjent for å være assosiert med angiogenese. Stimulerte endotelceller synes å være avhengig av denne reseptoren for å overleve i en kritisk periode av angiogeneseprosessen, siden antagonister av av(33-integrinreseptoren/ligandinteraksjon induserer apoptose og hemmer blodkarvekst.
Integriner er heterodimeriske molekyler der a- og subenhetene penetrerer cellemembranens lipidbilag. a-subenheten har fire Ca<2+->bindende domener på dens ekstracellulære kjede, og (3-subenheten har en rekke ekstracellulære cysteinrike domener.
Mange ligander (f.eks. fibronektin) som er involvert i celleadhesjon, inneholder tripeptidsekvensen arginin-glysin-asparginsyre (RGD). RGD-sekvensen synes å virke som et primært gjenkjenningssted mellom ligandene med denne sekvensen og reseptorer på celleoverflaten. Generelt antar man at sekundære interaksjoner mellom liganden og reseptoren øker interaksjonens spesifisitet. Disse sekundære interaksjonene kan finne sted mellom fragmentene av liganden og reseptoren som er i umiddelbar nærhet til RGD-sekvensen eller på steder som ligger fjernt fra RGD-sekvensen.
RGD-peptider er kjent for å binde seg til en rekke integrinreseptorer og har potensial til å regulere en rekke cellulære hendelser av signifikant anvendelse i den kliniske settingen. Kanskje den mest omfattende studerte effekten av RGD-peptider og mimetika av disse relaterer til deres bruk som antitrombotiske stoffer der de målretter blodplateintegrinet GpIIbllla.
Hemming av angiogenese i vev ved administrering av enten en av(33- eller av(35-antagonist er blitt beskrevet i for eksempel WO 97/06791 og WO 95/25543 ved bruk av enten antistoffer eller peptider med RGD. EP 578083 beskriver en rekke monosykliske peptider med RGD.
Sykliske RGD-peptider som inneholder flere broer, er også blitt beskrevet i WO 98/54347 og WO 95/14714.
Ytterligere eksempler på RGD som inneholder peptidbaserte forbindelser, finnes i WO01/77145, WO02/26776 og WO03/006491.
Det er et klinisk behov for å utvikle mer spesifikke, ikke-invasive avbildingsteknikker for
angiogeneserelaterte sykdommer. Slike avbildingsteknikker vil ha en sentral rolle i evalueringen av nye anti-angiogenetiske terapier. Å kunne vurdere det faktiske nivået av angiogenese, vil være av klinisk nytte ved diagnostisering av tidlige faser av angiogeneserelaterte sykdommer. Det er nå overraskende funnet at optisk avbilding kan brukes til å vurdere nivået av angiogenese, og oppfinnelsen frembringer nye kontrastmidler for optisk avbilding for dette formålet.
Oppsummering av oppfinnelsen
I lys av behov innen teknikken frembringer denne oppfinnelsen peptidbaserte, fluorescein-merkede forbindelser til bruk som kontrastmiddel ved optisk avbilding eller terapeutisk behandling. Den effektive målrettingen og avbildingen av integrinreseptorer assosiert med angiogenese in vivo, krever en selektiv, kjemisk robust og stabil RGD-basert vektor med høy affinitet. Videre er ekskresjonsmåten en viktig faktor ved utformingen av kontrastsmidler for å redusere problemer med bakgrunnsstøy. Disse stringente forholdene oppfylles ved de fluorescein-merkede peptidforbindelsene som beskrives ifølge oppfinnelsen.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen.
Sett fra ett aspekt frembringer oppfinnelsen nye peptidbaserte forbindelser som definert i kravene. Disse forbindelsene har affinitet for integrinreseptorer, f.eks. integrin av(33, og er merket med en fluorescein-fargereporter.
Forbindelsene, eller fysiologisk akseptable salter av disse, omfatter en peptidvektor og minst ett fluorescein-fargestoff. Peptidvektoren har affinitet for integrinreseptorer, for eksempel av(33-reseptoren.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen omfatter forbindelser omfattende en peptidvektor og minst ett fluorescein-fargestoff, der forbindelsen er valgt blant en av formlene;
der
Ra representerer -(CH2)n- eller - (CH2)n-C6H4- som danner en bro til hver av X2, X4eller X6, der
n representerer et positivt heltall fra 1 til 10,
Xi representerer en binding eller 1, 2, 3, 4 eller 5 aminosyrerester, der en aminosyrerest valgfritt funksjonaliseres med et spacerfragment, eller nevnte aminosyrerest har en funksjonell sidekjede, slik som en syre- eller amingruppe,
X2, X4og X6representerer aminosyrerester som kan danne et disulfid eller en tioeterbinding,
X3representerer arginin,
G representerer glysin,
D representerer asparginsyre,
X5representerer en hydrofob aminosyre,
X7representerer et spacerfragment eller en biomodifisererdel, eller er fraværende,
Wi er et spacerfragment eller er fraværende,
h er et positivt heltall 1 eller 2,
og der minst en av Z-gruppene foreligger, og representerer et fluorescein-fargestoff;
eller et fysiologisk akseptabelt salt av denne.
Bevegelsesmuligheten til forbindelsen ifølge oppfinnelsen kan begrenses ved dannelse av en eller flere "ringbroer"
(cyclising bridges) i peptidvektordelen. En peptidbasert forbindelse som inneholder en ringbro er mer spesifikk mot av(33, og er mer å foretrekke, enn et lineært peptid. Forbindelsene i oppfinnelsen omfatter to ringbroer mellom forskjellige aminosyrer i forbindelsene. Betegnelsen "ringbroer" henviser til en kombinasjon av aminosyrer, eller aminosyrer og -(CH2)n- eller - (CH2) n-C6H4—grupper med funksjonelle grupper som muliggjør innføringen av en bro. n representerer et positivt heltall fra 1 til 10. Noen foretrukne eksempler er disulfider, disulfidmimetika som -(CH2)4- karbrabroen, tioacetal-, tioeterbroen (cystation eller lantionin) og broer som inneholder estere og etere.
Avhengig av plasseringen til ringbroer, vil forbindelsene omfatte "discrete", "nested" eller "interlocking" konfigurasjoner. De to broene i hver forbindelse er: Mellom Ra og X6, og mellom X2og X4(som danner en nested konfigurasjon);
Mellom Ra og X2, og X4og X6(discrete konfigurasjon) ; Mellom Ra og X4, og X2og X6(som danner en interlocking konfigurasjon).
Et foretrukket aspekt ifølge oppfinnelsen angår forbindelsene i formel III eller de fysiologisk akseptable saltene av disse der:
Ra representerer-(CH2) - .
Videre representerer Xi en aminosyrerest med en funksjonell sidekjede slik som en syre- eller amingruppe, der aminosyren fortrinnsvis velges blant aspargin- eller glutaminsyre, lysin, homolysin, diaminoalkylsyre eller derivater av disse, helst asparginsyre eller lysin.
X2, X4og X6representerer fortrinnsvis og uavhengig en cystein- eller homocysteinrest.
X5representerer fortrinnsvis tyrosin, fenylalanin, 3-iodo-tyrosin eller naftylalanin, helst fenylalanin eller 3-iodo-tyrosin.
X7omfatter fortrinnsvis 1-10 enheter av en monodispers PEG-byggesten eller er fraværende, og Wi er helst fraværende.
Z representerer et fluorescein-fargestoff eller er fraværende, slik at forbindelsen omfatter minst ett fluorescein-fargestoff.
Forbindelse ifølge formel III-V omfatter minst to broer, der en bro danner en disulfidbinding og den andre broen omfatter en tioeterbinding (sulfidbinding). De foretrukne forbindelsene ifølge formel III har broer plassert på en slik måte at broene folder peptidfragmentet i en "nested" konfigurasjon. Forbindelsene ifølge denne utførelsesform ifølge oppfinnelsen har dermed maksimalt én disulfidbro per molekylfragment. Forbindelsene definert ifølge oppfinnelsen er overraskende stabile in vivo og under de betingelser som gjelder ved merking med fluorescein.
Z-reporteren omfatter et fluorescein-fargestoff, dvs. fluorescein eller derivater av fluorescein. Fluorescein er et gult fargestoff som gløder i synlig lys. Fluorescein eksiteres vanligvis av 488 nm-linjen fra en argonlaser, og emisjonen registreres ved 530 nm. Fluorescein og dets derivater har forholdsvis høy absorpsjonsevne, ypperlig fluorescensytelse og god løselighet i vann. Tidligere omfattende bruk gjør at de er svært godtkarakterisert, er svært lett tilgjengelige og generelt koster lite per mg.
Formel (VI) angir fluorescein, og viser nummerering av de forskjellige posisjonene.
Relevante derivater av fluorescein er f.eks. karboksy-fluoresceiner, f.eks. 5-karboksyfluorescein, vist i formel VII, eller 6-karboksyfluorescein.
Et annet relevant fluorescein-derivat er fluorescein-isotiocyanatet vist i formel VIII:
Det er enda mer foretrukket å bruke et aktivert karboksylat av fluorescein, f.eks. en N-hydroksy-suksinimid-ester (NHS), kalt fluorescein NHS ester, vist i formel IX. Suksinimidylestere er ypperlige reagenser da de dannede amideproduktene er svært stabile.
Fluorescein-fargestoffet, representert med Z, kan kobles til X7, eller eventuelt via spaceren Wi, som vist i formlene III-V. Fluorescein kobles fortrinnsvis til peptidvektoren ved dannelse av amidbinding med en egnet aminogruppe i peptidet. Aktive estere av fluorescein som f.eks. NHS-ester (Pierce Catalog 46100) anses som spesielt nyttige ved syntetisering av forbindelsene. Foretrukne koblingssteder for fluoresceinet er posisjon 5 og 6.
Aminosyrene kan fortrinnsvis representere en naturlig forekommende aminosyre. I de fleste tilfeller foretrekkes det at alle aminosyrene i peptidet er i L-form. Men i visse utførelsesformer ifølge oppfinnelsen er en, to, tre eller flere av aminosyrene i peptidet fortrinnsvis i D-form. Inkluderingen av slike aminosyrer i D-form kan ha signifikant virkning på forbindelsens serumstabilitet.
Enkelte forbindelser ifølge oppfinnelsen er RGD-baserte vektorer med høy affinitet. Betegnelsen "RGD-basert vektor med høy affinitet" angir forbindelser som har en Ki < 10 nM og helst < 5 nM, i en kompetitiv bindingsanalyse for av(33-integrin og der Ki-verdien ble bestemt gjennom konkurransen med den kjente liganden echistatin med høy affinitet. Metodene for utførelse av slike kompetitive analyser er velkjent innen faget.
Noen foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen er illustrert nedenfor. Forbindelsene A og B omfatter fluorescein konjugert til et peptid som inneholder et RGD-inneholdende peptid (Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys) ved dannelse av amidbinding - begge gir en "nested" konfigurasj on.
Forbindelse A:
Andre eksempler på forbindelser ifølge oppfinnelsen er illustrert av forbindelsene C og D nedenfor.
Forbindelse C:
Forbindelsen omfatter et RGD-peptid (Lys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly) knyttet til fluorescein, som danner en "discrete" konfigurasjon.
Forbindelse D:
Forbindelsen omfatter et RGD-peptid (Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys) knyttet til fluorescein, som danner en "interlocking" konfigurasjon.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsens kan anvendes som kontrastmidler ved optisk avbilding eller ved behandling av sykdommer. Bruk av de beskrevne forbindelsene som kontrastmidler ved optisk avbilding utgjør en utførelsesform ifølge oppfinnelsen. En foretrukken utførelsesform ifølge oppfinnelsen er at de beskrevne forbindelsene brukes som kontrastmiddel i optisk avbilding, særlig ved diagnostisering av angiogeneserelaterte sykdommer.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er nyttige som avbildingsmidler for detektering av angiogenese i dyr og mennesker. Disse produktene kan også være nyttige i prekliniske dyremodeller og muliggjøre overvåking av nye legemidlers terapeutiske effektivitet innen farmasøytisk forskning, f.eks. i onkologi.
Foreliggende oppfinnelse angår således også en farmasøytisk sammensetning som omfatter en effektiv mengde av en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et salt av denne, sammen med ett eller flere hjelpestoffer, bindemidler eller fortynningsmidler.
Foreliggende oppfinnelse angår også anvendelse av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et kontrastmiddel for optisk avbilding, til bruk i en diagnostikkmetode som innebærer administrering av nevnte kontrastmiddel til en menneske- eller dyrekropp og generering av et bilde av minst en del av nevnte kropp.
Det anses dermed at oppfinnelsen også omfatter bruk av forbindelsene til fremstilling av terapeutiske sammensetninger (legemidler) for terapeutisk eller profylaktisk behandling av mennesker eller dyr, fortrinnsvis for angiogeneserelaterte sykdommer.
Foreliggende oppfinnelse angår også i en fremgangsmåte for å generere bilder av en menneske- eller dyrekropp ved optisk avbilding som innebærer administrering av et kontrastmiddel til nevnte kropp og generering av et bilde av minst en del av nevnte kropp til hvilken nevnte kontrastmiddel er blitt distribuert kjennetegnet ved at nevnte kontrastmiddel omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også benyttes i en metode for å overvåke virkningen av en behandling av en menneske- eller dyrekropp med et legemiddel som skal bekjempe en angiogeneserelatert tilstand - nevnte metode omfatter administrering i nevnte kropp av en forbindelse ifølge oppfinnelsen og detektering av opptaket av nevnte forbindlese ved cellereseptorer, fortrinnsvis endoteliale cellereseptorer, og særlig av(33-reseptorer. Nevnte administrering og detektering kan eventuelt, og foretrukket, utføres flere ganger, f.eks. før, under og etter behandlingen med nevnte legemiddel. Nevnte detektering omfatter en teknikk med optisk avbilding.
Da fluorescein samt fluorescein-peptidforbindelsen ifølge oppfinnelsen emitterer i spektrets visuelle område, kan konvensjonelt oftalmoskopisk utstyr brukes til å fremskaffe bildene. Videre kan in-vivo confocal mikroskopi benyttes. Nylig utviklede avbildingsteknikker basert på tids- og frekvensområde og som utnytter flere av fluoroforens egenskaper, som f.eks. levetid, kan også benyttes.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan syntetiseres etter alle kjente metoder for kjemisk syntese, men særlig nyttig er fast fase-metodologien til Merrifield, som benytter en automatisert peptidsyntetisator (J. Am. Chem. Soc, 85: 2149 (1964)). Kobling av fluorescein, f.eks. en fluorescein-aktiv ester, kan også utføres automatisk - dette gir en amidbinding mellom peptidvektoren og fluorescein-gruppen. Peptidvektoren og peptidforbindelsen kan renses ved hjelp av høytrykksvæskekromatografi (HPLC), og karakteriseres ved massespektrometri og analytisk HPLC før testing in vitro.
Foreliggende oppfinnelse blir nå videre illustrert ved hjelp av de følgende eksempler.
Eksempler
Eksempel 1:
Syntese av disulfid [ Cys2" 6] tioeter cyclo[ CH2CO-Lys( fluorescein)- Cys2- Arg- Gly- Asp- Cys6- Phe- Cys]- PEG- NH2 1 a) Syntese av 17-( Fmoc- amino)- 5- okso- 6- aza- 3, 9, 12, 15-tetra- oksa- hepta- deka- nosyre
Denne byggeblokken er koblet til fast fase med Fmoc-kjemi. Den koblede formen av denne byggeblokken vil bli henvist til med kortbetegnelsen PEG.
1, ll- Diazido- 3, 6, 9- trioksa- undekan
En løsning av tørt tetraetylenglykol (19,4 g, 0,100 mol) og metansulfonylklorid (25,2 g, 0,220 mol) i tørr THF (100 ml) ble holdt under argon og nedkjølt til 0 °C i et is/vannbad. Til kolben ble det tilsatt en løsning av trietylamin (22,6 g, 0,220 mol) i tørr THF (25 ml) ved dråpevis tilsetning i 45 min. Etter 1 time ble kjølebadet fjernet, og omrøringen ble fortsatt i 4 timer. Vann (60 ml) ble tilsatt. Til blandingen ble det tilsatt natrium-hydrogenkarbonat (6 g, til pH 8) og natriumazid (14,3 g, 0,220 mmol), i denne rekkefølgen. THF ble fjernet ved destillering, og den vannholdige løsningen ble refluksert i 24 timer (to lag dannet). Blandingen ble nedkjølt, og eter (100 ml) ble tilsatt. Denne vannholdige fasen ble mettet med natriumklorid. Fasene ble skilt, og den vannholdige fasen ble ekstrahert med eter (4 x 50 ml). Kombinerte organiske faser ble vasket med saltvann (2 x 50 ml) og tørket (MgS04) . Filtrering og konsentrering ga 22,1 g (91%) gul olje. Produktet ble brukt i neste skritt uten videre rensing.
ll- Azido- 3, 6, 9- tri- oksa- undekanamin
En løsning av trifenylfosfin (19,9 g, 0,073 mol) ble tilsatt til en mekanisk, kraftig omrørt suspensjon av 1, ll-diazido-3,6,9-trioksa-undekan (20,8 g, 0,085 mol) i 5 % hydroklorsyre (200 ml), i 3 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 24 timer til. Fasene ble skilt, og den vannholdige fasen ble ekstrahert med diklorometan (3 x 40 ml). Den vannholdige fasen ble kjølt i et is/vannbad, og pH-verdien ble justert til ca. 12 ved tilsetning av KOH. Produktet ble ekstrahert til diklorometan (5 x 50 ml). Kombinerte organiske faser ble tørket (MgS04) . Filtrering og fordamping ga 14,0 g (88 %) gul olje. Analyse ved MALDI-TOF massespektroskopi (matriks: a-cyano-4-hydroksy-kanelsyre) ga en M+H topp på 219 som forventet. Videre karakterisering utført med NMR-spektroskopi med<1>R (500 MHz) og<13>C (125 MHz) bekreftet strukturen.
17- Azido- 5- okso- 6- aza- 3, 9, 12, 15- tetra- oksa- hepta- deka-nosyre
Diglykolisk anhydrid (6,38 g, 55,0 mmol) ble tilsatt til en løsning av ll-azido-3,6,9-tri-oksa-undekanamin (10,9 g, 50,0 mmol) i diklorometan (100 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt til neste dag. HPLC-analyse (kolonne: Vydac 218TP54; oppløsningsmidler: A = vann/0,1 % TFA og B = acetonitril/0,1 % TFA; gradient 4-16 % B i 20 min.; hastighet: 1,0 ml/min.; UV-detektering ved 214 og 284 nm), viste komplett omforming av startmaterialet til et produkt med en retensjonstid på 18,3 min. Løsningen ble konsentrert for å gi kvantitativt resultat i form av gul sirup. Produktet ble analysert ved LC-MS (ES-ionisering), som ga [MH]+ ved 335 som forventet. NMR-spektroskopi med<1>H (500 MHz) og13C (125 MHz) stemte overens med strukturen.
Produktet ble brukt i neste skritt uten videre rensing.
17- Amino- 5- okso- 6- aza- 3, 9, 12, 15- tetra- oksa- hepta- deka-nosyre
En løsning av 17-azido-5-okso-6-aza-3,9,12,15-tetra-oksa-hepta-deka-nosyre (8,36 g, 25,0 mmol) i vann (100 ml) ble redusert med H2(g)-Pd/C (10 %). Reaksjonen ble kjørt til LC-MS-analysen viste komplett omforming av startmaterialet (kolonne: Vydac 218TP54; oppløsningsmidler: A = vann/0,1 % TFA og B = acetonitril/0,1 % TFA; gradient 4-16 % B i 20 min.; hastighet: 1,0 ml/min.; UV-detektering ved 214 og 284 nm, ES-ionisering som gir M+H ved 335 for startmaterialet og 309 for produktet). Løsningen ble filtrert og brukt direkte i neste skritt.
17-( Fmoc- amino)- 5- okso- 6- aza- 3, 9, 12, 15- tetra- oksa- hepta-deka- nosyre
Natriumbikarbonat (5,04 g, 60,0 mmol) og dioksan (40 ml) ble tilsatt til den vannholdige løsningen av 17-amino-5-okso-6-aza-3,9,12,15-tetra-oksa-hepta-deka-nosyre ovenfor (tilsvarende 25,0 mmol aminosyre). En løsning av Fmoc-klorid (7,11 g, 0,275 mol) i dioksan (40 ml) ble tilsatt dråpevis. Reaksjonsblandingen ble omrørt til neste dag. Dioksan ble avdampet (rotavapor), og den vannholdige fasen ble ekstrahert med etylacetat. Den vannholdige fasen ble forsyret ved tilsetning av hydroklorsyre og presipitert materiale ble ekstrahert til kloroform. Den organiske fasen ble tørket (MgS04) , filtrert og konsentrert for å gi 11,3 g (85 %) i form av en gul sirup. Strukturen ble bekreftet av LC-MS-analyse (kolonne: Vydac 218TP54; oppløsningsmidler: A = vann/0,1
% TFA og B = acetonitril/O,1 % TFA; gradient 40-60% B i 20 min.; hastighet: 1,0 ml/min.; UV-detektering ved 214 og 254 nm, ES-ionisering med M+H ved 531 som forventet for produkttoppen på 5,8 minutter). Denne analysen viste svært lavt innhold av biprodukter, og materialet ble brukt uten videre rensing.
1 b) Syntese av C1CH2C0- Lys- Cys( tBu)- Arg- Gly- Asp- Cys( tBu)-Phe- Cys- PEG- NH2
PEG-enheten ble koblet manuelt til Rink Amide AM-harpiks, med start på en 0,25 mmol-skala, utløst ved HATU-aktivering. Det gjenværende peptidet ble samlet på en automatisk peptidsyntetisator av typen ABI 433A, med 1 mmol-aminosyrepatroner. Aminosyrene ble forhåndsaktivert med HBTU før kobling. N-terminal-amingruppene ble klor-acetylert med en løsning av kloreddikanhydrid i DMF i 30 min. Fjerningen av peptidet samtidig med de sidekjedebeskyttende gruppene (unntatt tBu) fra harpiksen ble utført i TFA, som inneholder TIS (5 %), H20 (5 %) og fenol (2,5 %), i to timer. Etter bearbeiding ble det oppnådd 322 mg råpeptid (analytisk HPLC: gradient: 5-50 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 6,37 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri: forventet M+H ved 1409, funnet ved 1415).
1 c) Syntese av tioeter cyclo [ CH2CO- Lys- Cys( tBu)- Arg- Gly-Asp- Cys( tBu)- Phe- Cys]- PEG- NH2
322 mg C1CH2C0-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-(PEG)n-NH2ble oppløst i vann/acetonitril. Blandingen ble justert til pH 8 med ammoniakkoppløsning og omrørt i 16 timer. Etter bearbeiding ble det oppnådd et råpeptid (analytisk HPLC: gradient: 5-50 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 6,22 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri: forventet M+H ved 1373, funnet ved 1378). 1 d) Syntese av disulfid [ Cys2 6] tioeter cyclo [ CH2CO- Lys-Cys2- Arg- Gly- Asp- Cys6- Phe- Cys]- PEG- NH2 Tioeter cyclo [CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-(PEG)n-NH2ble behandlet med en løsning av anisol (200 uL), DMSO (2 mL) og TFA (100 mL) i 60 min. - deretter ble TFA fjernet in vacuo og peptidet presipitert ved tilsetning av dietyleter. 70 mg råmateriale ble renset ved forberedende HPLC (kolonne: Phenomenex Luna 5 u C18 (2) 250 x 21,20 mm) med 0-30 % B, der A = H2O/0m,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA, i 40 min. ved en hastighet på 10 mL/min. Etter lyofilisering ble det oppnådd 46 mg rent materiale (analytisk HPLC: gradient: 0-30 % B over 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 6,80 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri: forventet M+H ved 1258,5, funnet ved 1258,8). 1 e) Syntese av disulfid [ Cys2" 6] tioeter cyclo [ CH2CO-Lys( fluorescein)- Cys2- Arg- Gly- Asp- Cys6- Phe- Cys]- PEG- NH2 30 mg [Cys<2-6>] cyclo[CH2CO-Lys-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-PEG-NH2, 16,2 mg fluorescein NHS ester og 4 uL N-metylmorfolin ble oppløst i DMF (3 mL). Blandingen ble beskyttet mot lys og omrørt over natten. Reaksjonsblandingen ble renset ved forberedende HPLC (kolonne: Vydac 218TP1022 C18) med 20-30 % B, der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA, i 40 min. ved en hastighet på 10 mL/min. Etter lyofilisering ble det oppnådd 21,6 mg rent materiale (analytisk HPLC: gradient: 10-40 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm;
hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm;
produktretensjonstid: 7,0 min.). Videre
produktkarakterisering ble utført med massespektrometri:
forventet M+H ved 1616,5, funnet ved 1616,3).
Eksempel 2:
Syntese av disulfid [ Cys 2" 6] tioeter cyclo [ CH2CO- Asp- Cys2-Arg- Gly- Asp- Cys- Phe- Cys- Gly]- Bis( aminoetyl) etylen glykol-fluorescein 2a. Syntese av C1CH2C0NH- Asp- Cys( tBu)- Arg- Gly- Asp-Cys ( tBu) - Phe- Cys- Gly- NH- ( CH2CH20) 2CH2CH2NH2
Peptidet ble syntetisert på en automatisk peptidsyntetisator av typen ABI 433A, som startet med 0-Bis-(aminoetyl)etylenglykoltrityl-harpiks på en skala på 0,25 mmol med 1 mmol aminopatroner. Aminosyrene ble forhåndsaktivert med HBTU før kobling. N-terminalen ble klor-acetylert med kloreddikanhydrid. Peptidet og de sidekjedebeskyttende gruppene (unntatt tBu) ble fjernet samtidig fra harpiksen i TFA med TIS (5 %), H20 (5 %) og fenol (2,5 %) i to timer. Etter bearbeiding ble det oppnådd 364 mg råpeptid (analytisk HPLC: gradient: 5-50 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 6,55 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri via elektrospray: forventet M+H ved 1293,5, funnet ved 1293,4). 2b. Syntese av cyclo [ CH2CONH- Asp- Cys ( tBu)- Arg- Gly- Asp-Cys ( tBu) - Phe- Cys ] - Gly- NH- ( CH2CH2Q)2CH2CH2NH2
250 mg C1CH2C0NH-Asp-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-NH-(CH2CH20)2CH2CH2NH2ble oppløst i vann/acetonitril. Blandingen ble justert til pH 8 med ammoniakkoppløsning og omrørt i 18 timer.
Etter lyofilisering ble råpeptidet oppnådd i form av et hvitt pulver. (Analytisk HPLC: gradient: 5-50 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 6,17 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri via elektrospray: forventet M+H ved 1257,5, funnet ved 1257, 6) .
2c. Syntese av [ Cys2" 6] cyclo [ CH2CONH- Asp- Cys- Arg- Gly- Asp-Cys- Phe- Cys] - Gly- NH- ( CH2CH2Q)2CH2CH2NH2
Cyclo [CH2CONH-Asp-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH20)2CH2CH2NH2ble oppløst i en løsning av anisol (500 ul), DMSO (4 ml) og TFA (200 ml). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 15 min. Deretter ble TFA'et fjernet in vacuo, og peptidet ble presipitert ved tilsetning av dietyleter.
Råmaterialet ble renset ved forberedende HPLC (kolonne: Phenomenex Luna 5u. C18 (2) 250 x 21,20 mm) ved 0-30 % B, der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA, i løpet av
40 min. ved en hastighet på 10 mL/min. Etter lyofilisering ble det oppnådd 44 mg rent materiale. (Analytisk HPLC: gradient: 0-30 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 5,88 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri via elektrospray: forventet M+H ved 1143,4, funnet ved 1143,5).
2d. Konjugering av [ Cys2" 6] cyclo [ CH2CONH- Asp- Cys- Arg- Gly-Asp- Cys- Phe- Cys] - Gly- NH- ( CH2CH20) 2CH2CH2NH2 med fluorescein 10 mg [Cys<26>] cyclo [CH2CONH-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-NH-(CH2CH2O)2CH2CH2NH2, 4,7 mg fluorescein NHS ester og 5 uL 4-metylmorfolin ble oppløst i DMF (0,5 mL), og oppløsningen ble omrørt i 3 timer.
Råmaterialet ble renset ved forberedende HPLC (kolonne: Phenomenex Luna 5 u C18 (2) 250 x 21,20 mm) ved 0-30 % B, der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA, i løpet av 40 min. ved en hastighet på 10 mL/min. Etter lyofilisering ble det oppnådd 6 mg rent materiale.
(Analytisk HPLC: gradiens: 0-30 % B i 10 min. der A = H2O/0,l % TFA og B = CH3CN/0,1 % TFA; kolonne: Phenomenex Luna 3 u C18 (2) 50 x 4,6 mm; hastighet: 2 mL/min.; detektering: UV 214 nm; produktretensjonstid: 10,07 min.). Videre produktkarakterisering ble utført med massespektrometri via elektrospray: forventet M+H ved 1501,4, funnet ved 1501,4).
Claims (10)
1. En forbindelse som omfatter en peptidvektor og minst ett fluorescein-fargestoff, der forbindelsen er valgt blant en av formlene;
der
Ra representerer -(CH2)n- eller - (CH2)n-C6H4- som danner en bro til hver av X2, X4eller X6, der
n representerer et positivt heltall fra 1 til 10, Xi representerer en binding eller 1, 2, 3, 4 eller 5 aminosyrerester, der en aminosyrerest valgfritt funksjonaliseres med et spacerfragment, eller nevnte aminosyrerest har en funksjonell sidekjede, slik som en syre- eller amingruppe,
X2, X4og X6representerer aminosyrerester som kan danne et disulfid eller en tioeterbinding,
X3representerer arginin,
G representerer glysin,
D representerer asparginsyre,
X5representerer en hydrofob aminosyre,
X7representerer et spacerfragment eller en biomodifisererdel, eller er fraværende,
Wi er et spacerfragment eller er fraværende,
h er et positivt heltall 1 eller 2,
og der minst en av Z-gruppene foreligger, og representerer et fluorescein-fargestoff;
eller et fysiologisk akseptabelt salt av denne.
2. En forbindelse med formel III angitt i krav 1, der Ra representerer -(CH2)-.
3. En forbindelse med formel III angitt i et hvilket som helst av kravene 1 eller 2, der Xi representerer en aminosyrerest med en funksjonell sidekjede slik som en syre- eller amingruppe, der aminosyren velges blant aspargin- eller glutaminsyre, lysin, homolysin, diaminoalkylsyre eller derivater av disse.
4. En forbindelse med formel III angitt i et hvilket som helst av kravene 1-3, der X2, X4og X6uavhengig representerer en cystein- eller homocysteinrest.
5. En forbindelse med formel III angitt i et hvilket som helst av kravene 1-4, der X5representerer fenylalanin, tyrosin, 3-iodo-tyrosin eller naftylalanin.
6. En forbindelse med formel III angitt i et hvilket som helst av kravene 1 til 5, der X7omfatter 1-10 enheter av en monodispers PEG-byggesten, eller er fraværende.
7. En farmasøytisk sammensetning omfattende en effektiv mengde av en forbindelse ifølge et hvilket som helst av de tidligere kravene, sammen med ett eller flere farmasøytisk akseptable hjelpestoffer, bindemidler eller fortynningsmidler.
8. En forbindelse angitt i et hvilket som helst av kravene 1-6 for bruk som kontrastmiddel for optisk avbilding.
9. Anvendelse av en forbindelse angitt i et hvilket som helst av kravene 1-6 for fremstillingen av et kontrastmiddel for optisk avbilding, til bruk i en diagnostikkmetode som innebærer administrering av nevnte kontrastmiddel til en menneske- eller dyrekropp og generering av et bilde av minst en del av nevnte kropp.
10. Fremgangsmåte for å generere bilder av en menneske-eller dyrekropp ved optisk avbilding som innebærer administrering av et kontrastmiddel til nevnte kropp og generering av et bilde av minst en del av nevnte kropp til hvilken nevnte kontrastmiddel er blitt distribuert,karakterisert vedat nevnte kontrastmiddel omfatter en forbindelse angitt i et hvilket som helst av kravene 1-6.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO20056055A NO332926B1 (no) | 2003-07-08 | 2005-12-19 | Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO20033115A NO20033115D0 (no) | 2003-07-08 | 2003-07-08 | Peptid-baserte forbindelser |
| PCT/NO2004/000208 WO2005003166A1 (en) | 2003-07-08 | 2004-07-07 | Fluorescein-labelled peptides |
| NO20056055A NO332926B1 (no) | 2003-07-08 | 2005-12-19 | Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20056055L NO20056055L (no) | 2006-02-13 |
| NO332926B1 true NO332926B1 (no) | 2013-02-04 |
Family
ID=27800789
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20033115A NO20033115D0 (no) | 2003-07-08 | 2003-07-08 | Peptid-baserte forbindelser |
| NO20056055A NO332926B1 (no) | 2003-07-08 | 2005-12-19 | Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20033115A NO20033115D0 (no) | 2003-07-08 | 2003-07-08 | Peptid-baserte forbindelser |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7608243B2 (no) |
| EP (1) | EP1639004B1 (no) |
| JP (1) | JP4993463B2 (no) |
| CN (1) | CN1820025A (no) |
| AT (1) | ATE500271T1 (no) |
| DE (1) | DE602004031617D1 (no) |
| ES (1) | ES2361670T3 (no) |
| NO (2) | NO20033115D0 (no) |
| WO (1) | WO2005003166A1 (no) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5043271B2 (ja) * | 2000-04-12 | 2012-10-10 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | ペプチドベースの化合物 |
| CA2452923C (en) * | 2001-07-10 | 2012-02-07 | Amersham Health As | Peptide-based compounds for targeting integrin receptors |
| NO20034350D0 (no) * | 2003-09-29 | 2003-09-29 | Amersham Health As | Optisk avbilding av kolorektal kreft |
| NO20035683D0 (no) * | 2003-12-18 | 2003-12-18 | Amersham Health As | Optisk avbildning av prostatakreft |
| NO20035681D0 (no) * | 2003-12-18 | 2003-12-18 | Amersham Health As | Optisk avbildning av lungekreft |
| CA2568601A1 (en) * | 2004-06-16 | 2005-12-29 | Ge Healthcare As | Peptide-based compounds |
| CN1968963A (zh) * | 2004-06-16 | 2007-05-23 | 通用电气医疗集团股份有限公司 | 基于肽的化合物 |
| RU2007118385A (ru) | 2004-11-22 | 2008-12-27 | Джи-И Хелткер АС (NO) | Контрастные агенты для направлений доставки во внеклеточный матрикс |
| GB0428012D0 (en) | 2004-12-22 | 2005-01-26 | Hammersmith Imanet Ltd | Radiolabelling methods |
| US8236283B2 (en) * | 2005-01-06 | 2012-08-07 | Ge Healthcare As | Optical imaging |
| ES2554993T3 (es) | 2009-09-17 | 2015-12-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Sistema de análisis para el análisis de muestras biológicas, métodos y producto de programa informático |
| PL238871B1 (pl) * | 2018-02-13 | 2021-10-18 | Univ Gdanski | Peptydomimetyk oraz jego zastosowanie jako środek fluorescencyjny in vitro |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6331289B1 (en) * | 1996-10-28 | 2001-12-18 | Nycomed Imaging As | Targeted diagnostic/therapeutic agents having more than one different vectors |
| DE19808591C2 (de) * | 1998-02-28 | 2000-02-03 | Univ Leipzig | Standardisierter durchflußzytometrischer Vollblutassay |
| JP5043271B2 (ja) * | 2000-04-12 | 2012-10-10 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | ペプチドベースの化合物 |
| NO20004795D0 (no) * | 2000-09-26 | 2000-09-26 | Nycomed Imaging As | Peptidbaserte forbindelser |
| CA2452923C (en) * | 2001-07-10 | 2012-02-07 | Amersham Health As | Peptide-based compounds for targeting integrin receptors |
| GB0206750D0 (en) * | 2002-03-22 | 2002-05-01 | Amersham Plc | Radiofluorination methods |
| GB0317815D0 (en) * | 2003-07-30 | 2003-09-03 | Amersham Health As | Imaging agents |
-
2003
- 2003-07-08 NO NO20033115A patent/NO20033115D0/no unknown
-
2004
- 2004-07-07 ES ES04748784T patent/ES2361670T3/es active Active
- 2004-07-07 EP EP04748784A patent/EP1639004B1/en not_active Not-in-force
- 2004-07-07 US US10/560,062 patent/US7608243B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-07-07 DE DE602004031617T patent/DE602004031617D1/de active Active
- 2004-07-07 JP JP2006518573A patent/JP4993463B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-07-07 WO PCT/NO2004/000208 patent/WO2005003166A1/en active Search and Examination
- 2004-07-07 CN CN200480019515.0A patent/CN1820025A/zh active Pending
- 2004-07-07 AT AT04748784T patent/ATE500271T1/de not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-12-19 NO NO20056055A patent/NO332926B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20056055L (no) | 2006-02-13 |
| ES2361670T3 (es) | 2011-06-21 |
| EP1639004B1 (en) | 2011-03-02 |
| EP1639004A1 (en) | 2006-03-29 |
| CN1820025A (zh) | 2006-08-16 |
| DE602004031617D1 (de) | 2011-04-14 |
| NO20033115D0 (no) | 2003-07-08 |
| JP4993463B2 (ja) | 2012-08-08 |
| JP2007528846A (ja) | 2007-10-18 |
| US20070183977A1 (en) | 2007-08-09 |
| US7608243B2 (en) | 2009-10-27 |
| WO2005003166A1 (en) | 2005-01-13 |
| ATE500271T1 (de) | 2011-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO332926B1 (no) | Peptidbaserte forbindelser, farmasoytiske sammensetninger omfattende slike, fremgangsmate for fremstilling og anvendelse | |
| JP6942147B2 (ja) | Ｍｔ１−ｍｍｐに対して特異的な二環式ペプチド−毒素コンジュゲート | |
| EP1765863B1 (en) | Peptide-based compounds | |
| EP1404371B1 (en) | Peptide-based compounds for targeting intergin receptors | |
| RU2430107C2 (ru) | Производные метастина и их применение | |
| US9029332B2 (en) | Cross-linked peptides and proteins, methods of making same, and uses thereof | |
| KR20230036156A (ko) | α4β7 인테그린 티오에테르 펩티드 길항제 | |
| KR20220141808A (ko) | 인터루킨-23 수용체의 펩티드 억제제 및 염증성 질환을 치료하기 위한 이의 용도 | |
| WO2001070769A1 (fr) | Derive peptidique | |
| KR20110025731A (ko) | 에리트로포이에틴 모방 펩티드 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이의 용도 | |
| WO2009131191A1 (ja) | メタスチン誘導体およびその用途 | |
| CA2906775A1 (en) | Bh4 stabilized peptides and uses thereof | |
| JP6583411B2 (ja) | 薬物複合体 | |
| CN106188270A (zh) | Rhamm结合肽 | |
| KR20230160321A (ko) | 면역조정제 | |
| US8623326B2 (en) | Ghrelin analogues | |
| CZ20014484A3 (cs) | Inhibitory integrinu alfa v beta 6 | |
| WO2023054712A1 (ja) | ペプチド | |
| KR20240082377A (ko) | 펩티드 | |
| Hauser-Kawaguchi | The Development Of Platforms For Inhibiting RHAMM-HA Interactions & The Development Of An Optical Probe For Measuring Glomerular Filtration Rate | |
| TW202404643A (zh) | 化合物及用途 | |
| JPH05279390A (ja) | エンドセリン拮抗性環状ペンタペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |