NO329434B1

NO329434B1 - Anvendelse av 6-(4-hydroksybenzylamino)purin til kosmetiske formal

Info

Publication number: NO329434B1
Application number: NO20040469A
Authority: NO
Inventors: Rene Lenobel; Miroslav Strnad; Karel Dolezal; Igor Popa; Jan Holub; Stefaan Werbrouck; Marek Zatloukal
Original assignee: Ustav Experiment Lni Botan Aka
Priority date: 2001-08-02
Filing date: 2004-02-02
Publication date: 2010-10-18
Also published as: AU2008203837A1; MXPA04000936A; EP1419157B1; SG127738A1; CN1556808A; RS52389B; HUP0401407A3; CZ20012818A3; RU2004105843A; US8552013B2; RU2302421C2; US20050043328A1; AU2002363362B2; US7279482B2; YU8904A; IL160136A0; US20080014227A1; CA2455972A1; CA2455972C; NO20040469L

Description

Teknisk område

Oppfinnelsen angår anvendelse av 6-(4-hydroksybenzylamino)purin til kosmetiske formål, og spesielt til inhibering av aldring og aldringstegn i epidermalceller hos pattedyr så som keratinocytter eller fibroblaster. Oppfinnelsen angår også et kosmetikum omfattende 6-(4-hydroksybenzylamino)purin eller farmasøytiske akseptable salter derav med en farmasøytisk bærer.

Bakqrunnsteknikk

Siden alle levende organismer på jorden har utviklet seg sammen over mange mil-lioner år, kan tilstedeværelsen av regulatoriske interaksjoner av planteforbindelser slik som cytokininer, bli antatt i dyr og mennesker. Cytokininavledede forbindelser påvirker sannsynligvis mange forskjellige molekylære mekanismer i animalske og humane celler. Søker har nylig oppdaget at nye generasjoner av antiinflammatoris-ke, antikreft, immunosuppressive, antivirale og andre medikamenter kan være basert på N<6->substituerte puriner og deres derivater.

Målet for foreliggende oppfinnelse er å fremskaffe antisenescente forbindelser som har forbedret selektivitets- og effektivitetsindeks, det vil si som er mindre toksiske og likevel mer effektive enn tidligere kjente analoger.

Beskrivelse av oppfinnelsen

Mål for foreliggende oppfinnelse er anvendelsen av 6-(4-hydroksybenzyl-amino)purin til kosmetiske formål samt kosmetika omfattende denne forbindelsen sammen med en farmasøytisk bærer.

De kosmetiske sammensetninger ifølge foreliggende oppfinnelse, fremstilles på en i og for seg kjent måte, for eksempel ved hjelp av konvensjonell blanding, granule-ring, belegging, oppløsning eller frysetørkingsprosesser.

Foretrukket blir oppløsninger av den aktive bestanddel, og i tillegg også suspensjoner eller dispersjoner, spesielt isotone, vandige oppløsninger, dispersjoner eller suspensjoner brukt, idet det er mulig for disse å bli fremstilt for bruk, for eksempel i tilfelle med frysetørkede sammensetninger som omfatter den aktive substans i seg selv eller sammen med et bæremateriale, for eksempel mannitol. De kosmetiske sammensetninger kan bli sterilisert og/eller omfatte eksipienter, for eksempel preservativer, stabilisatorer, fuktemidler og/eller emulgatorer, stabiliseringsmidler, og de fremstilles på i og for seg kjent måte, for eksempel ved hjelp av konvensjonell oppløsning eller frysetørkingsprosesser. Oppløsningene eller suspensjonene som er nevnt kan omfatte viskositetsøkende substanser, så som natrium, karboksymetyl-cellulose, dekstran, polyvinylpyrrolidon eller gelatin.

Suspensjoner i olje omfatter som oljekomponenten, vegetabilske, syntetiske eller semi-syntetiske oljer. Oljer som kan bli nevnt er spesielt flytende fettsyreestere som inneholder som syrekomponent, en langkjedet fettsyre som har 8-22, spesielt 12-22 karbonatomer, for eksempel laurinsyre, tridecylsyre, myristinsyre, pentade-cylinsyre, palmitinsyre, margarinsyre, stearinsyre, syre, arakidonsyre, beheninsyre eller tilsvarende umettede syrer, foreksempel oleinsyre, elaidinsyre, eurinsyre, brasidinsyre eller linoleinsyre, om passende med tilsetningen av antioksidanter, for eksempel vitamin E, p-karoten eller 3,5-di-tert-butyl-4-hydroksytoluen. Alkohol-komponenten av disse fettsyreestere har ikke mer enn 6 karbonatomer og er mono- eller polyhydrisk, for eksempel mono-, di- eller trihydrisk alkohol, for eksempel metanol, etanol, propanol, butanol eller pentanol, eller isomerer derav, men spesielt blykol og glycerol. Fettsyreestere er følgelig, for eksempel etyloleat, isopropylmyristat, isopropylpalmitat, "Labrafil M 2375" (polyoksyetylenglykol triol-etat fra Gattefoseé, Paris), "Labrafil M 1944 CS" (umettede polyglykolerte glycerider fremstilt ved en alkoholyse av aprikoskjerneolje og bestående av glycerider og polyetylenglykolestere fra Gattefoseé, Paris), "Labrasol" (mettede polyglykolerte glycerider fremstilt ved en alkoholyse av TCM og dannet av glycerider og polyetylenglykolestere, fra Gattefoseé, Paris) og/eller "Miglyol 812" (triglycerid av mettede fettsyrer av kjedelengde C8 til C12 fra Huls AG, Tyskland) og særskilt vegetabilske oljer, så som bomullsfrøolje, mandelolje, olivenolje, lakserolje, sesamolje, soya-bønneolje og spesielt jordnøttolje.

Passende bærematerialer er spesielt fyllmaterialer, så som sukkere, for eksempel laktose, sukrose, mannitol eller sorbitol, cellulosepreparater og/eller kalsiumfosfa-ter, for eksempel trikalsiumdifosfat, eller kalsium hyd rogenfosfat og ytterligere bin-demidler, så som stivelser, for eksempel mais, hvete, ris eller potetstivelse, metyl-cellulose, hydroksypropylmetylcellulose, natrium ka rboksymetylcel lu lose og/eller polyvinylpyrrolidon og/eller, om ønsket, desintegratorer, så som de ovennevnte stivelser og videre, karboksymetylstivelse, fornettet polyvinylpyrrolidon, algininsyre eller et salt derav, så som natriumalginat. Ytterligere eksipienter er spesielt strøm-ningsregulatorer og smøremidler, for eksempel salisylsyre, stivelse, stearinsyre eller salter derav, så som magnesiumstearat eller kalsiumstearat, og/eller polyetylenglykol eller derivater derav.

Salver er olje-i-vann emulsjoner, hvilke omfatter ikke mer enn 70 %, men foretrukket 20-50 % vann eller vandig fase. Fettfasen består spesielt av hydrokarboner, for eksempel vaselin, parafinolje eller harde parafiner, som fortrinnsvis omfatter egnede hydroksyforbindelser, så som fettsyrealkoholer eller estere derav, for eksempel cetylalkohol eller ullvoksolje, så som ullvoks for å forbedre den vann-bindende kapasitet. Emulgatorer er tilsvarende lipofile substanser, så som sorbitan, fettsyreestere (Spans), for eksempel sorbitanoleat og/eller sorbitanisostearat. Additiver til den vandige fase er for eksempel humektanter, så som polyalkoholer, for eksempel glycerol, propylenglykol, sorbitol og/eller polyetylenglykol eller preservativer og luktfremmende substanser.

Fettkremer er vannfrie og omfatter som base spesielt hydrokarboner, for eksempel parafin, vaselin eller parafinolje og videre, naturlig forekommende eller semi-syntetiske fettsorter, for eksempel hydrogenerte kokosnøttfettsyretriglyserider eller foretrukket hydrogenerte oljer, for eksempel hydrogenert jordnøtt- eller lakserolje og videre, partielle fettsyreestere av glycerol, for eksempel glycerol mono- og/eller distearat, for eksempel fettalkoholene. De inneholder også emulgatorer og/eller additiver nevnt i forbindelse med salvene som øker opptak av vann.

Kremer er olje-i-vann emulsjoner som omfatter mer enn 50 % vann. Oljebaser som blir brukt er spesielt fettalkoholer, for eksempel lauryl, cetyl eller stearylalkoholer, fettsyrer, for eksempel palmitin- eller stearinsyre, flytende til faste vokstyper, for eksempel isopropylmyristat, ullvoks eller bivoks, og/eller hydrokarboner, for eksempel vaselin (petrolatum) eller parafinolje. Emulgatorer er overflateaktive substanser med i hovedsak hydrofile egenskap så som tilsvarende ikke-joniske emulgatorer, for eksempel fettsyreestere av polyalkoholer eller etylenoksyaddukter derav, så som polyglyserinsyre fettsyreestere eller polyetylensorbitan fettestere (Tweens) og videre polyoksyetylen fettalkoholetere eller polyoksyetylen fettsyreestere, eller tilsvarende joniske emulgatorer, så som alkalimetallsalter av fettalkoholsulfater, for eksempel natrium laurylsulfat, natrium cetylsulfat eller natrium stearylsulfat, som vanligvis blir brukt i nærvær av fettalkoholer, for eksempel cetylstearylalkohol eller stearylalkohol. Additiver til den vandige fase er bl.a. midler som forhindrer kremene fra å tørke ut, for eksempel polyalkoholer så som glycerol, sorbitol, propylenglykol og/eller polyetylenglykoler og ytterligere preservativer og luktfremmende substanser.

Pastaer er kremer og salver som har sekresjonsabsorberende pulverbestanddeler så som metalloksider, for eksempel titanoksid eller zinkoksyd og videre talkum og/eller aluminiumsilikater, som har oppgaven å binde fuktigheten eller sekresjo-nene som er til stede.

Skum blir administrert fra trykksatte beholdere og der er flytende olje-i-vann emulsjoner som er til stede i aerosolskum. Som drivgasser blir halogenerte hydrokarboner så som polyhalogenerte alkaner, for eksempel diklorfluormetan og diklor-tetrafluoretan, eller fortrinnsvis ikke-halogenerte, gassformige hydrokarboner, luft, N20 eller karbondioksid brukt. Oljefasene som benyttes er bl.a. dem nevnt ovenfor for salver og kremer og additivene som er nevnt der blir likeledes benyttet.

Figurer

I figur 2 er det vist senescente celler i kultur av humane fibroblaster (B) (de andre celler (A)) farget blå grunnet virkningen av p-galaktosidase på substratet X-gal (5-brom-4-klor-3-indolyl-p-D-galaktopyranosid) (1 mg/ml).

De følgende eksempler virker til å illustrere oppfinnelsen uten å begrense omfanget derav.

Eksempler

Referanse Eksempel 1

6-(3-klorbenzylamino)purin

3 mmol av 6-klorpurin ble oppløst i 15 ml butanol. Derpå ble 4 mmol 3-klorbenzyl-amin og 5 mmol trietylamin tilsatt og blandingen ble oppvarmet til 90 °C i 4 timer. Etter avkjøling ble det utfelte produkt filtrert fra, vasket med kaldt vann og n-butanol og krystallisert fra etanol eller dimetylformamid. Smeltepunkt = 252°C, TLC (CHCI3:MeOH: kons. NH4OH (8:2:0.2, v/v/v)): enkel spot; HPLC: renhet> 98 %. Utbytte 95 %.

Referanse Eksempel 2

Blanding av 10 mmol adenin, 12 mmol 2-metoksybenzaldehyd og 5 ml 98-100 % maursyre ble kokt under tilbakeløp i 3 dager. Etter inndampning av maursyre ble det resulterende materialet avkjølt og deretter vasket med 40 ml dietyleter. Fast residium ble kokt med 60 ml vann, filtrert og grovproduktet krystallisert fra etanol. Utbytte 45 %.

Eksempel 3

Inhibering av senescens med utvalgte forbindelser

I dette eksempel ble humane, diploide fibroblaster (HCA-celler av forskjellige pas-sasjenivåer: passasje 25 - betegnet HCA25; passasje 45 - betegnet HCA45; passasje 80 - betegnet HCA80) farget for p-galaktosidaseaktivitet. Mediet som ble brukt for celledyrking ble fjernet, cellene ble vasket to ganger i PNS og fiksert i 2-3 ml av fikseringsoppløsning bestående av 2 % formaldehyde og 0,2 % glutaraldehyd i PBS. Cellene ble inkubert ved romtemperatur i 5 minutter, derpå vasket to ganger med PBS. Cellene ble derpå inkubert ved 37 °C (uten C02) i 1 til 16 timer i 2-3 ml av en oppløsning omfattende kalium ferricyanid (5 mM), kalium ferrocyanid (5 mM), MgCI2 (2 mM), X-gal (5-brom-4-klor-3-indol-p-D-galaktopyranosid) (1 mg/ml), i sitronsyre/fosfatbuffer, pH 6,0). Etter denne inkuberingsperioden ble cel-leprøvene observert for å påvise tilstedeværelsen av blå celler, noe som indikerer at X-gal hadde blitt spaltet (positivt senescente celler). I dette forsøk ble senescente celler, men ikke andre celler, farget blå grunnet virkningen av p-galaktosidase på substratet.

Som vist i tabell 5 ble, med økende antall passasjer, fargingen mørkere. For de eldste celler var det kun blå celler i området fra klart blått til en nesten gjennomsik-tig farge. N6 -substituerte adeninderivater var meget effektive i å oppnå et meget lavere nivå av senescente celler etter 80 passasjer. I tilfellet med langvarende dyr-king var de dyrkede celler i stand til å leve en 30 % lenger periode enn kontrollcel-lene.

Claims

1. Anvendelse av 6-(4-hydroksybenzylamino)purin til kosmetiske formål.

2. Anvendelse ifølge krav 1, hvor det kosmetiske formål er inhibering av aldring og aldringstegn i epidermalceller hos pattedyr så som keratinocytter eller fibroblaster.

3. Kosmetikum omfattende 6-(4-hydroksybenzylamino)purin eller dets farma-søytisk akseptable salt innbefattende en farmasøytisk bærer.