CZ2022227A3 - Heterocyklické sloučeniny pro prevenci a terapii poruch cirkadiánního rytmu - Google Patents

Abstract

Předkládané řešení poskytuje heterocyklické sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde každý z X, Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z X, Y a Z je O;n je 1 nebo 2 nebo 3, R1 je H nebo C1-C4 alkyl; R2 je vybraný z H, chlor, C1-C4 alkoxy a NR21R22; kde R21 a R22 jsou nezávisle vybrány z H, C3-C6 cykloalkyl a C1-C8 alkyl, přičemž jeden uhlíkový atom v C1-C8 alkylu může být volitelně nahrazen jedním dusíkovým atomem nebo jedním kyslíkovým atomem; nebo kde R21 je H nebo C1-C4 alkyl a R22 je vybraný z C6-C10 aryl-methyl, C6-10 aryl-ethyl, C3-C6 heteroaryl-methyl, C3-C6 heteroaryl-methyl, přičemž heteroarylová skupina obsahuje 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S, N; nebo kde R21 a R22 spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří tříčlenný až osmičlenný kruh volitelně obsahující jeden další heteroatom vybraný z O, S, N. Tyto sloučeniny jsou vhodné pro použití pro prevenci a terapii nemocí cirkadiánního rytmu.

Description

Heterocyklické sloučeniny pro prevenci a terapii poruch cirkadiánního rytmu

Oblast techniky

Vynález se týká využití heterocyklických sloučenin pro modulaci cirkadiánních rytmů savců včetně člověka a jejich buněk, tkání a orgánů. Taková modulace je užitečná pro léčbu jak akutních, tak chronických nemocí cirkadiánního rytmu v důsledku jak genetických, tak socioenviromentálních faktorů.

Dosavadní stav techniky

Cirkadiánní hodiny se vyvinuly jako adaptace na 24hodinový sluneční den, a ačkoli se jejich mechanismus u různých organismů liší, patří mezi univerzální vlastnosti života. Umožňují předvídat pravidelně se měnící vnější podmínky. Fungují však také v aperiodických podmínkách s vlastní geneticky určenou cirkadiánní periodou. Jsou synchronizovatelné vnějším prostředím a řídí metabolické, fýziologické a behaviorální rytmy. U savců jsou cirkadiánní rytmy řízeny centrálním oscilátorem umístěným v suprachiasmatických jádrech hypotalamu, tzv. SCN, který je přímo synchronizován světlem a reguluje místní hodiny v periferních tkáních, jako je mozková kůra, hippocampus, sítnice, játra, ledviny, střeva nebo slinivka. Hlavní oscilátor v SCN, a také periferní oscilátory, jsou složeny ze vzájemně propojených transkripčních a (post)translačních zpětnovazebních smyček (TTFL) tvořených rodinami hodinových genů, jako jsou PER, BMALl, CLOCK, REV-ERB, ROR a CRY. Hodinové geny pak rytmicky regulují velkou skupinu převážně tkáňově specifických hodinami řízených genů s různými fůnkcemi včetně regulace metabolismu nebo buněčného dělení.

Je zajímavé, že hodinové geny hrají roli v celé řadě dalších procesů. Například lidský BMALl přispívá k normální fůnkci pankreatických beta-buněk a reguluje glukózou stimulovanou sekreci inzulínu. Dále reguluje signální dráhu mTORCl regulací exprese MTOR a DEPTOR. Exprese chemokinů v Ly6C monocytech je také regulována pomocí ARNLL/BMALl (Nguyen et al. 2013 [doi: 10.1126/science. 1240636]). Dále reguluje expresi genů podílejících se na růstu vlasů (Watabe et al. 2013). Hraje také důležitou roli v dospělé hipokampální neurogenezi tím, že časuje vstup neuronálních kmenových buněk do buněčného cyklu. Lidský PER2 hraje roli v metabolismu lipidů (tlumením proadipogenní aktivity PPARG) a v metabolismu glukózy (regulace hladin cirkulujícího inzulínu). PER2 přispívá k udržení kardiovaskulárních fůnkci prostřednictvím regulace produkce NO a vasodilatačních prostaglandinů v aortě. Reguluje také absorpci glutamátu v synaptických vesikulech, absorpci mastných kyselin v játrech a podílí se na regulaci zánětlivých procesů.

Hodinami regulované geny a proteiny mohou tvořit i více než 20% celkového transkriptomu a proteomu v závislosti na tkáni.

Jejich rytmická regulace umožňuje buňkám, tkáním a orgánům koordinovaně provádět fýziologické procesy, předvídat a připravovat se na změny prostředí. Synchronizace jednotlivých oscilátorů v periferních tkáních pomocí SCN prostřednictvím hormonálních a neuronálních signálů umožňuje přesnou koordinaci a integraci různých fýziologických fůnkci.

Abnormální chování cirkadiánních hodin, pokud jde o změny v periodě, fázi nebo amplitudě na úrovni buněk, tkání, orgánů nebo celého těla i fázový nesoulad mezi oscilátory v jednotlivých tkáních/orgánech nebo mezi biologickým a vnějším časem vede k narušení homeostázy, což má za následek různé dysfunkce a patologie.

Mezi poruchy a onemocnění cirkadiánního rytmu (Fishbein et al. 2021 [doi:10.1172/JCI148286], Zee et al. 2013 [doi: 10.1212/01. CON.0000427209.21177. aa]) patří ty, u kterých je dysfunkce nebo nesoulad cirkadiánních hodin primární příčinou (dědičný syndrom pokročilé spánkové fáze

- 1 CZ 2022 - 227 A3

FASPS, porucha pokročilé fáze spánku - ASPD, syndrom nepravidelné spánkové fáze a volně běžící spánkové fáze, pásmová nemoc, intolerance směnného režimu, sociální jet lag), jakož i ty, u nichž je porucha cirkadiánního rytmu způsobena danou nemocí a přispívá k patofyziologii choroby. Mírná kognitivní porucha, Alzheimerova choroba a Smith-Magenisův syndrom jsou příklady onemocnění, kde je vliv na cirkadiánní rytmus variabilní - předbíhání fáze a odpovídající abnormální cyklus spánku a bdění je přítomen jen u některých pacientů (Naismith et al. 2013 [doi: 10.3233/JAD-131217], Liguori et al. 2014 [doi:10.1001/jamaneurol.2014.2510], Nováková et al. 2012 [10.1210/jc.2011-2750]).

Při absenci vnějších podnětů (například ve stálé tmě) je endogenní perioda cirkadiánního rytmu u lidí v průměru o 15 až 20 minut delší než 24 hodin. U zcela slepých subjektů neschopných synchronizace světlem takováto perioda často chronicky přetrvává. Výsledkem jsou vzhledem k vnějšímu času volně běžící spánkové fáze těchto subjektů, což je u nich často spojené s negativními metabolickými, kognitivními a emocionálními důsledky.

Nesoulad cirkadiánních hodin s vnějším časem je také typickým rysem moderního života. Letecká doprava umožňuje rychlé cestování přes časová pásma, což má za následek pásmovou nemoc (jet lag). Umělé světlo umožňuje aktivita nezávislé na přirozeném světle, které za přirozených podmínek účinně synchronizuje centrální oscilátor v SCN a v důsledku poté dochází k desynchronizaci a oslabení rytmu. Osobní preference specifické spánkové fáze (tzv. chronotyp, biologický čas) a společenské faktory (sociální čas) ovlivňují časování aktivity. Sociální a biologické hodiny jsou spolu často v rozporu, což má za následek tzv. sociální jet lag (tj. chronický rozdíl mezi fází spánku ve volných dnech a pracovních dnech), který má negativní vliv na zdraví (Roenneberg a Merrow 2008 [doi:0.1016/j.smrv.2007.07.005]). Obzvláště důležitý faktor způsobující cirkadiánní desynchronizaci je práce na směny, jak kvůli její prevalenci (více než 17 % pracovní síly v EU jsou noční pracovníci), tak kvůli jejím zdravotním rizikům.

Pásmová nemoc (jet lag), sociální jet lag, intolerance směnného režimu (shift work disorder) výrazně ovlivňují fyziologické fúnkce a zvyšují výskyt civilizačních chorob (Roenneberg 2012 [doi:10.1016/j.cub.2012.03.038]; Roenneberg a Merrow 2016 [doi: 10.1016/j.cub.2016.04.011]). Častí směnoví pracovníci také vykazují zvýšené riziko deprese, metabolického syndromu (Costa et al. 2016 [doi:10.1080/07420520802114193]), rakoviny prsu, prostaty a konečníku (Sulli et al. 2019 [doi: 10.1016/j.trecan.2019.07.002]).

Příznaky jet lagu a sociálního jet lagu zahrnují nejen narušení spánku (přerušovaný spánek, problémy se (znovu)usnutím a udržením spánku, buzení v neodpovídající čas) a únavu během dne, ale také změny nálady, kognitivní problémy (zmatenost, nedostatečná koncentrace, snížená mentální agilita), nevolnost, motání hlavy, úzkost, bolesti hlavy, problémy s trávením, změny ve frekvenci a konzistence stolice a snížení zájmu o okolí a jídlo. Tyto problémy nejde efektivně korigovat pomocí hypnotik. Vhodným prostředkem jsou naopak látky schopné přímým působením na buněčné komponenty cirkadiánního oscilátoru navodit nebo urychlit navození souladu vnitřního a vnějšího času.

Současným přístupům k léčbě poruch (nemocí) cirkadiánního rytmu dominují různé varianty terapie jasným světlem a použití melatoninu nebo syntetických agonistů melatoninových receptorů. Tyto metody však mají také významné nevýhody. Terapie jasným světlem je pro mnoho uživatelů považována za velmi nepohodlnou, protože vyžaduje vystavení se velmi vysokým úrovním světla v přesných časových oknech každý den (Zee et al. 2013 [doi:10.1212/01.CON.0000427209.21177.aa.]). U nevidomých pacientů je vyloučená. Melatonin je účinný u jen některých pacientů s poruchami spánku. Nemá významný efekt například na pacienty trpící FASPS, ASPD nebo pásmovou nemocí po cestování směrem na západ. Navíc existuje velká individuální variabilita v reakci na melatonin. Další nevýhoda světla nebo melatoninu je, že jejich účinek na fázi rytmů je přímo závislý na okamžité fázi centrálních hodin v SCN. Například světlo během subjektivního dne nijak nepůsobí na fázi SCN (neresponzivní zóna

-2CZ 2022 - 227 A3 fázově responzní křivky), je proto nutné ho časovat do brzkých ranních nebo pozdních večerních hodin.

Novým účinným způsobem úpravy cirkadiánních rytmů by proto mohlo být přímé farmakologické působení na molekulární cirkadiánní mechanismus. Taková terapie bude prospěšná u řady poruch spojených s nejrůznějšími typy cirkadiánních dysfunkcí vyžadujících správnou synchronizaci, úpravu délky periody, jednorázové nastavení nové fáze, nebo zvýšení celkové integrity rytmů. Navíc na rozdíl od terapií pomocí světla nebo melatoninu, terapie za využití látek cílících přímo na molekulární mechanismus v buňkách nevyžaduje SCN, je stejně efektivní ve dne i v noci a její časování pravděpodobně významně neovlivní její účinek, který může být snadno modulován pomocí změny dávky. Příkladem takové látky je N6-fůrfůryladenin, prodlužující periodu cirkadiánního rytmu (PV 2019-757).

Podstata vynálezu

Vynález se týká heterocyklických sloučenin obecného vzorce I

(I) a jejich farmaceuticky přijatelných solí, kde každý z X, Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z X, Y a Z je O;

n je 1 nebo 2 nebo 3,

R¹ je H nebo C1-C4 alkyl;

R² je vybraný z H, chlor, C1-C4 alkoxy a NR²¹R²²;

kde R²¹ a R²² jsou nezávisle vybrány z H, C3-C6 cykloalkyl a C1-C8 alkyl, přičemž jeden uhlíkový atom v C1-C8 alkylu může být volitelně nahrazen jedním dusíkovým atomem nebo jedním kyslíkovým atomem;

nebo kde R²¹ je H nebo C1-C4 alkyl a R²² je vybraný z C6-C10 aryl-methyl, C6-10 aryl-ethyl, C3C6 heteroaryl-methyl, C3-C6 heteroaryl-ethyl, přičemž heteroarylová skupina obsahuje 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S, N;

nebo kde R²¹ a R²² spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří tříčlenný až osmičlenný kruh volitelně obsahující jeden další heteroatom vybraný z O, S, N;

-3CZ 2022 - 227 A3 pro použití pro modulaci cirkadiánních rytmů savců, zejména člověka.

V případě chirálních center v molekule sloučeniny vzorce I předkládaný vynález také zahrnuje opticky aktivní izomery, jejich směsi a racemáty.

Látky obecného vzorce I jsou na základě modulace cirkadiánních rytmů pro použití pro prevenci a terapii nemocí cirkadiánního rytmu, jak akutních, tak chronických.

Předkládaný vynález se také týká sloučenin obecného vzorce la

(la) a jejich farmaceuticky přijatelných solí, kde

- n je 1, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž právě jeden z Y a Z je O; nebo

- n je 2, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z Y a Z je O; nebo

- n je 3, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z X, Y a Z je O;

a

R¹ je H nebo C1-C4 alkyl;

R² je vybraný z H, chlor,C1-C4 alkoxy aNR²¹R²²;

kde R²¹ a R²² jsou nezávisle vybrány z H, C3-C6 cykloalkyl a C1-C8 alkyl, přičemž jeden uhlíkový atom v C1-C8 alkylu může být volitelně nahrazen jedním dusíkovým atomem nebo jedním kyslíkovým atomem;

nebo kde R²¹ je H nebo C1-C4 alkyl a R²² je vybraný z C6-C10 aryl-methyl, C6-10 aryl-ethyl, C3C6 heteroaryl-methyl, C3-C6 heteroaryl-ethyl, přičemž heteroarylová skupina obsahuje 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S, N;

nebo kde R²¹ a R²² spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří tříčlenný až osmičlenný kruh volitelně obsahující jeden další heteroatom vybraný z O, S, N.

S výhodou n je 2, a X nebo Z je O.

S výhodou, když n je 3, X je O.

-4CZ 2022 - 227 A3

V některých provedeních, když n je 1, všechny z X, Y, Z jsou CH2.

V některých provedeních, když n je 1, X nebo Y je O.

S výhodou je substituent v poloze N9 (kruh obsahující -CH-X-Y-Z-(CH2)_n-) vybrán ze skupiny zahrnující cyklopentyl, tetrahydrofuran-2-yl, tetrahydrofuran-3-yl, tetrahydro-2//-pyran-2-yl, tetrahydro-2//-pyran-3-yl, tetrahydro-2//-pyran-4-yl, oxepan-2-yl.

S výhodou R¹ je H nebo CH3.

V některých provedeních jsou R²¹ a R²² nezávisle vybrány z C1-C4 alkylů.

V některých provedeních R²¹ je H a R²² je C1-C4 alkyl.

V některých provedeních R²¹ je H a R²² je C1-C8 alkyl, kde jeden atom uhlíku je nahrazen jedním atomem dusíku nebo jedním atomem kyslíku. S výhodou je kyslíkovým nebo dusíkovým atomem nahrazen terminální atom uhlíku.

V některých provedeních R²¹ je H a R²² je furfuryl, benzyl nebo cyklopentyl.

V některých provedeních R²¹ a R²² společně s dusíkovým atomem, ke kterému jsou vázány, tvoří morfolinyl, thiomorfolin-4-yl, nebo pyrrolidin-1 -yl.

S výhodou je R² vybrán z chlor, isopropoxy, methylamino, ethylamino, propylamino, cyklopentylamino, benzylamino, furfurylamino, 2-aminoethylamino, 6-aminohexylamino, 2(methylamino)ethylamino, 2-(dimethylamino)ethylamino, 2-hydroxy ethylamino, 3methoxypropylamino, dimethylamino, diethylamino, dipropylamino, 2-aminoethyl(methyl)amino, pyrrolidin-1 -yl, morfolinyl, thiomorfolin-4-yl.

Alkyl může být lineární nebo větvený alkyl. C1-C4 alkyl může být vybrán ze skupin methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl.

Alkoxy může být vybrán ze skupiny methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, tert-butoxy.

Modulace cirkadiánních rytmů látkami obecného vzorce I zahrnuje zejména prodloužení periody cirkadiánního rytmu a s ním spojené posunutí fáze cirkadiánního rytmu.

Termínem „modulace rytmu“ se zde rozumí prodloužení periody cirkadiánního rytmu buněk, tkání či organismu a/nebo posun fáze cirkadiánního rytmu buněk, tkání či organismu.

„Prodloužením periody cirkadiánního rytmu“ se rozumí prodloužení vnitřní periody cirkadiánního rytmu buněk, tkání či organismu oproti původní periodě cirkadiánního rytmu. V případě nemocí se zkrácenou periodou cirkadiánního rytmu slouží prodloužení periody k její normalizaci na přibližně 24 hodin.

„Posunem fáze cirkadiánního rytmu“ se rozumí předběhnutí nebo zpoždění cirkadiánního rytmu buněk, tkání či organismu oproti jejich původní cirkadiánní fázi. Posunu fáze cirkadiánního rytmu se dosahuje dočasným prodlužováním jeho periody. Cílem posunu fáze cirkadiánního rytmu je dosáhnout úpravy fáze vnitřního cirkadiánního rytmu tak, aby se přiblížila požadované fázi tohoto rytmu. Požadovaná fáze může být shodná s fází solárního času nebo fází vnitřního cirkadiánního rytmu vhodnou k provedení terapeutického zákroku.

Vynález je založen na zjištění, že heterocyklické sloučeniny vzorce I modulují aktivitu a koncentraci molekulárních komponent savčího buněčného cirkadiánního oscilátoru, a prodlužují

- 5 CZ 2022 - 227 A3 periodu cirkadiánního rytmu. Dočasným prodloužením periody je navíc možné docílit posunu fáze cirkadiánního rytmu. Heterocyklické sloučeniny vzorce I silně ovlivňují cirkadiánní oscilátor v koncentracích, při kterých je látka bez této substituce v pozici 9 na purinovém heterocyklu neúčinná. Toto zjištění vede k celé řadě terapeutických aplikací.

Prodloužení periody cirkadiánního rytmu, a v případě jednorázového či krátkodobého podávání (< 5 dní) i posun fáze cirkadiánního rytmu, dosažitelné podáváním sloučenin vzorce I jsou schopny korigovat onemocnění cirkadiánních rytmů.

Prodloužení periody cirkadiánního cyklu pomocí sloučeniny vzorce I má terapeutický efekt zejména v případě onemocnění, kde je perioda cirkadiánního cyklu zkrácena a/nebo dochází k předbíhání fáze cirkadiánního rytmu. Takovými chorobami jsou zejména dědičný syndrom pokročilé spánkové fáze - FASPS, porucha pokročilé fáze spánku - ASPD, syndrom nepravidelné spánkové fáze a volně běžící spánkové fáze. Zde je výhodné dlouhodobé podávání (více než 5 dní).

Prodloužení periody cirkadiánního cyklu pomocí sloučeniny vzorce I má terapeutický efekt zejména v případě onemocnění, kde zkrácení periody cirkadiánního cyklu a/nebo předbíhání fáze cirkadiánního rytmu je způsobeno nemocí, a dále přispívá k rozvoji choroby a/nebo k zhoršení kvality života. Takovými onemocněními jsou zejména abnormální cirkadiánní aktivita spojená s neurodegenerací jako je mírná kognitivní porucha a Alzheimerova choroba, případně vývojové poruchy jako je Smith-Magenisův syndrom. Zde je výhodné dlouhodobé terapeutické podávání (více než 5 dní) osobám, u nichž se projevuje abnormální cirkadiánní aktivita (abnormální cyklus spánku a bdění) v důsledku zkrácené periody cirkadiánního cyklu a/nebo předbíhání fáze cirkadiánního rytmu.

Posun fáze cirkadiánního rytmu v důsledku krátkodobého prodloužení periody po jednorázové nebo krátkodobé aplikaci sloučeniny vzorce I dovoluje prevenci nebo léčbu onemocnění a stavů způsobených nesouladem fáze vlastního cirkadiánního rytmu osoby s vnějším prostředím. Pro profylaktické nebo terapeutické účinky proti pásmové nemoci (j et lag), sociálnímu jet lagu, a/nebo intoleranci směnného režimu (shift work disorder) je výhodné podávat sloučeninu vzorce I jednorázově nebo krátkodobě (jednorázově nebo opakovaně po dobu 1 až 5 dní). Výhodou jednorázového a krátkodobého podávání je menší zatížení organismu včetně metabolických systémů léčivem.

Modulace cirkadiánních rytmů pomocí sloučeniny vzorce I má zásadní výhody oproti použití hypnotik, které se používají s částečným a variabilním úspěchem v terapii poruch spánku v důsledku narušení cirkadiánních rytmů. Sloučeniny vzorce I korigují i nespánkové příznaky a symptomy narušeného rytmu. Neovlivňují přímo bdělost a pozornost. Na rozdíl od hypnotik je možné tyto látky také podávat preventivně. Například synchronizace vnitřních hodin s objektivním časem v cílové destinaci s cílem předejít pásmové nemoci může být částečně či plně provedena před zahájením cesty. Podobně je možné použít preventivního podání k urychlení správného nastavení cirkadiánního rytmu při plánované změně aktivity (např. příprava na směnný provoz nebo jiné společenské aktivity). Výhodou například oproti melatoninu je schopnost působit na komponenty cirkadiánního oscilátoru v buňkách a tkáních mimo SCN, a tak urychlit normalizaci cirkadiánního rytmu.

Posunu fáze pomocí jednorázového nebo krátkodobého (nejvýše 5 dní) podávání sloučeniny vzorce I lze také využít k synchronizaci fáze cirkadiánního rytmu, tj. optimálního cirkadiánního času aplikace léčebného zákroku veterinární nebo humánní medicíny z hlediska jeho účinnosti a bezpečnosti, a solárního času vhodného pro aplikaci terapie z hlediska organizace pracovní doby osob aplikujících terapii. Takovým léčebným zákrokem může být například chirurgický zákrok nebo chemoterapie.

Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u

-6CZ 2022 - 227 A3 člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Aplikovaná denní dávka se s výhodou pohybuje mezi 1 a 100 mg/kg.

Předkládaný vynález dále poskytuje farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič. Sloučenina vzorce I se v přípravcích může vyskytovat mimo jiné ve formě farmaceuticky přijatelných solí či solvátů.

V upřednostňovaném provedení jsou tyto přípravky lékové formy pro perorální aplikaci. V jiném důležitém provedení jde o lékové formy pro transdermální, inhalační nebo nasální aplikaci. V dalších provedeních jde o lékové formy pro jiné formy parenterální aplikace jako je například intravenózní, intramuskulární nebo subkutánní podání.

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vzorce I vznikají protonací jednoho z dusíků anorganickou nebo organickou kyselinou. Příklady solí s anorganickými kyselinami zahrnují hydrochloridy, hydrobromidy, hydrojodidy, sulfáty, nitráty, fosfáty, hydrogenfosfáty, dihydrogenfosfáty, karbonáty, hydrogenkarbonáty, perchloráty. Příklady solí s organickými kyselinami zahrnují soli s jednosytnými či vícesytnými kyselinami s lineárním nebo větveným řetězcem s 2 až 20 uhlíky, jako jsou například laktát, oxalát, fumarát, tartarát, malát, maleát, citrát, sukcinát, glykolát, nikotinát, benzoát, salicylát, askorbát, pamoát; sulfonát, methansulfonát, ethansulfonát, 2hydroxyethansulfonát, benzensulfonát, /j-toluensulfonát, 2-naftalensulfonát, 3-fenylsulfonát a kafrsulfonát, aspartát nebo glutamát

Lékové formy:

Lékové formy pro perorální aplikaci zahrnují potahované i nepotahované tablety, měkké a tvrdé želatinové tobolky, matricové tablety, roztoky, emulze, suspenze, sirupy, prachy a granule pro rekonstituci, žvýkací a efervescentní tablety. Terapeutický přípravek pro perorální podání obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přednostně 1-20 % aktivní látky.

Lékové formy pro parenterální aplikaci zahrnují roztoky, emulze, suspenze a disperze, prachy a granule pro rekonstituci. Další uvažované lékové formy zahrnují supositoria, formy pro transdermální penetraci, implantáty, a formy pro insuflaci a inhalaci.

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, elaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitamínu E, beta-karotenu nebo 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy

-7 CZ 2022 - 227 A3 jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich izomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl-oleát, isopropyl-myristát, isopropylpalmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce C8 až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejné.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, mannitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylenglykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylenglykol a/nebo oxid tttaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftaláť Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tak, parafínový olej nebo kapalný polyethylenglykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylenglykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 1 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

-8CZ 2022 - 227 A3

Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylenglykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty, kde je to vhodné, a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infůzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy jako kyselina sorbová či benzoová.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-ethanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylenglykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylenglykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.

Objasnění výkresů

Obrázek 1. Srovnání vlivu látky 4 a A^-fůrfuryladeninu na periodu cirkadiánního rytmu v linii U2OS transdukované reportérem Bmall-Luc (koncentrační křivka, průměr±SD z 8 vzorků / koncentraci).

Obrázek 2. Ukázka vlivu /V-furfůryladeninu na fázi cirkadiánního rytmu v linii U2OS transdukované reportérem Bmall-Luc.

Obrázek 3. Srovnání vlivu látky 4 a A^-fůrfuryladeninu na periodu cirkadiánního rytmu v linii NIH3T3 transfekované reportérem Per2-Luc (průměr ze 4 vzorků ± SD).

Příklady uskutečnění vynálezu

Vynález je popsán pomocí následujících příkladů, které ovšem nijak neomezují jeho rozsah. Pokud není uvedeno jinak, všechna procenta a podobná množství jsou vztažena na hmotnost.

Seznam použitých zkratek a akronym:

Zkratka ASPD	Význam Porucha pokročilé fáze spánku (advanced sleep phase disorder)
ASPS	Syndrom odkládané spánkové fáze (advanced sleep phase syndrom)
app. bd bs CHC13 cP d dd ddd DHF DHP	Přibližně Široký dublet Široký singlet Chloroform Cyklopentyl Dublet Dublet dubletu Dublet dubletu dubletu 2,3-Dihydrofuran 3,4-Dihydro-2//-pyran

-9CZ 2022 - 227 A3

	DIAD	Diisopropyl-azodikarboxylát
	DIPEA	ΛζΥ-diisopropylethylamin
	DMSO	Dimethylsulfoxid
	DMSO-c?6	Deuterovaný dimethylsulfoxid
5	Ekv.	Ekvivalent
	ESU	Ionizace elektrosprejem v positivním módu
	Et2O	Diethylether
	EtOAc	Ethyl-acetát
	EtOH	Ethanol
10	FASPS	Dědičný syndrom pokročilé spánkové fáze (familial advanced sleep phase disorder)
	fůr	Furan
	H2SO4	Kyselina sírová
	HPLC	Vysokoúčinná kapalinová chromatografie
15	HRMS	Hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením
	zPrOH	Propan-2-ol, isopropanol
	It	Laboratorní teplota
	LC	Kapalinová chromatografie
20	m	Multiplet
	MeOH	Methanol
	MS	Hmotnostní spektrometrie
	MW	Mikrovlnné záření
	NaH	Hydrid sodný
25	Na2SO4	Bezvodý síran sodný
	w-PrOH	Propan-1 -ol
	NMR	Nukleární magnetická rezonance
	PDA	Detektor s diodovým polem
	PE	Petrolether
30	pent	Pentet
	PPh3	Trifenylfosfin
	ppm	Milióntina (parts per million)
	pur	Purin
	q	Kvartet
35	qd	Kvartet dubletu
	s	Singlet
	sept	Septet
	t	Triplet
	td	Triplet dubletu
40	tt	Triplet tripletu
	TEA	Triethylamin
	TFA	Trifluoroctová kyselina
	TOF	Analyzátor doby letu (Time-of-flighť)
	THF	T etrahydrofůran
45	THO	2,3,4,5-Tetrahydrooxepin
	THP	T ctrahydro-2//-py ran
	uv	Ultrafialový
	RP	Reverzní fáze
	SCN	Suprachiasmatické jádro (suprachiasmatic
50		nucleus)

Materiály a metody:

Výchozí materiál byl pořízen z komerčních zdrojů (Acros Organics, Sigma Aldrich, VWR, atd.) 55 nebo byl připraven tak, jak je popsáno níže. Chromatografie na tenké vrstvě byla prováděna na

- 10CZ 2022 - 227 A3 deskách se silikagelem 60 Á s fluorescenčním indikátorem F254 (VWR) a vyvíjeny v mobilních směsích CHCh/MeOH (9:1, v/v,) nebo PE/EtOAc (1:1, v/v) a skvrny byly detekovány UV světlem (254 a 365 nm) a/nebo použitím 6% vanilinu v absolutním EtOH obsahujícím 1 % (v/v) H2SO4 jako vizualizačního činidla. Sloupcová chromatografie byla prováděna na silikagelu 40-63 pm nepravidelného tvaru (VWR) s využitím mobilních směsí CHCE/MeOH nebo PE/EtOAc a gradientovou elucí nebo izokraticky s použitím ΕΪ2Ο. Preparativní HPLC byla prováděna na preparativním systému 1290 Infinity II LC/MSD (Agilent) s UV detektorem 1260 Infinity II s nastavitelnou vlnovou délkou a jednoduchým kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem s ionizací elektrosprejem LC/MSD. Látky byly purifikovány na koloně Agilent 5 Prep-C18 (50 ^x 21,2 mm nebo 100 ^x 21,2 mm, velikost částic 5 pm) za použití vody nebo 0.1% kyseliny octové jako rozpouštědla A a methanolu nebo acetonitrilu jako organického modifikátoru (rozpouštědlo B) při průtoku 20 ml/min. Chromatografická čistota a molekulová hmotnost připravených látek byla stanovena pomocí systému ACQUITY UPLC® Η-Class (Waters) připojenému k detektoru s diodovým polem ACQUITY UPLC PDA (Waters) a stolnímu hmotnostnímu spektrometru s jednoduchým kvadrupólem QDa (Waters). Vzorky byly rozpuštěny v DMSO na koncentraci 1 mg/100 pl a naředěny 1000^x do methanolu. Vzorky (10 pl) byly nastříknuty na kolonu s reverzní fází Symmetry C18 (150 mm ^x 2,1 mm ^x 3,5 pm, velikost částic 5 pm, Waters) a separovány při průtoku 0,2 ml/min v následujícím binárním gradientu: 0 min, 10 % B; 0-24 min, a lineární gradient na 90 % B, 10 min, následovala lOmin izokratická eluce 90 % B. Na konci gradientu byla kolona reekvilibrována na výchozí podmínky. 15mM kyselina mravenčí upravena na pH 4,0 byla použita jako rozpouštědlo A a methanol jako organický modifikátor (rozpouštědlo B). Eluent z kolony byl veden do PDA detektoru (rozsah skenování 190-500 nm s rozlišením 1,2 nm) a ESI zdroje (teplota zdroje 110 °C, napětí na kapiláře +3.0 kV, napětí na vstupním kuželu +20 V, desolvatační teplota 250 °C). Dusík byl použit zároveň jako zmlžující (500 1/h) i sušící plyn (50 Eh). Data byla získána v pozitivním módu v rozsahu 50-1000 m/z. Hmotnostní spektra s vysokým rozlišením byla získána na preparativním systému 1290 Infinity II připojenému k hmotnostnímu spektrometru s analyzátorem doby letu 6230 Time-of-flight LC/MS (LC/TOF, Agilent) s elektrosprejovým ionizačním zdrojem Dual AJS ESI za následujících podmínek: teplota plynu 260 °C, tlak zmlžujícího plynu 35 psi, teplota plynu 260 °C, sušící plyn 8 Emin, nebulizér 35 psi, teplota sušícího plynu: 350 °C, průtok sušícího plynu: 11 Emin, napětí na kapiláře 3500 V, napětí na trysce 300 V. Hmotnosti byly měřeny ve Fullscan módu v rozsahu od 100-1700 m/z a analyzovány pomocí softwaru MassHunter. NMR spektra byla pořízena na NMR spektrometru ECA-500 (Jeol) pracujícím na frekvencích 500 MHz (Ή) a 125 MHz (¹³C) nebo NMR spektrometru ECZ/R 400 (Jeol) pracujícím na frekvencích 400 MHz (Ή) a 100 MHz (¹³C) a 375 MHz (¹⁹F). Vzorky pro analýzu byly připraveny rozpuštěním látek v DMSO-tíe a získané chemické posuny byly kalibrovány na pík rozpouštědla (DMSO-<A, 2,49 ppm pro 'H) a DMSO-tíe (39,5 ppm pro ¹³C). Chemické posuny ve ¹⁹F spektrech byly kalibrovány na CCI3F (0 ppm).

Příprava látek vzorce I (resp. la):

Postup přípravy látek je shrnut ve Schématu 1 níže, a dále popsán v následujícím textu.

Cl

A R²* = H

B

14-61

- 11 CZ 2022 - 227 A3

Schéma 1

Činidla a reakční podmínky: i) DHF/DHP/THO, TFA, EtOAc, 0 °C poté It, 1 h; ii) R³-OH, PPh;, DIAD, THF, It, 1 h; iii) fúrfúrylamin/5-methylfúrfúrylamin, TEA, MeOH/w-PrOH, MW, 120 °C, 5 15 min; iv) fúrfúrylamin/5-methylfurfúrylamin, TEA, w-PrOH, 100 °C, 4 h; v) R²-amin, 165 °C, 3 h; vi) R²-amin v absolutním EtOH, 100 °C, přes noc; vii) R²-amin, DIPEA, 165 °C, 3 h; viii) NaH, R²-alkohol, 95 °C, přes noc.

Tabulka 1. Intermediáty 11I-XIV.

ČÍSLO LÁTKY	SUBSTITUCE NA PURINU	MS ANALÝZA m/z [ion]
R2*	C6 subst.	V9 subst. (R3)
III	H	Cl	cyklopentyl	223,1 [M+H]+
IV	H	Cl	tetrahydrofuran-2-yl	155,1 [M-THF+H]+
V	H	Cl	tetrahydrofuran-3 -yl	225,1 [M+H]+
VI	H	Cl	tetrahydro-2//-pyran-2-yl	155,1 [M-THP+H]+
VII	H	Cl	tetrahydro-2//-pyran-4-yl	239,1 [M+H]+
VIII	H	Cl	oxepan-2-yl	253,4 [M+H+]-
IX	Cl	Cl	cyklopentyl	256,8 [M+H]+
X	Cl	Cl	tetrahydrofuran-2-yl	188,8 [M-THF+H]+
XI	Cl	Cl	tetrahydrofuran-3 -yl	259,4 [M+H]+
XII	Cl	Cl	tetrahydro-2//-pyran-2-yl	189,1 [M-THP+H]+
XIII	Cl	Cl	tetrahydro-2//-pyran-4-yl	273,4 [M+H]+
XIV	Cl	Cl	oxepan-2-yl	287,7 [M+H]+

to Tabulka 2. Sloučeniny 1-13 (C6 subst. = R¹ -fúrfúrylamino)

ČÍSLO SUBSTITUCE NA PURINU HMRS

LAŤKY	R2x	C6 subst.	V9 subst. (R3)	kalk./změř. [M+H]+
1	H	fúrfúrylamino	cyklopentyl	284,1506/284,1508
2	H	fhrfúrylamino	tetrahydrofúran-2-yl	286,1299/286,1298
3	H	fúrfúrylamino	tetrahydrofúran-3 -yl	286,1299/286,1298
4	H	fúrfúrylamino	tetrahydro-2//-pyran-2-yl	300,1455/300,1458
5	H	fúrfúrylamino	tetrahydro-2//-pyran-4-yl	300,1455/300,1455
6	Cl	fúrfúrylamino	cyklopentyl	318,1116/318,1116
7	Cl	fúrfúrylamino	tetrahydrofúran-2-yl	320,0909/320,0910
8	Cl	fúrfúrylamino	tetrahydrofúran-3 -yl	320,0909/320,0909
9	Cl	fúrfúrylamino	tetrahydro-2//-pyran-2-yl	334,1065/334,1072
10	Cl	fúrfúrylamino	tetrahydro-2//-pyran-4-yl	334,1065/334,1067
11	Cl	fúrfúrylamino	oxepan-2-yl	348,1222/348,1223
12	Cl	5 -methylfúrfúrylamino	tetrahydrofúran-2-yl	334,1065/334,1066
13	Cl	5 -methylfúrfúrylamino	tetrahydro-2//-pyran-2-yl	348,1222/348,1222

- 12 CZ 2022 - 227 A3

Tabulka 3. Sloučeniny 14-61 (C6 subst. = R¹ -fwfurylamino)

ČÍSLO SUBSTITUCE NA PURINU HMRS kalk./změř.

LÁTKY	R2	C6 subst.	R3	[M+H]+
14	methylamino	furfurylamino	cyklopentyl	313,1771/313,1769
15	dimethylamino	furfurylamino	cyklopentyl	327,1931/327,1931
16	(2-aminoethyl)(methyl)amino	furfurylamino	cyklopentyl	356,2193/356,2190
17	2-(dimethylamino)ethylamino	furfurylamino	cyklopentyl	370,2347/370,2347
18	2-aminoethylamino	furfurylamino	cyklopentyl	342,2038/342,2038
19	2-hydroxyethylamino	furfurylamino	cyklopentyl	343,1879/343,1879
20	morfolino	furfurylamino	cyklopentyl	369,2035/369,2035
21	isopropoxy	furfurylamino	cyklopentyl	342,1925/342,1927
22	methylamino	furfurylamino	tetrahydrofuran-2-yl	315,1564/315,1564
23	dimethylamino	furfurylamino	tetrahydrofuran-2-yl	329,1721/329,1720
24	dimethylamino	5-methylfurfurylamino	tetrahydrofuran-2-yl	343,1877/343,1878
25	methylamino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	315,1564/315,1565
26	dimethylamino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	329.1721/329,1721
27	2-aminoethyl(methyl)amino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	358,1986/358,1990
28	2-(dimethylamino)ethylamino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	372,2142/372,2143
29	2-aminoethylamino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	344,1832/344,1832
30	2-hydroxyethylamino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	345,1670/345,1671
31	morfolino	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	371,1826/371,1828
32	isopropoxy	furfurylamino	tetrahy drofuran-3 -y 1	344,1717/344,1707
33	methylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	329,1721/329,1720
34	dimethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	343,1877/343,1886
35	propylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	357,2034/ 357,2034
36	dipropylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	399,2503/399,2505
37	benzylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	405,2034/405,2035
38	furfurylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	395,1826/395,1826
39	cyklopentylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	383,2190/383,2190
40	pyrrolidin-l-yl	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	369,2034/369,2034
41	2-aminoethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	358,1986/358,1992
42	6-aminohexylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	414,2612/414,2612
43	2-aminoethyl(methyl)amino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	372,2146/372,2146
44	2-(dimethylamino)ethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	386,2299/386,2308
45	2-hydroxyethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	359,1826/359,1827
46	3 -methoxypropy lamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	387,2139/387,2140
47	morfolino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	385,1983/385,1978
48	thiomorfolino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	401,1754/401,1754
49	isopropoxy	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	358,1874/358,1870
50	methylamino	5-methylfurfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	343,1877/343,1877
51	dimethylamino	5-methylfurfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-2-yl	357,2034/357,2036
52	methylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	329,1721/329,1711
53	dimethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	343,1877/343,1879
54	2-aminoethyl(methyl)amino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	372,2142/372,2145
55	2-(dimethylamino)ethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	386,2299/386,2299
56	2-aminoethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	372,2142/372,2145
57	2-hydroxyethylamino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	359,1826/359,1830
58	morfolino	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	385,1983/385,1986
59	isopropoxy	furfurylamino	tetrahydro-2H-pyran-4-yl	358,1874/358,1867
60	methylamino	furfurylamino	oxepan-2-yl	343,1877/343,1877
61	dimethylamino	furfurylamino	oxepan-2-yl	357,2034/357,2034

Sloučeniny byly syntetizovány z 6-chlorpurinu (A), respektive 2,6-dichloropurinu (B) jako 5 výchozích stavebních látek. 2,3,4,5-Tetrahydrooxepin byl připraven podle dříve publikovaného protokolu (Liu et al. 2010 [doi: 10.1002/chem.200903441]). Substituenty byly do polohy N9 připojeny buď hydroaminací katalyzovanou trifluoroctovou kyselinou (TFA) za použití 2,3dihydrofuranu, 3,4-dihydro-2//-pyranu nebo suchém EtOAc nebo Mitsunobu alkylací použitím odpovídajícího alkoholu, PPh3, DIADu v bezvodém THF, poskytujícím intermediáty (III-XIV).

Atom chloru v poloze C6 byl následně substituován fůrfůrylaminem/5-methylfůrfůrylaminem v přítomnosti TEA jako pomocné báze buď konvenčním zahříváním, nebo pomocí mikrovlnné reakce, čímž byly získány látky (1-13). Atom chloru v poloze C2 sloučenin IX-XIV byl substituován za různých podmínek, např.: a) zahříváním bez rozpouštědla nebo ve vhodném 15 rozpouštědle a nadbytku odpovídajícího aminu (jako v případě ethan-1,2-diaminu, hexan-1,6diaminu, 2-aminoethanolu, apod.); b) zahříváním s roztokem příslušného aminu (např. methylamin, dimethylamin, apod.); c) zahříváním bez rozpouštědla nebo ve vhodném rozpouštědle v přítomnosti odpovídajícího aminu a pomocné báze jako např. DIPEA (např. morfolin,

- 13 CZ 2022 - 227 A3 thiomorfolin, cyklopentylamin, YWdimethylethylendiamin, atd.); nebo d) zahříváním s odpovídajícím alkoholátem.

Funkcionalizace purinového heterocyklu A nebo B v pozici N9 hydroaminací - obecný postup:

TFA (1,5 ekv.) byla přikapávána za chlazení v ledové lázni pod inertní atmosférou (dusík) k suspenzi látek A nebo B (1 ekv.), 2,3-dihydrofuranu/3,4-dihydro-2//-pyranu/2,3,4,5tetrahydrooxepinu (1,3 ekv.) v suchém EtOAc (koncentrace A nebo B, 0,5M). Po přídavku TFA byla reakční směs ponechána volně vytemperovat na laboratorní teplotu, při níž byla míchána 1 h. Následně byla směs zalkalizována pomocí směsi 25% vodný amoniak/voda (2:3, v/v) na hodnotu pH 8-9. Vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na2SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Pevný produkt byl získán po trituraci směsí ΕΪ2Ο/ΡΕ.

PŘÍKLAD 1: 2,6-dichlor-9-(tetrahydrcfuran-2-yi)-9H-purm (II)

Pevná bílá látka, sumární vzorec: C9H8CI2N4O, výtěžek: 98%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min; %): 21,08; 99,7. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 188.8 (100, [³⁵C1,³⁵C1-M-THF+H]⁺), 190,8 (68, [³⁵C1,³⁷C1-M-THF+H]⁺), 192,8 (12, [³⁷C1,³⁷C1-M-THF+H]⁺). Ή NMR (500 MHz, DMSO-ďá) δ (ppm): 2,00-2,08 (m, 1H, THF H4), 2,12-2,20 (m, 1H, THF H4’), 2,42-2,46 (m, 2H, THF H3, THF H3’), 3,93 (q, J= 7,5 Hz, 1H, THF H5), 4,18 (td, J= 7,9, 5,7 Hz, 1H, THF H5‘), 6,33 (dd, J = 5,8, 4,3 Hz, 1H, THF H2), 8,82 (s, 1H, pur H8). ¹³C NMR (125 MHz, DMSO-ď6) δ (ppm): 23,9 (THF C4), 31,4 (THF C3), 69,3 (THF C5), 85,6 (THF C2), 131,1 (pur C5), 146,5 (pur C8), 149,7 (pur C6), 150,9 (pur C2), 152,6 (pur C4).

PŘÍKLAD 2: 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yi)-9H-purin (VI)

Pevná bílá látka, sumární vzorec: C10H10CI2N4O, výtěžek: 88%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 22,87, 98,4. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 189,1 (100, [³⁵C1,³⁵C1-M-THP+H]⁺), 191,0 (73, [³⁵C1,³⁷C1-M-THP+H]⁺), 193,0 (16, [³⁷C1,³⁷C1-M-THP+H]⁺). 'H-NMR (500 MHz, DMSO-cE) δ (ppm): 1,56-1,61 (m, 2H, ΤΗΡ H5, THP H5‘), 1,70-1,80 (m, 1H, ΤΗΡ H4), 1,94-2,01 (m, 2H, ΤΗΡ H3, THP H4‘), 2,21-2,29 (m, 1H, THP H3‘), 3,70-3,76 (m, 1H, ΤΗΡ H6), 4,01 (dd, J= 10,7, 1,5 Hz, 1H, THP H6‘), 5,73 (dd, J= 10,9, 2,0 Hz, 1H, THP H2‘), 8,95 (s, 1H, pur H8). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-ď₆) δ (ppm): 22,0 (THP C4), 24,3 (THP C5), 29,6 (THP C3), 67,7 (THP C6), 81,6 (THP C2), 130,5 (pur C5), 146,4 (pur C8), 149,9 (pur C6), 151,2 (pur C2), 152,8 (pur C4).

Funkcionalizace purinového heterocyklu A nebo B v pozici N9 Mitsunobuovou alkylací - obecný postup:

DIAD (2 ekv.) byl přikapán za laboratorní teploty pod inertní atmosférou (Ar) do suspenze látek A nebo B (1 ekv.), R³-OH (2 ekv.), trifenylfosfinu (2 ekv.) v suchém THF (koncentrace A nebo B, 0,15M). Reakční směs byla míchána 1 h za laboratorní teploty a následně zakoncentrována za sníženého tlaku. Většina trifenylfosfinoxidu byla odstraněna krystalizací z toluenu. Filtráty byly zakoncentrovány za sníženého tlaku a produkt přečištěn sloupcovou chromatografií s využitím CHCL/MeOH, ΡΕ/EtOAc nebo ΕΪ2Ο jako mobilní fáze, případně získán po rekrystalizaci z MeOH.

PŘÍKLAD 3: 2,6-dichlor-9-cyklcpentyl-9H-purin (111)

Dočištěno krystalizací z MeOH. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C10H10CI2N4, výtěžek: 68%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 25,48, 98,2. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 256,8 (100, [³⁵C1,³⁵C1-M+H]⁺), 258,8 (78, [³⁵C1,³⁷C1-M+H]⁺), 260,8 (18, [³⁷C1,³⁷C1-M+H]⁺). 'H-NMR (500 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 1,65-1,74 (m, 2H, cP H3), 1,83-1,91 (m, 2H, cP H3), 1,97-2,03 (m, 2H, cP H2), 2,15-2,22 (m, 2H, cP H2), 4,89-4,95 (m, 1H, cP Hl), 8,82 (s, 1H, pur H8). ¹³C

- 14 CZ 2022 - 227 A3

NMR(125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 23,5 (2x C, cP C3), 31,8 (2x C, cP C2), 56,4 (cP Cl), 130,8 (pur C5), 147,1 (pur C8), 149,5 (pur C6), 150,6 (pur C2), 153,3 (pur C4).

PŘÍKLAD 4: 2,6-dichlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-4-yi)-9H-purin (Vlh)

Bílá pevná látka, sumární vzorec: C10H10CI2N4O, výtěžek: 63%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 19,95, 99,9. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 273,4 (100, [³⁵C1,³⁵C1-M+H]⁺), 275,4 (68, [³⁵C1,³⁷C1-M+H]⁺), 277,4 (14, [³⁷C1,³⁷C1-M+H]⁺). 'H-NMR (500 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 1,98 (ddd, J= 12.3, 3.9, 1.6 Hz, 2H, ΤΗΡ H3), 2.18 (qd, J= 12,4, 4,6 Hz, 2H, THP H3‘), 3,52 (td, J = 11,9, 1,8 Hz, 2H, THP H2), 3,99 (dd, J = 11,5, 4,4 Hz, 2H, THP H2‘), 4,73 (tt, J = 12,1, 4,2 Hz, 1H, THP H4), 8,88 (s, 1H, pur H8). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 31,9 (2x C, THP C3), 52,1 (THP C4), 66,0 (2x C, THP C2), 130,7 (pur C5), 146,9 (pur C8), 149,6 (pur C6), 150,6 (pur C2), 153,0 (pur C4).

Funkcionalizace purinových intermediátů (III-XIV) v pozici C6 - obecný postup:

Směs intermediátů III-VIII (1 ekv.), forforylaminu/5-methylfurforylaminu (1,5 ekv.) a TEA (2,5 ekv.) v MeOH/n-PrOH (koncentrace III-VIII, 0,25M) byla zahřívána 15 min při 120 °C v mikrovlnném reaktoru CEM Discover SP. Směs byla následně zakoncentrována za sníženého tlaku. Odparek byl rozředěn vodou a extrahován EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na2SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Produkt byl purifikován sloupcovou chromatografií s použitím směsí CHCL/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc jako mobilních fází s gradientovou elucí.

PŘÍKLAD 5: N-furan-2-ylmethyt)-9-(tetrahydrcfuran-3-yt)-9H-purin-6-amin (sloučenina 3)

Purifikováno sloupcovou chromatografií s využitím mobilní směsi CHCL/MeOH (100:1, v/v) a gradientem MeOH. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C14H15N5O2, výtěžek: 65%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 14,99, 99,9. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 286,2 (100, [M+H]⁺). HRMS (ESE-TOF) m/z kalk. pro C14H15N5O2 [M+H]⁺ 286,1299, změř. 286,1298. 'H-NMR (500 MHz, DMSO-rL) δ (ppm): 2,25-2,31 (m, 1H, THF H4), 2,43-2,48 (m, 1H, THF H4’), 3,85 (td, J= 8,6, 5,6 Hz, 1H, THF H5), 3,92-3,98 (m, 2H, THF H2, THF H2’), 4,09 (td, J= 8,1, 6,9 Hz, 1H, THF H5’), 4,67 (bs, 2H, CH2-for), 5,15-5,19 (m, 1H, THF H3), 6,21 (d, J= 2,8 Hz, 1H, for H3), 6,34 (dd, J=3,4, 1,8 Hz, 1H, furH4), 7,52 (dd,J= 1,8, 0,9 Hz, 1H, forH5), 8,16 (s, lH,purH8), 8,24 (bs, 2H, pur NH, pur H2). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 31,8 (THF C4), 36,4 (CH2-fur), 54,0 (THF C3), 66,5 (THF C5), 71,7 (THF C2), 106,6 (for C3), 110,4 (for C4), 119,3 (purC5), 138,9 (purC8), 141,7 (forC5), 148,7 (purC4), 152,1 (purC2), 153,0 (fur C2), 154,1 (pur C6).

Funkcionalizace purinových intermediátů (III-XIV) v pozici C6 - obecný postup:

Směs intermediátů III-XIV (1 ekv.), forforylaminu/5-methylfurforylaminu (1,2 ekv.) a TEA (2,5 ekv.) v n-PrOH (koncentrace III-XIV, 0,25M) byla zahřívána 4 h při 100 °C v baňce pod zpětným chladičem nebo tlakové ampuli. Směs byla následně zakoncentrována za sníženého tlaku. Odparek byl rozředěn vodou a extrahován EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na2SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií s použitím mobilních směsí CHCL/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc s gradientovou elucí.

PŘÍKLAD 6: 2-chlor-N-[(5-methy.furan-2-yt)methyt]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6amin (sloučenina 13)

Purifikováno sloupcovou chromatografií s využitím mobilní směsi CHCL/MeOH (100:1, v/v) a gradientem MeOH. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C16H18CIN5O2, výtěžek: 96%. HPLCUV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 26,98, 99,9. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 264,7 (91, [³⁵C1

- 15 CZ 2022 - 227 A3

M-THP+H]), 266,7 (47, [³⁷C1-M-THP+H]⁺), 348,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺), 350,8 (64, [³⁷C1-M+H]⁺). HRMS (ESE-TOF) wh kalk. pro Ci6Hi8C1N5O2 [M+H]⁺ 348,1222, změř. 348,1222. 'H-NMR (500 MHz, DMSO-ďe) δ (ppm): 1,53-1,61 (m, 2H, ΤΗΡ H5, THP H5‘), 1,67-1,76 (m, 1H, ΤΗΡ H4), 1,91-1,95 (m, 2H, ΤΗΡ H3, THP H4‘), 2,17-2,27 (m, 4H, THP H3‘, for-CH3), 3,65-3,70 (m, 1H, ΤΗΡ H6), 3,98 (dd, J= 10,9, 1,7 Hz, 1H, THP H6), 4,55 (bd, J= 5,5 Hz, 2H, CH₂-fur), 5,56 (dd, J= 11,0, 1,5 Hz, 1H, THPH2), 5,96 (bs, 1H, for H4), 6,11 (d,J= 3,1 Hz, lH,forH3), 8,38 (s, 1H, pur H8), 8,73 (t, J= 5,5 Hz, 1H, pur NH). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 13,2 (forCH₃), 22,3 (THP C4), 24,4 (THP C5), 29,9 (THP C3), 36,7 (CH₂-for), 67,6 (THP C6), 80,8 (THP C2), 106,4 (forC4), 107,9 (for C3), 118,1 (purC5), 139,5 (pur C8), 149,4 (pur C4), 150,1 (forC2), 150,5 (for C5), 153,1 (pur C2), 154,6 (pur C6).

Funkcionalizace 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu v pozici C2 - obecný postup 1:

Suspenze 2-chlor-9-substifoovaných derivátů ;V⁶-forfory laden i nu (1 ekv.) a odpovídajícího aminu (20 až 30 ekv.) byla zahřívána pod inertní dusíkovou atmosférou v tlakové ampuli při 165 °C po dobu 3 h. Směs byla naředěna vodou a extrahována do EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na₂SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií s použitím mobilních směsí CHCl₃/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc s gradientovou elucí.

PŘÍKLAD 7: 2-({6-[furan-2-ylmethyt)amino]-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-2yi}amino)ethan-l-ol (sloučenina 45)

Purifikováno sloupcovou chromatografií s využitím mobilní směsi CHCl₃/MeOH (100:1, v/v) a gradientem MeOH. Pevná bílá látka, sumární vzorec: Ci7H₂₂NeO₃, výtěžek: 42%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 21,22, 99,4. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 358,9 (100, [M+H]⁺). HRMS (ESE-TOF) m/z kalk. pro Ci7H22N6O3 [M+H]⁺ 359,1826, změř. 359,1827. 'H-NMR (500 MHz, DMSO-ďe) δ (ppm): 1,52-1,59 (m, 2H, THP H5, THP, H5‘), 1,62-1,72 (m, 1H, THP H4), 1,86 (dd, J= 12,7, 2,3 Hz, 1H, THP H3), 1,93 (ddd,J= 12,9, 5,3,3,1 Hz, 1H, THPH4‘), 2,17 (qd, J= 12,1, 3,7 Hz, 1H, THP H3‘), 3,34 (q, J= 5,5 Hz, 2H, -NHCH2CH₂OH), 3,51 (t, J= 6,1 Hz, 2H, -NHCH₂CH₂OH), 3,57-3,62 (m, 1H, THP C6), 3,97 (dd, J= 11,0, 1,8 Hz, 1H, THP H6‘), 4,62 (bs, 3H, CH₂-for, -NHCH₂CH₂OH), 5,41 (dd, J= 11,0, 1,8 Hz, 1H, THP H2), 6,23 (d, J= 2,8 Hz, 1H, for H3), 6,28 (bs, 1H, -NHCH₂CH₂OH), 6,35 (dd, J= 3,1, 1,8 Hz, 1H, for H4), 7,51 (dd, J= 1,7, 0,8 Hz, 1H, for H5), 7,71 (bs, 1H, purNH), 7,88 (s, 1H, pur H8). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 22,6 (THP C4), 24,5 (THP C5), 30,1 (THP C6), 36,3 (CH₂-for), 43,9 (-NHCH₂CH₂OH), 60,3 (-NHCH₂CH₂OH), 67,5 (THP C6), 80,3 (THP C2), 106,5 (for C3), 110,3 (forC4), 113,1 (pur C5), 135,1 (pur C8), 141,6 (for C5), 150,6 (pur C4), 153,3 (for C2), 154,2 (pur C6), 159,1 (pur C2).

Funkcionalizace 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu v pozici C2 - obecný postup 2:

Suspenze 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu (1 ekv.) a ethanolického roztoku odpovídajícího aminu (20 ekv., např. 5,6M dimethylamin v absolutním EtOH) byla zahřívána pod inertní dusíkovou atmosférou v tlakové ampuli na 100 °C přes noc. Směs byla zakoncentrována za sníženého tlaku. Odparek byl přečištěn sloupcovou chromatografií s použitím mobilních směsí CHCl₃/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc s gradientovou elucí.

PŘÍKLAD 8: 9-cyklGpenlyl-N^r‘-furan-2-ylmethyí)-N(N²-dimethyl-9II-purin-2,6-diamin (sloučenina 15)

Purifikováno sloupcovou chromatografií s využitím mobilní směsi CHCl₃/MeOH (100:1, v/v) a gradientem MeOH. Pevná bílá látka, sumární vzorec: Ci₇H₂₂N6O, výtěžek: 83%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 26,14, 99,9. ESE-MS m/z (intenzita, ion): 327,3 (100, [M+H]⁺).

- 16CZ 2022 - 227 A3

HRMS (ESE-TOF) m/z kalk. pro Ci₇H₂2N₆O [M+H]⁺ 327,1931, změř. 327,1931. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-ďe) δ (ppm): 1,61-1,69 (m, 2H, cP H3), 1,81-1,89 (m, 2H, cP H3‘), 1,91-1,98 (m, 2H, cP H2), 2,04-2,10 (m, 2H, cP H2‘), 3,06 (s, 6H, -N(CH3)2), 4,58 (bs, 2H, CFL-for), 4,67 (pent, J= 7,6 Hz, 1H, cP Hl), 6,21 (d, J= 3,1 Hz, 1H, forH3), 6,34 (dd, J= 3,1, 1,8 Hz, 1H, for H4), 7,51 (d, J= 0,9 Hz, 1H, for H5), 7,73 (bs, 1H, purNH), 7,78 (s, 1H, pur H8). ¹³C-NMR(125 MHz, DMSO-č/á) δ (ppm): 23,8 (2x C, cP C3), 31,7 (2x C, cP C2), 36,4 (CH2-for), 36,9 (2x C, -N(CH₃)₂), 54,8 (cP Cl), 106,5 (forC3), 110,4 (forC4), 113,1 (purC5), 136,2 (pur C8), 141,6 (forC5), 151,2 (pur C4), 153,6 (for C2), 153,7 (pur C6), 158,8 (pur C2).

Funkcionalizace 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu v pozici C2 - obecný postup 3:

Suspenze 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu (1 ekv.), odpovídajícího aminu (10 ekv.) a DIPEA (5 ekv.) byla zahřívána 3 h pod inertní dusíkovou atmosférou v tlakové ampuli při 165 °C. Po ochlazení byla směs naředěna vodou a extrahována do EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na₃SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií s použitím mobilních směsí CHCl₃/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc s gradientovou elucí. Reakce může být také provedena ve vhodných rozpouštědlech, jako je DMSO, Α,Α-dimethylformamid (DMF), A-methylpyrrolidon (NMP) nebo ethylenglykol.

PŘÍKLAD 9: N²-(2-(dimethylamino)ethy^)-N⁶-furan-2-ylmethyt)-9-(tetrahydro-2H-pyran-4-yt)9H-purin-2,6-diamin (sloučenina 55)

Purifikováno preparativní HPLC. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C19H27N7O2, výtěžek: 50%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 10,64, 99,9. ESI -MS m/z (intenzita, ion): 386,4 (100, [M+H]⁺). HRMS (ESE-TOF) m/z kalk. pro C19H27N7O2 [M+H]⁺ 386,2299, změř. 386,2299. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 1,87 (dd, J= 12,2, 2,1 Hz, 2H, ΤΗΡ H3), 2,14 (s, 8H, THP H3‘, -NHCH2CH2N(CH3)2), 2,37 (t, J= 6,9 Hz, 2H, -NHCH2CH2N(CH3)2), 3,32 (q, J= 6,4 Hz, 2H, -NHCH2CH2N(CH3)2), 3,43 (td, J= 11,8, 1,4 Hz, 2H, THP H2), 3,96 (dd, J= 11,3, 4,0 Hz, 2H, THP H2‘), 4,38 (tt, J= 11,9, 4,1 Hz, 1H, THP H4), 4,59 (bs, 2H, CH2-fur), 6,18 (bs, 1H, -NHCH2CH2N(CH3)2), 6,20 (dd, J= 3,2, 0,8 Hz, 1H, for H3), 6,34 (dd, J= 3,4, 1,8 Hz, 1H, fůr H4), 7,51 (dd, J= 1,8, 0,9 Hz, 1H, forH5), 7,71 (bs, 1H, purNH), 7,80 (s, lH,purH8). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-ďe) δ (ppm): 32,1 (2x C, THP C3), 36,3 (CH2-fur), 39,1 (-NHCH₂CH₂N(CH₃)₂), 45,3 (2x C, -NHCH₂CH₂N(CH₃)₂), 50,5 (THP C3), 58,4 (-NHCH₂CH₂N(CH₃)₂), 66,4 (2x C, THP C2), 106,4 (forC3), 110,4 (forC4), 113,7 (pur C5), 135,5 (purC8), 141,6 (for C5), 150,9 (pur C4), 153,5 (for C2), 154,3 (pur C6), 158,9 (pur C2).

Funkcionalizace 2-chlor-9-substifoovaných derivátů A^-forforyladeninu v pozici C2 - obecný postup 4:

60% disperze NaH v minerálním oleji (3 ekv.) byla opatrně za chlazení přidána do odpovídajícího alkoholu (koncentrace 2-chlor-9-substifoovaného derivátu A^-forforyladeninu, 0,25M). Směs byla míchána za chlazení cca 30 minut (do ukončení vývoje plynu). Poté byl přidán 2-chlor-9substifoovaný derivát A^-forforyladeninu a směs byla míchána pod inertní dusíkovou atmosférou při 95 °C přes noc. Po ochlazení byla směs zakoncentrována za sníženého tlaku. Odparek byl naředěn vodou a směs byla extrahována do EtOAc. Spojené organické vrstvy byly promyty solankou, vysušeny nad Na₃SO4, zfiltrovány a zakoncentrovány za sníženého tlaku. Produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií s použitím mobilních směsí CHCl₃/MeOH nebo ΡΕ/EtOAc s gradientovou elucí.

- 17CZ 2022 - 227 A3

PŘÍKLAD 10: N-furan-2-ylmethyi)-2-isopropoxy-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6amin (sloučenina 49)

Purifikováno sloupcovou chromatografií s využitím mobilní směsi CHCL/MeOH (100:1, v/v) a gradientem MeOH. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C18H23N5O3, výtěžek: 56%. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min, %): 23,50, 99,9. ESL-MS m/z (intenzita, ion): 358,4 (100, [M+H]⁺).

HRMS (ESL-TOF) m/z kalk. pro Ci₈H₂3N₅O3 [M+H]⁺ 358,1874, změř. 358,1870. 'H-NMR (500 MHz, DMSO-tíe) δ (ppm): 1,25 (dd, J = 6,1, 2,4 Hz, 6H, -OCH(CH3)2), 1,52-1,57 (m, 2H, THP H5, THP H5‘), 1,64-1,73 (m, 1H, THP H4), 1,85-1,90 (m, 1H, THP H3), 1,94 (ddd, J= 12,9, 5,1, 3,6 Hz, 1H, THP H4‘),2,21 (qd,J= 12,1,3,3 Hz, ΙΗ,ΤΗΡ H3‘), 3,60-3,65 (m, 1H, THP H6), 3,98 (dd, J = 10,7, 1,8 Hz, 1H, THP H6‘), 4,60 (bs, 2H, CH2-for), 5,15 (sept, J = 6,1 Hz, 1H, OCH(CH3)2), 5,47 (dd, J= 11,0, 1,8 Hz, 1H, THP H2), 6,20 (d, J= 3,1 Hz, 1H, for H3), 6,35 (dd, J=3,l, 1,8 Hz, lH,forH4), 7,53 (dd,J=l,6, 0,8 Hz, lH,forH5), 8,12 (s, lH,purH8), 8,27 (bs, 1H, purNH). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-A) δ (ppm): 21,9 (2^χ C, -OCH(CH3)₂), 22,5 (THP C4), 24,6 (THP C5), 30,0 (THP C3), 36,5 (CH₂-for), 67,6 (THP C6), 68,6 (-OCH(CH₃)₂), 80,7 (THP C2), 106,5 (forC3), 110,4 (forC4), 115,1 (purC5), 137,5 (pur C8), 141,8 (for C5), 150,5 (pur C4), 152,9 (for C2), 154,8 (pur C6), 160,6 (pur C2).

PŘÍKLAD 11: Farmaceutické přípravky

Al: Tvrdé tobolky

5000 tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g sloučeniny vzorce I, se připraví následujícím způsobem:

Složení: sloučenina vzorce I: 1250 g; talek 180 g; pšeničný škrob: 120 g; stearát hořečnatý: 80 g; laktóza 20 g.

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek.

A2: Tvrdé tobolky s N-furan-2-ylmethyi)-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-aminem

5000 tobolek, každá obsahující jako aktivní složku 500 mg A-(foran-2-ylmethyl)-9-(tetrahydro2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-aminu, se připraví následujícím postupem:

Složení: ,V-(fiiran-2-ylmcthyl)-9-(tctrahydro-2//-pyran-2-yl)-9//-purin-6-amincm 2500 g; talek 35 g; magnézium stearát 10 g.

Postup přípravy: Homogenizované látky jsou protlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,51 g směsi je přenesena do želatinové tobolky.

A3: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g sloučeniny vzorce I jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: sloučenina vzorce I 250 g; lauroglykol 21 g.

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykolu® a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

- 18 CZ 2022 - 227 A3

V případě zvýšení dávky účinné látky na 0,5 g se odpovídajícím způsobem sníží množství laurylglykolu.

PŘÍKLAD 12: Sloučeniny vzorce I prodlužují periodu cirkadiánního rytmu lidských buněk

Buňky lidského osteosarkomu U2OS byly pěstovány ve standardním DMEM s 10% fetálním telecím sérem. Buňky U2OS byly transdukovány pomocí lentivirových částic obsahujících reportér s fúzí Bmall-Luc a selektovány pod Blasticidinem. Buněčná linie byla klonálně expandována a pro další experimenty byla použita jediná monoklonální buněčná linie. Buňky byly kultivovány v 384jamkové destičce v růstovém médiu do 90+ % konfluence. Testovaná sloučenina nebo vehikulum (DMSO) byly aplikovány do záznamového média s 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, Ix GlutaMAX, 10% fetálním telecím sérem a 0,1 mM Luciferinem-EF. Záznam luminiscence proběhl každou hodinu během dalších 144 hodin. Analýza cirkadiánního rytmu byla provedena pomocí cosinorové analýzy.

Délka periody byla vyjádřena relativně k periodě buněk ovlivněných pouze DMSO vehikulem (jejich perioda je tedy 1,00). Výsledky jsou zobrazeny na Obrázku 2 a uvedeny v Tabulce 4.

Tento experiment demonstruje, že sloučeniny vzorce I prodlužují periodu cirkadiánního rytmu lidských buněk a mohou být použity k manipulaci s fází cirkadiánního rytmu například s cílem synchronizovat vnitřní cirkadiánní hodiny se solárním časem. Celkový efekt na cirkadiánní oscilace nepřímo, ale jednoznačně, prokazuje, že sloučeniny vzorce I je možné použít i k časové modulaci koncentrace a aktivity nejen BMAL1, ale i dalších komponent oscilátoru včetně kritických komponent PER2, CRY and CLOCK v čase, protože tyto jsou nezbytnou součástí mechanismu generujícího rytmickou expresi použitého luminiscenčního reportéru. Nutně také dochází k ovlivnění koncentrace a hladiny dalších proteinů, jejichž rytmická exprese je řízena oscilátorem v mozku i periferních tkáních (tzv. hodinami kontrolované geny). Vliv sloučenin vzorce I na aktivitu komponent oscilátoru a podřízených genů také znamená ovlivnění fyziologických procesů buňky těmito geny a proteiny řízených. AČ-fúrfuryladenin byl použit jako srovnávací látka. Příklad ukazuje, že sloučeniny vzorce I vykazují významný vliv na komponenty cirkadiánního oscilátoru a periodu cirkadiánního rytmu v koncentracích, ve kterých N⁶fúrfuryladenin má minimální efekt (Tabulka 4). Sloučeniny vzorce I vykazují na dávce závislý účinek na délku periody cirkadiánního rytmu a jsou aktivnější než A^-furfúryladenin v širokém rozmezí koncentrací (Obrázek 1). Schopnost posunout fázi cirkadiánního cykluje patrná z Obrázku 2.

Tabulka 4. Efekt sloučenin vzorce lna délku periody cirkadiánního rytmu v linii U2OS. Kontrolní buňky ovlivněné DMSO vehikulem mují relativní periodu 1,00.

Číslo látky nebo název srovnávací látky	Délka periody ± střední chyba průměru (vyjádřená relativně ke kontrole) při uvedené koncentraci
1	10 pM: 1,19 + 0,02
2	10 pM: 1,05 + 0,01
3	10 pM: 1,06 + 0,01
4	20 pM: 1,08 + 0
5	10 pM: 1,05 + 0,01
6	5 pM: 1,23 + 0,03
7	10 pM: 1,13 + 0,02
8	10 pM: 1,04 ± 0,01 ;20 pM: 1,22 ± 0
9	10 pM: 1,09 ± 0,01 ;20 pM: 1,11+0,01
10	10 pM: 1,09 + 0,01
12	10 pM: 1,16 + 0,01
15	1 pM: 1,05 ± 0,01 ;4 pM: 1,15 ± 0,01
16	10 pM: 1,26 ± 0,07;20 pM: 1,95 ± 0,14

-19CZ 2022 - 227 A3

17	10 μΜ: 1,48 ±0,28
18	1 μΜ: 1,16 ±0,03
19	1 μΜ: 1,07 ± 0,01 ;4 μΜ: 1,21 ± 0,01
20	1 μΜ: 1,09 ± 0,01;4 μΜ: 1,67 ± 0,33
21	20 μΜ: 1,26 ±0,06
22	10 μΜ: 1,06 ±0
23	10 μΜ: 1,08 ±0,01
24	10 μΜ: 1,03 ± 0;20 μΜ: 1,09 ± 0,01
25	20 μΜ: 1,06 ±0,01
27	20 μΜ: 1,25 ±0,01
28	20 μΜ: 1,16 ±0
29	20 μΜ: 1,09 ±0
30	20 μΜ: 1,05 ±0
31	20 μΜ: 1,13 ±0,01
32	20 μΜ: 1,09 ±0
33	5 μΜ: 1,04 ±0
34	10 μΜ: 1,12 ± 0,01 ;20 μΜ: 1,25 ± 0,03;50 μΜ: 1,73 ± 0,6
35	10 μΜ: 1,05 ±0,01
38	10 μΜ: 1,1 ±0,02
39	20 μΜ: 1,05 ±0,01
40	10 μΜ: 1,04 ±0
41	1 μΜ: 1,03 ± 0,01;5 μΜ: 1,07 ± 0;20 μΜ: 1,32 ± 0,01
43	1 μΜ: 1,08 ±0,01
44	1 μΜ: 1,05 ± 0,01;5 μΜ: 1,28 ± 0,02
45	20 μΜ: 1,04 ±0,01
46	20 μΜ: 1,05 ±0,01
47	5 μΜ: 1,08 ± 0,01 ;20 μΜ: 1,47 ± 0,03
49	20 μΜ: 1,14 ±0,01
50	10 μΜ: 1,11 ± 0,01;20 μΜ: 1,14 ±0,02
52	20 μΜ: 1,08 ±0,01
53	20 μΜ: 1,22 ±0,01
54	5 μΜ: 1,14 ±0,02
55	4 μΜ: 1,16 ±0,01
56	20 μΜ: 1,26 ±0,02
57	20 μΜ: 1,16 ±0,01
58	20 μΜ: 1,42 ±0,04
59	20 μΜ: 1,2 ± 0,01 ;20 μΜ: 1,11 ±0,02
60	5 μΜ: 1,04 ± 0;20 μΜ: 1,15 ± 0,01
61	10 μΜ: 1,04 ± 0,01 ;20 μΜ: 1,15 ± 0,02
AČ-fúrfúryladenin	20 μΜ: 1,02 ±0,01
A^-(5-methylfúrfúryl)adenin	50 μΜ: 1,01 ± 0,02
2-chlor-A^-furfúryladenin	20 μΜ: 1,00 ±0,03
9-(tetrahydrofuran-2-yl)-V-[(purin-6-amin	20 μΜ: 0,98 ± 0,02
9-(ethoxymethyl)-A-(fúran-2ylmethyl)-9//-purin-6-amin	50 μΜ: 1,01 ± 0,01
9-(2-ethoxyethyl)-A-(fúran-2ylmethyl)-9//-purin-6-amin	50 μΜ: 0,99 ±0,01
W(fúran-2-ylmethyl)-9-(2isopropoxyethyl)-9//-purin-6amin	50 μΜ: 1,01 ± 0,01

-20CZ 2022 - 227 A3

9-[2-(tert-butoxy)ethyl]-V(fůran-2-ylmethyl)-9//-purin-6amin	50 pM: 1+0,01
V-(fůran-2-ylmethy 1 )-9-(3 methoxypropyl)-9//-purin-6amin	50 pM: 0,99 + 0,01
V-(fůran-2-ylmethyl)-9-(4methoxybutyl)-9//-purin-6-amin	50 pM: 1+0,01
9-benzyl-V-(fůran-2-ylmethyl)- 9//-purin-6-amin	10 pM: 1+0,02
V-(fůran-2-ylmethyl)-9(methoxymethyl)-9//-purin-6amin	50 pM: 1,01 + 0,01

PŘÍKLAD 13: Sloučeniny vzorce I prodluží.jí periodu cirkadiánního rytmu myších buněk

Myší embryonální fibroblasty NIH3T3 byly pěstovány ve standardním DMEM s 10% fetálním telecím sérem. Buňky NIH3T3 byly transfekovány 1 pg Per2-Luc reportéru pomocí GeneJuice a selektovány pod hygromycinem. Buněčná linie byla klonálně expandována a pro další experimenty byla použita jediná monoklonální buněčná linie. Buňky byly kultivovány v 96jamkové destičce v růstovém médiu do 90+ % konfluence. Testovaná sloučenina nebo vehikulum (DMSO) byly aplikovány do záznamového média s 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, Ix GlutaMAX, 10% fetálním telecím sérem a 0,lmM Luciferinem-EF (Promega Madison, WI, USA). Záznam luminiscence proběhl každou hodinu během dalších 144 hodin. Analýza cirkadiánního rytmu byla provedena pomocí cosinorové analýzy. Délka periody byla vyjádřena relativně k periodě buněk ovlivněných pouze DMSO vehikulem (jejich délka periody je tedy 1,00). Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 5.

Experiment demonstruje, že sloučeniny vzorce I prodlužují periodu cirkadiánního rytmu myších buněk a mohou být použity k manipulaci s fází cirkadiánního rytmu například s cílem synchronizovat vnitřní cirkadiánní hodiny se solárním časem. Celkový efekt na cirkadiánní oscilace nepřímo, ale jednoznačně, prokazuje, že tyto látky je možné použít i k časové modulaci koncentrace a aktivity nejen PER2, ale i dalších komponent oscilátoru včetně kritických komponent BMAL1, CRY and CLOCK, protože tyto jsou nezbytnou součástí mechanismu generujícího rytmickou expresi použitého luminiscenčního reportéru. Nutně také dochází k ovlivnění koncentrace a hladiny dalších proteinů, jejichž rytmická exprese je řízena oscilátorem v mozku i periferních tkáních (tzv. hodinami kontrolované geny). Vliv substitučních sloučenin vzorce I na aktivitu komponent oscilátoru a podřízených genů také znamená ovlivnění fyziologických procesů buňky těmito geny a proteiny řízených.

A^-fůrfůryladenin byl použit jako srovnávací látka. Tabulka 5 ukazuje, že sloučeniny vzorce I vykazují významný vliv na komponenty cirkadiánního oscilátoru a periodu cirkadiánního rytmu v koncentracích, ve kterých A^-fůrfůryladenin má daleko menší efekt. Obrázek 4 ukazuje, že efekt sloučenin vzorce I na periodu cirkadiánního rytmu je závislý na dávce a je významně vyšší než efekt A^-fůrfůryladeninu v širokém spektru koncentrací.

Tabulka 5. L·fekt sloučenin vzorce lna délku periody cirkadiánního rytmu v linii 5111373. Kontrolní buňky ovlivněné DMSO vehikulem mají relativní periodu 1,00.

Číslo látky nebo název srovnávací látky	délka periody ± střední chyba průměru (vyjádřená relativně ke kontrole) při uvedené koncentraci
1	10 uM: l,17±0,01;50uM: 1,54 + 0,01
4	50:uM: 1,23 ±0,03
6	10 uM: 1,27 + 0,01

-21 CZ 2022 - 227 A3

10	10 uM: 1,14 + 0,01
13	10 uM: 1,19 ± 0,01
15	0,83 uM: 1,08 ± 0,05;50 uM: 1,56 ± 0,07
16	0,83 uM: 1,05 ± 0,01; 10 uM: 2,02 ± 0,06
17	10 uM: 1,71 ± 0,04;50 uM: 2,17 ± 0,1
18	10 uM: 1,19 ± 0;50 uM: 2,19 ± 0,35
20	0,83 uM: 1,04 ± 0,01 ;50 uM: 1,55 ± 0,03
22	50 uM: 1,22 + 0,02
23	10 uM: 1,07 ± 0,01 ;50 uM: 1,36 ± 0,04
24	50 uM: 1,24 + 0,07
33	50 uM: 1,18 + 0,02
34	50 uM: 2,3 ± 0,03
35	50 uM: 1,38 ± 0,09
38	50 uM: 1,22 + 0,06
44	50 uM: 1,72 + 0,04
45	50 uM: 1,32 + 0,01
46	50 uM: 1,27 + 0,04
50	50 uM: 1,6 + 0,02
51	0,83 uM: 1,05 ± 0,02; 10 uM: 1,08 ± 0,02;50 uM:l,74 ±0,2
60	50 uM: 1,42 + 0,04
AČ-furfuryladenin	50 uM: 1,06 + 0,02
9-(cthoxymcthyl)-,V-(furan-2ylmethyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 1 ± 0,03
9-(2-ethoxyethyl)-V-(furan-2ylmethyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 0,97 ± 0,03
W(furan-2-ylmethyl)-9-(2isopropoxyethyl)-9//-purin-6-amine	50 uM: 0,95 ± 0,02
9-[2-(tert-butoxy)ethyl] 4V-(furan-2ylmethyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 0,9 ± 0,06
W(furan-2-ylmethyl)-9-(3methoxypropyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 0,93 ± 0
W(furan-2-ylmethyl)-9-(4methoxybutyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 0,97 ± 0,03
9-bcnzyl-,V-(furan-2-ylmcthyl)-9//purin-6-amin	10 uM: 1 + 0,02
V-(furan-2-ylmethyl)-9(methoxymethyl)-9//-purin-6-amin	50 uM: 0,96 ± 0,02

Claims (7)

1. Heterocyklická sloučenina obecného vzorce la

(la) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde

- n je 1, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž právě jeden z Y a Z je O; nebo

- n je 2, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z Y a Z je O; nebo

- n je 3, X je CH2 a každý z Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z X, Y a Z je O;

a

R¹ je H nebo C1-C4 alkyl;

R² je vybraný z H, chlor,C1-C4 alkoxy aNR²¹R²²;

kde R²¹ a R²² jsou nezávisle vybrány z H, C3-C6 cykloalkyl a ClC8 alkyl, přičemž jeden uhlíkový atom v ClC8 alkylu může být volitelně nahrazen jedním dusíkovým atomem nebo jedním kyslíkovým atome m;

nebo kde R²¹ je H nebo C1-C4 alkyl a R²² je vybraný z C6-C10 aryl-methyl, C6-10 aryl-ethyl, C3C6 heteroaryl-methyl, C3-C6 heteroarylethyl, přičemž heteroarylová skupina obsahuje 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S, N;

nebo kde R²¹ a R²² spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří tříčlenný až osmičlen ný kruh volitelně obsahující jeden další heteroatom vybraný z O, S, N.

2. Heterocyklická sloučenina obecného vzorce I

(I) nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, kde

-23 CZ 2022 - 227 A3 každý z X, Y, Z je vybrán z CH2 a O, přičemž nejvýše jeden z X, Y a Z je O;

n je 1 nebo 2 nebo 3,

R¹ je H nebo C1-C4 alkyl;

R² je vybraný z H, chlor, C1-C4 alkoxy a NR²¹R²²;

kde R²¹ a R²² jsou nezávisle vybrány z H, C3-C6 cykloalkyl a C1-C8 alkyl, přičemž jeden uhlíkový atom v C1-C8 alkylu může být volitelně nahrazen jedním dusíkovým atomem nebo jedním kyslíkovým atomem;

nebo kde R²¹ je H nebo C1-C4 alkyl a R²² je vybraný z C6-C10 aryl-methyl, C6-10 aryl-ethyl, C3C6 heteroaryl-methyl, C3-C6 heteroaryl-ethyl, přičemž heteroarylová skupina obsahuje 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S, N;

nebo kde R²¹ a R²² spolu s dusíkovým atomem, na kterém jsou vázány, tvoří tříčlenný až osmičlenný kruh volitelně obsahující jeden další heteroatom vybraný z O, S, N;

pro použití pro prevenci a terapii nemocí cirkadiánního rytmu.

3.

Heterocyklická sloučenina vzorce I pro použití podle nároku 2, kde použití je terapeutické, a lé čená nemoc je vybrána ze skupiny dědičný syndrom pokročilé spánkové fáze - FASPS, porucha po kročilé fáze spánku - ASPD, syndrom nepravidelné spánkové fáze a volně běžící spánkové fáze.

4.

Heterocyklická sloučenina vzorce I pro použití podle nároku 2, kde použití je terapeutické, a lé čená nemoc je abnormální cirkadiánní aktivita spojená s neurodegenerací vybranou ze skupiny mírná kognitivní porucha, Alzheimerova choroba a Smith-Magenisův syndrom, a sloučenina vzorce I se podává osobám, u nichž se projevuje abnormální cirkadiánní aktivita v důsledku zkrácené periody cirkadiánního cyklu a/nebo předbíhání fáze cirkadiánního rytmu.

5.

Heterocyklická sloučenina vzorce I pro použití podle nároku 2, kde použití je terapeutické neb o profylaktické, a léčená nemoc je vybrána ze skupiny pásmová nemoc, sociální jet lag, a intoleran ce směnného režimu.

6.

Heterocyklická sloučenina vzorce I popsaného v nároku 2 pro použití pro synchronizaci optim álního cirkadiánního času pacienta a solárního času pro aplikaci terapie, zejména chemoterapie, ra dioterapienebo chirurgického zákroku.

7.

Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu vzorce Ia podle nároku 1 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo solvát, a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nos ič.