CZ306984B6 - 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích - Google Patents

6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích Download PDF

Info

Publication number
CZ306984B6
CZ306984B6 CZ2014-908A CZ2014908A CZ306984B6 CZ 306984 B6 CZ306984 B6 CZ 306984B6 CZ 2014908 A CZ2014908 A CZ 2014908A CZ 306984 B6 CZ306984 B6 CZ 306984B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
purine
hydroxy
tetrahydropyranyl
tetrahydrofuranyl
amino
Prior art date
Application number
CZ2014-908A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ2014908A3 (cs
Inventor
Lenka Zahajská
Zahajská Lenka Mgr., Ph.D.
Jaroslav Nisler
Nisler Jaroslav Mgr., Ph.D.
Alena Kadlecová
Alena Mgr. Kadlecová
Marek Zatloukal
Zatloukal Marek RNDr., Ph.D.
Jiří Grúz
Grúz Jiří Mgr., Ph.D.
Jiří Voller
Voller Jiří Mgr., Ph.D.
Karel DoleĹľal
Dr. DSc. Doležal Karel Mgr.
Miroslav Strnad
CSc. DSc. Strnad Miroslav prof. Ing.
Original Assignee
Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i. filed Critical Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i.
Priority to CZ2014-908A priority Critical patent/CZ306984B6/cs
Priority to PCT/CZ2015/050009 priority patent/WO2016095880A1/en
Priority to US15/536,041 priority patent/US10093675B2/en
Priority to EP15794056.0A priority patent/EP3233861B1/en
Publication of CZ2014908A3 publication Critical patent/CZ2014908A3/cs
Publication of CZ306984B6 publication Critical patent/CZ306984B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/40—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with halogen atoms or perhalogeno-alkyl radicals directly attached in position 2 or 6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/04—Plant cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0601—Invertebrate cells or tissues, e.g. insect cells; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0656—Adult fibroblasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Vynález se týká 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů, jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích a přípravků obsahujících tyto deriváty.
Dosavadní stav techniky
Různé deriváty adeninu mají zajímavé vlastnosti v lékařství, kosmetice a zemědělství (WO 03/040144). Některé z nich se vyskytují přirozeně jako rostlinné hormony, například kinetin, isopentenyladenin, trans-zeatin, dihydrozeatin, 6-benzylaminopurin, 6-(3-hydroxybenzylamino) purin (Strnad, M. Plant Physiol 1997, 101, 674; Wojtania a Gabryszewska, Biotechnologia 2004, 2, 162; Baroja-Femández et al., Plant Physiol Biochem 2002, 40, 217; Peixe et al, Scientia Horticulturae 2007, 113, 1). Aplikace těchto rostlinných hormonů na rostliny ale přináší značné nežádoucí vedlejší účinky, včetně problémů s heterogenitou růstu a inhibice růstu kořene (Werbrouck a kol., Physiol. Plant. 1996, 98, 291).
WO 2008/008770 a WO 2009/086457 se týkají 6,9-disubstituovaných purinových derivátů, s 2tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl skupinou v poloze 9 a jejich použití v kosmetice jako protizánětlivé a protistámoucí složky přípravků pro péči o pleť.
Předkládaný vynález poskytuje použití 6,8-disubstituovaných derivátů purinu nesoucích 2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl skupinu v poloze 9 v kosmetických aplikacích. Použití těchto látek nevede k nežádoucím vedlejším účinkům, jako jsou buněčné proliferace a apoptóza, které jsou problémem mnoha dosud známých sloučenin na bázi adeninu. Sloučeniny neočekávaně vykazují významné antioxidační vlastnosti.
Sloučeniny podle vynálezu mají zlepšenou selektivitu a účinnost a nižší toxicitu než známé 6(substituované amino)puriny a 6,9-disubstituované puriny.
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny obecného vzorce I
a jejich farmaceuticky využitelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy ve formě racemátů nebo opticky aktivních izomerů, jakož i jejich adičních solí s kyselinami, ve kterých
- 1 CZ 306984 B6
Cyc znamená heterocyklyl vybraný ze skupiny zahrnující 2-tetrahydropyranyI a 2-tetrahydrofuranyl;
R6je-NH-Ry,
Ryje vybraný ze skupiny zahrnující
- Ci až Cg přímý nebo rozvětvený alkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkoxy,
- C2 až Cg přímý nebo rozvětvený alkenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkoxy,
- C3 až Cg cykloalkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,
- benzyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C, až C4 alkyl, C] až C4 alkoxy,
- fenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Cj až C4 alkoxy,
- furfuryl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Q až C4 alkoxy, a
R8 je vybraný ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, fluor, chlor, brom, acyl, acyloxy, amido, alkoxy, benzyloxy, alkylamino, karbamoyl, karboxyl, kyano, hydrazino, -NHOH, -NHCONH2, -NH-C(NH)NH2, nitro, sulfanyl, alkylsulfanyl, sulfo a alkyloxykarbony 1.
Výše uvedené generické skupiny používané ke specifikaci 6,8-disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů mají následující významy:
- halogen znamená atom fluoru, bromu, chloru nebo jodu,
- hydroxy znamená skupinu -OH;
- sulfanyl znamená skupinu -SH;
- amino znamená skupinu -NH2;
- hydrazino znamená skupinu -NHNH2;
- karbamoyl znamená skupinu -CONH2;
- kyano znamená skupinu -CN;
- karboxyl znamená skupinu -COOH;
- nitro znamená skupinu -NO2;
- sulfo znamená skupinu -SO2Ra, kde Ra je vodík, alkyl, nebo alkenyl;
- acyl znamená-C(O)Rb, Rb je alkyl a alkenyl;
- acyloxy znamená-O-C(O)Rc, kde Reje hydrogen, alkyl nebo alkenyl;
- alkoxy znamená skupinu-ORd, kde Rj je alkyl;
- alkylamino znamená skupinu -N(Re)2, kde každá skupina Re je nezávisle vybrána z vodíku, alkylu a alkenylu, které mohou být substituovány amino nebo hydroxy substituentem;
- alkylsulfanyl znamená skupinu -SRf, kde Rf je alkyl jak je definováno;
- alkyloxykarbonyl znamená skupinu -C(O)ORg, kde Rg je alkyl nebo alkenyl;
- amido znamená skupinu -C(O)N(Rf)2, kde každý Rf může být nezávisle vodík, alkyl a alkenyl;
- alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 8 uhlíkových atomů, které mohou být s výhodou substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;
- alkenyl znamená přímou npbo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 2 až 8 uhlíkových atomů (s výhodou vinyl, allyl, 1-propenyl, 1-methylethenyl, but-1 až 3-enyl, pent-1 až 4-enyl,
-2CZ 306984 B6 hex-1 až 5-enyl, hept-1 až 6-enyl, 3-methylbut-2-en-l-yl), které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;
-cykloalkyl znamená monocyklickou nebo polycyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 uhlíkových atomů (s výhodou cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl nebo adamantyl), které mohou být s výhodou substituovaný jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl.
Ryje s výhodou vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, n-alkyl a n-alkenyl obsahující 4, 5 a 6 uhlíkových atomů, (cyklohexyl)methyl a 3,3-dimethylallyl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, methoxy, methyl nebo amino skupinu. Mimořádně výhodné je, když je Ry vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, 4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yl, cyklohexylmethyl, allyl nebo 3,3-dimethylallyl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující halogen, hydroxy, methoxy, methyl, amino, nitro nebo jejich kombinacemi.
Výhodnými podle tohoto vynálezu jsou sloučeniny, kde je R8 vybrán ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, chlor, fluor, brom, amino(Ci-C5 alkyl)amino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy. Mimořádně výhodné je, když R8 je amino nebo alkylamino.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, které obsahují
- R6 vybrané z: furfurylamino, benzylamino, 2-fluorbenzylamino, 3-fluorbenzylamino, 4-fluorbenzylamino, 3-brombenzylamino, 3-jodbenzylamino, 2-chIorbenzylamino, 3-chlorbenzylamino, 4-chIorbenzylamino, 3-methylbenzylamino, 2-methoxybenzylamino, 3-methoxybenzylamino, 2-hydroxybenzylamino, 3-hydroxybenzylamino, 4-hydroxybenzylamino, 3-ethoxybenzylamino, 3,5-dichlorbenzylamino, 5-chlor-2-fluorbenzylamino, 2,3,5-trifluorbenzylamino, 3-chlor-2,6-difluorbenzylamino, 3,5-difluorbenzylamino, 3-(trifluormethyl)benzylamino, 3,4dihydroxybenzylamino, 3,5-dihydroxybenzylamino, 3,5-dimethoxybenzylamino, 2,5-dimethoxybenzylamino, 3-hydroxy-4-methoxybenzylamino, 2-hydroxy-3-methoxybenzylamino, 4hydroxy-3-methoxybenzylamino, 2-hydroxy-5-methoxybenzylamino, 2-aminobenzylamino, 3aminobenzylamino, 4-aminobenzylamino, 3,4,5-trimethoxybenzylamino, 2,4,5-trichlorbenzylamino, cyklohexylamino, cyklopentylamino, cyklobutylamino, allylamino, diallylamino, isopentylamino, 3,3—dimethylallylamino, 3—hydroxymethyl—3—methylallylamino, (Z)—(4—hydroxy—3— methylbut-2-en-l-ylamino, (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino, 4-hydroxy-3methylbutylamino, propargylamino, anilino, 3-bromanilino, 3,5-dichloranilino, 3,5-difluoranilino, 3,5-dimethylanilino, 2,3-dimethoxyanilino, 3-chloranilino, 2-chlor-5-fluoranílino, 2fluoranilino, 3-fluoranilino, 2-methoxyanilino, 3-methoxyanilino, 3-methylanilino, 2,3,5-trifluoranilino;
- R8 vybrané z: amino, hydroxy, chlor, fluor, brom, amino(C]-C5 alkylamino, hydroxy(C|-C5alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy; a
- Cyc vybrané z: 2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny zahrnující: 6-furfurylamino-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-chlor-9(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8 _ 1 ..
brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-(amino(Cl-C5-alkyI)amino)-9-(2tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-(amino(C 1 -C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyljpurin, 6-furfurylamino-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-nitro-9(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranylpurin, 6-furfuiylamino-8-sulfanyI-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methyísu!fanyI-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methoxy-9-(2tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6—(3— hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8amino-9-(2-tetrahydrofuranyI)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8chlor-9-(2-tetrahydrofuranyI)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6—(3— hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8brom-9-(2-tetrahydrofuranyI)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(amino(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(ammo(Cl-C5-aIkyI)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(hydroxy(C 1 -C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranylpurin, 6-(3hydroxybenzylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofurany])purin, 6(3-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3hydroxybenzylamino)-8-methylsuIfanyI-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methylsu]fanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzyIamino)-8methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzyIamino)-8fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylainino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6—(4— hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8(amino(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8(amino(Cl-C5-aIkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8(hydroxy(C 1 -C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzy lamino)-8(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-{2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-{4-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4hydroxybenzylaminoj-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-<4-hydroxybenzylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino>-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
-4CZ 306984 B6
6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-inethylbut-2-en-l-ylaniino)-8amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methy lbut-2-en- l-ylamino)-8hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylatnino)-8brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-niethylbut-2-en-l-ylamino)-8(amino(C l-C5-alkyl)amino)-9-(2- tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut2-en-l-ylamino)-8-(amino(C 1-C5- alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -y lamino)-8-(hydroxy(C 1 -C 5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino-8NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylaniino)-8NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purm, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-nitro9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en- 1-ylamíno)-8-sulfany 1-9(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-sulfanyl-9(2-tetrahydrofuranyl)-purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tretrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofurany l)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -y 1amino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -y 1amino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-broni-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino(C 1 -C 5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino>-9-{2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methyIbut-2-en-l-ylamino)-8nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-rnethylbut-2-en-l-ylamino)-8
- 5 CZ 306984 B6 sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8sulfanyl-9-(2-tetrahydrofúranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-enl-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-enl-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-amino-9-(2tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3methylbutylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-fluor-9(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyljpurin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(amino(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-amino(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyljpurin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3methylbutylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-nitro-9-(2tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4hydroxy-3-methylbutylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3methylbutylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-nethoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin.
Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny zahrnující 8-hydroxymethylamino-6-furfurylamino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 8hydroxyethylamino-6-furfurylamino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin a 8-hydroxypropylamino6-furfurylamino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin nebo jejich soli, přičemž furfurylová skupina může být dále substituována jedním nebo více atomy halogenů, hydroxy, methoxy, methylskupinou nebo jejich kombinacemi.
Soli 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů použitelné v tomto vynálezu zahrnují soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy, stejně jako jejich adičních solí s kyselinami. S výhodou se jedná o farmaceuticky nebo kosmeticky akceptovatelné soli. Sloučeniny podle tohoto vynálezu a jejich soli mohou v případě, že obsahují chirální centra, existovat ve formě racemátů nebo opticky aktivních izomerů.
6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny mají širokou škálu biologických aktivit, mezi něž patří antioxidační, protizánětlivá, antisenescenční, prodiferenciační, stejně jako aktivity, které jsou specificky použitelné ve farmaceutických a kosmetických aplikacích. Přípravky podle tohoto vynálezu vykazují dále růstově-regulační, diferenciační, antisenescenční (protistámoucí) vlastnosti o zvýšené selektivitě a účinnosti a rovněž minimální nebo žádné toxicitě v porovnání s analogy známými ze stavu techniky.
Předmětem tohoto vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)purinové deriváty obecného vzorce I pro použití jako antioxidanty pro inhibici nevhodných a nepříznivých metabolických procesů v rostlinách a zvířatech pomocí jak in vivo tak in vitro technik. Předmětem tohoto
-6CZ 306984 B6 vynálezu jsou 6,8-disubstituované-9-(heterocyklyl)purinové deriváty obecného vzorce I pro použití jako antioxidanty pro inhibici peroxidace lipidů v rostlinách a zvířatech pomocí jak in vivo tak in vitro technik.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity jako léčiva. Mohou být použity pro léčbu řady onemocnění u savců, zejména člověka. S výhodou zahrnují tato onemocnění choroby kůže. Sloučeniny podle toho vynálezu mohou být rovněž použity jako neurogenerativní léčiva nebo pro potlačení imunostimulace (např. ošetření artritidy nebo potlačení rejekce transplantátů). Sloučeniny podle vynálezu vykazují zejména antioxidační, antiinflamatomí a antisenescentní vlastnosti.
Tento vynález dále poskytuje použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinového derivátu obecného vzorce I či soli takovéto sloučeniny s alkalickým kovem, amoniakem či aminem ve formě racemátu nebo opticky aktivního izomeru, nebo jeho adiční soli s kyselinou, pro přípravu farmaceutické kompozice.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity v kosmetice. Kosmetické použití těchto sloučenin a jejich solí zahrnuje inhibici, zpomalení, nebo redukci nepříznivých vlivů stárnutí a senescence buněk, zejména epidermálních buněk jakými jsou keratinocyty nebo fibroblasty; kosmetické použití zahrnuje rovněž vylepšení celkového vzhledu a vlastností pokožky, včetně změn souvisejících s věkem a změn, které jsou blízce s věkem související (např. akné, erytém, zarudnutí kůže a další).
Tento vynález dále poskytuje kosmetické kompozice obsahující jeden nebo více 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů obecného vzorce I společně s kosmeticky akceptovatelným nosičem.
Tento vynález rovněž poskytuje použití sloučenin podle tohoto vynálezu pro výrobu léčiva pro inhibici a oddálení účinků stárnutí a/nebo pro zlepšení kosmetického vzhledu savčích buněk, zejména buněk lidské pokožky, a to aplikací účinných koncentrací 6,8-disubstituovaných-9(heterocyklyl)purinů na savčí buňky.
Zlepšení, inhibice a oddálení nepříznivých účinků stárnutí živočišných buněk znamená, že vývoj morfologických změn, které se normálně vyskytují ve spojitosti se stárnutím v normálních savčích buňkách in vitro nebo in vivo je zpomalen, obrácen, nebo zpožděn. Nepříznivé účinky stárnutí rovněž zahrnují se stářím spojené změny genové exprese a proteinové biosyntézy. Za zlepšující účinky jsou v tomto vynálezu považovány ty, které se projevují zvýšením a rychlostí buněčného růstu nebo celkovou proliferační kapacitou ošetřených buněk. Zlepšení, odstranění či oddálení nepříznivých vlivů stárnutí na buněčné úrovni je možné detekovat jako zpomalení nebo obrat morfologických a feno typických změn souvisejících s věkem, které se běžně vyskytují při stárnutí buněk. Změny související s věkem in vivo zahrnují změny v savčích tkáních, jakými jsou vývoj, nárůst počtu a hloubky vrásek, čar, pokleslá kůže, odbarvení, tvorba stařeckých skvrn, kožovatění, nebo nažloutlý vzhled, spojené s kosmetickým vzhledem kůže i změnami ve strukturální a funkční integritě kožních tkání. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle tohoto vynálezu jsou účinné v zlepšování celkového vzhledu a kondice kůže, a to včetně eliminace změn souvisejících se stářím a změn, které se stářím přímo nesouvisejí (např. akné, eiytém, zarudnutí kůže, rosacea, a další).
Přípravky obsahující jeden nebo více 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů jsou s výhodou použitelné pro ošetření senescentních a stárnoucích rostlinných, savčích a lidských buněk.
Předmětem vynálezu je rovněž použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinových derivátů obecného vzorce I jako růstových regulátorů ve tkáňových kulturách pro stimulaci proliferace, morfogeneze a inhibici senescence.
-7CZ 306984 B6
Vhodné cesty pro aplikaci jsou orální, rektální, vazální místní (zahrnující okulámí, bukální a sublinguální), vaginální a parenterální (zahrnující subkutánní, intramuskulámí, intravitreózní, nitrožilní, intradermální, intrathekální a epidurální). Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta, toxicitě sloučeniny a místě infekce, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.
Terapeutický či kosmetický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05g do 1,0g aktivní látky.
Farmaceutické přípravky tohoto vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy. Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze a disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je manitol. Farmaceutické přípravky mohou být sterilizovány anebo obsahují látky neutrální povahy, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla anebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku anebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.
Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8 až 22, s výhodou pak 12 až 22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitamínu E, β-karotenu nebo 3,5— di-fórc-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich izomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, Labrafil M 2375 (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), Labrafd M 1944 CS (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složený z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), Labrasol (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), Miglyol 812 (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce C8 až Cl2 od Huls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sezamový olej, sójový olej a olej z podzemnice olejné.
Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.
Např. farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.
Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktóza, sacharóza, manitol nebo sorbitol, celulózové preparáty anebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelu-8CZ 306984 B6 lózy a polyvinylpyrrolidin, a pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát horečnatý nebo vápenatý, polyethylen glykol 5 nebo jeho deriváty.
Jádra potahovaných tablet mohou být vybavena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol anebo oxid tita10 ničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulózových preparátů jako acetylcelulózaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulózaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávána do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky. Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou 15 také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát horečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapal20 ný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin. Ostatní formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, 25 např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.
Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují 30 kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy.
Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšuj í35 cí viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulózy, sorbitol nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s neutrálními látkami, kde je to vhodné, a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervo vadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina 40 askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.
Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafíny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich 45 estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spaný), s výhodou sorbitan-oleát nebo sorbitan-isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a polyethylen glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonicí látky.
Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafin, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo z podzemnice olejně, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a . o.
distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.
Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou mastné alkoholy, např. isopropyl-myristát, lanolin, včelí vosk, nebo uhlovodíky, s výhodou vazelína (petrolátum) a parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery či kyselé estery polyglycerických mastných kyselin (Tween), dále polyoxyethylenové étery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylenglykol a polyethylenglykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonicí látky.
Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.
Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako chlor-fluor nižší alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a také jsou používána aditiva tam zmíněná.
Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchány zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a polyethylenglykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylenglykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné i ostatní neutrální látky a aditiva.
Tento vynález dále poskytuje veterinární přípravky obsahující nejméně jednu aktivní složku společně s veterinárním nosičem. Veterinární nosiče jsou materiály pro aplikaci přípravku a mohou to být látky pevné, kapalné nebo plynné, které jsou inertní nebo přijatelné ve veterinární medicíně a jsou kompatibilní s aktivní složkou. Tyto veterinární přípravky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jakoukoli jinou požadovanou cestou.
Vynález se také vztahuje na procesy nebo metody pro léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 50 g, s výhodou 0,5 až 10 g.
Objasnění výkresu
Obr. 1. ukazuje vliv sloučeniny 5 na růst kalusu. Kinetin a íram-zeatin (tZ) byly použity jako standardy. Chybové úsečky naznačují směrodatnou odchylku pro 5 opakování. Kontrola vyjadřuje hodnoty pro experiment bez jakéhokoliv cytokininu.
Obr. 2. znázorňuje růstové křivky 6-furfurylamino-8-(2-hydroxyethylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu (sloučenina 243).
- 10CZ 306984 B6
Příklady uskutečnění vynálezu
Vynález je dále doložen následujícími příklady, které jeho rozsah nijak neomezují. Všechny odkazy na literaturu citované v předloženém vynálezu jsou včleněny do textu v závorkách. Není-li uvedeno jinak, všechna procenta a poměrná množství jsou vyjádřena hmotnostními procenty.
Výchozí chemikálie byly zakoupeny od komerčních dodavatelů (Sigma, Aldrich, Fluka, etc.) nebo připraveny postupy popsanými níže.
Odpařování bylo prováděno na rotační vakuové odparce při teplotách nižších než 80 °C. Teploty tání byly stanoveny na Koflerově přístroji a nejsou korigovány. Čistota připravených sloučenin byla kontrolována pomocí elementární analýzy (C, Η, N) stanovené přístrojem EA1112 Flash analyzer (Thermo-Finnigan) a vysokoúčinnou kapalinovou chromatografíí (HPLC) (Beckman Gold systém). Vzorky jednotlivých látek byly rozpuštěny v methanolu a nastříknuty na kolonu LiChroCARD 250 x 4 mm s náplní Purospher RP-18e, 5 pm (Měrek) a eluovány isokraticky mobilní fází sestávající z methanolu (HPLC grade) a AcOH/AcONíL pufru (pH = 3,4; 40 mM; s přídavkem 5 % (v/v) MeOH) ve vhodném poměru (v/v) při průtoku 0,5 ml/min. Eluované látky byly detekovány UV detektorem při 200 až 300 nm. NMR spectra (σ ppm; J, Hz) byla měřena na přístroji Varian Unity 300 (300 MHz) nebo JEOL ECA-500 spectrometer pracující při frekvencích 500,16 MHz (1H) a 125,76 MHz (13C) při 25 °C za použití tetramethylsilanu jako vnitřního standardu. Elektronově ionizační hmotnostní spectra (rel. % složení) byla měřena na VG 7070E spektrometru (70eV, 200 °C, přímý nástřik). Kvadrupólová hmotnostní spectra byla měřena na Micromass ZMD přístroji, ionizace elektrosprejem. Vzorky pro MS měření byly rozpuštěny v methanolu + 5 % (v/v) HCOOH. Jako stacionární fáze pro sloupcovou chromatografii sloužil silikagel PharmPrep 60 CC (40 až 63 pm) (Měrek).
6-Alkylamino-8-substituované-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97f-puriny byly připraveny čtyřstupňovou syntézou, která zahrnovala tetrahydropyranylaci 6-chlorpurinu, reakci 6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu s příslušným alkenyl- nebo arylakylaminem v alkoholu s bází, zavedení halogenového atomu do polohy 8 a následnou substituci halogenu odpovídajícím nukleofilem (aminem nebo alkoholátem) za vzniku 6,8-disubstituovaného-9-THP-purinu.
Příklad 1: Příprava 6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purinu
Sloučenina byla připravena z 6-chlorpurinu podle postupu v literatuře (Taddei et al., Org. Biomol. Chem. 2004, 2, 665). Směs 6-chlorpurinu (20,0 g; 129 mmol), p-toluensulfonové kyseliny (0,23 g; 1,85 mmol), 3,4-dihydro-2Z/-pyranu (14,5 ml; 159 mmol) v tetrahydrofuranu (175 ml) byla refluxována pod argonem při 84 °C po dobu 22 h. Po ochlazení byl přidán koncentrovaný vodný roztok čpavku (5 ml), nerozpuštěné částice odfiltrovány a filtrát odpařen dosucha. Žlutavý olejovitý odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (250 ml), vytřepán nasyceným roztokem NaCl (1 x 75 ml), vodou (2 x 75 ml) a vysušen Na2SO4. Ethyl-acetátový výtřepek byl zakoncentrován ve vakuu a extrahován vroucím cyklohexanem (cca 250 ml). Světle žlutý cyklohexanový extrakt byl zdekantován a nerozpuštěný oranžový zbytek extrahován cyklohexanem ještě dvakrát (2 x 150 ml). Ze spojených cyklohexanových extraktů vykrystalovaly přes noc lednici bezbarvé krystaly. Výtěžek: 19,1 g; 62 %. T. t: 68°C. 'H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.61 (2H, m, THP), 1.76 (1H, m, THP), 2.00 (2H, m, THP), 2.34 (1H, m, THP), 3.73 (1H, m, THP H4'), 4.03 (1H, dm, J= 11 Hz, THP H3'), 5.80 (lH,dd,J= 2.3, 11 Hz, THP H2'), 8.81 (1H, s, H8), 8.92 (lH,s, H2).
Příklad 2: Přípravy 6-alkylamino/aralkylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinů
6-Furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin _ 1 1
6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 1) (3,89 g; 16 mmol) byl rozpuštěn v 1propanolu (30 ml), přidán furfurylamin (2,9 ml; 33 mmol) a triethylamin (4,3 ml; 31 mmol). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc. První podíl krystalů byl odfiltrován, promyt vychlazeným 1-propanolem a důkladně vodou. Filtrát roztoku reakční směsi byl zahříván na 70 °C po 3 h, ochlazen a umístěn přes noc do lednice. Druhý podíl krystalů byl odfiltrován, promyt vychlazeným 1-propanolem a důkladně vodou. Filtrát byl částečným odpaření zahuštěn. Po umístění do lednice přes noc byl získán třetí podíl krystalů produktu. Bělavý krystalický produkt byl vysušen v exsikátoru s P2O5. Výtěžek: 3,46 g; 71 %. T. t.: 141 až 143 °C. HPLC Rt = 9,1 min (70 % CH3OH + 30 % pufr); UV (70 % CH3OH + 30 % pufr) λ1ΜΧ 267 nm, λ„„η 235 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 300 [M+H]+ (100), 322 [M+Na]+(36), 621 [2M+Na]+ (38); (CV 38) m/z (rel. %): 216 [Ci0H9N5O+H]+ (100), 322 [M+Na]+ (56), 238 [Ci0H9N5O+Na]+ (22), 300 [M+H]+ (21).
6-(3-Methylbut-2-en-I-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př. 1) (4,02 g; 17 mmol) byl rozpuštěn ve 2propanolu (47 ml), přidán 3-methylbut-2-en-l-amin hydrochlorid (3,08 g; 25 mmol) a triethylamin (5,9 ml; 42 mmol). Roztok byl míchán a zahříván při 65 °C po 14 h. Směs byla odpařena dosucha, zbytek rozpuštěn v chloroformu (50 ml) a vytřepán s vodou (3 x 30 ml). Chloroformová vrstva byla vysušena MgSO4 a odpařena. Produkt vykrystaloval při sušení odparku v exsikátoru s P2O5 (4,56 g; 94 %). Pevný surový produkt byl krystalován z ethylacetátu (8 ml) za vzniku bílých krystalů. Výtěžek: 2,86 g; 73 %. T. t.: 95 až 98 °C. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 288 [M+H]+ (100), 310 [M+Naf (37), 597 [2 M+Naf (28); (CV 38) m/z (rel. %): 204 [C1OH13N5+H]+ (100), 310 [M+Na]+ (37), 288 [M+H]+ (19), 226 [C10H!3N5+Na]+(17).
(E)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en~l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Připraven analogickým postupem jako 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 2). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 76 %. T. t: 111 až 116 °C (ethyl-acetát). HPLC Rt = 10,4 min (55 % CH3OH + 45 % pufr); Rt = 8,6 min (60 % CH3OH + 40 % pufr); UV (55 % CH3OH + 45 % pufr) Ámax 268 nm, Xmin 231 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 304 [M+H]+ (100), 326 [M+Naf (17), 220 [CíoH]3N50+HJ+ (16).
(Z)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en~l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purm (Z)-4-Amino-l-methylbut-2-en-l-ol (0,87 g; 8,6 mmol) byl rozpuštěn v 1-propanolu (14 ml), přidán triethylamin (0,95 ml; 6,9 mmol) a 6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl}-9//-purin (Př. 1) (1,64 g; 6,9 mmol) a směs zahřívána při 45 °C po 6 h. Po ochlazení byla směs zfiltrována, filtrát vakuově zahuštěn a produkt separován sloupcovou chromatografií (60,3 g silikagelu, mobilní fáze chloroform : aceton 4:1, průtok 7,5 ml/min. Produktem byla světle žlutá viskózní látka, která vykrystalovala po dvou týdnech sušení v exsikátoru s P2O5. Výtěžek 1,50 g; 72 %. T. t.: 127 až 131°C. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 304 [M+H]+ (100), 326 [M+Na]+ (17); (CV 38) m/z (rel. %): 220 [C10H13N5O+H]+ (100), 326 [M+Na]+ (32), 242 [Ci0H13N5O+Na]+(29).
6-Benzylamino-9-(tstrahydropyran-2-yl)-9H-purin
6-Chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (Př. 1) (2,52 g; 10,6 mmol) byl rozpuštěn v 2propanolu (13,5 ml), přidán benzylamin (1,4 ml; 12,8 mmol) and triethylamin (1,5 ml; 10,5 mmol. Roztok byl zamíchání zahříván při 40 °C po 8 h a poté vakuově odpařen. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (20 ml) a vytřepán s vodou (2x15 ml). Ethyl-acetátová vrstva byla vysušena Na2SO4 a odpařena. Produkt krystaloval po vysušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku bílých krystalů. Výtěžek (2,14 g; 66 %). T. t: 124 až 127 °C. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 310 [M+Hf (100); (CV 40) m/z (rel. %): 226 [C12H11N5+H]+ (100), 310 [M+H]+ (13).
- 12CZ 306984 B6
Příklad 3: Příprava 8-halogen-6-alkylamino/aralkylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9.ří-purinů
8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Sloučenina byla připravena z 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97/-purinu (Př. 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 1,8 M roztoku lithiumdiisopropylamidu (20 ml; 36 mmol) bylo v atmosféře argonu smíšeno se suchým tetrahydrofuranem (30 ml) a ochlazeno na -78 °C. K roztoku byl během 20 min přikapán roztok 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purinu (3,64 g; 12,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (35 ml). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po 2 h. Poté byl během 20 min přikapán benzensulfonylchlorid (4,7 ml; 36,6 mmol) a směs za chlazení míchána další 3 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH4C1 (30 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována diethyletherem (2 x 27 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem NaCl (65 ml) a vodou (2 x 50 ml), vysušeny Na2SO4 a odpařeny. Surový produkt byl zbaven benzensulfonamídu krystalizací z ethyl-acetátu a ethanolu. Matečný louh byl vakuově zahuštěn a podroben sloupcové chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 95:5). Produkt byl rekrystalován ze směsi methanol/diethylether. Světle béžové krystaly. Výtěžek: 2,80 g; 69 %. T. t.: 110 až 114 °C. HPLC Rt = 17,3 min (60 % CH3OH + 40 % pufr) (průtok 0,6 ml/min). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 334 [M+H]+ (100), 336 [M+H]+ (51); (CV 20) m/z (rel. %): 334 [M+H]+ (100), 336 [M+H]+ (34), 250 [Ci0H8C1N5O+H]+ (53), 252 [Ci0H8C1N5O+H]+ (19). *H NMR (300 MHz, DMSO-40: δ 1.62 (3Η, mm, THP, Η4', 5'), 1.85 (1H, dd, J= 12.6, 2.4 Hz, THP H3'), 1.97 (1H, d, J= 11.2 Hz, THP H4'), 2.89 (1H, qq, J = 11.8, 4.1 Hz, THPH3'), 3.66(1H, tt,J= 11.3, 3.6 Hz THP H6'), 4.02 (1H, d, J= 11.3 Hz, THP H6'), 4.66 (2H, s, -NH-CH2-Fur), 5.63 (1H, d, J = 10.6 Hz, THP H2'), 6.22 (1H, d, J = 2.6 Hz, Fur H3'), 6.35 (1H, m, Fur H4’), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 8.26 (1H, s, H2), 8.42 (1H, bs, N6H). 13C NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 22.58 (THP C4'), 24.46 (THP C5'), 28.09 (THP C3'), 36.51(NH-CH2-Fur), 68.10 (THP C6'), 83.11(THP C2'), 106.71 (Fur C3'), 110.43 (Fur C4fy 117.87 (C5), 136.32 (C8), 141.87(Fur C5'), 150.16 (C4), 152.62 (Fur C2’), 152.73 (C2), 153.11 (C6).
8-Brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Sloučenina byla připravena z 6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu (Př. 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (0,93 g; 3,1 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (10 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K. roztoku byl během 10 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (3,7 ml; 7,5 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 10 min přikapán roztok tetrabrommethanu (2,7 g; 8,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (3,5 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH4C1 (9 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (15 ml) a vodou (2 x 15 ml), vysušena MgSO4 a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 3:2). Produkt krystaloval po 4 dnech sušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku světle béžovo-hnědé látky, po rozetření prášku. Výtěžek: 0,44 g; 37 %. T. t.: 108 až 112 °C (ethyl-acetát). HPLC Rt = 11,5 min (75 % CH3OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) λ,„αχ 272 nm, λ,ηιπ 238 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 380 [M+H]+ (100), 378 [M+H]+ (86), 294 [C10H8BrN5O+H]+ (9); 296 [CwH8BrN5O+H]+ (8); (CV 30) m/z (rel. %): 296 [C10H8BrN5O+H]+ (100), 294 [CI0H8BrN5O+H]+ (93), 228 [C6H5BrN5]+(28), 226 [C6H5BrN5]+ (27), 380 [M+H]+ (10), 378 [M+H]+ (9). ’H NMR (300 MHz, DMSO-fy): δ 1.56 (1H, m, THP H5'), 1.65 (2H, mm, THP H4’, 5'), 1.85 (1H, dd, J= 12.9, 2.4, THP H3’), 1.99 (1H, d, J= 11.8, THP H4'), 3.00 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, THP H3'), 3.65 (1H, tt, J = 11.3, 3.6, THP H6'), 4.04 (1H, d, J = 11.3, THP H6'), 4.67 (2H, bs, NH-CH2-Fur), 5.61 (1H, dd, J = 11.2, 2.0, THP H2'), 6.23 (1H, d, J= 3.2, Fur H3’), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 8.24 (1H,
- 13 CZ 306984 B6 s, H2), 8.42 (1H, bs, N6H). l3C-NMR (300 MHz, DMSOx/Ř): δ 22.56 (THP C4'), 24.37 (THP C5'), 27.98 (THP C3'), 36.44 (NH-CH2-Fur), 68.04 (THP C6'), 84.10 (THP C2'), 106.62 (Fur C3'), 110.34 (Fur C4'), 119.46 (C5), 125.88 (C8), 141.76 (Fur C5'), 150.13 (C4), 152.45 (C2), 152.56 (FurC2r), 152.95 (C6).
8-Chlor-6-(3-methylbut~2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran--2-yl)-9H-purm
Sloučenina byla připravena z 6-(3-methylbut-2-en-l-yIamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7purinu (Př. 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-(3-Methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl}-9/7-purin (2,08 g; 7,2 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (30 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 30 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (22 ml; 44 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok hexachlorethanu (3,43 g; 14,5 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (15,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 18% NH4C1 (30 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (40 ml) a vodou (2 x 25 ml), vysušena Na2SO4 a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze hexany:ethyl-acetát, 3:2; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Produkt krystaloval po sušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 1,53 g; 66 %. T. t.: 118 až 120 °C (krystalováno ze směsi hexany : ethyl-acetát, 3:2). HPLC R, = 14,5 min (80 % CH3OH + 20 % pufr). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 322 [M+H] (100), 324 [M+H]+ (31); (CV 35) m/z (rel. %): 238 [C1OH12C1N5+H]+ (100), 240 [CioH]2C1N5+H]+ (31), 182 [C6H5C1N5]+ (17), 170 [C5H4C1N5]+ (17), 322 [M+H]+ (12). ‘HNMR (300 MHz, DMSO-í/6); δ 1.55 (3H, mm, THP, H4', 5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.84(1H, d,J = 13.0 Hz, THP H3'), 1.97 (1H, d,J= 11.0 Hz, THP H4’), 2.89 (1H, qq,J= 12.4, 3.4 Hz, THP H3'), 3.65 (1H, tt, J = 11.3, 3.6 Hz THP H6'), 4.01 (1H, m, THP H6'), 4.04 (2H, bs, -NH-CHz-), 5.26 (1H, t, J = 6.6 Hz, -CH2-CH=), 5.62 (1H, d, J = 11.7 Hz, THP H2'), 8.07 (1H, bs, N6H), 8.22 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-í/ó): δ 17.74 (-CH3), 22.49 (THP C4'), 24.36 (THP C5'), 25.30 (-CH3), 27.98 (THP C3'), 37.56 (-NH-CH2-), 68.00 (THP C6'), 82.94 (THP C2’), 117.72 (C5), 121.72 (-CH=), 133.30 (=C<), 135.74 (C8), 149.41 (C4), 152.77 (C2), 153.00 (C6).
8-Brom-6-(3-methylbut~2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Sloučenina byla připravena z 6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//purinu (Př. 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-(3-Methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (3,00 g; 10,42 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (30 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 40 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (31 ml; 62 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok tetrabrommethanu (8,50 g; 25,6 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (8,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH4C1 (50 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (50 ml) a vodou (2 x 50 ml), vysušena Na2SO4 a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát (3:2); na TLC chromatogramu Rf = 0,17). Produkt krystaloval po sušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 2,28 g, 60 %. T. t: 125 až 128 °C (hexany). HPLC Rt = 14,2 min (80 % CH3OH + 20 % pufr). UV (70 % CH3OH + 30 % pufr) Xmax 274 nm, λ„1ιη 235 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 368 [M+H]+(100), 366 [M+H]+ (98), 282 [C10HnBrN5+H]+ (30), 284 [C10H||BrN5+H]+ (28). 'H NMR (300 MHz, DMSO-í/4): δ 1.55 (3H, mm, THP, H4', 5'), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.82 (1H, d, J = 12.8 Hz, THP H3'), 1.97 (1H, m, THP H4'), 2.99 (1H, qq, 12.1,4.0 Hz, THP H3’), 3.63 (1H, tt, J = 10.8, 3.6 Hz THP H6'), 4.01 (1H, m,
- 14CZ 306984 B6
ΤΗΡ H6'), 4.05 (2H, bs, -NH-CH2-), 5.26 (1H, t, J = 6.4 Hz, -CH2-CH=), 5.59 (1H, d, J = 10.9 Hz, ΤΗΡ H2'), 8.08 (1H, bs, N6H), 8.20 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-4): δ 17.74 (-CH3), 22.56 (THP C4'), 24.36 (THP C5'), 25.30 (-CH3), 27.96 (THP C3'), 37.56 (-NH-CH2-), 68.01 (THP C6'), 84.02 (THP C2’), 119.43 (C5), 121.73 (-CH=), 125.36 (C8), 133.27 (=C<), 149.80 (C4), 152.58 (C2), 153.00 (C6).
(E)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9El·purin (E)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 2) (0,93 g; 3,1 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (15 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (15 ml; 30 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1,5 h. Poté byl během 12 min přikapán roztok hexachlorethanu (2,14 g; 9,0 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (6,0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH4C1 (20 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována ethyl-acetátem (3x10 ml). Organická vrstva byla promyta nasyceným roztokem NaCl (50 ml) a vodou (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny Na2SO4 a odpařeny. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografíi (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton 95:5. Produkt krystaloval po sušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku béžové látky. Výtěžek: 0,51 g; 49 %. T. t.: 130 až 134 °C (2-propanol). HPLC Rt = 15,3 min (60 % CH3OH + 40 % pufr), MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 338 [M+H]+ (100), 340 [M+H]+ (33); (CV 20) m/z (rel. %): 254 [C10H12ClN5O+H]+ (100), 256 [Ci0H,2ClN5O+H]+ (45), 338 [M+H]+ (86), 340 [M+H]+ (44). ’H NMR (300 MHz, DMSO-40: δ 1.55 (1H, m, THP, H5'), 1.60 (1H, m, THP, H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.70 (1H, m, THP, H4'), 1.84 (1H, dd, J= 12.8,2.2 Hz, THP H3'), 1.98 (1H, d, J = 12.3 Hz THP H4'), 2.89 (1H, qq, J = 12.1,3.6 Hz, THP H3'), 3.63 (1H, tt, J= 11.3, 3.6 Hz THP H6'), 3.78 (2H, d, J= 5.7 Hz, -CH2-OH), 4.03 (1H, d, J= 11.3 Hz THP H6'), 4.10 (2H, bs, -NH-CH2-), 4.72 (1H, t, J = 5.7 Hz, OH), 5.50 (1H, tt, J = 6.7, 1.7 Hz, -CH2-CH=), 5.63 (1H, dd, J = 11.3, 2.2 Hz, THP H2'), 8.04 (1H, bs, N6H), 8.23 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-Js): δ 13.56 (-CH3), 22.52 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.04 (-CH2OH), 28.04 (THP C3'), 37.25 (-NH-CH2-), 65.75 (-CH^OH), 68.03 (THP C6'), 82.99 (THP C2'), 117.80 (C5), 120.32 (-CH=), 135.79 (C8), 137.39 (=C<), 149.49 (C4), 152.78 (C2), 153.12 (C6).
(E)-8-Brom-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylammo)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin (£)-6-(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-y 1 )-9//-purin (Př. 2) (2,44 g; 8,0 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (55 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K. roztoku byl přikapán 1,8 Μ roztok lithiumdiisopropylamidu (45 ml; 90 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 35 min přikapán roztok tetrabrommethanu (8,01 g; 24,2 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (20 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH^Cl (70 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Vodná vrstva byla extrahována diethyletherem (1 x 70 ml). Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem NaCl (2 x 50 ml), vysušeny Na2SO4 a odpařeny. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : ethylacetát 1:3; na TLC chromatogramu Rf = 0,11). Produkt krystaloval po sušeni v exsikátoru s P2O5 za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 1,19 g; 45 %. T. t.: 138 až 142 °C (ethyl-acetát). HPLC Rt = 15,5 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) 274 nm, λ,η,η 235 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 382 [M+H]+ (100), 384 [M+H]+ (92); 406 [M+Na]+ (60), 404 [M+Na]+ (57); (CV 37) m/z (rel. %): 406 [M+Na]+ (100), 404 [M+Na]+ (96), 332 [C10HI2BrN5O+Na]+ (88), 320 [Ci0Hi2BrN5O+Na]+ (85), 300 [Ci0Hi2BrN5O+H]+ (84), 298 [Cl0H12BrN5O+H]+ (82), 382 [M+H]+ (36), 384 [M+H]+ (35). *H NMR (300 MHz, DMS(Wá): δ 1.55 (1H, m, THP, H5’), 1.60 (1H, m, THP, H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.70 (1H, m, THP, H4'), . 1 s .
1.84 (1H, dd, J = 12.8, 2.2 Hz, ΤΗΡ H3’), 1.98 (1H, d, J= 12.3 Hz ΤΗΡ H4'), 2.89 (1H, qq, J=
12.1, 3.6 Hz, ΤΗΡ H3'), 3.63 (1H, tt, J = 11.3, 3.6 Hz ΤΗΡ H6'), 3.78 (2H, d, J = 5.7 Hz, -CH2OH), 4.03 (1H, d, J = 11.3 Hz ΤΗΡ H6'), 4.10 (2H, bs, -NH-CH2-), 4.72 (1H, t, J = 5.7 Hz, OH), 5.50 (1H, tt, J = 6.7, 1.7 Hz, -CH2-CH=), 5.63 (1H, dd, J = 11.3, 2.2 Hz, ΤΗΡ H2'), 8.04 (1H, bs, N6H), 8.23 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-J6), δ 13.56 (-CH3), 22.52 (THP C4'), 24.39 (THP C5'), 28.04 (-CH2-OH), 28.04 (THP C3'), 37.25 (-NH-CH2-), 65.75 (-CH2OH), 68.03 (THP C6'), 82.99 (THP C2'), 117.80 (C5), 120.32 (_CH=), 135.79 (C8), 137.39 (=C<), 149.49 (C4), 152.78 (C2), 153.12 (C6).
8-Brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran~2-yl)-9H-purin
Sloučenina byla připravena z 6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97f-purinu (Př. 2) podle postupu popsaného v literatuře (Nolsoe et al., Synth. Commun. 1998, 28, 4303; Gunji, Helv. Chim. Acta 2000, 83, 1331). 6-Benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (2,14 g; 6,9 mmol) byl v atmosféře argonu rozpuštěn v suchém tetrahydrofuranu (25 ml) a roztok ochlazen na -78 °C. K roztoku byl během 30 min přikapán 1,8 M roztok lithiumdiisopropylamidu (21 ml; 42 mmol). Reakční směs pak byla míchána při -78 °C po dobu 1 h. Poté byl během 20 min přikapán roztok tetrabrommethanu (4,58 g; 13,8 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (10.0 ml) a směs za chlazení míchána další 1 h. Reakce byla ukončena přikapáním 20% NH4CI (44 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a poté, co teplota směsi dosáhla laboratorní teplotu, byly dvě vrstvy reakční směsi separovány. Organická vrstva byla promyta vodou (3 x 30 ml), vysušena Na2SO4 a odpařena. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze hexany : ethylacetát 3:2; na TLC chromatogramu Rf = 0,17). Produkt krystaloval po sušení v exsikátoru s P2O5 za vzniku světle béžové látky. Výtěžek: 2,05 g; 76 %. T. t.: 120 až 124 °C (hexany). HPLC Rt = 16,6 min (75 % CH3OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) 274 nm, Zmjn 235 nm. MS ES1+ (CV 10) m/z (rel. %): 390 [M+H]+ (100). 388 [M+H]+ (84). *H NMR (300 MHz, DMSO-40: δ 1.55 (1H, m, THP H5'), 1.66 (3H, mm, THP H4', 5'), 1.84 (1H, d, J = 12.8, THP H3'), 1.98 (1H, d, J = 8.8, THP H4'), 3.00 (1H, qq, J = 12.6, 4.9, THP H3’), 3.69 (1H, m, THP H6'), 4.03 (1H, d, J= 11.8, THP H6'), 4.67 (2H, bs, NH-CH2-Ph), 5.61 (1H, d, J = 9.8, THP H2'), 7.21 (1H, m, Ph H3'), 7.29 (4H, m, Ph), 8.20 (1H, s, H2), 8.59 (1H, bs, N6H).
Tabulka 1: Sloučeniny připravené dle Příkladu 3 (R6 - substituent v poloze 6 purinu,
R8 - substituent v poloze 8 purinu, R9=Cyc - substituent v poloze 9 purinu)
No. Substituent CHN analýza vypočteno / nalezeno ESI-MS [MH|
R6 R8 R9 %c %H %N
1 furiurylamino čl 2-tetrahydropyranyl 54.0/53.9 4.8/4.7 21.0/21.5 334.8
2 benzylamino TT 2-tetrahydropyranyl 59.4/59.5 5.3/5.2 20.4/20.8 344.8
(3 -methyl but-2-en-1 -yl )amino d 2-tetrahydropyranyl 56.0/56.1 6.3/6.5 21.8/21.5 322.8
4 (Z)-(4-hydroxy-3-mcthylbut-2-en-l- yl)amino Cl 2-tetrahydropyranyl 53.3/52.9 6.0/6.2 20.7/21.0 338.8
- 16CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno / nalezeno ESI-MS [M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %N
5 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yl)amino Cl 2-tetrahydropyranyl 53.3/52.7 6.0/6.3 20.7/21.1 338.8
6 allylaniino Cl 2-tetrahydropyranyl 53.2/53.8 5.5/5.4 23.8/23.6 294.8
7 3 -tl uorobenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 56.4/56.0 4.7/4.9 19.3/19.7 362.8
8 3-methoxylbenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 57.8/58.0 5.4/5.3 18.7/18.5 374.9
9 3-hydroxylbenzylamino T 2-tetrahydropyranyl 56.8/57.5 5.0/5.2 19.5/19.1 360.8
10 3,4-dihydroxybenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 54.3/54.5 4.8/4.9 18.6/18.4 376.8
11 3.4-ditluorobenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 53.8/54.0 4.3/4.3 18.4/18.2 380.8
12 3.4-dimethoxybenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 56.5/56.8 5.5/5.4 17.3/17.0 404.9
13 4-hydroxybenzylamino cl 2-tetrahydropyranyl 56.8/56.9 5.0/5.0 19.5/19.6 360.8
14 4-hydroxy-3.5-dimethoxybenzylamino Cl 2-tetrahydropyranyl 54.4/54.6 5.3/5.2 16.7/16.9 420.9
15 anilino Cl 2-tetrahydropyranyl 58.3/58.1 4.9/5.1 21.2/21.3 330.8
16 4-hydroxyanilino Cl 2-tetrahydropyranyl 55.6/55.3 4.7/4.9 20.3/20.3 346.8
17 3-methoxyanilino cl 2-tetrahydropyranyl 56.8/56.7 5.0/5.1 19.5/19.4 360.8
18 3-tIuoroanilino Cl Ž-tetrahydropyranyl 55.3/55.5 4.4/4.5 20.1/19.9 348.8
19 3-chloroanilino Cl 2-tetrahydropyranyl 52.8/53.0 4.2/4.2 19.2/19.0 365.2
20 3-methylanilino cl 2-tetrahydropyranyl 59.4/59.3 5.3/5.4 20.4/20.5 344.8
21 furfurylamino Ur 2-tetrahydropyranyl 47.6/47.4 4.3/4.4 18.5/18.4 379.2
22 benzylamino br J-tetrahydropyranyl 52.6/52.8 4.7/4.5 18.0/18.1 389.3
23 (3-methylbut-2-en-1 -yl)amino Ur 2-tetrahydropyranyl 49.2/49.4 5.5/5.4 19.1/19.2 367.2
24 (E)-(4-hydroxy-3 -methylbut-2-en-1 - yl)amino Br 2-tetrahydropyranyl 47.1/47.2 5.3/5.2 18.3/18.1 383.3
25 (Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l- yl)amino Br 2-tetrahydropyranyl 47.1/47.0 5.3/5.3 18.3/18.3 383.3
26 3-tluorobenzylamino br 2-tetrahydropyranyl 50.3/50.6 4.2/4.1 17.2/17.5 407.2
27 3,4-dÍtluorobenzylamino br 2-tetrahydropyranyl 48.1/47.8 3.8/3.7 16.5/16.3 425.3
28 3-methoxybenzylamino br 2-tetrahydropyranyl 51.7/51.8 4.8/5.0 16.7/16.8 419.3
29 3-hydroxylbenzylamino br 2-tetrahydropyranyl 50.5/50.2 4.5/4.5 17.3/17.1 405.3
- 17CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno / nalezeno ESI-MS [yfH+]
R6 R8 R9 %c %H %N
30 3-chlorobenzylanrino Br 2-tetrahydropyranyl 48.3/48.5 4.1/4.0 16.6/16.8 423.7
31 4-chlorobenzyl amino Br 2-tetrahydropyranyl 48.3/48.5 4.1/3.9 16.6/16.9 423.7
32 2-bromobenzylamino Br 2-tetrahydropyranyl 43.7/43.4 3.7/3.9 15.0/14.9 468.2
33 3-jodobenzylamino Br 2-tetrahydropyranyl 39.7/40.0 3.3/3.3 13.6/13.7 515.2
34 3-methylbenzyIamino ~BF 2-tetrahydropyranyl 53.7/53.6 5.0/5.1 17.4/17.6 403.3
35 2-methoxybenzylamino br 2-tetrahydropyranyl 51.7/51.7 4.8/5.0 16.7/16.8 419.3
36 4-methoxylbenzylamino ΊΒΓ 2-tetrahydropyranyl 51.7/51.6 4.8/4.9 16.7/16.7 419.3
37 4-hydroxybenzylamino Br 2-tetrahydropyranyl 50.5/50.3 4.5/4.6 17.3/17.2 405.3
38 3,4-diclilorobenzylamino Ér 2-telrahydropyranyl 44.7/44.5 3.5/3.2 15.3/15.6 458.2
39 3.4-dihydroxybenzylamino Br 2-tetrahydropyranyl 48.6/48.4 4.3/4.1 16.7/17.1 421.3
40 2-hydroxy-3-methoxybenzylamino 2-tetrahydropyranyl 49.8/50.1 4.6/4.5 16.1/16.0 435.3
41 3.4-dimethoxybenzylamino ~BFI 2-tetrahydropyranyl 50.9/50.8 5.0/5.2 15.6/15.4 449.3
42 anilino Τ5Γ 2-tetrahydropyranyl 51.4/51.4 4.3/4.2 18.7/18.5 375.2
43 3-methoxyanilino ΒΓ 2-tetrahydropyranyl 50.5/50.5 4.5/4.5 17.3/17.5 405.3
44 4-hydroxyanilino 2-tetrahydropyranyl 49.3/49.5 4.1/4.1 18.0/18.0 391.2
63 iurluryjamino cl 2-tetrahydrofuranyl 52.6/52.9 4.4/4.6 21.9/22.1 320.8
64 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 - yljamino Cl 2-tetrahydroftiranyl 51.9/52.2 5.6/5.4 21.6/21.5 324.8
65 (3-meíhylbut-2-en-l -yl Jamino 2-tetrahydrofuranyl 54.6/54.8 5.9/5.7 22.8/22.9 308.8
66 3.4-dihydroxybenzy lamino “cr 2-tetrahydrofuranyl 53.1/53.5 4.5/4.6 19.4/19.2 362.8
67 3.4-diiluorobenzylamino 2-tetrahydrofuranyl 52.5/52.8 3.9/3.8 19.2/19.0 366.8
68 3.4-dimethoxybenzyiamino “rr 2-tetrahydrofuranyl 55.5/55.2 5.2/5.3 18.0/17.6 340.8
69 3-methoxylbenzylamino TT“ 2'tetrahydroiuranyl 56.8/56.7 5.0/5.1 19.5/19.7 360.8
70 3-hydroxybenzylamÍno cl 2-tetrahydrol'uranyl 55.6/55.4 4.7/4.8 20.3/20.1 346.8
71 3-íluorobenzylamino Cl 2-tetrahydrofuranyl 55.3/55.6 4.4/4.4 20.1/19.8 348.8
72 lurfurylamino 2-tetrahydrofuranyl 46.2/46.0 3.9/4.0 19.2/18.9 365.2
73 benzylamino Ér 2-tetrahydroturanyl 51.4/51.3 4.3/4.1 18.7/18.5 375.2
74 (Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l- Ί5Γ 2-tetrahydrofuranyl 45.7/45.7 4.9/4.5 19.0/19.2 369.2
- 18 CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno / nalezeno ESI-MS [IVťlť]
R6 R8 R9 %c %H %N
yljamino
75 (3-metliylbut-2-en-l-yl)amino Ur 2-tetrahydroťuranyl 47.7/47.9 5.2/5.2 19.9/19.8 353.2
76 3-hydroxylbenzylamino i 2-tetrahydroftiranyl 44.0/44.1 3.7/3.8 16.0/16.1 438.2
77 4-liydroxybenzylamino 1 2-letraliydrofuranyl 44.0/43.8 3.7/3.9 16.0/16.0 438.2
78 anilino “T“ 2-tetrahydrofuranyl 44.2/44.1 3.5/3.6 17.2/17.5 408.2
79 3-hydroxy anilino 1 2-tetrahydroíwanyl 42.6/42.5 3.3/3.1 16.6/17.0 424.2
Příklad 4: Přípravy 6-alkylamino-8-substituovaných-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/f-purinů
6~Furfurylamino-8-dimethylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)~9H-purin
8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/Z-purin (Př. 3) (229 mg, 0,69 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (3 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc a pak odpařen. Odparek byl rozpuštěn v chloroformu (6 ml), Vytřepán s vodou (2 x 7,5 ml), chloroformová vrstva vysušena Na2SO4 a odpařena. Surový produkt poskytl po krystalizaci z ethyl-acetátu (6 ml) nažloutlou krystalickou látku. Výtěžek: 195 mg; 83 %. T. t: 174 až 176 °C. TLC Rf = 0,29 (chloroform : aceton 4:1). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 343 [M+H]+ (100); (CV 24) m/z (rel. %): 259 [Ci2Hi4N6O+H]+ (100). 343 [M+H]+ (89). ’H (500 MHz, DMSO-í4): δ 1.47-1.61 (4H, m), 1.89-1.94 (1H, m), 2.85 (6H, s), 2.99-3.08 (1H, m), 3.58 (1H, dt, J = 11.3 Hz, J = 2.45 Hz), 3.99 (1H, bd, J = 11.31 Hz), 4.63 (2H, bs), 5.29 (1H, dd, J = 11.30 Hz, J= 2.14 Hz), 6.16 (1H, dd, J = 3.06 Hz, J = 0.61 Hz), 6.30 (1H, dd, J= 3.06 Hz, J =
1.83 Hz), 7.47 (1H, dd, J = 1.83 Hz, J = 0.61 Hz), 7.56 (1H, t, J= 6.11 Hz), 8.06 (1H, s). ,3C (125 MHz, DMSO-4)? 23.5, 25.0, 28.0, 37.2, 42.8, 68.4, 83.3, 107.0, 110.9,117.4, 142.2,150.5,
150.8, 152.7, 153.9, 155.9.
8—(2-Aminoethylamino)-6~furfurylammo—9—(tetrahydropyran—2—yl)—9H—pwin
8-Brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 3) (0,40 g; 1,05 mmol) byl rozpuštěn v 1,2-diaminoethanu (3,0 ml). Roztok byl zahříván při 50 °C po dobu 35 min, poté ponechán za laboratorní teploty přes noc. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; gradientova eluce s počáteční mobilní fází chloroform : methanol: NH4OH (95:5:0,5) a konečnou mobilní fází chloroform : methanol: NH4OH (9:1:0,1). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 0,36 g; 77 %. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 358 [M+H]+ (100), (CV 45) m/z (rel. %): 274 [C12H15N7O+H]+ (100), 358 [M+H]+ (37). 'HNMR (300 MHz, CDC13): δ 1.65-1.83 (4H, m, THP), 1.94-2.15 (2H, m, THP), 2.99 (1H, q, J = 6.2 Hz, THP), 3.43-3.60 (3H, m, -NH-CH2-CH2-), 3.77-3.68 (1H, m, -NH-CH2-CH2-), 4.20 (1H, d, J = 11,2 Hz, THP), 4.75-4.88 (3H, m, THP, -NH-CH2-Fur), 5.72 (1H, d,J= 9,7 Hz, THP ),
5.83 (IH, m, Fur), 6.29 (2H, d, J = 9,7 Hz, Fur), 7.38 (1H, s, -NH-CH2-Fur), 8.19 (1H, s, H2). I3C NMR (300 MHz, CDC12): δ 22.04, 24.63, 29.22, 37.26, 40.70, 44.76, 68.82, 82.04, 106.68, 109.86, 116.89, 141.51, 148.11, 149.15, 150.65, 151.32, 152.04.
6—Furfurylamino-8—(2-hydroxyethylamino)—9—(tetrahydropyran—2—yl)—9H—purin n
8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97/-piirin (Př. 3) (0,30 g; 0,9 mmol) byl rozpuštěn v ethanolaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 80 °C po dobu 75 min. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 95:5:0,5). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem nažloutlá pěna. Výtěžek: 0,18 g; 56 %. HPLC Rt = 12,5 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) Xmax 283 nm, Xmin 243 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 359 [M+H]+ (100), 275 [C12H14N6O2+H]+ (8); (CV 40) m/z (rel. %): 275 [C12H14N6O2+H]+ (100). 359 [M+H]+ (19). ’H (500 MHz, DMSO-<76): 5 1.47-1.51 (1H, m), 1.54-1.63 (3H, m), 1.86-1.94 (1H, m), 2.47-2.54 (1H, m), 3.37-3.41 (2H, m), 3.56-3.57 (2H, bs), 3.60-3.65 (1H, m), 3.96-3.99 (1H, bd, J= 10.39 Hz), 4.6M.62 (2H, d), 4.75 (1H, bs), 5.49 (1H, dd, J = 10.80 Hz, J = 2.32 Hz), 6.14-6.15 (1H, bd, J= 3.06 Hz), 6.28-6.32 (2H, m), 7.15-7.18 (1H, t), 7.46—7.47 (1H, m), 7.94 (1H, s). ,3C (125 MHz, DMSO-J6): δ 23.1, 24.9, 28.9, 37.3, 45.3, 60.2, 68.5, 81.7, 106.8, 110.9,
117.6, 142.0, 149.1, 149.5, 151.3, 151.8, 154.2.
6-Furfurylammo-8-(3-hydroxypropylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purine
8-Chlor-6-furfiirylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/f-purin (Př. 3) (0,28 g; 0,8 mmol) byl rozpuštěn v 3-amino-l-propanolu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 6 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 85:15, na TLC chromatogramu Rf = 0.14). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem nažloutlá pěna. Výtěžek: 0,28 g; 90 %. HPLC Rt = 11,6 min (65 % CH3OH + 35 % pufr). UV (65 % CH3OH + 35 % pufr) Ámax 283 nm, Xmin 244 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 373 [M+H]+ (100), 289 [Ci3Hi6N6O2+H]+ (14). (CV 30) m/z (rel. %): 289 [Ci3H16N6O2+H]+ (100), 373 [M+H]+ (82). ]H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.51 (1H, m, ΤΗΡ Η5'), 1.64 (3Η, mm, ΤΗΡ H3', 4', 5'), 1.77 (2H, dui, J = 6.2, -NH-CH2-CH2-CH2-), 1.93 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 2.56 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, ΤΗΡ H3'), 3.45 (2H, J = t, 6.0, -NH-CH2-CH2-CH2-), 3.53 (2H, t, J = 5.9, -NH-CH2-CH2-CH2-OH), 3.65 (1H, tt, J = 11.3, 3.3, THP H5’), 4.01 (1H, d, J= 11.3, THP H6'), 4.67 (2H, d, 6.2, -NH-CH2-Fur), 4.68 (1H, bs, -OH), 5.52 (1H, dd, J = 11.2, 2.0, THP H2'), 6.19 (1H, d, J = 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 6.50 (1H, t, J = 5.5, HN8), 7.24 (1H, t, J = 6.2, HN6), 7.51 (1H, m, Fur H5'), 7.99 (1H, s, H2). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 22.57 (THP C4'), 24.31 (THP C5'), 28.32 (THP C3'), 36.81 (NH-CH2-Fur), 31.93 (-NH-CH2CH2-CH2-), 39.98 (-NH-CH2-CH2-CH2-), 58.94 (-CH2-CH2-CH2-NH2), 67.94 (THP C6’), 81.12 (THP C2'), 106.34 (FurC3'), 110.35 (Fur C4’), 117.12 (C5), 141.54 (FurC5'), 148.48 (C2), 148.99 (C4), 150.70 (C6), 151.23 (C8), 153.70 (FurC2').
8-Allylammo-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
8-Chlor-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Z7-purin (Př. 3) (0,21 g; 0,64 mmol) byl rozpuštěn v allylaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 10 h. Reakční směs byla odpařena a odparek odpařen s methanolem (3x3 ml) a chloroformem (3x3 ml). Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem narezlá viskózní látka. Výtěžek: 0,13 g; 58 %. HPLC (průtok 0,6 ml/min) Rt = 23,5 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 355 [M+H]+ (100), 709 [2M+H]+ (21), (CV 20) m/z (rel. %): 355 [M+H]+ (100), 271 [C13H14N6O+H]+ (24), 'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.51 (1H, m, THP H5'), 1.65 (3H, mm, THP H3', 4', 5'), 1.94 (1H, d, J= 11.8, THP H4'), 2.63 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, THP H3'), 3.69 (1H, m, THP H6'), 4.01 (1H, m, THP H6'), 4.02 (2H, t, J = 5.5, -CH2-CH=CH2), 4.67 (2H, d, J = 6.2, -NHCH,-Fur), 5.09 (1H, dd, J = 10.3, 1.5, -CH2-CH=CH2), 5.21 (1H, dd, J = 17.2, 1.8, -CH2CH=CH2), 5.53 (1H, dd, J= 11.2, 2.0, THP H2'), 5.99 (1H, m, -CH2-CH=CH2), 6.19 (1H, d,J = 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 6.59 (1H, t, J = 5.9, HN8), 7.20 (1H, t, J= 6.2, HN6), 7.51 (1H, m, Fur H5'), 7.99 (1H, s, H2). I3C-NMR (300 MHz, DMSO-fy): δ 22.57 (THP C4'), 24.28 (THP C5'), 28.29 (THP C3’), 36.76 (NH-CH2-Fur), 44.35 (-CH2-CH=CH2), 67.89 (THP C6'), 81.17 (THP C2'), 106.30 (Fur C3'), 110.27 (Fur C4'), 115, 01 (-CH2-CH=CH2), 117.09 (C5),
-20CZ 306984 B6
135.78 (-CH2-CH=CH2), 141.46 (Fur C5'), 148.51 (C2), 149.15 (C8), 150.77 (C6), 150.87 (C4), 153.64 (FurC2').
6-Furfurylamino-8-methoxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
7erc-butoxid sodný (107 mg, 0,53 mmol) byl přidán k roztoku 8-chlor-6-furfurylamino-9(tetrahydropyran-2-yl)-977-purinu (264 mg, 0,79 mmol) (Př. 3) v suchém methanolu (7 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C po dobu 10 h, zfiltrován a filtrát odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografíí (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1) a krystalován z ethyl-acetátu. Bílá krystalická látka. Výtěžek: 201 mg; 73 %. T. t.: 137 až 139 °C. MS ESI+ (CV 25) m/z (rel. %): 246 [CnHnN5O2+H]+ (100), 330 [M+H]+ (91). 'HNMR (300 MHz, CDC13): δ
l. 52 (1H, m, ΤΗΡ H5’), 1.60 (2H, mm, ΤΗΡ H4', 5'), 1.75 (1H, d, J= 11.8, ΤΗΡ H3'), 1.94 (1H, d, J = 11.8, ΤΗΡ H4'), 2.75 (1H, qq, J = 11.8, 4.2, THP H3’), 3.59 (1H, tt, J = 11.3, 3.6, THP H6'), 3.98 (1H, d, J = 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.11 (3H, s, -OCH3), 4.69 (2H, d, J= 6.2, -NH-CH2-Fur), 5.46 (1H, dd, J = 11.2, 2.0, ΤΗΡ H2'), 6.21 (1H, d, J = 3.2, Fur H3'), 6.34 (1H, m, Fur H4'), 7.52 (1H, m, Fur H5'), 7.68 (1H, t, J = 6.2, HN6), 8.31 (1H, s, H2). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-c/6): δ 22.67 (THP C4'), 24.47 (THP C5'), 27.94 (THP C3'), 36.72 (NH-CH2-Fur), 57.08 (-OCH3), 67.72 (THP C6'), 80.79 (THP C2'), 106.39 (Fur C3'), 110.30 (Fur C4’), 114.78 (C5), 141.58 (Fur C5’), 148.81 (C8), 150.58 (C2), 152.09 (C6), 153.23 (Fur C2’), 154.16 (C4).
6-Furfurylamino-8-propyloxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
8-Brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/f-purin (Př. 3) (303 mg; 0,80 mmol) byl rozpuštěn v 1-propanolu (5,0 ml). K roztoku byl přidán vodný roztok NaOH (0,41 g; 10,25 mmol; 13 ml). Reakční směs byla za energického míchání zahřívána při 60 °C přes noc a poté odpařena. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (10 ml), promyt vodou (3x10 ml), vysušen MgSO4, zfiltrován a odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografíí (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 3:2; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 187 mg; 65 %. HPLC Rt = 15,9 min (75 % CH3OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) Xmax 257 nm, λιηιη 235 nm. MS ESI+ (CV 10) 358 [M+H]+ (100), (CV 25) m/z (rel. %): 330 [M+H]+ (100), 274 [C13H15N5O2+H]+ (97). ’H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.00 (3H, t, J = 11.8, -CH2CH2CH3), 1.56 (3H, m, THP H4', H5'), 1.80 (3H, m, THP H3', -CH2CH2CH3), 1.96 (1H, d, J = 11.9, THP H4'), 2.75 (1H, qq, J = 12.0, 3.5, THP H3’), 3.59 (1H, tt, J = 11.5, 2.4, THP H6'), 3.98 (1H, d, J = 11.0, THP H6'), 4.46 (2H, q, J = 4.1, -CH2CH2CH3), 4.69 (2H, d, J = 5.7, -NH-CH2-Fur), 5.47 (1H, dd, J = 11.1, 1.7, THP H2'), 6.20 (1H, d, J = 2.9, Fur H3'), 6.34 (1H, t, J= 2.3, Fur H4'), 7.52 (1H, s, Fur H5'), 7.59 (1H, t, J = 6.0, HN6), 8.31 (1H, s, H2). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-c/6): δ 10.06 (-CH2CH2CH3), 21.61 (-CH2CH2CH3), 22.71 (THP C4'), 24.22 (THP C5'), 27.97 (THP C3'), 36.90 (NH-CH2-Fur), 67.72 (THP C6'), 71.34 (t -CH2CH2CH3), 80.74 (THP C2'), 106.38 (Fur C3'), 110.28 (Fur C4'), 114.82 (C5), 141.56 (Fur C5'), 148.81 (C8), 150.48 (C2), 152.02 (C6), 153.25 (Fur C2’), 153.27 (C4).
8-Benzyloxy-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Sodík (25 mg; 1,1 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (3 ml). K roztoku benzylalkoholátu byl přidán 8-brom-6-furfurylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purin (206 mg; 0,54 mmol) (Př. 3). Reakční směs byla zahřívána na 65 °C přes noc. Po ochlazení byla zředěna ethyletherem (8 ml). Precipitát byl odfdtrován, filtrát zahuštěn a čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze hexany : ethyl-acetát, 1:1; na TLC chromatogramu Rf = 0,09). Po sloupcové chromatografíí byl viskózní produkt rozetřen s hexany a precipitát krystalován z methanolu. Bílá krystalická látka. Výtěžek: 43 mg; 20 %. T. t.: 132 až 135 °C. HPLC Rt = 13,8 min (80 % CH3OH + 20 % pufr), Rt = 21,3 min (75 % CH3OH + 25 % pufr). UV (75 % CH3OH + 25 % pufr) λπ13χ 268 nm, λιηιη 236 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 406 [M+H]+ (100), 322 [Ci7H15N5O2+H]+ (17), (CV 40) m/z (rel. %): 322 [C17H15N5O2+H]+ (100), 254 [C13Hl2N5O]+
-21 CZ 306984 B6 (27), 406 [M+H]+ (24). 'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.57 (2H, s, ΤΗΡ H5'), 1.56 (1H, mm, THPH4'), 1.77 (1H, d,J= 13.1, ΤΗΡ H3’), 1.94 (1H, d,J= 11.9, ΤΗΡ H4’), 2.76 (1H, qq,J =
12.1, 3.3, ΤΗΡ H3'), 3.59 (1H, m, ΤΗΡ H6'), 4.00 (1H, d, J = 11.3, ΤΗΡ H6'), 4.71 (2H, d, J = 6.2, -NH-CH2-Fur), 5.50 (1H, d, J = 10.7, ΤΗΡ H2'), 5.57 (2H, d, J = 1.4, O-CH2-Ph), 6.21 5 (1H, m, Fur H3'), 6.34 (1H, s, Fur H4'), 7.41 (3H, m, HBn), 7.52 (3H, m, Fur H5', HBn), 7.69 (1H, t, J= 5.6, HN6), 8.15 (1H, s, H2). I3C-NMR (300 MHz, DMSO-<4): δ 22.63 (ΤΗΡ C4), 24.51 (ΤΗΡ C5'), 28.00 (ΤΗΡ C3'), 36.90 (NH-CH2-Fur), 71.02 (-OCH2-Ph), 67.72 (THP C6'), 80.84 (THP C2’), 106.44 (Fur C3'), 110.30 (Fur C4'), 114.82 (C5), 127.79 (Ph), 128.23 (Ph),
128.44 (Ph), 135.61 (Ph), 141.60 (Fur C5'), 148.81 (C8), 150.66 (C2), 152.13 (C6), 153.20 (Fur ío C2'), 154.16 (C4).
6-Furfurylamino-8~methylsulfanyl-9-(tetrahydropyran~2-yl)-9H-purin
Methanthiolát sodný (0,28 g; 4,00 mmol) byl přidán k roztoku 8-brom-6-furfurylamino-915 (tetrahydropyran-2-yl)-977-purinu (0,76 g; 2,01 mmol) (Př. 3) ve 2-propanolu (8 ml). Reakční směs byla zahřívána při 45 °C po dobu 2,5 h, poté odpařena. Odparek byl extrahován směsí voda (6 ml) a ethyl-acetát (7 ml). Vodná vrstva byla pak reextrahována ethyl-acetátem (1x7 ml). Spojené organické vrstvy byly vysušeny Na2SO4, zfíltrovány and odpařeny. Surový krystalický produkt (0,67 g; 96 %) byl krystalován z 2-propanolu (9 ml) and ethanolu (8 ml). Světle žluto20 hnědá krystalická látka. T. t: 153 až 156 °C. HPLC R, = 10,3 min (80 % CH3OH + 20 % pufr).
UV (80 % CH3OH + 20 % pufr) Zmax 285 nm, Zmin 250 nm. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 716 [2M+Na]+ (100), 346 [M+H]+ (97), (CV 25) m/z (rel. %): 716 [2M+Na]+ (100), 346 [M+H]+ (82), 262 [C11H11N5OS+H]+ (24), 'H NMR (300 MHz, CDC13): δ 1.54 (1H, m, THP H5'), 1.61 (1H, m, THP H4'), 1.75 (1H, dd, J = 11.8, 4.2, THP H3'), 1.95 (1H, d, J = 11.8, THP H4'), 2.69 25 (3H, d, J = 0.7, -SCH3), 2.71 (1H, qq,J= 11.8, 4.2, THP H3'), 3.64 (1H, tt, J= 11.3, 3.6, THP
H6'), 4.03 (1H, d, J = 11.3, THP H6'), 4.73 (2H, bs, -NH-CH2-Fur), 5.59 (1H, dd, J = 11.2, 2.0,
THP H2'), 6.23 (1H, dd, J = 3.1, 0.7, Fur H3’), 6.35 (1H, m, Fur H4'), 7.53 (1H, m, Fur H5'), 7.94 (1H, t, J= 6.2, HN6), 8.16 (1H, s, H2). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 14.25 (-SCH3) 22.41 (THP C4'), 24.40 (THP C5’), 28.45 (THP C3'), 36.47 (NH-CH2-Fur), 67.98 (THP C6’), 82.38 30 (THP C2'), 106.57 (Fur C3'), 110.33 (Fur C4'), 118.96 (C5), 141.96 (Fur C5'), 149.01 (C8),
150.88 (C4), 151.23 (C2), 152.28 (C6), 152.69 (Fur C2’).
8-Dimethylamin()-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(telrahydropyran-2-yl)-9-purin
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-97/-purin (Př. 3) (206 mg; 0,56 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (3 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty přes noc a pak odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 95:5). Nažloutlá kiystalická látka. Výtěžek: 169 mg; 91 %. T. t.: 76 až 79°C. HPLC (průtok 0,6 ml/min) Rt - 34,7 min (60 % 40 CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) λ,ΜΧ 281 nm, λ,πίη 245 nm. MS ESI+ (CV
10) m/z (rel. %): 247 [Ci2H18N6+H]+ (100), 331 [M+H]+ (90); (CV 20) m/z (rel. %): 247 [C12H18N6+H]+ (100), 331 [M+H]+ (37). ’HNMR (300 MHz, DMSCM,): δ 1.58 (3H, mm, THP, H4', 5'), 1.65 (3H, s,=C-CH3), 1.67(lH,d,J= 11.8, THP H3’), 1.69 (3H, s, =C-CH3), 1.94 (1H, m, THP H4'), 2.88 (6H, s, -N-(CH3)2), 3.09 (1H, m, THP H3'), 3.61 (1H, tt, J = 11.3, 3.6 Hz 45 THP H6'), 4.03 (1H, m, THP H6'), 4.05 (2H, t, J= 6.2, -NH-CH2-CH=), 5.28 (1H, t, J = 6.2, CH,-CH=), 5.32 (1H, dd, J = 11.2, 2.0, THP H2'), 7.15 (1H, t, J = 6.2, N6H), 8.07 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-ď6): δ 17.74 (=C-CH3), 22.86 (THP C4’), 24.46 (THP C5'), 25.30 (=C-CH3), 27.43 (THP C3'), 37.78 (-NH-CH2-), 42.21 (-N-(CH3)2), 67.78 (THP C6'), 82.68 (THP C2'), 116.61 (C5), 122.56 (-CH=), 132.69 (=C<), 149.56 (C8), 150.40 (C2), 152.37 (C6), 50 155.02 (C4).
8-(2-Aminoethylamino)--6-(3-methylbut-2-en--l-ylcimino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin
-22CZ 306984 B6
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-yIamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin (Př. 3) (296 mg; 0,81 mmol) byl rozpuštěn v 1,2-diaminoethanu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 60 °C pod atmosférou argonu po dobu 5 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 95:5:0,5; na TLC chromatogramu Rf = 0,19). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem bílá pěna. Výtěžek: 260 mg; 93 %. HPLC Rt = 12,8 min (50 % CH3OH + 50 % pufr). UV (50 % CH3OH + 50 % pufr) Xmax 282 nm, Xmin 241 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 346 [M+H]+ (100), 262 [Ci2H18N7+H]+ (12); (CV 30) m/z (rel. %): 262 [C12Hi8N7+H]+ (100), 346 [M+H]+ (59). *H NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 1.52 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.63 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 1.64 (1H, m, ΤΗΡ H5'), 1.66 (3H, s, -CH3), 1.67 (1H, m, ΤΗΡ H3'), 1.69 (3H, s, CH3), 1.93 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 2.59 (1H, qq, J = 11.7, 4.0 Hz, ΤΗΡ H3'), 2.84 (1H, tt, J= 6.2, 2.2 Hz, -CH2CH2NH2), 3.42 (3H, m, -CH2CH2NH2), 3.52 (2H, m, -CH2CH2NH2), 3.66 (1H, t, J =
11.7 Hz, THP H6'), 4.02 (1H, m, ΤΗΡ H6’), 4.4 (2H, s (br), -NH-CH2-CH=), 5.28 (1H, t, J =
6.8, -NH-CH2-CH=), 5.51 (1H, d, J = 11.7 Hz, THP H2'), 6.48 (1H, t, J = 6.0 Hz, -NH-CH2CH2-), 6.81 (1H, t, J = 6.0 Hz, -NH-CH2-CH=), 7.97 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-cZs): 5 17.77 (-CH3), 22.58 (THP C4’), 24.38 (THP C5'), 25.38 (-CH3), 28.32 (THP C3'),
37.88 (-NH-CH2-CH=), 40.57 (-CH2CH2NH2), 44.37 (-NH-CH2CH2-), 67.90 (THP C6'), 81.18 (THP C2'), 116.86 (C5), 122.87 (-CH=) , 132.60 (/ CH2CH=C), 148.50 (C8), 148.77 (C2),
150.88 (C4), 151.07 (C6).
8-(3-Aminopropylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropymn-2-yl)-9(tetrahydropyran)-2-yl)-9H-purin
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-yiamino)-9-tetrahydropyran-2-yl)-9/T-purin (Př. 3) (331 mg; 0,90 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml), 1,3-diaminopropanu (1,4 ml;
16.7 mmol) a triethylaminu (0,15 ml; 1,1 mmol). Roztok byl zahříván při 65 °C pod atmosférou argonu po dobu 16 h. Po ochlazení byla reakční směs umístěna na 3 h do lednice. Vyloučené bílé krystaly solí byly odfiltrovány. Filtrát byl zahuštěn a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1; na TLC chromatogramu Rf = 0,21). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 252 mg; 78 %. HPLC Rt = 14,0 min (50 % CH3OH + 50 % pufr). UV (50 % CH3OH + 50 % pufr) λπωχ283 nm, Xmm 243 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 360 [M+H]+ (100), 276 [C13H20N7+H]+ (13); (CV 45) m/z (rel. %): 276 [C13H20N7+H]+ (100), 208 [C8Hi4N7]+ (45), 360 [M+H]+ (28). 'HNMR (300 MHz, DMSOd6): δ 1.49 (1H, m, THP H5’), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', -CH2CH2CH2NH2), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.93 (1H, m, THP H4’), 2.57 (1H, qq, J = 12.0, 4.4, THP H3'), 2.64 (2H, t, J = 6.3, -CH2CH2CH2NH2), 3.42 (2H, q, J = 6.3, -CH2CH2CH2NH2), 3.64 (1H, t, J =
10.6, THP H6'), 4.03 (3H, m, THP H6', -NH-CH2-CH=), 5.29 (1H, t, J = 6.5, -NH-CH2-CH=), 5.49 (1H, d, J= 9.8, THP H2’)> 6.65 (1H, bs, N8H_), 6.77 (1H, t,J= 5.7, -N6H), 7.95 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-íZ6): δ 17.71 (-CH3), 22.56 (THP C4'), 24.27 (THP C5'), 25.33 (-CH3), 28.22 (THP C3'), 32.23 (-CH2CH2CH2NH2), 37.82 (-NH-CH2-CH=), 39.51 (-CH2CH2NH2), 40.55 (-NH-CH2CH2-), 67.83 (THP C6’), 81.01 (THP C2'), 116.96 (C5), 122.95 (_CH=), 132.37 (-CH2CH=C<), 148.48 (C8), 148.50 (C2), 150.93 (C4), 150.93 (C6).
8-(4-Aminobutylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetratyhydropyran—2-yl)-9H— purin
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 3) (331 mg; 0,90 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml), 1,4-diaminobutanu (0,9 ml; 9,0 mmol) a triethylaminu (0,15 ml; 1,1 mmol). Roztok byl zahříván při 65 °C pod atmosférou argonu dva dny. Reakční směs byla odpařena a odparek sušen v exsikátoru s P2O5. Prokrystalovaná směs byla rozpuštěna v budoucí mobilní fázi (5 ml), krystaly odfiltrovány a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1). Produktem je nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 264 mg; 78 %. HPLC Rt = 18,2 min (50 % CH3OH + 50 % pufr), Rt = 8,3 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (50 % CH3OH + % pufr) Zmax 283 nm, ληιιη 243 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 374 [M+H]+ (100), 290 [C14H22N7+H]+ (71); (CV 45) m/z (rel. %): 290 [C14H22N7+H]+, (100), 374 [M+H]+ (36), 222 [C9H16N7]+ (13). 'H NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 1.39 (2H, p, J = 7.5, -NHCH2CH2CH2-),
l. 50 (1H, d, J= 7.5, ΤΗΡ H5'), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', -NHCH2CH2CH2CH2.), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.56 (3H, t, J = 6.8, THP H3', -NHCH2CH2CH2CH2.), 3.34 (2H, t, J= 9.0, -CH2CH2CH2-NH2), 3.65 (1H, t, J = 10.5, THP H6'), 4.03 (3H, m, THP H6' -NH-CH2-CH=), 5.29 (1H, t, J = 6.8, -NH-CH2-CH=), 5.48 (1H, d, J = 10.5 Hz, THP H2'), 6.40 (1H, t, J = 6.8, -NHCH2CH2), 6.77 (1H, t, J = 5.6, -NH-CH2CH=), 7.95 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-J6): 8 17.71 (-CH3), 22.66 (THP C4'), 24.27 (THP C5'), 25.33 (-CH3), 26.54 (Bu), 28.24 (THP C3'), 30.64 (Bu), 37.82 (-NH-CH2CH=), 41.40 (Bu), 42.19 (Bu), 67.83 (THP C6'), 81.06 (THP C2'), 117.03 (C5), 122.95 (-CH=), 132.37 (-CH2CH=C<), 148.49 (C8), 148.67 (C2), 150.89 (C4), 151.00 (C6).
8-(6-Aminohexylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9~(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 3) (321 mg; 0,88 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (4,0 ml). K roztoku byl přidán 1,6diaminohexan (1,0 g; 8,7 mmol). Reakční směs byla zahřívána při 65 °C pod atmosférou argonu 4 dny. Poté byla odpařena a odparek sušen v exsikátoru s P2O5. Prokrystalovaná směs byla rozpuštěna v budoucí mobilní fázi (4 ml), krystaly odfiltrovány a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografíi (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1). Produktem je nažloutlá sklovitá látka. Výtěžek: 289 mg; 82 %. HPLC Rt = 11,8 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) λπ13Χ 285 nm, λιηίη 244 nm. MS ESI+ (CV 15) m/z (rel. %): 402 [M+H]+ (100), 318 [C16H26N7+H]+ (36); (CV 35) m/z (rel. %): 250 [CnH20N7]+ (100), 318 [C,6H26N7+H]+, (90), 402 [M+H]+ (26). 'H NMR (300 MHz, DMSCM,): δ 1.32 (6H, p, J = 7.5, HPř), 1.50 (1H, d, J = 7.3, THP H5'), 1.64 (5H, m, THP H3', H4', H5', HPř), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.93 (1H, m, THP H4’), 2.50 (2H, q, J = 1.8, HPř), 2.60 (1H, m, THP H3’), 3.34 (2H, q, 7.1, HPř), 3.65 (1H, t, J = 11.0 Hz, THP H6’), 3.99 (2H, bs, -NHCH2-CH=), 4.05 (1H, d, J = 7.1, THP H6’), 5.29 (1H, t, J = 6.3, -NH-CH2-CH=), 5.49 (1H, d, J = 10.4, THP H2’), 6.30 (1H, t, J= 5.6, -N8H), 6.81 (1H, t, J = 5.9, -NH-CH2-CH=), 7.95 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-fy,): δ 17.70 (-CH3), 22.57 (THP C4'), 24.32 (THP C5'), 25.32 (-CH3), 28.24 (THP C3'), 26.11 (HPř), 26.32 (HPř), 28.95 (HPř), 33.23 (HPř), 37.84 (-NH-CH2CH=), 41.52 (HPř), 42.14 (HPř), 67.83 (THP C6'), 81.05 (THP C2'), 117.02 (C5), 122.95 (-CH=), 132.36 (-CH2CH-C<), 148.50 (C8), 148.67 (C2), 150.87 (C4), 150.96 (C6).
8-(2-Hydroxyethylamino)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin
8-Brom-6-(3-methylbut-2-en-l-y!amino)-9-(tetrahydropyran-2-y!)-9/7-purin (Př. 3) (246 mg; 0,67 mmol) byl rozpuštěn v ethanolaminu (2,0 ml). Roztok byl zahříván při 80 °C po dobu 1,5 h. Reakční směs byla odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografíi (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol, 95:5). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 180 mg; 76 %. HPLC (průtok 0,6 ml/min) Rt = 14,4 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) kmax 284 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 347 [M+H]+ (100), 263 [C12H]9N6O+HJ+ (26); (CV 35) m/z (rel. %): 347 [M+H]+ (100), 263 [C12HI9N6O+H]+ (100). 'H (500 MHz, DMSO-c/6): 1.46-1.49 (1H, m), 1.56-1.63 (9H, m), 1.87-1.88 (1H, m), 2.45-2.50 (m, 1H), 3.36-3.40 (2H, m), 3.55-3.62 (3H, m), 3.96-3.99 (3H, m), 5.23-5.28 (1H, m), 5.48 (1H, dd, J = 10.70 Hz, J = 1.83 Hz), 6.26 (1H, t, J= 5.50 Hz), 6.71 (1H, t, J= 6.11 Hz), 7.92 (1H, s). I3C (125 MHz, DMSO-J6): 18.3, 23.0, 24.9, 25.9,28.9,38.4,
45.3,60.2,68.3,68.5,81.8, 117.4, 123.4, 133.1, 149.3, 151.6, 151.7.
-24CZ 306984 B6
8-Amino-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
8-Amino-6-chlor-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-piirin (72 mg; 0,28 mmol) a 3-methylbut-2en-l-ylamin*HCl (60 mg; 0,55 mmol) byly rozpuštěny v 1-propanolu (5 ml) a diisopropylethylaminu (194 μΐ, 1,13 mmol). Reakční směs byla zahřívána při 110 °C po 90 h, poté odpařena, odparek smíšen s budoucí mobilní fází (ethyl-acetát: aceton : NH4OH, 9:1:0,1). Vyloučené krystaly byly odfiltrovány, filtrát odpařen a odparek čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze ethyl-acetát: aceton : NH4OH, 9:1:0,1). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 21 mg; 24 %. HPLC Rt = 12,3 min (70 % CH3OH + 30 % pufr). UV (70 % CH3OH + 30 % pufr) Xmax 280 nm, λιηιη 239 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 303 [M+H]+ (100), 219 [CI0H,4N6+H]+ (13); (CV 40) m/z (rel. %): 219 [Ci9HI4N6+H]+ (100), 303 [M+H]+ (77), 163 [C6H7N6]+ (12). NMR (300 MHz, DMSO-e/é): δ 1.49 (1H, d, J = 7.6, THP H5'), 1.64 (3H, m, THP H3', H4', H5'), 1.64 (3H, s,-CH3), 1.66 (3H, s,-CH3), 1.93 (1H, m, THP H4'), 2.64 (1H, d,J= 11.4, THP H3'), 3.65 (1H, t, J = 10.5 Hz, THP H6'), 3.98 (1H, s, THP H6'), 4.03 (2H, d, J = 5.6, -NH-CH2-CH=), 5.27 (1H, t, J= 7.6, -NH-CH2-CH=), 5.48 (1H, d, J = 10.5, THP H2'), 6.31 (2H, s, -N8H2), 6.71 (1H, t, J= 5.7, -NH-CH2-CH=), 7.95 (1H, s, H2). l3C NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 17.77 (-CH3), 22.60 (THP C4'), 24.30 (THP C5'), 25.31 (-CH3), 28.21 (THP C3'), 37.96 (-NH-CH2CH=), 67.77 (THP C6'), 81.18 (THP C2'), 116.99 (C5), 122.92 (-CH=), 132.39 (-CH2CH=C), 148.43 (C8), 148.43 (C2), 150.95 (C4), 151.02 (C6).
8-Methoxy-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
7erc-butoxid draselný (103 mg, 0,53 mmol) byl přidán k roztoku 8-brom-6-(3-methylbut-2en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu (248 mg, 0,68 mmol) (Př. 3) v suchém methanolu (2 ml). Roztok byl zahříván při 45 °C po dobu 13 h. Po ochlazení byla reakční směs umístěna přes noc do lednice, poté zfíltrována a filtrát odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton 9:1; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem světle žlutá viskózní látka. Výtěžek: 170 mg; 79 %. HPLC Rt = 10,8 min (80 % CHjOH + 20 % pufr). MS ESI+ (CV 12) m/z (rel. %): 318 [M+H]+ (100); (CV25) m/z (rel. %): 234 [ChHi5N5O+H]+ (100). 318 [M+H]+ (76).
8-(3-Ammopropyloxy)-6-(3-methylbut-2-en-l-ylammo)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9H-purin
Hydrid sodný v minerálním oleji (34 %) (67 mg; 0,95 mmol) byl rozpouštěn pod argonovou atmosférou ve směsi 3-amino-l-propanolu (66 pl; 0,86 mmol) a dimethylformamidu (5 ml) po dobu 1,5 h. Poté byl přidán 8-chlor-6-(3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2yl)-9/Z-purin (Př. 3) (214 mg; 0,66 mmol). Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty 4 dny, odpařena a surový produkt čištěn sloupcovou chromatografii (silikagel; gradientova eluce počínající chloroformem jako mobilní fází a končící mobilní fází chloroform : methanol : NH4OH, 9:1:0,1). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem žlutá viskózní látka. Výtěžek: 156 mg; 65 %. HPLC Rt = 7,7 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) Ámax 268 nm, λιπιη 233 nm. MS ESI+ (CV 18) m/z (rel. %): 361 [M+H]+ (100); 277 [Ci3H20N6O+H]+ (15). (CV 29) m/z (rel. %): 277 [C13H20N6O+H]+ (100), 361 [M+H]+ (96); 220 [Ci0Hi3N5O+H]+ (38). ’H NMR (300 MHz, DMSCM0: δ 1.52 (1H, m, THP H5'), 1.64 (2H, m, THP H4', H5'), 1.65 (3H, s, -CH3), 1.68 (3H, s, -CH3), 1.75 (1H, m, THP H3'), 1.85 (2H, t, J = 6.5, -OCH2CH2CH2NH2), 1.94 (1H, m, THP H4'), 2.70 (2H, t, J= 6.6, -OCH2CH2CH2NH2), 2.73 (1H, m, THP H3'), 3.56 (1H, m, THP H6'), 3.97 (1H, d, J= 11.3, THP H6), 4.05 (2H, bs, -NHCH2-CH=), 4.53 (2H, q, J = 5.4, -OCH2CH2CH2NH2), 5.28 (1H, t, J = 6.5, -NH-CH2-CH=),
5.44 (1H, d, J = 9.5, THP H2'), 7.26 (1H, t, J = 5.7, -N6H), 8.10 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 17.71 (-CH3), 22.72 (THP C4'), 24.53 (THP C5'), 25.30 (-CH3), 27.98 (THP C3'), 32.03 (-OCH2CH2CH2NH2), 38.00 (-NH-CH2-CH=), 67.71 (THP C6'j, 68.06 (-OCH2CH2CH2NH2), 80.68 (THP C2'), 114.62 (C5), 122.50 (-CH=), 132.72 (-CH2CH=C<), 150.61 (C8), 150.61 (C2), 152.17 (C4), 153.48 (C6).
-25CZ 306984 B6 (E)~8-Dimethylamino~6~(4-hydroxy-3~methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2yl)-9H-purin (E)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//purin (Př. 3) (234 mg; 0,69 mmol) byl rozpuštěn v 50% roztoku dimethylaminu v methanolu (2,5 ml). Roztok byl míchán za laboratorní teploty 2 dny a pak odpařen. Surový produkt byl extrahován směsí ethyl-acetát: voda (1:1, 6 ml). Vodná vrstva byla re-extrahována ethyl-acetátem (2x3 ml). Spojené ethyl-acetátové vrstvy byly vysušeny MgSO4 a odpařeny. Produktem je po vysušení v exsikátoru s P2O5 bílá krystalická látka. Výtěžek: 217 mg; 90 %. T. t: 110 až 114 °C. HPLC Rt = 13,8 min (60 % CH3OH + 40 % pufr). UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) ληΐ3Χ 281 nm, λπιιη 245 nm. MS ESI+ (methanol) (CV 25) m/z (rel. %): 347 [M+H]+(100), 715 [2M+Na]+ (71), 263 [C12H18N6O+H]+ (15); (CV 40) m/z (rel. %): 369 [M+Na]+ (100), 347 [M+H]+ (88), 263 [C12Hi8N6O+H]+ (88), 715 [2M+Na]+ (53). *H NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 1.49 (1H, m, ΤΗΡ, H5'), 1.56 (1H, m, THP, H4’), 1.61 (1H, m, ΤΗΡ, Η3'),1.66 (3H, s, =C-CH3), 1.67 (1H, m, ΤΗΡ H3'), 1.93 (1H, m, ΤΗΡ H4'), 2.88 (6H, s, -N-(CH3)2), 3.09 (1H, qq, J = 12.1, 3.6, THP H3’), 3.61 (1H, tt, J = 11.3, 3.6, THP H6’), 3.78 (2H, d, J = 5.7, -CH2-OH), 4.03 (1H, d, J = 11.3, THP H6'), 4.11 (2H, t, J = 5.7, -NH-CH2-CH=), 4.71 (1H, t, J = 5.7, -OH), 5.32 (1H, dd, J = 11.3, 2.2, THP H2'), 5.50 (1H, tt, J = 6.7, 1.7, -CH2-CH=), 7.20 (1H, t, J = 5.7, N6H), 8.08 (1H, s, H2). 13C NMR (300 MHz, DMSO-J6): δ 13.57 (=C-CH3), 22.90 (THP C4'), 24.49 (THP C5'), 27.47 (THP C3'), 37.42 (-NH-CH2-), 42.23 (-N-(CH3)2), 65.88 (-CH2-OH), 67.84 (THP C6'), 82.74 (THP C2'), 116.68 (C5), 121.17 (-CH=), 132.91 (=C<), 149.57 (C4), 150.44 (C2),
152.44 (C6), 155.10 (C8).
(E)-6~(4-Hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin (£)-8-Chlor-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9J7purin (Př. 3) (190 mg; 0,56 mmol) byl rozpuštěn v methanolu (1,6 ml). K roztoku byl přidán 30% vodný roztok NaOH (1,6 ml). Reakční směs byla za energického míchání zahřívána při 60 °C 0,5 h a poté odpařena. Odparek byl rozpuštěn v ethyl-acetátu (5 ml), promyt vodou, vysušen MgSO4, zfiltrován a odpařen. Surový produkt byl čištěn sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 9:1; na TLC chromatogramu Rf = 0,10). Bílá krystalická látka. Výtěžek: 83 mg; 44 %. T. t: 126 až 130 °C. MS ESI+ (CV 10) m/z (rel. %): 334 [M+H]+ (100); (CV 30) m/z (rel. %): 250 [CnH15N5O2+H]+ (100), 334 [M+H]+ (40).
(E)-8-Benzyloxy-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2--en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurin
Sodík (120 mg; 5,2 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (5 ml). K roztoku benzylalkoholátu byl přidán (E)-8-brom-6-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9//-purin (Př. 3) (192 mg; 0,50 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 65 °C po 2 dny. Po ochlazení byla zředěna směsí chloroform : aceton (75:25, 5 ml). Prepcipitát byl odfiltrován a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografií (silikagel; mobilní fáze chloroform : aceton, 75:25; na TLC chromatogramu Rf = 0,14). Produktem je po vysušení v exsikátoru s P2O5 nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 20 mg; 10 %. HPLC Rt = 9,3 min (80 % CH3OH + 20 % pufr), Rt = 18,9 min (70 % CH3OH + 30 % pufr). UV (70 % CH3OH + 30 % pufr) A™ax 268 nm, λιηιη 233 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 410 [M+H]+ (100); (CV 40) m/z (rel. %): 326 [C17H19N5O2+H]+ (100), 406 [M+H]+ (49). !H (500 MHz, DMSO-fy): δ 1.46-1.48 (2H, m), 1.54-1.60 (1H, m), 1.61 (3H, s). 1.70-1.75 (1H, m), 1.82-1.90 (1H, m), 2.71 (1H, dq,J= 11.31 Hz, J= 3.97 Hz), 3.51-3.56 (1H, m), 3.73 (2H, s), 3.92-3.94 (1H, m), 4.08 (2H, bs), 4.66 (1H, bs), 5.43-5.53 (4H, m), 7.26-7.40 (4H, m), 7.48 (2H, d, J = 7.03 Hz), 8.07 (1H, s). 13C (125 MHz, DMSO-c/e): δ 14.8, 23.2, 25.1, 28.6, 38.0, 66.4, 68.1,68.3, 71.5, 81.4, 115.2, 121.6, 128.3,
128.8, 129.0, 136.2, 137.5, 151.4, 152.9, 153.8.
-26CZ 306984 B6
6-Benzylamino-8-benzyloxy-9-(tetrahydropyran-2-yl)~9H-purin
Sodík (40 mg; 1,7 mmol) byl rozpuštěn v suchém benzylalkoholu (1 ml). K. roztoku benzylalkoholátu byl přikapán roztok 8-brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9/7-purinu (Př. 3) (387 mg; 1,00 mmol) v dimethylformamidu (3,0 ml). Reakční směs byla míchána pod atmosférou argonu 4,5 h. Reakce byla ukončena přikapáním ledové kyseliny octové (2 kapky) a odpařena. Surový produkt ve formě bílé pevné látky byl triturován s ethyl-acetátem (10 ml), směs zahřátá ve vroucí vodní lázni a zfíltrována. Po dvou dnech v lednici byl produkt odfiltrován. Po vysušení v exsikátoru s P2O$ je produktem bílá krystalická látka. Výtěžek: 267 mg; 64 %. T. t: 149 až 151 °C. HPLC Rt = 13,0 min (85 % CH3OH + 15 % pufr). UV (85 % CH3OH + 15 % pufr) 269 nm, λ,ηιη 234 nm. MS ESI+ (CV 20) m/z (rel. %): 416 [M+H]+ (100); (CV 50) m/z (rel. %): 332 [Ci7Hi7N5O+H]+ (100), 416 [M+H]+ (13). ’HNMR (300 MHz, DMSO-r/6): δ 1.51 (2H, m, THPH5’), 1.65 (1H, m, THP H4'), 1.77 (1H, d, J= 13.1, THP H3'), 1.93 (1H, d,J = 12.3, THP H4'), 2.76 (1H, qq, J = 12.1, 3.6, THP H3'), 3.58 (1H, m, H6'), 4.05 (1H, d, J = 11.3, THP H6’), 4.72 (2H, d,J = 1.7, NH-CHz-Ph), 5.50 (1H, dd,J=ll.l, 1.7, THP H2'), 5.58 (2H, d,J = 11.3, O-CH2-Ph), 7.19 (1H, m, J= 6.8, 2.3, Ph H4'), 7.35 (7H, m, Ph), 7.52 (2H, m, Ph), 8.11 (1H, s, H2), 7.82 (1H, bs, N6H). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-í/6): δ 22.64 (THP C4'), 24.52 (THP C5'), 28.01 (THP C31), 43.18 (NH-CH2-Ph), 67.72 (THP C6’), 71.01 (OCH2Ph), 80.84 (THP C2’),
114.56 (C5), 126.41 (Ph C4'), 127.09 (2x) (Ph), 127.78 (2x) (Ph), 128.04 (2x) (Ph), 128.22 (Ph), 128.43 (2x) (Ph), 135.62 (Ph), 140.37 (Ph), 150.76 (2x) (Pur), 152.39 (Pur), 153.41 (Pur).
8-(4-Aminobutylamino)-6-benzylamino)-9-(tetrahydropyran-2~yl)-9H~purin
8-Brom-6-benzylamino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Zř-purin (Př. 3) (400 mg; 1,03 mmol) byl rozpuštěn ve 2-propanolu (5,5 ml), 1,4-diaminobutanu (1,0 ml; 9,95 mmol) a diisopropylethylaminu (0,18 ml; 1,03 mmol). Roztok byl zahříván při 80 °C pod atmosférou argonu přes noc. Reakční směs byla odpařena. Odparek byl rozpuštěn ve směsi chloroform : methanol 4:1 (5 ml), zfiltrován a složky filtrátu separovány sloupcovou chromatografii (silikagel; mobilní fáze chloroform : methanol: NH4OH, 85:15:1,5 na TLC chromatogramu Rf = 0,18). Po vysušení v exsikátoru s P2O5 je produktem nažloutlá viskózní látka. Výtěžek: 373 mg; 92 %. HPLC Rt = 13,0 min (60 % CH3OH + 40 % pufr), Rt = 18,6 min (50 % CH3OH + 50 % pufr), UV (60 % CH3OH + 40 % pufr) Zmax 285 nm, λιη,η 244 nm. *H NMR (300 MHz, DMSO-4): δ 1.40 (2H, p, J = 7.2, Bu), 1.50 (1H, d, J = 7.3, THP H5’), 1.63 (5H, m, THP H3' H4' H5', Bu), 1.93 (1H, bs, THP H4'),
2.56 (2H, t, J = 6.8, Bu), 2.57 (1H, qq, covered, THP H3'), 3.35 (2H, m, Bu), 3.65 (1H, t, J =
10.6, THP H6'), 4.01 (1H, d, J = 10.8, THP H6’), 4.68 (2H, d, J = 5.5, NH-CH2-Ph), 5.50 (1H, d, J = 9.9, THP H2'), 6.43 (1H, bs, N8H), 7.18 (1H, t, J = 6.9, N6H), 7.32 (5H, m, Ph), 7.94 (1H, s, H2). 13C-NMR (300 MHz, DMSO-Jft): δ 22.57 (THP C4’), 24.32 (THP C5'), 26.53 (Bu), 28.25 (THP C3'), 41.34 (Bu), 42.22 (Bu), 43.16 (NH-CH2-Ph), 67.84 (THP C6'), 81.11 (THP C2'), 117.02 (C5), 126.29 (Ph C4’), 127.13 (2x) (Ph), 127.96 (2x) (Ph), 140.85 (Ph), 148.45 (Pur), 148.92 (Pur), 150.96 (Pur), 151.05 (Pur).
. 77 _
Tabulka 2: Sloučeniny připravené dle Příkladu 4
No. Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI-MS [M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %N
80 furfurylamino —(όί-ΓΓ'Μ 3 2 2-tetraliydropyranyl 59.6/59.5 6.5/6.4 24.5/24.7 343.4
81 benzylamino (CH TN 3 2 2-tetrahydropyranyl 64.8/64.9 6.9/6.7 23.9/24.1 353.4
82 (Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyI 58.9/58.6 7.6/7.8 24.3/24.2 347.4
83 (4-hydroxy-3methylbutyl)amino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 58.6/58.7 8.1/8.2 24.1/24.4 349.5
84 2-lluorobenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 61.6/61.8 6.3/6.5 22.7/22.5 371.4
85 3-tluorobenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 61.6/61.7 6.3/6.4 22.7/22.6 371.4
86 3-chlorobenzylamino —(CH ) N— 3 2 2-tetrahydropyranyl 59.0/59.0 6.0/5.8 21.7/21.5 387.9
87 3-bromobenzylamino —(CHTN 3 2 2-tetrahydropyranyl 52.9/52.7 5.4/5.2 19.5/19.0 432.3
88 3-iodobenzylamino —(CHTN— 3 2 2-tetrahydropyranyl 47.7/47.9 4.9/5.1 17.6/17.4 479.3
89 4-methyibenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 65.6/66.0 7.2/7.1 22.9/23.4 367.5
90 2-methoxylbenzyl amino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 62.8/63.0 6.9/7.0 22.0/22.2 383.5
91 3-methoxylbcnzylamino —(CH ) N— 3 2 2-tetrahydropyranyl 62.8/62.8 6.9/6.9 22.0/21.9 383.5
92 3,4-dichlorobenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 54.2/54.1 5.3/5.5 20.0/20.4 422.3
93 2-hydroxy-3- methoxybenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 60.3/60.1 6.6/6.5 21.1/21.3 399.5
94 3,4-dimethoxybenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 61.2/61.5 6.8/6.9 20.4/20.1 413.5
95 anilino (CHTN 3 2 2-tetrahydropyranyl 63.9/64.2 6.6/.6.9 24.8/24.7 339.4
96 3-fluoroaniIino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 60.6/60.8 5.9/9.1 23.6/23.8 357.4
97 2-chloroanilino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 58.0/58.2 5.7/5.4 22.5/22.3 373.9
98 3-methoxyanilino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 61.9/62.3 6.6/6.5 22.8/22.7 369.4
-28CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI-MS [M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %N
99 3-methylanilino (CH ) N 3 2 2-tetrahydropyranyl 64.8/65.2 6.9/7.0 23.9/24.1 353.4
100 furfitrylamino allylamino 2-tetrahydropyranyl 61.0/61.6 6.3/6.5 23.7/23.9 355.4
101 benzylantino allylamino 2-tetrahydropyranyl 65.9/65.8 6.6/6.5 23.1/23.4 365.5
102 furfurylainino Nh 2 2-tetrahydropyranyl 57.3/57.7 5.8/5.7 26.7/26.8 315.4
103 benzylamino RH 2 2-tetrahydropyranyl 63.0/63.2 6.2/6.2 25.9/26.1 325.4
104 (Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino NH 2 2-tetrahydropyranyl 56.6/56.8 7.0/7.1 26.4/26.6 319.4
105 (F)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino NH 2 2-tetrahydropyranyl 56.6/56.1 7.0/7.2 26.4/26.5 319.4
106 (4-hydroxy-3- methylbutyl)amino NH 2 2-tetrahydropyranyl 56.2/55.7 7.6/7.5 26.2/26.1 321.4
107 (3-methylbut-2-en-l -yl lamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 59.2/59.7 8.0/7.8 27.6/27.5 305.4
108 3-fluorobenzylamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 59.6/60.1 5.6/5.4 24.6/24.6 343.4
109 2-chlorobenzylamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 56.9/57.3 5.3/5.1 23.4/23.5 359.8
110 2-bromobenzylamíno NH ~ 2 2-tetrahydropyranyl 50.6/50.4 4.8/4.9 20.8/21.1 404.3
111 3-methoxybenzylamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 61.0/61.2 6.3/6.4 23.7/24.0 355.4
112 3-aminobenzylamino 2 2-tetrahydropyranyl 60.2/60.0 6.2/6.5 28.9/28.7 340.4
113 3-hydroxybenzylamino NR 2 2 -tetrahydropyranyl 60.0/60.1 5.9/6.1 24.7/24.6 341.4
114 4-hydroxybenzylamino NR 2 2-tetrahydropyranyl 60.0/60.3 5.9/5.7 24.7/24.7 341.4
115 i, 3-dihydroxybenzy lamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 57.3/57.7 5.7/5.7 23.6/23.5 357.4
116 3,4-dihydroxybenzylamino 2 2-tetrahydropyranyl 57.3/57.9 5.7/5.8 23.6/23.7 357.4
117 3-hydroxy-4- methoxybenzylamino NH 2 2-tetrahydropyranyl 58.4/58.0 6.0/5.9 22.7/22.6 371.4
118 amlino ΝΠ 2 2-tetrahydropyranyl 61.9/70.3 5.9/5.8 27.1/27.4 311.4
119 3-tluoroanilino NH 2 2-tetrahydropyranyl 58.5/58.9 5.2/5.3 25.6/25.8 329.4
120 3-hydroxyanilino NH 2 2-tetrahydropyranyl 58.9/58.5 5.6/5.7 25.8/25.7 327.4
121 3-aminoantlino NH 2 2-tetrahydropyranyl 59.1/59.7 5.9/6.1 23.1/22.7 326.4
122 3,4-dihydroxyanihno 2 2-tetrahydropyranyl 56.1/56.6 5.3/5.0 24.6/24.8 343.4
-29CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI-MS |M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %N
123 3-methoxyanilino nO 2 2-tetrahydropyranyi 60.0/59.3 5.9/5.8 24.7/24.7 341.4
124 iurfurylamino —ΓηΤ>— 3 2-tetrahydropyranyl 58.4/58.8 5.8/5.8 21.3/21.4 330.4
125 benzylamino CH 0 3 2-tetrahydropyranyl 63.7/63.5 6.2/6.4 20.6/20.8 340.4
126 (£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino CH 0 3 2-tetrahydropyranyl 57.6/57.4 7.0/7.2 21.0/21.2 334.4
127 (3 -methyibut-2-en-1 -yl)amíno CH ó 3 2-tetrahydropyranyl 60.6/61.0 7.3/7.2 22.1/22.2 318.4
128 3-methoxylbenzylamino 3 2-tetrahydropyranyl 61.8/61.6 6.3/6.3 19.0/19.2 370.4
129 3-hydroxybenzylamino CITU 3 2-tetrahydropyranyl 60.8/60.5 6.0/6.2 19.7/19.9 356.4
130 3-f)uorobenzylamino CH O 3 2-tetrahydropyranyl 60.5/60.1 5.6/5.7 19.6/19.8 358.4
131 4-hydroxylbenzy lamino ČITO 3 2-tetrahydropyranyl 60.8/61.3 6.0/5.9 19.7/19.9 356.4
132 3-methoxyanilino crrn 3 2-tetrahydropyranyl 60.8/61.2 6.0/6.2 19.7/20.0 356.4
133 iurfurylamino čH ó 3 7 2-tetrahydropyranyl 60.5/61.0 6.5/6.4 19.6/19.7 358.4
134 benzylamino CHO 3 7 2-tetrahydropyranyl 65.4/65.2 6.9/6.8 19.1/19.0 368.5
135 iurfurylamino lC ff -CM ů 6 5 2 2-tetrahydropyranyl 65.2/65.4 5.7/5.9 17.3/17.5 406.5
136 benzylamino C H -CH Ů 6 5 2 2-telrahydropyranyl 69.4/69.3 6.1/6.0 16.9/16.7 416.5
137 (E)-(4-hy<iroxy-3-methyIbut-2- en-l-yl)amino ΓΤΓΤΪΠΓ- 6 5 2 2-tetrahydropyranyl 64.5/64.6 6.7/6.8 17.1/17.2 410.5
138 3-hydroxybenzylamino ΓΤΓΤΓτσ- 6 5 2 2-tetrahydropyranyl 66.8/66.5 5.8/5.9 16.2/16.3 432.5
139 3-methoxyanilino τπττττσ- 6 5 2 2-tetrahydropyranyl 66.8/66.6 5.8/5.8 16.2/16.4 432.5
140 turiurylamino SH 2-tetrahydropyranyl 54.4/54.6 5.2/5.4 21.1/21.3 332.4
141 benzylamino SH 2-tetrahydropyranyl 59.8/60.1 5.6/5.4 20.5/20.8 342.4
142 3-methoxylbenzyiamíno SH 2-tetrahydropyranyi 58.2/58.7 5.7/5.5 18.9/18.7 372.5
143 anibno ----sn---- 2-tetrahydropyranyl 58.7/58.5 5.2/5.3 21.4/21.5 328.4
144 4-methoxyaniÍino SH 2-tetrahydropyranyl 57.1/57.2 5.4/5.5 19.6/19.8 358.4
145 furfuryiamino CTH 3 2-tetrahydropyranyl 55.6/55.6 5.5/5.5 20.3/20.3 346.4
146 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino CH S 3 2-tetrahydropyranyl 55.0/55.3 6.6/6.4 20.0/20.2 350.5
147 (3-methylbut-2-en-l -yl)amino CTTS 3 2-tetrahydropyranyl 57.6/57.3 7.0/7.2 21.0/20.8 334.5
-30CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI-MS |M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %.N
148 benzylamino cH S 3 2-tetrahydropyranyl 60.8/60.9 6.0/6.4 19.7/19.6 356.5
149 3-hydroxybenzylamino —m— 3 2-tetrahydropyranyl 58.2/58.4 5.7/5.8 18.9/19.0 372.5
150 3-methoxybenzylamino —cttš— 3 2-tetrahydropyranyl 59.2/59.0 6.0/6.2 18.2/17.9 386.5
151 3-tluorobenzylamino CH~S 3 2-tetrahydropyranyl 57.9/58.1 5.4/5.5 18.8/18.5 374.5
152 furfurylamino '“ΟΓδ'δ— 3 2 2-tetrahydropyranyl 50.9/50.5 5.1/5.0 18.6/18.8 378.4
153 benzylamino CH'SO 3 2 2-tetrahydropyranyl 55.8/55.7 5.5/5.3 18.1/17.9 388.5
154 anilino CTTSO 3 2 2-tetrahydropyranyl 54.7/54.9 5.1/5.3 18.8/18.8 374.4
155 3-tluoroanilino Cil ŠÓ 3 2 2-tetrahydropyranyl 52.2/52.4 4.6/4.8 17.9/18.2 392.4
156 3-methoxyanilino CITSj 3 2 2-tetrahydropyranyl 53.6/54.0 5.3/5.5 17.4/17.8 404.5
157 furfurylamino NH (CH ) S 2 2 3 2-tetrahydropyranyl 55.7/55.8 6.2/6.4 21.6/21.5 389.5
158 benzylamino FS· 2 2 3 2-tetrahydropyranyl 60.3/60.2 6.6/6.9 21.1/21.0 399.5
159 furfurylamino ύΗ 2-tetrahydropyranyl 57.1/57.3 5.4/5.4 22.2/21.8 316.3
160 benzylamino OH 2-tetrahydropyranyl 62.8/62.7 5.9/6.2 21.5/21.3 326.4
161 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino OH 2-tetrahydropyranyl 56.4/56.1 6.6/6.7 21.9/22.2 320.4
162 3-hydroxybenzylamino OH 2-tetrahydropyranyl 59.8/60.0 5.6/5.3 20.5/20.9 342.4
163 3-methoxylbenzylamino OH 2-tetrahydropyranyl 60.8/60.9 6.0/5.8 19.7/19.9 356.4
164 anilino OH 2-tetrahydropyranyl 61.7/61.5 5.5/5.7 22.5/22.1 312.4
165 3-hydroxyanilino OH 2-tetrahydropyranyl 58.7/58.6 5.2/5.4 21.4/21.3 328.4
166 furfurylamino H NČH 2 2 2-tetrahydropyranyl 58.5/58.4 6.1/6.4 25.6/25.4 329.4
167 turiurylamino cH 000 3 2-tetrahydropyranyl 57.1/57.1 5.4/5.6 19.6/19.8 358.4
168 benzylamino CH OCo 3 2-tetrahydropyranyl 62.1/62.3 5.8/5.6 19.1/18.6 368.4
169 furfurylamino CH čiř (500 3 2 2-tetrahydropyranyl 58.2/58.5 5.7/5.3 18.9/18.7 372.4
170 furfurylamino NH (čri ) nh 2 2 2 2-tetrahydropyranyl 57.1/57.2 6.5/6.2 2ΊΑΙ2Ί.2 358.4
171 benzylamino NFHCHTNH 2 2 2 2-tetrahydropyranyl 62.1/62.3 6.9/7.2 26.7/26.4 368.5
172 (3-methyibut-2-en-1 -yl)amino NH (CH ) NH 2 2 2 2-tetrahydropyranyl 59.1/59.3 7.9/8.1 28.4/28.2 346.5
173 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino NH (CH ) NH 2 2 2 2-tetrahydropyranyl 56.5/56.5 7.5/7.7 27.1/27.2 362.5
- 31 CZ 306984 B6
No. Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI-MS |M+H+]
R6 R8 R9 %c %H %N
174 4-hydroxybenzylaniino NH (CH ) Ňh 2 22 2-tetrahydropyranyl 59.5/60.3 6.6/6.6 25.6/25.2 384.5
175 anilino NFT (CHTNff 2 2 2 2-tetrahydropyranyl 61.2/61.6 6.6/6.5 27.7/27.8 354.4
176 furfurylamino blH (ČH 1 Wh 2 23 2-tetrahydropyranyl 58.2/58.0 6.8/6.7 26.4/26.3 372.5
177 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino NH (CH ) NH 2 2 3 2-tetrahydropyranyl 57.6/57.2 7.8/7.5 26.1/25.8 376.5
178 furfurylamino Nri (ČH ) Nk 2 2 4 2-tetrahydropyranyl 59.2/59.0 7.1/7.3 25.4/25.4 386.5
179 furfurylamino NH(člTjJ 2 2 3 2-tetrahydropyranyl 58.1/58.4 6.5/6.4 22.6/22.9 373.4
180 (3-methylbut-2-en-l-yl)amino NH (CH y 0 2 2 3 2-tetrahydropyranyl 60.0/60.5 7.8/8.0 23.3/23.4 361.5
181 furfurylamino HO(CH ) NH 22 2-tetrahydropyranyl 57.0/57.3 6.2/6.3 23.5/23.7 359.4
182 benzylamino IKXCH ^Ml 2-tetrahydropyranyl 61.9/62.1 6.6/6.6 22.8/22.5 369.4
183 (E)-(4-hydroxy-3-mcthylbut-2- en-l-yl)amino HO(CH ) NH 2 2 2-tetrahydropyranyl 56.3/56.3 7.2/7.1 23.2/23.3 363.4
184 (3-methylbut-2-en-1 -ylfamino HO(CH ) N'TI 22 2-tetrahydropyranyl 58.9/58.8 7.6/7.2 24.3/24.5 347.4
185 furfurylamino Hotčtl i Wh 2-tetrahydropyranyl 58.1/58.4 6.5/6.9 22.6/22.4 373.4
186 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2- en-l-yl)amino HO(CH ) NH 2 3 2-tetrahydropyranyl 57.4/57.9 7.5/7.4 22.3/22.6 377.5
187 (3-methylbut-2-en-1 -yl)amino TWnTTTITr 2 3 2-tetrahydropyranyl 60.0/59.8 7.8/7.6 23.3/23.3 361.5
Tabulka 3: Sloučeniny připravené dle Příkladu 4
No Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI- MS [M+H+]
R6 R8 R9 %c %H/ %N
188 furfurylamino (ČH ) W 3 2 2-tetrahydrofuranyl 58.5/58.3 6.1/6.1 25.6/25.4 329.4
189 (Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- 1-yf) amino (CH ) N 3 2 2-tetrahydrofuranyl 57.8/58.4 7.3/7.4 25.3/25.0 333.4
190 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-επ- ί -yDamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydrofuranyl 57.8/58.2 7.3/7.4 25.3/25.3 333.4
-32CZ 306984 B6
No Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESlMS [M+H+|
R6 R8 R9 %c %H/ %N
191 4-chlorobenzylamino .......(ΓΓΠΠ 3 2 2-tetrahydrofuranyl 58.0/58.2 5.7/5.9 22.5/22.6 373.9
192 3-methoxylbenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydrofuranyl 61.9/61.8 6.6/6.4 22.8/23.0 369.4
193 2-hydroxy-3-methoxybenzylamino (CH ) N 3 2 2-tetrahydroturanyl 59.4/59.5 6.3/6.4 21.9/22.2 385.4
194 anilino (CH ) N 3 2 2-tetrahydrofuranyl 63.0/63.2 6.2/6.2 25.9/26.1 330.4
195 3-methoxyanilino (CH ) N 3 2 2-tetrahydroturanyl 61.0/61.6 6.3/6.1 23.7/23.6 355.4
196 furfurylamino ailylamino 2-tetrahydrofuranyl 60.0/60.5 5.9/6.0 24.7/24.5 341.4
197 furfurylamino ~TiE 2 2-tetrahydrofuranyl 56.0/56.2 5.4/5.7 28.0/28.4 301.3
198 benzylamino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 61.9/62.3 5.9/6.2 27.1/26.5 311.4
199 (Z)-(4-hydroxy-J-methyIbut-2-en-1 - yl)amino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 55.3/55.1 6.6/6.8 27.6/27.8 305.4
200 (£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 55.3/55.5 6.6/6.5 27.6/27.9 305.4
201 4-hydroxybenzylamino FJH 2 2-tetrahydrofuranyl 58.9/58.4 5.6/5.4 25.8/25.1 327.4
202 3,4-dihydroxybenzylamino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 56.1/56.4 5.3/5.2 24.6/24.4 343.4
203 4-hydroxy-3,5- dimethoxybenzylamino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 56.0/56.0 5.7/5.8 21.8/21.3 387.4
204 anilino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 60.8/60.7 5.4/5.6 28.4/28.6 297.3
205 3-hydroxyanilino NH 2 2-tetrahydrofuranyl 57.7/57.9 5.2/5.0 26.3/26.4 313.3
206 furfurylamino CTT75 3 2-tetrahydrofuranyl 57.1/57.3 5.4/5.8 22.2/22.5 316.3
207 (3-methylbut-2-en-l -yl)amino cmj 3 2-tetrahydroturanyl 59.4/59.2 7.0/6.8 23.1/23.4 304.4
208 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino CH O 3 2-tetrahydrofuranyl 56.4/56.7 6.6/6.7 21.9/22.1 320.4
209 3-methoxylbenzylamino CFTO 3 2-tetrahydrofuranyl 60.8/60.7 6.0/6.3 19.7/19.9 356.4
210 anilino ΓΤΠ5 3 2-tetrahydrofuranyl 61.7/61.9 5.5/5.9 22.5/22.1 312.4
211 furfurylamino Č H -ČH Ó 6 5 2 Ž-tetrahydrofuranyl 64.4/64.5 5.4/5.1 17.9/17.8 392.4
212 furfurylamino ŠH 2-tetrahydrofuranyl 53.0/53.1 4.8/4.9 22.1/22.1 318.4
213 benzylamino SH 2-tetrahydrofuranyl 58.7/58.9 5.2/5.2 21.4/21.5 328.4
214 (3-methylbut-2-en-1 -yl)amino SH 2-tetrahydrofuranyl 55.1/54.7 6.3/6.4 22.9/23.3 306.4
-33 CZ 306984 B6
No Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ESI- MS [M+H+l
R6 R8 R9 %c %H/ %N
215 4-methoxyanilino ŠH 2-tetrahydrofuranyl 56.0/55.4 5.0/5.1 20.4/20.8 344.4
216 furfurylamino ϋΤΠ 3 2-tetrahydrofuranyl 54.4/54.5 5.2/5.6 21.1/21.6 332.4
217 benzylamino ---CTTS--- 3 2-tetrahydrofuranyl 59.8/60.1 5.6/5.5 20.5/20.4 342.4
218 (3-methylbut-2-en-1 -yllamino cm 3 2-tetrahydrofuranyl 56.4/56.6 6.6/6.7 21.9/22.0 320.4
219 furfurylamino ČH SÓ 3 2 2-tetrahydrofuranyl 49.6/49.1 4.7/4.8 19.3/19.1 364.4
220 furfurylamino NH (CH ) S 2 2 3 2-tetrahydrofuranyl 54.5/54.1 5.9/6,1 22.4/22.3 375.5
221 furfurylamino OH 2-tetrahydrofuranyl 55.8/55.7 5.0/5.2 23.2/23.0 302.3
222 benzylamino OH 2-tetrahydrofuranyl 61.7/62.0 5.5/5.4 22.5/22.7 312.4
223 (b)-(4-hydroxy-3-methylbut-l-en- l-yl)amino OH 2-tetrahydrofiiranyl 55.1/55.4 6.3/6.3 22.9/22.6 306.3
224 4-hydroxybenzylamino OH 2-tetrahydroturanyl 58.7/58.9 5.2/5.1 21.4/21.2 328.4
225 anilino OH 2-tetrahydrofuranyl 60.6/60.3 5.1/5.0 23.6/23.7 298.3
226 3-methoxyanilino OH 2-tetrahydroturanyl 58.7/58.1 5.2/5.3 21.4/21.5 328.4
227 furfurylamino OCR- 2 2 2-tetrahydrofuranyl 57.3/57.0 5.8/5.9 26.7/26.4 315.4
228 benzylamino FTNČH 2 2 2-tetraliydrofuranyi 63.0/63.1 6.2/6.4 25.9/25.7 325.4
229 3-methoxyanilino —mřen 2 2 2-tetrahydrofuranyl 58.7/58.7 5.2/5.7 21.4/21.6 328.4
230 furfurylamino ČH OČO 3 2-tetrahydrofuranyl 59.8/59.9 5.6/5.4 20.5/20.2 342.4
231 benzylamino ČH CH ócó 3 2 2-tetrahydrofuranyl 65.7/95.2 6.3/6.1 19.2/19.0 366.4
232 4-hydroxylbenzylamino CFrciroro- 3 2 2-tetrahydrofuranyl 63.0/62.5 6.1/6.1 18.4/18.1 382.4
233 furfurylamino nh (cH ) MH 2 2 2 2-tetrahydrofuranyl 56.0/56.2 6.2/6.3 28.6/28.4 344.4
234 benzylamino NH (CH ) NH 2 2 2 2-tetrahydrof'uranyl 61.2/61.1 6.6/6.8 27.7/27.8 354.4
235 (3-methyibut-2-en-1 -yl lamino W7CFTTNR· 2 2 2 2-tetrahydrofuranyl 58.0/58.3 7.6/7.5 29.6/29.5 332.4
236 (E)-(4-hydroxy-3-methyIbut-2-en- l-yl)amino NH (CH ) NH 2 2 2 2-tetrahydrofuranyl 55.3/55.7 7.3/7.1 28.2/28.4 348.4
237 3-hydroxybenzylamino NH'(CH”1 NFT 2 2 2 2-tetrahydroftiranyl 58.5/58.4 6.3/6.4 26.5/26.3 370.4
238 furfurylamino NH (CH ) NÚ 2 23 2-tetrahydrofuranyl 57.1/57.1 6.5/6.9 27.4/27.3 358.4
239 (E)-(4-hydroxy-Š-tnethylbut-2-en- 1 -yl)amino NH (CH ) NH 2 23 2-tetrahydrofuranyl 56.5/56.4 7.5/7.9 27.1/27.0 362.5
-34CZ 306984 B6
No Substituent CHN analýza vypočteno/ nalezeno ES1- MS [M+H+]
R6 R8 R9 %c %H/ %N
240 furfurylamino Nit (dl ) NH 2 2 6 2-tetrahydrofuranyl 60.1/60.3 7.3/7.1 24.5/24.0 400.5
241 furfurylamino NH (dl) ó 2 2 3 2-tetrahydrofuranyl 57.0/57.5 6.2/6.2 23.5/23.8 359.4
242 (É)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino NH (CH ) O 2 2 3 2-tetrahydrofuranyl 56.3/56.6 7.2/7.0 23.2/23.7 363.4
243 furfurylamino HŮ(ČÚ ) NH 2 2 2-tetrahydrofuranyl 55.8/55.7 5.9/6.0 24.4/24.3 345.4
244 (E)-(4-hydroxy-3-metliylbut-2-en- l-yl)amino HO(CH ) NH 22 2-tetrahydrofuranyl 55.1/55.0 6.9/6.7 24.1/24.3 349.4
245 (3-methy lbut-2-en- i -yúamino HCXCiry WH 2 2 2-tetrahydrofuranyl 57.8/57.9 7.3/7.1 25.3/25.0 333.4
246 íurfurylamino HÓ(Čri ) biú 23 2 -tetrahydrofuranyl 57.0/56.6 6.2/6.5 23.5/23.5 359.4
247 (E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en- l-yl)amino HO(CH ) NH 23 2-tetrahydrofuranyl 56.3/56.0 7.2/7.1 23.2/23.1 363.4
Příklad 5: Schopnost látek vychytávat radikály, stanoveno metodou ORAC
Schopnost sloučenin vychytávat volné radikály in vitro byla stanovena metodou Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC). Fluorescein (100 μΐ, 500 mM) a 25 μΐ roztoku sloučeniny bylo přidáno do každé jamky v 96jamkové mikrotitrační desce pre-inkubováno při teplotě 37 °C. Poté, 25 μΐ 250 mM AAPH bylo rychle přidáno a mikrotitrační destička se třepala 5 s a pak byla měřena fluorescence (při ex. 485 nm, em. 510 nm) každé 3 min po dobu více než 90 minut pomocí readeru Infmite 200 (TECAN, Švýcarsko). Čistá plocha pod křivkou byla použita pro vyjádření antioxidační aktivitu vzhledem k Troloxu, který byl použit jako standard. Sloučeniny s hodnotou ORAC vyšší než 1 jsou účinnější než Trolox, hydrofílní ekvivalent vitaminu E, na ekvimolámí bázi.
Tabulka 4. Schopnost sloučenin vychytávat volné radikály v testu ORAC
Látka ORAC (Látka/trolox poměr)
KTHP* 0.6 ±0.1*
. TS CZ 306984 B6
145 1.3 ±0.1
80 2.2 ±0.1
102 4.5 ±0.1
82 8.5 ±0.4
107 24.4 ± 1.5
172 28.3 ± 1.6
124 30.1 ±3.1
100 32.4 ±3.2
185 48.3 ±2.3
181 78.1 ±3.9
170 181.3 ±5.2
* Průměr ± SD (n = 3) * KTHP - kinetin-9-tetrahydropyranyl jako referenční sloučenina.
Příklad 6: Ochrana peroxidace membránových lipidů
Typickým symptomem spojeným se stárnutím je jako přímý důsledek zvýšená koncentrace reaktivních forem kyslíku a peroxidace lipidů. Proto hladiny malonyldialdehydu (MDA), dekompozičního produktu peroxidace lipidů, byly měřeny v oddělených listech pšenice, které byly vystaveny účinku nových připravených derivátů a kinetinu po dobu čtyř dnů v temnu, jak je popsáno v příkladu 7. Hladiny MDA byly měřeny za použití kyseliny thiobarbiturové (metoda TBA). V detailu, 100 mg čerstvého rostlinného materiálu se homogenizuje pomocí vysoké lychlosti třepání v kulovém mlýnu (MM301, Retsch, Německo) se 1 ml 80% metanolu. Surový extrakt byl centrifugován při 10 000 x g po dobu 5 minut a 100 μΐ alikvot supernatantu se smíchal se 100 μΐ 0,5% (w/v) TBA, obsahující 0,1 % (w/v) kyseliny trichloroctové. Výsledný roztok byl poté inkubován po dobu 30 min při 95 °C. Vzorky byly rychle ochlazeny na ledu a centrifugovány 5 minut při 1000 x g. Absorbance supernatantu byla měřena při 532 nm s odečtením pozadí při 600 nm a množství MDA-TBA komplexu bylo vypočteno s využitím absorpčního koeficientu (155 mM“1 cm“1). Nové deriváty významně snížily peroxidaci membránových lipidů ve srovnání s neošetřenou kontrolou (Tabulka 5 - hodnoty vyjadřují obsah MDA, produkt rozkladu membránových lipidů). Sloučeniny podle tohoto vynálezu výrazně snižují hladinu peroxidace membránových lipidů v oddělených stárnoucích listech pšenice kultivovaných ve tmě, jak lze vidět z výsledků v tabulce 5.
Nově připravené deriváty obecného vzorce a tak mají ochrannou funkci proti negativnímu působení reaktivních forem kyslíku, které se výrazně hromadí v tkáních v průběhu stárnutí listů.
- 36 CZ 306984 B6
Tabulka 5. Vliv nových sloučenin na peroxidaci membránových lipidů během senescence oddělených listů Triticum aestivum cv. Hereward v tmavých podmínkách.
Compound No. MDA (nmol/g FW)
Control 18.9 (±2.2)
1 12.8 (±1.0)
4 13.2 (±1.5)
5 13.2 (±1.5)
9 12.4 (±1.3)
10 12.8 (±1.1)
13 11.9 (±1.3)
14 12.2 (±1.4)
16 11.6 (±1.0)
21 12.1 (±1.2)
24 11.4 (±0.9)
25 11.7 (±1.1)
29 12.3 (±1.4)
39 11.6 (±1.2)
80 11.3 (±0.9)
82 10.8 (±1.0)
100 10.2 (±1.1)
102 10.4 (±0.9)
107 10.5 (±0.5)
124 10.3 (±0.7)
145 9.6 (±0.8)
172 10.8 (±0.9)
170 10.4 (±0.7)
181 9.5 (±0.5)
185 10.2 (±1.1)
189 10.8 (±0.9)
197 9.2 (±0.6)
201 8.7 (±0.7)
206 10.5 (±0.4)
221 10.2 (±0.5)
224 9.3 (±0.8)
233 9.8 (±0.7)
238 9.4 (±0.7)
241 9.6 (±0.8)
245 9.5 (±0.6)
-37CZ 306984 B6
Příklad 7: Růstové křivky pro látky 6-furfurylamino-8-amino-9-(tetrahydropyran-2-yl)-9Hpurinu (sloučenina 102) a 6-furfurylamino-8-(2-hydroxyethylamino)-9-(tetrahydropyran-2yl)-9H-purinu (sloučenina 243)
Experimenty byly provedeny s kožními fibroblasty BJ v 24jamkových kultivačních destičkách. Do jednotlivých jamek bylo vyseto přibližně 10 000 buněk v médiu DMEM s 10 % FBS. Testovaná sloučenina byla přidána po 24 hodinách do finální koncentrace pohybující se mezi 6,25 a 50 μΜ. Každá koncentrace byla testována ve 4 opakováních. DMSO vehikulum bylo testováno jako netoxická kontrola. Pro získání lepší představy o variabilitě bylo kontrolních jamek 8 (sloupce desky A a D). Kultivační médium s testovanou látkou nebo DMSO bylo vyměňováno dvakrát týdně. Sedmý případně 8 den a poté 14 den byly buňky ztrypsinizovány a spočteny na přístroji Coulter Z2. Testované sloučeniny v daném koncentračním rozmezí a době kultivace neovlivňují negativně růst buněk (obr. 2).
Příklad 8: Inhibice senescence novými látkami testovaných v senescenčním testu na listových segmentech ozimé pšenice kultivovaných ve tmě
Semena ozimé pšenice Triticim aestivum cv. Hereward byla promyta pod tekoucí vodou po 24 hod a poté vyseta do vermikulitu nasyceného Knopovým živným roztokem. Nádoby se semeny byly umístěny do klimatizované růstové komory s 16/8 hodinovou světelnou periodou (světelná intenzita 50 pmol.mÝs“1) a teplotou 15 °C. Po 7 dnech měly semenáčky vyvinutý první praporcový list a druhý list začínal prorůstat. Z prvních listů vždy od 5 rostlin byly odebrány vrcholové sekce dlouhé přibližně 35 mm, které byly zkráceny tak, aby jejich váha byla přesně 100 mg. Bazální konce těchto 5 listových segmentů byly umístěny do jamek mikrotitračních polystyrénových destiček obsahujících 150 ml roztoku testovaného derivátu. Destičky byly umístěny do plastového boxu vystlaného filtračním papírem, který byl nasycen vodou za účelem maximální vzdušné vlhkosti. Po 96 hodinách inkubace ve tmě při 25 °C byly listové sekce vyjmuty a chlorofyl extrahován v 5 ml 80% ethanolu zahřátím při 80 °C po dobu 10 min. Objem vzorku byl poté doplněn na 5 ml přidáním 80% ethanolu. Absorbance extraktů byla měřena při 665 nm. Jako kontroly byly měřeny rovněž chlorofylové extrakty z listů a listových vrcholů inkubované v deionizované vodě. Ze získaných dat, koncentrace s nejvyšší aktivitou byla vybrána pro každou testovanou sloučeninu. Dále byla vypočítána relativní aktivita této sloučeniny v této koncentraci (viz tabulka 6 níže). Aktivita získaná pro 10 l M kinetin (Kin) byla stanovena jako 100%. Uvedené hodnoty jsou průměrem z pěti opakování a celý experiment byl opakován dvakrát.
Testované sloučeniny byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok byl naředěn na 10 3 M destilovanou vodou. Roztok se dále zředí v destilované vodě na koncentraci v rozmezí 10”8 M až 10“* M. Finální koncentrace DMSO nepřesáhla 0,2 %, a tudíž neovlivňuje biologickou aktivitu v testovacím systému.
Jak je shrnuto v tabulce 5, přítomnost C-8 substituentu byla výhodou a vedla ke zvýšení antisenescenčních vlastností testovaných látek.
-38CZ 306984 B6
Tabulka 6. Účinek sloučenin v 104 mol/1 koncentraci na retenci chlorofylu v oddělených listech pšenice.
Látka Aktivita (%) (s.d.)
kinetin 100
1 105 (±3)
5 118 (±5)
7 110 (±2)
8 125 (±6)
9 115(±4)
10 132 (±7)
11 127 (±5)
12 140 (±7)
21 108 (±3)
24 123 (±6)
26 117 (±5)
27 124 (±4)
28 126 (±7)
Látka Aktivita (%) (s.d.)
29 117 (±2)
39 128 (±3)
41 133 (±7)
63 110 (±2)
64 123 (±4)
66 132 (±5)
67 128 (±6)
68 142 (±5)
69 115 (±4)
70 126 (±1)
71 119 (±3)
72 106 (±2)
74 127 (±5)
76 112 (±3)
*Aktivita kinetinu byla stanovena na 100 %; standardní odchylky jsou stanoveny z 10 opakování.
Příklad 9: Inhibice stárnutí lidských buněk pomocí nových sloučenin
V tomto příkladu, lidské diploidní fibroblasty (HCA buňky s různou úrovní pasážování: pasáž 25 - označené HCA25; pasáž 45 - označené HCA45; pasáž 80 - označené HCA80) byly obarveny na stanovení beta-galaktózidázové aktivity. Médium použité pro kultivaci buněk bylo odstraněno a buňky byly promyty dvakrát v PNS, a zafixovány ve 2-3 ml fixačního roztoku, sestávající z 2% formaldehydu a 0,2% glutaraldehydu v PBS. Buňky byly inkubovány při pokojové teplotě po dobu 5 minut, a pak dvakrát promyty PBS. Buňky byly poté inkubovány při 37 °C (bez CO2) po dobu 1 až 16 hodin v 2 až 3 ml roztoku obsahujícího ferrikyanid draselný (5 mM), ferrokyanid draselný (5 mM), MgCl2 (2 mM), X-gal (5-brom-4-chlor-3-indolyl-beta-D-galaktopyranosid) (1 mg/ml), v citrát/fosfátovém pufru, pH 6,0). Po této inkubační době byly vzorky buněk pozorovány za účelem zjištění přítomnost modrých buněk, což ukazuje, že X-gal byl štěpen (pozitivně senescentní buňky). V tomto experimentu, senescentní buňky, ale žádné další buňky, byly obarveny modře v důsledku působení beta-galaktózidázy na substrát X-gal.
_ ΊΩ
Tabulka 7: Vliv nových sloučenin na počet stárnoucích buněk v kultuře lidských fibroblastů
Látka Stárnoucí buňky (%)
HCA25 HCA45 HCA80
BAP 5 9 45
kinetin 3 5 38
KTHP 3 4 26
21 3 5 20
24 3 5 21
26 2 5 19
27 2 4 21
39 3 4 20
41 2 6 21
63 2 4 19
64 3 4 8
66 2 4 16
67 4 6 18
68 2 5 19
69 3 4 14
70 2 5 18
71 3 6 19
72 3 4 17
74 3 5 21
76 3 4 15
* BAP = 6-benzylaminopurin; kinetin = 6-furfurylaminopurin; KTHP - kinetin-9-tetrahydropyranyl
Jak je ukázáno v tabulce 7, se zvyšujícím se počtem pasáží se počet zabarvených buněk zvyšuje.
U nej starších buněk, byly jen modré buňky v rozmezí od světlé modré po téměř neprůhlednou barvu. 6,8-Disubstituované-9-(2-tetrahydropyranyl, nebo 2-tetrahydrofuranyl)puriny jsou velmi účinné ve srovnání s BAP a kinetinem (klasické cytokininy, známé v dosavadním stavu techniky), v zachování mnohem nižší úrovně zestárlých buněk po 80-té pasáži. V případě dlouhotrvajícího pěstování buněk, buňky ošetřené sloučeninami zahrnutými ve vynálezu, byly schopné žít o 15 30 % delší dobu, než kontrolní buňky.
-40CZ 306984 B6
Příklad 10: Vliv na dělení rostlinných buněk
Cytokinin-dependentní tabákový kalusu Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsin 38 se udržuje na teplotě 25 °C ve tmě na modifikovaném MS mediu, obsahujícím 4 pmol/l kyseliny nikotinové, 2,4 pmol/l pyridoxin-hydrochlorid, 1,2 pmol/l thiamin, 26,6 pmol/l glycinu, 1,37 pmol/l glutaminu, 1,8 pmol/l myo -inositol, 30 g/1 sacharózy, 8 g/1 agaru, 5,37 pmol/l NAA a 0,5 pmol/l BAP. Subkultivace se provádí každé tři týdny. Čtrnáct dní před biologickou zkouškou, byl kalus převeden do média bez BAP. Biologická aktivita byla stanovena na základě nárůstu čerstvé hmoty kalusu po čtyřech týdnech kultivace. Pět replikátů bylo připraveno pro každou koncentraci cytokininů a celý test byl opakován dvakrát. Ze získaných dat byla koncentrace s nejvyšší aktivitou vybrána pro každou testovanou sloučeninu. Relativní aktivita při této koncentraci byla vypočítána (viz tabulka 17 níže). Aktivita získaná pro 106M kinetin (Kin) byla stanovena jako 100 %.
Testované cytokininy byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu (DMSO) a roztok byl pak naředěn do 10~3 M destilovanou vodou. Tato koncentrace se dále ředí v příslušných médiích používaných pro Biotest na koncentrace v rozmezí 108 M až 10^ M. Finální koncentrace DMSO nepřesáhla 0,2 %, a tudíž neovlivňuje biologickou aktivitu v testovacím systému. Jak je shrnuto v tabulce 8, sloučeniny podle tohoto vynálezu zvyšují dělení buněk a na rozdíl od cytokininů, které vykazují ostré koncentrační optimum, většina nových sloučenin má o výrazně prodloužený rozsah optimální koncentrace (v rozmezí dvou až tří řádů). Jak je znázorněno na obrázku 1, nové deriváty purinových derivátů tak ztrácí své cytotoxické účinky při aplikaci ve vyšších koncentracích.
Tabulka 8. Účinek na růst cytokinin-dependentního tabákového kalusu Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsins 38.
Látka Koncentrace pro Aktivita
nejvyšší aktivitu (%); (s.d.)
(mol/1)
Kinetin 10'6 100
3 10’6-10'4 118 (±6)
5 10’6-10'4 124 (±6)
7 10'6-10'4 114 (±5)
8 10'6-104 119 (±7)
9 10'6-104 108 (±3)
23 10’6-10’5 ~ 125 (±7)
24 10’6-10’5 128 (±8)
26 10'6-10'5 117 (±4)
27 10’6-10'5 115 (±4)
28 10'6-104 107(±2)
29 hAio4 112 (±3)
64 10‘6-10'4 130 (±10)
65 10'6-10’4 127 (±9)
Látka Koncentrace pro nejvyšší aktivitu Aktivita (%); (s.d.)
(mol/1)
124 10’6-104 105(±2)
125 10’6-10'4 104 (±2)
126 10^-104 116 (±6)
127 10’6-104 114 (±6)
128 10'6-10'5 121 (±5)
129 Io 6-io‘5 111 (±4)
130 10^-104 108 (±3)
145 10‘6-104 103 (±5)
146 10 6-10'5 108(±5)
147 10^-104 112 (±2)
149 10’6-104 107 (±1)
150 10'6-10’5 105 (±2)
151 10‘6-10'4 109 (±5)
206 10'6-10’4 110 (±3)
-41 CZ 306984 B6
69 10'6-10'4 111 (±5)
70 10’6-104 110 (±1)
71 10'6-10‘4 116 (±2)
74 10'6-10’4 122 (±4)
75 10‘6-10’4 119(±4)
76 Ίθ<104 114 (±3)
Aktivita kinetinu nastavená jako 100 %.
207 10'6-10'4 114 (±3)
208 ÍO^-IO4 119 (±7)
209 ÍO^-IO4 112 (±4)
216 ÍO^-IO·4 103 (±4)
218 ΙΟ'θ-ΙΟ4 113 (±5)
Příklad 11: In vitro cytotoxická aktivita (metabolismu kalceinu AM).
Protože toxické látky negativně ovlivňují metabolické procesy buňky, řada standardních testů cytotoxicity je založena na měření metabolizace rychlosti různých umělých substrátů. Výsledný produkt se pak kvantifikuje, například, pomocí spektrometrie. Tyto testy mohou být snadno modifikovány pro použití v 96jamkových destičkách. Pro hodnocení cytotoxicity 6,8-disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl, nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů tohoto vynálezu, byl použit test založený na kvantifikaci metabolizace kalceinu AM. Test je široce používán při screeningových programech drog a při testování chemosensitivity. V živých buňkách je Calcein AM enzymaticky hydrolyzován a akumulace tohoto produktu se pak projeví zelenou fluorescencí.
Následující lidské buněčné linie byly použity pro rutinní screening toxicity sloučenin: normální diploidní fibroblasty BJ, T-lymfoblastická buněčná linie leukémie CEM, promyelocytický buněčné linie leukémie HL-60, eiythroidní buněčná linie leukémie K-562, buněčná linie karcinomu prsu MCF-7, buněčná linie osteosarkomu HOS a buněčné linie melanomu G-361. Buňky byly udržovány v Nunc/Corning 80 cm2 plastových lahvích pro tkáňové kultury a pěstovány v médiu pro buněčné kultury (DMEM s 5 g/l glukózy, 2 mM glutaminu, 100 pg/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný).
Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a očekávané konečné hustoty buněk (2500 až 30 000 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu), pipetovalo se 80 μΐ buněčné suspenze na 96jamkové mikrotitrační destičky. Inokuláty byly stabilizovány 24 hodinovou pre-inkubací při 37 °C v atmosféře 5% CO2. Jednotlivé koncentrace testovaných látek byly přidány v čase nula jako 20 μΐ alikvotní podíl do jamek mikrotitračních destiček. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v čtyřnásobné ředicí řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 166,7 μΜ, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v triplikátech. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100% vlhkosti a v atmosféře 5% CO2. Na konci inkubační periody byly buňky analyzovány po přidání roztoku Calceinu AM (Molecular Probes) a inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluorskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: IC50 = (FDjamka s derivátem/FDkontroini jamka) x 100 %. Hodnota IC50, která odpovídá koncentraci látky, kdy je usmrceno 50 % nádorových buněk, byla vypočtena ze získaných dávkových křivek.
Cytotoxicita sloučenin byla testována na panelu buněčných linií různého histogenetického a druhového původu. Jak je uvedeno v tabulce 9; IC5o 6,8-disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů přesahuje maximální testovanou koncentraci, což naznačuje, že tyto sloučeniny by mohly být použity v koncentracích ještě vyšších, bez negativních vedlejších účinků.
-42CZ 306984 B6
Tabulka 9. Cytotoxicita látek u různých nádorových buněčných linií
Látka Testovaná buněčná linie / IC50 (μιηοΐ/l) Nejvyšší testovaná koncentrace (μιηοΐ/ΐ)
BJ CEM K-562 MCF7 HOS G-361
3 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
5 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
7 >100 >100 >50 >100 >100 >100 100
8 >100 >100 >100 >100 >100 >100 100
9 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
23 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
24 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
26 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
27 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
28 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
29 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
64 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
65 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
69 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
124 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
125 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
126 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
127 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
128 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
129 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
130 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
145 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
146 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
147 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
149 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
150 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
151 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
206 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
-zlT .
207 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
208 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
209 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
216 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
218 >50 >50 >50 >50 >50 >50 50
Příklad 12: In vitro cytotoxická aktivita (metabolizace MTT).
MTT (metabolická toxicita tetrazolia) test je standardní kolorimetrický test pro hodnocení cytotoxicity. Mitochondriální dehydrogenázy převádí žlutý MTT na fialový formazan, který se měří pomocí spektrometrie.
Lidské diploidní fibroblasty BJ (pasáž 18 až 22) byly vysety do 96jamkové destičky (5 000 buněk na jamku). Po 6 hodinách kultivace v médiu (DMEM s 5 g/1 glukózy, 2 mM glutaminu, 100 pg/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný) se medium nahradí kultivačním médiem s obsahem testovaných sloučenin v rozmezí koncentrací 0-200 μΜ. Nejvyšší koncentrace se upraví, pokud je rozpustnost sloučeniny omezená. Každá koncentrace byla testována v 5 opakováních. MTT bylo k buňkám přidáno po 72 hodinách inkubace (konečná koncentrace 0,5 mg/ml) a inkubace pokračovala po dobu dalších 3 hodin. MTT byl solubilizován pomocí DMSO a jeho absorbance byla následně změřena při 570 nm. Inhibice růstu (Growth Inhibition, GI) byla odhadnuta pomocí následujícího vzorce: GI = (průměr A látce vystavené jamky - Průměr A blank/Průměr kontrolních jamek - průměr Abiank) x 100%. Hodnota GI2o, která odpovídá koncentraci látky způsobující 20% snížení aktivity mitochondriální dehydrogenázy, byla vypočtena ze získaných křivek v závislosti na dávce.
Jak je ukázáno v tabulce 10, GI20 6,8-disubstituovaných-9-(2-tetrahydropyranyl nebo 2-tetrahydrofuranyl)purinů převyšuje maximální testovanou koncentraci, což naznačuje, že tyto sloučeniny by mohly být použity ve vyšších koncentracích bez negativních vedlejších účinků.
Tabulka 10. Cytotoxicita na lidských diploidních fibroblastech
Látka gi20 (μιηο1/1) Maximální testovaná koncentrace (pmoVI)
3 >50 50
5 >100 100
7 >200 200
8 >200 200
9 >100 100
23 >100 100
-44CZ 306984 B6
24 >100 100
26 >100 100
27 >100 100
28 >100 100
29 >100 100
64 >100 100
65 >100 100
69 >100 100
124 >100 100
125 >100 100
126 >100 100
127 >100 100
128 >100 100
129 >100 100
130 >100 100
145 >100 100
146 >100 100
147 >100 100
149 >100 100
150 >100 100
151 >100 100
206 >100 100
207 >100 100
208 >100 100
209 >100 100
216 >100 100
218 >100 100
Příklad 13: Amesův test
Rada testů týkajících se bezpečnosti byla provedena za použití běžně uznávaných protokolů a postupů. Výsledky těchto studií jsou shrnuty v tomto textu. Testy byly prováděny za použití DMSO jako rozpouštědla a sloučenin 21,24,26,27,39, 41, 45, 48, 50, 52, 53, 54, 55, 56,63,64,
-45CZ 306984 B6
66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 74, 76, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 145, 146, 147, 149, 150, 151, 208, 216, 218 a 243 v dávkách 2,5; 5,0; 15; 50; 500; 1500 a 5000 pg / misku na základě standardního protokolu a postupů (Ames et al., Mutation Research, 31, 347-364 (1975); Maron et al, Mutation Research, 113, 173-215 (1983)). Za použití histidin auxotrofní Saimonella typhimurium TA98 a TA100 v přítomnosti a nepřítomnosti Arocior vyvolané krysí jatemí S9, žádné mutagenní pozitivní odpovědi nebyly pozorovány.
Příklad 14: Přípravky
Prostředky pro regulaci růstu obvykle obsahují 0,1 až 99 % z hmotnosti, obzvláště 0,1 až 95 % hmotnosti, směsi účinných látek obsahující 6,8-disubstituované puriny podle tohoto vynálezu, 1 až 99,9 % hmotnosti pevné nebo kapalné přípravky, a od 0 do 25 % hmotnosti, obzvláště 0,1 až 25 % hmotnosti, povrchově aktivního činidla. Zatímco komerční produkty jsou obvykle formulovány jako koncentráty, konečný uživatel bude normálně používat zředěné formulace. Tyto prostředky mohou také obsahovat další přísady, jako jsou stabilizátory, například rostlinné oleje nebo epoxidované rostlinné oleje (epoxidovaný kokosový, řepkový olej nebo sójový olej), činidla proti pěnění, například silikonový olej, konzervační látky, regulátory viskozity, pojidla, látky způsobující lepivost a také hnojivá nebo jiné aktivní složky. Výhodné formulace mají zejména následující složení: (% = hmotnostní procenta):
Al. Emulgovatelné koncentráty a) b) c) d)
Aktivní složka 5% 10% 25 % 50%
dodecylbenzensulfonan vápenatý 6% 8% 6% 8%
polyoxyethylovaný ricinový olej (polyglykol ether ricinového oleje) 4% — 4% 4%
(36 mol ethylenoxid) oktylfenol polyglykol ether 2% 2%
(7-8 mol ethylenoxid) cyklohexanon - - 10% 20%
směs aromatických uhlovodíků 83 % 82% 53% 18%
C9—C]2
Emulze o vyžadované finální koncentraci mohou být získány z takového koncentrátu zředěním vodou.
A2. Roztoky a) b) c) d)
Aktivní složka 5% 10% 50% 90%
l-methoxy-3-( 3-methoxy- —propoxy)—propan _ 20% 20% —
polyethylenglykol MW 400 20% 10% - -
N-methyl-2-pyrrolidon - - 30% 10%
směs aromatických uhlovodíků 75 % 60% - -
Roztoky jsou vhodné k aplikaci ve formě mikrokapének.
A3. Smáčivé prášky a) b) c) d)
Aktivní složka 5% 25% 50% 80%
ligninsulfonan sodný 4% - 3 % -
laurylsulfát sodný 2% 3 % - 4%
diisobutylnaftalensulfonát sodný - 6% 5% 6%
oktylfenol polyglykol ether - 1 % 2% -
-46CZ 306984 B6 (7-8 mol ethylenoxid) vysoce disperzní kyselina křemičitá 1 % 3 % 5 % 10 % kaolin 87% 61% 37%
Aktivní složka je důkladně promísena s pomocnými látkami a směs je důkladně rozemleta ve vhodném mlýnu. Suspenzi libovolné koncentrace je možné získat smísením vzniklého prachu s vodou.
A4. Suspenzní koncentrát a) b) c) d)
Aktivní složka 3 % 10% 25% 50%
etylén glykol 5% 5% 5% 5%
nonylfenol polyglykol ether - 1 % 2% -
(15 mol etylen oxid)
lignosulfonát sodný 3% 3 % 4% 5%
karboxymethylcelulóza 1 % 1 % 1 % 1 %
37% vodný roztok formaldehydu 0,2 % 0,2 % 0,2 % 0,2 %
emulze silikonového oleje 0,8 % 0,8 % 0,8 % 0,8 %
voda 86% 78% 64% 38%
Jemně rozemletá aktivní složka je smíchána s pomocnými látkami. Vzniklý suspenzní koncentrát umožňuje přípravu suspenze o požadované koncentraci zředěním vodou.
A5: Suché Kapsle
5000 Tobolek, z nichž každá obsahuje 0,25 g jeden z 6,8-disubstituovaných purinu, se připraví následujícím způsobem:
Složení: Léčivá látka: 1250 g; Talek 180 g; Pšeničný škrob: 120 g; Stearát horečnatý: 80 g; Laktóza 20 g.
Postup přípravy: Rozetřené látky jsou tlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí stroje na plnění tobolek.
A6: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g jednoho z 6,8- disubstituovaných purinů jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.
A7: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g jednoho z 6,8-disubstituovaných purinů jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:
Složení: 250 g účinné složky v 1 1 PEG 400, 1 litr Tween 80.
Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem lne., Inc., USA., dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulve
-47CZ 306984 B6 rizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.
Příklad 15: Gelový přípravek
Formulace mastí byla testována během pilotní klinické studie se 4 dobrovolníky s psoriázou, což je onemocnění kůže. Složky jsou uvedeny v gramech na 100 g.
látka Obsah
6-furfurylamino-8-amino-9- - tetr ahydropyr anylpur in ú°g
Butyihydroxytoluen 0,2 g
Butylparaben 0,2 g
Diethyleneglykol monoethyl ether 10,0 g
Silica colloidalis anhydrica(SiO2) 5,0 g
Propylenglykol laurát 83,6 g
Gel této konzistence může být navíc modifikován přidáním oxidu křemičitého, colloidalis anhydrica. Také se opět předpokládá, že transdermální systém Transcutol P / Lauroglycol FCC zvýší účinnost 8-amino-6-furfurylamino-9-tetrahydropyranyl-purinu. Oxid křemičitý colloidalis anhydrica pravděpodobně zpomalí penetraci účinné látky.
Příklad 16: Postupem přípravy kožní masti
Složky masti jsou uvedeny v gramech na 200 g:
Látka Obsah
6-furfurylamino-8-amino-9- - tetrahydropyranylpurin 20g
Butyihydroxytoluen 0,4 g
Butylparaben 0,4 g
Diethyleneglykol monoethyl ether 20,0 g
Glycerol dibehenát 44,0 g
Propylenglykol laurát 133,2 g
Doporučený postup
Fáze A: 2 g 8-amino-6-furfurylamino-9-tetrahydropyranylpurinu se rozpustí ve 20 g Transcutol P za stálého míchání při teplotě místnosti v oddělené skleněné nebo nerezové nádobě. Proces rozpouštění může být urychlen zahříváním roztoku na maximální teplotu 40 °C.
-48CZ 306984 B6
Fáze B: 0.4 g Nipanox BHT a 0,4 g Nipabutyl se rozpustí za stálého míchání v 133,2 g Lauroglycolu FCC při teplotě přibližně 70 °C, v další samostatné skleněné nebo nerezové nádobě. Čirý olejovitý roztok se zahřívá na teplotu přibližně 80 °C a 44 g Compritol 888 ATO se taví v něm, za stálého míchání. Čirý olejovitý roztok se ochladí na cca 60 °C za stálého míchání a ochlazení a smísí se s fází A. Vzniklá bělavá mast je rozdělena na přibližně 15 g porce a plní se do předem připravených plastových nádob.
Příklad 17: Formulace přípravku pro lokální aplikaci na kůži
Prostředek pro místní aplikaci na kůži obsahuje následující složky podle hmotnostních %: Aktivní složka: 6-furfurylamino-8-amino-9-tetrahydropyranylpurin 0,1%
Olejová fáze:
Cetylalkohol 5,0 %
Glycerylmonostearát 15,0 %
Sorbitanmonooleát 0,3 %
Polysorbát 80 USP 0,3 %
Vodná fáze:
Methylcelulózová 100 cps 1,0 %
Methylparaben 0,25 % Propylparaben 0,15 % Vyčištěná voda q.s. na 100 %
Methylparaben a propylparaben se rozpustí v horké vodě a následně se v ní disperguje i methylcelulóza. Směs se pak ochladí na 60 °C, dokud se methylcelulóza nerozpustí. Směs se potom zahřívá na 72 °C a přidá se do olejové fáze, která se zahřívá na teplotu 70 °C za stálého míchání. 8-Amino-6-furfurylaminopurin se přidá při teplotě 35 °C a výsledná směs se míchá až do okamžiku rozptýlení. Tento prostředek se aplikuje na kůži přinejmenším každý den, dokud se nedosáhne požadovaného zmírnění stárnutí kůže (proti stárnutí).

Claims (11)

1. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky využitelné soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, ve formě racemátů nebo opticky aktivních izomerů, jakož i jejich adičních solí s kyselinami, ve kterých
- 4Q .
Cyc znamená heterocyklyl vybraný ze skupiny zahrnující 2-tetrahydropyranyl a 2-tetrahydrofuranyl;
R6je-NH-Ry,
Ryje vybraný ze skupiny zahrnující
- Ci až C8 přímý nebo rozvětvený alkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C] až C4 alkoxy,
- C2 až C8 přímý nebo rozvětvený alkenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Q až C4 alkoxy,
- C3 až Cg cykloalkyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C[ až C4 alkyl, Cj až C4 alkoxy,
- benzyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Ci až C4 alkyl, Ci až C4 alkoxy,
- fenyl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, Cj až C4 alkyl, C] až C4 alkoxy,
- furfuryl, popřípadě substituovaný alespoň jedním substituentem zvoleným z množiny zahrnující hydroxyl, halogen, C, až C4 alkyl, C, až C4 alkoxy, a
R8 je vybraný ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, chlor, fluor, brom, acyl, acyloxy, amido, alkoxy, benzyloxy, alkylamino, karbamoyl, karboxyl, kyano, hydrazino, -NHOH, -NHCONH2, -NH-C(NH)NH2, nitro, sulfanyl, alkylsulfanyl, sulfo a alkyloxykarbonyl, přičemž:
- sulfo znamená skupinu -SO2Ra, kde Ra je vodík, alkyl, nebo alkenyl;
- acyl znamená -C(O)Rb, Rb je alkyl a alkenyl;
- acyloxy znamená -O-C(O)R„ kde Reje hydrogen, alkyl nebo alkenyl;
- alkoxy znamená skupinu -ORj, kde Rj je alkyl;
- alkylamino znamená skupinu -N(Re)2, kde každá skupina Re je nezávisle vybrána z vodíku, alkylu a alkenylu, které mohou být substituovány amino nebo hydroxy substituentem;
- alkylsulfanyl znamená skupinu -SRf, kde Rfje alkyl jak je definováno;
- alkyloxykarbonyl znamená skupinu -C(O)ORg, kde Rg je alkyl nebo alkenyl;
- amido znamená skupinu -C(O)N(Rf)2, kde každý Rf může být nezávisle vodík, alkyl a alkenyl;
- alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 8 uhlíkových atomů, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;
- alkenyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 2 až 8 uhlíkových atomů, s výhodou vinyl, allyl, 1-propenyl, 1-methylethenyl, but-1 až 3-enyl, pent-1 až 4-enyl, hex-1 až 5-enyl, hept-I až 6-enyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino. sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl;
- cykloalkyl znamená monocyklickou nebo polycyklickou alkylovou skupinu obsahující 3 až 8 uhlíkových atomů, s výhodou cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl nebo adamantyl, které mohou být s výhodou substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými z množiny zahrnující hydroxy, halogen, amino, sulfanyl, karboxyl, kyano, nitro, karbamoyl.
2. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde Ry je vybrán ze skupiny zahrnující furfuryl, fenyl, benzyl, 3-methylbut-2-en-l-yl, cyklohexylmethyl, allyl a 3,3-dimethylallyl, které mohou být případně substituovány jedním nebo více substituenty zvolenými ze skupiny zahrnující halogen, hydroxy, methoxy, methyl, amino, nitro nebo jejich kombinace.
-50CZ 306984 B6
3. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R8 je vybrán ze skupiny zahrnující amino, hydroxy, chlor, fluor, brom, amino(Ci-C5 alkyljamino, hydroxy(Ci-C5 alkyl)amino, NHOH, NHNH2, karboxyl, nitro, sulfanyl, methylsulfanyl, methoxy.
4. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující 6-furfurylamino-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-furfurylamino-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, i o 6-furfury lamino-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofurany ljpurin,
6-furfurylammo-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-furfurylamino-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-furfurylamino-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
15 6-furfurylamino-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-furfurylamino-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-furfurylamino-8-(amino(Cl-C5 alkyI)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-furfurylamino-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfuiylamino-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
20 6-furfurylamino-8-(hydroxy(C 1-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-furfurylamino-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-furfurylamino-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-furfurylamino-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
25 6-furfurylamino-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-furfuiylamino-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin
30 6-furfurylamino-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-furfurylamino-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methyIsuIfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-furfurylamino-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
35 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofúranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
40 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-ehlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3~hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydroíuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-brom~9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
45 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(amino(C 1-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
C 1
6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-(hydroxy(C 1-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxyben2ylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyí)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzyIamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methyIsuIfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(3-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-aniino-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzyíamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofiiranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzy lamino)-8-N HN H2-9-(2-tetrahydropyrany 1 )purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyI)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyi)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
-52CZ 306984 B6
6-(4-hydroxybenzylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylammo)-8~amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin. 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-niethylbut-2-en-l-ylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylainino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purÍn, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylaniino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino(CI-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methy I but-2-en-1 -ylamino)-8-(hydroxy(C 1-C 5-alkyl)amino)-9-(2tetrahydropyranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5-alkyl)amino)-9-(2tetrahydrofuranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylainino-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyI)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino}-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-1 -y Iamino)-8-n itro-9-(2-tetrahydropyrany l)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methybut-2-en-l-ylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)-purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylainino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tretrahydropyranyl)purin, 6-(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylainino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purm, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylainino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-niethylbut-2-en-l-ylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-€hlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylaniino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yIamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyI)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
- 53 CZ 306984 B6
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2tetrahydropyranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2tetrahydrofuranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyi)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(E)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-ylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-amino-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-hydroxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-chlor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino>-8-chlor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin) 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-fluor-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methyIbutylamino)-8-brom-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(amino(C 1-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-amino(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-(hydroxy(Cl-C5 alkyl)amino)-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHOH-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydropyranyl)purin, 6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-NHNH2-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
-54CZ 306984 B6
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-karboxyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-karboxyI-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-nitro-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methyIbutylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-sulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-methylsulfanyl-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydropyranyl)purin,
6-(4-hydroxy-3-methylbutylamino)-8-methoxy-9-(2-tetrahydrofuranyl)purin, a jejich soli s alkalickými kovy, amonné soli a aminy, ve formě racemátů a opticky aktivních izomerů, stejně jako jejich adičních solí s kyselinami.
5. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro použití jako antioxidanty pro inhibici nevhodných a nepříznivých metabolických procesů u rostlin, živočichů a člověka, a/nebo jako antioxidanty pro inhibici peroxidace lipidů a proteinů v rostlinách, zvířatech a člověku.
6. 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro použití jako léčiva.
7. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 jako kosmetika.
8. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva pro inhibici, zlepšení a oddálení procesů stárnutí a senescence, a pro zlepšení vzhledu a kondice kůže.
9. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro kosmetické účely pro inhibici, zlepšení a oddálení procesů stárnutí a senescence, a pro zlepšení vzhledu a kondice kůže.
10. Použití 6,8-disubstituovaných-9-(heterocyklyl)purinů podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 jako růstových regulátorů ve tkáňových kulturách pro stimulací proliferace, morfogeneze a inhibici senescence.
11. Farmaceutický a/nebo kosmetický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden 6,8-disubstituovaný-9-(heterocyklyl)purin obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 a alespoň jednu pomocnou látku.
1 výkres
CZ2014-908A 2014-12-15 2014-12-15 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích CZ306984B6 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-908A CZ306984B6 (cs) 2014-12-15 2014-12-15 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích
PCT/CZ2015/050009 WO2016095880A1 (en) 2014-12-15 2015-10-21 6,8-disubstituted-9-(heterocyclyl)purines, compositions containing these derivatives and their use in cosmetic and medicinal applications
US15/536,041 US10093675B2 (en) 2014-12-15 2015-10-21 6,8-disubstituted-9-(heterocyclyl)purines, compositions containing these derivatives and their use in cosmetic and medicinal applications
EP15794056.0A EP3233861B1 (en) 2014-12-15 2015-10-21 6,8-disubstituted-9-(heterocyclyl) purines, compositions containing these derivatives and their use in cosmetic and medicinal applications

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2014-908A CZ306984B6 (cs) 2014-12-15 2014-12-15 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2014908A3 CZ2014908A3 (cs) 2016-06-22
CZ306984B6 true CZ306984B6 (cs) 2017-11-01

Family

ID=54540763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2014-908A CZ306984B6 (cs) 2014-12-15 2014-12-15 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10093675B2 (cs)
EP (1) EP3233861B1 (cs)
CZ (1) CZ306984B6 (cs)
WO (1) WO2016095880A1 (cs)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110407836B (zh) * 2019-08-15 2022-03-29 沈阳化工研究院有限公司 一种9-（2-甲氧基乙基）-9h-嘌呤-6-胺衍生物及其应用
US12220592B1 (en) 2023-01-18 2025-02-11 Bardy Technologies, Inc. Defibrillator case
US11794026B1 (en) 2023-01-18 2023-10-24 Gust H. Bardy Defibrillation circuit with low voltage energy storage
US12168137B1 (en) 2023-01-18 2024-12-17 Bardy Technologies, Inc. De-energizable defibrillation assembly
CN116496277B (zh) * 2023-06-14 2023-08-25 齐泽(云南)生物科技有限公司 一种姜黄素2,6-二氨基嘌呤衍生化合物
CN116444522B (zh) * 2023-06-14 2023-08-25 齐泽(云南)生物科技有限公司 一种姜黄素腺嘌呤衍生化合物
US12280265B1 (en) 2024-08-15 2025-04-22 Bardy Technologies, Inc. Solid state defibrillation therapy generator
US12383728B1 (en) 2024-08-15 2025-08-12 Bardy Technologies, Inc. Circuit for defibrillation waveform generation

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4369181A (en) * 1981-08-05 1983-01-18 Sri International Process for treating proliferative skin diseases using certain 6,8-substituted ribofuranosylpurine-3',5'-cyclic phosphates
US5602139A (en) * 1987-02-26 1997-02-11 Senetek Plc Method for ameliorating the adverse effects of aging
US5968912A (en) * 1996-07-29 1999-10-19 Immune Modulation, Inc. Methods for immunosuppressing
WO2000043394A1 (en) * 1999-01-26 2000-07-27 Ústav Experimentální Botaniky Av Cr Substituted nitrogen heterocyclic derivatives and pharmaceutical use thereof
WO2001049688A1 (en) * 2000-01-07 2001-07-12 Universitaire Instelling Antwerpen Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
WO2008008770A2 (en) * 2006-07-10 2008-01-17 Institute Of Experimental Botany, Academy Of Sciences Of The Czech Republic 6, 9-disubstituted purine derivatives and their use for treating skin
WO2009086457A2 (en) * 2007-12-28 2009-07-09 Institute Of Experimental Botany, Academy Of Sciences Of The Czech Republic 6,9-disubstituted purine derivatives and their use as cosmetics and cosmetic compositions

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ294535B6 (cs) 2001-08-02 2005-01-12 Ústav Experimentální Botaniky Avčr Heterocyklické sloučeniny na bázi N6-substituovaného adeninu, způsoby jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4369181A (en) * 1981-08-05 1983-01-18 Sri International Process for treating proliferative skin diseases using certain 6,8-substituted ribofuranosylpurine-3',5'-cyclic phosphates
US4369181B1 (cs) * 1981-08-05 1985-07-16
US5602139A (en) * 1987-02-26 1997-02-11 Senetek Plc Method for ameliorating the adverse effects of aging
US5968912A (en) * 1996-07-29 1999-10-19 Immune Modulation, Inc. Methods for immunosuppressing
WO2000043394A1 (en) * 1999-01-26 2000-07-27 Ústav Experimentální Botaniky Av Cr Substituted nitrogen heterocyclic derivatives and pharmaceutical use thereof
WO2001049688A1 (en) * 2000-01-07 2001-07-12 Universitaire Instelling Antwerpen Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
WO2008008770A2 (en) * 2006-07-10 2008-01-17 Institute Of Experimental Botany, Academy Of Sciences Of The Czech Republic 6, 9-disubstituted purine derivatives and their use for treating skin
WO2009086457A2 (en) * 2007-12-28 2009-07-09 Institute Of Experimental Botany, Academy Of Sciences Of The Czech Republic 6,9-disubstituted purine derivatives and their use as cosmetics and cosmetic compositions

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Suárez, Rosa M., et al. "Inhibitors of the TAM subfamily of tyrosine kinases: synthesis and biological evaluation." European journal of medicinal chemistry 61 (2013): 2-25. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP3233861B1 (en) 2019-04-10
US10093675B2 (en) 2018-10-09
US20170362236A1 (en) 2017-12-21
CZ2014908A3 (cs) 2016-06-22
EP3233861A1 (en) 2017-10-25
WO2016095880A1 (en) 2016-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ306984B6 (cs) 6,8-Disubstituované-9-(heterocyklyl)puriny, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití v kosmetických a medicínských aplikacích
US8575182B2 (en) 6, 9-disubstituted purine derivatives and their use as cosmetics and cosmetic compositions
US8222260B2 (en) Substituted 6-anilinopurine derivatives as inhibitors of cytokinin oxidase/dehydrogenase and preparations containing these derivatives
RU2302421C2 (ru) Гетероциклические соединения на основе n6-замещенного аденина, их применение при производстве медикаментов, косметических средств, регуляторов роста, фармацевтические и косметические композиции или регуляторы роста на их основе
AU2002363362A1 (en) Heterocyclic compound based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
US11643413B2 (en) 9-(2-oxacycloalkyl)-9H-purine-2,6-diamine derivatives and their use for the treatment of skin disorders
EP2755977B1 (en) 6,8-disubstituted purine compositions and their pharmaceutical and cosmetic use
US9073961B2 (en) Substitution derivatives of N6 -benzyladenosine-5′-monophosphate, methods of preparation thereof, use thereof as medicaments, and therapeutic preparations containing these compounds
CZ2014875A3 (cs) 6-aryl-9-glykosylpuriny a jejich použití
NZ538596A (en) Heterocyclic compound based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of cosmetic, cosmetic preparations containing these compounds

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20181215