CN101969967A - 酒精性肝病抑制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供以属于短乳杆菌(Lactobacillus brevis)的菌株的菌体或其处理物为有效成分的酒精性肝病抑制剂。本发明的酒精性肝病抑制剂对生物体的安全性高,可用作饮食品的成分。
Description
技术领域
本发明涉及酒精性肝病抑制剂。
背景技术
近年来,随着酒精饮料的消费量的增加,对酒精性肝病抑制剂的需求增大。
作为酒精性肝病抑制剂,已知多种制剂。例如,有报道称对大麦烧酒蒸馏残液施以一定的处理而得的组合物具有酒精性肝病抑制作用(参照专利文献1)。
专利文献1:日本专利特开2004-210687号公报
发明的揭示
另外,作为酒精性肝病抑制剂,理想的是对生物体的安全性高、可用作饮食品的成分的制剂。然而,关于这样的酒精性肝病抑制剂,实际情况是其种类还较少,无法充分满足消费者的需求。
于是,本发明的课题是提供对生物体的安全性高、可用作饮食品的成分的新的酒精性肝病抑制剂。
本发明提供以属于短乳杆菌(Lactobacillus brevis)的菌株的菌体或其处理物为有效成分的酒精性肝病抑制剂。
本发明的酒精性肝病抑制剂可抑制酒精性肝病,即因酒精饮料的摄取而引起的肝病(脂肪肝、肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌等)。
此外,短乳杆菌是自古以来就被用于发酵食品的乳酸菌的一种,已确认对生物体的安全性。因此,本发明的酒精性肝病抑制剂对生物体的安全性高,不仅可用作医药品成分,也可用作饮食品添加剂或饮食品等的成分。
此外,如果将本发明的酒精性肝病抑制剂用作酒精饮料的成分,则可获得肝损伤的程度得到抑制的酒精饮料。特别是如果使用含有能在酒精饮料中增殖的菌株的活菌体的酒精性肝病抑制剂,则可获得肝损伤的程度进一步得到抑制的酒精饮料。
短乳杆菌有短亚种(brevis)、格雷夫斯亚种(gravesensis)、大泷亚种(otakiensis)、凝结亚种(coagulans)这4个亚种(subspecies)。作为本发明的酒精性肝病抑制剂中的菌株,优选属于短亚种的菌株,属于短亚种的菌株中,特优选短乳杆菌(Lactobacillus brevis)SBC8803菌株。SBC8803菌株在酒精的存在下也能增殖,特别适合用作酒精饮料的成分。短乳杆菌SBC8803菌株于2006年6月28日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566)),保藏号为FERM BP-10632。
本发明的酒精性肝病抑制剂可用作医药品、饮食品添加剂、饮食品等的成分,因此本发明也提供含有本发明的酒精性肝病抑制剂的医药品、饮食品添加剂、饮食品等。
通过本发明,可提供对生物体的安全性高、可用作饮食品的成分的新的酒精性肝病抑制剂。此外,也可提供含有这样的酒精性肝病抑制剂的医药品、饮食品添加剂、饮食品等。
附图的简单说明
图1是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的血清AST浓度的经时变化的图。
图2是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的血清ALT浓度的经时变化的图。
图3是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的肝脏中的总胆固醇浓度的图。
图4是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的肝脏甘油三酯浓度的图。
图5是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的肝脏中的TNF-αmRNA量的图。
图6是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的肝脏中的SREBP-1mRNA量的图。
图7是表示给予了短乳杆菌SBC8803菌株的小鼠的肝脏中的SREBP-2mRNA量的图。
实施发明的最佳方式
以下,对本发明的优选实施方式进行说明。
本发明的酒精性肝病抑制剂含有属于短乳杆菌(Lactobacillus brevis)的菌株的菌体或其处理物作为有效成分。
短乳杆菌根据16S核糖体DNA的碱基序列、由消耗的糖生成酸的比例等的不同,可分为4个亚种,即短亚种(brevis)、格雷夫斯亚种(gravesensis)、大泷亚种(otakiensis)、凝结亚种(coagulans)。
作为属于短乳杆菌的菌株,优选属于短亚种的菌株,属于短亚种的菌株中,优选例如短乳杆菌(Lactobacillus brevis)SBC8803菌株。短乳杆菌SBC8803菌株于2006年6月28日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566)),保藏号为FERM BP-10632。
本发明的酒精性肝病抑制剂中的菌株属于短乳杆菌的菌株即可,例如可以是可从自然界分离的菌株,也可以是可从ATCC等细胞库获取的菌株。
作为上述菌株的菌体,可以仅含有1种菌株的菌体,也可以同时含有2种以上的菌株的菌体。此外,菌体可以是活菌体和死菌体中的任一种。菌体可通过培养活菌体来大量生产。作为培养基,可使用含有氮源和碳源的培养基。作为氮源,可使用肉提取物、胨、谷蛋白、酪蛋白、酵母提取物、氨基酸等;作为碳源,可使用葡萄糖、木糖、果糖、肌醇、麦芽糖、糖稀、曲汁、淀粉、蔗渣、麦麸、糖蜜、甘油等。此外,作为无机质,可添加硫酸铵、磷酸钾、氯化镁、食盐、铁、锰、钼等,还可添加维生素等。培养温度为约25~40℃,较好是约27~35℃,培养时间为约12~48小时,可以通气振荡。培养基的pH为约3~6,较好是约4~6。
作为菌体的处理物,可例举例如将菌体在100℃以上的温度下加热数分钟以上而得的处理物(例如在110~125℃的温度下对菌体实施10分钟以上的高压釜处理而得的处理物),对菌体进行冷冻干燥、喷雾干燥等而得的处理物,或者通过超声波、弗氏压碎器(French press)等以物理方法破坏菌体而得的处理物。
本发明的酒精性肝病抑制剂可以是固体(例如冷冻干燥而得的粉末)、液体(水溶性或脂溶性的溶液或悬浮液)、糊剂等任意形状,也可以采用散剂、颗粒剂、片剂、糖浆剂、含片剂、胶囊剂等任意剂型。此外,本发明的酒精性肝病抑制剂也可以是由属于短乳杆菌的菌株的菌体或其处理物构成的制剂。
上述各种制剂可通过将属于短乳杆菌的菌株的菌体或其处理物和药学上允许的添加剂(赋形剂、粘结剂、润滑剂、崩解剂、乳化剂、表面活性剂、基剂、助溶剂、悬浮剂等)混合来制备。
例如,作为赋形剂,可例举乳糖、蔗糖、淀粉、糊精等。作为粘结剂,可例举聚乙烯醇、阿拉伯树胶、黄蓍胶、明胶、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮等。作为润滑剂,可例举硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石等。作为崩解剂,可例举例如结晶纤维素、琼脂、明胶、碳酸钙、碳酸氢钠、糊精等。作为乳化剂或表面活性剂,可例举吐温60、吐温80、司盘80、单硬脂酸甘油酯等。作为基剂,可例举十六醇十八醇混合物、羊毛脂、聚乙二醇、米糠油、鱼油(DHA、EPA等)、橄榄油等。作为助溶剂,可例举聚乙二醇、丙二醇、碳酸钠、柠檬酸钠、吐温80等。作为悬浮剂,除上述表面活性剂外,可例举聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟甲基纤维素、藻酸钠等。
本发明的酒精性肝病抑制剂可用作医药品、饮食品添加剂、饮食品等的成分。
例如,本发明的酒精性肝病抑制剂可用作水、清凉饮料水、果汁饮料、乳饮料、酒精饮料、面包类、面类、米类、豆腐、乳制品、酱油、豆酱、点心类等饮食品中的添加剂。这些饮食品还可含有本领域内常用的其它添加剂,作为这样的添加剂,可例举例如苦味剂、香料、苹果纤维、大豆纤维、肉提取物、黑醋提取物、明胶、玉米淀粉、蜂蜜、动植物油脂;葡萄糖、果糖等单糖类;蔗糖等双糖类;右旋糖、淀粉等多糖类;赤藓醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇等糖醇类;维生素C等维生素类。本发明的酒精性肝病抑制剂也可用作特定保健用食品(特定保健用食品)、特殊用途食品(特别用途食品)、营养辅助食品、保健食品、功能性食品、病人用食品等的成分。含有本发明的酒精性肝病抑制剂的饮食品也可以是用属于短乳杆菌的菌株使牛奶、脱脂奶、豆奶等发酵而得的发酵产物。
本发明的酒精性肝病抑制剂可以给予人,也可以给予非人哺乳动物。给药量和给药方法可根据给药的个体的状态、年龄等适当决定。作为优选的给药方法,可例举例如口服给药。
另外,本发明中,“酒精性肝病抑制剂”是表示可抑制因酒精摄取而引起的肝病(脂肪肝、肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌等)的制剂。这里,“肝病”既可以是将来将要发生但尚未发生的肝病,也可以是已经发生的肝病,此外,“抑制”也包括预防、治疗、减轻、缓解等中的任一种。肝病是否得到抑制例如可通过伴随酒精摄取而发生的血清AST(天冬氨酸氨基转移酶)或血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)的升高或脂肪(胆固醇、甘油三酯等)在肝脏中的积累是否得到抑制来判定。
实施例
以下,基于试验例对本发明进行更具体的说明。但本发明不受以下试验例的限定。
以下的试验例中,使用以SPF环境下、温度23±1℃、湿度55±10%、明暗周期12小时(明期:8点~20点,暗期:20点~8点)的条件饲养的7周龄的雄性C57BL/6N小鼠(日本查尔斯河公司(日本チャ一ルス·リバ一社))。动物的处理依据“合理实施动物试验指南”(日本学术会议)进行。
此外,以下的试验例将小鼠分为以下3组来进行。使各组的小鼠摄取规定的饲料或菌株35天(试验例1)或49天(试验例2~4)。
阳性对照组:摄取添加有乙醇的饲料的组(8个体)
SBC8803给药组:摄取添加有乙醇的饲料及短乳杆菌SBC8803菌株的组(8个体)
阴性对照组:摄取对照饲料(未添加乙醇的饲料)的组(7个体)
另外,添加有乙醇的饲料及对照饲料的组成如表1所述。表1中,各成分的量以每1L该饲料中的克数(g)表示。
[表1]
〔试验样品的制备〕
通过高压釜处理(121℃、20分钟)对短乳杆菌SBC8803菌株的菌体进行杀菌后,冷冻干燥,将冷冻干燥的菌体悬浮于蒸馏水,得到100mg/mL的菌体悬浮液。以下的试验例中,对SBC8803给药组的SBC8803菌株的给药通过用胃探针以菌体悬浮液100μL/小鼠/天(菌体10mg/小鼠/天)的量口服给药来进行。另外,短乳杆菌SBC8803菌株于2006年6月28日保藏于独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(日本茨城县筑波市东1丁目1番地1中央第6(邮政编码305-8566)),保藏号为FERM BP-10632。
〔试验例1:血清AST及血清ALT的测定〕
使阳性对照组、SBC8803给药组和阴性对照组的小鼠分别摄取规定的饲料或菌株35天。于第7天、第14天、第21天、第28天及第35天测定小鼠的血清AST(天冬氨酸氨基转移酶)浓度(单位)及血清ALT(丙氨酸氨基转移酶)浓度(单位)。血清AST浓度及血清ALT浓度的测定采用转氨酶分析试剂盒(Transaminase CII-test Wako)(和光纯药工业(和光純薬工業)公司)进行。另外,血清AST浓度及血清ALT浓度可用作肝病的标记物。
结果示于图1及图2。图1是表示各组小鼠的血清AST浓度的经时变化的图。图2是表示各组小鼠的血清ALT浓度的经时变化的图。另外,图1及图2中,各数据以平均值±标准差表示。此外,数据所带的“*”表示该数据是与阳性对照组相比存在显著差异(显著水平:5%)的数据。有无显著差异用Student的t检验来判定。
由试验例1的结果(图1及图2)可知,在第7天以后,与阴性对照组相比,阳性对照组中的血清AST浓度及血清ALT浓度显示出明显较高的值。另一方面,在第21天以后,与阳性对照组相比,SBC8803给药组中的血清AST浓度及血清ALT浓度显示出明显较低的值。
〔试验例2:肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度的测定〕
使阳性对照组、SBC8803给药组和阴性对照组的小鼠分别摄取规定的饲料或菌株49天。在第49天测定小鼠的肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度。肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度的测定采用胆固醇分析试剂盒(Cholesterol E-test Wako)(和光纯药工业公司)及甘油三酯分析试剂盒(Triglyceride E-test Wako)(和光纯药工业公司)进行。另外,肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度可用作肝病(特别是脂肪肝)的标记物。
详细地说,从前一天起使小鼠禁食,在第49天从小鼠下腔静脉采血后,摘出肝脏,测定肝脏的重量。然后将肝脏投入含1mM EDTA的0.25%蔗糖溶液,用微量匀浆器匀浆10秒钟。在3mL肝匀浆液中添加3mL氯仿/甲醇(2∶1v/v),用漩涡搅拌器混合1分钟,提取肝脏中的脂质。离心分离(3000rpm、10分钟)后,回收氯仿/甲醇层,将其中的0.5mL用浓缩离心机干燥。在所提取的脂质中添加0.5mL的1%无脂肪酸的牛血清白蛋白(BSA)水溶液,用上述试剂盒测定总胆固醇浓度(mg/g肝脏)及甘油三酯浓度(mg/g肝脏)。根据摘出的肝脏重量算出单位肝脏重量(湿润)的总胆固醇量及甘油三酯量。
结果示于图3及图4。图3是表示各组小鼠的肝脏中的总胆固醇浓度的图。图4是表示各组小鼠的肝脏甘油三酯浓度的图。另外,图3及图4中,各数据以平均值±标准差表示。此外,数据所带的“*”及“**”表示该数据是与阳性对照组相比存在显著差异(显著水平:分别为5%及1%)的数据。有无显著差异用Student的t检验来判定。
由试验例2的结果(图3及图4)可知,与阴性对照组相比,阳性对照组中的肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度显示出明显较高的值。另一方面,与阳性对照组相比,SBC8803给药组中的肝脏中的总胆固醇浓度及肝脏甘油三酯浓度显示出明显较低的值。
〔试验例3:肝脏的病理组织标本的制作〕
对于随机选择的阳性对照组的3个体、SBC8803给药组的3个体及阴性对照组的2个体,将试验例2中摘出的肝脏的一部分用10%福尔马林溶液进行组织固定,制成病理组织标本(油红O染色图)。
阳性对照组的小鼠肝脏的油红O染色图整体带有红色,且确认存在大颗的脂肪滴(macrovesicular steatosis)。SBC8803给药组中,虽然确认存在脂肪滴,但其数量少于阳性对照组。由油红O染色图也可确认,短乳杆菌SBC8803菌株的给药抑制了酒精性脂肪肝的发病。
〔试验例4:肝脏中的TNF-α、SREBP-1及SREBP-2的表达量的测定〕
使阳性对照组、SBC8803给药组和阴性对照组的小鼠分别摄取规定的饲料或菌株49天。在第49天从小鼠体内摘出肝脏,用Trizol(英杰公司(ィンビトロジェン社))抽提总RNA,将其用RNeasy迷你试剂盒(RNeasy Mini Kit)(凯杰公司(キアゲン社))纯化。接着,用Quant iTect逆转录试剂盒(QuantiTect Reverse Transcription Kit)(凯杰公司)由RNA制备cDNA,通过采用SYBR绿(SYBR Green)的实时PCR测定TNF-αmRNA量、SREBP-1mRNA量及SREBP-2mRNA量。另外,TNF(肿瘤坏死因子)-α是促进炎症反应的细胞因子,SREBP(固醇调节元件结合蛋白)-1及SREBP-2分别是促进甘油三酯及胆固醇的从头合成的转录因子。
结果示于表2及图5~7。图5是表示各组小鼠的肝脏中的TNF-αmRNA量的图。图6是表示各组小鼠的肝脏中的SREBP-1mRNA量的图。图7是表示各组小鼠的肝脏中的SREBP-2mRNA量的图。另外,表2及图5~7中,TNF-αmRNA量、SREBP-1mRNA量、SREBP-2mRNA量以相对于同时测定的GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)mRNA量的比例(平均值±标准差)表示。
[表2]
TNF-α | SREBP-1 | SREBP-2 | |
阳性对照组 | 0.868±0.353 | 2.543±0.503 | 2.744±0.643 |
SBC8803给药组 | 0.346±0.103 | 1.577±0.459 | 1.252±0.397 |
阴性对照组 | 0.170±0.091 | 0.801±0.624 | 1.313±0.972 |
由试验例4的结果(表2、图5~7)可知,与阴性对照组相比,阳性对照组中的肝脏中的TNF-α、SREBP-1及SREBP-2的表达量显著升高。另一方面,与阳性对照组相比,SBC8803给药组中的肝脏中的TNF-α、SREBP-1及SREBP-2的表达量显著降低。
由以上的试验例可以确认,如果使用本发明的酒精性肝病抑制剂,则可抑制因酒精饮料的摄取而引起的肝病。
产业上利用的可能性
本发明的酒精性肝病抑制剂可用于酒精性肝病的预防和治疗。
Claims (6)
1.一种酒精性肝病抑制剂,其特征在于,以属于短乳杆菌(Lactobacillus brevis)的菌株的菌体或其处理物为有效成分。
2.如权利要求1所述的酒精性肝病抑制剂,其特征在于,所述菌株是属于短乳杆菌短亚种(Lactobacillus brevis subspecies brevis)的菌株。
3.如权利要求2所述的酒精性肝病抑制剂,其特征在于,所述菌株是短乳杆菌(Lactobacillus brevis)SBC8803菌株,保藏号:FERM BP-10632。
4.一种医药品,其特征在于,含有权利要求1~3中的任一项所述的酒精性肝病抑制剂。
5.一种饮食品添加剂,其特征在于,含有权利要求1~3中的任一项所述的酒精性肝病抑制剂。
6.一种饮食品,其特征在于,含有权利要求1~3中的任一项所述的酒精性肝病抑制剂。
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