NO329645B1

NO329645B1 - Bakteriestamme, sammensetning og anvendelse av nevnte bakteriestamme

Info

Publication number: NO329645B1
Application number: NO20033621A
Authority: NO
Inventors: Claudio De Simone
Original assignee: Actial Farm Lda
Priority date: 2001-12-21
Filing date: 2003-08-14
Publication date: 2010-11-22
Also published as: KR20040074053A; ES2271384T3; IS7229A; CN1276970C; EA006688B1; HU225787B1; IL161995A0; PL370252A1; NO20033621L; MA27685A1; CN1875994A; CY1105402T1; HUP0402460A2; DE60213859D1; EP1652913A1; PL207395B1; KR100934747B1; HUP0402460A3; CN100502893C; DK1456351T3

Abstract

Det beskrives en ny stamme av Streptococcus thermoophilus ssp. Salivarius (deponert 4. desember 2001 ved DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Tyskland, med aksesjonsnr. DSM 14667) og spiselige sammensetninger, legemidler og veterinærprodukter inneholdende stammen. Anvendelsen av nevnte stamme er spesielt effektiv ved forebyggelse/behandling av hepatisk steatosis (fettlever) og ved ikke-alkoholisk hepatisk steatosis.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en ny biologisk ren stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8), deponert 4. desember 2001 ved DSMZ- - Deutysche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen G mbH, Braunschweig, Tyskland, med aksesjonsnr. DSM 14667 og dens etterkommere og mutanter.

Foreliggende oppfinnelse er videre relatert til spiselige sammensetninger inneholdende den nevnte nye stammen CD8 som aktivt prinsipp (eller som et av de aktive prinsippene) og anvendelsen av den nevnte stammen til fremstilling av spiselige sammensetninger, legemidler og veterinærprodukter for forebyggelsen/behandlingen av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, insulinresistens, hyperinsulinemi, fedme.

For å være kortfattet vil resten av den foreliggende beskrivelsen bare referere til forebyggelsen/behandlingen av steatosis hepatis (fettlever) og ikke alkoholisk steatosis hepatis. Disse tilstandene er ikke bare valgt ut i fra et hensyn om kortfattethet, men også fordi sammensetningene i den foreliggende oppfinnelsen har spesiell preventiv og kurativ effektivitet med hensyn på disse patologiene.

Steatosis hepatis (eller fettlever) defineres som eksessiv akkumulering av lipider i hepatocyttene, hvor "eksessiv akkumulering" betyr lipidakkumulering som overstiger de normale 5% i forhold til leverens vekt. I makro vesikulær steatosis hepatis får store dråper av triglyserider hepatocyttene til å svulme, for dermed å forflytte kjernen mot cellens periferi slik de gjør i adipocytter. I mikrovesikulær steatosis hepatis akkumuleres små dråper av triglyserider i hepatocyttene og kjernen forblir i en sentral posisjon, og hepatocyttene antar derved et skumaktig utseende.

Steatosis hepatis, som vanligvis forårsaker begrenset økning i serum aminotransferase (mindre enn 4 ganger den øvre grense av normen), identifiseres pålitelig ved bildeteknikker slik som ultrasonografi og computertomografi.

Ikke-alkoholisk steatosis hepatis (ofte kalt ikke-alkoholisk steatosis hepatis, NASH) er et klinisk steatosesyndrom ledsaget av hepatitt.

Dette er diagnostisert ved leverbiopsi etter at andre årsaker til leversykdom (for eksempel infeksjoner av hepatitt B virus og hepatitt C virus) har blitt ekskludert og etter at alkoholmissbruk (>20 g per dag) har blitt utelukket med sikkerhet. Når slik missbruk er utelukket, bør de følgende etiologiske faktorer vurderes:

Ingen spesifikk årsak til ikke-alkolisk steatosis hepatis er kjent. Tidligere ble den typiske pasient berørt av denne patologi beskrevet som et kvinnelig individ, fet, med et overskudd av sukker i blodet som kan være forårsaket av diabetes. Videre kan pasienten ha et overskudd av blodtriglyserider og lide av hjertesykdom, skjoldbrukskjertelsykdommer eller hypertensjon. Det har nylig blitt rapportert at pasienter affisert av ikke-alkoholisk steatosis hepatis ikke alltid samsvarer med dette bildet. En studie var på både kvinnelig og mannlig individer som ikke var overvektige, ikke sukkersyke og som ikke hadde overskytende blodtriglyserider. En annen gruppe pasienter som ble diagnostisert med ikke-alkoholisk steatosis hepatis omfattet barn mellom 9 og 16 år. De fleste av dem var overvektige, men bare to av 30 led av diabetes.

Det finnes ingen blodprøver som gjør det mulig å diagnostisere steatose og ikke-alkoholisk steatosis hepatis med sikkerhet.

Økninger i aminotransferaser (aspartat transaminase AST og alanin transaminase ALT), som heller ikke trenger å forekomme, er de eneste biokjemiske indikatorer. Begge er imidlertid vanlige i begge patologien Normale biokjemiske verdier har blitt funnet i patologisk fete individer hvor leverbiopsier antydet progressiv leversykdom.

AST/ALT forholdet kan imidlertid være nyttig for å skille ikke-alkoholisk steatosis hepatis fra alkoholisk steatosis hepatis, en patologi hvor store anatomopatologiske endringer i leveren kan forårsakes av alkoholmisbruk (etanol). I alkoholisk steatose er AST/ALT forholdet typisk større enn 2, mens i ikke-alkoholisk steatose er nivået av ALT høyere enn det av AST.

EP0196858 omhandler bruk av syv ulike Streptococcus- sXaxnmer for å forbedre leverfunksjon. Det blir vist at dyr foret med diett rik på kolesterol har forhøyede nivåer av ALT og AST. Videre er det vist at denne økningen i nivåer av ALT og AST kan motvirkes ved å fore dyret med en diett tilsatt for eksempel Streptococcus faecalis FERMBP-297.

Journal of Applied Bacteriology, vol. 59, nr.2,1985, side 147-151 omtaler ulike Streptococcus- stsramer og deres anvendelse ved fermentering av melk.

Det er for tiden ingen kjent spesifikk behandling for ikke-alkoholisk steatosis hepatis med generell aksept. Pasienter som er fete, sukkersyke og har forhøyede verdier av blodtriglyserider er åpenbart rådet til å gå ned i vekt og kontrollere deres diabetes ved å adoptere en hypokaloriisk, fettfattig diett, så vel som å ta insulinmedisiner for å redusere blodsukkernivået. For en utfyllende gjennomgang av patogenesen, kliniske aspekter, diagnosebehandling av NASH, se Sheth S.G. et al., Non-alcoholic steatohepatitis, Ann. Intern. Med. 1997,127-137.

Mangelen på en effektiv og generelt akseptert behandling utgjør en risikofaktor fordi mens ikke-inflammatorisk steatose er en godartet tilstand, så utvikler fra 10 til 50% av pasientene med ikke-alkoholisk steatosis hepatis en progressiv fibrose som i neste omgang kan degenerere til chirrose, den ellevte mest vanlig årsak til død i vesten, for eksempel i USA.

Det er derfor et behov for å ha tilgjengelig et effektiv forebyggende/kurerende behandlingsverktøy for steatosis hepatis og, spesielt, ikke-alkoholisk steatosis hepatis, og det er derfor hensikten med den foreliggende oppfinnelse å gjøre slikt virkemiddel tilgjengelig.

I henhold til oppfinnelsen består nevnte virkemiddel av en ny, biologisk ren stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8), deponert 4. desember 2001 ved DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Tyskland, med aksesjonsnr. DSM 14667 og dens etterkommere og mutanter.

Oppfinnelsen er videre relatert til en sammensetning som inneholder den nevnte stamme av Streptococcus som aktivt prinsipp, som kan anta formen og utføre aktiviteten til spiselige produkter eller kosttilskudd, eller til et legemiddel, eller veterinærprodukter, som en funksjon til den støtten eller forebyggende effekten, eller fullverdig terapeutisk effekt, som sammensetningene er ment å utføre, avhengig av det spesielle individet som det er ment for.

Oppfinnelsen inkluderer også anvendelse av den nevnte stammen til fremstilling av sammensetninger egnet til forebyggelsen/behandlingen av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, hepatisk encefalopati, insulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

Selv om nærmere forståelse av mekanismene som den nye Streptococcus CD8-stammen utøver sin forebyggende/kurerende effekt ikke er nødvendig for forståelsen og praktisk anvendelse av den foreliggende oppfinnelsen, så kan det bli postulert at utviklingen av benign og ikke-alkoholisk steatosis hepatis (NASH) inhiberes av endringene, indusert av Streptococcus, i signalene til de inflammatoriske cytokinene, ved forbedring av funksjonen av epitelbarrieren og ved inhibering av translokasjon av andre bakterier fra tarmen. Disse mekanismene er ikke gjensidige utelukkende og det er sannsynlig at den nye stammen av Streptococcus er utrustet med flere aktiviteter.

Sammensetninger basert på melkesyrebakterier som har en beskyttende effekt på magetarmsystemet er kjent, men sammensetningen som reduserer eller motvirker benign steatosis hepatis eller ikke-alkoholisk steatosis hepatis er ikke kjent.

Sammensetningene i henhold til oppfinnelsen som inneholder en forebyggende eller terapeutisk effektiv mengde av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) eller av dennes avkomme eller mutanter kan formuleres som spiselige sammensetninger eller kostholdstillegg, som legemidler eller veterinærprodukter, hvor nevnte Streptococcus er eneste aktive ingrediens eller blandet med en eller flere andre aktive ingredienser og/eller en eller flere farmakologisk akseptable bindemidler. Valg av bindemidlene og de mest egnede formuleringsmetodene i samsvar med den bestemte hensikten til sammensetningene er innenfor rekkevidde til gjennomsnittsfagmannen innen mat eller farmasøytisk teknologi.

En spesielt foretrukket sammensetning inneholder en stamme av den nevnte Streptococcus CD8 og en stamme av Lactobacillus brevis CD2. Sistnevnte er deponert ved DSMZ - Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Tyskland, med aksesjonsnr. DSM 11988.

Den foregående sammensetningen kan videre inneholde en stamme valgt fra gruppen omfattende Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidium, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus eller blandinger av disse.

De foregående sammensetningene kan videre inneholde minst en av de følgende ingrediensene: vitamin E, kolin, ursodeoksykullsyre, klofibrat, tiglitazon, gemfibrozil, betain, N-acetylcystein, rosiglitazon, basiske aminosyrer, L-karnitin eller en lavere alkanyl L-karnitin eller deres farmakologisk akseptable salter.

Foretrukne lavere alkanyl L-karnitiner er acetyl, propionyl og isovaleryl L-karnitin. Farmakologiske akseptable salter av L-karnitin er fumarater og tartrater, mens farmakologisk akseptable salter av alkanyl L-kamitinene er klorid, fumarat og galactaratene.

Sammensetninger egnet for oral administrering kan være i form av en enkel dose, for eksempel tabletter, kapsler og pakker, eller i form av pulver eller granulater eller, alternativt, i form av suspensjoner eller emulsjoner.

Tablettene og kapslene kan inneholde bindingsmidler, smøremidler, stabilisatorer, fargestoffer, separerende midler og dets like. Tablettene kan belegges med velkjente teknikker.

De flytende sammensetningene kan være i form av vandige eller olj esuspensj oner, for eksempel i spiselige oljer, eller kan bli fremstilt som ønsket av brukeren ved å løse eller suspendere preparatet i form av pulver eller granulater i vann eller andre egnede løsemidler.

Disse flytende sammensetningene kan inneholde suspensjonsmidler, emulsjonsmidler, preservasjonsmidler og liknende.

Det er foretrukket at de forskjellige doseformene beskrevet ovenfor inneholder en mengde Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) tilstrekkelig slik at brukeren, i samsvar med et doseringsregime som er lett å følge, kan ta fra 50 til 3 600 billioner bakterier av stammen per dag.

Det skal nå beskrives kliniske studier hvor pasienter med ikke-alkoholisk steatosis hepatis ble inkludert. Diagnosen av ikke-alkoholisk steatosis hepatis må inkludere ekskludering av infeksjon av hepatitt C viruset (dvs. antistoffer mot hepatitt C og B viruset) og av infeksjon av hepatitt B viruset (overflateantigener mot hepatitt B). Nivåene av ceruloplasmin og av a-l-antitrypsin er vanligvis normale hos pasienter med ikke-alkoholisk steatosis hepatis. De serologiske autoimmune parametrene (antimitokondriske antistoff, antinukleære antistoff, antiglattmuskelaturantistoff og antilever/nyremikrosomale antistoff) er negative hos pasienter affisert av ikke-alkoholisk steatosis hepatis, unntatt hos noen pasienter som har en lav titer antinukleær antistoff positivitet (varierende fra 1:40 til 1:320).

Klinisk studie 1

Tjuefire pasienter (ti menn og 14 kvinner, gjennomsnittlig alder 49±12 år) som hadde blitt diagnostisert med tilstanden ikke-alkoholisk steatosis hepatis på basis av kompatible serumtester demonstrerende opphøyde alanine transaminaseverdier ble inkludert i studien. Alle pasientene mottok, per dag, 1800 billioner Streptococcus thermophilus ssp. salvarius (CD8) bakterier frysetørket i form av granulat.

De biokjemiske serumparametrene, måling av kroppsvekt og lipidprofilen ble bestemt ved start av studien og etter 3 måneders terapi. Tolv pasienter av tjuefire (50%) var overvektige (>20% over ideell kroppsvekt). Elleve pasienter brukte orale hypoglykemiker og/eller insulin eller hadde fastende glukoseverdier >160 mg/dl.

Verdiene for gjennomsnittlige serumalkalisk fosfatase (Alk. fosf.), alanintransaminase (ALT) og gamma-glutamyltranspeptidase (GGT) etter 3 måneders terapi var signifikant redusert relativt til baseverdiene ved inklusjon, som vist i følgende tabell, hvor verdiene er uttrykt i IU/1.

Ingen signifikante endringer ble detektert i triglyserider, kolesterol og kroppsvekt. Data gitt i tabellen viser at behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis med Streptococcus thermophilus ssp. salvivarius (CD8) fører til en signifikant bedring av nivåene av alkalisk fosfatase, ALT og GGT, som er serumenzymer indikative på leverfunksjoner slik som cytolyse og kolestase.

Klinisk studie 2

Fem pasienter ble inkludert i studien: to mannlige og tre kvinnelige som hadde økte nivåer av asparatat transminase (AST) og alanin transminase (ALT)og hvor en leverbiopsi hadde blitt utført som avslørte ikke-alkoholisk hepatisk steatosis som hadde utviklet seg innen de seks månedene forut for inkluksjon i studien. Disse pasientene viste ingen tegn på andre kroniske leversykdommer og tok ikke legemidler for reduksjon av triglycerider. Hver pasient mottok i fire måneder 1800 billioner bakterier per dag av følgende arter:

Streptococcus thermophilus ssp. salvivarius (CD8)

Lactobacillus brevis (CD2)

Bifidobacterium infantis

Lactobacillus plantarum

Lacobacillus casei

Lactobacillus bulgaricus

Lactobacillus acidophilus

Hvert gram av sammensetningingen inneholdt:

Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) - 150 billioner Lactobcillus brevis (CD2) - 10 billioner

Bifidobacterium infantis - 100 billioner

Lactobacillus plantarum - 10 billioner

Lactobacillus casei - 10 billioner

Lactobacillus bulgaricus - 30 billioner

Lactobacillus acidophilus - 30 billioner

Serumnivåene av AST og ALT ble målt ved starten av studien og ved sekstende uke.

Studien ble avsluttet på alle fem pasienter uten at noen negative regaksjoner ble vist.

Resultatene av studien er presentert i den følgende tabellen, hvor resultatene er uttrykt i

IU/I.

Heller ikke denne studien ble endringer funnet i lipidprofilen (kolesterolemi, triglyserider) noe som bekrefter spesifisiteten av effekten av den ovenstående sammensetningen inneholdende Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) i kombinasjon med andre melkesyrebakterier. Sammensetningen var formulert for å vise, i kombinasjon, egenskapene til Streptococcus thermophilus ssp. salivarius (CD8) med de anti-inflammatoriske egenskapene til andre melkesyrebakterier (fore eksempel Lactobacillus brevis CD2, se WO 99/42568).

Claims

1. Biologisk ren stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salviarus CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 og dens etterkommere og mutanter.

2. Sammensetning, karakterisert ved at den inneholder stammen definert i krav 1.

3. Sammensetning i henhold til krav 2, karakterisert ved at den i tillegg inneholder en stamme av Lactobacillus brevis CD2 med aksesjonsnummer DSM 11988 eller dens etterkommere eller mutanter.

4. Sammensetning i henhold til krav 3, karakterisert ved at den i tillegg inneholder en stamme valgt fra gruppen omfattende Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus adicophilus eller blandinger av disse.

5. Sammensetning i henhold til kravene 2-4, karakterisert v e d at den i tillegg inneholder minst en av de følgende ingredienser: vitamin E, kolin, ursodeoksykolinsyre, clofibrat, tiglitazon, gemfibrozil, betain, N-acetylcystein, rosiglitazon, basiske aminosyrer, L-karnitin eller en lavere alkanyl L-karnitin eller deres farmakologiske akseptable salter.

6. Anvendelse av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter for fremstilling av spiselig sammensetning til forebygging/behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, hepatisk encefalopati, insulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

7. Anvendelse av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter til fremstilling av et legemiddel som kan administreres ved oral eller enteral rute til forebyggelse/behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, hepatisk encefalopati, insulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

8. Anvendelse av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter til fremstilling av et veterinærprodukt for forebyggelse/behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, inslulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

9. Anvendelse av en blanding av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter og av en stamme av Lactobacillus brevis CD2 med aksesjonsnummer DSM 1988 eller av dens etterkommere eller mutanter til fremstilling av en spiselig sammensetning for forebyggelse/behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, hepatisk encefalopati, insulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

10. Anvendelse av en blanding av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter og av en stamme av Lactobacillus brevis CD2 med aksesjonsnummer DSM 11988 eller av dens etterkommere eller mutanter til fremstilling av et legemiddel som kan administreres ved oral eller enteral rute for forebygging/behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, hepatisk encefalopati, insulinresistens, hyperinsulinemi og fedme.

11. Anvendelse av en blanding av en stamme av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter og av en stamme av Lactobacillus brevis CD2 med aksesjonsnummer DSM 11988 eller av dens etterkommere eller mutanter til fremstilling av et veterinærprodukt for forebyggelse /behandling av ikke-alkoholisk hepatisk steatosis, fettlever, insulinresistens, hyperinsulinemi, fedme.

12. Anvendelse i henhold til kravene 9-11, hvor blandingen i tillegg inneholder stammer av Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus eller deres blandinger.

13. Anvendelse i henhold til kravene 6, 7, 9,10, hvor den spiselige sammensetningen eller legemiddelet administreres til en bruker fra 50 til 3600 billioner bakterier av stammen av Streptococcus thermophilus ssp. salivarius CD8 med aksesjonsnummer DSM 14667 eller av dens etterkommere eller mutanter.