CZ308800B6

CZ308800B6 - Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu, farmaceutické přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití při neuroprotekci

Info

Publication number: CZ308800B6
Application number: CZ201982A
Authority: CZ
Inventors: Gabriel Gonzales; Václav Mik; Noemi Bucharová; Jiří Grúz; Petr Kaňovský; Miroslav Strnad
Original assignee: Univerzita Palackého v Olomouci; Fakultní Nemocnice Olomouc
Priority date: 2019-02-12
Filing date: 2019-02-12
Publication date: 2021-05-26
Also published as: US20220127269A1; WO2020164648A1; CZ201982A3; EP3924353B1; US12319694B2; EP3924353A1

Abstract

Řešení se týká heterocyklických derivátů purinu vzorce I, se substituenty obsahujícími dusík, jejich použití v lékařských aplikacích a přípravků obsahujících tyto deriváty. Nová generace sloučenin má selektivní antineurodegenerativní vlastnosti na nervových buňkách a tkáních a může být s výhodou použita při léčení a profylaxi neurodegenerativních onemocnění, zejména pak při léčení a profylaxi Parkinsonovy choroby.

Description

Výskyt neurodegenerativních onemocnění zaznamenal dramatický nárůst. Zvláště výskyt onemocnění, jako je Alzheimerova choroba (AD), se v populaci ve věku nad 65 let zdvojnásobuje. Kromě toho AD postihuje až 50 % populace ve věku nad 85 let (Qiu, Kivipelto and von Strauss et al., Dial ClinNeurosci, 2009, 11, 111).

Podobně také Parkinsonova choroba (PD), amyotrofická laterální skleróza (ALS), progresivní supranukleámí paralýza (PSP), kortikobazální degenerace (CBD), frontotemporální demence (FTD), demence s Lewyho tělísky (DLB), Huntingtonova choroba (HD), multisystémová atrofie (MSA), chronická traumatická encefalopatie (CTE), spinocerebelámí ataxie jsou spojeny se stárnutím populace. Neurodegenerativní onemocnění jsou v současné době palčivým problémem moderní společnosti, kvůli vzrůstající incidenci a nákladům spojených s léčbou a nedostatkem účinných léků (Christophe Coupé et al., Eur Neurol Rev, 2013, 8, 38; Levy et al., Arch Neurol, 2007, 64, 1242; Shah et al., Lancet Neurol, 2016, 15, 1285). Neurodegenerativní onemocnění jsou úzce spojena s několika patologickými ději, jako jsou progresivní ztráta funkce neuronů vedoucí k jejich apoptotické smrti, porucha autofagie, agregace proteinů, zvýšená zánětlivost, oxidativní stres, mitochondriální dysfunkce a excitotoxicita (Jeffrey, L. C.; Jagan, A. P.; (2016). Neurodegenerative Diseases Evolving Unifying Principles In Neurodegenerative Diseases Unifýing Principles (pp. 1-14). Oxford, UK).

V současné době se terapeutické trendy neurodegenerativních onemocnění zaměřují na terapii modifikující onemocnění, která se zaměřuje na patologické mechanismy onemocnění, které vedou k progresi a smrti neuronů. Současné strategie terapie zahrnují 1) přímé účinky na neurony prostřednictvím snížení oxidativního stresu a indukce dráhy Nrf-2, zvýšení mitochondriální vitality, snížení apoptózy (indukce Akt dráhy, Bel-2 up-regulace), ochranu axonů a jejich funkcí, a tvorbu trofických faktorů; nebo 2) nepřímé účinky regulace buněk odpovědných za zánětlivé procesy, jako je mikroglie a astrocyty. Konečným výsledkem terapie modifikující onemocnění je dosažení neuroprotekce (Cummings et al., Transl Neurodeg, 2017, 6, 25).

Proto je předmětem tohoto vynálezu poskytnout novou generaci derivátů purinu, které vykazují silné a selektivní antineurodegenerativní vlastnosti na nervových buňkách a tkáních a mohou být s výhodou použity při léčení a profýlaxi neurodegenerativních onemocnění, mimořádně výhodně pak Parkinsonovy choroby.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I,

- 1 CZ 308800 B6

(I) ve kterém

R je vybráno ze skupiny zahrnující H, F, Cl, Br, methyl, OH a methoxy;

kruh -[N-(CH2)_c-A(Rl)-(CH2)d-] v poloze 2 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-1yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

kruh -[N-(CH2)_a-A(Rl)-(CH2)b-] v poloze 6 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-1yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli, zejména soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo adiční soli s kyselinami.

Předmětem tohoto vynálezu jsou C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce la,

R¹

(la) ve kterém

R je vybráno ze skupiny zahrnující H, F, Cl, Br, methyl, OH a methoxy;

kruh -[N-(CH2)_c-A(Rl)-(CH2)d-] v poloze 2 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolinyl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazinl-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

kruh -[N-(CH2)_a-A(Rl)-(CH2)b-] v poloze 6 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolinyl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazinl-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo adiční soli s kyselinami.

-2 CZ 308800 B6 pro použití pro léčení nebo profylaxi neurodegenerativních onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující amyotrofíckou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleámí paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, Lewyho tělní demence, atrofie mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelámí ataxie.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou dále C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I nesoucí substituent v poloze 9, tedy substituent -CH2-C6H4R, který je vybraný ze skupiny zahrnující benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl.

Jednotlivé sloučeniny popsané v příkladech představují jednotlivá výhodná provedení předloženého vynálezu. Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou tyto C2,C6disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I:

-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6(azetidin-l-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-lyl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-lyl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(pyrrolidin-l-yl)-9(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, 1,5oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(piperidin-l-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9Hpurin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6morfolino-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-thiomorfolino-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(piperazin-l-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9Hpurin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-l-yl, 4methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(4methylpiperazin-l-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2

-3 CZ 308800 B6 methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-lyl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-1-yl, 4-methylpiperazin-lyl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(azepan-l-yl)-9-(benzyl, 2fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-1-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, 1,5oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(azokan-l-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9Hpurin; 2-(azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-1-yl, 4methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(l,5oxazokan-5-yl)-9-(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4-methoxybenzyl)-9H-purin; 2-(azetidin-lyl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolino, thiomorfolino, piperazin-1-yl, 4-methylpiperazin-lyl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl, l,5-thiazokan-5-yl)-6-(l,5-thiazokan-l-yl)-9(benzyl, 2-fluorbenzyl, 3-fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2-brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3methoxybenzyl, 4 -methoxybenzyl) -9H-purin.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou tyto C2,C6-disubstituované-9-benzyl9H-purinové deriváty obecného vzorce I: 2,6-di(azetidin-l-yl)-9-(3-hydroxybenzyl)-9H-purin, 2,6-di(azetidin-1 -yl )-9-(4-hydroxybenzyl )-9H-purin, 9-(4-hydroxybenzyl)-2,6-di(pyrrolidin-1 yl)-9H-purin, 9-benzyl-2-(piperidin-1 -yl)-6-(pyrrolidin-1 -yl)-9H-purin, 9-benzyl-6-(piperidin-1 yl)-2-(pyrrolidin-1 -yl)-9H-purin, 9-benzyl-2,6-dithiomorfolino-9H-purin, 9-(4-hydroxybenzyl)2,6-dithiomorfolino-9H-purin, 2-(azetidin-1 -yl)-9-(4-hydroxybenzyl)-6-thiomorfolino-9H-purin, 9-(4-hydroxybenzyl)-2-(pyrrolidin-1 -yl )-6-thiomorfol ino-9H-purin, 2,6-di(azepan-1 -yl)-9-(4hydroxybenzyl)-9H-purin.

Látky podle tohoto vynálezu mají široké spektrum biologických účinků, včetně zvyšování viability neuronů, redukce oxidativního stresu, neuroprotektivity a aktivace Nrf-2. Tyto účinky jsou zejména výhodné pro léčbu neurodegenerativních chorob a odpovídají spektru účinků, které jsou požadovány od látek určených pro takovou léčbu.

C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I a la aktivují signální dráhu Nrf2 proteinu, podílející se na antioxidační odpovědi. Tato signální dráha kontroluje expresi genů, jejichž proteinové produkty jsou zapojeny v detoxifikaci a eliminaci reaktivních oxidantů a elektrofilních činidel cestou konjugativních reakcí a cestou zvýšení buněčné antioxidační kapacity.

C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I a la lze použít při ochraně buněk jak in vivo, tak in vitro, jako antioxidanty pro inhibici nepříznivých metabolických procesů v rostlinách a zvířatech.

Předmětem tohoto vynálezu jsou také C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I pro použití jako léčiva.

Předmětem tohoto vynálezu jsou C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9H-purinové deriváty obecného vzorce I a la pro použití při léčení a profylaxi neurodegenerativních onemocnění, kde neurodegenerativní onemocnění je s výhodou vybráno ze skupiny zahrnující amyotrofickou

-4 CZ 308800 B6 laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleámí paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, demence s Lewyho tělísky, atrofíe mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelámí ataxie.

Předmětem tohoto vynálezu jsou ve výhodném provedení C2,C6-disubstituované-9-benzyl-9Hpurinové deriváty obecného vzorce I pro použití při léčbě a profylaxi Parkinsonovy nemoci.

Tento vynález dále poskytuje farmaceutické kompozice obsahující jeden nebo více C2,C6disubstituovaných-9-benzyl-9H-purinových derivátů obecného vzorce I společně s alespoň jedním farmaceuticky akceptovatelným nosičem.

Farmaceutické přípravky

Vhodné cesty pro systémovou aplikaci jsou orální, inhalační, injekční (intravazální, intramuskulámí, subkutánní), bukální, sublinguální anasální. Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta a místě onemocnění, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.

Farmaceutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou, např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou, např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.

Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují pomocné látky, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufiry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, dextran, polyvinylpyrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8 až 22, s výhodou pak 12 až 22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, beta-karotenu nebo 3,5-di-terc-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako methanol, ethanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich izomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou, např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylenglykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylenglykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cx až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový

- 5 CZ 308800 B6 olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olej né.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidlajako cukry, např. laktóza, sacharóza, mannitol nebo sorbitol, celulózové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogen fosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylenglykol nebo jeho deriváty. Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulózových preparátů jako acetylcelulózaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulózaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet, např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou, např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylenglykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty, např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou, např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku, např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou, např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou, např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou, např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylenglykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory, tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofílizátu společně s pomocnými látkami, kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity, např. i pro

-6CZ 308800 B6 infuzní roztoky. Preferovaná konzervo vadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafíny, které přednostně obsahují vhodné hydroxy sloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetylalkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofílní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou, např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylenglykol, sorbitol a/nebo polyethylenglykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonicí látky.

Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafín, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejně, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a/nebo distearát. Dále obsahují, např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.

Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo starylalkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropylmyristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery (Tween), dále polyoxyethylenové ethery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearylalkoholu nebo stearylalkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylenglykol a polyethylenglykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonicí látky.

Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.

Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob ajsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodné-ethanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylenglykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylenglykolů, tj. lipofílní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže ethanolem, a pokud je to nutné, i ostatní pomocné látky a aditiva.

Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profýlakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána

-7 CZ 308800 B6 zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.

Objasnění výkresů

Obrázek 1 ukazuje neuroprotektivní účinek nových C2,C6-disubstituovaných-9-benzyl-9Hpurinových derivátů na Salsolinolem indukovaném modelu Parkinsonovy choroby. Spolu s látkami podle vynálezu byly jako pozitivní kontroly použity Donepezil (DON), Deferoxamin (DFO) a ZM241385 (ZM) v koncentracích 0,1, 1 a 10 μΜ. Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) vtriplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=9) ve třech různých dnech. ANOVA, Bonferonni post hoc test; *, # P < 0,05; **, ## P < 0,01; ***, ### P < 0,001; * P porovnání se vzorkem se Salsolinol 500 μΜ, # P porovnání se vzorkem bez Salsolinolu 500 pM. Hodnota P < 0,05 je považována za statisticky významnou.

Obrázek 2 Účinky nových C2,C6-disubstituovaných-9-benzyl-9H-purinových derivátů na modelu oxidativního stresu (OS) indukovaném Salsolinolem. Látky byly testovány v aktivních koncentracích 1 pM a 10 pM spolu s pozitivními kontrolami DON, DFO a ZM (10 pM), a negativními kontrolami OS-induktory 6-hydroxydopaminem (6-OHDA) a glutamátem (Glu). Všechny výsledky představují průměrnou hodnotu ± standardní chybu průměru (SEM) v triplikátu (trojnásobné opakování) experimentů (n=9) ve třech různých dnech.

Příklady uskutečnění vynálezu

Následující příklady slouží k ilustraci vynálezu, aniž by omezovaly jeho rozsah. Pokud není uvedeno jinak, veškerá procenta jsou uváděna jako hmotnostní. Výchozí látky lze získat z komerčních zdrojů (Sigma, Aldrich, Fluka, atd.) nebo je lze připravit dle návodů uvedených níže.

Chromatografie na tenké vrstvě byla prováděna na destičkách Silica 60 F254 (Merck) s vyvíjecí soustavou petrolether/ethylacetát, kdy byly následně jednotlivé skvrny detekovány pomocí UV světla o vlnové délce 254 nm. Pro čištění látek pomocí sloupcové chromatografie byl použit silikagel Davisil 40-63 micron (Grace Davision). Chromatografická čistota a molekulová hmotnost připravených látek byla změřena pomocí separačního modulu Alliance 2695 (Waters) připojenému k DAD detektoru PDA 996 (Waters) a kvadrupólovému TOF (Time-of-Flight) hmotnostnímu spektrometru Q-Tof micro (Waters). Látky byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a naředěny počáteční mobilní fází na koncentraci 10 pg/ml. Vzorky (10 μΐ) byly nastříknuty na kolonu s reverzní fází Symmetry C18 (150 mm x 2,1 mm x 3,5 pm, Waters) a separovány pomocí následujícího binárního gradientu s průtokem 0,2 ml/min: 0 min, 10% B; 0-24 min, lineární gradient na 90% B, následně 10 min isokratická eluce 90% B. Na konci gradientu byla kolona ekvilibrována na počáteční podmínky. 15 mM kyselina mravenčí titrovaná hydroxidem amonným na pH 4,0 byla použita jako rozpouštědlo (A), a jako organický modifikátor byl použit methanol (rozpouštědlo B). Eluent byl z kolony byl dále veden na DAD detektor (skenovací rozsah 210 až 400 nm s rozlišením 1,2 nm) a ESI zdroj (teplota zdroje 110 °C, kapilární napětí +3,0 kV, napětí na vstupním kuželu (cone voltage) +20 V, desolvatační teplota 250 °C). Dusík byl použit jako desolvatační (500 1/h) i zmlžovací plyn (50 1/h). Data byla získána v pozitivním (ESI+) ionizačním módu v rozsahu 50 až 1000 m/z. Elementární analýza byla změřena na analyzátoru Flash EA 1112 (Thermo Scientific) a získaná data jsou průměrem třech měření. Ή a ¹³C NMR spektra byla pořízena na spektrometru Jeol ECA-500 s frekvencí 500 MHz (Ή) a 125 MHz (¹³C). Vzorky pro měření byly rozpuštěny v DMSO-rie nebo CDCL a chemické posuny byly kalibrovány na pík residuálního rozpouštědla (DMSO-ris - 2,49 ppm, CHCE -7,26 pro proton) a DMSO-rienebo CDCL (DMSO-rie- 39,5 ppm a CDCL - 77,0 pro uhlík).

C2,C6-disubstitutované-9-benzyl-9H-purinové deriváty byly připraveny z 2,6-dichlorpurinu. Prvně byl purin modifikován v pozici N9 reakcí 2,6-dichlorpurinu s odpovídajícím

- 8 CZ 308800 B6 benzylhalogenidem v bezvodém Λζ/V-dimethylformamidu a v přítomnosti uhličitanu draselného, případně reakcí s odpovídajícím benzylalkoholem za použití Mitsunobuovy reakce. V případě C2,C6 symetrických látek byly substituenty na pozice C2 a C6 připojeny v jednom kroku zahřívání 2,6-dichlor-9-benzyl-9H-purinu na 165 °C s nadbytkem odpovídajícího cyklického aminu a Hunigovy báze. C2,C6-asymetrické deriváty byly připraveny ve dvou krocích, kdy v prvním kroku byl nukleofilní substitucí zaveden substituent do polohy C6 reakcí 2,6-dichlor-9-benzyl-9H-purinu s cyklickým aminem a triethylaminem v refluxujícím propanolu. Následně byla provedena substituce v pozici C2 za stejných podmínek jako v případě C2,C6 symetrických látek.

Modifikace purinu v poloze N9:

A) Reakce 2,6-dichlorpurinu s benzylhalogenidy

2,6-Dichlorpurin (2 g ,10,58 mmol) a uhličitan draselný (4,39 g, 31,74mmol) byl pod argonovonou atmosférou rozsuspendován v suchém Λζ/V-di methyl form amidu (53 ml) a míchán 30 minut za teploty místnosti. K suspenzi byl přikapán benzylhalogenid (12,70 mmol) a reakční směs byla míchána za teploty místnosti dalších 16 h. Výsledná suspenze byla nalita do ledové vody (300 ml) a extrahována ethylacetátem (6* 30 ml). Spojené organické frakce byly promyty solankou (2x 50 ml), vysušeny (Na2SO4) a odpařeny za sníženého tlaku. Λ'9-izomcr byl získán přečištěním na silikagelu pomocí sloupcové chromatografie za použití mobilní fáze petrolether/ethylacetát 4:1 s následným gradientem ethylacetátu.

Příklad 1 - 9-benzyl-2,6-dichlor-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlorpurinu a benzylbromidu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C12H8Q2N4, výtěžek (%): 53. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 26,18; 98,0.

EST-MS m/z (rel. int. %, ion): 279,4 (100, [³⁵C1-M+H]⁺), 281,4 (79, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 51,64/51,19; 2,89/2,54; 20,07/19,43. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 5,49 (s, 2H); 7,29-7,37 (m, 5H); 8,83 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 47,0; 2χ 127,5; 128,0; 2χ 128,7; 130,4; 135,5; 148,3; 149,7; 151,0; 153,3.

Příklad 2 - 2,6-dichlor-9-(2,6-dichlorbenzyl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlorpurinu a 2,6-dichlorbenzylbromidu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C12H6CI4N4, výtěžek (%): 55. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 27,75; 98,5%. ESI⁺MS m/z (rel. int. %, ion): 347,4 [³⁵C1-M+H]⁺), 349,4 (79, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 41,41/41,65; 1,74/ 1,59; 16,10/16,49. Ή-NMR (500 MHz, DMSCM,) δ (ppm): 5,67 (s, 2H); 7,47 (dd, J= 8,9; 7,3 Hz, 1H); 7,57 (d, J= 1,9 Hz, 2H); 8,61 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 43,7; 2χ 129,1; 129,5; 130,2; 131,7; 2χ 136,0; 148,1; 149,8; 151,1; 153,3.

Β) Reakce 2,6-dichlorpurinu s benzylalkoholy pomocí Mitsunobuovy reakce

DIAD (diisopropylazodikarboxylát, 625 μΐ, 3,18 mmol) byl pod argonovou atmosférou přikapán do roztoku 2,6-dichlorpurinu (0,5 g, 2,65 mmol), benzylalkoholu (3,18 mmol) a trifenyfosfmu (833 mg, 3,18 mmol) v suchém THF (tetrahydrofuran, 18 ml). Reakční směs byla míchána jednu hodinu za teploty místnosti a poté za sníženého tlaku odpařena. Většina vedlejšího produktu (trifenylfosfinoxidu) byla odstraněna rekrystalizací v horkém toluenu (10 ml). Surový produkt byl posléze přečištěn pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu s použitím mobilní fáze petrolether/ethylacetát 5:1 s následným gradientem ethylacetátu.

Příklad 3 - 2,6-dichlor-9-(2-methoxybenzyl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlorpurinu a 2-methoxybenzylalkoholu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C13H10CI2N4O, výtěžek (%): 49. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 26,25; 98,9. ESI⁺

-9CZ 308800 B6

MS m/z (rel. int. %, ion): 309,4 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 311,4 (78, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 55,51/54,88; 3,26/3,59; 18,12/17,51. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-J₆) δ (ppm): 3,80 (s, 3H); 5,40 (s, 2H); 6,91 (td, J= 7,4; 1,0 Hz, 1H); 7,03 (d, J= 8,3 Hz, 1H); 7,13 (dd, J= 7,3; 1,5 Hz, 1H); 7,32 (td, J= 7,9; 1,5 Hz, 1H); 8,70 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-ď,) δ (ppm): 43,2; 55,4; 111,0; 120,4; 122,9; 129,3; 129,9; 130,3; 148,8; 149,6; 150,9; 153,4; 156,9.

Příklad 4 - 2,6-dichlor-9-(2-chlorbenzyl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlorpurinu a 2-chlorbenzylalkoholu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C12H7CI3N4, výtěžek (%): 53. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 27,23; 97,2.

ESE-MS m/z (rel. int. %, ion): 313,4 (99, [³⁵C1-M+H]⁺); 315,4 (100, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 45,96/45,87; 2,25/2,19; 17,87/18,12. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 5,57 (s, 2H); 7,14 (dd, J= 7,6; 1,2 Hz, 1H); 7,30 (td, J= 7,6; 1,0 Hz, 1H); 7,37 (td, J= 7,7; 1,6 Hz, 1H); 7,52 (dd, J= 7,9; 0,9 Hz, 1H); 8,77 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-í/6) δ (ppm): 45,2; 127,7; 2χ 129,6; 130,0; 130,5; 132,1; 132,6; 148,6; 149,9; 151,1; 153,5.

Příklad 5 - 9-(2-brombenzyl)-2,6-dichlor-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlorpurinu a 2-brombenzylalkoholu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: Ci2H7BrC12N4, výtěžek (%): 62. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 23,08; 97,1.

ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 357,1 (100, [³⁵Cl-³⁵Cl-⁷⁹Br-M+H]⁺); 359,0 (97, [³⁵Cl-³⁷Cl-⁷⁹BrM+H]⁺, [³⁵Cl-³⁵Cl-⁸¹Br-M+H]⁺); 361,0 (62, [³⁷Cl-³⁷Cl-⁷⁹Br-M+H]⁺, [³⁵Cl-³⁷Cl-⁸¹Br-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 40,26/40,33; 1,97/2,23; 15,65/15,32. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 5,53 (s, 2H); 7,05 (dd, J= 7,5; 1,7 Hz, 1H); 7,30 (td, J= 7,6; 1,8 Hz, 1H); 7,34 (td, J= 7,5; 1,4 Hz, 1H); 7,70 (dd, J= 7,8; 1,4 Hz, 1H); 8,76 (s, 1H).

¹³C-NMR(125 MHz, DMSO-ď,) δ (ppm): 47,6; 122,1; 128,2; 129,4; 130,2; 130,5; 132,9; 134,1; 148,6; 149,9; 151,1; 153,6.

Tabulka 1. Příklady připravených 2,6-dichlor-9-benzyl-9H-purinových derivátů

	SUBSTITUENT NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS ANALÝZA
Látka	N9	[%C, %H, %N] [kalk./anal.]	[M+H]⁺
1	2-methylbenzyl	53,26/53,48	3,44/3,66	19,11/19,35	293
2	3-methylbenzyl	53,26/53,32	3,44/3,61	19,11/19,05	293
3	4-methylbenzyl	53,26/53,30	3,44/3,26	19,11/19,00	293
4	2-hydroxybenzyl	48,84/49,05	2,73/2,91	18,98/19,17	295
5	3 -hydroxybenzyl	48,84/48,64	2,73/2,69	18,98/18,62	295
6	4-hydroxybenzyl	48,84/48,77	2,73/2,45	18,98/18,59	295
7	3 -methoxybenzyl	50,51/50,55	3,26/3,29	18,12/18,20	309
8	4-methoxybenzyl	50,51/50,23	3,26/3,48	18,12/18,49	309
9	2-fluorbenzyl	48,51/48,61	2,37/2,43	18,86/19,12	297
10	3-fluorbenzyl	48,51/48,62	2,37/2,46	18,86/19,05	297
11	4-fluorbenzyl	48,51/48,33	2,37/2,49	18,86/18,61	297
12	3-chlorbenzyl	45,96/45,83	2,25/2,12	17,87/17,98	312
13	4-chlorbenzyl	45,96/46,29	2,25/2,41	17,87/18,03	312
14	3-brombenzyl	40,26/40,00	1,97/2,06	15,65/15,38	356
15	4-brombenzyl	40,26/40,51	1,97/1,79	15,65/15,83	356

- 10CZ 308800 B6

Syntéza C2,C6-symetrických látek

9-Benzyl-2,6-dichlor-9H-purin (0,485 mmol) byl zahříván 4 h na 165 °C s odpovídajícím cyklickým aminem (7,28 mmol) a Hunigovou bází (422 μΐ, 2,43 mmol). Po ochlazení byla reakční směs naředěna vodou (10 ml) a extrahována chloroformem (4x10 ml). Spojené organické frakce byly promyty solankou (10 ml), vysušeny (Na2SO4) a odpařeny za sníženého tlaku. Surový produkt byl přečištěn na silikagelu pomocí sloupcové chromatografíe s mobilní fází petrolether/ethylacetát 5:1 s následným gradientem ethylacetátu.

Příklad 6 - 9-benzyl-2,6-di(piperidin-l-yl)-9H-purin

Připraven z 9-benzyl-2,6-dichlor-9H-purinu a piperidinu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C22H28N6, výtěžek (%): 70. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 35,30; 99,9. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 377,7 (100, [M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 70,18/69,43; 7,50/7,78; 22,32/21,94. Ή NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,47-1,48 (m, 4H); 1,52-1,53 (m, 6H); 1,62 (s, 2H); 3,66 (s, 4H); 4,07 (bs, 4H); 5,19 (s, 2H); 7,25-7,26 (m, 1H); 7,29-7,32 (m, 4H); 7,85 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 24,3; 24,5; 2χ 25,2; 2χ 25,5; 44,8; 2χ 45,3; 2χ 45,6; 112,8; 127,5; 2χ 127,8; 2χ 128,5; 136,6; 137,5; 152,8; 153,2; 158,0.

Příklad 7 - 9-(3-hydroxybenzyl)-2,6-di(pyrrolidin-l-yl)-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(3-hydroxybenzyl)-9H-purinu a pyrrolidinu. Pevná bílá látka, sumární vzorec: C20H24N6O, výtěžek (%): 72. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 29,03; 98,2. ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 365,7 (100, [M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 65,91/65,67; 6,64/6,42, 23,06/23,28. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 1,84-1,87 (m, 8H); 3,45-3,47 (m, 4H); 3,59 (bs, 2H); 3,95 (bs, 2H); 5,10 (s, 2H); 6,63-6,64 (m, 2H); 6,73 (d, J= 7,3 Hz, 1H); 7,09 (t, J= 7,8 Hz, 1H); 7,74 (s, 1H); 9,40 (s, 1H).¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 23,6; 2χ 25,1; 25,7; 45,3; 3χ 46,3; 48,0; 113,1; 114,3; 114,4; 118,1; 129,5; 136,6; 139,1; 152,3; 152,5; 157,3; 157,4.

Příklad 8 - 9-(2-methoxybenzyl)-2,6-dimorfolino-9H-purin

Připraven z 2,6-dichlor-9-(2-methoxybenzyl)-9H-purinu a morfolinu. Bílá pevná látka, sumární vzorec: C21H26N6O3, výtěžek (%): 88. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 27,90; 99,9. ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 411,8 (100, [M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 61,45/61,39; 6,38/6,11; 20,47/20,59. Ή-ΝΜΒ(500 MHz, DMSCM,) δ (ppm): 3,60 (bs, 8H); 3,66 (bs, 4H); 3,82 (s, 3H); 4,10 (bs, 4H); 5,15 (s, 2H); 6,86 (t, J= 7,2 Hz, 1H); 6,99-7,02 (m, 2H); 7,26 (t, J= 7,3 Hz, 1H); 7,80 (s, 1H).¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 41,3; 2χ 44,6; 2χ 45,0; 55,4; 2χ 66,0; 2χ 66,2; 110,8; 113,3; 120,2; 124,5; 129,1; 129,3; 137,9; 152,9; 153,2; 156,7; 158,0.

Příklad 9 - 9-(2-brombenzyl)-2,6-dithiomorfolino-9H-purin

Připraven z 9-(2-brombenzyl)-2,6-dichlor-9H-purinu a thiomorfolinu. Nažloutlá pevná látka, sumární vzorec: C2oH23BrNeS2, výtěžek (%): 65. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 35,67; 99,9. ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 491,9 (87, [⁷⁹Br-M+H]⁺); 493,9 (100, [⁸¹Br-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 48,88/48,85; 4,72/4,77; 17,10/17,15. Ή-ΝΜΒ(500 MHz, DMSOd6) δ (ppm): 2,49-2,51 (m, 4H); 2,64-2,66 (m, 4H); 3,95-3,97 (m, 4H); 4,39 (bs, 4H); 5,29 (s, 2H); 7,15 (dd, J= 7,6; 1,2 Hz, 1H); 7,24 (td, J= 7,6; 1,4 Hz, 1H); 7,33 (t, J= 7,2 Hz, 1H); 7,64 (d, J= 7,0 Hz, 1H); 7,92 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 2χ 25,5; 2χ 26,2; 46,3; 3χ 46,6; 47,3; 112,9; 122,6; 127,9; 129,8; 130,3; 132,7; 135,6; 137,7; 153,0; 153,1; 157,2.

- 11 CZ 308800 B6

Příklad 10 - 9-(2,6-dichlorbenzyl)-2,6-di(pyrrolidin-1 -yl)-9H-purin

Připraven z 9-(2,6-dichlorbenzyl)-2,6-dichlor-9H-purinu a pyrrolidinu. Bílá pevná látka, sumární 5 vzorec: C20H22CI2N6, výtěžek (%): 46. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 35,37; 99,9.

ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 417,8 (99, [³⁵C1-M+H]⁺); 419,8 (100, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 57,56/57,58; 5,31/5,33; 20,14/20,10. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 1,81-1,87 (m, 8H); 3,36-3,38 (m, 4H); 3,55 (bs, 2H); 3,91 (bs, 2H); 5,38 (s, 2H); 7,38 (dd, J= 8,6; 7,6 Hz, 1H); 7,49 (d, J= 7,9 Hz, 2H); 7,54 (s, 1H).

¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-r/e) δ (ppm): 23,6; 2x 25,0; 25,7; 42,4; 3x 46,2; 48,0; 112,9;2x 128,7; 130,8; 131,1; 136,0; 2x 136,5; 152,3; 152,4; 157,0.

Tabulka 2. Příklady připravených C2,C6-symetrických 9-benzyl-9H-purinových derivátů

SUBSTITUENT NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS ANALÝZA
Látka	C2+C6	N9	[%C, %H, %N] [kalk./anal.]	[M+H]⁺
1	azetidin-l-yl	benzyl	67,48/67,23; 6,29/6,42; 26,23/26,30	321
2	pyrrolidin-l-yl	benzyl	68,94/68,87; 6,94/6,63; 24,12/24,48	349
3	azepan-l-yl	benzyl	71,25/71,15; 7,97/8,02; 20,77/20,79	405
4	morfblino	benzyl	63,14/63,32; 6,36/6,15; 22,09/22,19	381
5	thiomorfblino	benzyl	58,22/57,84; 5,86/5,59; 20,37/20,25	413
6	piperazin-l-yl	benzyl	63,47/63,58; 6,92/6,86; 29,61/29,50	379
7	4methylpiperazin1-yl	benzyl	65,00/64,63; 7,44/7,29; 27,56/28,01	407
8	piperazin-l-yl	2methylbenzyl	64,26/63,98; 7,19/7,36; 28,55/28,73	393
9	pyrrolidin-l-yl	2methylbenzyl	69,58/69,35; 7,23/7,11; 23,19/23,51	363
10	azetidin-l-yl	2methylbenzyl	68,24/68,49; 6,63/6,82; 25,13/24,69	335
11	thiomorfblino	2methylbenzyl	59,12/58,87; 6,14/6,45; 19,70/19,32	427
12	piperidin-l-yl	2methylbenzyl	70,74/71,02; 7,74/7,76; 21,52/21,16	391
13	morfblino	3methylbenzyl	63,94/63,66; 6,64/6,61; 21,30/21,69	395
14	piperazin-l-yl	3methylbenzyl	64,26/64,25; 7,19/7,25; 28,55/28,48	393
15	pyrrolidin-l-yl	3methylbenzyl	69,58/69,64; 7,23/7,28; 23,19/23,28	363
16	azepan-l-yl	3methylbenzyl	71,74/71,75; 8,19/8,26; 20,08/19,96	419
17	piperidin-l-yl	4methylbenzyl	70,74/70,60; 7,74/7,81; 21,52/21,61	391

- 12CZ 308800 B6

18	azetidin-l-yl	4methylbenzyl	68,24/68,15; 6,63/6,54; 25,13/25,31	335
19	morfolino	4methylbenzyl	63,94/63,98; 6,64/6,87; 21,30/21,06	395
20	pyrrolidin-l-yl	4methylbenzyl	69,58/69,89; 7,23/7,17; 23,19/22,97	363
21	morfolino	2hydroxybenzyl	60,59/60,46; 6,10/6,18; 21,20/21,49	397
22	piperidin-1-yl	2hydroxybenzyl	67,32/67,46; 7,19/7,01; 21,41/21,69	393
23	pyrrolidin-l-yl	2hydroxybenzyl	65,91/65,73; 6,64/6,89; 23,06/22,77	365
24	piperazin-1-yl	2hydroxybenzyl	60,89/60,77; 6,64/6,36; 28,41/28,22	395
25	azetidin-l-yl	3hydroxybenzyl	64,27/64,43; 5,99/6,06; 24,98/24,86	337
26	pyrrolidin-l-yl	3hydroxybenzyl	65,91/65,83; 6,64/6,48; 23,06/23,28	365
27	4methylpiperazin1-yl	3hydroxybenzyl	62,54/62,81; 7,16/7,26; 26,52/26,48	423
28	thiomorfblino	3hydroxybenzyl	56,05/56,00; 5,64/5,61; 19,61/19,83	429
29	piperidin-1-yl	3hydroxybenzyl	67,32/67,17; 7,19/7,35; 21,41/21,68	393
30	pyrrolidin-l-yl	4hydroxybenzyl	65,91/66,18; 6,64/6,68; 23,06/23,15	365
31	morfolino	4hydroxybenzyl	60,59/60,41; 6,10/6,15; 21,20/21,28	397
32	azetidin-l-yl	4hydroxybenzyl	64,27/64,33; 5,99/6,13; 24,98/24,68	337
33	azepan-l-yl	4hydroxybenzyl	68,54/68,93; 7,67/7,49; 19,98/20,21	421
34	piperazin-1-yl	4hydroxybenzyl	60,89/61,15; 6,64/6,55; 28,41/28,11	395
35	pyrrolidin-l-yl	2methoxybenzyl	66,64/66,82; 6,92/6,84; 22,21/22,08	379
36	azetidin-l-yl	2methoxybenzyl	65,12/65,34; 6,33/6,47; 23,98/22,76	351
37	4methylpiperazin1-yl	2methoxybenzyl	63,28/63,35; 7,39/7,65; 25,67/25,20	437
38	thiomorfblino	3methoxybenzyl	56,99/56,77; 5,92/6,14; 18,99/19,26	443
39	piperidin-1-yl	3methoxybenzyl	67,95/67,61; 7,44/7,35; 20,67/20,83	407
40	azepan-l-yl	3methoxybenzyl	69,09/69,42; 7,89/7,63; 19,34/19,65	435
41	piperazin-1-yl	3methoxybenzyl	61,74/61,63; 6,91/7,15; 27,43/27,37	409
42	pyrrolidin-l-yl	3methoxybenzyl	66,64/66,32; 6,92/7,23; 22,21/22,56	379
43	morfolino	4methoxybenzyl	61,45/61,24; 6,38/6,63; 20,47/20,29	411

- 13 CZ 308800 B6

44	piperidin-l-yl	4methoxybenzyl	67,95/68,13; 7,44/7,16; 20,67/20,81	407
45	azetidin-l-yl	4methoxybenzyl	65,12/65,03; 6,33/6,28; 23,98/23,81	351
46	pyrrolidin-l-yl	4methoxybenzyl	66,64/66,56; 6,92/7,01; 22,21/22,13	379
47	piperazin-l-yl	2-fluorbenzyl	60,59/60,38; 6,36/6,49; 28,26/28,56	396
48	azetidin-l-yl	2-fluorbenzyl	63,89/63,61; 5,66/5,72; 24,84/24,91	338
49	morfblino	2-fluorbenzyl	60,29/60,35; 5,82/5,68; 21,09/21,22	398
50	pyrrolidin-l-yl	3-fluorbenzyl	65,55/65,60; 6,33/6,40; 22,93/23,01	366
51	azepan-l-yl	3-fluorbenzyl	68,22/68,00; 7,93/8,15; 19,89/20,13	422
52	piperazin-l-yl	4-fluorbenzyl	60,59/60,68; 6,36/6,21; 28,26/28,39	396
53	thiomorfolino	4-fluorbenzyl	55,79/55,77; 5,38/5,36; 19,52/19,55	430
54	piperidin-l-yl	4-fluorbenzyl	66,98/66,71; 6,90/6,82; 21,30/21,44	394
55	4methylpiperazin1-yl	4-fluorbenzyl	62,24/62,38; 6,89/7,21; 26,40/26,22	424
56	piperidin-l-yl	2-chlorbenzyl	64,30/64,61; 6,62/6,35; 20,45/20,34	411
57	morfblino	2-chlorbenzyl	57,90/57,96; 5,59/5,70; 20,26/20,44	415
58	piperazin-l-yl	2-chlorbenzyl	58,17/58,15; 6,10/6,10; 27,14/27,18	413
59	4methylpiperazin1-yl	2-chlorbenzyl	59,92/60,05; 6,63/6,78; 25,41/25,39	441
60	azetidin-l-yl	3-chlorbenzyl	60,93/60,85; 5,40/5,27; 23,68/23,84	354
61	pyrrolidin-l-yl	3-chlorbenzyl	62,74/62,57; 6,05/5,87; 21,95/22,09	382
62	azepan-l-yl	4-chlorbenzyl	65,66/65,48; 7,12/6,98; 19,14/19,05	438
63	thiomorfolino	4-chlorbenzyl	53,74/53,86; 5,19/5,01; 18,80/18,99	447
64	piperazin-l-yl	4-chlorbenzyl	58,17/58,15; 6,10/6,10; 27,14/27,18	413
65	azepan-l-yl	2-brombenzyl	59,63/59,75; 6,46/6,51; 17,38/17,46	483
66	piperidin-l-yl	2-brombenzyl	58,02/57,98; 5,98/6,21; 18,45/18,65	455
67	4methylpiperazin1-yl	2-brombenzyl	54,43/54,52; 6,02/6,14; 23,08/22,76	485
68	pyrrolidin-l-yl	3-brombenzyl	56,21/56,22; 5,42/5,40; 19,67/19,78	427

- 14CZ 308800 B6

69	thiomorfolino	3-brombenzyl	48,88/45,01; 4,72/4,51; 17,10/16,83	491
70	azepan-1-yl	4-brombenzyl	59,63/59,77; 6,46/6,53; 17,38/17,41	483
71	morfolino	4-brombenzyl	52,30/52,49; 5,05/4,81; 18,30/18,56	459
72	piperidin-1-yl	4-brombenzyl	58,02/58,20; 5,98/6,13; 18,45/18,21	455
73	azetidin-l-yl	2,6dichlorbenzyl	55,54/55,68; 4,66/4,71; 21,59/21,36	389
74	pyrrolidin-l-yl	2,6dichlorbenzyl	57,56/57,48; 5,31/5,33; 20,14/19,87	418
75	piperazin-1-yl	2,6dichlorbenzyl	53,70/53,61; 5,41/5,38; 25,05/25,17	447
76	morfolino	2,6dichlorbenzyl	53,46/53,56; 4,94/5,06; 18,70/18,92	449

Syntéza C2,C6-asymetrických látek:

A) Nukleofilní substituce na purinu v pozici C6

Suspenze 9-benzyl-2,6-dichlor-9H-purinu (0,717 mmol), cyklického aminu (0.860 mmol) a triethylaminu (250 μΐ, 1,793 mmol) byla 4 h refluxována v w-propanolu (7,17 ml). Následně byla reakční směs odpařena za sníženého tlaku. Odparek byl rozředěn vodou (15 ml) a extrahován ethylacetátem (5x 10 ml). Spojené organické frakce byly promyty solankou (15 ml), vysušeny (Na2SO4) a odpařeny za sníženého tlaku. Surový produkt byl přečištěn na silikagelu pomocí sloupcové chromatografie s mobilní fází petrolether/ethylacetát 8:1 s gradientem ethylacetátu.

Příklad 11- 9-benzyl-2-chlor-6-(piperidin-l-yl)-9H-purin

Bezbarvý olej, sumární vzorec: CnHisQNs, výtěžek (%): 98. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 29,65; 99,4. ESI⁺-MS m/z (rel. int. %, ion): 328,6 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 330,6 (52, [³⁷C1M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 62,29/61,92; 5,53/5,73; 21,36/20,97. Ή-NMR (500 MHz, DMSCM,) δ (ppm): 1,55 (s, 4H); 1,61-1,64 (m, 2H); 3,83 (s, 2H); 4,43 (bs, 2H); 5,33 (s, 2H); 7,25-7,34 (m, 5H); 8,26 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 24,0; 2χ 25,6; 44,5; 46,2; 46,8; 117,8; 2χ 127,3; 127,8; 2χ 128,7; 136,6; 140,1; 151,5; 152,8; 153,2.

Β) Nukleofilní substituce na purinu v pozici C2

9-Benzyl-2-chlor-6-substituovaný-9H-purin (0,342 mmol) byl zahříván na 165 °C s cyklickým aminem (5,13 mmol) a Hunigovou bází (296 μΐ, 1,71 mmol) po dobu 4 h. Po ochlazení byla směs naředěna vodou (10 ml) a extrahována chloroformem (5x 10 ml). Spojené organické frakce byly promyty solankou (10 ml), vysušeny (Na2SO4) a opařeny za sníženého tlaku. Surový produkt byl přečištěn na silikagelu pomocí sloupcové chromatografie s mobilní fází petrolether/ethylacetát 10:1 s gradientem ethylacetátu.

Příklad 12 - 9-benzyl-2-(piperidin-l-yl)-6-(pyrrolidin-l-yl)-9H-purin

Bílá pevná látka, sumární vzorec: C21H26N6, výtěžek (%): 68. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 33,38; 99,9. ESU-MS m/z (rel. int. %, ion): 363,7 (100, [M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 69,58/69,42; 7,23/7,15; 23,19/23,41. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ (ppm): 1,441,49 (m, 4H); 1,54-1,57 (m, 2H); 1,89 (bs, 4H); 3,54 (bs, 2H); 3,67-3,69 (m, 4H); 3,95 (bs, 2H); 5,19 (s, 2H); 7,27-7,23 (m, 1H); 7,31 (d, J = 4,3 Hz, 4H); 7,81 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-de) δ (ppm): 23.6; 24.5; 2χ 25.2; 25.9; 2χ 44.8; 45.5; 46.5; 48.0; 113.2; 127.5; 2χ 127.7; 2χ 128.5; 137.1; 137.6; 152.2; 152.5; 158.3.

- 15 CZ 308800 B6

Příklad 13 - 9-benzyl-6-(piperidm-l-yl)-2-(pyrrolidin-l-yl)-9H-purin

Bílá pevná látka, sumární vzorec: C21H26N6, výtěžek (%): 74. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 33,53; 99,9. EST-MS m/z (rel. int. %, ion): 363,7 (100, [M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 69,58/69,49; 7,23/7,51; 23,19/23,02. Ή-NMR (500 MHz, DMSO-í/₆) δ (ppm): 1,491,54 (m, 4H); 1,60-1,62 (m, 2H); 1,85-1,87 (m, 4H); 3,44 (t, J= 6,6 Hz, 4H); 4,09 (bs, 3H); 5,18 (s, 2H); 7,23-7,27 (m, 1H); 7,30-7,33 (m, 2H); 7,34-7,35 (m, 2H); 7,82 (s, 1H).¹³C-NMR (125 MHz, DMSO-r/e) δ (ppm): 24,4; 2χ 25,0; 2χ 25,6; 2χ 45,3; 45,6; 2χ 46,3; 112,7; 127,5; 2χ 127,8; 2χ 128,5; 136,0; 137,5; 152,9; 153,1; 156,9.

Příklad 14 - 9-(2,6-dichlorbenzyl)-2-morfolmo-6-(pyrrolidin-l-yl)-9H-purin

Bílá pevná látka, sumární vzorec: C20H22CI2N6O, výtěžek (%): 62. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 31,17; 98,1. ESU-MS Wz(rel. int. %, ion): 433,7 (98, [³⁵C1-M+H]⁺); 435,7 (100, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 55,43/55,59; 5,12/5,26; 19,39/19,66. Ή-NMR (500 MHz,) δ (ppm): 1,96 (bs, 4H); 3,68 (bs, 2H); 3,76-3,80 (m, 8H); 4,07 (bs, 2H); 5,48 (s, 2H); 7,24 (t, J= 8,1 Hz, 1H); 7,35-7,37 (m, 3H). ¹³C-NMR (125 MHz, CDC1₃) δ (ppm): 24,0; 26,3; 42,4; 2χ 45,1; 47,1; 48,3; 2χ 67,0; 113,7; 2χ 128,6; 130,3; 131,2; 135,9; 2χ 136,7; 152,2; 152,7; 158,8.

Příklad 15 - 9-(2,6-dichlorbenzyl)-6-morfolmo-2-thiomorfolino-9H-purin

Bílá pevná látka, sumární vzorec: C20H22CI2N6OS, výtěžek (%): 58. HPLC-UV/VIS retenční čas, čistota (min.; %): 32,77; 99,8. ESL-MS m/z (rel. int. %, ion): 465,8 (100, [³⁵C1-M+H]⁺); 467,8 (85, [³⁷C1-M+H]⁺). EA (%C, %H, %N, kalk./anal.): 51,61/51,75; 4,76/4,82; 18,06/18,21. Ή-NMR (500 MHz, CDCk) δ (ppm): 2,59-2,61 (m, 4H); 3,79-3,81 (m, 4H); 4,11-4,13 (m, 4H); 4,17 (bs, 4H); 5,48 (s, 2H); 7,25 (dd, J= 8,6; 7,3 Hz, 1H); 7,36 (d, J= 7,9 Hz, 2H); 7,40 (s, 1H). ¹³C-NMR (125 MHz, CDCk) δ (ppm): 2χ 26,5; 42,6; 2χ 45,2; 2χ 47,1; 2χ 66,9; 113,4; 2χ 128,6; 130,3; 131,0; 136,0; 2χ 136,7; 153,2; 153,8; 157,5.

Tabulka 2. Příklady připravených C2,C6-asymetrických 9-benzyl-9H-purinových derivátů

SUBSTITUENT NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS ANALÝZ A
Látk a	C2	C6	N9	[%C, %H, %N] [kalk./anal.]	[M+H]⁺
77	piperidin-l-yl	pyrrolidin-1yi	benzyl	69,58/69,52; 7,23/7,27; 23,19/23,22	363
78	pyrrolidin-lyi	piperidin-lyl	benzyl	69,58/69,63; 7,23/7,21; 23,19/23,16	363
79	morfolino	piperidin-lyl	benzyl	66,64/66,84; 6,92/6,81; 22,21/22,40	379
80	piperidin-l-yl	morfolino	benzyl	66,64/66,81; 6,92/7,25; 22,21/22,09	379
81	pyrrolidin-lyi	morfolino	benzyl	65,91/65,87; 6,64/6,98; 23,06/22,86	365
82	piperazin-1yi	azetidin-l-yl	2methylbenzyl	66,09/65,84; 6,93/7,13; 26,98/27,04	363
83	morfolino	pyrrolidin-1yi	2methylbenzyl	66,64/66,48; 6,92/7,09; 22,21/22,51	378
84	piperidin-l-yl	4methylpipera zi n-l-yl	3methylbenzyl	68,12/68,03; 7,70/7,81; 24,18/24,16	405

- 16CZ 308800 B6

85	azepan-l-yl	pyrrolidin-1yi	3methylbenzyl	70,74/70,68; 7,74/7,92; 21,52/21,41	390
86	piperazin-1yi	thiomorfolin 0	4methylbenzyl	61,59/61,74; 6,64/6,49; 23,94/24,06	409
87	azetidin-l-yl	piperidin-1yi	4methylbenzyl	69,58/69,35; 7,23/7,44; 23,19/23,21	362
88	morfolino	4methylpipera zi n-l-yl	2hydroxybenzyl	61,60/61,72; 6,65/6,36; 23,94/24,12	409
89	azetidin-l-yl	pyrrolidin-1yi	2hydroxybenzyl	65,12/65,00; 6,33/6,17; 23,98/24,28	350
90	4methylpipera zin-1-yl	piperidin-1yi	3hydroxybenzyl	64,84/64,59; 7,17/7,36; 24,06/23,81	407
91	azepan-l-yl	azetidin-l-yl	3hydroxybenzyl	66,64/66,27; 6,92/7,09; 22,21/22,48	378
92	piperazin-1yi	morfolino	3hydroxybenzyl	60,74/60,61; 6,37/6,45; 24,79/24,54	395
93	pyrrolidin-lyi	azepan-l-yl	4hydroxybenzyl	67,32/67,41; 7,19/7,26; 21,41/21,38	392
94	thiomorfolino	piperazin-1yi	4hydroxybenzyl	58,37/58,42; 6,12/5,97; 23,83/24,00	411
95	piperidin-1-yl	4methylpipera zi n-l-yl	2methoxybenzy 1	65,53/65,27; 7,41/7,35; 23,26/23,59	421
96	azetidin-l-yl	thiomorfolin 0	2methoxybenzy 1	60,58/50,73; 6,10/6,04; 21,20/21,39	396
97	morfolino	pyrrolidin-1yi	2methoxybenzy 1	63,94/64,06; 6,64/6,78; 21,30/21,42	394
98	4methylpipera zin-1-yl	azepan-l-yl	3methoxybenzy 1	66,18/65,81; 7,64/7,49; 22,51/22,36	435
99	pyrrolidin-lyi	piperidin-1yi	3methoxybenzy 1	67,32/67,41; 7,19/7,02; 21,41/21,56	392
100	piperazin-1yi	4methylpipera zin-1-yl	4methoxybenzy 1	62,54/62,67; 7,16/7,28; 26,52/26,34	422
101	thiomorfolino	azetidin-l-yl	4methoxybenzy 1	60,58/60,64; 6,10/6,22; 21,20/21,09	396
102	azepan-l-yl	pyrrolidin-1yi	2-chlorbenzyl	64,30/64,32; 6,62/6,70; 20,45/20,34	410
103	4methylpipera zin-1-yl	thiomorfolin 0	2-chlorbenzyl	56,81/57,21; 5,90/5,63; 22,08/22,17	443
104	azetidin-l-yl	piperazin-1yi	3-chlorbenzyl	59,45/59,32; 5,78/5,91; 25,54/25,49	383
105	pyrrolidin-lyi	piperidin-1yi	4-chlorbenzyl	63,55/63,36; 6,35/6,52; 21,17/21,19	396
106	morfolino	azepan-l-yl	4-chlorbenzyl	61,89/62,16; 6,37/6,03; 19,68/19,91	426

- 17CZ 308800 B6

107	thiomorfblino	4methylpipera zin-l-yl	4-chlorbenzyl	56,81/56,92; 5,90/6,00; 22,08/22,28	443
108	piperidin-l-yl	morfolino	2-brombenzyl	55,15/5,18; 5,51/5,49; 18,37/18,42	457
109	piperazin-1yi	azepan-l-yl	3-brombenzyl	56,17/56,28; 6,00/5,84; 20,84/20,96	470
110	4methylpipera zin-l-yl	pyrrolidin-lyl	3-brombenzyl	55,27/55,36; 5,74/5,37; 21,48/21,55	456
111	morfolino	azetidin-l-yl	3-brombenzyl	53,16/53,00; 4,93/5,13; 19,58/19,61	429
112	piperidin-l-yl	4methylpipera zin-l-yl	4-brombenzyl	56,17/56,29; 6,00/6,35; 20,84/20,71	470
113	azepan-l-yl	piperidin-lyl	4-brombenzyl	58,85/59,07; 6,23/6,03; 17,90/17,69	469
114	piperazin-1yi	azetidin-l-yl	2-fluorbenzyl	53,28/53,29; 5,18/5,23; 22,89/22,91	428
115	azetidin-l-yl	morfolino	3-fluorbenzyl	61,94/62,06; 5,75/5,68; 22,81/22,73	368
116	4methylpipera zin-l-yl	azepan-l-yl	4-fluorbenzyl	65,22/65,06; 7,14/7,11; 23,15/23,31	423
117	piperidin-l-yl	pyrrolidin-lyl	4-fluorbenzyl	66,29/66,45; 6,62/6,45; 22,09/22,18	380
118	pyrrolidin-lyl	4methylpipera zin-l-yl	2,6dichlorbenzyl	56,50/56,62; 5,65/5,41; 21,97/22,19	446
119	thiomorfblino	piperazin-1yi	2,6dichlorbenzyl	51,72/51,39; 4,99/5,11; 21,11/22,38	464
120	azetidin-l-yl	pyrrolidin-lyl	2,6dichlorbenzyl	56,58/56,52; 5,00/5,07; 20,84/20,79	403

Příklad 16 - -Testy viability na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (diferenciovaný fenotyp)

Lidská neuroblastomová linie SH-SY5Y (ATCC® CRL-2266), získána jako dar od Waltera d’Acunto (původně zakoupena z ATCC - American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA), byla kultivována v Eaglově médiu modifikovaném podle Dulbecca a Hamově F12 Nutrient mixu (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium a Ham's F12 Nutrient Mixture (DMEM:F-12, 1:1) s 10% fetálním bovinním sérem (FBS) a 1% penicilin/streptomycin mixem v inkubátoru při 37 °C v 5% CO2, 95% vzduchu a humifikované atmosféře. Limit pasážování byl do ATCC+15. Test byl zahájen buněčnou násadou na 96-jamkové desky (7000 buňkami SH-SY5Y na jamku). Další den, SH-SY5Y buňky podstoupily diferenciační proceduru pomocí all-trans retinové kyseliny (ATRA) po dobu 48 h (ATRA 10 μΜ). Po 48 hodinách bylo staré DMEM/F12 médium vyměněno čerstvým médiem obsahujícím testované látky v koncentracích 0,1, 1 a 10 pM po dobu 24 h. Testované látky byly rozpuštěny v DMSO a přidány do média. Maximální koncentrace DMSO v médiu byla udržována pod 0,1 % (v/v). Viabilita byla měřena pomocí Calcein AM (1 mg/ml, ThermoFisher) viabilitního testu. Roztok Calcein AM v PBS (0,5 pM) byl napipetován k buňkám a inkubován po dobu 50 min. Poté byla měřena fluorescence při 488/517 nm (excitace/emise) pomocí mikrodestičkového readeru Infinite M200 (TECAN). Calcein AM viabilitní test je založen na štěpení nefluore skují čího barviva (Calcein-AM) pomocí intracelulámích esteras živých buněk na fluoreskující barvivo (Calcein), zatímco umírající buňky tuto schopnost ztrácí. Hodnoty v tabulce 4 vyjadřují % viability všech testovaných látek vztažené ke kontrole. Kontrola (médium s DMSO,

- 18 CZ 308800 B6 < 0,1 % (v/v)) byla stanovena jako 100 % viability (viz první řádek tabulky). Jak je uvedeno v tabulce 4, všechny deriváty prokázaly silný stimulační efekt na neuronálních SH-SY5Y buňkách.

Tabulka 4. Vliv nových derivátů na viabilitu lidské neuroblastomové linie SH-SY5Y (diferenciovaný fenotyp)

DMSO	průměr	100,00	±SEM	0,84
Látka	0,1 μΜ	±SEM	1 μΜ	±SEM	10 μΜ	±SEM
1	104,80	2,09	114,03	4,68	145,94	3,04
4	106,29	2,13	112,63	3,49	146,44	7,06
5	105,87	1,76	125,72	2,53	128,71	5,16
26	108,14	6,34	119,64	5,70	142,50	4,46
30	99,49	3,12	110,63	3,24	122,84	2,87
35	104,22	1,86	118,77	2,36	135,02	5,53
42	112,01	3,06	127,94	3,61	138,52	2,95
74	111,48	3,05	138,17	2,85	151,69	2,93
77	107,19	4,63	118,15	3,90	116,98	3,96
78	105,72	2,48	120,35	5,02	134,18	2,62

Příklad 17 - Viabilitní test na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (diferenciovaný fenotyp) Salsolinolem indukovaný model Parkinsonovy choroby (PD)

Podobně jako v předchozím testu byly použity 96-jamkové desky se 7000 buňkami SH-SY5Y na jamku. Den po násadě buněk SH-SY5Y podstoupily buňky diferenciační proceduru pomocí alltrans retinové kyseliny (ATRA) po dobu 48 h. (ATRA 10 μΜ). Po 48 hodinách bylo staré DMEM/F12 vyměněno čerstvým médiem obsahujícím samotný 500μΜ dopaminergní neurotoxin Salsolinol (SAL) nebo testované látky v koncentracích 0,1, 1 a 10 μΜ na dobu 24 h. Deferoxamin (DFO), Donepezil (DON) aZM241385 (ZM) byly použityjako pozitivní kontroly apro stratifikaci aktivit testovaných látek. Po 24 h. byla měřena buněčná viabilita pomocí Calcein AM viabilitního testu viz výše. Salsolinol indukoval výrazné snížení viability činící 30,7 %. Všechny testované látky prokázaly silný protektivní účinek, a dokonce vyšší účinek než standardní léčiva jako jsou DFO, ZM a DON. Látky 30 a 1 prokázaly nej vyšší protektivní účinek (26,41 % a 26,08 %), vyšší než pozitivní kontroly v koncentraci 10 μΜ. Látka 74 překvapivě projevila silnou neuroprotekci od koncentrace 1 μΜ po 10 μΜ (20,24 % a 22,35 %). Celkově všechny látky prokázaly značnou účinnost a vyšší neuroprotektivní efekt při 10 μΜ než pozitivní kontroly DFO, ZM a DON viz obrázek 1 a tabulka 5.

Tabulka 5. Neuroprotektivní účinky nových C2,C6-disubstituovaných-9-benzyl-9H-purinových derivátů na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y (diferenciovaný fenotyp)

Látka	Neuroprotektivní účinek (% kontroly)	p-hodnota
0,1 μΜ	1 μΜ	10 μΜ
ZM241385 (ZM)	1,95	7,03	9,31	>0,001
Deferoxamin (DFO)	1,43	4,86	10,52	>0,001
Donepezil (DON)	2,76	6,73	14,25	>0,001
1	N/A	3,03	26,08	>0,001
4	1,70	8,11	21,12	>0,001
5	7,03	18,72	19,89	>0,001
26	4,90	14,43	20,71	>0,001
30	10,62	16,04	26,41	>0,001
35	1,19	13,01	19,11	>0,001

- 19CZ 308800 B6

42	6,86	15,44	20,05	>0,001
74	8,57	20,24	22,35	>0,001
77	4,64	12,11	13,8	>0,001
78	N/A	17,95	N/A	>0,001

N/A - netestováno

Příklad 18 - -Měření oxidativního stresu na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y - Salsolinolem indukovaný model PD

Testování bylo provedeno v 96-jamkové desce s 7000 buňkami na jamku. Další den po násadě buněk SH-SY5Y podstoupily buňky diferenciační proceduru po 48 h stejně jako v předchozích příkladech. Testovací procedura zůstala stejná jako v předchozím případu (Viabilitní test Salsolinolem indukovaný model PD). Dále byly použity induktory oxidativního stresu (OS), 6hydroxydopamin (6-OHDA) a glutamát (Glu), jako negativní kontroly. Negativní kontroly určily práh excesivního OS. Po 6 h inkubaci buněk s médiem obsahujícím: toxin samotný (SAL 500 μΜ), kombinaci toxinu a testovaných látek (SAL 500 μΜ atestované látky v aktivních koncentracích: 1 a 10 μΜ), DMSO kontrolu nebo negativní kontroly, bylo médium vyměněno za PBS roztok s 10μΜ dihydroethidiem (DHE), a poté třepáno po dobu 30 min. Po 30 minutách bylo DHE měřeno při 500 nm/580 nm (excitace/emise). DHE je permeabilní barvivo, které je selektivní pro detekci superoxidového radikálu. Kontrola (médium s DMSO, 0,1% (v/v)) byla stanovena jako 100 % OS, zatímco u Salsolinolu (toxin) se OS zvýšil třikrát, na 335 %. Látky prokázaly OS-snižující aktivity. Ze všech derivátů prokázaly nejvyšší účinnost látky 30, 77 a 5 ve snížení oxidativního stresu (OS) indukovaného Salsolinolem. Celkově nejlepší látky 30 a 5 prokázaly mírně lepší nebo stejnou OS redukční aktivitu jako nejlepší pozitivní kontrola Donepezil, ale jejich celkový neuroprotektivní účinek překonal Donepezil i při koncentraci 1 μΜ. Posun terapeutického okna (neuroprotektivní aktivita a redukce ROS) na nižší koncentrace, např. látek 30 a 5 proti Donepezilu jsou výhodné pro navrhování nového potenciálního léčiva.

Tabulka 6. Oxidativní stres indukovaný endogenním neurotoxinem Salsolinolem a ROS redukční aktivita nových C2,C6-disubstituovaných-9-benzyl-9H-purinových derivátů při testování na lidské neuroblastomové linii SH-SY5Y.

-20CZ 308800 B6

Látka	Oxidativní stres (% kontroly)
průměr	SEM±
DMSO kontrola	99,60	2,08
Salsolinol 500 μΜ	335,36	21,61
6-OHDA 30 μΜ^Δ	215,43	21,97
Glu 160 mM^A	268,62	19,07
Positivní kontrola	10 μΜ	SEM±
ZM241385 (ZM)	102,30	12,47
Deferoxamin (DFO)	100,95	6,83
Donepezil (DON)	120,10	11,71
Látky	1 μΜ	SEM±	10 μΜ	SEM ±
i*	124,48	9,55	157,22	5,21
4*	105,57	7,17	155,38	22,62
5*	121,19	6,18	135,37	10,80
26*	107,47	8,56	142,22	17,81
30*	95,86	7,53	97,44	5,50
35*	161,97	24,87	214.57	42,74
42*	171,55	29,23	173,94	23,60
74*	125,98	10,74	178,95	20,35
77*	118,21	10,14	126,84	8,33
78*	135,70	9,58	238.45	20,11

* Průměr (n=9), Δ - -negativní kontrola

Příklad 19 - Schopnost vychytávat radikály stanovená pomocí ORAC

Schopnost látek vychytávat volné radikály in vitro byla stanovena pomocí metody ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity). Fluorescein (100 μΐ, 500 mM) a 25 μΐ testované látky byly přidány do každé jamky na 96-jamkové mikrotitrační desce předehřáté na 37 °C. Následně bylo rychle přidáno 25 μΐ 250mM 2,2’-azobis(2-amidino-propan)dihydrochloridu (AAPH), deska byla ίο protřepána 5 s a poté byla měřena fluorescence (Ex. 485 nm, Em. 510 nm) každé 3 minuty po dobu minut pomocí fluorescenční čtečky Infinite 200 (TECAN, Switzerland). Veličina NAUČ (Net Area Under Curve) byla použita pro výpočet antioxidační aktivity vztažené na jednotku troloxu (hydrofilní ekvivalent vitamínu E, postulován jako standard). Látky s ORAC hodnotou vyšší než 0 aktivně vychytávají volné radikály.

Látka	ORAC (látka/trolox)
1	0,052 ± 0,002
4	0,007 ± 0,002
5	0,016 ±0,001
26	0,126 ±0,018
30	0,422 ± 0,034
35	0,033 ±0,001
42	0,029 ± 0,002
74	0,029 ± 0,004
77	0,028 ±0,001
78	0,071 ±0,005

* Průměr ± SD (n=3)

-21 CZ 308800 B6

Příklad 20 - -Aktivace transkripčního faktoru Nrf2

Schopnost látek aktivovat Nrf2-dependentní expresi byla stanovena pomocí reportérové buněčné linie EpRE-LUX. Testované látky byly inkubovány s buňkami po dobu 24 h v koncentracích 100, 10, 1 a 0,1 μΜ. Po lyzaci buněk (10 mM Tris, 2 mM DTT) byl přidán pufr obsahující 0,2mM luciferin, což je substrát zahajující luminiscenční reakci. Nárůst luminiscence byl měřen přístrojem Infinite M200 (TECAN). Látky s Nrf2 hodnotou vyšší než 0 jsou aktivátory Nrf2 a budou tedy vhodnými látkami pro léčbu neurodegenerativních onemocnění provázaných s oxidativním stresem.

Látka	Nrf2 (relativní luminiscence)
1	0,27 ± 0,06
4	0,19 ±0,02
5	0,17 ±0,06
26	0,33 ± 0,06
30	0,29 ±0,11
35	0,04 ± 0,00
42	0,07 ± 0,00
74	0,38 ±0,08
77	0,16 ±0,04
78	0,23 ± 0,03

* Průměr ± SD (n=3)

Příklad 21 - Farmaceutické přípravky

Farmaceutické přípravky obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, účinných látek obsahujících C2,C6-disubstituovaný-9-benzyl-9H-purin podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti alespoň jednoho pevného nebo kapalného excipientu, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla. Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje, činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost anebo jiné aktivní složky. Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):

Fl. Smáčivé prášky

Aktivní složka ligninsulfonan sodný laurylsulfát sodný diisobutylnaftalensulfonát sodný oktylfenolpolyglykol ether (7 až 8 mol ethylenoxid) vysoce disperzní kyselina křemičitá kaolin

a) %

4%

2% %

%

b) %

% 6%

0/ /o %

%

c) %

% c 0/

J /0 o/

Z /o %

%

d)

80%

4%

6%

10%

Aktivní složka je důkladně promísena s pomocnými látkami a směs je důkladně rozemleta ve vhodném mlýnu. Suspenzi libovolné koncentrace je možné získat smísením vzniklého prachu s vodou.

F2. Suspenzní koncentrát

Aktivní složka

a) o 0/ /o

b) %

c) %

d)

50%

-22CZ 308800 B6 ethylenglykol nonylfenolpolyglykolether (15 mol ethylenoxid) lignosulfonát sodný karboxymethylcelulóza % vodný roztok formaldehydu emulze silikonového oleje voda

c 0/ J /0	c 0/ J /0 1 o/ 1 /o	c 0/ J /0 2%	c 0/ J /0
o o/ 3 /o	Ώ 0/ 3 /o	4%	c 0/ J /0
1 %	1 %	1 %	1 %
0,2 %	0,2 %	0,2 %	0,2 %
0,8 %	0,8 %	0,8 %	0,8 %
86 %	78 %	64 %	38 %

Jemně rozemletá aktivní složka je smíchána s pomocnými látkami. Vzniklý suspenzní koncentrát umožňuje přípravu suspenze o požadované koncentraci zředěním vodou.

F3: Suché kapsle

5000 tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g C2,C6-disubstituovaného-9-benzyl-9H-purinu, se připraví následujícím způsobem:

Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát horečnatý: 80 g; Laktóza 20 g.

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomoci stroje na plnění tobolek.

F4: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g C2,C6-disubstituovaný-9benzyl-9H-purin jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykollaurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsí je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

F5: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g C2,C6-disubstítuovaného~9benzyl-9H-purinu jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: 250 g účinné složky v 1 1 PEG 400, 1 litr Tween 80.

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylensorbitanmonolaurát, Atlas Chem lne., Inc., USA., dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhliém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 22 - Formulace tablety s řízeným uvolňováním

Jedna tableta obsahuje například 300 až 350 mg C2,C6-disubstituovaného-9-benzyl-9H-purinu jako účinnou látku.

-23 CZ 308800 B6

Pomocná látka se známým účinkem: Jedna tableta obsahuje 150 až 200 mg retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojivá (Prosolv SMCC 90).

Lékovou formou je tableta s řízeným uvolňováním.

Příprava tableto viny: Tablety jsou připraveny přímým lisováním. Nejprve je naváženo vypočtené množství retardující složky (Methocel, Parteck® SRP 80, Kollidon® SR, Kollidon 25, chitosan, alginát), dále lubrikantu (stearát hořečnatý), účinné látky (VH), pojivá (Prosolv SMCC 90). ίο Následně je vzniklá směs homogenizována v homogenizátoru (Retsch MM200 - Retsch GmbH, Haan). Homogenizaci se doporučuje provádět ve třech frekvencích: 10 kmitů/s, 13 a 15 kmitů/s vždy po dobu 1 minuty. Tabletovina je poté převedena do ručního lisu. Tablety jsou lisovány při zatížení 8 kN po dobu 5 minut. Zatížení je zvoleno s ohledem na požadovanou pevnost tablet 0,8 až 0,8 MPa. Hmotnost tablet činí 500 ± 5 mg.

Hydrofilní matricové tablety s hypromelosou

Tablety jsou připraveny metodou přímého lisování dle postupu uvedeného výše.

Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet s hypromelosou v %

Formulace	AI	A2	A3
Prosolv SMCC 90	49	49	49
Methocel K4M	0	30	0
Methocel K15M	30	0	0
Methocel K100M	0	0	30
účinná látka	20	20	20
Stearát hořečnatý	1	1	1

Hydrofilní matricové tablety s retardující složkou Kollidon 25, Kollidon® SR, Parteck® SRP 80

Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet v %:

Formulace	F1	F2	F3	F4	F5
Prosolv® SMCC 90	49	49	49	49	49
Kollidon 25	30	20	10	0	0
Kollidon® SR	0	0	0	30	0
40 Parteck® SRP 80	0	0	0	0	30
účinná látka	20	30	40	20	20
Stearát hořečnatý	1	1	1	1	1

Hydrofilní matricové tablety obsahující LubriTose™ MCC, Methocel K15M nebo Methocel K4M

Hmotnost tablet byla 500 ± 5 mg. Složení hydrofilních tablet v %:

so Formulace	F1	F2
LubriTose™ MCC	50	50
Methocel K15M	30	0
Methocel K4M	0	30
účinná látka	20	20

-24CZ 308800 B6

Claims

1. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu obecného vzorce I,

R¹

J

A «3 »b N

(I), ve kterém

R je vybráno ze skupiny zahrnující H, F, Cl, Br, methyl, OH a methoxy;

2. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu podle nároku 1, nesoucí substituent v poloze 9, tedy substituent -CH2-C6H4R, který je vybraný ze skupiny zahrnující benzyl, 2-fluorbenzyl, 3fluorbenzyl, 4-fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 3-chlorbenzyl, 4-chlorbenzyl, 2,6-dichlorbenzyl, 2brombenzyl, 3-brombenzyl, 4-brombenzyl, 2-methylbenzyl, 3-methylbenzyl, 4-methylbenzyl, 2hydroxybenzyl, 3-hydroxybenzyl, 4-hydroxybenzyl, 2-methoxybenzyl, 3-methoxybenzyl, 4methoxybenzyl.

3. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující 2,6di(azetidin-1 -yl )-9-(3-hydroxybenzyl)-9H-purin, 2,6-di(azetidin-1 -yl )-9-(4-hydroxybenzyl )-9Hpurin, 9-(4-hydroxybenzyl)-2,6-di(pyrrolidin-1 -yl )-9H-purin, 9-benzyl-2-(piperidin-1 -yl)-6(pyrrolidin-1 -yl)-9H-purin, 9-benzyl-6-(piperidin-1 -yl)-2-(pyrrolidin-1 -yl)-9H-purin, 9-benzyl2,6-dithiomorfolino-9H-purin, 9-(4-hydroxybenzyl)-2,6-dithiomorfolino-9H-purin, 2-(azetidin-1 yl )-9-(4-hydroxybenzyl )-6-thiomorfol ino-9H-purin, 9-(4-hydroxybenzyl)-2-(pyrrolidin-1 -yl)-6thiomorfolino-9H-purin, 2,6-di(azepan-1 -yl)-9-(4-hydroxybenzyl)-9H-purin.

4. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, pro použití jako léčiva.

5. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, pro použití pro léčení nebo profýlaxi neurodegenerativních onemocnění.

6. Heterocyklické dusíkaté deriváty purinu obecného vzorce la,

-25 CZ 308800 B6

(la), ve kterém

R je vybráno ze skupiny zahrnující H, F, Cl, Br, methyl, OH a methoxy;

kruh -[N-(CH2)_c-A(Rl)-(CH2)d-] v poloze 2 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolinyl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

kruh -[N-(CH2)_a-A(Rl)-(CH2)b-] v poloze 6 je vybraný ze skupiny zahrnující azetidin-l-yl, pyrrolidin-l-yl, piperidin-l-yl, morfolinyl, thiomorfolinyl, piperazin-l-yl, 4-methylpiperazin-l-yl, azepan-l-yl, azokan-l-yl, l,5-oxazokan-5-yl a l,5-thiazokan-5-yl;

pro použití pro léčení nebo profylaxi neurodegenerativních onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující amyotrofíckou laterální sklerózu, Parkinsonovu chorobu, Alzheimerovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, progresivní supranukleámí paralýzy, kortikobazální degenerace, frontotemporální demence, Lewyho tělní demence, atrofíe mnohočetného systému, chronické traumatické encefalopatie a spinocerebelámí ataxie.

7. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje jeden nebo více heterocyklických dusíkatých derivátů purinu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, a alespoň jeden farmaceuticky akceptovatelný nosič.