CZ307868B6

CZ307868B6 - Deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminu, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití

Info

Publication number: CZ307868B6
Application number: CZ2017-237A
Authority: CZ
Inventors: Jana Bíbová; Václav Mik; Marek Zatloukal; Lucie Plíhalová; Jiří Grúz; Lukáš Spíchal; Karel DoleĹľal; Miroslav Strnad
Original assignee: Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci
Priority date: 2017-04-28
Filing date: 2017-04-28
Publication date: 2019-07-10
Also published as: CZ2017237A3; WO2018196893A1; EP3615535A1; US11643413B2; EP3615535B1; US20200157105A1

Abstract

Řešení se týká-disubstituovaných derivátů 9-(2-oxacykloalkyl)-9-purin-2,6-diaminu vzorce I, a jejich použití jako léčiv a kosmetik. Sloučeniny podle tohoto řešení vykazují řadu biologických aktivit souvisejících s inhibicí oxidačního stresu, zejména proti stárnutí, protizánětlivé a proti neurodegenearaci. Řešení se rovněž týká kosmetických a farmaceutických přípravků obsahujících tyto deriváty jako aktivní sloučeniny.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká /Vý/fy-disubstitiiovanýcli derivátů 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů, jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích a přípravků obsahujících tyto deriváty.

Dosavadní stav techniky

Obecně platí, že přírodní cytokininy jsou N⁶-substituované deriváty adeninu. Prvním nalezeným cytokininem byl kinetin (K, N⁶-fúrfúryladenin), který byl izolován a identifikován v roce 1955 jako produkt degradace DNA; kinetin podporuje buněčné dělení u rostlin. Kinetin byl považován za artefakt, který pochází z autoklávované DNA spermatu sledě nebo vzniká při dlouhodobém skladování DNA. Kinetin, jakož i další cytokininy, mohou být dále substituovány v poloze C2, N3, NI N9 purinového kruhu. Nejčastěji se vyskytují N9-nukleosidy a nukleotidy. Chemická struktura kinetinu jasně ukazuje, že reakce adeninového zbytku DNA s fúrfúralem je možným biosyntetickým postupem. Nedávné experimenty ukazují, že furfural, což je oxidovaný cukerný zbytek, je tvořen během oxidačního poškození DNA in vitro. Furfural pochází z hydroxylového radikálu oxidace zbytku deoxyribózy na uhlíku 5', který reaguje s aminoskupinou adeninu, v důsledku čehož tvoří Schiffovu bázi. Dalším intramolekulámím přesmykem se získá kinetin (Barciszewski et al. FEBS Lett 414:457-460, 1997). Tato zjištění naznačují, že kinetin je důležitou součástí nové resyntézy hydroxylových radikálů, které tvoří sink volných radikálů, což je v souladu s hypotézou, že cytokininy jsou produkty oxidativního metabolismu buňky. Toto je hlavní mechnismus, jakým buňky neutralizují škodlivé vlastnosti reaktivních kyslíkových radikálů (ROS) a reagují na oxidativní stres tím, že indukují molekulární mechanismy obrany a opravy (Barciszewski et al., Int. J. Biol. Macromol. 40: 182-192, 2007). V poslední době byl zkoumán účinek N⁶-benzyladeninu a kinetinu na základní oxidační parametry stresu, jakými jsou aktivity antioxidačních enzymů, redukovaného glutathionu a thiolové skupiny a peroxidace lipidů (Jablonska-Trypuc et al. Mol Cell Biochem 413:97-107, 2016). Antioxidační kapacita čtyř přírodních N⁶-substituovaných derivátů adeninu (cytokininů) byla poprvé hodnocena in vitro pomocí fluorimetrických a spektrofotometrických testů, tj. oxygen radical absorbance capacity (ORAC), trolox equivalence antioxidant capacity (TEAC) a 2-deoxyribose degradation (2-DRA) testů (Brizzolari et al. J. Chromatogr. B 1019: 164-168, 2016). Za posledních 40 let je oxidační stres stále více uznáván jako faktor přispívající ke stárnutí a k různým formám patofyziologie obecně spojeným se stárnutím. Pohled na oxidační stres je do značné míry superoxidcentrický, neboť jsme se zaměřili na patologické zdroje těchto od kyslíku odvozených volných radikálů a na druhy molekulárního spouštění, stejně jako na ochranu poskytovanou antioxidačními enzymy, zejména superoxid dismutázou, katalázou a glutathion peroxidázou. V posledním desetiletí se pohled na oxidativní stres značně rozšířil, a ten je nyní často viděn jako nerovnováha, která má svůj původ v našich genech a způsobech regulace genové exprese. V centru tohoto nového zaměření je transkripční faktor, tzv. nukleární faktor-2 (erythroid-derived 2), nebo Nrf2. Nrf2 je označován jako hlavní regulátor antioxidační reakce, modulující expresi stovek genů, včetně nejen známých antioxidačních enzymů, avšak i velkého množství genů řídících zdánlivě různorodé procesy, např. imunitní a zánětlivé reakce, tkáňové remodelace a fibrózy, karcinogeneze a metastázy, a dokonce i kognitivní dysfúnkce a návykové chování. To znamená, že dysregulace Nrf2-regulovaných genů poskytuje logické vysvětlení pro spojení, přímá i nepřímá, mezi pozorovatelným oxidativním stresem a až 200 lidskými nemocemi zahrnujícími různé fyziologické procesy, z nichž v každém se promítá síť zahrnující mnoho genových produktů. Evoluční kooperace těchto mnoha genů pod společnou kontrolou Nrf2 naznačuje, že imunitní a zánětlivé systémy mohou vyžadovat zvýšenou antioxidační ochranu, na rozdíl od konstitutivního oxidativního stresu vyplývajícího z mitochondriální spotřeby kyslíku pro metabolické účely (Hybertson et al. Molecular Aspects of Medicine 32 (2011) 234-246).

- 1 CZ 307868 B6

Proto je předmětem tohoto vynálezu poskytnout novou generaci analog cytokininů, které vykazují silné antioxidační vlastnosti a/nebo schopnost regulovat expresi důležitého stresového transkripčního faktoru Nrf2. Nová generace cytokininových sloučenin vykazujících uvedené vlastnosti najde použití v prevenci a léčbě mnoha onemocnění souvisejících s oxidačním stresem v kůži, například rakoviny kůže a psoriázy. Oxidativní stres a jeho procesy jsou rovněž nezbytné pro vývoj fibrózy u fibrotických poruch, jako je sklerodermie, GVHD, hypertrofické jizvy, NSF a jiná kožní patologická onemocnění. Nová generace cytokininových sloučenin pro použití pro léčbu kožních onemocnění vyvolaných zvýšeným oxidativním stresem se vyznačuje zlepšenou selektivitou a indexem účinnosti, tedy zahrnuje látky, které jsou méně toxické a ještě účinnější než až dosud známé analogy.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou /V²,/V⁶-disubstituované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9Hpurin-2,6-diaminů obecného vzorce I, pí

HN

(i) ve kterém

- R² a R³ jsou nezávisle vybrány z H, -(CH₂)_mCH₃, m = 0 nebo 1 nebo 2, -CH₂(CH₃)₂, (CH₂)„-N(CH₃)₂, n = 2 nebo 3, přičemž alespoň jeden ze substituentů R² a R³ je alkyl nebo dimethylaminoalkyl;

- o je celé číslo v rozmezí 2 až 5, tedy 2 nebo 3 nebo 4 nebo 5, přičemž vodík v alespoň jedné methylenové skupině (CH₂) v substituentů na N9 může být volitelně nahrazen methylem nebo methoxy skupinou, tedy substituent na N9 je vybrán ze skupiny zahrnující oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl nebo oxepan-2-yl, volitelně substituované alespoň jedním methylem nebo methoxylem;

- je vybráno ze skupiny zahrnující

- fúrfuryl nebo fúrfuryl substituovaný alespoň jednou, s výhodou právě jednou, methylovou nebo methoxy skupinou,

- benzyl nebo benzyl substituovaný alespoň jedním substituentem, s výhodou jedním nebo dvěma nebo třemi substituenty, vybraným ze skupiny zahrnující methyl, trifluormethyl, hydroxy, methoxy, trifluormethoxy, halogen, amino, methoxykarbonyl nebo acetoxy,

- 3-methylbut-2-en-l-yl,

- 3-methylbut-3-en-l-yl,

- 4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -y 1,

- 4-hydroxy-3-methylbutyl.

a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

-2CZ 307868 B6

Farmaceuticky přijatelnými solemi jsou zejména soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo adiční soli s kyselinami. S výhodou se jedná o farmaceuticky nebo kosmeticky akceptovatelné soli.

V případě, že jsou v molekule chirální centra, pak tento vynález zahrnuje i opticky aktivní isomery, jejich směsi a racemáty.

S výhodou, je-li R² nebo R³ -(Cl FjůCI b)?, je druhý z těchto substituentů vodík.

S výhodou je skupina -N(R²)(R³) vybrána ze skupiny zahrnující methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-dimethylamino)propyl] amino.

S výhodou je skupina -N(R²)(R³) vybrána ze skupiny zahrnující methylamino, ethylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino.

S výhodou je R¹ vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, 3-methylfurfuryl, 4-methylfurfuryl, 5methylfurfuryl, 3-methoxyfurfuryl, 4-methoxyfurfuryl, 5-methoxyfurfuryl, benzyl, 2methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-(trifluormethyl)benzyl, 3(trifluormethyl)benzyl, 4-(trifluormethyl)benzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4hydroxybenzy lamino, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl, 2(trifluormethoxy)benzyl, 3-(trifluormethoxy)benzyl, 4-(trifluormethoxy)benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-5 - chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2-brombenzyl,

3- brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-jodbenzyl, 3-jodbenzyl, 4-jodbenzyl, 2-aminobenzyl, 3aminobenzyl, 4-aminobenzyl, 2-(methoxykarbonyl)benzyl, 3-(methoxykarbonyl)benzyl, 4(methoxykarbonyl)benzyl, 2-acetoxybenzyl, 3-acetoxybenzyl, 4-acetoxybenzyl, 2,3dihydroxybenzyl, 2,5-dihydroxybenzyl, 3,4-dihydroxybenzyl, 3,5-dihydroxybenzyl, 2,3dimethoxybenzyl, 2,5-dimethoxybenzyl, 3,4-dimethoxybenzyl, 3,5-dimethoxybenzyl, 2,6difluorbenzyl, 3,4-difluorbenzyl, 3,5-difluorbenzyl, 2,3-dichlorbenzyl, 2,4-dichlorbenzyl, 3,4dichlorbenzyl, 3,5-dichlorbenzyl, 2-hydroxy-3-methylbenzyl, 2-hydroxy-5-methylbenzyl, 2hydroxy-3-methoxybenzyl, 2-hydroxy-4-methoxybenzyl, 3-hydroxy-4-methoxybenzyl, 4hydroxy-2-methoxybenzyl, 4-hydroxy-3-methoxybenzyl, 3-fluor-4-hydroxybenzyl, 3-chlor-

4- hydroxybenzyl, 4-fluor-3-hydroxybenzyl, 4-chlor-3-hydroxybenzyl, 2-chlor-4-fluorbenzyl, 2-chlor-6-fluorbenzyl, 3,4,5-trihydroxybenzyl, 3,4,5-trimethoxybenzyl, 2,3,4-trifluorbenzyl, 2,3,6-trifluorbenzyl, 3,4,5-trifluorbenzyl, 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzyl, 3-methylbut-2-en-

1- yl, 3-methylbut-3-en-l-yl, 4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yl, 4-hydroxy-3-methylbutyl.

S výhodou je substituent na N9 vybrán z tetrahydro-2H-pyran-2-ylu a tetrahydrofuran-2-ylu, které mohou být volitelně substituované alespoň jednou, s výhodou jednou, methylovou nebo methoxylovou skupinou.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminové deriváty obecného vzorce I vybrané ze skupiny zahrnující:

2- (methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylaminojethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6-furfurylamino-9-(oxetan-2yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylaminojethyljamino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-methylfurfuryl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylaminojethyljamino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-methylfurfuryl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin, 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylaminojethyljamino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(5-methylfurfuryl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2

-3CZ 307868 B6 (methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3- (dimethylamino)propyl]amino)-6-(3-methoxyfurfurylamino)9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-(4-methoxyfurfurylamino)9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-(5-methoxyfurfurylamino)9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin;

2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-benzylamino-9-(oxetan-2yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-methylbenzyl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2- propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-methylbenzyl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2- propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-methylbenzyl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[2(trifluormethyl)benzyl] amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6- {[3-(trifluormethyl)benzyl] amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[4(trifluormethyl)benzyl] amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2- propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-hydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-methoxybenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2- propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-methoxybenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-methoxybenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[2(trifluormethoxy)benzyl]amino}-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3-4CZ 307868 B6 (dimethylamino)propyl]amino)-6-{[3-(trifluormethoxy)benzyl]amino}-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propy lamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethy lamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[4(trifluormethoxy)benzyl]amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-fluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3- (dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-fluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-fluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-chlorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-chlorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3- (dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-chlorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-brombenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-brombenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-brombenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-jodbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-jodbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-jodbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-aminobenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-aminobenzyl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-aminobenzyl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6- {[2(methoxykarbonyl)benzyl]amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino,

-5CZ 307868 B6 dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[3-(methoxykarbonyl)benzyl]amino}-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propy lamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-{[4(methoxykarbonyl)benzyl]amino }-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-acetoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-acetoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-acetoxybenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,3dihydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6-[(3,4dihydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,5-dihydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,3dimethoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,5-dimethoxybenzyI)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6-[(3,4dimethoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,5-dimethoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,6-difluorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,4-difluorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,5-difluorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,3-dichlorbenzyl)amino]-6CZ 307868 B6

9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,4-dichlorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,4-dichlorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,5-dichlorbenzyl)amino]9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-hydroxy-3methylbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H/-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-hydroxy-5-methylbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-hydroxy-4—methoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)eťhyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-hydroxy-4methoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-hydroxy-2-methoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(meťhylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-hydroxy-3methoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-fluor-4-hydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrořuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-chlor^lhydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-fluor-3-hydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-chlor-3hydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-chlor-4-fluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2-chlor-6fluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-7 CZ 307868 B6

2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,4,5trihydroxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3,4,5-trimethoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6-[(2,3,4trifluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(2,3,6-trifluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino)-6-[(3,4,5trifluorbenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin.

2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3-methylbut-2-en-lyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)9H-purin; 2-(methy lamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(3methylbut-3-en-l-yl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-(E)-[(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yl)amino]-9(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl]amino)-6-(Z)-[(4-hydroxy-3methylbut-2-en-l-yl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2yl, oxepan-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl] amino, [3(dimethylamino)propyl]amino)-6-[(4-hydroxy-3-methylbutyl)amino]-9-(oxetan-2-yl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydro-2H-pyran-2-yl, oxepan-2-yl)-9H-purin, a jejich farmaceuticky využitelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, jakož i jejich adiční soli s kyselinami.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou /V²,/V⁶-disubstitiiovanč-9-(2oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminy obecného vzorce I vybrané ze skupiny zahrnující: 2-(methylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin, 2-(ethylamino)-6furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2-(dimethylamino)-6-furfurylamino-9(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2-(diethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2yl)-9H-purin; 2-{ [2-(dimethylamino)ethyl]amino}-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)9H-purin; 2-(methylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin, 2(ethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin; 2-(dimethylamino)6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin; 2-(diethylamino)-6-furfurylamino9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin; 2-{ [2-(dimethylamino)ethyl] amino }-6furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin a jejich soli, ve kterých může být fůrfůrylová skupina volitelně substituovaná alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující methyl nebo methoxy skupinu.

- 8 CZ 307868 B6

N²,N⁶-Disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminy podle tohoto vynálezu mají širokou škálu biologických aktivit, mezi něž patří antioxidační, antisenescenční, antiaging a prodiferenciační aktivity, což jsou aktivity zejména použitelné ve farmaceutických a kosmetických aplikacích. Látky podle tohoto vynálezu vykazují antioxidační, prodiferenciační, antisenescenční a antiaging (protistámoucí) vlastnosti o zvýšené selektivitě a účinnosti a rovněž o minimální nebo žádné toxicitě v porovnání s analogy známými ze současného stavu techniky.

Předmětem tohoto vynálezu jsou N²,N⁶-disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6diaminy obecného vzorce I pro použití při ochraně buněk jak in vivo, tak in vitro, jako antioxidanty pro inhibici nepříznivých metabolických procesů v rostlinách a zvířatech.

Předmětem tohoto vynálezu jsou N²,N⁶-disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6diaminy obecného vzorce I pro použití k aktivaci signální dráhy Nrf2-elementu antioxidativní odpovědi, která kontroluje expresi genů, jejichž proteinové produkty jsou zapojeny v detoxifíkaci a eliminaci reaktivních oxidantů a elektrofilních agens cestou konjugativních reakcí a cestou zvýšení buněčné antioxidativní kapacity.

Předmětem tohoto vynálezu jsou N²,N⁶-disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6diaminy obecného vzorce I pro použití jako antioxidanty pro inhibici peroxidace lipidů, nukleových kyselin a proteinů v rostlinách a zvířatech in vivo i in vitro.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být použity jako léčiva. Mohou být použity pro léčbu řady onemocnění u savců, zejména člověka. S výhodou zahrnují tato onemocnění choroby kůže. Sloučeniny podle toho vynálezu mohou být rovněž použity jako antineurodegenerativní léčiva nebo pro potlačení imunostimulace (např. ošetření artritidy nebo potlačení rejekce transplantátů). Sloučeniny podle vynálezu vykazují zejména antioxidační, protizánětlivé a antisenescentní vlastnosti.

Tento vynález také poskytuje látky obecného vzorce I pro použití v prevenci a léčbě onemocnění zahrnujících oxidační stres v kůži, například rakoviny kůže, psoriázy, fibrózy u fibrotických poruch, jako je sklerodermie, reakce štěpu proti hostiteli (GVHD), hypertrofické jizvy, nefirogenní systémové fibrózy (NSF). Dále je lze použít pro léčbu dalších chorob zahrnujících oxidační stres, např. při léčbě lupenky, alergického ekzému, toxického ekzému, atopické dermatitidy, lichen planus, hyperpigmentace a leze herpes simplex, ichtyózy, papilomu, Bowenovy choroby, seboroické keratózy, aktinické keratózy, bazálního a spinocelulámího karcinomu.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity v kosmetice. Kosmetické použití těchto sloučenin a jejich solí zahrnuje inhibici, zpomalení, nebo redukci nepříznivých vlivů stárnutí a senescence buněk, zejména epidermálních buněk jakými jsou keratinocyty nebo fibroblasty, in vivo a in vitro; kosmetické použití zahrnuje rovněž vylepšení celkového vzhledu a vlastností pokožky savce, zejména člověka, včetně změn souvisejících s věkem a dalších změn, např. akné, erytém, zarudnutí kůže.

Tento vynález rovněž poskytuje použití sloučenin obecného vzorce I pro inhibici senescence a stárnutí u zvířat a rostlin, přičemž toto použití zahrnuje aplikaci účinného množství N²,N⁶disubstituovaného-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminového derivátu in vivo nebo in vitro.

Tento vynález dále poskytuje použití N²,N⁶-disubstituovaného-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin2,6-diaminového derivátu při rejuvenizaci pokožkových buněk, stimulaci buněčné proliferace stárnoucích buněk a/nebo jejich diferenciace v organismu.

Jak je zde uvedeno, zlepšení, inhibice a oddálení nepříznivých účinků stárnutí živočišných buněk znamená, že vývoj morfologických změn, které se normálně vyskytují ve spojitosti se stárnutím v

-9CZ 307868 B6 normálních savčích buňkách in vitro nebo in vivo, je zpomalen, obrácen, nebo zpožděn. Nepříznivé účinky stárnutí rovněž zahrnují se stářím spojené změny genové exprese a proteinové biosyntézy. Za zlepšující účinky jsou v tomto vynálezu považovány ty, které se projevují zvýšením a rychlostí buněčného růstu nebo celkovou proliferační kapacitou ošetřených buněk. Zlepšení, odstranění či oddálení nepříznivých vlivů stárnutí na buněčné úrovni je možné detekovat jako zpomalení nebo obrat morfologických a fenotypických změn souvisejících s věkem, které se běžně vyskytují při stárnutí buněk. Změny související s věkem in vivo zahrnují změny v savčích tkáních, jakými jsou vývoj, nárůst počtu a hloubky vrásek, čar, pokleslá kůže, odbarvení, tvorba stařeckých skvrn, kožovatění, nebo nažloutlý vzhled, spojené s kosmetických vzhledem kůže i změnami ve strukturální a funkční integritě kožních tkání.

N²,N⁶-Disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminové deriváty podle tohoto vynálezu jsou účinné v zlepšování celkového vzhledu a kondice kůže, a to včetně eliminace změn souvisejících se stářím a dalších nežádoucích změn pokožky (např. akné, erytém, zarudnutí kůže, rosacea).

Tento vynález dále poskytuje kosmetické a/nebo farmaceutické kompozice obsahující jeden nebo více N²,N⁶-disubstituovaných-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminovů obecného vzorce I společně s kosmeticky a/nebo farmaceuticky akceptovatelným nosičem.

N²,N⁶-Disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminové deriváty obecného vzorce I mohou být dále použity jako faktory buněčného dělení a diferenciace savčích a lidských buněk.

Farmaceutické a kosmetické kompozice

Vhodné cesty pro systémovou aplikaci jsou orální, inhalační, injekční (intravazální, intramuskulámí, subkutanní), bukální, sublingualní a nasální. Lokální podání je možné ve formě očních a ušních kapek a mastí, ve formě vaginálních přípravků a rektálních čípků. Pro terapii onemocnění skalpu a kůže jsou výhodou lékovou formou roztoky, krémy a masti. V případě onemocnění oka může být vhodnou formou podání intravitreální injekce nebo medikovaný inzert. V případě onemocnění plic pak inhalační lékové formy. Vhodnou formou prevence restenózy po cévní nebo srdeční chirurgii je medikovaný stent. V případě onemocnění gastrointestinálního traktuje výhodné perorální nebo rektální podání.

Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta a místě onemocnění, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.

Terapeutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky

- 10CZ 307868 B6 zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu. Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, beta-karotenu nebo 3,5-di-íerc-buty 1-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, Labrafil M 2375 (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), Labrafil M 1944 CS (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), Labrasol (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo Miglyol 812 (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cs až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejně.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktóza, sacharóza, mannitol nebo sorbitol, celulózové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát horečnatý a/nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulózových preparátů jako acetylcelulózaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulózaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát horečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen

- 11 CZ 307868 B6 glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce. Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infuzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafiny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a/nebo polyethylen glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.

Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafín, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejné, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a/nebo distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.

Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo stearyl alkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropyl myristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery (Tween), dále polyoxyethylenové étery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylen glykol a polyethylen glykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky. Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.

- 12CZ 307868 B6

Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylen glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylen glykolu, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.

Tento vynález dále poskytuje veterinární přípravky obsahující nejméně jednu aktivní složku společně s veterinárním nosičem. Veterinární nosiče jsou materiály pro aplikaci přípravku a mohou to být látky pevné, kapalné nebo plynné, které jsou inertní nebo přijatelné ve veterinární medicíně a jsou kompatibilní s aktivní složkou. Tyto veterinární přípravky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jakoukoli jinou požadovanou cestou.

Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.

Objasnění výkresů

Obrázek 1 znázorňuje inhibici produkce intracelulámí ROS sloučeninou 114. Úsečky naznačují průměr ± SD. Rozdíly mezi kontrolou a buňkami ošetřenými sloučeninou 114 byly testovány Studentovým t-testem (** p<0.01, *** p<0.001).

Příklady uskutečnění vynálezu

Vynález je popsán pomocí následujících příkladů, které ovšem nijak neomezují jeho rozsah. Pokud není uvedeno jinak, veškerá procenta jsou uváděna jako hmotnostní. Výchozí látky je možné získat z komerčních zdrojů (Sigma, Aldrich, Fluka, atd.) nebo mohou být připraveny, jak je popsáno níže. Chromatografie na tenké vrstvě byla prováděna na hliníkových destičkách s oxidem křemičitým Silica 60 F254 (Měrek), kdy jako mobilní fáze byla použita směs chloroform/methanol. Detekce skvrn byla provedena pomocí UV záření (254 a 365 nm), případně pomocí 6% (v/v) roztoku vanilinu v absolutním ethanolu obsahujícím 1 % (v/v) H2SO4. Chromatografické čištění meziproduktů a finálních produktů bylo prováděno na koloně s oxidem křemičitým Davisil 40-63 micron (Grace Davision). Elementární analýza byla stanovena na analyzátoru Flash EA 1112 (Thermo Scientific). Chromatografická čistota a molekulová hmostnost připravených látek byla stanovena pomocí kapalinového chromatografů Alliance 2695 Separation Module (Water) připojenému k DAD detektoru PDA 996 (Waters) a kvadrupol-time of flight tandemovému hmotnostnímu spektrometru Q-Tof micro (Waters). Látky byly rozpuštěny v DMSO a zředěny na koncentraci 10 pg/ml v počáteční mobilní fázi (90 % 15mM mravenčan amonný, pH = 4,0 (A) + 10 % methanol (B)). Vzorky (10 μΐ) byly aplikovány na kolonu s reverzní fází Symmetry C18 (150 mm x 2,1 mm x 3,5 pm, Waters) a separovány při průtoku 0,2ml/min s následujícím binárním gradientem: 0 min, 10 % B; 0 až 24 min, lineární gradient na 90% B, 10 min, isokratická eluce 90% B. Na konci gradientu byla kolona znovu ekvilibrována na počáteční podmínky. Eluát byl zaváděn do DAD (rozsah skenování 210 až 400 nm, rozlišení 1,2 nm) a do iontové zdroje ESI (teplota zdroje 110 °C, kapilární napětí +3,0 kV,

- 13CZ 307868 B6 napětí na vstupní štěrbině +20 V, teplota desolvatace 250 °C). Jako desolvatační plyn (500 1/h) a zmlžovací plyn (50 1/h) byl použit dusík. Data byla získána v kladném ionizačním módu (ESI+) v rozsahu 50 až 1000 m/z. Ή a ¹³C NMR spektra by změřena na NMR spektrometru Jeol ECA-500 pracujícím při frekvenci 500 MHz (II) a 126 mHz (¹³C) nebo spektrometru Bruker Avance pracujícím při frekvenci 300 MHz (II) a 75 MHz (¹³C). Vzorky byly připraveny rozpuštěním látek v DMSO-í/ď a chemické posuny byly kalibrovány na residuální pík rozpouštědla (DMSO, 2,49 ppm pro proton) a DMSO-A, (39,5 ppm pro uhlík).

/V²,/V⁶-Disubstituované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminu byly připraveny třístupňovou syntézou z 2,6-dichlor-9H-purinu. 2-Oxacykloalkylové substituenty byly zavedeny do pozice /V9 na purinovém kruhu hydroaminací odpovídajících α,β-nenasycených Oheterocyklů 2,6- dichlor-9H-purinem v ethyl-acetátu za katalýzy kyselinou trifluoroctovou podle protokolu (Szučová et al. 2009 Bioorg. Med. Chem. 17, 1938-1947). 2,3,4,5Tetrahydrooxepin byl připraven endo cykloizomerací 5-hexyn-l-olu, katalyzovanou smíšeným (N/P) tetradentátním rutheniovým komplexem (Liu et al. 2010 Chem. Eur. ./. 16, 7889-7897 a Mitchell et al. 1973 J. Chem. Soc, Dalton Trans. (8), 846-854).

Tyto intermediáty byly dále podrobeny nukleofilní substituci v poloze C6 odpovídajícími aminy v refluxujícím propanolu za přítomnosti triethylaminu a následné nukleofilní substituci v poloze C2. Aminy o malé molekulové hmotnosti, jako například methylamin nebo dimethylamin, byly zavedeny do polohy C2 za použití modifikovaného postupu publikovaného v Kelley et al. 1989 J. Med. Chem. 32, 218-224, zatímco aminy o větší molekulové hmotnosti podle Kurimoto et al. 2003 Bioorg. Med. Chem. 11, 5501-5508.

Modifikace purinů na pozici N9:

A) Hydroaminace α,β-nenasycenych 0-heterocyklů

Příklad 1 2,6-Dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

K suspenzi 2,6-dichlor-9H-purinu (1 ekviv, 5 g) a 2,3-dihydrofuranu (2,5 ekviv.) v suchém ethyl-acetátu (40 ml) byla pod Ar atmosférou přikapána trifluoroctová kyselina (2,5 ekviv.) a výsledná směs byla míchána 2 hodiny za laboratorní teploty. Po vychlazení v ledové lázni bylo pH roztoku upraveno pomocí směsi konc. Vodný amoniak/voda (2:3, v/v) na pH 7 až 8. Vrstvy byly odděleny a vodná fáze byla extrahována ethyl-acetátem (5x 25 ml). Spojené organické fáze byly promyty solankou (2x 25 ml), vysušeny (NazSCfi) a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Pevný světle žlutý produkt byl získán po rekrystalizaci z petroletheru. Pevná světle žlutá látka, sumární vzorec: C9H8CI2N4O, výtěžek (%): 98. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 21,07; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 258,8 (8, [³⁵C1-M+H]⁺); 260,8 (6, [³⁷C1-M+H]⁺);

188,8 (100, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 190,8 (68, [³⁷C1-M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSOde) δ (ppm): 2,01-2,08 (m, 1H); 2,11-2,20 (m, 1H); 2,41-2,46 (m, 2H); 3,93 (q, J = 7,5 Hz, 1H); 4,18 (td, J = 7,9, 5,7 Hz, 1H); 6,33 (dd, J = 5,8, 4,3 Hz, 1H); 8,82 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-ífc) δ (ppm): 23,8; 31,3; 69,2; 85,6; 131,0; 146,4; 149,6; 150,9; 152,6.

Příklad 2 2,6-Dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin

K suspenzi 2,6-dichlor-9H-purinu (1 ekviv., 5 g) a 3,4-dihydro-2H-pyranu (2 ekviv.) v suchém ethyl-acetátu (50 ml) byla pod Ar atmosférou přikapána trifluoroctová kyselina (1,8 ekviv.) a výsledná směs byla míchána 2 hodiny za laboratorní teploty. Po vychlazení v ledové lázni bylo pH roztoku upraveno pomocí směsi konc. vodný amoniak/voda (2:3, v/v) na pH 7 až 8. Vzniklá pevná látka byla zfitrována, promyta vychlazenou vodou a vysušena za laboratorní teploty. Druhý podíl produktu byl extrakcí filtrátu a proplachů ethyl-acetátem (3x 25 ml). Spojené organické fáze byly promyty solankou (2x 15 ml), vysušeny (NazSCfi) a zakoncentrovány za sníženého tlaku na žlutý gel. Pevný produkt byl získán rekrystalizaci z diethyletheru. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C10H10CI2N4O, výtěžek (%): 88. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 22,87; 98,4. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 273,0 (10, [³⁵C1-M+H]⁺); 275,0 (8, [³⁷C1M+H]⁺); 189,0 (100, [³³C1-M-THP+H]⁺); 191,0 (74, [³⁷C1-M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz,

- 14CZ 307868 B6

DMSO-í/e) δ (ppm): 1,56-1,61 (m, 2H); 1,73-1,77 (m, 1H); 1,94-2,01 (m, 2H); 2,21-2,29 (m, 1H); 3,70-3,75 (m, 1H); 4,00-4,03 (m, 1H); 5,73 (dd, J = 10,9, 2,3 Hz, 1H); 8,95 (s, 1H). ^I3C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,0; 24,3; 29,6; 67,7; 81,6; 130,5; 146,4; 149,9; 151,2; 152,7.

Substitutice purinů v pozici C6:

Syntéza 2-chlor-6-substituovaných-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purinových derivátů - typický postup

Směs 2,6-dichlor-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purinu (1 ekviv., 250 mg), aminu postranního řetězce (1,2 ekviv.) a triethylaminu (2,5 ekviv. a v případě solí 3,5 ekviv.) byla refluxována 4 hodiny v propanolu (9 ml). Po odpaření za sníženého tlaku byla k odparku přidána ledová voda (15 ml).

Metoda A) V případě získání pevné látky - pevná látka byla zfiltrována, pečlivě promyta vychlazenou vodou a vysušena.

Metoda B) V případě, že se neobjevila pevná látka - směs byla extrahována ethyl-acetátem (5x 10 ml). Spojené organické fáze byly promyty solankou (2x 10 ml), vysušeny (Na₂SC>4) a zakoncentrovány za sníženého tlaku.

Surový produkt byl přečištěn pomocí sloupcové chromatografie s využitím mobilní směsi chloroform/methanol, začínající čistým chloroformem s následným gradientem methanolu.

Příklad 3 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a furfůrylaminu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C14H14CIN5O2, výtěžek (%): 85. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,43; 99,8. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 319,8 (100, [³⁵C1M+H]⁺); 321,8 (45, [³⁷C1-M+H]⁺); 249,8 (83, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 251,8 (35, [³⁷C1-MTHF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,96-2,04 (m, 1H); 2,11-2,20 (m, 1H);

2,36-2,41 (m, 2H); 3,89 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,11 (td, J = 7,8, 5,9 Hz, 1H); 4,61 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 6,19 (t, J= 5,2 Hz, 1H); 6,25 (d, J= 2,8 Hz, 1H); 6,37 (bs, 1H); 7,54-7,55 (m, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,76 (t, J= 5,2 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,1; 31,2; 36,6; 68,7; 84,4; 107,1; 110,5; 118,6; 139,7; 142,0; 149,3; 152,0; 152,9; 154,7.

Příklad 4 2-Chlor-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)—9H—purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5-methylfurfurylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C15H16CIN5O2, výtěžek (%): 66. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,05; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 334,6 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 336,7 (64, [³⁷C1-M+H]⁺); 264,5 (87, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 266,6 (43, [³⁷C1M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) 8 (ppm): 1,96-2,04 (m, 1H); 2,13-2,17 (m, 1H); 2,20 (s, 3H); 2,36-2,41 (m, 2H); 3,89 (q, J = Ί,3 Hz, 1H); 4,11 (q, J= 7,2 Hz, 1H); 4,55 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 5,96 (bs, 1H); 6,11 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 6,19 (t, J = 5,2 Hz, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,72 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 13,3; 24,1; 31,2; 36,6; 68,7; 84,4; 106,4; 107,9; 118,6; 139,6; 149,3; 150,1; 150,5; 152,9; 154,6.

Příklad 5 2-Chlor-6-benzylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a benzylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H16CIN5O, výtěžek (%): 65. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,39; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 330,7 (100, [³⁵C1M+H]⁺); 332,7 (63, [³⁷C1-M+H]⁺); 260,5 (82, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 262,6 (40, [³⁷C1-MTHF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,99-2,04 (m, 1H); 2,13-2,18 (m, 1H); 2,38-2,39 (m, 2H); 3,88-3,90 (m, 1H); 4,10-4,11 (m, 1H); 4,63 (bs, 2H); 6,18-6,19 (m, 1H);

- 15CZ 307868 B6

7,22 (bs, 1H); 7,31 (bs, 4H); 8,28 (s, 1H); 8,86 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,1; 31,2; 43,1; 68,7; 84,4; 118,5; 126,8; 2* 127,2; 2* 128,2; 139,2; 139,6; 149,2; 153,0; 154,9.

Příklad 6 2-Chlor-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofiiran

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 3-(aminomethyl)fenolu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H16CIN5O2, výtěžek (%): 94. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,33; 99,2. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 345,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 347,8 (40, [³⁷C1-M+H]⁺); 275,8 (83, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 277,8 (35, [³⁷C1M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,98-2,03 (m, 1H); 2,14-2,19 (m, 1H); 2.39 (dd, J= 12,8, 7,3 Hz, 2H); 3,89 (q, 7 = 7,3 Hz, 1H); 4,11 (dd, J = 13,8, 7,6 Hz, 1H); 4,56 (d, J = 6,1 Hz, 2H); 6,19 (t, J = 5,2 Hz, 1H); 6,60 (dd, J = 7,9, 1,5 Hz, 1H); 6,70 (s, 1H); 6,73 (d, J = 7,8 Hz, 1 H); 7,08 (t, J = 7,6 Hz, 1H); 8,28 (s, 1H); 8,81 (t, J = 6,1 Hz, 1H); 9,31 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,1; 31,2; 42,9; 68,7; 84,4; 113,7; 113,8; 117,7; 118,5; 129,2; 139,5; 140,7; 149,2; 153,1; 154,9; 157,3.

Příklad 7 2-Chlor-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 4-(aminomethyl)fenolu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H16CIN5O2, výtěžek (%): 98. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,02; 97,6. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 345,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 347,8 (45, [³⁷C1-M+H]⁺); 275,8 (85, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 277,8 (35, [³⁷C1M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,96-2,04 (m, 1H); 2,12-2,20 (m, 1H);

2.36- 2,41 (m, 2H); 3,89 (q, J = Ί,3 Hz, 1H); 4,11 (td, J = Ί,Ί, 6,2 Hz, 1H); 4,51 (d, J = 5,2 Hz, 2H); 6,18 (t, J = 5,2 Hz, 1H); 6,68 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,14 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 8,25 (s, 1H); 8,69 (přibl. t, 1H); 9,23 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSC-í/e) δ (ppm): 24,0; 31,1; 42,6; 68,6; 84,3; 2x 114,9; 118,5; 2* 128,6; 129,3; 139,3; 149,1; 153,0; 154,7; 156,2.

Příklad 8 2-Chlor-6-[(2-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu and 2-methoxybenzylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H18CIN5O2, výtěžek (%): 53. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,97; 98,7. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 360,3 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 362,3 (65, [³⁷C1-M+H]⁺); 290,6 (88, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 292,6 (46, [³⁷C1M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,99-2,03 (m, 1H); 2,14-2,18 (m, 1H); 2,38-2,42 (m, 2H); 3,82 (s, 3H); 3,89 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,09-4,14 (m, 1H); 4,61 (d, J = 6,1 Hz, 2H); 6,19 (t, J = 5,0 Hz, 1H); 6,85 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 6,98 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 7,10 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 7,21 (t, J = 7,6 Hz, 1H); 8,30 (s, 1H); 8,63 (t, J = 6,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,1; 31,2; 38,4; 55,3; 68,7; 84,4; 110,4; 118,6; 120,1; 126,4; 126,8; 127,9; 139,5; 149,2; 153,1; 155,1; 156,5.

Příklad 9 2-Chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 4-methoxybenzylaminu, zpracování metodou B. Světle žlutá pevná látka, sumární vzorec: C17H18CIN5O2, výtěžek (%): 54. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,17; 98,3. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 360,3 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 362,3 (68, [³⁷C1-M+H]⁺); 290,6 (87, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 292,6 (48, [³⁷C1M-THF+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,97-2,02 (m, 1H); 2,13-2,18 (m, 1H);

2.36- 2,40 (m, 2H); 3,70 (s, 3H); 3,88 (q, J= 7,4 Hz, 1H); 4,08-4,12 (m, 1H); 4,55 (d, J = 6,1 Hz, 2H); 6,18 (t, J = 5,2 Hz, 1H); 6,86 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,26 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 8,27 (s, 1H);

8,79 (t, J = 6,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,1; 31,2; 42,5; 55,0; 68,7; 84,4; 2x 113,6; 118,5; 128,4; 128,7; 131,1; 139,5; 149,1; ^v15 153,0; 154,7; 158,2.

Příklad 10 2-Chlor-6-[(4-hydroxy-3-methoxybenzyl )amino ]-9-( tetrahydrofuran-2-yl )-9Hpurin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 4-(aminomethyl)-2methoxyfenolu hydrochloridu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec:

- 16CZ 307868 B6

C17H18CIN5O3, výtěžek (%): 96. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,27; 99,9. LSF-MS m/z (rel. int. %, ion): 375,8 (99, [³⁵C1-M+H]⁺); 377,8 (43, [³⁷C1-M+H]⁺); 305,8 (100, [³⁵C1-M-THF+H]⁺); 307,8 (42, [³⁷C1-M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,96-2,04 (m, 1H); 2,12-2,20 (m, 1H); 2,36-2,41 (m, 2H); 3,73 (s, 3H); 3,89 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,11 (td,./ = 7,7, 6,2 Hz, 1H); 4,51 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 6,18 (t, J = 5,2 Hz, 1H); 6,68 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 6,73 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 7,00 (s, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,68 (pribl. t, 1H); 8,79 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 24,0; 31,1; 43,0; 55,4; 68,6; 84,3; 112,3; 115,1; 118,5; 120,0; 129,9; 139,3; 145,4; 147,2; 149,1; 153,0; 154,7.

Příklad 11 2-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a furfurylaminu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C15H16CIN5O2, výtěžek (%): 83. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 25,57; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 334,0 (100, [³⁵C1M+H]⁺); 336,0 (56, [³⁷C1-M+H]⁺); 249,9 (92, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 251,9 (44, [³⁷C1-MTHP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,53-1,58 (m, 2H); 1,68-1,74 (m, 1H); 1,91-1,95 (m, 2H); 2,15-2,23 (m, 1H); 3,65-3,70 (m, 1H); 3,97-3,99 (m, 1H); 4,62 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 5,55-5,57 (m, 1H); 6,26 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 6,37 (bs, 1H); 7,55 (d, J = 0,9 Hz, 1H); 8,39 (s, 1H); 8,78 (t, J = 5,3 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 22,2; 24,4; 29,9; 36,6; 67,6; 80,8; 107,0; 110,4; 118,1; 139,5; 141,9; 149,4; 151,9; 153,1; 154,6.

Příklad 12 2-chlor-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5-methylfurfurylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H18CIN5O2, výtěžek (%): 96. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,98; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 348,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 350,8 (64, [³⁷C1-M+H]⁺); 264,7 (91, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 266,7 (47, [³⁷C1M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,53-1,58 (m, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H); 1,91-1,95 (m, 2H); 2,13-2,20 (m, 4H); 3,65-3,70 (m, 1H); 3,98 (dd, J = 10,9, 1,7 Hz, 1H); 4,55 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 5,55-5,57 (m, 1H); 5,96 (bs, 1H); 6,11 (d, J = 3,1 Hz, 1H); 8,38 (s, 1H); 8,73 (t, J = 5,5 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 13,2; 22,3; 24,4; 29,9; 36,7; 67,6; 80,8; 106,4; 107,9; 118,1; 139,5; 149,4; 150,1; 150,5; 153,1; 154,6.

Příklad 13 2-Chlor-6-benzylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a benzylaminu, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H18CIN5O, výtěžek (%): 97. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 27,28; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 344,8 (100, [³⁵C1M+H]⁺); 346,8 (64, [³⁷C1-M+H]⁺), 260,6 (90, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 262,6 (47, [³⁷C1-MTHP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,53-1,60 (m, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H); 1,93 (bs, 2H); 2,16-2,24 (m, 1H); 3,65-3,70 (m, 1H); 3,98 (d, J = 11,0 Hz, 1H); 4,64 (d, J = 3,Ί Hz, 2H); 5,55 (dd, J = 11,0, 1,8 Hz, 1H); 7,22 (t, J = 6,6 Hz, 1H); 7,28-7,33 (m, 4H); 8,38 (s, 1H); 8,88 (t, J = 6,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 22,3; 24,4; 29,9; 43,1; 67,6; 80,8; 118,0; 126,8; 2* 127,2; 2* 128,2; 139,2; 139,4; 149,3; 153,2; 154,9.

Příklad 14 2-Chlor-6-[(4-methylbenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 4-methylbenzylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H20CIN5O, výtěžek (%): 99. HPLCUV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,63; 98,5. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 358,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 360,8 (72, [³⁷C1-M+H]⁺); 274,6 (90, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 276,6 (59, [³⁷C1-MTHP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,53-1,58 (m, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H);

1,90-1,94 (m, 2H); 2,15-2,27 (m, 4H); 3,64-3,70 (m, 1H); 3,98 (d, J= 11,3 Hz, 1H); 4,58 (d, J =

4,9 Hz, 2H); 5,55 (dd, J = 10,9, 2,0 Hz, 1H); 7,10 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 7,20 (d, J = 7,9 Hz, 2H); 8,37 (s, 1H); 8,84 (t, J = 6,1 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 20,6; 22,3; 24,5; 29,9; 42,8; 67,6; 80,8; 118,0; 2x 127,2; 2x 128,8; 135,8; 136,1; 139,4; 149,3; 153,3; 154,9.

- 17CZ 307868 B6

Příklad 15 2-Chlor-6-{[4-(trifluormethyl)benzylJamino}-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 4-(trifluormethyl)benzylamino, zpracování metodou A. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H17CIF3N5O, výtěžek (%): 73. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 29,12; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 412,7 (97, [³⁵C1-M+H]⁺); 414,7 (65, [³⁷C1-M+H]⁺); 328,7 (90, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 330,7 (64, [³⁷C1-M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,55 (bs, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H); 1,93 (bs, 2H); 2,16-2,24 (m, 1H); 3,65-3,70 (m, 1H); 3,98 (d, J = 11,3 Hz, 1H); 4,72 (d, J = 5,5 Hz, 2H); 5,55-5,57 (m, 1H); 7,53 (d, J = 7,9 Hz, 2H); 7,68 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 8,41 (s, 1H); 8,98 (t, J = 6,0 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 22,3; 24,4; 29,9; 42,8; 67,6; 80,9; 118,1; 124,3 (q, Vcf = 272,3Hz); 2x 125,2 (q, ³./ci·· = 2,4 Hz); 127,5 (q, ²J_Cp = 32,2 Hz); 2x 127,8; 139,7; 144,1; 149,4; 153,2; 154,9.

Příklad 16 2-Chlor-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran

Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 3-(aminomethyl)fenolu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H18CIN5O2, výtěžek (%): 73. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,43; 99,8. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 359,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 361,8 (40, [³⁷C1-M+H]⁺); 275,8 (99, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 277,8 (38, [³⁷C1M-THP+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,53-1,58 (m, 2H); 1,70-1,74 (m, 1H);

1,90-1,95 (m, 2H); 2,16-2,21 (m, 1H); 3,65-3,70 (m, 1H); 3,96-3,99 (m, 1H); 4,56 (d, J = 6,1 Hz, 2H); 5,56 (dd, J = 11,0, 2,1 Hz, 1H); 6,60 (dd, J = 7,9, 1,8 Hz, 1H); 6,70 (s, 1H); 6,73 (d, J =

7,9 Hz, 1H); 7,08 (t, J = 7,8 Hz, 1H); 8,38 (s, 1H); 8,83 (t, J = 6,3 Hz, 1H); 9,31 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 22,3; 24,5; 29,9; 42,9; 67,7; 80,9; 113,7; 113,8; 117,7; 118,0; 129,2; 139,4; 140,6; 149,3; 153,3; 154,9; 157,3.

Příklad 17 2-Chlor-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 4-(aminomethyl)fenolu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H18CIN5O2, výtěžek (%): 99. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,98; 98,0. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 360,8 (90, [³⁵C1-M+H]⁺); 362,8 (51, [³⁷C1-M+H]⁺); 276,7 (100, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 278,6 (58, [³⁷C1M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,53-1,57 (m, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H);

1,90-1,94 (m, 2H); 2,15-2,23 (m, 1H); 3,64-3,70 (m, 1H); 3,98 (d, J= 11,3 Hz, 1H); 4,51 (d, J =

5,8 Hz, 2H); 5,55 (d, J = 10,7 Hz, 1H); 6,68 (d, J = 7,9 Hz, 2H); 7,13 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 8,36 (s, 1H); 8,76 (t, J = 6,1 Hz, 1H); 9,27 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 22,3; 24,4; 29,9; 42,6; 67,6; 80,8; 2x 115,0; 118,0; 128,5; 128,7; 129,3; 139,3; 149,2; 153,3; 154,8; 156,3.

Příklad 18 2-Chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 4-methoxybenzylaminu, zpracování metodou B. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H20CIN5O2, výtěžek (%): 99. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 27,10; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 374,8 (98, [³⁵C1-M+H]⁺); 376,8 (65, [³⁷C1-M+H]⁺); 290,7 (100, [³⁵C1-M-THP+H]⁺); 292,7 (62, [³⁷C1M-THP+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,53-1,60 (m, 2H); 1,67-1,76 (m, 1H);

1,90-1,95 (m, 2H); 2,15-2,23 (m, 1H); 3,64-3,67 (m, 1H); 3,70 (s, 3H); 3,98 (dd, J = 10,9, 1,7 Hz, 1H); 4,55 (d, J = 4,6 Hz, 2H); 5,55 (dd, J = 10,9, 1,7 Hz, 1H); 6,86 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,26 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 8,37 (s, 1H); 8,82 (t, J = 6,1 Hz, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 22,3; 24,4; 29,9; 42,6; 55,0; 67,6; 80,8; 2x 113,6; 118,0; 128,4; 128,7; 131,1; 139,4; 149,2; 153,2; 154,8; 158,2.

Substituce purinů v pozici C2:

A) Substituce primárními a sekundárními alkylaminy - typický postup

- 18CZ 307868 B6

Směs 2-chlor-6-substituovaného-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purinu (150 mg, 1 ekviv.) a aminu (20 ekviv.) byla zahřívána v tlakové ampuli pod Ar atmosférou 16 hodin na 95 °C. Po zakoncentrování za sníženého tlaku byl odparek rozsuspendován v ledové vodě (5 ml). Výsledná pevná látka byla zfiltrována, promyta vychlazenou vodou a vysušena za laboratorní teploty. Surový produkt byl přečištěn pomocí sloupcové chromatografie s využití mobilní směsi chloroform/methanol, začínající čistým chloroformem s následným gradientem methanolu.

Příklad 19 2-(Methylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)—9H—purin

Připraven z 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: ΟιΟΙιχΝΑ», výtěžek (%): 74. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 22,03; 99,8. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 315,0 (100, [M+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,93-2,01 (m, 1H); 2,18-2,26 (m, 1H); 2,29-2,36 (m, 1H); 2,41 (bs, 1H); 2,76 (d, J = 4,9 Hz, 3H); 3,85 (q, J = 7,5 Hz, 1H);

4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,60 (bs, 2H); 6,07 (dd, J = 6,7, 3,7 Hz, 1H); 6,22 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 6,34 (m, 2H); 7,51 (s, 1H); 7,67 (bs, 1H); 7,81 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,5; 28,1; 30,7; 36,6; 68,3; 83,6; 106,5; 110,3; 113,5; 135,5; 141,5; 150,8; 153,4; 154,2; 159,7.

Příklad 20 2-(Dimethy lamino )-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H20N6O2, výtěžek (%): 97. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 27,07; 99,3. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 328,8 (100, [M+H]⁺); 258,8 (79, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,94-2,01 (m, 1H); 2,21-2,27 (m, 1H); 2,30-2,37 (m, 1H); 2,43-2,48 (m, 1H); 3,06 (s, 6H);

3,84-3,88 (m, 1H); 4,10 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,59 (bs, 2H); 6,09 (dd, J = Ί,2>, 4,0 Hz, 1H); 6,21 (d, J= 2,8 Hz, 1H); 6,34 (dd, J = 3,1, 1,8 Hz, 1H); 7,51 (d, J = 1,2 Hz, 1H); 7,79 (bs, 1H); 7,83 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,7; 30,5; 36,3; 2x 36,9; 68,5; 83,8; 106,5; 110,4; 113,1; 136,2; 141,6; 150,8; 153,5; 153,7; 159,0.

Příklad 21 2-(Dimethylamino)-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H22N6O2, výtěžek (%): 66. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,55; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 343,7 (100, [M+H]⁺); 273,6 (70, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,94-2,00 (m, 1H); 2,19 (s, 3H); 2,22-2,27 (m, 1H); 2,30-2,37 (m, 1H); 2,43-2,47 (m, 1H); 3,07 (s, 6H); 3,86 (dd, J = 13,4, 7,6 Hz, 1H); 4,10 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,52 (bs, 2H); 5,93 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 6,07-6,10 (m, 2H); 7,71 (bs, 1H); 7,82 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 13,3; 24,7; 30,5; 36,3; 2x36,9; 68,5; 83,8; 106,3; 107,3; 113,1; 136,2; 150,0; 150,7; 151,6; 153,6; 159,0.

Příklad 22 2-(Methylamino)-6-benzylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-benzylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H20N6O, výtěžek (%): 58. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,14; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 325,7 (100, [M+H]⁺); 255,6 (38, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,932,01 (m, 1H); 2,19-2,26 (m, 1H); 2,30-2,36 (m, 1H); 2,42 (bs, 1H); 2,73 (d, J = 4,9 Hz, 3H); 3,85 (dd, J = 13,9, 7,5 Hz, 1H); 4,10 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,61 (bs, 2H); 6,07 (dd, J= 6,6, 3,8 Hz, 1H); 6,31 (bs, 1H); 7,18 (t, J = 7,2 Hz, 1H); 7,27 (t, J = 7,6 Hz, 2H); 7,33 (d, J = 7,6 Hz, 2H);

7,80 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24.6, 28.2, 30.7,42.6, 68.4, 83.6,113.5, 126.4, 2x 127.3,2x 128.0, 135.5, 140.7, 150.6, 154.4,159.8.

Příklad 23: 2-(Dimethylamino)-6-benzylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-benzylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H22N6O, výtěžek

- 19CZ 307868 B6 (%): 74. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,60; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 339,7 (100, [M+H]⁺); 269,6 (73, [M-THF+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,94-1,99 (m, 1H); 2,21-2,26 (m, 1H); 2,29-2,36 (m, 1H); 2,43-2,48 (m, 1H); 3,03 (s, 6H);

3,84-3,88 (m, 1H); 4,10 (q, J = Ί,3 Hz, 1H); 4,59 (bs, 2H); 6,08 (dd, J = Ί,3, 4,0 Hz, 1H); 7,18 (t, J = 7,3 Hz, 1H); 7,26 (t, J = 7,6 Hz, 2H); 7,35 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 7,82 (s, 1H); 7,97 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 24,7; 30,5; 2x 36,9; 43,0; 68,5; 83,8; 113,1; 126,4; 2x 127,4; 2x 128,0; 136,1; 140,8; 150,6; 153,9; 159,0.

Příklad 24 2-(Dimethylamino)-6-(3-hydroxybenzy lamino)-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin Připraveno z 2-chlor-6-(3-hydroxybenzylamino)-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H22N6O2, výtěžek (%): 53. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 25,73; 98,0. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 354,8 (100, [M+H]⁺); 284,8 (53, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 1,94-1,99 (m, 1H); 2,21-2,27 (m, 1H); 2,30-2,37 (m, 1H); 2,43-2,47 (m, 1H); 3,03 (s, 6H); 3,86 (q, J= 6,9 Hz, 1H); 5 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,52 (bs, 2H); 6,09 (dd, J = 7,0, 4,0 Hz, 1H); 6,56 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 6,75 (s, 1H); 6,76 (s, 1H); 7,05 (t, J = 7,8 Hz, 1H); 7,82 (s, 1H); 7,89 (bs, 1H); 9,24 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 24,8; 30,5; 2x 36,9; 42,9; 68,5; 83,8; 113,1; 113,4; 114,1; 118,0; 129,0; 136,1; 142,2; 150,6; 153,9; 157,2; 159,0.

Příklad 25 2-(Dimethylamino)-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H22N6O2, výtěžek (%): 77. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 25,50; 99,07.

LSF-MS m/z (rel. int. %, ion): 354,8 (100, [M+H]⁺); 284,8 (54, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 1,94-2,00 (m, 1H); 2,21-2,26 (m, 1H); 2,29-2,37 (m, 1H); 2,44-2,48 (m, 1H); 3,06 (s, 6H); 3,86 (td, J = 7,6, 5,8 Hz, 1H); 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,49 (bs, 2H); 6,08 (dd, J = 7,2, 3,8 Hz, 1H); 6,65 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,16 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,73 (bs, 1H); 7,79 (s, 1H); 9,16 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 24,6; 30,5; 2x 36,9; 42,4; 68,4; 83,7; 113,0; 2x 114,7; 2x 128,6; 130,9; 135,9; 150,5; 153,8; 155,9; 159,0.

Příklad 26 2-(Methylamino)-6-[(2-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)—9H—purin Připraven z 2-chlor-6-[(2-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H22N6O2, výtěžek (%): 77. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,62; 99,0. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 355,8 (100, [M+H]⁺); 285,8 (20, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,95-2,00 (m, 1H); 2,22-2,26 (m, 1H); 2,31-2,37 (m, 1H); 2,44 (bs, 1H); 2,70 (d, J = 4,3 Hz, 3H); 3,81 (s, 3H);

3,84-3,88 (m, 1H); 4,11 (q, J = 7,1 Hz, 1H); 4,59 (bs, 2H); 6,08 (dd, J = 6,9, 3,8 Hz, 1H); 6,29 (d, J = 3,7 Hz, 1H); 6,83 (t, J = Ί,3 Hz, 1H); 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 1H); 7,13 (d, J = Ί,3 Hz, 1H); 7,16-7,19 (m, 1H); 7,49 (bs, 1H); 7,81 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 24,6; 28,1; 30,7; 37,8; 55,2; 68,4; 83,6; 110,1; 113,6; 119,9; 126,9; 127,5; 127,8; 135,5; 150,5; 154,7; 156,5; 159,8.

Příklad 27 2-(Dimethylamino)-6-[(2-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(2-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O2, výtěžek (%): 80. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,95; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 369,8 (100, [M+H]⁺); 299,8 (63, [M-THF+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-tf₆) 8 (ppm): 1,94-2,01 (m, 1H); 2,21-2,28 (m, 1H); 2,30-2,37 (m, 1H); 2,44-2,47 (m, 1H); 3,00 (s, 6H); 3,81 (s, 3H); 3,84-3,88 (m, 1H); 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,61 (bs, 2H); 6,09 (dd, J = 7,3, 4,0 Hz, 1H); 6,83 (t, J = 7,3 Hz, 1H); 6,95 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 7,16-7,19 (m, 2H); 7,60 (bs, 1H);

-20CZ 307868 B6

7,82 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,7; 30,5; 2x 36,8; 37,7; 55,2; 68,5; 83,8; 110,2; 113,1; 119,9; 2* 127,5; 127,9; 5_S 136,1; 150,6; 154,1; 156,5; 159,0.

Příklad 28 2-(Methylamino)-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2-chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H22N6O2, výtěžek (%): 73. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,85; 98,4. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 355,8 (100, [M+H]⁺); 285,8 (20, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,93-2,01 (m, 1H); 2,18-2,25 (m, 1H); 2,29-2,36 (m, 1H); 2,41 (bs, 1H); 2,75 (d, J = 4,6 Hz, 3H); 3,69 (s, 3H); 3,83-3,87 (m, 1H); 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,52 (bs, 2H); 6,06 (dd, J = 7,0, 4,0 Hz, 1H); 6,30 (bs, 1H); 6,83 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,27 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,74 (bs, 1H); 7,79 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,6; 28,2; 30,7; 42,0; 54,9; 68,4; 83,6; 3x 113,4; 2x 128,7; 132,6; 135,4; 150,6; 154,3; 157,9; 159,8.

Příklad 29 2-(Dimethylamino)-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O2, výtěžek (%): 81. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,33; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 369,8 (100, [M+H]⁺); 299,8 (74, [M-THF+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,94-1,99 (m, 1H); 2,20-2,26 (m, 1H); 2,29-2,36 (m, 1H); 2,43-2,47 (m, 1H); 3,05 (s, 6H); 3,68 (s, 3H); 3,85 (td, J= 7,6, 5,8 Hz, 1H); 4,10 (q, J = 7,2 Hz, 1H); 4,52 (bs, 2H); 6,08 (dd, J = 7,2, 3,8 Hz, 1H); 6,83 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,28 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,81 (s, 1H); 7,87 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,7; 30,5; 2x 36,9; 42,4; 55,1; 68,5; 83,8; 113,1; 2x 113,4; 2x 128,7; 132,7; 136,0; 150,5; 153,8; 157,9; 159,0.

Příklad 3 0 2-(Dimethylamino)-6-[(4-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2yl)-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-hydroxy-3-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9Hpurinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O3, výtěžek (%): 68. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 25,52; 99,7. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 384,8 (100, [M+H]⁺); 314,8 (46, [M-THF+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,94-2,01 (m, 1H); 2,19-2,27 (m, 1H); 2,30-2,37 (m, 1H); 2,44-2,47 (m, 1H); 3,07 (s, 6H); 3,71 (s, 3H); 3,86 (td, J = Ί,Ί, 5,7 Hz, 1H); 4,10 (q, J = 7,3 Hz, 1H); 4,50 (bs, 2H); 6,08 (dd, J = Ί$, 4,0 Hz, 1H); 6,66 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 6,76 (dd, J = 7,9, 1,8 Hz, 1H); 6,99 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 7,73 (bs, 1H); 7,80 (s, 1H); 8,71 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 24,7; 30,5; 2x 36,9; 42,8; 55,4; 68,4; 83,7; 112,2; 113,0; 115,0; 120,0; 131,5; 135,9; 145,1; 147,1; 150,5; 153,8; 159,0.

Příklad 31 2-(Methylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H20N6O2, výtěžek (%): 52. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 23,42; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 328,9 (100, [M+H]⁺); 244,9 (28, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,521,60 (m, 2H); 1,63-1,72 (m, 1H); 1,84-1,87 (m, 1H); 1,92-1,94 (m, 1H); 2,12-2,20 (m, 1H); 2,78 (d, J =4,9 Hz, 3H); 3,57-3,62 (m, 10 1H); 3,96-3,99 (m, 1H); 4,63 (bs, 2H); 5,43 (d, J = 9,5 Hz, 1H); 6,22 (d, J = 3,1 Hz, 1H); 6,34 (m, 2H); 7,51 (d, J = 0,9 Hz, 1H); 7,62 (bs, 1H); 7,87 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,5; 24,5; 28,2; 30,1; 36,3; 67,5; 80,2; 106,5; 110,3; 112,9; 134,9; 141,5; 150,9; 153,4; 154,2; 159,8.

Příklad 32 2-(Dimethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C17H22N6O2, výtěžek (%): 96. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,07; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel.

-21 CZ 307868 B6 int. %, ion): 343,0 (100, [M+H]⁺); 258,9 (88, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,52-1,56 (m, 2H); 1,66-1,70 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,19 (ddd, J = 23,9, 12,6,4,1 Hz, 1H); 3,07 (s, 6H); 3,58-20 3,64 (m, 1H); 3,97 (dd, J= 10,9, 2,0 Hz, 1H); 4,59 (bs, 2H); 5,45 (dd, J = 11,0, 2,1 Hz, 1H); 6,21 (d, J = 3,4 Hz, 1H); 6,34 (dd, J = 3,2, 2,0 Hz, 1H); 7,51 (d, J = 1,2 Hz, 1H); 7,79 (bs, 1H); 7,90 (s, 1H). ¹³C NMR (75 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,1; 36,4; 2x 36,9; 67,5; 80,2; 106,4; 110,3; 112,4; 135,4; 141,5; 150,9; 153,5; 153,7; 159,1.

Příklad 3 3 2-(Methylamino)-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Světle žlutá pevná látka, sumární vzorec: C17H22N6O2, výtěžek (%): 79. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,98; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 343,8 (100, [M+H]⁺); 259,7 (32, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,52-1,59 (m, 2H); 1,65-1,69 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,12-2,18 (m, 1H); 2,19 (s, 3H); 2,77 (d, J = 4,6 Hz, 3H); 3,57-3,62 (m, 1H); 3,97 (dd, J = 10,9, 2,0 Hz, 1H); 4,54 (bs, 2H); 5,42 (d, J = 10,1 Hz, 1H); 5,93 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 6,08 (d, J =2,8Hz, 1H); 6,37 (bs, 1H); 7,61 (vbs, 1H); 7,88 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 13,3; 22,6; 24,6; 28,2; 30,2; 36,2; 67,6; 80,1; 106,3; 107,4; 112,9; 134,9; 150,1; 150,8; 151,5; 154,1; 159,8.

Příklad 34 2-(Dimethylamino)-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(5-methylfurfuryl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Světle žlutá pevná látka, sumární vzorec: C18H24N6O2, výtěžek (%): 86. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,90; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 357,8 (100, [M+H]⁺); 273,7 (20, [M-THP+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,52-1,56 (m, 2H); 1,64-1,72 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,15-2,18 (m, 1H); 2,19 (s, 3H); 3,08 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,97 (dd, 7= 11,0, 1,8 Hz, 1H); 4,53 (bs, 2H); 5,45 (dd, J = 11,0, 2,1 Hz, 1H); 5,93 (dd, J = 2,9, 0,8 Hz, 1H); 6,08 (d, J =

2.8 Hz, 1H); 7,71 (bs, 1H); 7,90 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 13,2; 22,6; 24,6; 30,1; 36,3; 2x 36,9; 67,5; 80,2; 106,3; 107,3; 112,4; 135,4; 150,0; 150,7; 151,6; 153,6;

159,1.

Příklad 35 2-( Dimethylamino )-6-benzylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin Připraven z 2-chlor-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O, výtěžek (%): 86. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 29,12; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 353,8 (100, [M+H]⁺); 269,7 (78, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,51-1,57 (m, 2H); 1,63-1,72 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,19 (ddd, J = 24,0, 12,5, 3,7 Hz, 1H); 3,04 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,97 (dd, J = 11,0,

1.8 Hz, 1H); 4,60 (bs, 2H); 5,45 (dd, 7= 11,0, 2,1 Hz, 1H); 7,18 (t, 7 = 7,3 Hz, 1H); 7,27 (t, 7 = 7,5 Hz, 2H); 7,35 (d, 7 = 7,3 Hz, 2H); 7,89 (s, 1H); 7,96 (bs, 1H).

¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,1; 2x 36,9; 43,0; 67,5; 80,2; 112,4; 126,4; 2x 127,4; 2x 128,0; 135,3; 140,8; 150,6; 153,9; 159,2.

Příklad 36 2-(Dimethylamino)-6-[(4-methylbenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-methylbenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C20H26N6O, výtěžek (%): 82. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 30,32; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 367,8 (100, [M+H]⁺); 283,8 (29, [M-THP+H]⁺). IINMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,51-1,59 (m, 2H); 1,63-1,72 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,14-2,19 (m, 1H); 2,23 (s, 3H); 3,04 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,97 (dd, 7= 11,0, 1,8 Hz,

-22CZ 307868 B6

1H); 4,55 (bs, 2H); 5,44 (dd, J= 11,0, 2,1 Hz, 1H); 7,07 (d, J = 7,9 Hz, 2H); 7,23 (d, J = 7,6 Hz, 2H); 7,89 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 20,6; 22,6; 24,6; 30,1; 2^X 36,9; 42,7; 67,5; 80,2; 112,4; 2x 127,4; 2x 128,6; 135,3; 135,4; 137,7; 150,6; 153,8; 159,2.

Příklad 37 2-(Dimethylamino)-6-{[4-(trifluormethyl)benzylJamino}-9-(tetrahydro-2H-pyran2-yl )-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-{ [4 (lrifluormethyl)benzylJamino}-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9Hpurinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C20H23F3N6O, výtěžek (%): 96. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 30,43; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 421,7 (100, [M+H]⁺); 337,8 (81, [M-THP+H]⁺). H NMR (500 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 1,52-1,58 (m, 2H); 1,64-1,70 (m, 1H); 1,85 (dd, J = 12,8, 1,8 Hz, 1H); 1,93 (bd, J = 13,4 Hz, 1H); 2,15-2,23 (m, 1H); 3,00 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,97 (d, J = 11,0 Hz, 1H); 4,66 (bs, 2H); 5,45 (dd, J = 10,9, 1,7 Hz, 1H); 7,54 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,64 (d, J = 7,9 Hz, 2H); 7,91 (s, 1H); 8,10 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,1; 2x 36,8; 42,8; 67,5; 80,3; 112,4; 124,4 (q, Úcf = 272,1 Hz); 2x 125,0 (q, ³Jcf = 3,6 Hz); 127,1 (q, Vcf = 32,2 Hz); 2x 127,9; 135,5; 145,7; 150,7; 153,8; 159,1.

Příklad 3 8 2-(Dimethylamino)-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(3-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O2, výtěžek (%): 94. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,50; 99,5. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 368,8 (100, [M+H]⁺); 284,8 (53, [M-THP+H]⁺). Ή NMR (500 MHz,

DMSO-í/ď) δ (ppm): 1,52-1,58 (m, 2H); 1,63-1,73 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,90-1,95 (m, 1H); 2,15-2,23 (m, 1H); 3,04 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,96-3,98 (m, 1H); 4,53 (bs, 2H); 5,45 (dd, J = 11,0, 1,8 Hz, 1H); 6,55-6,57 (m, 1H); 6,75 (s, 1H); 6,76 (bs, 1H); 7,05 (t, J = 7,9 Hz, 1H); 7,89 (s, 2H); 9,24 (bs, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,2; 36,9; 38,9; 39,1; 39,3; 39,5; 39,6; 39,8; 40,0; 42,9; 67,5; 80,3; 112,4; 113,4; 114,1; 118,0; 129,0;

135,3; 142,2; 150,7; 153,9; 157,2; 159,2.

Příklad 39 2-(Dimethylamiw)-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-hydroxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Světle žlutá pevná látka, sumární vzorec: C19H24N6O2, výtěžek (%): 76. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 26,12; 99,9. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 369,8 (100, [M+H]⁺); 285,7 (83, [M-THP+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 1,51-1,56 (m, 2H); 1,66-1,70 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,18 (ddd, J =24,0,12,5, 3,7 Hz, 1H); 3,06 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,95-3,98 (m, 1H); 4,48 (bs, 2H); 5,44 (dd, J = 11,0, 1,5 Hz, 1H); 6,65 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,16 (d, J = 8,3 Hz, 2H);

7,80 (bs, 1H); 7,88 (s, 1H); 9,19 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,1; 2x 36,9; 42,4; 67,5; 80,2; 112,4; 2x 114,8; 2x 128,7; 130,9; 135,2; 150,6; 153,8; 156,0;

159,2.

Příklad 40 2-(Methylamino)-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9Hpurin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 8M roztoku methylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H24N6O2, výtěžek (%): 70. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 24,92; 98,0. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 369,8 (100, [M+H]⁺); 285,8 (29, [M-THP+H]⁺). IINMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 1,51-1,57 (m, 2H); 1,62-1,72 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,16 (ddd, J = 24,1, 12,4, 3,5 Hz, 1H); 2,76 (d, J = 4,9 Hz, 3H); 3,56-3,62 (m, 1H); 3,69 (s, 3H); 3,97 (dd, J = 11,0, 1,8 Hz, 1H); 4,53 (bs, 2H); 5,41 (d, J = 10,4 Hz, 1H); 6,33 (bs, 1H); 6,83 (d, J = 8,6 Hz, 2H); 7,27 (d, J = 8,3 Hz, 2H); 7,76 (bs, 1H); 7,86 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-de) δ

-23CZ 307868 B6 (ppm): 22,6; 24,6; 28,3; 30,2; 42,1; 54,9; 67,6; 80,1; 112,9; 2x 113,4; 2x 128,7; 132,6; 134,8; 150,6; 154,3; 157,9; 159,9.

Příklad 41 2-(Dimethylamino)-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-[(4-methoxybenzyl)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 5,6M roztoku dimethylaminu v absolutním ethanolu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C20H26N6O2, výtěžek (%): 93. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 28,85; 99,9. ESI⁺MS mJz (rel. int. %, ion): 383,8 (100, [M+H]⁺); 299,8 (82, [M-THP+H]⁺). II NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,51-1,59 (m, 2H); 1,63-1,72 (m, 1H); 1,83-1,86 (m, 1H); 1,91-1,94 (m, 1H); 2,18 (ddd, J = 24,0, 12,5, 4,0 Hz, 1H); 3,06 (s, 6H); 3,58-3,63 (m, 1H); 3,68 (s, 3H); 3,97 (dd, J = 11,0, 1,8 Hz, 1H); 4,52 (bs, 2H); 5,44 (dd, J = 11,0, 2,1 Hz, 1H); 6,83 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,28 (d, J= 8,6 Hz, 2H); 7,88 (s, 2H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,6; 24,6; 30,1; 2x 36,9; 42,4; 54,9; 67,5; 80,2; 112,4; 2x 113,4; 2x 128,7; 132,7; 135,2; 150,6; 153,8; 157,9; 159,2.

B) Substituce 2-(dimethylamino)ethylaminem nebo 3-(dimethylamino)propylaminem typický postup

Směs 2-chlor-6-substituovaného-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purinu (150 mg, 1 ekviv.) a 2(dimethylamino)ethylaminu nebo 3-(dimethylamino)propylaminu (10 ekviv.) v //-butanolu (2,2 ml) byla zahřívána v tlakové ampuli pod Ar atmosférou 18 hodin při 120 °C. Reakční směs byla zakoncentrována za sníženého tlaku a surový produkt byl přečištěn pomocí sloupcové chromatografie s využití mobilní směsi chloroform/methanol, začínající čistým chloroformem s následným gradientem methanolu.

Příklad 42 2-{[2-(Dimethylamino)ethylJamino}-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2yl)-9H-purin

Připraven z 2-chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purinu a 2(dimethylamino)ethylaminu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H27N7O2, výtěžek (%): 78. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min., %): 16,27; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 385,8 (100, [M+H]⁺). NMR (500 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 1,52-1,57 (m, 2H); 1,62-1,68 (m, 1H);

1,84-1,87 (m, 1H); 1,92-1,94 (m, 1H); 2,15-2,23 (m, 7H); 2,37 (t, J= 6,9 Hz, 2H); 3,30-3,35 (m, 2H); 3,56-3,61 (m, 1H); 3,96-3,99 (m, 1H); 4,62 (bs, 2H); 5,41 (dd, J = 11,0, 1,8 Hz, 1H); 6,17 (bs, 1H); 6,20 (dd, J = 3,1, 0,6 Hz, 1H); 6,34 (dd, J = 3,4, 1,8 Hz, 1H); 7,51 (dd, J = 1,7, 0,8 Hz, 1H); 7,65 (bs, 1H); 7,87 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, DMSO-í/e) δ (ppm): 22,6; 24,5; 30,0; 36,3; 3x 45,1; 58,3; 67,5; 80,3; 106,3; 110,31; 113,0; 135,0; 141,5; 150,9; 153,4; 154,2; 159,1.

-24CZ 307868 B6

Tabulka 1. Příklady připravených 9-(oxetan-2-yl)purinových derivátů.

na ηικϊΝο	ČHN AA ALA za [%C; %N\|	MS ANALÝZA
Lfttkr O	C6
Ϊ	MO-	felurytamo	6ŮA54;2W	...........361..............
s		farilírylájnissO	5110; 20	315
3		fefttryia^iw	57,3; O 26,7	15
4	ŮA-			343
$	^fejN^thyl- Nll-	Ms]íkw	ŠllCiW	358
&	.MeNW	běn»Í«hiS	$19; 5Λ 27,1	3H
	BNK-	txíiixylaswci	63,S; 6,2; 20	323
s	Me^N-	tasytehís	6X1 O; 25,9	325
&	iktůM'	tessyJssfšm?	60; tó 234	353
1«	W	tožyteAís	W,W	.W
ií	MeNBl·	(3-<niethylÍSíSí“2-&s-i-ylj&mššíj	smi; m	W
u	BW	(3~m®thylb®Oes» i --vi)stsjsst>	51&7Λ w	O
o	ON·	(3-me&yta-£w« š ho	% O; 27,8	W3
		(3^^y^í#-2-o-Vylito»	<i 7,9; 2.5,4	331
3$	NH-	(S-s^thyibuúOO »y i>»sis	59,1 7,120	34§
U	MsNR-	(ŽX4»hyáraty‘3-“mAy<tó-ea- - ΗνΙ>ηώκ>	50; Mi 274	305
Π	Eti»	-Wí^mitisj	W:O;W	319
u		(i^tty^&xy«3»me&yítaj^2^» --> yl Wt>hw	5&6; 7,β; W	,m
1S		(E>(44jýůwxyH’m«ít^taÍ-2v®^ Oylkmrae	SUU M3	347
	MeyN-etW- »	OyOsrós^s	56,5; 7.5; 27,1	362

-25CZ 307868 B6

Ϊ4

2S

íZJ-řT-hvdroxv-S-methyihut-S-en-
MeNH-	- l-yl)amino (Z)-(4-hydr0xy»3~methylbut2'en«	55,3; 6,6; 27,6	305
EtNH-	-1 -yl)aminp (Z)-(44iydr0xy-3-methylbut-2~en-	56,6; 7,0; 26,4	319
MejN-	- 1 -yljammo (Z)“(4-hydr<?xy-3-íneíhylbut-2-en-	56,6; 7,0; 26,4	319
EtjN-	-1 -yl)ajnino	58,9; 7,6; 24,3	347

NfežN-etíiylNH362 (Zý(4-hydroxy-3 -methyl but-2~en-l-yl)átmno

Tabulka 2. Příklady připravených 9-(tetrahydrofuran-2-yl)purinových derivátů.

OSTITFENTY ΝΆ FURÍNV

Tiitkxí, L-3 $26

MS

ANALÝZA

CUM

ANALÝZA %N|

:p as	MeNH- BNL jwpyiNIIr	Bďatylamiw fetrfatylmta třÁfýhmm	'~J: 5ΛΧ7 53.3: 6, L 25.6 59,S;6,$;24,5	315 329 343
sšs		fetWysmňífKí	,iW; XX 34,5	343
.» Sí	WX	íhthfyhmta fer&ryhmta	<7; O; 2X6	3X3 357
	NLL	fbdmytmnta	5XX6AW	372
λ’	NH-		§XX 7,1; 254	336
M	MeKH»		58,5; -54: Xyd	329
35	FMF	O-swtliylfefSsyfWfeo	W; XS; 245	343
	Μ»	(Š-mgthýlferferyl^mš»	59,4 45; 245	343
3?	w	(3-ms^y tferfury l>m ta	4.4 7,1; 2X7	371
JŠ		(3-wihy ifcrfeíyijsst ta	50; XI; 25,4	386
			5M;6,hW>	329
	W	(4-3selWfcrfetyl)»ta	WW_:;2O	343
41	MířjM-	(4~wáiyWfuiyi>nh&	Wh O; 243	343
«		(4*wta IfirttryO&st	6W XI; 32,7	371

-26CZ 307868 B6

MxXAihyl·
KS	»
44	MížNIT
4S	Β»
se	Me_sN«
4 «	EbM· SkA-eTy:· »
®-	W®
5<:	Β»
Sí	MgJSl···
6Ž	Euhí- kkA-Xhyl·
S3	NIT
54	Mg®
SS	HÍNH-
	MéžN’
V ss	Γί/b Mv^N ťtM- Ní-b
	M«®
<5®	B®
«1	M«_?N-
AX í4	.EtgN*· MííN-cí^yL ®
44	MvNH-
	B®

44 44	bO4* Sk X ťih S : Nik
53	M«®
7#	B®
ΐί	Me_; N-
«X «-X-	EO~

!>-:TiĚ?dn s íW:;íy 1>>Π1 h’ií> t_ winnu (5 -Tíseíhybsitfus·^ i íatriHio i Jdttmo (5-«^y i& rf^íj®n.i«© υ'-^'ίΝ'ΆνΛηύ'Γ·. í Zrnino ξ3> furíWs i Rimim'- < 1 lit *' V< 'IHíu 3 ’'») ! A' < v řh<Bi N-<> ΰi’ΐίίř> 1 sammo (4- SRťl\>'XU Kg jí «tm(no (4'sW,k' orikl· sxsx xUňln· · vMítfthoxy tiísrtiií . 1 simrao (4 nuth<J3íylftrilsíyI>miw

11· -wí^av im txíjj. i \υυιη< $ 5-fPw· boxytm tisn I aiw i S-řk^tťi.Ud^ fitrran.: kimtno

Sn^hma» beszv Issohu· feiz\ ίϊίχηίίΊ-.

bfctuy i&mhá

Mízylamisi·?

<.’ - hyiiiív< ylwr-yx Ů&wíís h_E -ί-ΪΥίΧΛ b<:U?> Í laSÍSSím

i.. Έχ2l !w be::.- , $ 'á'iom>

I )'::>d:'O\> hřXíM 8MO

5<>,2, 7J 23.4	38$
28 .'.^ 28.C	329
5^,6; X>. 24.5	3«
8«Λ 6.8 24,8	343
01A ?J; 22_s7	371
59,2; ?J; 354	3S6
55,$; $4; ?4.4	345
57Λ 6>2ý5
8?,(í: 6.2: 23.5	í.'Sř
x9..kfV4, 31.8	A
5X8; f>X 24,4	402
88,8: 8 9; 24.4	MS
5 7.0, £>.2; 23.3	3»
STO, 6,2: 22.8	359
$V,L 8.8. 2;,S	317
56,8. 6,8: 24,4	402
?.\$. JN.2U	345
S ' 4; X2. J i y	3S0
57,0. >>.2, 22.7	35^:3
SQJ.6.S.21.8	38?
56,8: 6.8: 24.4
OA 9,2.23,9	< ? X
©£*Λ; 24Λ
íVA XX 2 í κ
(Β®,2 22,9
63A .1 2,'
60 A 5.9: 24,7	\41
MA x', ?'
b Λ’ Cx' 23,'	355
ftUt'¹⁵ ~\o	'V

-27CZ 307868 B6

~5 w*	NH- ŘtóWJv
>4 7Š	Χν.1»·5^ί. híA Ml·
?4	MeXL
??	BW-
7S 79	M^N-sthyi- NTL M®NIl·
M	Ε».
W	M«Xl·
«s	El$N*
83	Me^e&yX FOX
	M«W
8§	WIX
»8	MěýN-
S?	EljN-
ss	M^N-eíhyL Nit

(4-Mrňxybemyl>ffi^6 (4-hyd^^ybei:wl>miš>í) (4Myd^yfeee^)smií&e (4’hy£lfweytoKyl>»ús>s (4 4iy 4 Řisyhěriřy | )šsWí4 (3-iiieltox,j<béňi^'i)g^fe3 (3 -'jnetlmýbfiíw 0 mm (3-mieÓiaxybesxyÍ>mi» (3-n?rtoxybe^Kyi>Mia·

O^sě&ěxybeM^>m:m (4 ~m&3š.y heKxyf^tn.i ň o (4«^taybewl^«^o f^íKetotybmyi^tíRífto (^Rwthoxytaí^ljamine (4“ftietím;ybs3eayl)wim

W; 6,9; 24,7	WS
$$50,7	341
6iaOi23,7	335
61,0; 6,3; 23,7	355
62Λ 6^ 2U	30
<4; 6Λ 24,7	3«
61,0;	355
61,9; M; 22,8	165'
61,9; 6,6; 22,S	369
63,6; 7,1; 2U	303
61,3; 7,1; 23,5	412
MACXXU	355
61^6,6; 22,8	369
61,9; 6.6; 22,8	369
63AXU2U	397
<3; 7,1; 23 J	412

» w

Sl

9§ §ř?

M«»	(3’WfhyÍfetó“ess-Uyl>mw	W; 7X27,0	3X
EtNH-	(S-meshyl but-2-es.-1	60,7; 7,7; 26,6	317
JvfejN	(>mlhy IW-2-en-l -yljm&io	<7; 7,7; MX	317
BOX	(Xw^yíta-S-^ii“ 1 -yl>wiso	62,X 8,2; 24,4	345
e^N-ethyl- NH-	(3»Hwtbylto«2-ea-1 -yljamia©	6Xh 8,1; 27,3	360
Mí»	t£)4Xhyifr^ » ®fto l-yiy&mtiiě	56,6; 7,0; 26,4	319
EMH-	(XX4-hydmm3-nmhylbeLX -®®4-’yi)o»G	57,8; 73; 25,3	333
Me.U	(£>(4-Mmsy-3-methylhefU » ee-l yýl>m.W	57,8? 73; 25,3	333
Bt_žN-	(X)'<4'&yd^xy^3 -meftylbst-X ~eeX-yí>mm	6X0; 7,8; 23,3	361
ějN-šťliyL	(^X4-hyd^xy^3-mel.hj#Kč2-	57,6:7,¾ W	376

-28CZ 307868 B6

NH-	- en« 1 -yljamino
9?	MeNH-	(Z)-(4-hydr<»xy-3-racthylbuit-2- - en- i -yl)amino	56,6; 7,0; 26,4	319
1(>0	EtNH-	(Z}-(4-hydroxy-3-inethylbiít-2- -en-l -yl)amíno	57,8: 7,3; 253	333
ΚΊ	Me?N-	(Zl-(4-hydroxy-3-methylhni''2- -en-l-yl)atníno	57.8; 7,3; 25,3	333
102	Et₃N-	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- - eo-1 -yljaiuíno	60,0: 7,8; 233	361
103	X- y NH-	(Z)-(4-hydroxy-3-oiethylbut-2- -en-1 -yljamino	57,6; 7,8; 26,1	376
	MeNH-	(4-hydroxy-3-mcthyl butylíami tw	56,2; 7,6; 26,2	321
105	EtNH-	E4-hydrGxy-3-methylbutyl)aniíno	57,5; 7,8; 25,1	335
106	Me>N-	(4-hydroxy-3-metirylbutyl)smino	57,5, 7,8; 25,1	335
107	Et₂N-	(4-hydrGxy-3-niethylbutyl)ainino	59,6; 8.3; 23,2	363
108	MejN-ethyl- NH-	(4-hydrcxy-3-niethylbutyl)aiBÍno	57,3; 8,3; 26,0	378

Tabulka 3. Příklady připravených 9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)purinových derivátů.

stómrvsmŤ ná	CHN ANALÝZA (%C_?	MS ANALÝZA (Μ-ΗΗΓ
Látka	O	€6
	MW	farfurytejníno	58,5; 6,í; 254	329
ÍMJ	EW	fbdhtytemtee	59,6; O; MS	343
lil	propýlNH-	ŮirŮirylomim?	60,7; 48; 234	357
tlí		ůirfůfylsmíito	W; 6,8; 234	35?
m		to rtoryí aminu	W; 6,5; 24_;S	343
114	ĚíťN- MeTS-sthví-		61,6; 7,1; 22,7	371
iíš	NH- Me_áN-přOpyl-	ferforyssrmne	59,3; 7J; 25,4	386
m	NH-		60,1; 7,3; 24,5	400
lí?	MeNH-	0- methyl &íf«ry Ijamhio	594; 6,5; 24,5	343
lít	BNřL	0» methythsríií ry IJamšno	60,7; 6,8; 234	35?
lít	HfeN-	0-merhyífůríh jylXmhio	<7; 6,8; 23,6	357
	Ht>N'	0-meíhyiferf»iyl)asiin<3	62,5; 7.3; 21,9	385

-29CZ 307868 B6

m	,Me_;N -«shyd NH-
w	MíNll·
	BNH-
	yk.Aj-
iJS.	EON-
	Μ· N efe.
MS	HM
07	»®
m	Β»
O^J>	MeM
m
	LM
Bž	W®l·
W	Β1»
	Me.?N··
	EbN-
	MCjN^thV:-
íM	NH-
»7	ΜΛΉ-
«	HNtl·
W	M<O
	HM
	Mc N- d&yi-
M?	NK-
	MeHTC
M	HNH-,
Ui	McM
MS	Ι',τΝ-
	V, Vťli J
J4S	NH
M?	M«Ník
£«	HXH-
S-O	NkvM-
w	MM

i OuríVs i KifUiiíO

Macíky Kurfíín !kt:^ií5i.' {4-í s •ťdiy I kirťm j )«ísu> ; UřtRThy IkMUi'} BjrJÚJU' V'F mcthy Ui íriš-jy i ,jř«M <-,Í 4 q tMh y í fejkiy i )ž«íš:m ηνΐΐΗ1Μ!'··*0>®ικ··' (>:·:··ϊύρ< u< ’ .f?hy't^inAWi<io (S-Amhy|fehn?rte» í ''^esJhs HC’ 'ΒΛ í hir'íB· >

$ *'Sí>-'.k'-A*, 'uf} 1Μ*ϊ -m > 'ίι”8Π íhi'\w < < ít-;··.'· ,as ůi 'fisn Ikisutw (Muj-vv} sM ,rs hauteu''

4 'mí4h<3xy1fiirisrs I (4-mettmy hurňn-yl«?»« f 4-rn<-iFE-:»>; % ifuriúr} 1 i»w f 4 'jnetíwxy I IMuryl )*Mw (4-s^eshiAy Ihjrfury Ιχμηηκ» (5-JTK'U IX AS UíS i luXSx^S

Kd^rs i lasssni·' (>b ^íh?ojudi:\’rií!U5 5· (§Hix?ho\s hsriuA ^ťcrx» i Ms^hoxy líítfuřs i $frhi>t i:s.'i) zy 1. ií η» bei »£> jdřmstó isenzy^jwv' hí«z} íxbsj^íJ

Ml; 7 j; MS
'-Μ, M, > ?	3-n
6{!,?; 4,8: 23,6
60,?: 6 8: 23,6	3S7
62Λ~Λ >: 6	?$>
bO i. '.', V ;4,s	4M
;59,&: b.5; 34.5	363
60,7 kS,2\*	357
60 ’,Μ ?'*	337
6Λ,', M 2. '>	385
ML Μ; MS	490
57,0:	334
i8. L 6,5; 23Λ	373
MLM, .33.0	373
603). M2L0	401
5M: Mí; 33 ,6	416
sw ?.\>	334
M,LM; JM	373
ML u,X ,LM	373
mi.hsu	401.
5?X7Jh :j,í>	416
L.Ú, 6.3, 23.5	359
MO	373
SlMfM 32,6	373
Mlh 7,1; 3 = Ai	<H
Mj;7> 20	416
b.M 2 í S	Mř
64A 8 !; 23,9	353
64 Λ M2.(9	.5 5.5
&?„>, 74; 32,1	381

-30CZ 307868 B6

JSI SSž	MW-cihyi- NH- Ms»	WnayhMbó (S^yílixjwbgssyljgimO	63J;7Á24J 61_ř9; 6J; 23,7	396 W
w	KtWH-	(3-hydwwta^i)gtón&	UMA US	369
		p-hydwsybesizyOsmitiíi	UMA US	369
	EtžN»	(3-hydrá»be^f)smimíi	63A ?>2U	397
ISé	MeaWeíhyl· W	{3’^mK>t®ssgf'í>mhs	M3;	412
	MíW	(^ydmxybe^l^hů	UMABJ	355
	EtNH-	(4^>áw?sy^8^<^i»G	UMA 22,8	369
	Ms_sN~	(d-hydrtssyfegřjxylWífeíi	61A O; 33j	369
»		(Oiydmxybsn^l) ww	anuu	397
U1	NfeíhFsihyi- NH·	(44iyďmxytef:iO>mW	$U;7,W	412
líS	MsNH-	(3-wíteyyb«žyÓastO	61,¾ 6,6; 22, $	3®
K?		(3-sjjěíhóxýbešl7yÍ)šs:imi>	WW	30
SSÍ	Wf«	{3^etím^«K^)atów	<«; O; 2:0	30
íš?		(3-ímedií?xyW^4)mi»	Wh 7A 20,5	411
1M	MOOáhyh W	O-^hayyb^ftzyij^miířio	Ul; MW	425
1®	Μ»	(4-^thí3sybefiíg}-Í>»mo	61.2 6A 22,8	369
m	W	(4“Wflmybertíž>i)^3heÍ		30
ÍW	MejjN’	(^ittgftařybím-^I^imisse	62 A W 20	30
1W	&;N-	(^-uiĚito^ykwyljfissššMs	60; 7,4; 20,3	Ol
Í7J	»	(T-mšthsjyýb^^Osw^	Wh 7,3; 23,9	425
STJ	MeNfr	(3-m^vlbrt-2^> ÚytKwha	<7; 7,7; 20	317
SVÍ	Emn-		&OOÁ.354	331
174	Me_žH’	(3SMhylbuU2^fi-l~ylMmim	61Λ 7Λ 25,4	331
m	W-	G-mOyfaiW^iM '-yíjamhe	6.1.7; 8.4; 23.4	359
í?&	NH-	(3-aOiy lbšW-3-«n-l-ylM&ó	Wh O; 20	.374
	MeNH-	(l)-(4-hyďK^-3-Ě^&yltató“gm “l-yljawsiueí	574; 7,3; 20	333
m		f£>-(O¥dr«)xy-3-SBselfelb^U^^	UMA 243	347

-31 CZ 307868 B6

'1’9	Meýb-	(.E)-(4-'hyd3refsj‘'“3methyIbut“2“eii	58,9; 7.6: 24,3	347
	Et_;íN-	«M'4- hydroxyA ~methylbW2~e.n - - I-yQámino	60.9; 8,1:22,4	37ΐ
581	M ěN-ethyl· NH-	{ř?)-(4-hyd roxy-3 -nietbylb u bS-en- -l-yl)Hmino	58,6; 8.(1: 25,2	390
133	MeNH-	(Z>(4“hydroxy -3-meřhy 1 bm-2-en- -l-yl)amino	57,8; 73; 25,3	333
183	DNII-	(ž)-(4-hydroxy-3’mediyttmt-2-ea- -I-ylJaaimo	585; 7,6; 24,3	.347
	MeN-	(Z)-(4-by droxy *3 inethylbut-i-en- ~l-yl)smi.tw	58,9; 7,6; 24.3	347
1SS		(ZH4 -hydroxy-3 -methylbut-2-eíi- -1 -yl jansisio	60,9; 8,1; 2X4	375
ISS	Me?-N~ethyl· NH-	(ZX44ty<hvxy-3 í hyi bu l-S-en- -l-yl)aminv	58,6; 8,0; 25,2	390
18?	McNR-	(4“hydroxy^r’3’mcthylbiJU^rl)a^ino	57,5; 7,8; 25,1	335
IííS	EťNH-	(4-hydiOx>^ř-3-iii£thyihuty])ařnssíC	58,6; 8,1; 24,1	349
	Mc,N-	(4 hydryxy-3-mechy IbutyDaminc	58,6; 8J; 24,1	349
m	EbN	(4-hydroxy-3-msthy 1 bttíyl)gj.ntiio	6(5,6; 8,6; 22,3	.377
191	McjN-ethyl· NU-	(4 -hy divxy -3 -rnelhy Ib myIJaniin u	58,3; 8,5; 25,0	392

Tabulka 4. Příklady připravených 9-(oxepan-2-yl)purinových derivátů.

Látka	SUSBTITLJENTY NA PURINIJ	CÍ1N ANALÝZA [%C; %H; %NJ	MS ANALÝZA
a	Cti
192	MeNH-	fiirfurylíímínn	59,6; 6,5; 24,5	343
m	Etbi.H-	f ú rftiry iainino	60,7; 6,8; 23,6	357
S 94	M.e,_rN-	furfuryÍ8imtx>	60,7: 6,8; 23,6	357
19š	E1₂N-	furfurylaiBíiw	62,5; 7,3; 21,9	385
ISÍ	MejN-eřliyl' ΝΠ-	fnrfiirylaniHio	60,1; 7,3; 24,5	i 00
197	MeNÍI-	benzýlaminn	6-,8, 6Λ 23,9	353
199	EíNH-	bísií.Kylstmmo	65,6; 7Λ 22,9	367

-32CZ 307868 B6

19í>	MejN-	benzykimhio	65,6; 7,2; 22,9	367
28B	Et₂N- MejN-ethyi-	benzylamiíio	67,0; 7,7; 213	395
281	NH-	benzylamino	64,5; 7,6; 23,9	410

Příklad 43

In vitro cytotoxická aktivita nových derivátů

Nízká cytotoxicita je nezbytná pro použití těchto látek v zemědělství. Jedním z parametrů používaných jako základ pro cytotoxickou analýzu je metabolická aktivita životaschopných buněk. Například mikrotitrační analýza, kde se používá Calcein AM, je dnes rozšířena jako metoda kvantifikace buněčné proliferace a cytotoxicity. Tento test je využíván v programech pro screening léků a pro testy chemosenzitivity. Testem se rozpoznají pouze životaschopné buňky. Množství zredukovaného Calceinu AM odpovídá počtu životaschopných buněk v kultuře.

Myší fibroblasty NIH3T3; myší immortalizované mikrofágy kostní dřeně B2.4 a B10A.4, a lidské fibroblasty BJ (human foreskin fibroblasts) byly použity pro rutinní screening sloučenin. Buňky byly udržovány v Nunc/Corning 80 cm² plastikových lahvích a pěstovány v médiu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5 g/1 glukózy, 2 mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10 % fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný).

Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a podle očekávané konečné hustoty buněk (2.500 až 30.000 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu), pipetovalo se 80 pl buněčné suspenze na 96-jamkové mikrotitrační destičky, fnokuláty byly stabilizovány 24 hodinovou preinkubací při 37 °C v atmosféře 5% CO2. Jednotlivé koncentrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 pl alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v čtyřnásobné ředicí řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 166,7 pM, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v triplikátech. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100 % vlhkosti a v atmosféře 5% CO2. Na konci inkubační periody byly buňky analyzovány po přidání roztoku Calceinu AM (Molecular Probes) a inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluorskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: IC50 = (FDj_amka s derivátem /FDkontrolní jamka) X 100 %. Hodnota IC50, která odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk, byla vypočtena ze získaných dávkových křivek (Tabulka 5).

Nulová cytotoxicita je základním předpokladem pro použití těchto látek v zemědělských aplikacích. Pro vyhodnocení protinádorové aktivity byla testována toxicita nových derivátů na panelech obsahujících buněčné linie rozdílného histogenetického a druhového původu (Tabulka 5). Ukázalo se, že pro všechny testované nádorové linie bylo působení nových sloučenin srovnatelné, kdežto nemaligní buněčné linie, tzn. N1H3T3 fibroblasty a normální lidské lymfocyty, byly vůči tomuto působení rezistentní. Sloučeniny uvedené v Tabulce 5 je možné rozdělit do 2 skupin. První skupina obsahuje klasické cytokininy reprezentované 6substituovanými puriny (jejich působení je již známé). Druhá skupiny zahrnuje nové substituované 6-anilinopurinové deriváty. Tyto výsledky naznačují, že substituce v pozici 2 purinového skeletu vede obecně k poklesu cytotoxické aktivity ve srovnání s klasickými cytokininovými analogy. Jak je ukázáno v tabulce 5, GI50 pro NIH3T3 fibroblasty a normální lidské lymfocyty byla vždy vyšší než 166,7 μΜ. Nové deriváty vykazují nulovou toxicitu pro normální i nádorové buňky v koncentracích okolo 166,7 μΜ a jsou proto mnohem vhodnější pro zemědělské a kosmetické aplikace než klasické cytokininy (6-substituované deriváty purinu).

-33CZ 307868 B6

Nízká cytotoxicity (vysoká hodnota IC50) je základním předpokladem pro použití těchto látek v kosmetických a medicinálních aplikacích. Nulová cytotoxická aktivita byla nalezena pro nové deriváty N²,N⁶-disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminu v porovnání s 5 klasickými cytokininy, které jsou známé z předchozích vynálezů (kinetin, isopentenyladenin,....).

Tabulka 5: Cytotoxicita nových sloučenin pro různé normální buněčné linie / IC50 (pmol/l)

š Sloučenina \|	S10A.4	BIO A .4	PJ	ΝΪΗ-3Τ3
iKinetin i	>166,7	164.1	147.5	132,8
ísopí.říte«yíadmi n	>166,7	146,9	Í34_SI
ů-hcftiř.yíadwm s iWsí-žVRtžn š	>166,7 > 166,7	138.9 >166,7	128,7 >166,7	..........112,6 ; 154,^
	>166,7		165,7	167,7
	87,’		107.8	91,1
Aťtenm I _ ................	> 166,7 >16 65	>166,7	>166,7 ______	>166.7 >1 ňft.7 1
9	> i 66.”		>166,7	>1.06,7
u 2 _ ..............................	166,7 > i 66,7	>166,7 >166,7	>166.'' >166,·’	>166,⁷ ΐ > i 66.⁷ ·
30 j	·-166,7		>166,⁷	> 166.7 i
39 1	> 166,7		>166,	>166,7 \|
46 ........1	> Š66.7		>166,⁷
\|47 1	>166.7		>166,7	>166,7
49 \|	>166,7 i >166,7	> í 66,7	> 166,7
58	>166,7		>166.7	>166.7
	>166,7		>166.7	>166.7
M i	>166.7		>166.7	>166,7
			-'166.7	>166,7
Í82 í	>166.7		>166.7	>166 7
84 \|	>166.7		>166,7	>166.7
85	>.166,7		>166,7	.> ΐ 6'5,7

>16ů.7

>166.7 >Ϊ66,7 >166.7

Příklad 44 Schopnost vychytávat volné radikály podle ORAC

Schopnost látek vychytávat volné radikály in vitro byla stanovena pomocí metody ORAC 15 (Oxygen Radical Absorbance Capacity). Ve stručnosti, 100 μΐ fluoresceinu (500 mM) a 25 μΐ

-34CZ 307868 B6 roztoku zkoumané látky byly napipetovány do každé jamky 96jamkové mikrotitrační desky předehřáté na 37 °C. Samotná reakce byla spuštěna přídavkem 25 pL 250 mM AAPH. Po 5 s třepání byla odečítána fluorescence (Ex. 485 nm, Em. 510 nm) každé 3 min po dobu 90 min pomocí přístroje Infinite 200 (TECAN, Švýcarsko). Plocha pod křivkou byla použitá k vyjádření antioxidační kapacity relativní vůči troloxu, který je používán jako standard. Látky s ORAC aktivitou vyšší než 1 jsou efektivnější než trolox, který je hydrofilním ekvivalentem vitaminu E. Kinetin, přirozeně se vyskytující cytokinin s antioxidačními vlastnostmi, byl přiřazen pro srovnání jako kontrola a jako látka známá ve stavu techniky.

Tabulka 6: Schopnost látek vychytávat volné radikály

Látka	ORAC (látka trolox)
kinetin	0201+0.5
155	2,422+0,107¹⁴
30	1,292+0,006
89	4.359+0.183
71	5,212+0,238
116	2,475+0,086
110	1.2 05+0,03 2
114	1,21 i ±0,018
6	LI 92+0,005
160	1,728+0,016
128	1.461+0,003
46	1,14+0.004
64	1,24+0,001

*Mean ± SD (n=3)

Příklad 45 Aktivace transkripčního faktoru Nrf2

Schopnost látek aktivovat Nrf2-dependentní expresi byla stanovena pomocí reportérové linie EpRE-LUX. Ve stručnosti, látky v koncentracích 100, 10, 1 a 0.1 μΜ byly inkubovány 24 h s buňkami. Po lyzaci buněk (10 mM Tris, 2 mM DTT) byl přidán pufr s 0.2 mM luciferinem čímž se spustila luminiscenční reakce. Nárůst luminiscence byl měřen pomocí přístroje Infinite M200 (TECAN, Švýcarsko) a vyjádřen jako relativní přírůstek vůči dimethylfůmarátu (DMF). Látky s Nrí2 aktivitou vyšší než 1 jsou efektivnější než dimethylfůmarát (DMF), aktivátor Nrf2 schválený k léčbě psoriázy a roztroušené sklerózy. Všechny nově vyvinuté deriváty jsou aktivnější než kinetin, přirozeně se vyskytující cytokinin, který byl použit jako srovnávací látka a je známý ve stavu techniky.

-35CZ 307868 B6

Tabulka 7: Aktivace transkripčního faktoru Nrf2

Látka
kinetin
155
30
76
89
71
T16
110
114
150
i 60
128
66
64

74rf2 0átka/DMF)

0,04+0.00

0,24+6.07*

1,09+0,29

0.27+0,15

0,19+0.02.

0,18±0

0,24+0,05

i ,83+0,08

2,53+9.39

0,34+0.02

0,14+0.03

0,66+0.14

0.25+0,17

1,21+0.09

*Mean ± SD (n=3)

Příklad 46 Inhibice intracelulární produkce ROS pomocí látky 114

Produkce ROS v živých buňkách byla stanovena pomocí fluorescenční próby DCFH-DA. Stručně, látka 114 v koncentracích 100, 10, 1 a 0,1 μΜ byla inkubovaná 24 h s BJ kožními fibroblasty. Následně byly buňky opláchnuty fosfátovým pufrem a byla přidaná látka DCFHDA. Nárůst fluorescence byl odečítán každou minutu po dobu 20 min pomocí přístroje Infinite M200 (TECAN, Switzerland). Produkce ROS byla vyjádřena jako nárůst fluorescence během 20 min. Látka 114 signifikantně snižovala intracelulární produkci ROS in vitro v koncentraci > 10 μΜ.

Příklad 47 Ochrana peroxidace membránových lipidů

Typickým symptomem spojeným se stárnutím je jako přímý důsledek zvýšená koncentrace reaktivních forem kyslíku a peroxidace lipidů. Proto hladiny malonyldialdehydu (MDA), dekompozičního produktu peroxidace lipidů, byly měřeny v oddělených listech pšenice, které byly vystaveny účinku nových připravených derivátů a kinetinu po dobu čtyř dnů v temnu, jak je popsáno v příkladu 7. Hladiny MDA byly měřeny za použití kyseliny thiobarbiturové (metoda TBA). V detailu, 100 mg čerstvého rostlinného materiálu se homogenizuje pomocí vysoké rychlosti třepání v kulovém mlýnu (MM301, Retsch, Německo) se 1 ml 80% metanolu. Surový extrakt byl centrifugován při 10 000 x g po dobu 5 minut a 100 μΐ alikvot supernatantu se smíchal se 100 μΐ 0,5% (w/v) TBA, obsahující 0,1% (w/v) kyseliny trichloroctové. Výsledný roztok byl poté inkubován po dobu 30 min při 95 °C. Vzorky byly rychle ochlazeny na ledu a centrifugovány 5 minut při 1000 xg. Absorbance supernatantu byla měřena při 532 nm s odečtením pozadí při 600 nm a množství MDA-TBA komplexu bylo vypočteno s využitím absorpčního koeficientu (155 mM ¹ cm ). Nové deriváty významně snížily peroxidaci membránových lipidů ve srovnání s neošetřenou kontrolou (Tabulka 8 - hodnoty vyjadřují obsah MDA, produktu rozkladu membránových lipidů). Sloučeniny podle tohoto vynálezu výrazně snižují hladinu peroxidace membránových lipidů v živočišných buňkách, jak lze vidět z výsledků v tabulce 8.

Nově připravené deriváty obecného vzorce tak mají ochrannou funkci proti negativnímu působení reaktivních forem kyslíku, které se výrazně hromadí v tkáních.

-36CZ 307868 B6

Tabulka 8. Vliv nových sloučenin na peroxidaci membránových lipidů u NIH3T3 fibroblastů.

Sloučenina č.	MDA (nmol/g čJh.)
Kontrola	18,9 (±2,2)
kinctin	14,2 (±1,6)
3	12,4 (±1,1)
9	12,2 (±1,0)
13	13,1 (±1,1)
Í4	11,4 (±1,0)
30	12,6 (±1,1)
39	11,4 (±1,0)
46	11,2 (±1,5)
47	12,5 (±1,2)
49	12,3 (±1,0)
58	11,4 (±0,9)
59	11,5 (±1,0)
60	12,2 (±1,2)
75	11,7 (±1,2)
82	10,9 (±0,7)
84	10,6 (±0,8)
85	11,1 (±0,9)
87	10,4 (±1,0)
93	10,5 (±1,1)
99	10,2 (±0,9)
101	10,6 (±0,5)
103	10,1 (±0,9)
104	9,6 (±0,7)
105	1.0,6 (±0,8)
107	1.0,3 (±0,9)
108	9,7 (±0,6)
111	10,3 (±1,0)
114	8,8 (±0,5)
116	9,2 (±0,8)
119	9,7 (±0,9)
127	10,4 (±1,4)
132	10,7 (±1,2)

*č.h. - čerstvá hmota

-37CZ 307868 B6

Příklad 48 Amesův Test

Testovaná substance 114 byla testována na mutagenitu bakteriálním testem reverzních mutací. Provedení testu bylo založeno na metodě EU B. 13/14 Mutagenicity - Reverse mutation test using bacteria, která je analogem metodiky OECD Test Guideline No. 471. Byly použity čtyři indikátory kmene Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535, TA 1537 a také byl použit jeden kmen Escherichia coli WP2 uvrA. Zkoušená látka se rozpustila v dimethylsulfoxidu (DMSO) a byla testována v dávkách 10 až 1000 pg na jednu desku, která byla aplikována na plotny v objemu 0,1 ml. Experimenty byly prováděny s metabolickou aktivací se supematantem z krysích jater a směsi kofaktorů stejně jako bez metabolické aktivace. Pracovní postup byl proveden podle dokumentů Metody B. 13 / 14, Mutagenicity - Reverse mutation test using bacteria, Council Regulation (EC) No.440/2008. Published in O. J. L 142, 2008 a podle metodiky OECD Test Guideline 471, Bacterial Reverse Mutation Test. Adopted July 21, 1997. Při testování v uspořádání uvedeném výše se testovaná látka projevila jako nemutagenní pro všechny použité testovací kmeny s metabolickou aktivací stejně jako bez metabolické aktivace.

Příklad 49 Akutní Toxicita -procedura s fixní dávkou (v podkožním podání)

Cíl této studie byl prozkoumat akutní toxický efekt testované substance po jednom podání podkožně krysám Wistar. Testování bylo provedeno v souladu s metodikou: ČSN EN ISO 10993-11: Biologické hodnocení zdravotnických prostředků - část 11: Zkoušky na systémovou toxicitu a OECD Test Guideline No. 420 Acute Oral Toxicity - Fixed Dose Proceduře adopted 17th December 2001. Testovaná substance 114 byla podána v jedné dávce jako roztok ve vehikulu (olivový olej) a byla aplikována podkožně samcům a samicím krys Wistar. Dávkování bylo provedeno postupně. Předtestování látky (obervační studie) byla provedena s jednou samicí a jedním samcem pro každou dávku. Jako startovací dávka byla použito dávkování 30 mg/kg. Žádné ze zvířat neuhynulo po podání startovací dávky, a proto se pokročilo k zvýšení dávkování (100 mg/kg). Testovaná substance podána v dávkách 30 a 100 mg/kg nezpůsobila uhynutí testovacích subjektů a nebyly pozorovány žádné klinické znaky intoxikace. Přítomnost podkožně aplikované testované substance při dávkování 30 a 100 mg/kg byla pozorovatelná do druhého dne po aplikaci. Nebyly diagnostikovány žádné 5 makroskopické změny v průběhu patologického vyšetření. Dle výsledků studie testované substance je Maximální tolerovaná dávka v podkožním podání v krysích samcích i samicích >100 mg/kg.

Příklad 50 Akutní dermální toxicita

Testovaná substance 114 byla testována na akutní dermální toxicitu s použitím Wistar krys. Testování bylo provedeno v souladu s ČSN EN ISO 10993-11: Biologické hodnocení zdravotnických prostředků - část 11: Zkoušky na systémovou toxicitu a také v souladu s OECD Test Guideline No. 402 Acute Dermal Toxicity adopted 24thFebruary 1987. Studie byla provedena jako limitní test: dvě skupiny subjektů - 5 samců a 5 samic při dávkování 1000 mg/kg tělesné hmotnosti. Předtestování bylo provedeno s 1 samcem a 1 samicí z každé skupiny. Po pilotním experimentu byla i ostatní zvířata naaplikována. Testovaná substance byla aplikována ve formulaci na oholenou kůži pokusných zvířat a ponechána po dobu 24 hodin. Pokusná zvířata byla pozorována po 14 dní po vystavení testované substanci, poté byla pokusná zvířata usmrcena a byla provedena pitva s makroskopickým vyšetřením orgánů. Testovaná látka pří dávce 1000 mg/kg tělesné hmotnosti nezpůsobila uhynutí pokusných zvířat. Nebyly pozorovány žádné klinické znaky toxicity v průběhu celé studie. Nebyly diagnostikovány žádné makroskopické změny v průběhu patologického vyšetření. Toxicita testované substance byla posuzována na základě úmrtnosti, změnách hmotnosti, klinických známkách toxicity v průběhu pozorovacího období a pitvy na konci studie. Vzhledem k výsledkům studie je hodnota Maximální tolerované dávky u testované substance vyšší než 1000 mg/kg tělesné hmotnosti.

Příklad 51 In vitro test dráždivosti pokožky

Testovaná substance byla testována v in vitro testu na dráždivost kůže v lidském epidermálním modelu EpiDerm™. Test byl proveden dle metodiky Method B.46. In vitro skin irritation:

-38CZ 307868 B6

Reconstructed human epidermis model test and Protocol for: In Vitro EpiDerm™ Skin Irritation Test For use with MatTek Corporation’s Reconstructed Human Epidermal Model EPI-200-SIT (see par. 1.4, (1), (3)). Byly připraveny dva typy extraktů ve smyslu polární (voda) a nepolární (olivový olej) rozpouštědlo dle instrukcí daných normou ČSN EN ISO 10 993-12 (2012). Po preinkubaci tkáně bylo 30 μΐ extraktu umístěno přímo na povrch tkáně tak, aby překryl celý její povrch. Délka expozice byla 60 minut. Tři tkáňové kultury byly použity pro extrakt a pro každou kontrolu. Procedura byla provedena zvlášť pro každý extrakt. Po odstranění extraktů testovací substance z tkání, byla tkáň post inkubována po dobu 42 hodin kvůli zbytkům po opravách poškození. Tří hodinová inkubace s MTT a dvě hodiny extrakční periody vytřepáváním následovaly. Optická hustota (OD570) extraktu isopropyl alkoholu byla změřena na spektrofotometru. Relativní buněčná životaschopnost byla vypočítána pro každou tkáň jako % střední životaschopnosti negativní kontroly tkáně. Dle experimentů popsaných výše, průměrná životaschopnost tkání ošetřených testovací substancí ve vodním extraktu byla 99,0% a u testovací substance v extraktu s olivovým olejem byla 103,0%, což znamená, že životaschopnost byla > 50% v obou případech. Efekt testované substance 114 byl negativní v EpiDerm™ modelu (tkáň nebyla poškozena). Dle klasifikačních kritérií daných v kapitole 4.5. je testovaná substance považována, že nemá kategorii ve vztahu k dráždivosti kůže.

Příklad 52 Test dráždivosti kůže

Testovaná substance 114 byla testována v zvířecím testu podráždění kůže. Králíci (Novozélandské albínské plemeno) byly použity pro tento test. Test byl proveden dle norem ČSN EN ISO 10993 (březen 2014): Biologické hodnocení zdravotnických prostředků - část 10: Zkoušky dráždivosti a senzibilizace kůže, článek 6.3 Zkouška dráždivosti na zvířatech. Dávka 0.5 g testované substance byla aplikována na kůži na zádech na obou stranách králíka. S cílem prokázat citlivost pokusu, byla zahrnuta pozitivní kontrola (0,5g laurylsulfát). Zpočátku byl použit jeden králík (testovací zvíře č. 16). Dva další králíci (králík č. 17 a č. 18) byly použiti pro potvrzující test. Na konci kontaktu (po 4 hodinách) byly odstraněny obvazy a zvířata se pozorují na příznaky erytému a edému a odezva byla hodnocena po 1, 24, 48 a 72 hodinách po odstranění obvazu. Nebyly pozorovány žádné změny v hmotnosti zvířat. Během celé studie nebyly zjištěny žádné klinické známky systémové intoxikace. Primární index podráždění pro pozitivní kontrolu byl 1,67 (mírné), čímž byla zajištěna spolehlivost pozitivní kontroly. Bez zarudnutí a otoku bylo zaznamenáno po 1, 24, 48 a 72 hodinách v testovacích místech všech tří králíků. Primární index podráždění pro testovanou látku byl definován jako 0. Nebylo způsobeno žádné podráždění kůže po 4 hodinovém vystavení králíků testované substanci.

Příklad 53 Přípravky

Prostředky pro regulaci růstu obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, směsi účinných látek obsahující N²,N⁶-disubstituovaný-9-(2-oxacykloalkyl)-9Hpurin-2,6-diamin podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti pevné nebo kapalné přípravky, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla. Zatímco komerční produkty jsou obvykle formulovány jako koncentráty, konečný uživatel bude normálně používat zředěné formulace. Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje (epoxidovaný kokosový, řepkový olej nebo sójový olej), činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost a také hnojivá nebo jiné aktivní složky. Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):

AI. Emulgovatelné koncentráty	a)	b)	c)	d)
Aktivní složka	5%	10%	25%	50%
dodecylbenzensulfonan vápenatý	6%	8%	6%	8%
polyoxyethylovaný ricinový olej
(polyglykol ether ricinového oleje)	4%	-	4%	4%
(36 mol ethylenoxid)

-39CZ 307868 B6 oktylfenol polyglykol ether - 2 % - 2 % (7 až 8 mol ethylenoxid) cyklohexanon - - 10 % 20 % směs aromatických uhlovodíků C9-C22 83 % 82 % 53 % 18 %

Emulze o vyžadované finální koncentraci mohou být získány z takového koncentrátu zředěním vodou.

A2. Roztokv	a)	b)	c)	d)
10 Aktivní složka	5 %	10 %	50%	90%
1 -methoxy-3-(3-methoxy-
-propoxyj-propan	-	20 %	20%	-
polyethylenglykol MW 400	20%	10 %	-	-
N-methyl-2-pyrrolidon	-	-	30%	10%
15 směs aromatických uhlovodíků	75 %	60 %	-	-

Roztoky jsou vhodné k aplikaci ve formě mikrokapének.

	A3. Smáčivé práškv	a)	b)	c)	d)
20	Aktivní složka	5 %	25 %	50%	80%
	ligninsulfonan sodný	4%	-	3 %	-
	laurylsulfát sodný	2%	3 %	-	4 %
	diisobutylnaftalensulfonát sodný	-	6 %	5 %	6 %
25	oktylfenol polyglykol ether (7 až 8 mol ethylenoxid)	—	1 %	2%	—
	vysoce disperzní kyselina křemičitá	1 %	3 %	5 %	10 %
	kaolin	87 %	61 %	37 %	-
	Aktivní složka je důkladně promísena	s pomocnými	látkami	a směs	je důkladně rozemleta ve
30	vhodném mlýnu. Suspenzi libovolné koncentrace je možné získat smísením vzniklého prachu s vodou.
	A4. Suspenzní koncentrát	a)	b)	c)	d)
	Aktivní složka	3%	10%	25%	50%
35	etylenglykol	5 %	5 %	5 %	5 %
	nonylfenol polyglykol (15 mol etylenoxid)	—	1 %	2%	—
	lignosulfonát sodný	3 %	3 %	4%	5 %
	karboxymethylcelulóza	1 %	1 %	1 %	1%
40	37% vodný roztok formaldehydu	0.2 %	0.2%	0.2 %	0.2%
	emulse silikonového oleje	0.8 %	0.8 %	0.8 %	0.8%
	voda	86%	78 %	64%	38%

Jemně rozemletá aktivní složka je smíchána s pomocnými látkami. Vzniklý suspenzní koncentrát 45 umožňuje přípravu suspenze o požadované koncentraci zředěním vodou.

A5: Suché Kapsle

5000 Tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g N²,N⁶-disubstituovaný-9-(2-oxacykloalkyl)-9Hpurin-2,6-diamin, se připraví následujícím způsobem:

Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180 g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát horečnatý: 80 g; Laktóza 20 g.

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek.

-40CZ 307868 B6

A6: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g N²,N⁶-disubstituovaný-9(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diamin jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem: Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

A7: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g N²,N⁶-disubstituovaný-9(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diamin jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem: Složení: 250 g účinné složky vil PEG 400, 1 litr Tween 80.

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem lne., Inc., USA., dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 54 Gelový přípravek

Formulace mastí byla testována během pilotní klinické studie se 4 dobrovolníky s psoriázou, což je onemocnění kůže. Složky jsou uvedeny v gramech na 100 g.

látka	Obsah \|
Látka 114	LOg ί
Butvlhydroxytol uenuin	0.2 g i
Butyiparaben	0.2 g
Diethyíeneglycol monoetbyl ether	10.0 g 1
Síliea colloidalis anhydrica	5.0 g
Propylene glycol Jaurate	83.6 g

Gel této konzistence může být navíc modifikován přidáním oxidu křemičitého, colloidalis anhydrica. Také se opět předpokládá, že transdermální systém Transcutol P / Lauroglycol FCC zvýší účinnost látky 114. Oxid křemičitý colloidalis anhydrica pravděpodobně zpomalí penetraci účinné látky.

Příklad 55 Postup přípravy kožní masti

Složky masti jsou uvedeny v gramech na 200 g:

Látka	Obsah
Látka 114	2.0g
Ritty Jhydrox y 1 o* uetiutn	0.4 g
Buty Iparaben	Mg
Diethyleneglycol monoetbyl ether	20.0 g
Glycetol dibehenaie	44.0 g
Propylene glyccl laurate	133.2 g

-41 CZ 307868 B6

Doporučený postup

Fáze A: 2 g látky 114 se rozpustí ve 20 g Transcutol P za stálého míchání při teplotě místnosti v oddělené skleněné nebo nerezové nádobě. Proces rozpouštění může být urychlen zahříváním roztoku na maximální teplotu 40 °C.

Fáze B: 0.4 g Nipanox BHT a 0,4 g Nipabutyl se rozpustí za stálého míchání ve 133,2 g Lauroglycolu FCC při teplotě přibližně 70 °C, v další samostatné skleněné nebo nerezové nádobě. Čirý olejovitý roztok se zahřívá na teplotu přibližně 80 °C a 44 g Compritol 888 ATO se taví v něm, za stálého míchání. Čirý olejovitý roztok se ochladí na cca 60 °C za stálého míchání a ochlazení a smísí se s fází A. Vzniklá bělavá mast je rozdělena na přibližně 15 g porce a plní se do předem připravených plastových nádob.

Příklad 56 Formulace přípravku pro lokální aplikaci na kůži

Prostředek pro místní aplikaci na kůži obsahuje následující složky podle hmotnostních %:

Aktivní složka:	Látka 114 0,1%
Olejová fáze:	Cetylalkohol 5,0% Glycerylmonostearát 15,0% Sorbitanmonooleát 0,3% Polysorbát 80 USP 0,3%
Vodná fáze:	Methylcelulózová 100 cps 1,0% Methylparaben 0,25% Propylparaben 0,15% Vyčištěná voda q.s. na 100%

Methylparaben a propylparaben se rozpustí v horké vodě a následně se v ní disperguje i methylcelulóza. Směs se pak ochladí na 60 °C, dokud se methylcelulóza nerozpustí. Směs se potom zahřívá na 72 °C a přidá se do olejové fáze, která se zahřívá na teplotu 70 °C za stálého míchání. 8-Amino-6-furfůrylaminopurin se přidá při teplotě 35 °C a výsledná směs se míchá až do okamžiku rozptýlení. Tento prostředek se aplikuje na kůži přinejmenším každý den, dokud se nedosáhne 10 požadovaného zmírnění stárnutí kůže (proti stárnutí).

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. /V²/V-Disiibstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů, přičemž uvedené deriváty mají obecný vzorec I, (I) ve kterém

R² a R³ jsou nezávisle vybrány z H, -(CIFfuCIF, m = 0 nebo 1 nebo 2, -CF^CFbh, -(CFL)» N(CFb)2, n = 2 nebo 3,

-42CZ 307868 B6 přičemž alespoň jeden ze substituentů R² a R³ je alkyl nebo dimethylaminoalkyl;

o je celé číslo v rozmezí 2 až 5, tedy 2 nebo 3 nebo 4 nebo 5, přičemž vodík v alespoň jedné methylenové skupině (CH2) v substituentů na N9 může být volitelně nahrazen methylem nebo methoxy skupinou;

R¹ je vybráno ze skupiny zahrnující

- fůrfůryl nebo furfůryl substituovaný alespoň jednou methylovou nebo methoxy skupinou,

- benzyl nebo benzyl substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující methyl, trifluormethyl, hydroxy, methoxy, trifluormethoxy, halogen, amino, methoxykarbonyl a acetoxy,

- 3-methylbut-2-en-l-yl,

- 3-mefhyIbut-3-en-l-yl,

- 4-hydroxy-3 -methylbut-2-en-l-yl,

- 4-hydroxy-3-methylbutyl, a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo jejich adiční soli s kyselinami.

2. /V²,/V^{5 6}-I)isubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle nároku 1, kde je-li R² nebo R³ -(CH₂)„N(CH₃)₂, je druhý z těchto substituentů vodík.

3. /V²,/V⁶-I)isubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle nároku 1 nebo 2, kde skupina -N(R²)(R³) je vybrána ze skupiny zahrnující methylamino, ethylamino, propylamino, 2-propylamino, dimethylamino, diethylamino, [2-(dimethylamino)ethyl]amino, [3-(dimethylamino)propyl] amino.

4. /V²,/V²-Disubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde R¹ je vybrán ze skupiny zahrnující fůrfůryl, 3methylfurfuryl, 4-methylfurfuryl, 5-methylfurfuryl, 3-methoxyfurfuryl, 4-methoxyfurfuryl, 5methoxyfurfuryl, benzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2(trifluormethyl)benzyl, 3-(trifluormethyl)benzyl, 4-(trifluormethyl)benzyl, 2-hydroxybenzyl, 3hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzylamino, 2-methoxybenzyI, 3-methoxybenzyl, 4methoxybenzyl, 2-(trifluormethoxy)benzyl, 3-(trifluormethoxy)benzyl, 4(trifluormethoxy)benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-jodbenzyl, 3jodbenzyl, 4-jodbenzyl, 2-aminobenzyl, 3-aminobenzyl, 4-aminobenzyl, 2methoxykarbonyljbenzyl, 3-(methoxykarbonyl)benzyl, 4-(methoxykarbonyl)benzyl, 2acetoxybenzyl, 3-acetoxybenzyl, 4-acetoxybenzyl, 2,3-dihydroxybenzyl, 2,5-dihydroxybenzyl, 3,4-dihydroxybenzyl, 3,5-dihydroxybenzyl, 2,3- dimefhoxybenzyl, 2,5-dimethoxybenzyl, 3,4dimethoxybenzyl, 3,5-dimethoxybenzyl, 2,6-difluorbenzyl, 3,4-difluorbenzyl, 3,5difluorbenzyl, 2,3-dichlorbenzyl, 2,4-dichlorbenzyl, 3,4-dichlorbenzyl, 3,5-dichlorbenzyl, 2hydroxy-3-methylbenzyl, 2-hydroxy-5-methylbenzyl, 2-hydroxy-3-methoxybenzyl, 2hydroxy-4-methoxybenzyl, 3-hydroxy-4-methoxybenzyl, 4-hydroxy-2-methoxybenzyl, 4hydroxy-3-methoxybenzyl, 3-fluor-4-hydroxybenzyl, 3-chlor-4-hydroxybenzyl, 4—fluor-3hydroxybenzyl, 4-chlor-3-hydroxybenzyl, 2-chlor-4-fluorbenzyl, 2-chlor-6-fluorbenzyl,

3.4.5- trihydroxybenzyl, 3,4,5-trimethoxybenzyl, 2,3,4-trifluorbenzyl, 2,3,6-trifluorbenzyl,

3.4.5- trifluorbenzyl, 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, 3-methylbut3-en-1 -yl, 4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -yl, 4-hydroxy-3-methylbuty 1.

5. /V²,/V⁶-I)isubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z předcházejících nároků, kde substituent na N9 je vybrán z tetrahydro-2H-pyran2-ylu a tetrahydrofuran-2-ylu, které mohou být volitelně substituované alespoň jednou, s výhodou jednou, methylovou nebo methoxylovou skupinou.

-43CZ 307868 B6

6. /V²,/V⁶-Disiibstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle nároku 1 vybrané ze skupiny zahrnující 2-(methylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)9H-purin, 2-(ethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2(dimethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2-(diethylamino)-6furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2-{[2-(dimethylamino)ethyl]amino}-6furfurylamino-9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin; 2-(methylamino)-6-furfurylamino-9(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin, 2-ethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2Hpyran-2-yl)-9H-purin; 2-(dimethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)9H-purin; 2-(diethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin; 2-{ [2(dimethylamino)ethyl] amino} -6-furfurylamino-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin a jejich soli, ve kterých může být fůrfůrylová skupina substituovaná alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující methyl nebo methoxy skupinu.

7. /V²,/V⁶-I)isubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití jako antioxidační, antisenescenční, antiaging a prodiferenciační činidla pro inhibici nepříznivých metabolických procesů, inhibici peroxidace lipidů a proteinů a/nebo inhibici procesů stárnutí u rostlin a živočichů, zejména člověka.

8. /V²,/V⁶-Disubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití jako léčiva a/nebo kosmetické přípravky.

9. /V²,/V⁶-Disubstitiiované deriváty 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro použití při léčbě kožních onemocnění, jakými je akné, erytém a zarudnutí, onemocnění zahrnujících oxidační stres v kůži, jakými jsou rakovina kůže, psoriáza, fibrózy u fibrotických poruch, jako je sklerodermie, reakce štěpu proti hostiteli (GVHD), hypertrofické jizvy, nefrogenní systémové fibrózy, při léčbě lupenky, alergického ekzému, toxického ekzému, atopické dermatitidy, lichen planus, hyperpigmentace a leze herpes simplex, ichtyózy, papilomu, Bowenovy choroby, seboroické keratózy, aktinické keratózy, bazálního a spinocelulámího karcinomu, jako antineurodegenerativních léčiv, a pro potlačení imunostimulace, a/nebo pro léčení zánětu, zejména k urychlení hojení lézí, poskytnutí okamžité úlevy od bolesti a jiné imunologické odpovědi na zánět.

10. Použití /V²,/\/-disiibstitiiovanýcli derivátů 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jako kosmetik pro inhibici, zlepšení a oddálení procesů stárnutí a senescence, a pro zlepšení vzhledu a kondice kůže.

11. Použití /Vý/V-disubstitiiovanýcIi derivátů 9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 jako růstových regulátorů ve tkáňových kulturách pro stimulaci proliferace, morfogeneze a inhibici senescence; použití jako faktorů buněčného dělení a diferenciace rostlin, mikroorganizmů, kvasinek a hub.

12. Farmaceutický a/nebo kosmetický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden derivát /V²,/V⁶-disubstituované-9-(2-oxacykloalkyl)-9H-purin-2,6-diaminu obecného vzorce I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 a alespoň jednu pomocnou látku. ¹