CZ2014908A3

CZ2014908A3 - 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích

Info

Publication number: CZ2014908A3
Application number: CZ2014-908A
Authority: CZ
Inventors: Lenka Zahajská; Jaroslav Nisler; Alena Kadlecová; Marek Zatloukal; Jiří Grúz; Jiří Voller; Karel DoleĹľal; Miroslav Strnad
Original assignee: Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i.
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2016-06-22
Also published as: EP3233861B1; US10093675B2; US20170362236A1; CZ306984B6; EP3233861A1; WO2016095880A1

Abstract

Řešení poskytuje 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny vzorce I, které jsou použitelné pro přípravu léčebných a kosmetických přípravků a kompozic. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle tohoto vynálezu vykazují řadu biologických aktivit, zejména antioxidační, antiinflamatorní a antisenescenční, ale i další aktivity použitelné v kosmetických a farmaceutických aplikacích. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny obecného vzorce I vykazují dále účinky růstově-regulační, diferenciační, proliferační a proti stárnutí na úrovni buněk, tkání i celých rostlinných, savčích i lidských organizmů.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů, jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích a přípravků obsahujících tyto deriváty.

Dosavadní stav techniky

Různé deriváty adeninu mají zajímavé vlastnosti v lékařství, kosmetice a zemědělství (WO 03/040144). Některé z nich se vyskytují přirozeně jako rostlinné hormony, například kinetin, isopentenyladenin, trans-zeatin, dihydrozeatin, 6-benzylaminopurin, 6-(3hydroxybenzylamino) purin (Strnad, M. Plant Physiol 1997, 101, 674; Wojtania a Gabryszewska, Biotechnologia 2004, 2, 162; Baroja-Femández et al., Plant Physiol Biochem 2002, 40, 217; Peixe et al, Scientia Horticulturae 2007, 113, 1). Aplikace těchto rostlinných hormonů na rostliny ale přináší značné nežádoucí vedlejší účinky, včetně problémů s heterogenitou růstu a inhibice růstu kořene (Werbrouck a kol., Physiol. Plant. 1996, 98, 291).

WO 2008/008770 a WO 2009/086457 se týkají 6,9-disubstituovaných purinových derivátů, s 2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl skupinou v poloze 9 a jejich použití v kosmetice jako protizánětlivé a protistámoucí složky přípravků pro péči o pleť.

Předkládaný vynález poskytuje použití 6,8-disubstituovaných derivátů purinu nesoucích 2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl skupinu v poloze 9 v kosmetických aplikacích. Použití těchto látek nevede k nežádoucím vedlejším účinkům, jako jsou buněčné proliferace a apoptóza, které jsou problémem mnoha dosud známých sloučenin na bázi adeninu. Sloučeniny neočekávaně vykazují významné antioxidační vlastnosti.

Sloučeniny podle vynálezu mají zlepšenou selektivitu a účinnost a nižší toxicitu než známé 6(substituované amino)puriny a 6,9-disubstituované puriny.

Podstata vynálezu

Předmětem předkládaného obecného vzorce I vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny

Cyc (I) a jejich farmaceuticky využitelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, jakož i jejich adičních solí s kyselinami, ve kterých Cyc znamená heterocyklyl vybraný ze skupiny zahrnující 2-tetrahydropyranyl a 2tetrahydrofuranyl;

R6 je -NH-Ry,

Ryje vybraný ze skupiny zahrnující

- Ci až Cs přímý nebo rozvětvený alkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C₄ alkoxy,

- C₂ až Cs přímý nebo rozvětvený alkenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C₄alkoxy,

- C₃ až Cs cykloalkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C₍ až C₄ alkyl, Ci až C₄alkoxy,

- benzyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C] až C₄ alkyl, Ci až C₄ alkoxy,

- fenyl, popřípadě ou substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C₄ alkyl, Ci až C₄ alkoxy,

- furfuryl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C₄ alkyl, Ci až C₄ alkoxy,

R8 je vybraný ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, halogen, acyl, acyloxy, amido, alkoxy, benzyloxy, alkylamino, karbamoyl, karboxyl, kyano, hydrazino, -NHOH, -NHCONH2, -NHC(NH)NH2, nitro, sulfanyl, alkylsulfanyl, sulfo a alkyloxykarbonyl.

Výše uvedené generické skupiny používané ke spedifikaci 6,8-disubstituovaných-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů mají následující významy:

- halogen znamená atom fluoru, bromu, chloru nebo jodu,

- hydroxy znamená skupinu -OH;

- sulfanyl znamená skupinu -SH;

- amino znamená skupinu -NH2;

- hydrazino znamená skupinu -NHNH2;

- karbamoyl znamená skupinu -CONH2;

- kyano znamená skupinu -CN;

- karboxyl znamená skupinu -COOH;

- nitro znamená skupinu -NO2;

- sulfo znamená skupinu -SO2R_a, kde R_a je vodík, alkyl, nebo alkenyl;

- acyl znamená -C(O)Rb, Rb je alkyl a alkenyl;

- acyloxy znamená-O-C(O)R_c, kde R_c je hydrogen, alkyl nebo alkenyl;

- alkoxy znamená skupinu -ORj, kde Rj je alkyl;

- alkylamino znamená skupinu -N(Re)2, kde každá skupina Reje nezávisle vybrána z vodíku, alkylu a alkenylu, které mohou být substituovány amino nebo hydroxy substituentem;

- alkylsulfanyl znamená skupinu -SRf, kde Rf je alkyl jak je definováno;

- alkyloxykarbonyl znamená skupinu -C(O)OR_g, kde R_g je alkyl nebo alkenyl;

- amido znamená skupinu -C(O)N(Rf)2, kde každý Rf může být nezávisle vodík, alkyl a alkenyl;

- alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 8 uhlíkových atomů, které mohou být s výhodou substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;

- alkenyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 2 až 8 uhlíkových atomů (s výhodou vinyl, allyl, 1-propenyl, 1-methylethenyl, but-1 až 3-enyl, pent-1 až 4-enyl, hex-1 až 5-enyl, hept-1 až 6-enyl, 3-methylbut-2-en-l-yl), které mohou být s výhodou substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;

- cykloalkyl znamená monocyklickou nebo polycyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 uhlíkových atomů (s výhodou cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl nebo adamantyl), které mohou být s výhodou substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl.

R_y je s výhodou vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, n-alkyl a n-alkenyl obsahující 4, 5 a 6 uhlíkových atomů, (cyclohexyl)methyl a 3,3-dimethylallyl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, methoxy, methyl nebo amino skupinu. Mimořádně výhodné je, když je R_y vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, 4-hydroxy-3-methylbut-2en-l-yl, cyklohexylmethyl, allyl nebo 3,3-dimethylallyl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující halogen, hydroxy, methoxy, methyl, amino, nitro nebo jejich kombinacemi.

Výhodnými podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, kde je R8 vybrán ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, chlor, fluor, brom, amino(Ci-C5 alkyljamino, hydroxy(Ci-C5 alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy. Mimořádně výhodné je, když R8 je amino nebo alkylamino.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny obecného vzorce I vybrané ze skupiny zahrnující: 6-furfurylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyljamino, hydroxy(Cj-C₅ alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyljpurin, 6-benzylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, aminoCCjC5 alkyljamino, hydroxy(Ci-Cs alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2fluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C₅ alkyljamino, hydroxy(Ci-C5 alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-fluorobenzylamino)-8 (amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(C]-C₅alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-fluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-bromobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-iodobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C₅ alkyl)amino, hydroxy(C]-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(2-chlorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-chlorobenzylamino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-chlorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(C]-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-methylbenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-hydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(CrC5 alkyl)amino, hydroxy(C|-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy) -9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(3-hydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-ethoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-dichlorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(5-chloro-2-fluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2,3,5-trifluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-chloro-2,6-difluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-difluorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-(trifluoromethyl)benzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,4-dihydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(C 1-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-dihydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-dimethoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2,5-dimethoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxy-4-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-hydroxy-3-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C₅ alkyl)amino, hydroxy(C]-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-hydroxy-5-methoxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-aminobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(3-aminobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-aminobenzylamino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-Cs alkyl)amino, hydroxy(C]-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,4,5-trimethoxybenzylamino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2,4,5-trichlorobenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Cj-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-cyclohexylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6cyclopentylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-cyclobutylamino-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-allylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-diallylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(CiC₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6isopentylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,3-dimethylallylamino)8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3 -hydroxymethyl-3-methylallyl)amino)8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-lylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(ClC5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-lylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(C]-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-propargylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH,

NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydroíuranyl)purin, 6-anilino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3bromoanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-dichloroanilino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-Cs alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-difluoroanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3,5-dimethylanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(Ci-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(2,3-dimethoxyanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-C₅ alkyl)amino, hydroxy(C,-C₅ alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-chloroanilino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-chloro-5-fluoroanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-fluoroanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, nhnh2> karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(3-fluoroanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(2-methoxyanilino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-methoxyanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(C 1-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-methylanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(2,3,5-trifluoroanilino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin.

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny zahrnující: 6-furfurylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyljpurin, 6-(3hydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-lylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(ClC5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-lylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(ClC5 alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyljamino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9(heterocyklyl)puriny zahrnující 8-hydroxymethylamino-6-furfurylamino-9-(2tetrahydropyranyljpurin, 8-hydroxyethylamino-6-furfurylamino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin a 8-hydroxypropylamino-6-furfurylamino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin nebo jejich soli, přičemž furfurylová skupina může být dale substituována jedním nebo více atomy halogenů, hydroxy, methoxy, methylskupinou nebo jejich kombinacemi.

Soli 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů použitelné v tomto vynálezu zahrnují soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy, stejně jako jejich adičních solí s kyselinami. S výhodou se jedná o farmaceuticky nebo kosmeticky akceptovatelné soli. Sloučeniny podle tohoto vynálezu a jejich soli mohou v případě, že obsahují chirální centra, existovat ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů.

6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny mají širokou škálu biologických aktivit, mezi něž patří antioxidační, protizánětlivá, antisenescenční, prodiferenciační, stejně jako aktivity, které jsou specificky použitelné ve farmaceutických a kosmetických aplikacích. Přípravky podle tohoto vynálezu vykazují dále růstově-regulační, diferenciační, antisenescenční (protistámoucí) vlastnosti o zvýšené selektivitě a účinnosti a rovněž minimální nebo žádné toxicitě v porovnání s analogy známými ze stavu techniky.

Předmětem tohoto vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)purinové deriváty obecného vzorce I pro použití jako antioxidanty pro inhibici nevhodných a nepříznivých metabolických procesů v rostlinách a zvířatech pomocí jak in vivo tak in vitro technik.

Předmětem tohoto vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)purinové deriváty obecného vzorce I pro použití jako antioxidanty pro inhibici peroxidace lipidů v rostlinách a zvířatech pomocí jak in vivo tak in vitro technik.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity jako léčiva. Mohou být použity pro léčbu řady onemocnění u savců, zejména člověka. S výhodou zahrnují tato onemocnění choroby kůže. Sloučeniny podle toho vynálezu mohou být rovněž použity jako neurogenerativní léčiva nebo pro potlačení imunostimulace (např. ošetření artritidy nebo potlačení rejekce transplantátů). Sloučeniny podle vynálezu vykazují zejména antioxidační, antiinflamatomí a antisenescentní vlastnosti.

Tento vynález dále poskytuje použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinového derivátu obecného vzorce I či soli takovéto sloučeniny s alkalickým kovem, amoniakem či aminem ve formě racemátů nebo opticky aktivního isomeru, nebo jeho adiční soli s kyselinou, pro přípravu farmaceutické kompozice.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity v kosmetice. Kosmetické použití těchto sloučenin a jejich solí zahrnuje inhibici, zpomalení, nebo redukci nepříznivých vlivů stárnutí a senescence buněk, zejména epidermálních buněk jakými jsou keratinocyty nebo fibroblasty; kosmetické použití zahrnuje rovněž vylepšení celkového vzhledu a vlastností pokožky, včetně změn souvisejících s věkem a změn, které jsou blízce s věkem související (např. akné, erytém, zarudnutí kůže a další).

Tento vynález dále poskytuje kosmetické kompozice obsahující jeden nebo více 6,8disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů obecného vzorce I společně s kosmeticky akceptovatelným nosičem.

Tento vynález rovněž poskytuje použití sloučenin obecného vzorce I pro inhibici senescence a stárnutí u savců a rostlin zahrnujících aplikaci efektivního množství 6,8-disubstituovaného-9(heterocyklyl)purinu s použitím in vivo nebo in vitro technik.

Tento vynález rovněž poskytuje použití sloučenin podle tohoto vynálezu pro inhibici a oddálení účinků stárnutí a/nebo pro zlepšení kosmetického vzhledu savčích buněk, zejména buněk lidské pokožky, a to aplikací účinných koncentrací 6,8-disubstituovaných-9(heterocyklyl)purinů na savčí buňky.

Tento vynález dále poskytuje metody rejuvenizace pokožkových buněk, stimulace buněčné proliferace stárnoucích buněk anebo jejich diferenciace v organismu aplikací účinných koncentrací 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle tohoto vynálezu.

Zlepšení, inhibice a oddálení nepříznivých účinků stárnutí živočišných buněk znamená, že vývoj morfologických změn, které se normálně vyskytují ve spojitosti se stárnutím v normálních savčích buňkách in vitro nebo in vivo je zpomalen, obrácen, nebo zpožděn. Nepříznivé účinky stárnutí rovněž zahrnují se stářím spojené změny genové exprese a proteinové biosyntézy. Za zlepšující účinky jsou v tomto vynálezu považovány ty, které se projevují zvýšením a rychlostí buněčného růstu nebo celkovou proliferační kapacitou ošetřených buněk. Zlepšení, odstranění či oddálení nepříznivých vlivů stárnutí na buněčné úrovni je možné detekovat jako zpomalení nebo obrat morfologických a fenotypických změn souvisejících s věkem, které se běžně vyskytují při stárnutí buněk. Změny související s věkem in vivo zahrnují změny v savčích tkáních, jakými jsou vývoj, nárůst počtu a hloubky vrásek, čar, pokleslá kůže, odbarvení, tvorba stařeckých skvrn, kožovatění, nebo nažloutlý vzhled, spojené s kosmetických vzhledem kůže i změnami ve strukturální a funkční integritě kožních tkání. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle tohoto vynálezu jsou účinné v zlepšování celkového vzhledu a kondice kůže, a to včetně eliminace změn souvisejících se stářím a změn, které se stářím přímo nesouvisejí (např. akné, erytém, zarudnutí kůže, rosacea, a další).

Přípravky obsahující jeden nebo vice 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů jsou s výhodou použitelné pro ošetření senescentních a stárnoucích rostlinných, savčích a lidských buněk.

Předmětem vynálezu je rovněž použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů obecného vzorce I jako růstových regulátorů pro stimulaci proliferace, morfogeneze a inhibici senescence.

Předmětem vynálezu je dále použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů obecného vzorce I jako faktorů buněčného dělení a diferenciace rostlin, savců, mikroorganizmů, kvasinek a hub.

Předmětem vynálezu je dále použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů obecného vzorce I pro přípravu afinitních sorbentů, imobilizovaných enzyme pro procesní kontroly, reagencií pro imunoanalýzy, diagnostické vzorky, látky značené ^l4C, ³H, avidinem a biotinem.

Sloučeniny podle toho vynálezu lze s výhodou rovněž použít pro výrobu přípravků vhodných pro použití při manipulacích s rostlinnými a živočišnými embryonálními kmenovými buňkami a pro klonování embryí.

Vhodné cesty pro aplikaci jsou orální, rektální, vazální místní (zahrnující okulámí, bukální a sublinguální), vaginální a parenterální (zahrnující subkutánní, intramuskulámí, intravitreózní, nitrožilní, intradermální, intrathekální a epidurální). Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta, toxicitě sloučeniny a místě infekce, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.

Terapeutický či kosmetický přípravek obsahuje od 1 do 95% aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90% aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20% aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0.05g do l.Og aktivní látky.

Farmaceutické přípravky tohoto vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např.

běžným mícháním, granulaci, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy. Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze a disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizováných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je manitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány anebo obsahují látky neutrální povahy, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla anebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku anebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofílizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitamínu E, β-karotenu nebo 3,5-di-/erc-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složený z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cg až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a olej z podzemnice olejně.

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, manitol nebo sorbitol, celulosové preparáty anebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a polyvinylpyrrolidin, a pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být vybavena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol anebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávána do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky. Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin. Ostatní formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20%, přednostně okolo 10% nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy. Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s neutrálními látkami, kde je to vhodné, a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervo vadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70%, ale přednostně 20 až 50% vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafíny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan-oleát nebo sorbitan-isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a polyethylen glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.

Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafin, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo z podzemnice olejně, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.

Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50% vody. Používané olejové báze jsou mastné alkoholy, např. isopropyl-myristát, lanolin, včelí vosk, nebo uhlovodíky, s výhodou vazelína (petrolátum) a parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofílními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery či kyselé estery polyglycerických mastných kyselin (Tween), dále polyoxyethylenové etery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylenglykol a polyethylenglykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky.

Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovu, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.

Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako chlor-fluor nižší alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N₂O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a také jsou používána aditiva tam zmíněná.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchány zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a polyethylenglykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylenglykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné i ostatní neutrální látky a aditiva.

Tento vynález dále poskytuje veterinární přípravky obsahující nejméně jednu aktivní složku společně s veterinárním nosičem. Veterinární nosiče jsou materiály pro aplikaci přípravku a mohou to být látky pevné, kapalné nebo plynné, které jsou inertní nebo přijatelné ve veterinární medicíně a jsou kompatibilní s aktivní složkou. Tyto veterinární přípravky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jakoukoli jinou požadovanou cestou.

Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 50 g, s výhodou 0,5 až 10 g.

Seznam vyobrazení

Obr. 1. ukazuje vliv sloučeniny 5 na růst kalusu. Kinetin a trara-zeatin (tZ) byly použity jako standardy. Chybové úsečky naznačují směrodatnou odchylku pro 5 opakování. Kontrola vyjadřuje hodnoty pro experiment bez jakéhokoliv cytokininu.

Obr. 2. znázorňuje růstové křivky 6-furfurylamino-8-(2-hydroxyethylamino)-9(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu (sloučenina 243).

Příklady provedení vynálezu

Vynález je dále doložen následujícími příklady, které jeho rozsah nijak neomezují. Všechny odkazy na literaturu citované v předloženém vynálezu jsou včleněny do textu v závorkách. Není-li uvedeno jinak, všechna procenta a poměrná množství jsou vyjádřena hmotnostními procenty.

Výchozí chemikálie byly zakoupeny od komerčních dodavatelů (Sigma, Aldrich, Fluka, etc.) nebo připraveny postupy popsanými níže.

Odpařování bylo prováděno na rotační vakuové odparce při teplotách nižších než 80°C. Teploty tání byly stanoveny na Koflerově přístroji a nejsou korigovány. Čistota připravených sloučenin byla kontrolována pomocí elementární analýzy (C, Η, N) stanovené přístrojem EA1112 Flash analyzer (Thermo-Finnigan) a vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) (Beckman Gold system). Vzorky jednotlivých látek byly rozpuštěny v methanolu a nastříknuty na kolonu LiChroCARD 250 x 4 mm s náplní Purospher RP-18e, 5 pm (Merck) a eluovány isokraticky mobilní fází sestávající z methanolu (HPLC grade) a AcOH/AcONH₄pufru (pH = 3,4; 40 mM; s přídavkem 5 % (v/v) MeOH) ve vhodném poměru (v/v) při průtoku 0,5 ml/min. Eluované látky byly detekovány UV detektorem při 200 - 300 nm. NMR spectra (σ ppm; J, Hz) byla měřena na přístroji Varian Unity 300 (300 MHz) nebo JEOL ECA-500 spectrometer pracující při frekvencích 500.16 MHz (' IT) a 125.76 MHz (¹³C) při 25 °C za použití tetramethylsilanu jako vnitřního standardu. Elektronově ionizační hmotnostní

.............

spectra (rel. % složení) byla měřena na VG 7070E spektrometru (70eV, 200°C, přímý nástřik). Kvadrupólová hmotnostní spectra byla měřena na Micromass ZMD přístroji, ionizace elektrosprejem. Vzorky pro MS měření byly rozpuštěny v methanolu + 5 % (v/v) HCOOH. Jako stacionární fáze pro sloupcovou chromatografií sloužil silikagel PharmPrep 60 CC (4063 pm) (Merck).

6-Alkylamino-8-substituované-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-puriny byly připraveny čtyřstupňovou syntézou, která zahrnovala tetrahydropyranylaci 6-chlorpurinu, reakci 6-chlor9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu s příslušným alkenyl- nebo arylakylaminem v alkoholu s baží, zavedení halogenového atomu do polohy 8 a následnou substituci halogenu odpovídajícím nukleofilem (aminem nebo alkoholátem) za vzniku 6,8-disubstituovaného-9THP-purinu.

Příklad 1: Příprava 6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu

Sloučenina byla připravena z 6-chloropurinu podle postupu v literatuře (Taddei et al., Org. Biomol. Chem. 2004, 2, 665). Směs 6-chloropurinu (20,0 g; 129 mmol), p-toluenesulfonové kyseliny (0,23 g; 1,85 mmol), 3,4-dihydro-2H-pyranu (14,5 ml; 159 mmol) v tetrahydrofuranu (175 ml) byla refluxována pod argonem při 84°C po dobu 22 h. Po ochlazení byl přidán koncentrovaný vodný roztok čpavku (5 ml), nerozpuštěné částice odfiltrovány a filtrát odpařen dosucha. Žlutavý olej ovitý odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (250 ml), vytřepán nasyceným roztokem NaCI (1 x 75 ml), vodou (2 x 75 ml) a vysušen Na₂SO₄. Ethyl-acetátový výtřepek byl zakoncentrován ve vakuu a extrahován vroucím cyklohexanem (cca 250 ml). Světle žlutý cyklohexanový exrakt byl zdekantován a nerozpuštěný oranžový zbytek extrahován cyklohexanem ještě dvakrát (2 x 150 ml). Ze spojených cyklohexanových extraktů vykrystalovaly přes noc lednici bezbarvé krystaly. Výtěžek: 19,1 g; 62 %. T. t: 68°C. *H NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ 1.61 (2H, m, THP), 1.76 (1H, m, THP), 2.00 (2H, m, THP), 2.34 (1H, m, THP), 3.73 (1H, m, THP H4'), 4.03 (1H, dm, J= 11 Hz, THP H3'), 5.80 (1H, dd, J= 2.3, 11 Hz, THP H2'), 8.81 (1H, s, H8), 8.92 (1H, s, H2).

Příklad 2: Přípravy 6-alkyIamino/aralkylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purinů

6-Furfurylamino-9- ('etrahydropyran-2-yl)-9H-purin

6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př 1) (3,89 g; 16 mmol) byl rozpuštěn v 1 propanolu (30 ml), přidán furfurylamin (2,9 ml; 33 mmol) a triethylamin (4,3 ml; 31 mmol). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc. První podíl krystalů byl odfiltrován, promyt vychlazeným 1-propanolem a důkladně vodou. Filtrát roztoku reakční směsi byl zahříván na 70 °C po 3 h, ochlazen a umístěn přes noc do lednice. Druhý podíl krystalů byl odfiltrován, promyt vychlazeným 1-propanolem a důkladně vodou. Filtrát byl částečným odpaření zahuštěn. Po umístění do lednice přes noc byl získán třetí podíl krystalů produktu. Bělavý krystalický produkt byl vysušen v exikátoru s P₂O₅. Výtěžek: 3,46 g; 71%. T. t.: MIMS °C. HPLC R_t = 9,1 min (70 % CH₃OH + 30 % pufr); UV (70 % CH₃OH + 30 % pufr) X_max 267 nm, X_min 235 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 300 [M+H]⁺ (100), 322 [M+Na]⁺(36), 621 [2M+Na]⁺ (38); (CV 38) m/z (rel. %): 216 [CioH9N50+H]⁺ (100), 322 [M+Na]⁺(56), 238 [Ci0H₉N₅O+Na]⁺ (22), 300 [M+H]⁺ (21).

6-(3-Methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purine (Př 1) (4,02 g; 17 mmol) byl rozpuštěn ve 2propanolu (47 ml), přidán 3-methylbut-2-en-l-amin hydrochlorid (3,08 g; 25 mmol) a triethylamin (5,9 ml; 42 mmol). Roztok byl míchán a zahříván při 65 °C po 14 h. Směs byla odpařena dosucha, zbytek rozpuštěn v chloroformu (50 ml) a vytřepán s vodou (3 x 30 ml). Chloroformová vrstva byla vysušena MgSCfi a odpařena. Produkt vykrystaloval při sušení odparku v exikátoru s P₂O₅ (4,56 g; 94 %). Pevný surový produkt byl krystalován z ethylacetátu (8 ml) za vzniku bílých krystalů. Výtěžek: 2,86 g; 73 %. T. t.: 95-98 °C. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 288 [M+H]⁺ (100), 310 [M+Na]⁺ (37), 597 [2M+Na]⁺ (28); (CV 38) m/z (rel. %): 204 [Ci0Hi3N5+H]⁺ (100), 310 [M+Na]⁺ (37), 288 [M+H]⁺ (19), 226 [C10Hi₃N₅+Na]⁺(17).

(E)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin Připraven analogickým postupem jako 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př 2). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 76 %. T. t.: 111-116 °C (ethyl-acetát). HPLC R_t = 10,4 min (55 % CH₃OH + 45 % pufr); R_t = 8,6 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr); UV (55 % CH₃OH + 45 % pufr) λ™_χ 268 nm, λ™ 231 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 304 [M+H]⁺(100), 326 [M+Na]⁺ (17), 220 [C₁₀Hi₃N₅O+H]⁺ (16).

(Z) -ů- (4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Z)-4-Amino-l-methylbut-2-en-l-ol (0,87 g; 8,6 mmol) byl rozpuštěn v 1-propanolu (14 ml), přidán triethylamin (0,95 ml; 6,9 mmol) a 6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 1) (1,64 g; 6,9 mmol) a směs zahřívána při 45 °C po 6 h. Po ochlazení byla směs zfiltrována, filtrát vakuově zahuštěn a produkt separován sloupcovou chromatografií (60,3 g silikagelu, mobilní fáze chloroform : aceton 4:1, průtok 7,5 ml/min. Produktem byla světle žlutá viskózní látka, která vykrystalovala po dvou týdnech sušení v exikátoru s P₂O₅. Výtěžek 1,50 g; 72 %. T. t: 127 - 131°C. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 304 [M+H]⁺ (100), 326 [M+Na]⁺ (17); (CV 38) m/z (rel. %): 220 [Ci0Hi3N5O+H]⁺ (100), 326 [M+Na]⁺ (32), 242 [Ci0Hi₃N₅O+Na]⁺(29).

6-Benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 1) (2,52 g; 10,6 mmol) byl rozpuštěn v 2propanolu (13,5 ml), přidán benzylamin (1,4 ml; 12,8 mmol) and triethylamin (1,5 ml; 10,5 mmol. Roztok byl zamíchání zahříván při 40 °C po 8 h a poté vakuově odpařen. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (20 ml) a vytřepán s vodou (2x15 ml). Ethyl-acetátová vrstva byla vysušena Na₂SO₄ a odpařena. Produkt krystaloval po vysušení v exikátoru s P₂O₅ za vzniku bílých krystalů. Výtěžek (2,14 g; 66 %). T. t.: 124-127 °C. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 310 [M+H]⁺ (100); (CV 40) m/z (rel. %): 226 [Ci₂H₁₁N₅+H]⁺ (100), 310 [M+H]⁺ (13).

Příklad 3: Příprava 8-halogen-6-alkylamino/aralkylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//purinů

8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 1,8 M roztoku lithiumdiisopropylamidu (20 ml; 36 mmol) bylo v atmosféře argonu smíseno se suchým tetrahydrofuranem (30 ml) a ochlazeno na -78 °C. K roztoku byl během 20 min přikapán roztok 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurinu (3,64 g; 12,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (35 ml). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po 2 h. Poté byl během 20 min přikapán benzensulfonylchlorid (4,7 ml; 36,6 mmol) a směs za chlazení míchána další 3 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH₄C1 (30 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována diethyletherem (2 x 27 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem NaCl (65 ml) a vodou (2 x 50 ml), vysušeny Na₂SO₄ a odpařeny. Surový produkt byl zbaven benzensulfonamidu krystalizací z ethyl-acetátu a ethanolu. Matečný louh byl vakuově zahuštěn a podroben sloupcové chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 95:5). Produkt byl rekrystalován ze směsi methanol/diethylether. Světle béžové krystaly. Výtěžek: 2,80 g; 69 %. T. t.r 110-114 °C. HPLC R_t = 17,3 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr) (průtok 0,6 ml/min). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 334 [M+H]⁺ (100), 336 [M+H]⁺ (51); (CV 20) m/z (rel. %): 334 [M+H]⁺ (100), 336 [M+H]⁺ (34), 250 [Ci0H8C1N5O+H]⁺ (53), 252 [C,oH8C1N₅0+H]⁺ (19). ‘H NMR (300 MHz, DMSO-í/6); δ 1.62 (3H, mm, ΤΗΡ, H4', 5'), 1.85 (1H, dd, J= 12.6, 2.4 Hz, ΤΗΡ H3'), 1.97 (1H, d, J= 11.2 Hz, ΤΗΡ H4'), 2.89 (1H, qq, J = 11.8, 4.1 Hz, ΤΗΡ H3'), 3.66 (1H, tt, J= 11.3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 4.02 (1H, d, J= 11.3 Hz, ΤΗΡ H6'), 4.66 (2H, s, -NH-CH2-Fur), 5.63 (1H, d, J= 10.6 Hz, ΤΗΡ H2'), 6.22 (1H, d, J= 2.6 Hz, Fur H3'), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 8.26 (1H, s, H2), 8.42 (1H, bs, N⁶H). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 22.58 (ΤΗΡ C4'), 24.46 (ΤΗΡ C5'), 28.09 (ΤΗΡ C3'), 36.51(-NH-CH₂-Fur), 68.10 (THP C6'), 83.11(THP C2'), 106.71 (Fur C3'), 110.43 (Fur C4'), 117.87 (C5), 136.32 (C8), 141.87(Fur C5'), 150.16 (C4), 152.62 ( Fur C2'), 152.73 (C2), 153.11 (C6).

8-Brom-6-furfurylam ino-9- (tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-furfuryIamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (0,93 g; 3,1 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 10 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (3,7 ml; 7,5 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 10 min přikapán roztok tetrabrommethanu (2,7 g; 8,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (3,5 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH₄C1 (9 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (15 ml) a vodou (2 x 15 ml), vysušena MgSO₄ a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 3:2). Produkt krystaloval po 4 dnech sušení v exikátoru s P2O5 za vzniku světle béžovo-hnědé látky, po rozetření prášku. Výtěžek: 0,44 g; 37 %. T. t.: 108-112 °C (ethyl-acetát). HPLC R_t = 11,5 min (75 % CH3OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) X_max 272 nm, λ™, 238 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 380 [M+H]⁺ (100), 378 [M+H]⁺ (86), 294 [Ci0H8BrN5O+H]⁺ (9); 296 [C10H8BrN5O+H]⁺ (8); (CV 30) m/z (rel. %): 296 [C10H8BrN5O+H]⁺ (100), 294 [C10H8BrN5O+H]⁺ (93), 228 [C6H5BrN5]⁺(28), 226 [C6H5BrN5]⁺ (27), 380 [M+H]⁺ (10), 378 [M+H]⁺ (9). *H NMR (300 MHz, DMSO-76): δ 1.56 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.65 (2H, mm, THP H4', 5'), 1.85 (1H, dd, 7= 12.9, 2.4, ΤΗΡ H3'), 1.99 (1H, d, 7= 11.8, ΤΗΡ H4'), 3.00 (1H, qq, 7= 11.8, 4.2, ΤΗΡ H3'), 3.65 (1H, tt, 7= 11.3, 3.6, ΤΗΡ H6'), 4.04 (1H, d, 7= 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.67 (2H, bs, NH-CH₂-Fur), 5.61 (1H, dd, 7= 11.2, 2.0, ΤΗΡ H2'), 6.23 (1H, d, 7 = 3.2, Fur H3'), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 8.24 (1H, s, H2), 8.42 (1H, bs, N⁶H). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-7₆): δ 22.56 (THP C4'), 24.37 (THP C5'), 27.98 (THP C3'), 36.44 (NH-CH₂-Fur), 68.04 (THP C6'), 84.10 (THP C2'), 106.62 (Fur C3'), 110.34 (Fur C4'), 119.46 (C5), 125.88 (C8), 141.76 (Fur C5'), 150.13 (C4), 152.45 (C2), 152.56 (Fur C2'), 152.95 (C6).

8-Jod-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-977-purin (2,12 g; 7,1 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (35 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 16 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (21 ml; 42 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 70 min. Poté byl přikapán roztok jódu (12,5 g; 49 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (8,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním Na₂S₂O₃· 5 H₂O (24 g). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (15 ml) a vodou (2 x 40 ml). Vodná vrstva byla extrahována ethyl-acetátem (2 x 40 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny MgSO₄ a odpařeny. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát 3:2). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P2O5 za vzniku světle béžovo-hnědé látky, po rozetření prášku. Výtěžek: 2,00 g; 66 %. T. t.: 130-134 °C (ethyl-acetát). HPLC R_t = 6,0 min (90 % CH₃OH + 10 % pufr), R_t = 8,6 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr). UV (80 % CH₃OH + 20 % pufr) 276 nm, X_min 240 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 426 [M+H]⁺ (100). ’H NMR (300 MHz, DMSOd6): δ 1.56 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.64 (2H, mm, ΤΗΡ H4', 5'), 1.81 (1H, dd, J= 12.9, 2.4, THP H3'), 1.99 (1H, d, J= 11.8, ΤΗΡ H4'), 3.09 (1H, qq, J= 11.8, 3.3, ΤΗΡ H3'), 3.64 (1H, tt,J= 11.3, 2.9, ΤΗΡ H6'), 4.05 (1H, d, J = 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.65 (2H, bs, NH-CH2-Fur), 5.54 (1H, dd, J= 11.3, 2.2, ΤΗΡ H2'), 6.21 (1H, d, J = 2.9, Fur H3'), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 8.17 (1H, s, H2), 8.42 (1H, bs, N⁶H). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 22.67 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.07 (THP C3'), 36.41 (NH-CH₂-Fur), 68.01 (THP C6'), 85.77 (THP C2'), 101.75 (C8), 106.57 (Fur C3'), 110.34 (Fur C4'), 122.07 (C5), 141.72 (Fur C5'), 150.16 (C4), 152.03 (C2), 152.67 (Fur C2'), 152.80 (C6).

8-Chlor-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-(3-Methylbut-2-en-l-ylamino)-9(tetrahydropyran-2-yl)-977-purin (2,08 g; 7,2 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (30 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 30 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (22 ml; 44 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok hexachlorethanu (3,43 g; 14,5 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (15,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 18% NH4CI (30 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCI (40 ml) a vodou (2 x 25 ml), vysušena Na₂SO4 a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany:ethyl-acetát, 3:2; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₃ za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 1,53 g; 66 %. T. t.: 118120 °C (krystalováno ze směsi hexanny : ethyl-acetát, 3:2). HPLC R_t = 14,5 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 322 [M+H]⁺ (100), 324 [M+H]⁺ (31); (CV 35) m/z (rel. %): 238 [Ci0Hi2C1N5+H]⁺ (100), 240 [Ci0H₁₂C1N₅+H]⁺ (31), 182 [C6H5C1N5]⁺ (17), 170 [C5H4C1N5]⁺ (17), 322 [M+H]⁺ (12). *H NMR (300 MHz, DMSOd₆y. δ 1.55 (3H, mm, THP, H4', 5'), 1.66 (3H, s, -CH₃), 1.68 (3H, s, -CH₃), 1.84 (1H, d, J = 13.0 Hz, THP H3'), 1.97 (1H, d, J= 11.0 Hz, THP H4'), 2.89 (1H, qq, J= 12.4, 3.4 Hz, THP

H3'), 3.65 (1H, tt, J= 11.3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 4.01 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.04 (2H, bs, -NHCH₂-), 5.26 (1H, t, J= 6.6 Hz, -CH₂-CH=), 5.62 (1H, d, J= 11.7 Hz, ΤΗΡ H2'), 8.07 (1H, bs, N⁶H), 8.22 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-t/₆): δ 17.74 (-CH₃), 22.49 (THP C4'), 24.36 (THP C5'), 25.30 (-CH₃), 27.98 (THP C3'), 37.56 (-NH-CH₂-), 68.00 (THP C6'), 82.94 (THP C2'), 117.72 (C5), 121.72 (-CH=), 133.30 (=C<), 135.74 (C8), 149.41 (C4), 152.77 (C2), 153.00 (C6).

8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-(3-Methylbut-2-en-l-ylamino)-9(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (3,00 g; 10,42 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (30 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 40 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (31 ml; 62 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok tetrabrommethanu (8,50 g; 25,6 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (8,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH₄C1 (50 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (50 ml) a vodou (2 x 50 ml), vysušena Na₂SO₄ a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát (3:2); na TLC chromatogramu Rf = 0,17). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₃ za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 2,28 g, 60 %. T. t: 125-128 °C (hexany). HPLC R_t = 14,2 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr). UV (70 % CH₃OH + 30 % pufr) X_max 274 nm, λ_πιιη 235 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 368 [M+H]⁺(100), 366 [M+H]⁺ (98), 282 [Ci0HnBrN5+H]⁺ (30), 284 [Cl0HnBrN₅+H]⁺ (28). ^]H NMR (300 MHz, DMSO-í/í): δ 1.55 (3H, mm, THP, H4', 5'), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, CH3), 1.82 (1H, d, J= 12.8 Hz, THP H3'), 1.97 (1H, m, THP H4'), 2.99 (1H, qq, J= 12.1, 4.0 Hz, THP H3'), 3.63 (1H, tt, J= 10.8, 3.6 Hz THP H6'), 4.01 (1H, m, THP H6'), 4.05 (2H, bs, -NH-CH2-), 5.26 (1H, t, J= 6.4 Hz, -CH2-CH=), 5.59 (1H, d, J= 10.9 Hz, THP H2'), 8.08 (1H, bs, N⁶H), 8.20 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 17.74 (-CH₃), 22.56 (THP C4'), 24.36 (THP C5'), 25.30 (-CH₃), 27.96 (THP C3'), 37.56 (-NH-CH₂-), 68.01 (THP C6'), 84.02 (THP C2'), 119.43 (C5), 121.73 (-CH=), 125.36 (C8), 133.27 (=C<), 149.80 (C4),

152.58 (C2), 153.00 (C6).

(E)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (E)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 2) (0,93 g; 3,1 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (15 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (15 ml; 30 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1,5 h. Poté byl během 12 min přikapán roztok hexachlorethanu (2,14 g; 9,0 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (6,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH₄C1 (20 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována ethyl-acetátem (3 x 10 ml). Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (50 ml) a vodou (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny Na₂SO₄ a odpařeny. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton 95:5. Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₅ za vzniku béžové látky. Výtěžek: 0,51 g; 49 %. T. t.: 130-134°C (2-propanol). HPLC R_t = 15,3 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr), MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 338 [M+H]⁺ (100), 340 [M+H]⁺ (33); (CV 20) m/z (rel. %): 254 [CioHi2C1N50+H]⁺ (100), 256 [C]0Hi₂C1N₅O+H]⁺ (45), 338 [M+H]⁺ (86), 340 [M+H]⁺ (44). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.55 (1H, m, ΤΗΡ, H5'), 1.60 (1H, m, ΤΗΡ, H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.70 (1H, m, ΤΗΡ, H4'), 1.84 (1H, dd, J= 12.8, 2.2 Hz, ΤΗΡ H3'), 1.98 (1H, d, J= 12.3 Hz ΤΗΡ H4'), 2.89 (1H, qq, J = 12.1, 3.6 Hz, ΤΗΡ H3'), 3.63 (1H, tt, J= 11.3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 3.78 (2H, d, J= 5.7 Hz, -CH2-OH), 4.03 (1H, d, J= 11.3 Hz ΤΗΡ H6'), 4.10 (2H, bs, -NH-CH2-), 4.72 (1H, t, J = 5.7 Hz, OH), 5.50 (1H, tt, J= 6.7, 1.7 Hz, -CH2-CH=), 5.63 (1H, dd, J = 11.3, 2.2 Hz, ΤΗΡ H2'), 8.04 (1H, bs, N⁶H), 8.23 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-dň): δ 13.56 (-CH3), 22.52 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.04 (-CH₂OH), 28.04 (THP C3'), 37.25 (-NH-CH₂-), 65.75 (-CH₂-OH), 68.03 (THP C6'), 82.99 (THP C2'), 117.80 (C5), 120.32 (-CH=), 135.79 (C8), 137.39 (=C<), 149.49 (C4), 152.78 (C2), 153.12 (C6).

(E)-8-Brom-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyrcm-2-yl)-9H-purin (£’)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př 2) (2,44 g; 8,0 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (55 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (45 ml; 90 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 35 min přikapán roztok tetrabrommethanu (8,01 g; 24,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH₄C1 (70 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována diethyletherem (1 x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly promyta nasyceným roztokem NaCl (2 x 50 ml), vysušeny Na₂SO₄ a odpařeny. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : ethyl-acetát 1:3; na TLC chromatogramu R_f = 0,11). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₅ za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 1,19 g; 45 %. T. t.: 138-142 °C (ethyl-acetát). HPLC R_t = 15,5 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) ž_max 274 nm, λ_ηιιη 235 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 382 [M+H]⁺ (100), 384 [M+H]⁺ (92); 406 [M+Na]⁺ (60), 404 [M+Na]⁺ (57); (CV 37) m/z (rel. %): 406 [M+Na]⁺(100), 404 [M+Na]⁺ (96), 332 [Ci0HI2BrN5O+Na]⁺ (88), 320 [Ci0H₁₂BrN₅O+Na]⁺ (85), 300 [Ci0Hi2BrN5O+H]⁺ (84), 298 [Ci0Hi₂BrN₅O+H]⁺ (82), 382 [M+H]⁺ (36), 384 [M+H]⁺ (35). *H NMR (300 MHz, DMSO-t/ý): δ 1.55 (1H, m, ΤΗΡ, H5'), 1.60 (1H, m, ΤΗΡ, H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.70 (1H, m, ΤΗΡ, H4'), 1.84 (1H, dd, 7= 12.8, 2.2 Hz, ΤΗΡ H3'), 1.98 (1H, d, 7= 12.3 Hz ΤΗΡ H4'), 2.89 (1H, qq, 7= 12.1, 3.6 Hz, ΤΗΡ H3'), 3.63 (1H, tt, J= 11.3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 3.78 (2H, d, 7= 5.7 Hz, -CH2-OH), 4.03 (1H, d, 7= 11.3 Hz ΤΗΡ H6'), 4.10 (2H, bs, -NH-CH2-), 4.72 (1H, t, 7= 5.7 Hz, OH), 5.50 (1H, tt, 7= 6.7, 1.7 Hz, -CH2-CH=), 5.63 (1H, dd, 7= 11.3, 2.2 Hz, ΤΗΡ H2'), 8.04 (1H, bs, N⁶H), 8.23 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-7d): δ 13.56 (-CH₃), 22.52 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.04 (-CH₂OH), 28.04 (THP C3'), 37.25 (-NH-CH₂-), 65.75 (-CH₂-OH), 68.03 (THP C6'), 82.99 (THP C2'), 117.80 (C5), 120.32 (-CH=), 135.79 (C8), 137.39 (=C<), 149.49 (C4), 152.78 (C2), 153.12 (C6).

8-Brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (2,14 g; 6,9 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (25 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 30 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (21 ml; 42 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok tetrabrommethanu (4,58 g; 13,8 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (10,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapánírn 20% NH₄C1 (44 ml). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta vodou (3 χ 30 ml), vysušena Na₂SO₄ a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát 3:2; na TLC chromatogramu R_f = 0,17). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₅ za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 2,05 g; 76 %. T. t.: 120-124 °C (hexany). HPLC R_t = 16,6 min (75 % CH₃OH + 25 % pufr). UV (75 % CH₃OH + 25 % pufr) X_max 274 nm, λ_πυη 235 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 390 [M+H]⁺(100), 388 [M+H]⁺ (84). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/₆): δ 1.55 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.66 (3H, mm, ΤΗΡ H4', 5'), 1.84 (1H, d, J= 12.8, ΤΗΡ H3'), 1.98 (1H, d, J= 8.8, ΤΗΡ H4'), 3.00 (1H, qq, J= 12.6, 4.9, ΤΗΡ H3'), 3.69 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.03 (1H, d, J = 11.8, THP H6'), 4.67 (2H, bs, NH-CH₂-Ph), 5.61 (1H, d, J= 9.8, ΤΗΡ H2'), 7.21 (1H, m, Ph H3'), 7.29 (4H, m, Ph), 8.20 (1H, s, H2), 8.59 (1H, bs, N⁶H).

8-Jod-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sloučenina byla připravena z 6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purinu (Př 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (0,30 g; 0,97 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (3 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (1,5 ml; 3 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 70 min. Poté byl přikapán roztok jódu (0,98 g; 3,9 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (1,5 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapánírn 10 ml roztoku Na₂S₂O₃»5 H₂O (1,4 g; 5,7 mmol). Chladící lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla zředěna diethyletherem (6 ml), promyta vodou (2x5 ml), vysušena Na₂SO₄ a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 3:2; na TLC chromatogramu R_f= 0,18). Produkt krystaloval po sušení v exikátoru s P₂O₅ za vzniku bílé látky. Výtěžek: 134 mg; 32 %. T. t.: 153-155 °C (diethylether). HPLC R_t = 15,7 min (75 % CH₃OH + 25 % pufr). UV (75 % CH₃OH + 25 % pufr) X_max 278 nm, 7_min 239 nm. MS ESI+ (CV 13) m/z (rel. %):

436 [M+H]⁺ (100); (CV 30) m/z (rel. %): 352 [Ci2H10N5I+H]⁺ (100). 436 [M+H]⁺ (55). Ή NMR (300 MHz, DMSO-7á): δ 1.57 (2H, m, ΤΗΡ H5'), 1.64 (1H, qq, J= 12.4, 3.4, THP H4'), 1.81 (1H, d, J = 12.4, THP H3'), 1.99 (1H, d, J= 12.4, THP H4'), 3.09 (1H, qq, 7 = 12.4, 3.4, THP H3'), 3.64 (1H, tt,7= 11.1, 3.4, THP H6'), 4.05 (1H, d,7= 11.1, THP H6'), 4.67 (2H, bs, NH-CH₂-Ph), 5.54 (1H, dd, 7= 11.1, 2.3, THP H2'), 7.20 (1H, tt, 7= 6.8, 2.3, Ph H4'), 7.28 (2H, tt, 7= 6.8, 2.3, Ph H3', H5'), 7.29 (2H, dd, 7= 6.8, 2.3, Ph H2', H6'), 8.13 (1H, s, H2), 8.50 (1H, bs, N⁶H). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-J₆): δ 22.67 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.06 (THP C3'), 42.87 (NH-CH₂-Ph), 68.00 (THP C6'), 85.76 (THP C2'), 101.56 (C8), 122.00 (C5), 126.52 (Ph C4'), 128.03 (Ph C2', C6'), 128.10 (Ph C3', C5'), 490.98 (C4), 152.01 (C2), 152.98 (C6).

Tabulka 1: Sloučeniny připravené dle Příkladu 3 (R6 - substituent v poloze 6 purinu,

R8 - substituent v poloze 8 purinu, R9=Cyc - substituent v poloze 9 purinu)

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno / nalezeno	ESI-MS [MH]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
1	furfurylamino	ci	2-tetrahydropyranyl	54.0/53.9	4.8/4.7	21.0/21.5	334.8
2	benzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	59.4/59.5	5.3/5.2	20.4/20.8	344.8
3	(3-methylbut-2-en-1 -yljamino	“ϋΓ	2-tetrahydropyranyl	56.0/56.1	6.3/6.5	21.8/21.5	322.8
4	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yljamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	53.3/52.9	6.0/6.2	20.7/21.0	338.8
5	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yljamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	53.3/52.7	6.0/6.3	20.7/21.1	338.8
6	allylamino	“ϋΓ	2-tetrahydropyranyl	53.2/53.8	5.5/5.4	23.8/23.6	294.8
7	3-tluorobenzylamino	7Γ	2-tetrahydropyranyl	56.4/56.0	4.7/4.9	19.3/19.7	362.8
8	3-methoxylbenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	57.8/58.0	5.4/5.3	18.7/18.5	374.9
9	3-hydroxylbenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	56.8/57.5	5.0/5.2	19.5/19.1	360.8
10	3.4-dihydroxybenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	54.3/54.5	4.8/4.9	18.6/18.4	376.8
11	3.4-difluorobenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	53.8/54.0	4.3/4.3	18.4/18.2	380.8
12	3.4-dímethoxybenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	56.5/56.8	5.5/5.4	17.3/17.0	404.9
13	4-hydroxybenzylamino	Cl	2-tetrahydropyranyl	56.8/56.9	5.0/5.0	19.5/19.6	360.8

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno / nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
14	4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzylamino	CT	2-tetrahydropyranyl	54.4/54.6	5.3/5.2	16.7/16.9	420.9
15	anilino	Cl	2-tetrahydropyranyI	58.3/58.1	4.9/5.1	21.2/21.3	330.8
16	4-hydroxyanilino	Cl	2-tetrahydropyranyl	55.6/55.3	4.7/4.9	20.3/20.3	346.8
17	3-methoxyanilino		2-tetrahydropyranyl	56.8/56.7	5.0/5.1	19.5/19.4	360.8
18	3-fluoroanilino	T	2-tetrahydropyranyl	55.3/55.5	4.4/4.5	20.1/19.9	348.8
19	3-chloroanilino	“cr	2-tetrahydropyranyl	52.8/53.0	4.2/4.2	19.2/19.0	365.2
20	3-methylanilino		2-tetrahydropyranyl	59.4/59.3	5.3/5.4	20.4/20.5	344.8
21	furfurylamino	Br	2-tetrahydropyranyl	47.6/47.4	4.3/4.4	18.5/18.4	379.2
22	benzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	52.6/52.8	4.7/4.5	18.0/18.1	389.3
23	(3-methyIbut-2-en-l-yl)amino	Br	2-tetrahydropyranyl	49.2/49.4	5.5/5.4	19.1/19.2	367.2
24	(E)-(4-hydroxy-3-methyIbut-2-en-1 - yl)amino	Br	2-tetrahydropyranyl	47.1/47.2	5.3/5.2	18.3/18.1	383.3
25	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino	Br	2-tetrahydropyranyl	47.1/47.0	5.3/5.3	18.3/18.3	383.3
26	3-tluorobenzylamino	~EF	2-tetrahydropyranyl	50.3/50.6	4.2/4.1	17.2/17.5	407.2
27	3,4-ditluorobenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	48.1/47.8	3.8/3.7	16.5/16.3	425.3
28	3-methoxybenzyIamino	br	2-tetrahydropyranyl	51.7/51.8	4.8/5.0	16.7/16.8	419.3
29	3-hydroxylbenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	50.5/50.2	4.5/4.5	17.3/17.1	405.3
30	3-chlorobenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	48.3/48.5	4.1/4.0	16.6/16.8	423.7
31	4-chlorobenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	48.3/48.5	4.1/3.9	16.6/16.9	423.7
32	2-bromobenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	43.7/43.4	3.7/3.9	15.0/14.9	468.2
33	3-jodobenzylamino	IF	2-tetrahydropyranyl	39.7/40.0	3.3/3.3	13.6/13.7	515.2
34	3-methylbenzylamino	IF	2-tetrahydropyranyl	53.7/53.6	5.0/5.1	17.4/17.6	403.3
35	2-methoxybenzylamino	T	2-tetrahydropyranyl	51.7/51.7	4.8/5.0	16.7/16.8	419.3
36	4-methoxylbenzylamino	“Bř“	2-tetrahydropyranyl	51.7/51.6	4.8/4.9	16.7/16.7	419.3
37	4-hydroxybenzylamino	“BF	2-tetrahydropyranyl	50.5/50.3	4.5/4.6	17.3/17.2	405.3
38	3.4-dichlorobenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	44.7/44.5	3.5/3.2	15.3/15.6	458.2
39	3.4-dihydroxybenzylamino	br	2-tetrahydropyranyl	48.6/48.4	4.3/4.1	16.7/17.1	421.3

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno / nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
40	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	Br	2-tetrahydropyranyl	49.8/50.1	4.6/4.5	16.1/16.0	435.3
41	3.4-dimethoxybenzylamino	“ΒΓ	2-tetrahydropyranyl	50.9/50.8	5.0/5.2	15.6/15.4	449.3
42	anilino	“BŤ“	2-tetrahydropyranyl	51.4/51.4	4.3/4.2	18.7/18.5	375.2
43	3-methoxyanilino	~Br~	2-tetrahydropyranyl	50.5/50.5	4.5/4.5	17.3/17.5	405.3
44	4-hydroxyanilino		2-tetrahydropyranyl	49.3/49.5	4.1/4.1	18.0/18.0	391.2
45	furfurylamino	1	2-tetrahydropyranyl	42.4/42.3	3.8/3.6	16.5/16.2	426.2
46	benzylamino	—T^-	2-tetrahydropyranyl	46.9/46.9	4.2/4.1	16.1/15.7	436.3
47	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	~Γ”	2-tetrahydropyranyl	43.6/43.5	4.9/4.9	17.0/17.4	414.3
48	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino	I	2-tetrahydropyranyl	42.0/42.1	4.7/4.6	16.3/16.2	430.3
49	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino	I	2-tetrahydropyranyl	42.0/42.1	4.7/4.8	16.3/16.5	430.3
50	3-tluorobenzylamino	~T“	2-tetrahydropyranyl	45.1/45.3	3.8/3.5	15.5/15.7	454.3
51	3-chlorobenzylamino	^—I^-	2-tetrahydropyranyl	43.5/43.8	3.7/3.8	14.9/15.1	470.7
52	3-methoxylbenzylamino	^—r~	2-tetrahydropyranyl	46.5/46.4	4.3/4.5	15.1/15.0	466.3
53	3-hydroxybenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	45.3/45.1	4.0/4.1	15.5/15.3	452.3
54	3.4-dihydroxybenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	43.7/43.8	3.9/3.7	15.0/14.8	468.3
55	3.4-difluorobenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	43.3/43.6	3.4/3.5	14.9/14.7	472.3
56	3.4-dimethoxybenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	46.1/46.4	4.5/4.7	14.1/14.3	496.3
57	4-hydroxybenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	45.3/45.2	4.0/4.1	15.5/15.6	452.3
58	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	1	2-tetrahydropyranyl	44.9/45.0	4.2/4.0	14.6/14.2	482.3
59	anilino	1	2-tetrahydropyranyl	45.6/45.8	3.8/3.9	16.6/16.3	422.2
60	4-hydroxyanilino	~r~	2-tetrahydropyranyl	44.0/44.3	3.7/3.8	16.0/16.2	438.2
61	3-methoxyanilino	^—Γ^-	2-tetrahydropyranyl	45.3/45.1	4.0/3.9	15.5/15.8	452.3
62	3-methylanilino	^—r~	2-tetrahydropyranyl	46.9/46.8	4.2/4.0	16.1/16.0	436.3
63	furfurylamino	ΤΓ	2-tetrahydrofuranyl	52.6/52.9	4.4/4.6	21.9/22.1	320.8
64	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino	Cl	2-tetrahydrofuranyl	51.9/52.2	5.6/5.4	21.6/21.5	324.8

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno / nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
65	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	TT	2-tetrahydrofuranyl	54.6/54.8	5.9/5.7	22.8/22.9	308.8
66	3.4-dihydroxybenzylamino	TT	2-tetrahydrofuranyl	53.1/53.5	4.5/4.6	19.4/19.2	362.8
67	3 4-ditluorobenzylamino	TT	2-tetrahydrofuranyl	52.5/52.8	3.9/3.8	19.2/19.0	366.8
68	3.4-dimethoxybenzylamino	TT	2-tetrahydrofuranyl	55.5/55.2	5.2/5.3	18.0/17.6	340.8
69	3-methoxy lbenzyl am ino	TT	2-tetrahydrofuranyl	56.8/56.7	5.0/5.1	19.5/19.7	360.8
70	3-hydroxybenzylamino	ΤΓ	2-tetrahydroturanyl	55.6/55.4	4.7/4.8	20.3/20.1	346.8
71	3-tluorobenzylamino	ΤΓ	2-tetrahydrofuranyl	55.3/55.6	4.4/4.4	20.1/19.8	348.8
72	furfurylamino	ΤΓ	2-tetrahydroturanyl	46.2/46.0	3.9/4.0	19.2/18.9	365.2
73	benzylamino	ΤΓ	2-tetrahydrofuranyl	51.4/51.3	4.3/4.1	18.7/18.5	375.2
74	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino	Br	2-tetrahydrofuranyl	45.7/45.7	4.9/4.5	19.0/19.2	369.2
75	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	ΤΓ	2-tetrahydrofuranyl	47.7/47.9	5.2/5.2	19.9/19.8	353.2
76	3-hydroxylbenzylamino	“Τ	2-tetrahydrofuranyl	44.0/44.1	3.7/3.8	16.0/16.1	438.2
77	4-hydroxybenzylamino	^—Γ^-	2-tetrahydrofuranyl	44.0/43.8	3.7/3.9	16.0/16.0	438.2
78	anilino	τ	2-tetrahydrofuranyl	44.2/44.1	3.5/3.6	17.2/17.5	408.2
79	3-hydroxyanilino	τ^-	2-tetrahydrofuranyl	42.6/42.5	3.3/3.1	16.6/17.0	424.2

Příklad 4: Přípravy 6-alkylaniino-8-substituovaiiých-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9// purinů

6-Furfurylamino-8-dimethylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 3) (229 mg, 0,69 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (3 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc a pak odpařen. Odparek byl rozpuštěn v chloroformu (6 ml), Vytřepán s vodou (2 x 7,5 ml), chloroformová vrstva vysušena Na₂SO₄ a odpařena. Surový produkt poskytl po krystalizací z ethyl-acetátu (6 ml) nažloutlou krystalickou látku. Výtěžek: 195 mg; 83 %. T. t.: 174-176°C. TLC R_f = 0,29 (chloroform : aceton 4:1). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 343 [M+H]⁺ (100); (CV 24) m/z (rel. %): 259 [Ci2Hi4N6O+H]⁺ (100). 343 [M+H]⁺ (89). 'H (500 MHz, DMSO-c/6): δ 1.47-1.61 (4H, m), 1.89-1.94 (1H, m), 2.85 (6H, s),

2.99-3.08 (1H, m), 3.58 (1H, dt, 7 = 11.3 Hz, 7= 2.45 Hz), 3.99 (1H, bd, 7= 11.31 Hz), 4.63 (2H, bs), 5.29 (1H, dd, 7= 11.30 Hz, 7= 2.14 Hz), 6.16 (1H, dd, 7= 3.06 Hz, 7= 0.61 Hz), 6.30 (1H, dd, 7= 3.06 Hz, J= 1.83 Hz), 7.47 (1H, dd, 7= 1.83 Hz, 7= 0.61 Hz), 7.56 (1H, t, 7 = 6.11 Hz), 8.06 (1H, s). ¹³C (125 MHz, DMSO-7₆): 23.5, 25.0, 28.0, 37.2, 42.8, 68.4, 83.3, 107.0, 110.9,117.4, 142.2, 150.5, 150.8, 152.7,153.9, 155.9.

8-(2-Ammoethylamino)-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 3) (0,40 g; 1,05 mmol) byl rozpuštěn v 1,2-diaminoethanu (3,0 ml). Roztok byl zahříván při 50 °C po dobu 35 min, poté ponechán za laboratorní teploty přes noc. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; gradientevá eluce s počáteční mobilní fází chloroform : methanol : NH₄OH (95:5:0,5) a konečnou mobilní fází chloroform : methanol : NH₄OH (9:1:0,1). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 0,36 g; 77 %. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 358 [M+H]⁺ (100), (CV 45) m/z (rel. %): 274 [C12Hi5N7O+H]⁺ (100), 358 [M+H]⁺ (37). ‘H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1.65-1.83 (4H, m, THP), 1.94-2.15 (2H, m, THP), 2.99 (1H, q, 7= 6.2 Hz, THP), 3.43-3.60 (3H, m, -NH-CH2-CH₂-), 3.77-3.68 (1H, m, NH-CH₂-CH₂-), 4.20 (1H, d, 7= 11,2 Hz, THP), 4.75-4.88 (3H, m, THP, -NH-CH₂-Fur), 5.72 (1H, d, 7= 9,7 Hz, THP ), 5.83 (1H, m, Fur), 6.29 (2H, d, 7= 9,7 Hz, Fur), 7.38 (1H, s, -NHCH₂-Fur), 8.19 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, CDC1₂): δ 22.04, 24.63, 29.22, 37.26, 40.70, 44.76, 68.82, 82.04,106.68, 109.86, 116.89,141.51, 148.11, 149.15, 150.65,151.32, 152.04.

6-Furfurylamino-8-(2-hydroxyethylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př 3) (0,30 g; 0,9 mmol) byl rozpuštěn v ethanolaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 80 °C po dobu 75 min. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol: NH₄OH, 95:5:0,5). Po vysušení v exikátoru s P₂Os je produktem nažloutlá pěna. Výtěžek: 0,18 g; 56 %. HPLC R_t = 12,5 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) X_max 283 nm, L_mj_n 243 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 359 [M+H]⁺ (100), 275 [Ci2Hi4N6O2+H]⁺ (8); (CV 40) m/z (rel. %): 275 [C]2H₁₄N₆O₂+H]⁺ (100). 359 [M+H]⁺ (19). *H (500 MHz, DMSO-J_d): δ 1.47-1.51 (1H, m), 1.54-1.63 (3H, m), 1.861.94 (1H, m), 2.47-2.54 (1H, m), 3.37-3.41 (2H, m), 3.56-3.57 (2H, bs), 3.60-3.65 (1H, m), 3.96-3.99 (1H, bd, 7= 10.39 Hz), 4.61-4.62 (2H, d), 4.75 (1H, bs), 5.49 (1H, dd, 7= 10.80

Hz, J= 2.32 Hz), 6.14-6.15 (1H, bd, J= 3.06 Hz), 6.28-6.32 (2H, m), 7.15-7.18 (1H, t), 7.467.47 (1H, m), 7.94 (1H, s). ^,3C (125 MHz, DMSO-í/₆): δ 23.1, 24.9, 28.9, 37.3, 45.3, 60.2,

68.5, 81.7, 106.8, 110.9, 117.6, 142.0,149.1, 149.5,151.3,151.8,154.2.

6-Furfurylamino-8-(3-hydroxypropylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purine 8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-977-purin (Př 3) (0,28 g; 0,8 mmol) byl rozpuštěn v 3-amino-l-propanolu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 6 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 85:15, na TLC chromatogramu R_f = 0.14). Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem nažloutlá pěna. Výtěžek: 0,28 g; 90 %. HPLC R_t = 11,6 min (65 % CH₃OH + 35 % pufr). UV (65 % CH₃OH + 35 % pufr) X_max 283 nm, λ_ηιίη 244 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 373 [M+H]⁺ (100), 289 [Ci3Hi6N6O2+H]⁺ (14). (CV 30) m/z (rel. %): 289 [Ci3Hi₆N₆O₂+H]⁺ (100), 373 [M+H]⁺ (82). ‘HNMR (300 MHz, CDC13): δ 1.51 (1H, m, THP H5'), 1.64 (3H, mm, THP H3', 4', 5'), 1.77 (2H, dui, J= 6.2, -NH-CH2-CH2-CH2-), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.56 (1H, qq, J= 11.8, 4.2, THP H3'), 3.45 (2H,J=t, 6.0, -NH-CH2CH2-CH2-), 3.53 (2H, t, J= 5.9, -NH-CH2-CH2-CH2-OH ), 3.65 (1H, tt, J= 11.3, 3.3, THP H5'), 4.01 (1H, d, J= 11.3, THP H6'), 4.67 (2H, d, 6.2, -NH-CH2-Fur), 4.68 (1H, bs, -OH), 5.52 (1H, dd, J= 11.2, 2.0, THP H2'), 6.19 (1H, d, J= 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 6.50 (1H, t, J= 5.5, HN8), 7.24 (1H, t, J= 6.2, HN6), 7.51 (1H, m, Fur H5'), 7.99 (1H, s, H2). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-í/č): δ 22.57 (THP C4'), 24.31 (THP C5'), 28.32 (THP C3'), 36.81 (NH-CH2-Fur), 31.93 (-NH-CH₂-CH₂-CH₂-), 39.98 (-NH-CH₂-CH₂-CH₂-), 58.94 (CH₂-CH₂-CH₂-NH₂), 67.94 (THP C6'), 81.12 (THP C2'), 106.34 (Fur C3'), 110.35 (Fur C4'), 117.12 (C5), 141.54 (Fur C5'), 148.48 (C2), 148.99 (C4), 150.70 (C6), 151.23 (C8), 153.70 (FurC2').

8-Allylamino-6-furfurylammo-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-977-purin (Př 3) (0,21 g; 0,64 mmol) byl rozpuštěn v allylaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 10 h. Reakční směs byla odpařena a odparek odpařen s methanolem (3x3 ml) a chloroformem (3x3 ml). Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1). Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem narezlá viskózní látka. Výtěžek: 0,13 g; 58 %. HPLC (průtok 0,6 ml/min) R_t = 23,5 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). MS ESI+ (CV 10)

.............

m/z (rel. %): 355 [M+H]⁺ (100), 709 [2M+H]⁺ (21), (CV 20) m/z (rel. %): 355 [M+H]⁺ (100), 271 [C13H14N6O+H]⁺ (24), *H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.51 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.65 (3H, mm, ΤΗΡ H3', 4', 5'), 1.94 (1H, d, J= 11.8, ΤΗΡ H4'), 2.63 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, THP H3'), 3.69 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.01 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.02 (2H, t, J= 5.5, -CH₂-CH=CH₂), 4.67 (2H, d, J - 6.2, -NH-CH₂-Fur), 5.09 (1H, dd, J= 10.3, 1.5, -CH₂-CH=CH₂), 5.21 (1H, dd, J= 17.2, 1.8, -CH₂-CH=CH₂), 5.53 (1H, dd, J= 11.2, 2.0, THP H2'), 5.99 (1H, m, -CH₂CH=CH₂), 6.19 (1H, d, J= 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 6.59 (1H, t, J= 5.9, HN8), 7.20 (1H, t, J = 6.2, HN6), 7.51 (1H, m, Fur H5'), 7.99 (1H, s, H2). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-í/é): δ 22.57 (THP C4'), 24.28 (THP C5'), 28.29 (THP C3'), 36.76 (NH-CH₂-Fur), 44.35 (-CH₂-CH=CH₂), 67.89 (THP C6'), 81.17 (THP C2'), 106.30 (Fur C3'), 110.27 (Fur C4'), 115, 01 (-CH₂-CH=CH₂), 117.09 (C5), 135.78 (-CH₂-CH=CH₂), 141.46 (Fur C5'), 148.51 (C2), 149.15 (C8), 150.77 (C6), 150.87 (C4), 153.64 (Fur C2').

6-Furfurylam ino-8-methoxy-9- (tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Terc-butoxid sodný (107 mg, 0,53 mmol) byl přidán k roztoku 8-chlor-6-furfurylamino-9(tetrahydropyran-2-yl)-977-purinu (264 mg, 0,79 mmol) (Př 3) v suchém methanolu (7 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 10 h, zfiltrován a filtrát odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1) a krystalován z ethyl-acetátu. Bílá krystalická látka. Výtěžek: 201 mg; 73 %. T. t.: 137-139 °C. MS ESI+ (CV 25) m/z (rel. %): 246 [CnHi₁N₅O₂+H]⁺ (100), 330 [M+H]⁺ (91). ^!H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 1.52 (1H, m, THP H5'), 1.60 (2H, mm, THP H4', 5'), 1.75 (1H, d, J =

11.8, THP H3'), 1.94 (1H, d, J= 11.8, THP H4'), 2.75 (1H, qq, J= 11.8, 4.2, THP H3'), 3.59 (1H, tt, J= 11.3, 3.6, THP H6'), 3.98 (1H, d, J= 11.3, THP H6'), 4.11 (3H, s, -OCH₃), 4.69 (2H, d, J = 6.2, -NH-CH₂-Fur), 5.46 (1H, dd, J = 11.2, 2.0, THP H2'), 6.21 (1H, d, J= 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 7.52 (1H, m, Fur H5'), 7.68 (1H, t, J= 6.2, HN6), 8.31 (1H, s, H2). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-í/₆): δ 22.67 (THP C4'), 24.47 (THP C5'), 27.94 (THP C3'), 36.72 (NH-CH₂-Fur), 57.08 (-OCH₃), 67.72 (THP C6'), 80.79 (THP C2'), 106.39 (Fur C3'), 110.30 (Fur C4'), 114.78 (C5), 141.58 (Fur C5'), 148.81 (C8), 150.58 (C2), 152.09 (C6), 153.23 (Fur C2'), 154.16 (C4).

6-Furfurylamino-8-propyloxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

8-Brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př 3) (303 mg; 0,80 mmol) byl rozpuštěn v 1-propanolu (5,0 ml). K roztoku byl přidán vodný roztok NaOH (0,41 g; 10,25 mmol; 13 ml). Reakční směs byla za energického míchání zahřívána při 60 °C přes noc a poté odpařena. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (10 ml), promyt vodou (3x10 ml), vysušen MgSO₄, zfiltrován a odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 3:2; na TLC chromatogramu R_f = 0,14). Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 187 mg; 65 %. HPLC R_t = 15,9 min (75 % CH₃OH + 25 % pufr). UV (75 % CH₃OH + 25 % pufr) X_max 257 nm, λ™„ 235 nm. MS ESI+ (CV 10) 358 [M+H]⁺ (100), (CV 25) m/z (rel. %): 330 [M+H]⁺ (100), 274 [Ci3Hi5N5O2+H]⁺ (97). *H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.00 (3H, t, J= 11.8, -CH₂CH₂CH₃), 1.56 (3H, m, THP H4', H5'), 1.80 (3H, m, THP H3', -CH₂CH₂CH₃), 1.96 (1H, d, J = 11.9, THP H4'), 2.75 (1H, qq, J= 12.0, 3.5, THP H3'), 3.59 (1H, tt, J= 11.5, 2.4, THP H6'), 3.98 (1H, d, J= 11.0, THP H6'), 4.46 (2H, q, J = 4.1, -CH₂CH₂CH₃), 4.69 (2H, d, J= 5.7, -NHCH₂-Fur), 5.47 (1H, dd, J= 11.1, 1.7, THP H2'), 6.20 (1H, d, J= 2.9, Fur H3'), 6.34 (1H, t, J = 2.3, Fur H4'), 7.52 (1H, s, Fur H5'), 7.59 (1H, t, J= 6.0, HN6), 8.31 (1H, s, H2). ^I3C-NMR (300 MHz, DMSO-í/₆): δ 10.06 (-CH₂CH₂CH₃), 21.61 (-CH₂CH₂CH₃), 22.71 (THP C4'), 24.22 (THP C5'), 27.97 (THP C3'), 36.90 (NH-CH₂-Fur), 67.72 (THP C6'), 71.34 (CH₂CH₂CH₃), 80.74 (THP C2'), 106.38 (Fur C3'), 110.28 (Fur C4'), 114.82 (C5), 141.56 (Fur C5'), 148.81 (C8), 150.48 (C2), 152.02 (C6), 153.25 (Fur C2'), 153.27 (C4).

8-Benzyloxy-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sodík (25 mg; 1,1 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (3 ml). K roztoku benzylalkoholátu byl přidán 8-brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-977-purin (206 mg; 0,54 mmol) (Př 3). Reakční směs byla zahřívána na 65 °C přes noc. Po ochlazení byla zředěna ethyletherem (8 ml). Precipitát byl odfiltrován, filtrát zahuštěn a čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 1:1; na TLC chromatogramu R_f= 0,09). Po sloupcové chromatografií byl viskózní produkt rozetřen s hexany a precipitát krystalován z methanolu. Bílá krystalická látka. Výtěžek: 43 mg; 20 %. T. t.: 132-135 °C. HPLC R_t = 13,8 min (80 % CH3OH + 20 % pufr), R_t = 21,3 min (75 % CH₃OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) X_max 268 nm, λ_ηιιη 236 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 406 [M+H]⁺ (100), 322 [Ci7H15N5O2+H]⁺ (17), (CV 40) m/z (rel. %): 322 [Ci7Hi₅N₅O₂+H]⁺(100), 254 [C13Hi2N5O]⁺ (27), 406 [M+H]⁺ (24). ‘H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.57 (2H, s, THPH5'), 1.56 (1H, mm, THP H4'), 1.77 (1H, d, J= 13.1, THP H3'), 1.94 (1H, d, J= 11.9, .:....- ........

ΤΗΡ Η4'), 2.76 (1Η, qq, J= 12.1, 3.3, ΤΗΡ H3'), 3.59 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.00 (1H, d, J = 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.71 (2H, d, J= 6.2, -NH-CH₂-Fur), 5.50 (1H, d, J= 10.7, ΤΗΡ H2'), 5.57 (2H, d, J= 1.4, O-CH₂-Ph), 6.21 (1H, m, Fur H3'), 6.34 (1H, s, Fur H4'), 7.41 (3H, m, HBn), 7.52 (3H, m, Fur H5', HBn), 7.69 (1H, t, J = 5.6, HN6), 8.15 (1H, s, H2). ^I3C-NMR (300 MHz, DMSO-</₆): δ 22.63 (ΤΗΡ C4'), 24.51 (ΤΗΡ C5'), 28.00 (ΤΗΡ C3'), 36.90 (NH-CH₂Fur), 71.02 (-OCH₂-Ph), 67.72 (THP C6'), 80.84 (THP C2'), 106.44 (Fur C3'), 110.30 (Fur C4'), 114.82 (C5), 127.79 (Ph), 128.23 (Ph), 128.44 (Ph), 135.61 (Ph), 141.60 (Fur C5'), 148.81 (C8), 150.66 (C2), 152.13 (C6), 153.20 (Fur C2'), 154.16 (C4).

6-Furfurylamino-8-methylsulfanyl-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Methanthiolát sodý (0,28 g; 4,00 mmol) byl přidán k roztoku 8-brom-6-furfurylamino-9(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purinu (0,76 g; 2,01 mmol) (Př 3) ve 2-propanolu (8 ml). Reakční směs byla zahřívána při 45 °C po dobu 2,5 h, poté odpařena. Odparek byl extrahován směsí voda (6 ml) a ethyl-acetát (7 ml). Vodná vrstva byla pak reextrahována ethyl-acetátem (1x7 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny Na₂SO₄, zfiltrovány and odpařeny. Surový krystalický produkt (0,67 g; 96 %) byl krystalován z 2-propanolu (9 ml) and ethanolu (8 ml). Světle žlutohnědá krystalická látka. T. t: 153-156 °C. HPLC R_t = 10,3 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr). UV (80 % CH3OH + 20 % pufr) λ_π1ί1χ 285 nm, λ_ηιιη 250 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 716 [2M+Na]⁺ (100), 346 [M+H]⁺ (97), (CV 25) m/z (rel. %): 716 [2M+Na]⁺ (100), 346 [M+H]⁺ (82), 262 [ChHhN₅OS+H]⁺ (24), ’H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 1.54 (1H, m, THP H5'), 1.61 (1H, m, THP H4'), 1.75 (1H, dd, J= 11.8, 4.2, THP H3'), 1.95 (1H, d, J =

11.8, THP H4'), 2.69 (3H, d, J = 0.7, -SCH₃), 2.71 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, THP H3'), 3.64 (1H, tt, J- 11.3, 3.6, THP H6'), 4.03 (1H, d, J= 11.3, THP H6'), 4.73 (2H, bs, -NH-CH₂Fur), 5.59 (1H, dd, J= 11.2, 2.0, THP H2'), 6.23 (1H, dd, J= 3.1, 0.7, Fur H3'), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 7.94 (1H, t, J = 6.2, HN6), 8.16 (1H, s, H2). ¹³C-NMR (300 MHz, DMSO-í/tf): δ 14.25 (-SCH₃₎ 22.41 (THP C4'), 24.40 (THP C5'), 28.45 (THP C3'), 36.47 (NH-CH₂-Fur), 67.98 (THP C6'), 82.38 (THP C2'), 106.57 (Fur C3'), 110.33 (Fur C4'), 118.96 (C5), 141.96 (Fur C5'), 149.01 (C8), 150.88 (C4), 151.23 (C2), 152.28 (C6), 152.69 (FurC2').

8-Dimethylamino-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97/-purin (Př 3) (206 mg;

0,56 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (3 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc a pak odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 95:5). Nažloutlá krystalická látka. Výtěžek: 169 mg; 91 %. T. t.: 76-79°C. HPLC (průtok 0,6 ml/min) R_t = 34,7 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) Z_max 281 nm, 245 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %); 247 [Ci₂Hi₈N6+H]⁺ (100), 331 [M+H]⁺ (90); (CV 20) m/z (rel. %): 247 [Ci2Hi8N6+H]⁺ (100), 331 [M+H]⁺ (37). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.58 (3H, mm, ΤΗΡ, H4', 5'), 1.65 (3H, s, =C-CH₃), 1.67 (1H, d,J= 11.8, ΤΗΡ H3'), 1.69 (3H, s, =C-CH₃),

I. 94 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 2.88 (6H, s, -N-(CH₃)₂), 3.09 (1H, m, ΤΗΡ H3'), 3.61 (1H, tt, J =

II. 3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 4.03 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.05 (2H, t, J= 6.2, -NH-CH₂-CH=), 5.28 (1H, t, J= 6.2, -CH₂-CH=), 5.32 (1H, dd, J= 11.2, 2.0, ΤΗΡ H2'), 7.15 (1H, t, J= 6.2, N⁶H), 8.07 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-ífy): δ 17.74 (=C-CH₃), 22.86 (THP C4'), 24.46 (THP C5'), 25.30 (=C-CH₃), 27.43 (THP C3'), 37.78 (-NH-CH₂-), 42.21 (-N-(CH₃)₂), 67.78 (THP C6'), 82.68 (THP C2'), 116.61 (C5), 122.56 (-CH=), 132.69 (=C<), 149.56 (C8), 150.40 (C2), 152.37 (C6), 155.02 (C4).

8-(2-Ammoethylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylammo)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př 3) (296 mg; 0,81 mmol) byl rozpuštěn v 1,2-diaminoethanu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C pod atmosférou argonu po dobu 5 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol: NH₄OH, 95:5:0,5; na TLC chromatogramu Rf = 0,19). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem bílá pěna. Výtěžek: 260 mg; 93 %. HPLC R_t = 12,8 min (50 % CH₃OH + 50 % pufr). UV (50 % CH₃OH + 50 % pufr) λ_ηΐ3χ 282 nm, X_mj_n 241 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 346 [M+H]⁺ (100), 262 [C12H18N7+H]⁺ (12); (CV 30) m/z (rel. %); 262 [Ci2Hi₈N₇+H]⁺ (100), 346 [M+H]⁺ (59). ’H NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 1.52 (1H, m, THP H5'), 1.63 (1H, m, THP H4'), 1.64 (1H, m, THP H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.67 (1H, m, THP H3'), 1.69 (3H, s, -CH3), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.59 (1H, qq, J= 11.7, 4.0 Hz, THP H3'), 2.84 (1H, tt, J = 6.2, 2.2 Hz, -CH2CH2NH2), 3.42 (3H, m, -CH2CH2NH2), 3.52 (2H, m, CH2CH2NH2), 3.66 (1H, t, J= 11.7 Hz, THP H6'), 4.02 (1H, m, THP H6'), 4.4 (2H, s (br), NH-CH2-CH=), 5.28 (1H, t, 6.8, -NH-CH2-CH=), 5.51 (1H, d, J = 11.7 Hz, THP H2'), 6.48 (1H, t, 6.0 Hz, -NH-CH2-CH2-), 6.81 (1H, t, J= 6.0 Hz, -NH-CH2-CH=), 7.97 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-ífy): δ 17.77 (-CH3), 22.58 (THP C4'), 24.38 (THP C5'),

25.38 (-CH₃), 28.32 (THP C3'), 37.88 (-NH-CH₂-CH=), 40.57 (-CH₂CH₂NH₂), 44.37 (-NHCH₂CH₂-), 67.90 (THP C6'), 81.18 (THP C2'), 116.86 (C5), 122.87 (-CH=) , 132.60 (CH₂CH=C), 148.50 (C8), 148.77 (C2), 150.88 (C4), 151.07 (C6).

8-(3-Aminopropylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 3) (331 mg; 0,90 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml), 1,3-diaminopropanu (1,4 ml; 16,7 mmol) a triethylaminu (0,15 ml; 1,1 mmol). Roztok byl zahříván při 65 °C pod atmosférou argonu po dobu 16 h. Po ochlazení byla reakční směs umístěna na 3 h do lednice. Vyloučené bílé krystaly solí byly odfiltrovány. Filtrát byl zahuštěn a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH₄OH, 9:1:0,1; na TLC chromatogramu R_f = 0,21). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 252 mg; 78 %. HPLC R_t = 14,0 min (50 % CH₃OH + 50 % pufr). UV (50 % CH₃OH + 50 % pufr) U 283 nm, Zmiň 243 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 360 [M+H]⁺ (100), 276 [Ci3H20N7+H]⁺(13); (CV 45) m/z (rel. %): 276 [Ci3H₂₀N₇+H]⁺ (100), 208 [C8H14N7]⁺ (45), 360 [M+H]⁺ (28). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.49 (1H, m, THP H5'), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', -CH₂CH₂CH₂NH₂), 1.65 (3H, s, -CH₃), 1.68 (3H, s, -CH₃), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.57 (1H, qq, J= 12.0, 4.4, THP H3'), 2.64 (2H, t, J= 6.3, -CH₂CH₂CH₂NH₂), 3.42 (2H, q, J= 6.3, CH₂CH₂CH₂NH₂), 3.64 (1H, t, J= 10.6, THP H6'), 4.03 (3H, m, THP H6', -NH-CH₂-CH=), 5.29 (1H, t, J = 6.5, -NH-CH₂-CH=), 5.49 (1H, d, J= 9.8, THP H2'), 6.65 (1H, bs, N⁸H-), 6.77 (1H, t, J= 5.7, -N⁶H), 7.95 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-c/₆): δ 17.71 (CH₃), 22.56 (THP C4'), 24.27 (THP C5'), 25.33 (-CH₃), 28.22 (THP C3'), 32.23 (CH₂CH₂CH₂NH₂), 37.82 (-NH-CH₂-CH=), 39.51 (-CH₂CH₂NH₂), 40.55 (-NH-CH₂CH₂-), 67.83 (THP C6'), 81.01 (THP C2'), 116.96 (C5), 122.95 (-CH=), 132.37 (-CH₂CH=C<), 148.48 (C8), 148.50 (C2), 150.93 (C4), 150.93 (C6).

8-(4-Aminobutylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin^ 8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př 3) (331 mg; 0,90 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml), 1,4-diaminobutanu (0,9 ml; 9,0 mmol) a triethylaminu (0,15 ml; 1,1 mmol). Roztok byl zahříván při 65 °C pod atmosférou argonu dva dny. Reakční směs byla odpařena a odparek sušen v exikátoru s P₂O5. Prokrystalovaná směs byla rozpuštěna v budoucí mobilní fázi (5 ml), krystaly odfiltrovány a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 264 mg; 78 %. HPLC R_t = 18,2 min (50 % CH₃OH + 50 % pufr), R_t = 8,3 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (50 % CH3OH + 50 % pufr) X_max 283 nm, λ_ηιιη 243 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 374 [M+H]⁺(100), 290 [Ci4H22N7+H]⁺ (71); (CV 45) m/z (rel. %): 290 [Ci4H₂₂N₇+H]⁺, (100), 374 [M+H]⁺ (36), 222 [C9Hi6N7]⁺ (13). *H NMR (300 MHz, DMSO-76): δ 1.39 (2H, p, J= 7.5, NHCH₂CH₂CH₂-), 1.50 (1H, d, J = 7.5, THP H5'), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', NHCH₂CH₂CH₂CH₂_), 1.65 (3H, s, -CH₃), 1.68 (3H, s, -CH₃), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.56 (3H, t, 7= 6.8, THP H3', -NHCH₂CH₂CH₂CH₂.), 3.34 (2H, t, 7= 9.0, -CH₂CH₂CH₂-NH₂),

3.65 (1H, t, 7= 10.5, THP H6'), 4.03 (3H, m, THP H6', -NH-CH₂-CH=), 5.29 (1H, t, 7= 6.8, -NH-CH₂-CH=), 5.48 (1H, d, 7= 10.5 Hz, THP H2'), 6.40 (1H, t, 7= 6.8, -NHCH₂CH₂), 6.77 (1H, t, 7= 5.6, -NH-CH₂-CH=), 7.95 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-7_d): δ 17.71 (CH₃), 22.66 (THP C4'), 24.27 (THP C5'), 25.33 (-CH₃), 26.54 (Bu), 28.24 (THP C3'), 30.64 (Bu), 37.82 (-NH-CH₂-CH=), 41.40 (Bu), 42.19 (Bu), 67.83 (THP C6'), 81.06 (THP C2'), 117.03 (C5), 122.95 (-CH=), 132.37 (-CH₂CH=C<), 148.49 (C8), 148.67 (C2), 150.89 (C4), 151.00 (C6).

8-(6-Ammohexylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 3) (321 mg; 0,88 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml). K roztoku byl přidán 1,6-diaminohexan (1,0 g; 8,7 mmol). Reakční směs byla zahřívána při 65 °C pod atmosférou argonu 4 dny. Poté byla odpařena a odparek sušen v exikátoru s P₂O₅. Prokrystalovaná směs byla rozpuštěna v budoucí mobilní fázi (4 ml), krystaly odfiltrovány a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH₄OH, 9:1:0,1). Produktem je nažloutá sklovitá látka. Výtěžek: 289 mg; 82 %. HPLC R_t = 11,8 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) X_max 285 nm, X_min 244 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 402 [M+H]⁺ (100), 318 [Ci6H26N7+H]⁺ (36); (CV 35) m/z (rel. %): 250 [CnH20N₇]⁺(100), 318 [Ci6H26N7+H]⁺, (90), 402 [M+H]⁺ (26)?H NMR (300 MHz, DMSO-76): δ 1.32 (6H, p, 7 = 7.5, HPř), 1.50 (1H, d,7= 7.3, THP H5'), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', HPř),

1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH₃), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.50 (2H, q, 7= 1.8, HPř), 2.60 (1H, m, THP H3'), 3.34 (2H, q, 7= 7.1, HPř), 3.65 (1H, t, 7= 11.0 Hz, THP H6'), 3.99 (2H, bs, -NH-CH₂-CH=), 4.05 (1H, d, 7= 7.1, THP H6'), 5.29 (1H, t, 7 = 6.3, -NH-CH₂

CH=), 5.49 (ÍH, d, 7 = 10.4, THP H2'), 6.30 (1H, t, J = 5.6, -N⁸H), 6.81 (1H, t, 7= 5.9, -NHCH2-CH=), 7.95 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-7d): δ 17.70 (-CH₃), 22.57 (THP C4'), 24.32 (THP C5'), 25.32 (-CH₃), 28.24 (THP C3'), 26.11 (HPř), 26.32 (HPř), 28.95 (HPř), 33.23 (HPř), 37.84 (-NH-CH₂-CH=), 41.52 (HPř), 42.14 (HPř), 67.83 (THP C6'), 81.05 (THP C2'), 117.02 (C5), 122.95 (-CH=), 132.36 (-CH₂CH=C<), 148.50 (C8), 148.67 (C2), 150.87 (C4), 150.96 (C6).

8-(2-Hydroxyethylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purm 8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př 3) (246 mg; 0,67 mmol) byl rozpuštěn v ethanolaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 80 °C po dobu 1,5 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol, 95:5). Po vysušení v exikátoru s P₂0s je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 180 mg; 76 %. HPLC (průtok 0,6 ml/min) R_t = 14,4 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) k_max 284 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 347 [M+H]⁺ (100), 263 [C12Hi9N6O+H]⁺ (26); (CV 35) m/z (rel. %): 347 [M+H]⁺ (100), 263 [Ci2Hi₉N₆O+H]⁺ (100). *H (500 MHz, DMSO-7d): 1.46-1.49 (1H, m), 1.56-1.63 (9H, m), 1.87-1.88 (1H, m), 2.45-2.50 (m, 1H), 3.36-3.40 (2H, m), 3.55-3.62 (3H, m), 3.96-3.99 (3H, m), 5.23-5.28 (1H, m), 5.48 (1H, dd, 7= 10.70 Hz, 7= 1.83 Hz), 6.26 (1H, t, 7=5.50 Hz), 6.71 (1H, t, 7= 6.11 Hz), 7.92 (1H, s). ¹³C (125 MHz, DMSO-7d): 18.3, 23.0,

24.9, 25.9, 28.9, 38.4, 45.3, 60.2, 68.3, 68.5, 81.8, 117.4,123.4, 133.1, 149.3, 151.6,151.7.

8-Amino-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Amino-6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (72 mg; 0,28 mmol) a 3-methylbut-2-enl-ylamin»HCl (60 mg; 0,55 mmol) byly rozpuštěny v 1-propanolu (5 ml) a diisopropylethylaminu (194 μΐ, 1,13 mmol). Reakční směs byla zahřívána při 110 °C po 90 h, poté odpařena, odparek smísen s budoucí mobilní fází (ethyl-acetát : aceton : NH₄OH, 9:1:0,1). Vyloučené krystaly byly odfiltrovány, filtrát odpařen a odparek čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze ethyl-aceát : aceton : NH4OH, 9:1:0,1). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 21 mg; 24 %. HPLC R_t = 12,3 min (70 % CH₃OH + 30 % pufr). UV (70 % CH₃OH + 30 % pufr) k_max 280 nm, X_min 239 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 303 [M+H]⁺ (100), 219 [Ci0Hi4N6+H]⁺ (13); (CV 40) m/z (rel. %): 219 [Ci0Hi₄N₆+H]⁺ (100), 303 [M+H]⁺ (77), 163 [C6H7N6]⁺ (12). 'H NMR (300 MHz, DMSO-7d): δ 1.49 (1H, d, 7 =

7.6, ΤΗΡ Η5'), 1.64 (3Η, m, ΤΗΡ Η3', Η4', Η5'), 1.64 (3Η, s, -CH₃), 1.66 (3H, s, -CH₃), 1.93 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 2.64 (1H, d, J= 11.4, ΤΗΡ H3'), 3.65 (1H, t, J= 10.5 Hz, ΤΗΡ H6'), 3.98 (1H, s, ΤΗΡ H6'), 4.03 (2H, d, J = 5.6, -NH-CH₂-CH=), 5.27 (1H, t, J= 7.6, -NH-CH₂-CH=),

5.48 (1H, d, J= 10.5, ΤΗΡ H2'), 6.31 (2H, s, -N⁸H₂), 6.71 (1H, t, J= 5.7, -NH-CH₂-CH=),

7.95 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-íZ₆): δ 17.77 (-CH₃), 22.60 (THP C4'), 24.30 (THP C5'), 25.31 (-CH₃), 28.21 (THP C3'), 37.96 (-NH-CH₂-CH=), 67.77 (THP C6'), 81.18 (THP C2'), 116.99 (C5), 122.92 (-CH=), 132.39 (-CH₂CH=C), 148.43 (C8), 148.43 (C2),

150.95 (C4), 151.02 (C6).

8-Methoxy-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Terc-butoxid draselný (103 mg, 0,53 mmol) byl přidán k roztoku 8-brom-6-(3-methylbut-2en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/f-purinu (248 mg, 0,68 mmol) (Př 3) v suchém methanolu (2 ml). Roztok byl zahříván při 45 °C po dobu 13 h. Po ochlazení byla reakční směs umístěna přes noc do lednice, poté zfiltrována a filtrát odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton 9:1; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem světle žlutá viskózní látka. Výtěžek: 170 mg; 79 %. HPLC R_t = 10,8 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr). MS ESI+ (CV 12) m/z (rel. %): 318 [M+H]⁺ (100); (CV 25) m/z (rel. %): 234 [ChHi₅N₅O+H]⁺ (100). 318 [M+H]⁺ (76).

8-(3-Aminopropyloxy)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin Hydrid sodný v minerálním oleji (34 %) (67 mg; 0,95 mmol) byl rozpouštěn pod argonovou atmosférou ve směsi 3-amino-l-propanolu (66 μΐ; 0,86 mmol) a dimethylformamidu (5 ml) po dobu 1,5 h. Poté byl přidán 8-chlor-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)9H-p urine (Př 3) (214 mg; 0,66 mmol). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty 4 dny, odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; gradientová eluce počínající chloroformem jako mobilní fází a končící mobilní fází chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1). Po vysušení v exikátoru s P₂O₃ je produktem žlutá viskózní látka. Výtěžek: 156 mg; 65 %. HPLC R_t = 7,7 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) X_max 268 nm, X_min 233 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 361 [M+H]⁺ (100); 277 [Ci3H20N6O+H]⁺ (15). (CV 29) m/z (rel. %): 277 [C13H₂₀N₆O+H]⁺ (100), 361 [M+H]⁺ (96); 220 [Ci0H,3N5O+H]⁺ (38). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.52 (1H, m, THP H5'), 1.64 (2H, m, THP H4', H5'), 1.65 (3H, s, -CH₃), 1.68 (3H, s, -CH₃), 1.75 (1H, m, ΤΗΡ H3'), 1.85 (2H, t, J = 6.5, -OCH2CH2CH2NH2), 1.94 (1H, m, THP H4'), 2.70 (2H, t, J = 6.6, OCH2CH2CH2NH2), 2.73 (1H, m, THP H3'), 3.56 (1H, m, THP H6'), 3.97 (1H, d, J = 11.3, THP H6), 4.05 (2H, bs, -NH-CH₂-CH=), 4.53 (2H, q, J= 5.4, -OCH2CH2CH2NH2), 5.28 (1H, t, J= 6.5, -NH-CH₂-CH=), 5.44 (1H, d, J= 9.5, THP H2'), 7.26 (1H, t, J= 5.7, -N⁶H), 8.10 (1H, s, H2). ¹³C NMR (300 MHz, DMSO-7₆): δ 17.71 (-CH₃), 22.72 (THP C4'), 24.53 (THP C5'), 25.30 (-CH₃), 27.98 (THP C3'), 32.03 (-OCH2CH2CH2NH2), 38.00 (-NH-CH₂-CH=), 67.71 (THP C6'), 68.06 (-OCH₂CH₂CH₂NH₂), 80.68 (THP C2'), 114.62 (C5), 122.50 (-CH=), 132.72 (-CH₂CH=C<), 150.61 (C8), 150.61 (C2), 152.17 (C4), 153.48 (C6).

(E)-8-Dimethylamino-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)9H-purin (E)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př 3) (234 mg; 0,69 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (2,5 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty 2 dny a pak odpařen. Surový produkt byl extrahován směsí ethyl-acetát : voda (1:1, 6 ml). Vodná vrstva byla re-extrahována ethylacetátem (2x3 ml). Spojené ethyl-acetátové vrstvy byly vysušeny MgSO₄ a odpařeny. Produktem je po vysušení v exikátoru s P₂O₅ bílá krystalická látka. Výtěžek: 217 mg; 90 %. T. t.: 110-114°C. HPLC R_t = 13,8 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr). UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) 7_max 281 nm, 7_min 245 nm. MS ESI+ (methanol) (CV 25) m/z (rel. %): 347 [M+H]⁺(100), 715 [2M+Na]⁺ (71), 263 [C]2Hi8N6O+H]⁺ (15); (CV 40) m/z (rel. %): 369 [M+Na]⁺(100), 347 [M+H]⁺ (88), 263 [Ci2Hi₈N₆O+H]⁺ (88), 715 [2M+Na]⁺ (53). ’H NMR (300 MHz, DMSO-c/č): δ 1.49 (1H, m, THP, H5'), 1.56 (1H, m, THP, H4'), 1.61 (1H, m, THP, H3'),1.66 (3H, s, =C-CH3), 1.67 (1H, m, THP H3'), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.88 (6H, s, -N-(CH3)2), 3.09 (1H, qq, J= 12.1, 3.6, THP H3'), 3.61 (1H, tt, J= 11.3, 3.6, THP H6'), 3.78 (2H, d, J = 5.7, -CH2-OH), 4.03 (1H, d, 7=11.3, THP H6'), 4.11 (2H, t, J= 5.7, -NH-CH2-CH=), 4.71 (1H, t, J= 5.7, -OH), 5.32 (1H, dd, 7= 11.3, 2.2, THP H2'), 5.50 (1H, tt,7= 6.7, 1.7, -CH2CH=), 7.20 (1H, t, 7 = 5.7, N⁶H), 8.08 (1H, s, H2). ^I3C NMR (300 MHz, DMSO-76): δ 13.57 (=C-CH₃), 22.90 (THP C4'), 24.49 (THP C5'), 27.47 (THP C3'), 37.42 (-NH-CH₂-), 42.23 (N-(CH₃)₂), 65.88 (-CH2-OH), 67.84 (THP C6'), 82.74 (THP C2'), 116.68 (C5), 121.17 (CH=), 132.91 (=C<), 149.57 (C4), 150.44 (C2), 152.44 (C6), 155.10 (C8).

(E)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (E)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/f-purin (Př 3) (190 mg; 0,56 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (1,6 ml). K roztoku byl přidán 30% vodný roztok NaOH (1,6 ml). Reakční směs byla za energického míchání zahřívána při 60 °C 0,5 h a poté odpařena. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (5 ml), promyt vodou, vysušen MgSO₄, zfiltrován a odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1; na TLC chromatogramu R_f = 0,10). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 83 mg; 44 %. T. t.: 126 - 130 °C. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 334 [M+H]⁺(100); (CV 30) m/z (rel. %): 250 [CiiH₁₅N₅O₂+H]⁺ (100), 334 [M+H]⁺ (40).

(E)-8-Benzyloxy-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin

Sodík (120 mg; 5,2 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (5 ml). K roztoku benzylalkoholátu byl přidán (E)-8-brom-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př 3) (192 mg; 0,50 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 65 °C po 2 dny. Po ochlazení byla zředěna směsí chloroform : aceton (75:25, 5 ml). Prepcipitát byl odfiltrován a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 75:25; na TLC chromatogramu R_f = 0,14). Produktem je po vysušení v exikátoru s P₂O₅ nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 20 mg; 10 %. HPLC R_t = 9,3 min (80 % CH₃OH + 20 % pufr), R_t = 18,9 min (70 % CH₃OH + 30 % pufr). UV (70 % CH3OH + 30 % pufr) 7_max 268 nm, X_min 233 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 410 [M+H]⁺(100); (CV 40) m/z (rel. %): 326 [Ci7Hi9N5O2+H]⁺ (100), 406 [M+H]⁺ (49). ’H (500 MHz, DMSO-76): δ 1.46-1.48 (2Η, m), 1.54-1.60 (1H, m), 1.61 (3H, s). 1.70-1.75 (1H, m), 1.821.90 (1H, m), 2.71 (1H, dq, 7=11.31 Hz, J= 3.97 Hz), 3.51-3.56 (1H, m), 3.73 (2H, s), 3.923.94 (1H, m), 4.08 (2H, bs), 4.66 (1H, bs), 5.43-5.53 (4H, m), 7.26-7.40 (4H, m), 7.48 (2H, d, 7= 7.03 Hz), 8.07 (1H, s). ¹³C (125 MHz, DMSO-7₆): δ 14.8, 23.2, 25.1, 28.6, 38.0, 66.4, 68.1, 68.3, 71.5, 81.4, 115.2, 121.6, 128.3, 128.8, 129.0, 136.2, 137.5, 151.4, 152.9, 153.8.

6-Benzylamino-8-benzyloxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin

Sodík (40 mg; 1,7 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (1 ml). K roztoku benzylalkoholátu byl přikapán roztok 8-brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7purinu (Př 3) (387 mg; 1,00 mmol) v dimethylformamidu (3,0 ml). Reakční směs byla míchána pod atmosférou argonu 4,5 h. Reakce byla ukončena přikapáním ledové kyseliny octové (2 kapky) a odpařena. Surový produkt ve formě bílé pevné látky byl triturován s ethylacetátem (10 ml), směs zahřáta ve vroucí vodní lázni a zfíltrována. Po dvou dnech v lednici byl produkt odfiltrován. Po vysušení v exikátoru s P₂O₅ je produktem bílá krystalická látka. Výtěžek: 267 mg; 64 %. T. t: 149-151 °C. HPLC R_t = 13,0 min (85 % CH₃OH + 15 % pufr). UV (85 % CH₃OH + 15 % pufr) λ™_χ 269 nm, λ,_ηιη 234 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 416 [M+H]⁺ (100); (CV 50) m/z (rel. %): 332 [C17Hi7N5O+H]⁺ (100), 416 [M+H]⁺ (13). *H NMR (300 MHz, DMSO-ď6): δ 1.51 (2H, m, ΤΗΡ H5'), 1.65 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 1.77 (1H, d, J= 13.1, ΤΗΡ H3'), 1.93 (1H, d, J= 12.3, ΤΗΡ H4'), 2.76 (1H, qq, J= 12.1, 3.6, ΤΗΡ H3'), 3.58 (1H, m, H6'), 4.05 (1H, d, J= 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.72 (2H, d, J= 1.7, NH-CH₂-Ph), 5.50 (1H, dd, J= 11.1, 1.7, ΤΗΡ H2'), 5.58 (2H, d, J= 11.3, O-CH₂-Ph), 7.19 (1H, m, J= 6.8, 2.3, Ph H4'), 7.35 (7H, m, Ph), 7.52 (2H, m, Ph), 8.11 (1H, s, H2), 7.82 (1H, bs, N⁶H). ^I3C-NMR (300 MHz, DMSO-í/d): δ 22.64 (ΤΗΡ C4'), 24.52 (ΤΗΡ C5'), 28.01 (ΤΗΡ C3'), 43.18 (NHCH₂-Ph), 67.72 (THP C6'), 71.01 (OCH₂Ph), 80.84 (THP C2'), 114.56 (C5), 126.41 (Ph C4'), 127.09 (2x) (Ph), 127.78 (2x) (Ph), 128.04 (2x) (Ph), 128.22 (Ph), 128.43 (2x) (Ph), 135.62 (Ph), 140.37 (Ph), 150.76 (2x) (Pur), 152.39 (Pur), 153.41 (Pur).

8-(4-Aminobutylamino)-6-benzylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin 8-Brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př 3) (400 mg; 1,03 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (5,5 ml), 1,4-diaminobutanu (1,0 ml; 9,95 mmol) a diisopropylethylaminu (0,18 ml; 1,03 mmol). Roztok byl zahříván při 80 °C pod atmosférou argonu přes noc. Reakční směs byla odpařena. Odparek byl rozpuštěn ve směsi chloroform : methanol 4:1 (5 ml), zfiltrován a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH₄OH, 85:15:1,5 na TLC chromatogramu Rf = 0,18). Po vysušení v exikátoru s P₂O₃ je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 373 mg; 92 %. HPLC R_t = 13,0 min (60 % CH₃OH + 40 % pufr), R_t = 18,6 min (50 % CH₃OH + 50 % pufr), UV (60 % CH₃OH + 40 % pufr) 7_max 285 nm, λ_ηιιη 244 nm. *H NMR (300 MHz, DMSO-íZ₆): δ 1.40 (2H, p, J= 7.2, Bu), 1.50 (1H, d, J = 7.3, THP H5'), 1.63 (5H, m, THP H3' H4' H5', Bu), 1.93 (1H, bs, THP H4'), 2.56 (2H, t, J= 6.8, Bu), 2.57 (1H, qq, covered, THP H3'), 3.35 (2H, m, Bu), 3.65 (1H, t, J= 10.6, THP H6'), 4.01 (1H, d, J= 10.8, THP H6'), 4.68 (2H, d, J= 5.5, NH-CH₂-Ph), 5.50 (1H, d, J= 9.9, THP H2'), 6.43 (1H, bs, N⁸H), 7.18 (1H, t, J= 6.9, N⁶H), 7.32 (5H, m, Ph), 7.94 (1H, s, H2). ¹³C-NMR (300 MHz,

DMS0-í4): δ 22.57 (THP C4'), 24.32 (THP C5'), 26.53 (Bu), 28.25 (THP C3'), 41.34 (Bu),

42.22 (Bu), 43.16 (NH-CH₂-Ph), 67.84 (THP C6'), 81.11 (THP C2'), 117.02 (C5), 126.29 (Ph

C4'), 127.13 (2x) (Ph), 127.96 (2x) (Ph), 140.85 (Ph), 148.45 (Pur), 148.92 (Pur), 150.96 (Pur), 151.05 (Pur).

Tabulka 2: Sloučeniny připravené dle Příkladu 4

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
80	furfurylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	59.6/59.5	6.5/6.4	24.5/24.7	343.4
81	benzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	64.8/64.9	6.9/6.7	23.9/24.1	353.4
82	(Z)-(4-hydroxy-3 -methylbut-2- en-l-yl)amino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	58.9/58.6	7.6/7.8	24.3/24.2	347.4
83	(4-hydroxy-3- methylbutyl)amino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	58.6/58.7	8.1/8.2	24.1/24.4	349.5
84	2-tluorobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	61.6/61.8	6.3/6.5	22.7/22.5	371.4
85	3-fluorobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	61.6/61.7	6.3/6.4	22.7/22.6	371.4
86	3-chlorobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	59.0/59.0	6.0/5.8	21.7/21.5	387.9
87	3-bromobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	52.9/52.7	5.4/5.2	19.5/19.0	432.3
88	3-iodobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	47.7/47.9	4.9/5.1	17.6/17.4	479.3
89	4-methylbenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	65.6/66.0	7.2/7.1	22.9/23.4	367.5
90	2-methoxylbenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	62.8/63.0	6.9/7.0	22.0/22.2	383.5
91	3-methoxylbenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	62.8/62.8	6.9/6.9	22.0/21.9	383.5
92	3,4-dichlorobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	54.2/54.1	5.3/5.5	20.0/20.4	422.3
93	2-hydroxy-3- methoxybenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	60.3/60.1	6.6/6.5	21.1/21.3	399.5
94	3,4-dimethoxybenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	61.2/61.5	6.8/6.9	20.4/20.1	413.5
95	aniline	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	63.9/64.2	6.6/.6.9	24.8/24.7	339.4
96	3-tluoroanilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	60.6/60.8	5.9/9.1	23.6/23.8	357.4
97	2-chloroanilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	58.0/58.2	5.7/5.4	22.5/22.3	373.9
98	3-methoxyanilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	61.9/62.3	6.6/6.5	22.8/22.7	369.4

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
99	3-methylanilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydropyranyl	64.8/65.2	6.9/7.0	23.9/24.1	353.4
100	furfurylamino	allylamino	2-tetrahydropyranyl	61.0/61.6	6.3/6.5	23.7/23.9	355.4
101	benzylamino	allylamino	2-tetrahydropyranyl	65.9/65.8	6.6/6.5	23.1/23.4	365.5
102	furfurylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	57.3/57.7	5.8/5.7	26.7/26.8	315.4
103	benzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	63.0/63.2	6.2/6.2	25.9/26.1	325.4
104	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	56.6/56.8	7.0/7.1	26.4/26.6	319.4
105	(£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	56.6/56.1	7.0/7.2	26.4/26.5	319.4
106	(4-hydroxy-3- methylbutyl)amino	NH 2	2 -tetrahydropyranyl	56.2/55.7	7.6/7.5	26.2/26.1	321.4
107	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	59.2/59.7	8.0/7.8	27.6/27.5	305.4
108	3-tluorobenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	59.6/60.1	5.6/5.4	24.6/24.6	343.4
109	2-chlorobenzyIamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	56.9/57.3	5.3/5.1	23.4/23.5	359.8
110	2-bromobenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	50.6/50.4	4.8/4.9	20.8/21.1	404.3
111	3-methoxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	61.0/61.2	6.3/6.4	23.7/24.0	355.4
112	3-aminobenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	60.2/60.0	6.2/6.5	28.9/28.7	340.4
113	3-hydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	60.0/60.1	5.9/6.1	24.7/24.6	341.4
114	4-hydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	60.0/60.3	5.9/5.7	24.7/24.7	341.4
115	2,3-dihydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	57.3/57.7	5.7/5.7	23.6/23.5	357.4
116	3,4-dihydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	57.3/57.9	5.7/5.8	23.6/23.7	357.4
117	3-hydroxy-4- methoxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	58.4/58.0	6.0/5.9	22.7/22.6	371.4
118	anilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	61.9/70.3	5.9/5.8	27.1/27.4	311.4
119	3-fluoroanilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	58.5/58.9	5.2/5.3	25.6/25.8	329.4
120	3-hydroxyanilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	58.9/58.5	5.6/5.7	25.8/25.7	327.4
121	3-aminoanilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	59.1/59.7	5.9/6.1	23.1/22.7	326.4
122	3,4-dihydroxyanilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	56.1/56.6	5.3/5.0	24.6/24.8	343.4

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
123	3-methoxyanilino	NH 2	2-tetrahydropyranyl	60.0/59.3	5.9/5.8	24.7/24.7	341.4
124	furfurylamino	ČH Ó 3	2-tetrahydropyranyl	58.4/58.8	5.8/5.8	21.3/21.4	330.4
125	benzylamino	CH Ó 3	2-tetrahydropyranyl	63.7/63.5	6.2/6.4	20.6/20.8	340.4
126	(£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	CH 0 3	2-tetrahydropyranyl	57.6/57.4	7.0/7.2	21.0/21.2	334.4
127	(3-methylbut-2-en-l -yl)amino	CH C 3	2-tetrahydropyranyl	60.6/61.0	7.3/7.2	22.1/22.2	318.4
128	3-methoxylbenzylamino	CH C 3	2-tetrahydropyranyl	61.8/61.6	6.3/6.3	19.0/19.2	370.4
129	3-hydroxybenzylamino	CH ϋ 3	2-tetrahydropyranyl	60.8/60.5	6.0/6.2	19.7/19.9	356.4
130	3-fluorobenzylamino	CH Ó 3	2-tetrahydropyranyl	60.5/60.1	5.6/5.7	19.6/19.8	358.4
131	4-hydroxylbenzylamino	CH 0 3	2-tetrahydropyranyl	60.8/61.3	6.0/5.9	19.7/19.9	356.4
132	3-methoxyanilino	CH C 3	2-tetrahydropyranyl	60.8/61.2	6.0/6.2	19.7/20.0	356.4
133	furfurylamino	C H 0 3 7	2-tetrahydropyranyl	60.5/61.0	6.5/6.4	19.6/19.7	358.4
134	benzylamino	C H Ó 3 7	2-tetrahydropyranyl	65.4/65.2	6.9/6.8	19.1/19.0	368.5
135	furfurylamino	C H -CH 0 6 5 2	2-tetrahydropyranyl	65.2/65.4	5.7/5.9	17.3/17.5	406.5
136	benzylamino	C H -CH 0 6 5 2	2-tetrahydropyranyl	69.4/69.3	6.1/6.0	16.9/16.7	416.5
137	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	C H -CH ϋ 6 5 2	2-tetrahydropyranyl	64.5/64.6	6.7/6.8	17.1/17.2	410.5
138	3-hydroxybenzylamino	C H -CH Ů 6 5 2	2-tetrahydropyranyl	66.8/66.5	5.8/5.9	16.2/16.3	432.5
139	3-methoxyanilino	C H -CM Ó 6 5 2	2-tetrahydropyranyl	66.8/66.6	5.8/5.8	16.2/16.4	432.5
140	furfurylamino	SH	2-tetrahydropyranyl	54.4/54.6	5.2/5.4	21.1/21.3	332.4
141	benzylamino	SH	2-tetrahydropyranyl	59.8/60.1	5.6/5.4	20.5/20.8	342.4
142	3-methoxylbenzylamino	SH	2-tetrahydropyranyl	58.2/58.7	5.7/5.5	18.9/18.7	372.5
143	anilino	SH	2-tetrahydropyranyl	58.7/58.5	5.2/5.3	21.4/21.5	328.4
144	4-methoxyanilino	SH	2-tetrahydropyranyl	57.1/57.2	5.4/5.5	19.6/19.8	358.4
145	furfurylamino	CH S 3	2-tetrahydropyranyl	55.6/55.6	5.5/5.5	20.3/20.3	346.4
146	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	CH S 3	2-tetrahydropyranyl	55.0/55.3	6.6/6.4	20.0/20.2	350.5
147	(3-methylbut-2-en-l-yl)amino	CH S 3	2-tetrahydropyranyl	57.6/57.3	7.0/7.2	21.0/20.8	334.5

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
148	benzylamino	Ch Š 3	2-tetrahydropyranyl	60.8/60.9	6.0/6.4	19.7/19.6	356.5
149	3-hydroxybenzylamino	CH 8 3	2-tetrahydropyranyl	58.2/58.4	5.7/5.8	18.9/19.0	372.5
150	3-methoxybenzylamino	CH 8 3	2-tetrahydropyranyl	59.2/59.0	6.0/6.2	18.2/17.9	386.5
151	3-tluorobenzylamino	CH 8 3	2-tetrahydropyranyl	57.9/58.1	5.4/5.5	18.8/18.5	374.5
152	furfurylamino	CH ŠÓ 3 2	2-tetrahydropyranyl	50.9/50.5	5.1/5.0	18.6/18.8	378.4
153	benzylamino	CH SO 3 2	2-tetrahydropyranyl	55.8/55.7	5.5/5.3	18.1/17.9	388.5
154	aniline	CH 80 3 2	2-tetrahydropyranyl	54.7/54.9	5.1/5.3	18.8/18.8	374.4
155	3-fluoroanilino	CH 80 3 2	2-tetrahydropyranyl	52.2/52.4	4.6/4.8	17.9/18.2	392.4
156	3-methoxyanilino	CH SO 3 2	2-tetrahydropyranyl	53.6/54.0	5.3/5.5	17.4/17.8	404.5
157	furfurylamino	NH (CH ) S 2 2 3	2-tetrahydropyranyl	55.7/55.8	6.2/6.4	21.6/21.5	389.5
158	benzylamino	NH (CH ) S 2 23	2-tetrahydropyranyl	60.3/60.2	6.6/6.9	21.1/21.0	399.5
159	furfurylamino	OH	2-tetrahydropyranyl	57.1/57.3	5.4/5.4	22.2/21.8	316.3
160	benzylamino	OH	2-tetrahydropyranyl	62.8/62.7	5.9/6.2	21.5/21.3	326.4
161	(E)-(4-hydroxy-3 -methylbut-2- en-l-yl)amino	OH	2-tetrahydropyranyl	56.4/56.1	6.6/6.7	21.9/22.2	320.4
162	3-hydroxybenzylamino	OH	2-tetrahydropyranyl	59.8/60.0	5.6/5.3	20.5/20.9	342.4
163	3-methoxylbenzylamino	OH	2-tetrahydropyranyl	60.8/60.9	6.0/5.8	19.7/19.9	356.4
164	anilino	OH	2-tetrahydropyranyl	61.7/61.5	5.5/5.7	22.5/22.1	312.4
165	3-hydroxyanilino	OH	2-tetrahydropyranyl	58.7/58.6	5.2/5.4	21.4/21.3	328.4
166	furfurylamino	h NCH 2 2	2-tetrahydropyranyl	58.5/58.4	6.1/6.4	25.6/25.4	329.4
167	furfurylamino	ČH ÓCÓ 3	2-tetrahydropyranyl	57.1/57.1	5.4/5.6	19.6/19.8	358.4
168	benzylamino	CH uco 3	2-tetrahydropyranyl	62.1/62.3	5.8/5.6	19.1/18.6	368.4
169	furfurylamino	Ch CH ÓCO 3 2	2-tetrahydropyranyl	58.2/58.5	5.7/5.3	18.9/18.7	372.4
170	furfurylamino	nh (CH ) MH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	57.1/57.2	6.5/6.2	27.4/27.2	358.4
171	benzylamino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	62.1/62.3	6.9/7.2	26.7/26.4	368.5
172	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	59.1/59.3	7.9/8.1	28.4/28.2	346.5
173	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	56.5/56.5	7.5/7.7	27.1/27.2	362.5

No.	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI-MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H	%N
174	4-hydroxybenzylamino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	59.5/60.3	6.6/6.6	25.6/25.2	384.5
175	anilino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydropyranyl	61.2/61.6	6.6/6.5	27.7/27.8	354.4
176	furťurylamino	NH (CH ) NH 2 2 3	2-tetrahydropyranyl	58.2/58.0	6.8/6.7	26.4/26.3	372.5
177	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	NH (CH ) NH 2 2 3	2-tetrahydropyranyl	57.6/57.2	7.8/7.5	26.1/25.8	376.5
178	furfurylamino	NH (ČH ) NH 2 2 4	2-tetrahydropyranyl	59.2/59.0	7.1/7.3	25.4/25.4	386.5
179	furfurylamino	Nh (ČH } 6 2 2 3	2-tetrahydropyranyl	58.1/58.4	6.5/6.4	22.6/22.9	373.4
180	(3-methylbut-2-en-1 -yl )am ino	NH (ČH ) 0 2 2 3	2-tetrahydropyranyl	60.0/60.5	7.8/8.0	23.3/23.4	361.5
181	furfurylamino	HO(CH ) NH 2 2	2-tetrahydropyranyl	57.0/57.3	6.2/6.3	23.5/23.7	359.4
182	benzylamino	HČ(CH ) NH 2 2	2-tetrahydropyranyl	61.9/62.1	6.6/6.6	22.8/22.5	369.4
183	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	HO(CH ) NH 2 2	2-tetrahydropyranyl	56.3/56.3	7.2/7.1	23.2/23.3	363.4
184	(3-methylbut-2-en-l-yl)amino	HČ(ČH ) NH 2 2	2-tetrahydropyranyl	58.9/58.8	7.6/7.2	24.3/24.5	347.4
185	furfurylamino	HČ(ČH i NH 2 3	2-tetrahydropyranyl	58.1/58.4	6.5/6.9	22.6/22.4	373.4
186	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino	HO(CH ) NH 2 3	2-tetrahydropyranyl	57.4/57.9	7.5/7.4	22.3/22.6	377.5
187	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	HO(Č'H ) NH 2 3	2-tetrahydropyranyl	60.0/59.8	7.8/7.6	23.3/23.3	361.5

Tabulka 3: Sloučeniny připravené dle Příkladu 4

No	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI- MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H/	%N
188	furfurylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	58.5/58.3	6.1/6.1	25.6/25.4	329.4
189	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	57.8/58.4	7.3/7.4	25.3/25.0	333.4
190	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	57.8/58.2	7.3/7.4	25.3/25.3	333.4

No	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI- MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%H/	%N
191	4-chlorobenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	58.0/58.2	5.7/5.9	22.5/22.6	373.9
192	3-methoxylbenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	61.9/61.8	6.6/6.4	22.8/23.0	369.4
193	2-hydroxy-3-methoxybenzylamino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	59.4/59.5	6.3/6.4	21.9/22.2	385.4
194	anilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	63.0/63.2	6.2/6.2	25.9/26.1	330.4
195	3-methoxyanilino	(CH ) N 3 2	2-tetrahydrofuranyl	61.0/61.6	6.3/6.1	23.7/23.6	355.4
196	furfurylamino	allylamino	2-tetrahydrofuranyl	60.0/60.5	5.9/6.0	24.7/24.5	341.4
197	furtiirylamino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	56.0/56.2	5.4/5.7	28.0/28.4	301.3
198	benzylamino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	61.9/62.3	5.9/6.2	27.1/26.5	311.4
199	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l- yl)amino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	55.3/55.1	6.6/6.8	27.6/27.8	305.4
200	(£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	55.3/55.5	6.6/6.5	27.6/27.9	305.4
201	4-hydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	58.9/58.4	5.6/5.4	25.8/25.1	327.4
202	3,4-dihydroxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	56.1/56.4	5.3/5.2	24.6/24.4	343.4
203	4-hydroxy-3,5- dimethoxybenzylamino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	56.0/56.0	5.7/5.8	21.8/21.3	387.4
204	anilino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	60.8/60.7	5.4/5.6	28.4/28.6	297.3
205	3-hydroxyanilino	NH 2	2-tetrahydrofuranyl	57.7/57.9	5.2/5.0	26.3/26.4	313.3
206	furfurylamino	ČH Ó 3	2-tetrahydrofuranyl	57.1/57.3	5.4/5.8	22.2/22.5	316.3
207	(3-methylbut-2-en-l -yl)amino	CH O 3	2-tetrahydrofuranyl	59.4/59.2	7.0/6.8	23.1/23.4	304.4
208	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	CH O 3	2-tetrahydrofuranyl	56.4/56.7	6.6/6.7	21.9/22.1	320.4
209	3-methoxylbenzylamino	CH 0 3	2-tetrahydrofuranyl	60.8/60.7	6.0/6.3	19.7/19.9	356.4
210	anilino	CH O 3	2-tetrahydrofuranyl	61.7/61.9	5.5/5.9	22.5/22.1	312.4
211	furfurylamino	C H -CH 0 6 5 2	2-tetrahydrofuranyl	64.4/64.5	5.4/5.1	17.9/17.8	392.4
212	furfurylamino	ŠH	2-tetrahydrofuranyl	53.0/53.1	4.8/4.9	22.1/22.1	318.4
213	benzylamino	SH	2-tetrahydrofuranyl	58.7/58.9	5.2/5.2	21.4/21.5	328.4
214	(3-methylbut-2-en-l-yl)amino	SH	2-tetrahydrofuranyl	55.1/54.7	6.3/6.4	22.9/23.3	306.4

No	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI- MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%c	%HZ	%N
215	4-methoxyanilino	ŠH	2-tetrahydrofuranyl	56.0/55.4	5.0/5.1	20.4/20.8	344.4
216	furfurylamino	ČH Š 3	2-tetrahydrofuranyl	54.4/54.5	5.2/5.6	21.1/21.6	332.4
217	benzylamino	CH S 3	2-tetrahydrofuranyl	59.8/60.1	5.6/5.5	20.5/20.4	342.4
218	(3-methyibut-2-en-1 -yl)amino	CH S 3	2-tetrahydrofuranyl	56.4/56.6	6.6/6.7	21.9/22.0	320.4
219	furfurylamino	CH SO 3 2	2-tetrahydrofuranyl	49.6/49.1	4.7/4.8	19.3/19.1	364.4
220	furfurylamino	NM (ČH ) Š 2 2 3	2-tetrahydrofiiranyl	54.5/54.1	5.9/6.1	22.4/22.3	375.5
221	furfurylamino	OH	2-tetrahydrofuranyl	55.8/55.7	5.0/5.2	23.2/23.0	302.3
222	benzylamino	OH	2-tetrahydroturanyl	61.7/62.0	5.5/5.4	22.5/22.7	312.4
223	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- 1 -yljamino	OH	2-tetrahydrofuranyl	55.1/55.4	6.3/6.3	22.9/22.6	306.3
224	4-hy droxybenzy 1 am i no	OH	2-tetrahydrofuranyl	58.7/58.9	5.2/5.1	21.4/21.2	328.4
225	anilino	.... _0H	2-tetrahydrofuranyl	60.6/60.3	5.1/5.0	23.6/23.7	298.3
226	3-methoxyanilino	OH	2-tetrahydrofuranyl	58.7/58.1	5.2/5.3	21.4/21.5	328.4
227	furfurylamino	H NCH 2 2	2-tetrahydrofuranyl	57.3/57.0	5.8/5.9	26.7/26.4	315.4
228	benzylamino	H NCH 2 2	2-tetrahydrofuranyl	63.0/63.1	6.2/6.4	25.9/25.7	325.4
229	3-methoxyanilino	H NCH 2 2	2-tetrahydrofuranyl	58.7/58.7	5.2/5.7	21.4/21.6	328.4
230	furfurylamino	ČH ÓCÓ 3	2-tetrahydrofuranyl	59.8/59.9	5.6/5.4	20.5/20.2	342.4
231	benzylamino	CH CH ÓCÓ 3 2	2-tetrahydrofuranyl	65.7/95.2	6.3/6.1	19.2/19.0	366.4
232	4-hydroxylbenzylamino	CH CH OCO 3 2	2-tetrahydrofuranyl	63.0/62.5	6.1/6.1	18.4/18.1	382.4
233	furfurylamino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydrofuranyl	56.0/56.2	6.2/6.3	28.6/28.4	344.4
234	benzylamino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydrofuranyl	61.2/61.1	6.6/6.8	27.7/27.8	354.4
235	(3-methylbut-2-en-1 -yl (amino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydrofuranyl	58.0/58.3	7.6/7.5	29.6/29.5	332.4
236	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydrofuranyl	55.3/55.7	7.3/7.1	28.2/28.4	348.4
237	3-hydroxybenzylamino	NH (CH ) NH 2 2 2	2-tetrahydrofuranyl	58.5/58.4	6.3/6.4	26.5/26.3	370.4
238	furfurylamino	NH (CH ) NH 2 2 3	2-tetrahydrofuranyl	57.1/57.1	6.5/6.9	2ΊΑ/2Ί3	358.4
239	(É)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	NH (CH ) NH 2 2 3	2-tetrahydrofuranyl	56.5/56.4	7.5/7.9	27.1/27.0	362.5

No	Substituent	CHN analýza vypočteno/ nalezeno	ESI- MS [M⁺H⁺]
R6	R8	R9	%C	%H/	%N
240	furfiirylamino	NH (CH ) NH 2 2 6	2-tetrahydrofuranyl	60.1/60.3	7.3/7.1	24.5/24.0	400.5
241	furfurylamino	NH (CH ) 0 2 2 3	2-tetrahydrofuranyl	57.0/57.5	6.2/6.2	23.5/23.8	359.4
242	(É)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	NH (CH ) O 2 2 3	2-tetrahydrofuranyl	56.3/56.6	7.2/7.0	23.2/23.7	363.4
243	furfurylamino	HO(CH ) NH 2 2	2-tetrahydrofuranyl	55.8/55.7	5.9/6.0	24.4/24.3	345.4
244	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	HO(CH ) NH 2 2	2-tetrahydrofuranyl	55.1/55.0	6.9/6.7	24.1/24.3	349.4
245	(3-methylbut-2-en-1 -yl)amino	HO(CH ) NH 2 2	2-tetrahydrofiiranyl	57.8/57.9	7.3/7.1	25.3/25.0	333.4
246	furfurylamino	MÓ(Č11 ) NH 2 3	2-tetrahydrofuranyl	57.0/56.6	6.2/6.5	23.5/23.5	359.4
247	(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino	HO(CH ) NH 2 3	2-tetrahydrofuranyl	56.3/56.0	7.2/7.1	23.2/23.1	363.4

Příklad 5: Schopnost látek vychytávat radikály, stanoveno metodou ORAC

Schopnost sloučenin vychytávat volné radikály in vitro byla stanovena metodou Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC). Fluorescein (100 μΐ, 500 mM) a 25 μΐ roztoku sloučeniny bylo přidáno do každé jamky v 96-jamkové mikrotitrační desce pre-inkubováno při teplotě 37 °C. Poté, 25 μΐ 250 mM AAPH bylo rychle přidáno a mikrotitrační destička se třepala 5 s a pak byla měřena fluorescence (při ex. 485 nm, em. 510 nm) každé 3 min po dobu více než 90 minut pomocí readeru Infinite 200 (TECAN, Švýcarsko). Čistá plocha pod křivkou byla použita pro vyjádření antioxidační aktivitu vzhledem k Troloxu, který byl použit jako standard. Sloučeniny s hodnotou ORAC vyšší než 1 jsou účinnější než Trolox, hydrofilní ekvivalent vitaminu E, na ekvimolámí bázi.

Tabulka 4. Schopnost sloučenin vychytávat volné radikály v testu ORAC

Látka	ORAC (Látka/trolox poměr)
KTHP*	0.6±0.1*
46	1.4 ±0.0

145	1.3 ±0.1
80	2.2 ±0.1
102	4.5 ±0.1
82	8.5 ±0.4
107	24.4 ± 1.5
172	28.3 ± 1.6
124	30.1 ±3.1
100	32.4 ±3.2
185	48.3 ±2.3
181	78.1 ±3.9
170	181.3 ±5.2

* Průměr ± SD (η = 3) * KTHP - kinetin-9-tetrahydropyranyl jako referenční sloučenina.

Příklad 6: Ochrana peroxidace membránových lipidů

Typickým symptomem spojeným se stárnutím je jako přímý důsledek zvýšená koncentrace reaktivních forem kyslíku a peroxidace lipidů. Proto hladiny malonyldialdehydu (MDA), dekompozičního produktu peroxidace lipidů, byly měřeny v oddělených listech pšenice, které byly vystaveny účinku nových připravených derivátů a kinetinu po dobu čtyř dnů v temnu, jak je popsáno v příkladu 7. Hladiny MDA byly měřeny za použití kyseliny thiobarbiturové (metoda TBA). V detailu, 100 mg čerstvého rostlinného materiálu se homogenizuje pomocí vysoké rychlosti třepání v kulovém mlýnu (MM301, Retsch, Německo) se 1 ml 80% metanolu. Surový extrakt byl centrifugo ván při 10 000 x g po dobu 5 minut a 100 μί alikvot supematantu se smíchal se 100 μί 0,5% (w/v) TBA, obsahující 0,1% (w/v) kyseliny trichloroctové. Výsledný roztok byl poté inkubován po dobu 30 min při 95 °C. Vzorky byly rychle ochlazeny na ledu a centrifugovány 5 minut při 1000 x g. Absorbance supematantu byla měřena při 532 nm s odečtením pozadí při 600 nm a množství MDA-TBA komplexu bylo vypočteno s využitím absorpčního koeficientu (155 mM'¹ cm'¹). Nové deriváty významně snížily peroxidaci membránových lipidů ve srovnání s neošetřenou kontrolou (Tabulka 5 - hodnoty vyjadřují obsah MDA, produkt rozkladu membránových lipidů). Sloučeniny podle tohoto vynálezu výrazně snižují hladinu peroxidace membránových lipidů v oddělených stárnoucích listech pšenice kultivovaných ve tmě, jak lze vidět z výsledků v tabulce 5.

Nově připravené deriváty obecného vzorce a tak mají ochrannou funkci proti negativnímu působení reaktivních forem kyslíku, které se výrazně hromadí v tkáních v průběhu stárnutí listů.

Tabulka 5. Vliv nových sloučenin na peroxidaci membránových lipidů během senescence oddělených listů Triticum aestivum cv. Hereward v tmavých podmínkách.

Compound No.	MDA (nmol/g FW)
Control	18.9 (±2.2)
1	12.8 (±1.0)
4	13.2 (±1.5)
5	13.2 (±1.5)
9	12.4 (±1.3)
10	12.8 (±1.1)
13	11.9 (±1.3)
14	12.2 (±1.4)
16	11.6 (±1.0)
21	12.1 (±1.2)
24	11.4 (±0.9)
25	11.7 (±1.1)
29	12.3 (±1.4)
39	11.6 (±1.2)
44	10.7 (±0.8)
46	10.9 (±1.0)
80	11.3 (±0.9)
82	10.8 (±1.0)
100	10.2 (±1.1)
102	10.4 (±0.9)
107	10.5 (±0.5)
124	10.3 (±0.7)
145	9.6 (±0.8)
172	10.8 (±0.9)
170	10.4 (±0.7)
181	9.5 (±0.5)
185	10.2 (±1.1)
189	10.8 (±0.9)
197	9.2 (±0.6)
201	8.7 (±0.7)

206	10.5 (±0.4)
221	10.2 (±0.5)
224	9.3 (±0.8)
233	9.8 (±0.7)
238	9.4 (±0.7)
241	9.6 (±0.8)
245	9.5 (±0.6)

PŘIKLAD 7: Růstové křivky pro látky 6-furfuryIamino-8-ammo-9-(tetrahydropyran-2yl)-9H-purinu (sloučenina 102) a 6-furfurylamino-8-(2-hydroxyethylamino)-9(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu (sloučenina 243)

Experimenty byly provedeny s kožními fibroblasty BJ v 24-jamkových kultivačních destičkách. Do jednotlivých jamek bylo vyseto přibližně 10000 buněk v médiu DMEM s 10 % FBS. Testovaná sloučenina byla přidána po 24 hodinách do finální koncentrace pohybující se mezi 6,25 a 50 μΜ. Každá koncentrace byla testována ve 4 opakováních. DMSO vehikulum bylo testováno jako netoxická kontrola. Pro získání lepší představy o variabilitě bylo kontrolních jamek 8 (sloupce desky A a D). Kultivační médium s testovanou látkou nebo DMSO bylo vyměňováno dvakrát týdně. Sedmý případně 8 den a poté 14 den byly buňky ztrypsinizovány a spočteny na přístroji Coulter Z2. Testované sloučeniny v daném koncentračním rozmezí a době kultivace neovlivňují negativně růst buněk (obr.2).

Příklad 8: Inhibice senescence novými látkami testovaných v senescenčním testu na listových segmentech ozimé pšenice kultivovaných ve tmě

Semena ozimé pšenice Triticum aestivum cv. Hereward byla promyta pod tekoucí vodou po 24 hod a poté vyseta do vermikulitu nasyceného Knopovým živným roztokem. Nádoby se semeny byly umístěny do klimatizované růstové komory s 16/8 hodinovou světelnou periodou (světelná intenzita 50 pmol.mÁs'¹) a teplotou 15 °C. Po 7 dnech měly semenáěky vyvinutý první praporcový list a druhý list začínal prorůstat. Z prvních listů vždy od 5 rostlin byly odebrány vrcholové sekce dlouhé přibližně 35 mm, které byly zkráceny tak, aby jejich váha byla přesně 100 mg. Bazální konce těchto 5 listových segmentů byly umístěny do jamek mikrotitračních polystyrénových destiček obsahujících 150 ml roztoku testovaného derivátu. Destičky byly umístěny do plastového boxu vystlaného filtračním papírem, který byl nasycen vodou za účelem maximální vzdušné vlhkosti. Po 96 hodinách inkubace ve tmě při 25 °C byly listové sekce vyjmuty a chlorofyl extrahován v 5 ml 80% ethanolu zahřátím při 80 °C po dobu 10 min. Objem vzorku byl poté doplněn na 5 ml přidáním 80% ethanolu. Absorbance extraktů byla měřena při 665 nm. Jako kontroly byly měřeny rovněž chlorofylové extrakty z listů a listových vrcholů inkubované v deionizované vodě. Ze získaných dat, koncentrace s nejvyšší aktivitou byla vybrána pro každou testovanou sloučeninu. Dále byla vypočítána relativní aktivita této sloučeniny v této koncentraci (viz tabulka 6 níže). Aktivita získaná pro 10'⁴ M kinetin (Kin) byla stanovena jako 100%. Uvedené hodnoty jsou průměrem z pěti opakování a celý experiment byl opakován dvakrát.

Testované sloučeniny byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok byl naředěn na 10’ M destilovanou vodou. Roztok se dále zředí v destilované vodě na koncentraci v rozmezí 10'⁸ M až 10’⁴ M. Finální koncentrace DMSO nepřesáhla 0,2 %, a tudíž neovlivňuje biologickou aktivitu v testovacím systému.

Jak je shrnuto v tabulce 5, přítomnost C-8 substituentu byla výhodou a vedla ke zvýšení antisenescenčních vlastností testovaných látek.

Tabulka 6. Účinek sloučenin v 10’⁴ mol/1 koncentraci na retenci chlorofylu v oddělených listech pšenice.

Látka	Aktivita (%) (s.d.)
kinetin	100
1	105(±3)
5	118(±5)
7	110 (±2)
8	125 (±6)
9	115 (±4)
10	132 (±7)
11	127 (±5)
12	140 (±7)
21	108 (±3)
24	123 (±6)
26	117 (±5)

Látka	Aktivita (%) (s.d.)
48	120 (±4)
50	121(±4)
52	120 (±3)
53	125 (±6)
54	138(±7)
55	133(±5)
56	141 (±8)
63	110 (±2)
64	123 (±4)
66	132 (±5)
67	128 (±6)
68	142 (±5)

27	124(±4)
28	126 (±7)
29	117 (±2)
39	128 (±3)
41	133 (±7)
45	112(±4)

69	115 (±4)
70	126 (±1)
71	119 (±3)
72	106(±2)
74	127(±5)
76	112 (±3)

* Aktivita kinetinu byla stanovena na 100%; standardní odchylky jsou stanoveny z opakování.

Příklad 9: Inhibice stárnutí lidských buněk pomocí nových sloučenin

V tomto příkladu, lidské diploidní fibroblasty (HCA buňky s různou úrovní pasážování: pasáž 25 - označené HCA25; pasáž 45 - označené HCA45; pasáž 80 - označené HCA80) byly obarveny na stanovení beta-galaktosidázové aktivity. Médium použité pro kultivaci buněk bylo odstraněno a buňky byly promyty dvakrát v PNS, a zafixovány ve 2-3 ml fixačního roztoku, sestávající z 2% formaldehydu a 0,2% glutaraldehydu v PBS. Buňky byly inkubovány při pokojové teplotě po dobu 5 minut, a pak dvakrát promyty PBS. Buňky byly poté inkubovány při 37 °C (bez CO₂) po dobu 1 až 16 hodin v 2 až 3 ml roztoku obsahujícího ferrikyanid draselný (5 mM), ferrokyanid draselný (5 mM), MgCl₂ (2 mM), X-gal (5-brom-4chlor-3-indolyl-beta-D-galaktopyranosid) (1 mg/ml), v citrát/fosfátovém pufru, pH 6,0). Po této inkubační době byly vzorky buněk pozorovány za účelem zjištění přítomnost modrých buněk, což ukazuje, že X-gal byl štěpen (pozitivně senescentní buňky). V tomto experimentu, senescentní buňky, ale žádné další buňky, byly obarveny modře v důsledku působení betagalaktosidasy na substrát X-gal.

Tabulka 7: Vliv nových sloučenin na počet stárnoucích buněk v kultuře lidských fibroblastů

Látka	Stárnoucí buňky (%)
	HCA25	HCA45	HCA80
BAP	5	9	45
kinetin	3	5	38
KTHP	3	4	26

21	3	5	20
24	3	5	21
26	2	5	19
27	2	4	21
39	3	4	20
41	2	6	21
45	3	5	20
48	2	4	21
50	3	4	19
52	2	6	21
53	2	5	21
54	3	5	20
55	3	4	18
56	3	5	21
63	2	4	19
64	3	4	8
66	2	4	16
67	4	6	18
68	2	5	19
69	3	4	14
70	2	5	18
71	3	6	19
72	3	4	17
74	3	5	21
76	3	4	15

*BAP = 6-benzylaminopurin; kinetin = 6-furfurylaminopurin; KTHP - kinetin-9tetrahydropyranyl

Jak je ukázáno v tabulce 7, se zvyšujícím se počtem pasáží se počet zabarvených buněk zvyšuje. U nejstarších buněk, byly jen modré buňky v rozmezí od světlé modré po téměř neprůhlednou barvu. 6,8-Disubstituované-9-(2-tetrahydropyranyl, nebo 2 tetrahydrofuranyl)puriny jsou velmi účinné ve srovnání s BAP a kinetinem (klasické cytokininy, známé v dosavadním stavu techniky), v zachování mnohem nižší úrovně zestárlých buněk po 80-té pasáži. V případě dlouhotrvajícího pěstování buněk, buňky ošetřené sloučeninami zahrnutými ve vynálezu, byly schopné žít o 30% delší dobu, než kontrolní buňky.

Příklad 10: Vliv na dělení rostlinných buněk

Cytokinin-dependentní tabákový kalusu Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsin 38 se udržuje na teplotě 25 °C ve tmě na modifikovaném MS mediu, obsahujícím 4 pmol/l kyseliny nikotinové, 2,4 pmol/l pyridoxin-hydrochlorid, 1,2 pmol/l thiamin, 26,6 pmol/l glycinu, 1,37 pmol/l glutaminu, 1,8 pmol/l myo -inositol, 30 g/1 sacharózy, 8 g/1 agaru, 5,37 pmol/l NAA a 0,5 pmol/l BAP. Subkultivace se provádí každé tři týdny. Čtrnáct dní před biologickou zkouškou, byl kalus převeden do média bez BAP. Biologická aktivita byla stanovena na základě nárůstu čerstvé hmoty kalusu po čtyřech týdnech kultivace. Pět replikátů bylo připraveno pro každou koncentraci cytokininů a celý test byl opakován dvakrát. Ze získaných dat byla koncentrace s nej vyšší aktivitou vybrána pro každou testovanou sloučeninu. Relativní aktivita při této koncentraci byla vypočítána (viz tabulka 17 níže). Aktivita získaná pro ΙΟ’⁶ M kinetin (Kin) byla stanovena jako 100 %.

Testované cytokininy byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok byl pak naředěn do 10³ M destilovanou vodou. Tato koncentrace se dále ředí v příslušných médiích používaných pro Biotest na koncentrace v rozmezí 10’⁸ M až 10‘⁴ M. Finální koncentrace DMSO nepřesáhla 0,2 %, a tudíž neovlivňuje biologickou aktivitu v testovacím systému.

Jak je shrnuto v tabulce 8, sloučeniny podle tohoto vynálezu zvyšují dělení buněk a na rozdíl od cytokininů, které vykazují ostré koncentrační optimum, většina nových sloučenin má výrazně prodlužený rozsah optimální koncentrace (v rozmezí dvou až tří řádů). Jak je znázorněno na obrázku 1, nové deriváty purinových derivátů tak ztrácí své cytotoxické účinky při aplikaci ve vyšších koncentracích.

Tabulka 8. Účinek na růst cytokinin-dependentního tabákového kalusu Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsins 38.

Látka

Koncentrace pro nejvyšší aktivitu

Aktivita (%); (s.d.)

Látka

Koncentrace pro nejvyšší aktivitu

Aktivita (%); (s.d.)

	(mol/1)
Kinetin	10'⁶	100
3	10'⁶-10'⁴	118 (±6)
5	10‘⁶-10'⁴	124 (±6)
7	10’⁶-10’⁴	114 (±5)
8	10'⁶-10'⁴	119 (±7)
9	10'⁶-10’⁴	108(±3)
23	10‘⁶-10’⁵	125 (±7)
24	10'⁶-10'⁵	128 (±8)
26	10’⁶-10‘⁵	117 (±4)
27	10’⁶-10'⁵	115 (±4)
28	10'⁶-10‘⁴	107(±2)
29	10'⁶-10'⁴	112(±3)
64	10'⁶-10’⁴	130(±10)
65	10’⁶-10’⁴	127 (±9)
69	10’⁶-10’⁴	111 (±5)
70	10’⁶-10’⁴	110(±l)
71	10‘⁶-10’⁴	116 (±2)
74	10’⁶-10’⁴	122 (±4)
75	10’⁶-10'⁴	119 (±4)
76	10’⁶-10’⁴	114 (±3)

Aktivita kinetinu nastavená jako 100 %.

	(mol/1)
124	10’⁶-10’⁴	105 (±2)
125	10’⁶-10’⁴	104 (±2)
126	10’⁶-10^-4	116 (±6)
127	10'⁶-10’⁴	114 (±6)
128	10'⁶-10‘⁵	121 (±5)
129	10‘⁶-10’⁵	111(±4)
130	10’⁶-10·⁴	108(±3)
145	10’⁶-10'⁴	103 (±5)
146	10’⁶-10’⁵	108(±5)
147	10’⁶-10’⁴	112 (±2)
149	10'⁶-10’⁴	107(±1)
150	10‘⁶-10’⁵	105(±2)
151	10'⁶-10’⁴	109(±5)
206	10'⁶-10‘⁴	110(±3)
207	10’⁶-10'⁴	114 (±3)
208	10’⁶-10'⁴	119 (±7)
209	10’⁶-10‘⁴	112 (±4)
216	10’⁶-10·⁴	103 (±4)
218	10’⁶-10'⁴	113 (±5)

Příklad 11: In vitro cytotoxická aktivita (metabolismu kalceinu AM).

Protože toxické látky negativně ovlivňují metabolické procesy buňky, řada standardních testů cytotoxicity je založena na měření metabolizace rychlosti různých umělých substrátů. Výsledný produkt se pak kvantifikuje, například, pomocí spektrometrie. Tyto testy mohou být snadno modifikovány pro použití v 96-jamkových destičkách. Pro hodnocení cytotoxicity 6,8disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl, nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů tohoto vynálezu, byl použit test založený na kvantifikaci metabolizace kalceinu AM. Test je široce používán při screeningových programech drog a při testování chemosensitivity. V živých buňkách je

Calcein AM enzymaticky hydrolyzován a akumulace tohoto produktu se pak projeví zelenou fluorescencí.

Následující lidské buněčné linie byly použity pro rutinní screening toxicity sloučenin: normální diploidní fibroblasty BJ, T-lymfoblastická buněčná linie leukémie CEM, promyelocytický buněčné linie leukémie HL-60, erythroidní buněčná linie leukémie K-562, buněčná linie karcinomu prsu MCF-7, buněčná linie osteosarkomu HOS a buněčné linie melanomu G-361. Buňky byly udržovány v Nunc/Coming 80 cm² plastových lahvích pro tkáňové kultury a pěstovány v médiu pro buněčné kultury (DMEM s 5 g/1 glukózy, 2 mM glutaminu, 100 pg/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný).

Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a očekávané konečné hustoty buněk (2 500 - 30 000 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu), pipeto válo se 80 pl buněčné suspenze na 96-jamkové mikrotitrační destičky. Inokuláty byly stabilizovány 24 hodinovou pre-inkubací při 37 °C v atmosféře 5% CO₂. Jednotlivé koncentrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 pl alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v čtyřnásobné ředící řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 166,7 pM, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v triplikátech. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře 5% CO₂. Na konci inkubační periody byly buňky analyzovány po přidání roztoku Calceinu AM (Molecular Probes) a inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluorskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: IC₅o = (FDj_amka s derivátem /FDkontroiní jamka) x 100 %. Hodnota IC50, která odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk, byla vypočtena ze získaných dávkových křivek.

Cytotoxicita sloučenin byla testována na panelu buněčných linií různého histogenetického a druhového původu. Jak je uvedeno v tabulce 9; IC50 6,8-disubstituovaných-9-(2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů přesahuje maximální testovanou koncentraci, což naznačuje, že tyto sloučeniny by mohly být použity v koncentracích ještě vyšších, bez negativních vedlejších účinků.

Tabulka 9. Cytotoxicita látek u různých nádorových buněčných linií

Látka	Testovaná buněčná linie / IC50 (μιηοΐ/l)	Nejvyšší testovaná koncentrace (μπιοί/ΐ)
BJ	CEM	K-562	MCF7	HOS	G-361
3	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
5	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
7	>100	>100	>50	>100	>100	>100	100
8	>100	>100	>100	>100	>100	>100	100
9	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
23	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
24	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
26	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
27	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
28	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
29	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
64	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
65	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
69	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
124	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
125	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
126	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
127	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
128	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
129	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
130	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
145	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
146	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
147	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
149	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
150	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
151	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
206	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50

207	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
208	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
209	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
216	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50
218	>50	>50	>50	>50	>50	>50	50

Příklad 12: In vitro cytotoxická aktivita (metabolizace MTT).

MTT (metabolická toxicita tetrazolia) test je standardní kolorimetrický test pro hodnocení cytotoxicity. Mitochondriální dehydrogenázy převádí žlutý MTT na fialový formazan, který se měří pomocí spektrometrie.

Lidské diploidní fibroblasty BJ (pasáž 18-22) byly vysety do 96-jamkové destičky (5 000 buněk na jamku). Po 6 hodinách kultivace v médiu (DMEM s 5 g/l glukózy, 2 mM glutaminu, 100 pg/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) se medium nahradí kultivačním médiem s obsahem testovaných sloučenin v rozmezí koncentrací 0-200 μΜ. Nejvyšší koncentrace se upraví, pokud je rozpustnost sloučeniny omezená. Každá koncentrace byla testována v 5 opakováních. MTT bylo k buňkám přidáno po 72 hodinách inkubace (konečná koncentrace 0,5 mg/ml) a inkubace pokračovala po dobu dalších 3 hodin. MTT byl solubilizován pomocí DMSO a jeho absorbance byla následně změřena při 570 nm. Inhibice růstu (Growth Inhibition, GI) byla odhadnuta pomocí následujícího vzorce: GI = (průměr A látce vystavené jamky - Průměr A blank/Průměr kontrolních jamek - průměr A_bi_ank) x 100 %. Hodnota GI₂o, která odpovídá koncentraci látky způsobující 20% snížení aktivity mitochondriální dehydrogenázy, byla vypočtena ze získaných křivek v závislosti na dávce.

Jak je ukázáno v tabulce 10, GI₂o 6,8-disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2tetrahydrofuranyl)purinů převyšuje maximální testovanou koncentraci, což naznačuje, že tyto sloučeniny by mohly být použity ve vyšších koncentracích bez negativních vedlejších účinků.

Tabulka 10. Cytotoxicita na lidských diploidních fibroblastech

Látka	GI₂₀ (μπιοί/ΐ)	Maximální testovaná koncentrace (μιηοΐ/ΐ)
3	>50	50

5	>100	100
7	>200	200
8	>200	200
9	>100	100
23	>100	100
24	>100	100
26	>100	100
27	>100	100
28	>100	100
29	>100	100
64	>100	100
65	>100	100
69	>100	100
124	>100	100
125	>100	100
126	>100	100
127	>100	100
128	>100	100
129	>100	100
130	>100	100
145	>100	100
146	>100	100
147	>100	100
149	>100	100
150	>100	100
151	>100	100
206	>100	100
207	>100	100
208	>100	100
209	>100	100
216	>100	100

218

>100

100

Příklad 13: Amesův test.

Rada testů týkajících se bezpečnosti byla provedena za použití běžně uznávaných protokolů a postupů. Výsledky těchto studií jsou shrnuty v tomto textu. Testy byly prováděny za použití DMSO jako rozpouštědla a sloučenin 21,24,26,27,39,41, 45,48, 50,52,53,54,55,56,63, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 74, 76,124, 125, 126, 127,128, 129, 130, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 208, 216, 218 a 243 v dávkách 2,5; 5,0; 15; 50; 500; 1500 a 5000 ug / misku na základě standardního protokolu a postupů (Ames et al., Mutation Research, 31, 347-364 (1975); Maron et al, Mutation Research, 113, 173-215 (1983)). Za použití histidin auxotrofní Salmonella typhimurium TA98 a TA100 v přítomnosti a nepřítomnosti Aroclor vyvolané krysí jatemí S9, žádné mutagenní pozitivní odpovědi nebyly pozorovány.

Příklad 14: Přípravky

Prostředky pro regulaci růstu obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, směsi účinných látek obsahující 6,8-disubstituované puriny podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti pevné nebo kapalné přípravky, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla. Zatímco komerční produkty jsou obvykle formulovány jako koncentráty, konečný uživatel bude normálně používat zředěné formulace. Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje (epoxidovaný kokosový, řepkový olej nebo sójový olej), činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost a také hnojivá nebo jiné aktivní složky. Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):

Al. Emulgovatelné koncentráty	a)	b)	c)	d)
Aktivní složka	5%	10%	25% 50%
dodecylbenzensulfonan vápenatý	6%	8%	6%	8%
polyoxyethylovaný ricinový olej
(pólyglykol ether ricinového oleje)	4%	-	4%	4%

(36 mol ethylenoxid)

oktylfenol polyglykol ether	-	2%	2%
(7-8 mol ethylenoxid)
cyklohexanon	-	-	10% 20%
směs aromatických uhlovodíků	83%	82%	53% 18%
C₉-Ci₂

Emulze o vyžadované finální koncentraci mohou být získány z takového koncentrátu zředěním vodou.

A2. Roztoky	a)	b)	c) d)
Aktivní složka	5%	10%	50% 90%
l-methoxy-3-( 3-methoxy-
propoxy)-propan	-	20%	20% -
polyethylenglykol MW 400	20%	10%	-
N-methyl-2-pyrrolidon	-	-	30% 10%
směs aromatických uhlovodíků	75%	60%	-

C₉-C₁₂

Roztoky jsou vhodné k aplikaci ve formě mikrokapének.

A3. Smáčivé prášky	a)	b)	c)	d)
Aktivní složka	5%	25%	50%	80%
ligninsulfonan sodný	4%	-	3 %	-
laurylsulfát sodný	2%	3%	-	4%
diisobutylnaftalensulfonát	-	6%	5% 6%
sodný
oktylfenol polyglykol ether	-	1 %	2%	-
(7-8 mol ethylen oxid)
vysoce disperzní kyselina křemičitá	1 %	3 %	5% 10%
kaolin	87%	61 %	37 %-

Aktivní složka je důkladně promísena s pomocnými látkami a směs je důkladně rozemleta ve vhodném mlýnu. Suspenzi libovolné koncentrace je možné získat smísením vzniklého prachu s vodou.

A4. Suspenzní koncentrát	a)	b)	c) d)
Aktivní složka	3%	10%	25% 50%
etylén glykol	5 %	5%	5% 5%
nonylfenol polyglykol ether	-	1 %	2%
(15 mol etylén oxid)
lignosulfonát sodný	3%	3%	4% 5%
karboxymethylcelulosa	1 %	1 %	1 % 1%
37 % vodný roztok formaldehydu	0.2 %	0.2 %	0.2 % 0.2%
emulse silikonového oleje	0.8 %	0.8 %	0.8 % 0.8%
voda	86%	78%	64% 3 8%
Jemně rozemletá aktivní složka je	smíchána	s pomocnými látkami. Vzniklý suspenzní

koncentrát umožňuje přípravu suspenze o požadované koncentraci zředěním vodou.

Λ5: Suché Kapsle

5000 Tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g jeden z 6,8-disubstituovaných purinů, se připraví následujícím způsobem:

Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180 g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát hořečnatý: 80 g; Laktóza 20 g.

Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek.

A6: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g jednoho z 6,8disubstituovaných purinů jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

A7: Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g jednoho z 6,8 disubstituovaných purinů jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem: Složení: 250 g účinné složky v 1 1 PEG 400,1 litr Tween 80.

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem lne., lne., USA., dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Příklad 15: Gelový přípravek

Formulace mastí byla testována během pilotní klinické studie se 4 dobrovolníky s psoriázou, což je onemocnění kůže. Složky jsou uvedeny v gramech na 100 g.

látka	Obsah
6-furfurylamino-8-amino-9- tetrahydropyranylpurin	1.0 g
Butylhydroxytoluenum	0.2 g
Butylparaben	0.2 g
Diethyleneglycol monoethyl ether	10.0 g
Silica colloidalis anhydrica	5.0 g
Propylene glycol laurate	83.6 g

Gel této konzistence může být navíc modifikován přidáním oxidu křemičitého, colloidalis anhydrica. Také se opět předpokládá, že transdermální systém Transcutol P / Lauroglycol FCC zvýší účinnost 8-amino-6-furfurylamino-9-tetrahydropyranyl-purinu. Oxid křemičitý colloidalis anhydrica pravděpodobně zpomalí penetraci účinné látky.

Příklad 16: Postupem přípravy kožní masti

Složky masti jsou uvedeny v gramech na 200 g:

Látka	Obsah
6-furfurylamino-8-amino-9- tetrahydropyranylpurin	2.0 g
Butylhydroxytoluenum	0.4 g
Butylparaben	0.4 g
Diethyleneglycol monoethyl ether	20.0 g
Glycerol dibehenate	44.0 g
Propylene glycol laurate	133.2 g

Doporučený postup

Fáze A: 2 g 8-amino-6-furfurylamino-9-tetrahydropyranylpurinu se rozpustí ve 20 g Transcutol P za stálého míchání při teplotě místnosti v oddělené skleněné nebo nerezové nádobě. Proces rozpouštění může být urychlen zahříváním roztoku na maximální teplotu 40 °C.

Fáze B: 0.4 g Nipanox BHT a 0,4 g Nipabutyl se rozpustí za stálého míchání ve 133,2 g Lauroglycolu FCC při teplotě přibližně 70 °C, v další samostatné skleněné nebo nerezové nádobě. Čirý olejovitý roztok se zahřívá na teplotu přibližně 80 °C a 44 g Compritol 888 ATO se taví v něm, za stálého míchání. Čirý olejovitý roztok se ochladí na cca 60 °C za stálého míchání a ochlazení a smísí se s fází A. Vzniklá bělavá mast je rozdělena na přibližně 15 g porce a plní se do předem připravených plastových nádob.

Příklad 17: Formulace přípravku pro lokální aplikaci na kůži

Prostředek pro místní aplikaci na kůži obsahuje následující složky podle hmotnostních %: Aktivní složka: 6-furfurylamino-8-amino-9-tetrahydropyranylpurin 0,1%

Olejová fáze:

Cetylalkohol 5,0%

Glycerylmonostearát 15,0%

Sorbitanmonooleát 0,3%

Polysorbát 80 USP 0,3%

Vodná fáze:

Methylcelulózová 100 cps 1.0%

Methylparaben 0,25%

Propylparaben 0,15%

Vyčištěná voda q.s. na 100%

Methylparaben a propylparaben se rozpustí v horké vodě a následně se v ní disperguje i methylcelulóza. Směs se pak ochladí na 60 °C, dokud se methylcelulóza nerozpustí. Směs se potom zahřívá na 72 °C a přidá se do olejové fáze, která se zahřívá na teplotu 70 °C za stálého míchání. 8-Amino-6-furfurylaminopurin se přidá při teplotě 35 °C a výsledná směs se míchá až do okamžiku rozptýlení. Tento prostředek se aplikuje na kůži přinejmenším každý den, dokud se nedosáhne požadovaného zmírnění stárnutí kůže (proti stárnutí).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny obecného vzorce I

R6

Cyc (I) a jejich farmaceuticky využitelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, ve formě racemátů nebo opticky aktivních isomerů, jakož i jejich adičních solí s kyselinami, ve kterých

Cyc znamená heterocyklyl vybraný ze skupiny zahrnující 2-tetrahydropyranyl a 2tetrahydrofuranyl;

R6je-NH-R_y,

Ryje vybraný ze skupiny zahrnující

- Ci až Cg přímý nebo rozvětvený alkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkoxy,

- C₂ až Cg přímý nebo rozvětvený alkenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkoxy,

- C₃ až Cg cykloalkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,

- benzyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,

- fenyl, popřípadě ou substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,

- furfuryl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,

R8 je vybraný ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, halogen, acyl, acyloxy, amido, alkoxy, benzyloxy, alkylamino, karbamoyl, karboxyl, kyano, hydrazino, -NHOH, -NHCONH₂, -NHC(NH)NH₂, nitro, sulfanyl, alkylsulfanyl, sulfo a alkyloxycarbonyl.
2. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1, vyznačující se tím, že R_y je vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, cyklohexylmethyl, allyl a 3,3-dimethylallyl, které mohou být případně substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxy, methoxy, methyl, amino, nitro nebo jejich kombinace.
3. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1, vyznačující se tím, že R8 je vybrán ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Ci-Cs alkyl)amino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy.
4. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1, vyznačující se tím, že jsou vybrané ze skupiny zahrnující 6-furfurylamino-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(3-hydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4hydroxybenzylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydro furanyl )purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5 alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(ClC5 alkyljamino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(amino, hydroxy, chloro, fluoro, bromo, amino(Cl-C5

ΊΑ alkyl)amino, hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH₂, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy)-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purin a jejich soli s alkalickými kovy, amonné soli a aminy, ve formě racemátů a opticky aktivních isomerů, stejně jako jejich adičních solí s kyselinami.
5. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro použití jako antioxidanty pro inhibici nevhodných a nepříznivých metabolických procesů u rostlin, živočichů a člověka, a/nebo jako antioxidanty pro inhibici peroxidace lipidů a proteinů v rostlinách, zvířatech a člověku.
6. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro použití jako léčiva.
7. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro přípravu léčiva pro léčbu kůže a kožních onemocnění, jako neurodegenerativní léčiva, pro potlačení imunostimulace a pro ošetření zánětů.
8. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 jako kosmetika.
9. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro inhibici, zlepšení a oddálení procesů stárnutí a senescence, a pro zlepšení vzhledu a kondice kůže.
10. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 jako růstových regulátorů ve tkáňových kulturách pro stimulaci proliferace, morfogeneze a inhibici senescence; použití jako faktorů buněčného dělení a diferenciace rostlin, savců, mikroorganizmů, kvasinek a hub.
11. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro přípravu afmitních sorbentů, imobilizovaných enzymů pro procesní kontroly, reagencií pro imunoanalýzy, diagnostických vzorků, látek značených ¹⁴C, ³H, avidinem a biotinem; pro použití při manipulacích s rostlinnými a živočišnými (ne lidskými) embryonálními kmenovými buňkami a pro klonování.
12. Způsob zlepšení, inhibice a oddálení procesů stárnutí a senescence v savčích a rostlinných buňkách, vyznačený tím, že zahrnuje aplikaci 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 na buňky.
13. Farmaceutický a/nebo kosmetický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden 6,8-disubstituovaný-9-(heterocyklyl)purin obecného vzorce I podle nároku 1 až 4 a alespoň jednu pomocnou látku.