CZ2023259A3 - Deriváty adeninů substituované kyselinou thioktovou, přípravky obsahující tyto deriváty a jejich použití - Google Patents

Abstract

Předkládané řešení se týká sloučenin obecného vzorce I, které vykazují řadu biologických aktivit souvisejících s inhibicí oxidačního stresu, feroptózy a kuproptózy. Řešení se rovněž týká kosmetických a farmaceutických přípravků obsahujících tyto deriváty jako aktivní sloučeniny.

Description

Vynález se týká derivátů adeninů substituovaných kyselinou thioktovou na postranním řetězci v pozici N⁶, jejich použití v kosmetice a terapii onemocnění, a přípravků obsahujících tyto deriváty.

Dosavadní stav techniky

N⁶-substituované a N⁶ a C9 disubstituované puriny mají různé účinky na lidské buňky a tkáně. Substituce v poloze 9 často poskytuje vysoce toxické sloučeniny, jejichž příkladem jsou jak ribosidy, tak deriváty s 9-alkylovou skupinou studované jako protinádorová léčiva. Zajímavá je jejich schopnost chránit buňky před různými formami stresu a předcházet některým škodlivým účinkům stárnutí buněk. Například fibroblasty lidské kůže kultivované v přítomnosti N6furfuryladeninu nebo (E)-2-methyl-4-(7H-purin-6-ylamino)but-2-en-1 -olu (trans-zeatin) si zachovávají některé vlastnosti buněk s nižší pasáží. N⁶-furfuryladenin má také mírné neuroprotektivní účinky proti glutamátem indukované cytotoxicitě in vitro (Gonzales et al., 2022, doi: 10.3390/molecules26020361). Slabá přímá antioxidační aktivita byla pozorována u N⁶furfuryladeninu, N⁶-benzyladeninu a derivátu s izoprenoidním postranním řetězcem N⁶isopentenyladeninu (Jablonska-Trypuc et al. Mol Cell Biochem 413:97-107, 2016; Brizzolari et al. J. Chromatogr. B 1019: 164-168, 2016). Nepřímá antioxidační aktivity díky indukci Nrf2 transkripčního faktoru byla popsána také pro N⁶-isopentenyl adenosin (Dassano et al., 2014 DOI: 10.1016/j.redox.2014.03.001). Nevýhodou ribozidů, mezi které patří právě isopentenyl adenosin, je toxicita ve vyšších koncentracích než jednotky mikromolů a problematická biologická dostupnost (Voller et al., 2010, doi: 10.1016/j.phytochem.2010.04.018).

Role oxidačního stresu v nemocech a stárnutí

Reaktivní formy kyslíku (ROS) a oxidační stres hrají významnou roli ve stárnutí a patologii různých onemocnění a přispívají k poškození buněk prostřednictvím dvou hlavních mechanismů. ROS, zejména hydroxylový radikál (·ΟΗ), peroxydusitan (ONOO-) a kyselina chlorná (HOCl) přímo oxidují makromolekuly, včetně membránových lipidů, strukturálních proteinů, enzymů a nukleových kyselin, což vede k aberantním buněčným funkcím a nakonec k smrti. ROS a příbuzné sloučeniny, zejména peroxid vodíku generovaný buňkami, mohou působit jako druzí poslové, oxidační stres může narušit tuto redoxní signalizaci. Oba typy mechanismů oxidačního stresu se mohou vyskytovat u jednoho onemocnění, jako je diabetes.

Oxidační stres může narušit různé signální dráhy a ovlivnit širokou škálu biologických procesů. Může mimo jiné modifikovat proteiny, stimulovat zánět, spouštět apoptózu, deregulovat autofagii a narušovat mitochondriální funkce.

Zatímco oxidační stres je primární příčinou u některých onemocnění, jako je ateroskleróza nebo radiační poškození, u většiny jiných onemocnění vzniká oxidační stres sekundárně z faktorů, jako je zvýšená produkce ROS během zánětlivých reakcí prostřednictvím NADPH nebo v důsledku aktivity xanthinoxidázy při ischemii (reperfuzní poranění). Strukturální a funkční změny způsobené oxidačním stresem často urychlují progresi onemocnění a zintenzivňují jeho příznaky. Mezi onemocnění s významným přispěním oxidačního stresu, kde je antioxidační terapie zkoumána, patří rakovina, ischemicko-reperfuzní poškození různých orgánů (mrtvice, srdeční infarkt, posttransplantační poranění), Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, amyotrofická laterální skleróza (ALS) chronická obstrukční plicní nemoc, idiopatická plicní fibróza, hypertenze, diabetes mellitus 2. typu, syndrom systémové zánětlivé odpovědi, onemocnění koronárních tepen, ztráta sluchu a Meniérova choroba a sepse. Oxidační stres se podílí na patogenezi mnoha forem

- 1 CZ 2023 - 259 A3 onemocnění sítnice a oka, včetně fotokeratokonjunktivitidy, fotokeratitidy, onemocnění pingueculae a pterygie, katarakty, glaukomu, ischemických retinopatií, okluze retinální žíly a makulární degenerace (Chen et al., https:2009 //doi.org/10.1016/S1542-0124(12)70185-4]; Rivera a kol., 2017 [https://doi.org/10.1155/2017/3940241]).

Mnoho mitochondriálních onemocnění se vyznačuje zvýšenou produkcí ROS, která přispívá k dalšímu poškození organel a buněk. Tento fenotyp je přítomen u onemocnění s mutacemi přímo či nepřímo ovlivňujícími fungování elektronového transportního řetězce a oxidativní fosforylace. Příklady zahrnují Friedreichovu ataxii (FA), Leberovu hereditární optickou neuropatii (LHON), mitochondriální encefalomyopatii, laktátovou acidózu a epizody podobné mrtvici (MELAS), myoklonickou epilepsii s roztřepenými červenými vlákny (MERRF) a Leighův syndrom (Genki Hayashi a Gino Cortopassi , 2015 [http://dx.doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2015.05.039];

Meseguer et al., 2014 [https://doi.org/10.1093/hmg/ddu427]).

Oxidační stres hraje významnou roli při stárnutí kůže a onemocněních. Ve stárnoucí pokožce je koncentrace antioxidantů významně snížena, přičemž se ukázalo, že hladiny α-tokoferolu, askorbátu a GSH jsou sníženy o 70 %. V epidermis oxidační stres narušuje kalciový gradient, což vede ke změnám ve složení zrohovatělého obalu a snížení bariérové funkce stárnoucí kůže. V dermis je proces stárnutí řízen aktivací matricových metaloproteáz, což vede k degradaci složek extracelulární matrice, zejména kolagenů a elastických vláken. Tyto změny v extracelulární matrix přispívají ke vzniku jemných vrásek. UV záření, významný externí zdroj ROS, masivně vyvolává předčasné stárnutí v kožních buňkách, přispívá ke stárnutí kůže a fotostárnutí. Proces stárnutí v kůži je řízen ROS v míře, kterou není dosaženo v žádném jiném orgánu. Různá kosmetika a kosmeceutika se snaží snížit oxidační stres a obnovit redoxní rovnováhu v pokožce.

Oxidační stres je také přítomen ve stavech, kdy je zvýšené volné železo nebo měď. Konečně těžké kovy včetně rtuti, olova, chrómu, kadmia a arsenu vyvolávají oxidační stres (Balali-mood et al. 2021 [doi: 10.3389/fphar.2021.643972]).

Role feroptózy v nemocech

Feroptóza je forma regulované buněčné smrti charakterizovaná akumulací lipidových peroxidů závislou na železe. Liší se od jiných forem buněčné smrti, jako je apoptóza, nekróza a nekroptóza ve svých morfologických, biochemických a genetických charakteristikách (Dixon et al., 2012 [https://doi.org/10.1038/nature11116]). Tento proces je řízen selháním buněčné antioxidační obrany, zejména detoxikačního systému lipidového hydroperoxidu závislého na glutathionu, což má za následek smrtelné poškození buněčných membrán (Yang et al., 2014 [https://doi.org/10.1038/nature14063 ]). Feroptóza je obvykle důsledkem dysregulace homeostázy železa, která katalyzuje produkci radikálů prostřednictvím Fentonovy reakce (Dixon et al., 2012 [https://doi.org/10.1038/nature11116]).

Feroptóza hraje roli v širokém spektru onemocnění včetně neurodegenerací (přehled v Vitalakumar et al., 2021 [DOI: 10.1002/jbt.22830]), stavů spojených se zraněním a metabolických onemocnění (přehled v Ajoolabady et al., 2022 [ https://doi.org/10.1016/j.tem.2021.04.010]). Terapeutické strategie se zaměřují na chelataci železa, zhášení radikálů a inhibici enzymů řídících peroxidaci lipidů, jako jsou ACSL4, LPCAT3, LOX a POR.

Feroptóza se také podílí na patogenezi Friedreichovy ataxie, neurodegenerativní poruchy, která primárně postihuje nervový systém a srdce. Friedreichova ataxie je způsobena nedostatkem frataxinu, mitochondriálního proteinu zapojeného do homeostázy železa. Ztráta frataxinu vede k přetížení mitochondrií železem, oxidačnímu stresu a peroxidaci lipidů, což jsou klíčové rysy feroptózy (Abeti et al., 2018 [https://doi.org/10.1016/j.redox.2018.03.002]).

U potkanů trpících encefalopatií spojenou se sepsí jsou pozorovány kognitivní poruchy spolu se zvýšením feroptózy. Ukázalo se však, že použití deferoxaminu (DFO) působí proti těmto účinkům

- 2 CZ 2023 - 259 A3 aktivací osy NFE2L2-GPX4 (Yao et al., 2019 [10.3760/cma.j.issn.2095-4352.2019.11.015]). Kromě toho se aplikace DFO jako strategie cílené na feroptózu také ukázala jako slibná při ochraně před poraněním míchy u potkaních modelů (Yao et al., 2019 [doi: 10.4103/1673-5374.245480]). Arsenitem indukovaná neurotoxicita byla navíc spojena s indukcí feroptózy prostřednictvím aktivace feritinofágie, a to jak in vitro, tak in vivo.

Nedávné studie odhalily důležitou roli feroptózy u onemocnění sítnice, jako je Stargardtova choroba, makulární degenerace (Chen a kol., 2021 [DOI: 10.1074/jbc.RA120.015779]; Zhao a kol., 2021 [DOI: 10.14102. ]), glaukom, ischemicko-reperfuzní poškození sítnice, retinitis pigmentosa a diabetická retinopatie. Hromadění železa v sítnici v důsledku dědičných poruch homeostázy železa, aceruloplasminemie, a neurodegenerace spojená s panthothenátkinázou také způsobují degeneraci sítnice (He et al., 2007 [https://doi.org/10.1016/j.preteyeres.2007.07.004]). Mezi další oční onemocnění s postižením feroptózy patří keratopatie a katarakta (přehled v Liu et al., 2023 [DOI: 10.1007/s11010-022-04644-5]).

Role feroptózy při ischemicko-reperfuzním (I/R) poškození (IRI) napříč různými orgány byla rozsáhle studována. Data jasně podporují nejen účast feroptózy na poškození, ale také účinnost cílení na feroptózu (Yuan a Liang, 2020)

[https://europepmc.org/articles/pmc7231469?pdf=render].

Akumulace železa v oblastech mozku postižených mrtvicí byla pozorována jak u pacientů, tak u experimentálních zvířecích modelů mozkové ischemie a byla navržena jako klíčový mediátor neuronového poškození a smrti. Bylo prokázáno, že inhibitory feroptózy, jako je liprostatin-1 a ferrostatin-1, zachraňují poškození neuronů související s IRI, což silně naznačuje přímé zapojení feroptózy (Yuan a Liang, 2020) [https://europepmc.org/articles/pmc7231469?pdf =vykreslení].

Feroptóza se také podílí na reperfuzním poškození myokardu. Klinické studie ukazují, že zbytkové železo v myokardu je rizikovým faktorem pro nedostatečnou remodelaci levé komory po reperfuzi. Zejména mitochondriálně specifická nadměrná exprese GPx4 zmírňuje srdeční dysfunkci po I/R. Ferostatin-1 a chelatace železa mohou také zlepšit srdeční selhání způsobené akutním i chronickým I/R, což je v souladu s myšlenkou, že cílení na feroptózu může sloužit jako potenciální strategie k prevenci kardiomyopatie (Yuan a Liang, 2020) [https://europepmc .org/articles/pmc7231469?pdf=render].

Role feroptózy byla také zkoumána v jiných orgánech, které mohou podléhat I/R událostem.

Například přetížení železem a feroptóza jsou také zapojeny do IRI ledvin a bylo prokázáno, že chelátory železa inhibují smrt renálních tubulárních buněk. Důležitost robustní ochrany proti feroptóze byla potvrzena na myších s knockoutem GPx4 (Yuan a Liang, 2020 [https://europepmc.org/articles/pmc7231469?pdf=render]). Testikulární I/R indukuje buněčnou smrt zárodečných a Sertoliho buněk a smrt Sertoliho buněk je explicitně spojena s feroptózou. Také se ukázalo, že ACSL4 hraje kritickou roli ve střevních I/R, které mohou být chráněny inhibicí ACSL4 a inhibitory feroptózy (Yuan a Liang, 2020, https://europepmc.org/articles/pmc7231469?pdf=render). Feroptóza hraje také roli v retinální I/R a potransplantační I/R.

Feroptóza je také zapojena do široké kategorie metabolických onemocnění, včetně kardiomyopatie sepsí zprostředkované srdeční dysfunkce, diabetes meliutus, aterosklerózy a alkoholického poškození jater. (viz přehledový článek Ajoolabady et al., 2022

[https://doi.org/10.1016/j .tem.2021.04.010]).

Role kuproptózy v nemocech

Kuproptóza je forma buněčné smrti, která je závislá na mědi (Tsvetkov et al., 2022 [DOI: 10.1126/science.abf052]). Byl identifikován v nedávných studiích a je odlišný od všech ostatních

- 3 CZ 2023 - 259 A3 známých cest, které jsou základem buněčné smrti, včetně apoptózy, nekroptózy, nekrózy a feroptózy. Mechanismus kuproptózy zahrnuje interferenci s proteiny obsahujícími FeS-klastr, vazbu mědi na lipoylované enzymy v cyklu trikarboxylových kyselin, oxidační stres, agregaci proteinů, proteotoxický stres a nakonec buněčnou smrt (přehled v Chen et al., 2022 [https: //doi.org/10.1038/s41392-022-01229-y]).

Kuproptóza má důsledky v patogenezi různých onemocnění a poruch, včetně Wilsonovy choroby, neurodegenerativních onemocnění a rakoviny. Wilsonova choroba je genetická porucha, při které se v těle hromadí měď, která postihuje především játra a mozek. Neurodegenerace, jako je Alzheimerova, Parkinsonova a Huntingtonova choroba, jsou také spojeny s narušením homeostázy mědi. Exprese genů souvisejících s kuproptózou má diagnostickou hodnotu u Alzheimerovy choroby (Zhang et al. 2023 [https://doi.org/10.3389/fneur.2022.1064639]). Abnormální aktivace imunitního systému spojená s kuproptózou byla hlášena u Alzheimerovy choroby (Lai et al., 2022 [https://doi.org/10.3389/fnagi.2022.932676]), revmatoidní artritidy a osteoartritidy (Zhao et al., 2022 [https ://doi.org/10.3389/fimmu.2022.930278];Chang et al., 2023 [https://doi.org/10.3389/fimmu.2023.1090596]), zánětlivá střevní onemocnění (IBD), včetně Crohnovy choroby, ulcerózní kolitidy , celiakie a rakovina vyvolaná IBD (Chen a kol., 2022 [https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.1031539]; Youan a kol., 2022 [https://doi.org/10.3389/fimmu .2022.1074271]). Další vysoké hladiny plazmatické mědi vedoucí k kuproptóze mohou vést k diabetické kardiomyopatii (Cui et al., 2022 [https://doi.org/10.1155/2022/5418376]).

V souvislosti s rakovinou se role mědi a kuproptózy stále zkoumá, ale experimentální důkazy ukazují, že manipulace s hladinami mědi zabíjí rakovinné buňky in vitro i in vivo.

Pokud jde o terapeutické strategie, bylo prokázáno, že aplikace chelátorů mědi, jako je Cliochinol nebo Tetrathiomolybdenan, zmírňuje patologické symptomy i nepravidelnosti chování pozorované u myšího modelu R6/2 Huntingtonovy choroby. Kromě toho dietní úpravy zaměřené na snížení příjmu mědi a podávání bathocuproin disulfonátu (BCS) - ve vodě rozpustného chelátorů mědi výrazně zvýšily míru přežití v modelu Huntingtonovy choroby.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou estery substituovaných adeninů a kyseliny thioktové obecného vzorce I, ve kterém,

-4CZ 2023 - 259 A3

RI je vybráno z přičemž obsahuje-li substituent R1 benzenové jádro, může být toto benzenové jádro volitelně dále substituováno jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými z methyl, methoxy, fluor a chlor;

R2 je vybráno z H, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Farmaceuticky přijatelnými solemi jsou zejména soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo adiční soli s kyselinami. S výhodou se jedná o farmaceuticky nebo kosmeticky akceptovatelné soli.

Notace znamená dvojnou vazbu, a zahrnuje izomery E, Z a směsi izomerů E a Z.

Ve vzorci substituentu R1 může být atom kyslíku vázán na benzenové jádro v poloze ortho, meta nebo para.

Hvězdička ve vzorcích označuje chirální centrum. Zahrnuty jsou enantiomery S, R i směsi enantiomerů.

Předmětem tohoto vynálezu jsou tedy deriváty N⁶-substituováných adeninů dále substituovaných kyselinou thioktovou, které vykazují silnou schopnost chránit buňky a tkáně různých typů proti oxidativnímu stresu, feroptóze, kuproptóze a expozici těžkým kovům. Látky vykazujících uvedené vlastnosti lze použít v prevenci a léčbě onemocnění, kde hraje roli poškození v důsledku oxidačního stresu, feroptózy, kuproptózy nebo nefyziologické koncentrace kovů. Rovněž jsou tyto látky použitelné v kosmetice pro zpomalení projevů stárnutí a zlepšení vzhledu kůže.

Vynález zahrnuje sloučeniny vzorce I pro použití v léčbě, zejména v léčbě chorob vybraných ze skupiny zahrnující diabetes, diabetes mellitus 2. typu, zánětlivá onemocnění, aterosklerózu, radiační poškození, reperfůzní poranění, rakovinu, ischemicko-reperfůzní poškození různých orgánů (mrtvice, srdeční infarkt, posttransplantační poranění), hypoxii, Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, amyotrofickou laterální sklerózu (ALS), chronickou obstrukční plicní nemoc, idiopatickou plicní fibrózu, hypertenzi, syndrom systémové zánětlivé odpovědi, onemocnění koronárních tepen, ztrátu sluchu, Meniérovu chorobu, sepsi, Huntingtonovu chorobu, Friedreichovu ataxii (FA), Leberovu hereditární optickou neuropath (LHON), mitochondriální encefalomyopatii, laktátovou acidózu, epizody podobné mrtvici (MELAS), myoklonickou epilepsii s roztřepenými červenými vlákny (MERRF), Leighův syndrom, aceruloplasminemii, Wilsonovu chorobu, kardiomyopatii a onemocnění sítnice a oka. Onemocnění sítnice a oka jsou s výhodou vybrána z fotokeratokonjunktivitidy, Stargardtovy choroby, fotokeratitidy, onemocnění pingueculae a pterygie, katarakty, keratopatie, glaukomu, ischemických retinopatií, okluze retinální žíly, makulární degenerace, glaukomu, ischemicko-reperfůzního poškození sítnice, retinitis pigmentosy a diabetické retionpatie.

CZ 2023 - 259 A3

Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou následující sloučeniny vzorce I, přičemž kyselina thioktová může být ve formě enantiomeru (R), (S) nebo jejich směsi: 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methoxyfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-3-methoxyfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methylfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-fluorfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát 5-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methoxyfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 5-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methylfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-4-methoxyfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-6-methoxyfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-6-methylfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-5-methylfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-5-fluorfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (Z)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E/Z) )-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1 -yl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát,

2-methoxy-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

3-methoxy-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

2-methyl-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

2-fluoro-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

2-methoxy-5-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

2-methyl-5-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát (E)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl yl)pentanoát (Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl yl)pentanoát,

5-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-3(E/Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan

3-yl)pentanoát,

2-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

3-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

4-(((9-(9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl yl)pentanoát,

5-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-35-(1,2-dithiolan-32-methoxy-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl dithiolan-3-yl)pentanoát,

3-methoxy-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl dithiolan-3-yl)pentanoát,

5-(1,25-(1,22-methyl-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan3-yl)pentanoát,

- 6 CZ 2023 - 259 A3

2-fluoro-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(l,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methoxy-5-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2dithiolan-3-yl)pentanoát,

2-methyl-5-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(l,2-dithiolan3-yl)pentanoát (£)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-l-yl 5-(1,2dithiolan-3-yl)pentanoát, (Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-l-yl 5-(1,2dithiolan-3-yl)pentanoát, (E/Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-l-yl 5-(1,2dithiolan-3-yl)pentanoát.

Mimořádně výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou deriváty cytokininů substituovaných kyselinou thioktovou obecného vzorce I vybrané ze skupiny zahrnující: 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (R)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (S)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (RS)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (R)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (S)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (RS)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£/Z)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (R)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£/Z)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (S)-5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (£/Z)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (RS)-5-(l,2-dithiolan-3yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((R)-1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((S)-l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((RS)-l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát

Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin vzorce I se tvoří protonací jednoho z atomů dusíku anorganickou nebo organickou kyselinou. Příklady solí s anorganickými kyselinami zahrnují hydrochloridy, hydrobromidy, hydrojodidy, sírany, dusičnany, fosforečnany, hydrogenfosforečnany, dihydrogenfosforečnany, uhličitany, hydrogenuhličitany, chloristany. Příklady solí s organickými kyselinami zahrnují soli s lineárními nebo rozvětvenými kyselinami s 2 až 20 uhlíky, jako je laktát, oxalát, fůmarát, tartrát, malát, maleát, citrát, sukcinát, glykolát, nikotinát, benzoát, salicylát, askorbát, pamoát; sulfonát, methansulfonát, ethansulfonát, 2hydroxyethansulfonát, benzensulfonát, p-toluensulfonát, 2-naftalensulfonát, 3-fenylsulfonát a kafrsulfonát, aspartát nebo glutamát

Vynález zahrnuje různé izomery a jejich směsi. Příklady izomerie vyskytující se ve sloučeninách podle vynálezu jsou uvedeny zde níže:

-7 CZ 2023 - 259 A3

Hvězdičkou označená chirální centra:

O

para-isomer

-8CZ 2023 - 259 A3

Deriváty obecného vzorce I mají širokou škálu biologických aktivit, mezi něž patří antioxidační, antisenescenční a antiaging aktivity, dále schopnost chránit buňky proti ferroptóze, kuproptóze a expozici těžkým kovům, což jsou aktivity zejména použitelné ve farmaceutických a kosmetických aplikacích.

Předmětem tohoto vynálezu jsou deriváty vzorce I pro ochranu savčích, zejména lidských buněk, tkání a orgánů před oxidačním stresem, ferroptózou, kuproptózou a toxickým působením nefyziologických koncentrací těžkých kovů a pro léčbu onemocnění, kde tyto jevy přispívají ke škodlivým změnám vedoucím ke stárnutí nebo onemocnění. Oxidační stres, který deriváty podle vzorce I snižují, může být vyvolán fyzikálními faktory (jako je ultrafialové záření), chemickými faktory (jako otrava paraquatem nebo těžkými kovy) nebo během biologických procesů, a to jak fyziologických (stárnutí), tak patologických (zánět, reperfuze po hypoxii, suboptimální funkce mitochondrií, změněná redoxní signalizace, narušená homeostáza železa a mědi).

Vynález je založen na zjištění, že sloučeniny vzorce I snižují oxidační stresu v lidských buňkách vyvolaný onemocněním nebo expozicí exogenním stresorům, chrání buňky proti induktorům kuproptózy, a chrání lidské buňky před expozicí těžkým kovům. Tyto účinky jsou pozorovány při koncentracích, při kterých jsou jiné N6-substituované puriny derivátů nesubstituovaných thioktovou kyselinou neaktivní nebo mají mnohem nižší aktivitu.

Tyto aktivity, buď odděleně nebo kombinované, jsou užitečné při prevenci a léčbě široké škály stavů postihujících různé tkáně a látky obecného vzorce I proto mohou být použita jako léčiva celého spektra chorob samostatně nebo v kombinaci s jinými látkami. Neuronální tkáň je zvláště citlivá na oxidační stres a sloučeniny vzorce I mají ochranné účinky proti destrukci tkáně po mrtvici (hypoxia-reperfuzní poranění) a poranění míchy a budou zmírňovat účinky oxidačního stresu u neurodegenerativních onemocnění, jako je Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba a Friedreichova ataxie. Mají také ochranný účinek při očních onemocněních postihujících jak sítnici, tak další části oka, včetně spojivky, rohovky a čočky, kde hraje roli oxidační stres. Patří mezi ně: Stargardtova choroba, makulární degenerace, glaukom, ischemicko-reperfuzní poškození sítnice, retinitis pigmentosa, ischemické retinopatie, jako je diabetická retinopatie, retinopatie nedonošených, věkem podmíněná makulární degenerace, keratopatie, katarakta, postižení sítnice při pantothenátové neurodegeneraci a aceruloplasminémii, fotokeratokonjunktivitida, fotokeratitida, pingueculae a pterygie.

Mezi další onemocnění, na kterých se podílí oxidační stres a kde pacienti budou mít prospěch z podávání sloučenin vzorce I, patří mitochondriální onemocnění, jako je Friedreichova ataxie, deficit koenzymu Q10 a onemocnění v důsledku mutací v genech kódujících proteiny komplexů elektronových transportních řetězců I-V a proteiny podílející se na jejich sestavování. Patří mezi ně Leberova hereditární optická neuropatie (LHON), mitochondriální encefalomyopatie, laktátová acidóza a epizody podobné mrtvici (MELAS), myoklonická epilepsie s roztřepenými červenými vlákny (MERRF) a Leighův syndrom. Mezi další cílová onemocnění patří ztráta sluchu a Meniérova choroba, idiopatická plicní fibróza, chronická obstrukční plicní nemoc, diabetes mellitus 2. typu, sepse, ateroskleróza a onemocnění koronárních tepen.

Ochrana před oxidačním stresem vyvolaným UV zářením je důležitá pro oko, kde mohou být ovlivněny různé struktury včetně rohovky, čočky a sítnice. Je také zvláště významný pro pokožku, kde UV záření přispívá jak ke kožním onemocněním, tak ke stárnutí vlivem světla prostřednictvím produkce radikálů. Oxidační stres je přítomen u různých otrav, včetně otrav způsobených parakvatem a těžkými kovy (železo, olovo, rtuť, kadmium) a arsenem - v těchto situacích jsou použitelné sloučeniny vzorce I. Jsou také užitečné při otravě mědí a Wilsonově chorobě, kde se měď hromadí v důsledku mutace transportních proteinů. Sloučeniny vzorce I chrání buňky před kuproptózou a jsou proto také užitečné při onemocněních, kde kuproptóza přispívá k patologii. Příklady zahrnují Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, revmatoidní artritidu, osteoartritidu, Crohnovu chorobu, ulcerózní kolitidu, celiakii a diabetickou kardiomyopatii.

- 9 CZ 2023 - 259 A3

Sloučeniny vzorce I jsou zvláště užitečné při stavech, kdy ferroptóza přispívá k patologickému fenotypu. Aktivace feroptotických drah se často vyskytuje současně s oxidačním stresem. Mezi taková onemocnění patří Friedreichova ataxie a hypoxia-reperfuzní poškození různých tkání (srdce po mrtvici, tkáň po infarktu, ledviny, sítnice, varlata, transplantované orgány). Schopnost předcházet ferroptóze je prospěšná u onemocnění, kde dochází k akumulaci železa - jako jsou primární a sekundární hemochromatózy, aceruloplasminémie a neurodegenerace spojená s pantothenátkinázou. V případě posledních dvou onemocnění lze poškození sítnice zmírnit aplikací sloučenin vzorce I. Podobně jsou prospěšné u dalších očních onemocnění s postižením ferroptózy, včetně keratopatie, katarakty, glaukomu, ischemicko-reperfuzního poškození sítnice, věkem podmíněná makulární degenerace, retinitis pigmentosa a diabetická retinopatie. Antiferroptotická aktivita je také prospěšná u jiných neurodegenerativních onemocnění kromě Friedreichovy ataxie, včetně Alzheimerovy, Parkinsonovy a Huntingtonovy choroby, neurotoxicity vyvolané arsenitem, poranění míchy, srdeční dysfunkce zprostředkované sepsí, diabetes mellitus, ateroskleróza a alkoholické poškození jater.

Deriváty obecného vzorce I aktivují signální dráhu Nrf2-elementu antioxidativní odpovědi, která kontroluje expresi genů, jejichž proteinové produkty jsou zapojeny v detoxifikaci a eliminaci reaktivních oxidantů a elektrofilních agens cestou konjugativních reakcí a cestou zvýšení buněčné antioxidativní kapacity.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž použity v kosmetice. Kosmetické použití těchto sloučenin a jejich solí zahrnuje inhibici, zpomalení, nebo redukci nepříznivých vlivů stárnutí a senescence buněk, zejména epidermálních buněk jakými jsou keratinocyty nebo fibroblasty, in vivo a in vitro; kosmetické použití zahrnuje rovněž vylepšení celkového vzhledu a vlastností pokožky savce, zejména člověka, včetně změn souvisejících s věkem a dalších změn, např. akné, erytém, zarudnutí kůže, rosacea.

Tento vynález rovněž poskytuje použití sloučenin obecného vzorce I pro inhibici senescence a stárnutí u zvířat a rostlin, přičemž toto použití zahrnuje aplikaci účinného množství derivátu obecného vzorce I in vivo nebo in vitro.

Tento vynález dále poskytuje použití derivátu obecného vzorce I při rejuvenizaci pokožkových buněk, stimulaci buněčné proliferace stárnoucích buněk a/nebo jejich diferenciace v organismu.

Zlepšení, inhibice a oddálení nepříznivých účinků stárnutí živočišných buněk znamená, že vývoj morfologických změn, které se normálně vyskytují ve spojitosti se stárnutím v normálních savčích buňkách in vitro nebo in vivo, je zpomalen nebo obrácen. Nepříznivé účinky stárnutí rovněž zahrnují se stářím spojené změny genové exprese a proteinové biosyntézy. Za zlepšující účinky jsou v tomto vynálezu považovány ty, které se projevují zvýšením a rychlostí buněčného růstu nebo celkovou proliferační kapacitou ošetřených buněk. Zlepšení, odstranění či oddálení nepříznivých vlivů stárnutí na buněčné úrovni je možné detekovat jako zpomalení nebo obrat morfologických a fenotypických změn souvisejících s věkem, které se běžně vyskytují při stárnutí buněk. Změny související s věkem in vivo zahrnují změny v savčích tkáních, jakými jsou vývoj, nárůst počtu a hloubky vrásek, čar, pokleslá kůže, odbarvení, tvorba stařeckých skvrn, kožovatění, nebo nažloutlý vzhled, spojené s kosmetických vzhledem kůže i změnami ve strukturální a funkční integritě kožních tkání.

Tento vynález dále poskytuje kosmetické a/nebo lékové formy obsahující jeden nebo více derivátů obecného vzorce I společně s kosmeticky a/nebo farmaceuticky akceptovatelným nosičem. Sloučenina vzorce I se může vyskytovat v přípravcích mimo jiné ve formě farmaceuticky přijatelných solí nebo solvátů.

- 10 CZ 2023 - 259 A3

LÉKOVÉ A KOSMETICKÉ PŘÍPRAVKY

Vhodné cesty pro systémovou aplikaci jsou orální, topická, inhalační, injekční (intravazální, intramuskulární, subkutanní), bukální, sublingualní a nasální. Lokální podání je možné ve formě očních a ušních kapek a mastí, ve formě vaginálních přípravků a rektálních čípků. Pro terapii onemocnění skalpu a kůže jsou výhodou lékovou formou roztoky, krémy a masti. V případě onemocnění oka může být vhodnou formou podání intravitreální injekce nebo medikovaný inzert. V případě onemocnění plic pak inhalační lékové formy. V případě onemocnění gastrointestinálního traktu je výhodné perorální nebo rektální podání.

Preferovaný způsob podání závisí na stavu pacienta, toxicitě sloučeniny a místě infekce, kromě ostatních ohledů známých klinikovi.

Terapeutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahují přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.

Lékové přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známým způsobem, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy.

Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Lékové přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.

Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely. Oleje, které zde mohou být zmíněny, jsou obzvláště kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 12-22 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, beta-karotenu nebo 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin nemá více než 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cx až C12 od Huls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejné.

- 11 CZ 2023 - 259 A3

Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.

Např. lékové přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.

Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, mannitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojiva jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo pokud požadováno desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.

Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.

Lékové přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivy nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin.

Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10 % nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.

Lékové přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy.

Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.

- 12 CZ 2023 - 259 A3

Masti jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují ne více než 70 %, ale přednostně 20 až 50 % vody nebo vodné fáze. Tukovou fázi tvoří zejména uhlovodíky, např. vazelína, parafínový olej nebo tvrdé parafiny, které přednostně obsahují vhodné hydroxysloučeniny jako mastné alkoholy a jejich estery, např. cetyl alkohol, nebo alkoholy lanolinu, s výhodou lanolin pro zlepšení kapacity pro vázání vody. Emulgátory jsou odpovídající lipofilní sloučeniny jako sorbitanové estery mastných kyselin (Spany), s výhodou sorbitan oleát nebo sorbitan isostearát. Aditiva k vodné fázi jsou např. smáčedla jako polyalkoholy, např. glycerol, propylen glykol, sorbitol a/nebo polyethylen glykol, nebo konzervační prostředky či příjemně vonící látky.

Mastné masti jsou nevodné a obsahují jako bázi hlavně uhlovodíky, např. parafin, vazelínu nebo parafínový olej, a dále přírodní nebo semisyntetické tuky, např. hydrogenované kokosové triglyceridy mastných kyselin nebo, s výhodou, hydrogenované oleje, např. hydrogenovaný ricínový olej nebo olej z podzemnice olejné, a dále částečné glycerolové estery mastných kyselin, např. glycerol mono- a/nebo distearát. Dále obsahují např. mastné alkoholy, emulgátory a/nebo aditiva zmíněná v souvislosti s mastmi, která zvyšují příjem vody.

Krémy jsou emulze oleje ve vodě, které obsahují více než 50 % vody. Používané olejové báze jsou zejména mastné alkoholy, např. lauryl, cetyl nebo staryl alkoholy, mastné kyseliny, například palmitová nebo stearová kyselina, kapalné a pevné vosky, například isopropyl myristát, lanolin nebo včelí vosk, a/nebo uhlovodíky, například vazelína (petrolátum) nebo parafínový olej. Emulgátory jsou povrchově aktivní sloučeniny s převážně hydrofilními vlastnostmi, jako jsou odpovídající neiontové emulgátory, např. estery mastných kyselin polyalkoholů nebo jejich ethylenoxy adukty, např. estery polyglycerických mastných kyselin nebo polyethylen sorbitanové estery (Tween), dále polyoxyethylenové etery mastných alkoholů nebo polyoxyethylenové estery mastných kyselin, nebo odpovídající iontové emulgátory, jako alkalické soli sulfátů mastných alkoholů, s výhodou laurylsulfát sodný, cetylsulfát sodný nebo stearylsulfát sodný, které jsou obvykle používány v přítomnosti mastných alkoholů, např. cetyl stearyl alkoholu nebo stearyl alkoholu. Aditiva k vodné fázi jsou mimo jiné činidla, která chrání krémy před vyschnutím, např. polyalkoholy jako glycerol, sorbitol, propylen glykol a polyethylen glykol, a dále konzervační činidla a příjemně vonící látky.

Pasty jsou krémy nebo masti obsahující práškové složky absorbující sekreci jako jsou oxidy kovů, např. oxidy titanu nebo oxid zinečnatý, a dále talek či silikáty hliníku, které mají za úkol vázat přítomnou vlhkost nebo sekreci.

Pěny jsou aplikovány z tlakových nádob a jsou to kapalné emulze oleje ve vodě v aerosolové formě, přičemž jako hnací plyny jsou používány halogenované uhlovodíky, jako polyhalogenované alkany, např. dichlorfluormethan a dichlortetrafluorethan, nebo přednostně nehalogenované plynné uhlovodíky, vzduch, N2O či oxid uhličitý. Používané olejové fáze jsou stejné jako pro masti a krémy a také jsou používána aditiva tam zmíněná.

Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování, jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylen glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylen glykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.

Pro oční aplikační formy jsou sloučeniny vzorce I formulovány do vhodného nosiče, který zajišťuje stabilitu, sterilitu a optimální oční absorpci. Oční kapky, masti, gely nebo suspenze jsou příklady těchto forem. Obvykle se aplikují přímo na povrch oka. Kromě toho nabízejí léčivé kontaktní čočky další inovativní způsob aplikace. Tyto kontaktní čočky jsou navrženy tak, aby pomalu uvolňovaly sloučeniny *vzorce I na povrch oka po delší dobu, což umožňuje kontinuální, kontrolované dodávání léčiva. Tohoto řízeného uvolňování je dosaženo začleněním sloučeniny do materiálu kontaktních čoček během výrobního procesu. Kontaktní čočka pak funguje jako rezervoár a při nošení čočky sloučeninu postupně uvolňuje.

- 13 CZ 2023 - 259 A3

Pro intraokulární aplikační formy mohou být sloučeniny vzorce I připraveny jako injekční roztoky nebo implantáty. Injekční roztoky mohou zahrnovat solubilizaci nebo suspendování sloučeniny ve vhodném sterilním injikovatelném nosiči. Příprava implantátu zahrnuje začlenění sloučeniny do biodegradovatelné matrice, která umožňuje pomalé a řízené uvolňování sloučeniny do nitroočních tkání.

Tento vynález dále poskytuje veterinární přípravky obsahující nejméně jednu aktivní složku společně s veterinárním nosičem. Veterinární nosiče jsou materiály pro aplikaci přípravku a mohou to být látky pevné, kapalné nebo plynné, které jsou inertní nebo přijatelné ve veterinární medicíně a jsou kompatibilní s aktivní složkou. Tyto veterinární přípravky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jakoukoli jinou požadovanou cestou.

Vynález se také vztahuje na postupy nebo metody pro zmírňování patologických procesů (oxidační stres, feroptóza, kuproptóza, narušení homeostázy železa a mědi, toxické působení solí těžkých kovů) a léčení nemocí zmíněných výše. Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě farmaceutických přípravků, přednostně v množství, které je efektivní proti zmíněným patologickým procesům a nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě lékového přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.

Příklady uskutečnění vynálezu

Vynález je popsán pomocí následujících příkladů, které ovšem nijak neomezují jeho rozsah.

Pokud není uvedeno jinak, veškerá procenta jsou uváděna jako hmotnostní. Výchozí látky je možné získat z komerčních zdrojů (Sigma, Aldrich, Fluka, atd.) nebo mohou být připraveny, jak je popsáno níže. Chromatografie na tenké vrstvě byla prováděna na hliníkových destičkách s oxidem křemičitým Silica 60 F254 (Merck), kdy jako mobilní fáze byla použita směs chloroform/methanol. Detekce skvrn byla provedena pomocí UV záření (254 a 365 nm), případně pomocí 6% (v/v) roztoku vanilinu v absolutním ethanolu obsahujícím 1 % (v/v) H2SO4. Chromatografické čištění meziproduktů a finálních produktů bylo prováděno na koloně s oxidem křemičitým Davisil 40-63 micron (Grace Davision). Elementární analýza byla stanovena na analyzátoru Flash EA 1112 (Thermo Scientific). Chromatografická čistota a molekulová hmostnost připravených látek byla stanovena pomocí kapalinového chromatografu Alliance 2695 Separation Module (Water) připojenému k DAD detektoru PDA 996 (Waters) a kvadrupól-time of flight tandemovému hmotnostnímu spektrometru Q-Tof micro (Waters). Látky byly rozpuštěny v DMSO a zředěny na koncentraci 10 μg/ml v počáteční mobilní fázi (90 % 15mM mravenčan amonný, pH = 4,0 (A) + 10 % methanol (B)). Vzorky (10 μl) byly aplikovány na kolonu s reverzní fází Symmetry C18 (150 mm x 2,1 mm x 3,5 μm, Waters) a separovány při průtoku 0,2 ml/min s následujícím binárním gradientem: 0 min, 10 % B; 0-24 min, lineární gradient na 90% B, 10 min, isokratická eluce 90% B. Na konci gradientu byla kolona znovu ekvilibrována na počáteční podmínky. Eluát byl zaváděn do DAD (rozsah skenování 210-400 nm, rozlišení 1,2 nm) a do iontové zdroje ESI (teplota zdroje 110 °C, kapilární napětí +3,0 kV, napětí na vstupní štěrbině +20 V, teplota desolvatace 250 °C). Jako desolvatační plyn (500 l/h) a zmlžovací plyn (50 l/h) byl použit dusík. Data byla získána v kladném ionizačním módu (ESI+) v rozsahu 50-1000 m/z. Ή a ¹³C NMR spektra by změřena na NMR spektrometru Jeol ECA-500 pracujícím při frekvenci 500 MHz (¹H) a 126 mHz (¹³C) nebo spektrometru Bruker Avance pracujícím při frekvenci 300 MHz (¹H) a 75 MHz (¹³C). Vzorky byly připraveny rozpuštěním látek v DMSO-d6 a chemické posuny byly kalibrovány na residuální pík rozpouštědla (DMSO, 2,49 ppm pro proton) a DMSO-d6 (39,5 ppm pro uhlík).

- 14 CZ 2023 - 259 A3

Syntéza

Pro přípravu cílových molekul byla využita vícestupňová syntéza. V prvním stupni byl připraven meziprodukt 6-chlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin reakcí 6-chlor-9H-purinu s 3,4dihydro-2H-pyranem v ethylacetátu za katalýzy kyseliny trifluoroctové (TFA) za laboratorní teploty. Tato reakce zajišťuje protekci polohy N9 proti nežádoucí substituci v esterifikačním kroku. V druhém stupni (Schéma 2) syntézy reaguje 6-chloro-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin s aminem, který vytvoří postranní řetězec derivátu aminu. Reakce probíhala v přítomnosti ethylacetátu a n-propanolu při teplotě 100 °C. (Szučová L., et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry, 17(5):1938-1947). Ve třetím stupni probíhá esterifikace chráněného intermediátu z 2. stupně kyselinou (R), (S) nebo (RS)-alfa thioktovou za přítomnosti N,N-dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) a katalytického množství 4-dimethylaminopyridinu (DMAP). Poslední stupeň spočívá v selektivní deprotekci tetrahydropyran-2-yl skupiny v poloze N9 purinu pomocí 4 M chlorovodíku v bezvodém dioxanu. Surové finální produkty byly přečištěny sloupcovou chromatografií na silikagelu. Identita a chromatografická čistota látek byla stanovena pomocí HPLC-MS, dále byla změřena Ή a ¹³C NMR spektra pro určení struktury nových derivátů.

Syntéza prekurzorů

Příklad 1: 6-chlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin

Reakční schéma

Do jednohrdlé baňky o objemu 1000 ml byl předložen ethylacetát (500 ml) a 6-chlor-9H-purin (50 g; 0,323 mol). Za stálého míchání byl přidán 3,4-dihydro-2H-pyran (40,7 g; 0, 484 mol) a TFA (50 ml; 0,65 mol). Reakční směs byla ponechána reagovat do dalšího dne za laboratorní teploty. Průběh reakce byl monitorován pomocí TLC (mobilní fáze: ethylacetátooluen 1:1). Poté byla provedena extrakce do ethylacetátu. Spojené organické fáze byly vytřepány solankou, vysušeny bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěny na RVO na odparek, který byl krystalizován z ethanolu (230 ml). 1. podíl krystalu byl izolován filtrací. Filtrát dále zahuštěn na A původního objemu a znovu ponechán krystalizovat při -18°C. Izolován druhý podíl produktu srovnatelné čistoty. Výtěžek: 57 %. Sumární vzorec: C10H11CIN4O, MH: 238,68; MS ESI⁺ [M+H]⁺ 238,08; Čistota HPLC-UV): 98 %.

Příklad 2: 4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yi)-9H-purin-6-yi)amino)methy^fenol (9-ΊΗΡ-ρΊ)

Reakční schéma

- 15 CZ 2023 - 259 A3

OH

6-chlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin (2,39 g; 0,01 mol) a 4-(aminomethyl)fenol monohydrát (1,41 g; 0,01 mol) byly předloženy do tlakové ampule a rozpuštěny v 50 ml npropanolu. Poté byl přidán triethylamin (4,2 ml, 0,03 mol). Reakční směs byla inertizována dusíkem a po uzavření umístěna na olejovou lázeň o teplotě 100°C. Při této teplotě byla reakční směs míchána (700 rpm) 5 hodin. Průběh reakce byl kontrolován pomocí TLC (mobilní fáze: ethylacetátůoluen 1:1). Reakční směs byla po ochlazení na laboratorní teplotu odpařena na rotační vakuové odparce (40°C; 10 mbar; 100-120 rpm). Odparek byl rozpuštěn ve vodě (50 ml) a ponechán na míchačce při laboratorní teplotě po dobu několika hodin. Vyloučený nažloutlý krystalický produkt byl izolován filtrací. Produkt byl přečištěn rekrystalizací z methanolu (1:6) při teplotě lázně 80°C. Methanol byl přidáván postupně do rozpuštění produktu (cca 30 min). Poté ochlazeno na laboratorní teplotu a ponecháno krystalizovat v lednici. Produkt byl izolován filtrací jako bílá pevná látka. Výtěžek: 67 %; sumární vzorec: C17H19N5O2; MH: 325,37 g mol¹; MS ESI⁺ [M+H]⁺ 326,19; Bod tání: 186,6 - 187,1 °C; HPLC-UV: 95 %+.

Příklad 3a: (Fj-2-methyl-4-((⁽)-(telrahyclro-2ll-pyran-2-yí)-9ll-purin-6-yí)aminc)bul-2-en-l-ol (9ΊΗΡ-tZ)

Reakční schéma

6-chloro-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin (3,6 g; 15 x 10³ mol) a (E)-4-amino-2-methylbut2-en-l-ol hemioxalát (2,625 g; 18 x 10³ mol) byly předloženy do tlakové ampule a rozpuštěny v 112,5 ml n-propanolu. Poté byl přidán trimethylamin (21 ml, 0,16 mol). Reakční směs byla inertizována dusíkem a po uzavření umístěna na olejovou lázeň o teplotě 100°C. Při této teplotě byla reakční směs míchána (700 rpm) 5 hodin. Průběh reakce byl kontrolován pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol 9:1). Reakční směs byla po ochlazení na laboratorní teplotu

- 16CZ 2023 - 259 A3 odpařena na rotační vakuové odparce (40°C; 1 mbar; 100-120 rpm). Nažloutlý olejovitý odparek byl po přídavku vody (150 ml) extrahován ethylacetátem (3x 150 ml a 1 x 50 ml). Spojené organické fáze byly vytřepány nasyceným roztokem chloridu sodného (50 ml). Spodní fáze byla oddělena a horní organická fáze byla vysušena síranem hořečnatým. Síran hořečnatý byl zfiltrován a filtrát byl zahuštěn na RVO. Odparek byl rozpuštěn v 15 ml DCM. Do roztoku bylo za stálého míchání přikapáváno 135 ml diethyletheru. Pro podpoření krystalizace byl roztok ochlazen suchým ledem na teplotu -20°C. Produkt byl dále ponechán přes noc v lednici. Následující den byla suspenze zfiltrována a promyta diethyletherem (3x10 ml). Pevný nažloutlý produkt byl ponechán sušit v exsikátoru nad molekulovým sítem 4 A za laboratorní teploty. Výtěžek: 83 %; sumární vzorec: C15H21N5O2; MH: 303,37 g mol¹; MS ESI⁺ [35C1-M+H]⁺ 304,2; Bod tání: 111,8 - 112,6 °C; HPLC-UV: 97 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.58 (tt, 2H, Ja = 12.1 Hz, Jb = 4.0 Hz), 1.67 (s, 3H), 1.98-1.91 (m, 2H), 2.30-2.23 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3.78 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.113.99 (m, 3H),4.75(t, J = 5.7Hz, 1H), 5.52 (t,J = 6.0Hz, 1H), 5.63 (dd,J= 11.0, 1.8 Hz, 1H), 7.91 (bs, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.34 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 13.56, 22.80, 25.69, 31.38, 37.84, 66.20, 68.19, 80.97, 119.56, 121.25, 137.50, 139.00, 152.76, 155.03.

Příklad 3b: (2)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-yt)amino)but-2-en-l-ol (9ΊΗΡ-cisZ).

Připraven stejným postupem jako 9-THP-transZ (příklad 3a) z 6-chloro-9-(tetrahydro-2H-pyran2-yl)-9H-purinu a (Z)-4-amino-2-methylbut-2-en-1-ol hemioxalátu. Výtěžek: 68 %; sumární vzorec:

C15H21N5O2; MH: 303,37 g mol¹; MS ESI⁺[M+H]⁺304,2; Bod tání: 112,3-113,1 °C; HPLC-UV: 98 %+

Příklad 4: 2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-yí)aminG)butan-l-ol (9-ΊΗΡDHZ)

Reakční schéma

6-chlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin (0,36 g; 1,5 x 10³ mol) a 4-amino-2-methylbutanl-ol hemioxalát (0,266 g; 1,79 x 10³ mol) byly předloženy do tlakové ampule a rozpuštěny v 5 ml n-propanolu. Poté byl přidán triethylamin (1,045 ml, 7,5 x 10³ mol). Reakční směs byla inertizována dusíkem a po uzavření umístěna na olejovou lázeň o teplotě 100°C. Při této teplotě byla reakční směs míchána (700 rpm) 5 hodin. Průběh reakce byl monitorován pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol:25% roztok amoniaku 9:1:0,05). Reakční směs byla ochlazena na laboratorní teplotu. Po oddestilování triethylaminu a n-propanolu na RVO (40 °C, 1 mbar, 100120 rpm) byla provedena extrakce. Odparek byl zpracován s ethylacetátem (150 ml) a vodou (150 ml). Po extrakci byla oddělena ethylacetátová od vodné frakce. Vodná frakce byla dále 2 x extrahována ethylacetátem (150 ml a 50 ml). Spojené ethylacetátové frakce byly vytřepány solankou, vysušeny síranem hořečnatým a zahuštěny na odparce. Výtěžek: 95 %. Sumární vzorec:

- 17CZ 2023 - 259 A3

C15H23N5O2; MS ESI⁺ [M+H]⁺ 306,3; MH: 305,37 g mol¹; TLC mobilní fáze: chloroform:methanol:25% roztok amoniaku (9:1:0,05); HPLC-UV: 98 %.

Syntéza finálních molekul

Příklad 5a: 4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yi)-9H-purin-6-yt)amino)methy^fenyl-5-((R)-l, 2dithiolan-3-yt)pentanoát (R-TA-pT-ΊΗΡ) - sloučenina 15

Reakční schéma

4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenol (0,325 g; 10³ mol) byl rozpuštěn v DCM (dichlormethanu). Poté byly postupně přidány další suroviny: R-TA (0,206 g; 1O^-3 mol) (R-TA je kyselina thioktová), DCC (0,206 g; 10^-3 mol) (DCC = dicyklohexylkarbodiimid) a DMAP (0,0122 g; 10^-4 mol) (DMAP = dimethylaminopyridin) a aparatura byla inertizována N2. Reakční směs byla míchána při pokojové teplotě 20 hodin. Průběh reakce byl monitorován TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol 19:1). Poté byla zfiltrována a promyta DCM. Filtrát byl zahuštěn na RVO (rotační vakuové odparce). Odparek byl rozpuštěn v ethylacetátu (20 ml)a roztok byl třepán s 2% NaHCO; (3x10 ml), vodou (15 ml) a 1% kyselinou citrónovou (3x10 ml). Na závěr byl proveden výtřep solankou (2x15 ml) a vysušení bezvodým síranem hořečnatým. Po odfiltrování síranu hořečnatého zfiltrován a promyt ethylacetátem. Filtrát byl zahuštěn na RVO a odparek byl přečištěn krystalizací z metanolu (5 ml). Výtěžek: 51 %. Sumární vzorec: C25H31N5O3S2; MH: 513,69 g mol’¹; MS ESL [M+H]⁺514,22; HPLC-UV: 97 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.48-1.40 (m, 2H), 1.73-1.54 (m, 8H), 1.97-1.84 (m, 3H), 2.36-2.23 (m, 1H), 2.41 (td, J= 12.5, 6.2 Hz, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 3.13-3.08 (m, 1H), 3.21-3.16 (m, 1H), 3.69-3.60 (m, 2H), 3.99 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.68 (s, 2H), 5.62 (dd, J = 11.0, 1.8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.21 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.41 (bs, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 23.04, 24.63, 28.51, 30.31, 33.61, 34.82, 38.47, 56.63, 67.86, 81.72, 121.69, 128.87, 139.73, 148.85, 149.59, 153.13, 172.49.

-18 CZ 2023 - 259 A3

Příklad 5b: 4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-yt)amino)methy^fenyl-5-((S)-l,2dithiolan-3-yt)pentanoát (S-ΊΑ-ρΤ-ΊΗΡ) - sloučenina 16

Připraven stejným postupem jako odpovídající R-izomer. Výtěžek: 51 %. Sumární vzorec: C25H31N5O3S2; Molární hmotnost: 513,69 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 514,22; HPLC-UV: 99+ %; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.43 (q, J = 7.8 Hz, 2H), 1.62 (m, 8H), 1.89 (m, 3H), 2.18-2.35 (1H), 2.39 (td, J = 12.5, 6.3 Hz, 1H), 2.54 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.09 (m, 1H), 3.17 (m, 1H), 3.63 (m, 2H), 3.98 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H), 5.61 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 8.20 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.41 (bs, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSOd6) δ 23.10, 24.55, 24.99, 28.56, 30.40, 33.60, 34.29, 38.37, 56.45, 67.97, 81.37, 121.72, 128.37, 138.19, 139.65, 148.85, 149.66, 153.11, 154.92, 172.90.

Příklad 6a: 4-(((9H-pmrin-6-yi)amino)methy^fenyl (R)-5-(l,2-dithiolan-3-yt)pentanoát (R-ΊΑ-ρΊ) - sloučenina 7

Reakční schéma

RA-9-THP-pT (1 g, 1,9 mol) byl rozpuštěn v dioxanu (40 ml). Reakční směs byla míchána a chlazena studenou vodou (+ 5 °C). Po rozpuštění byl k reakční směsi přikapáván 4 M HC1 v dioxanu (8 ml) při teplotě do + 5 °C. Po 2 hodinách reakce byla provedena kontrolní TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol:25% roztok amoniaku; 9:1:0,05) a reakční směs byla ponechána 1 hodinu ustát za pokojové teplotě. Produkt byl izolován filtrací a promyt vychlazeným dioxanem (2 x 5 ml) a diethyletherem (2x5 ml). Nažloutlý pevný produkt byl sušen v exsikátoru nad P2O5. Produkt byl rozpuštěn ve vodě (40 ml) za stálého míchaní a chlazení ledem. Poté byl převeden na volnou bázi úpravou pH roztoku na 7-8 pomocí 25 % amoniaku (spotřeba 140 μΐ). Při daném pH byla suspenze ponechána míchat 30 minut. Pevný produkt byl izolován filtrací a promyt vodou (3 x 5 ml). Surový produkt byl dále přečištěn sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 17 %. Sumární vzorec: C20H23N5O2; MH: 429,56 g mol’¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 430,26; HPLC-UV: 99+ %; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.47-1.41 (m, 2H), 1.64 (m, 4H), 1.87 (td, J = 13.1, 6.5 Hz, 1H), 2.442.38 (m, 1H), 2.56 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.15 (m, 2H), 3.63 (m, 1H), 4.69 (s, 2H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.37 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 8.12 (bs, 1H), 8.18 (bs, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 24.63, 28.57, 33.79, 34.55, 38.65, 56.44, 122.07, 128.76, 149.59, 152.71, 172.05.

Příklad 6b: 4-(((9H-purin-6-yi)amino)methy^fenyl (S)-5-(l,2-dithiolan-3-yi)pentanoát (S-ΊΑ-ρΊ) - sloučenina 8

- 19CZ 2023 - 259 A3

Připraven stejným postupem jako odpovídající R-izomer. Výtěžek: 94 %. Sumární vzorec: C20H23N5O2; MH: 429,56 g mol’¹; MS ESI⁺ [M+H]⁺ 430,27; HPLC-UV: 97 %; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.44 (m, 2H), 1.64 (m, 4H), 1.88 (td, J= 13.1, 6.7 Hz, 1H), 2.41 (td, J= 12.5, 6.3 Hz, 1H), 2.57 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 3.62 (m, 1H), 4.75 (s, 2H), 7.06 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.40 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 8.20 (bs, 1H), 8.27 (bs, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSOd6) δ 24.62, 28.46,33.65, 34.62,38.51,56.66, 122.12, 128.75, 149.99, 172.33, 181.11.

Příklad 7a: (£)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yi)-9H-purin-6-yi)amino)but-2-en-l-yl-5((R)-l,2-dithiolan-3-yt)pentanoát (R-lA-tZ-EHF) - sloučenina 9

Reakční schéma

V baňce o objemu 50 ml byl rozpuštěn (E)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin6-yl)amino)but-2-en-1-ol (0,303g; 10³ mol) v 10 ml dichlormethanu (DCM). Postupně byly přidávány další navážené suroviny: R-TA (0,206 g; 10^-3 mol), DCC (0,206 g; 10^-3 mol) a DMAP (0,0122 g; 0,1 x 10³ mol). Reakční směs byla inertizována dusíkem a míchána do druhého dne. Průběh reakce byl monitorován pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol 19:1). Reakční směs byla zfiltrována, filtrační koláč byl promyt DCM (2x5 ml). Filtrát byl odpařen na RVO na nažloutlý, olejovitý odparek, který byl rozpuštěn ve 20 ml ethylacetáto. Následně byla provedena extrakce 2% hydrogenuhličitanem sodným (3x10 ml) a 15 ml H2O, 1 % kyselinou citrónovou (3 x 10 ml) a nasyceným roztokem chloridu sodného (2x15 ml). Organická fáze byla sušena síranem hořečnatým. Následující den byl síran hořečnatý zfiltrován a promyt ethylacetátem. Filtrát byl zahuštěn na RVO na nažloutlý, olejovitý produkt, který byl dále přečištěn sloupcovou chromatografií, kde stacionární fázi tvořil silikagel (40 g) a mobilní fáze stejného složení jako u TLC. Požadovaný čistý produkt byl jímán jako první. První 4 frakce byly spojeny, odpařeny na RVO. Produkt byl získán ve formě nažloutlého olej ovitého odparku. Výtěžek: 67 %. Sumární vzorec: C₂3H₃₃N5O₃S₂; MH: 491,68 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 492,34; HPLC-UV: 97,6 %; ΉNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.17-1.43 (m, 2H), 1.48-1.64 (m, 6H), 1.71 (s, 3H), 1.81-1.99 (m, 3H), 2.42-2.23 (m, 6H), 3.20-3.07 (m, 4H), 3.45 (m, 1H), 3.54 (s, 1H), 4.01-3.91 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 5.63-5.56 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.33 (s, 1H);

¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.47, 23.04, 24.77, 25.08, 28.61, 28.81, 30.58, 33.82, 34.40, 34.52, 38.61, 56.53, 68.20, 68.80, 81.34, 126.08, 132.18, 139.20, 152.92, 173.06

Příklad 7b: (E)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-yt)amino)but-2-en-l-yl-5((S)-l,2-dithiolan-3-yt)pentanoát (S-lA-tZ-EHF) ) - sloučenina 11

Připraven stejným postupem jako odpovídající R-izomer. Výtěžek: 73 %; Sumární vzorec: C₂₃H₃₃N₅O₃S₂; MH: 491,68 g mol’¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 492,34; HPLC-UV: 96 %+; 'H-NMR (500

-20CZ 2023 - 259 A3

MHz, DMSO-d6) δ 1.34 (m, 2H), 1.49 (m, 6H), 1.71 (s, 3H), 1.97-1.79 (m, 4H), 2.29 (m, 6H), 3.09 (m, 1H), 3.16 (m, 1H), 3.57 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 4.12 (bs, 2H), 4.43 (s, 2H), 5.635.58 (m, 3H), 7.99 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.34 (s, 1H);

¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.47, 23.03, 24.76, 25.07, 28.69, 30.57, 33.82, 34.52, 38.61, 56.53, 68.20, 68.69, 81.41, 126.09, 132.24, 139.27, 145.41, 152.90, 172.85.

Příklad 8a: (E^-^H-purin-e-y^amino^-methylbut^-en-l-yl R)-5-(l,2-dithiolan-3yt)pentanoát (R-ΊΑ-ίΖ) ) - sloučenina 1

Reakční schéma

R-ΤΑ-ΐΖ-ΤΗΡ (Příklad 7a, 0,524 g; 10³ mol) byl rozpuštěn v dioxanu (26 ml) za stálého míchání a chlazení studenou vodou. Do reakční směsi byla následně přikapávána 4M kyselina chlorovodíková v dioxanu (5,24 ml). Po 2 hodinách byla provedena kontrolní TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol:25% roztok amoniaku 9:1:0,05). Reakční směs byla ponechána 1 hod. stát při pokojové teplot a, poté zahuštěna na RVO. Odparek byl zvážen a rozpuštěn v acetonu a ponechán krystalizovat do dalšího dne. Následně byla krystalická suspenze zfiltrována a promyta acetonem. Produkt byl rozpuštěn v 5 ml methanolu za stálého míchání a zahříván (80°C) pod zpětným chladičem. Poté byly přidávaný další podíly methanolu do rozpuštění produktu (cca 30 min). Poté ponecháno krystalizovat v lednici. Produkt byl odfiltrován a promyt vychlazeným methanolem (5 ml). Filtrát byl zahuštěn na RVO. Surový produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií. Výtěžek: 13 %. Sumární vzorec: C18H25N5O2S2; MH: 407,56 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 408,32; HPLC-MS (ESI+): 97 %; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.35 (m, 4H), 1.53 (m, 2H), 1.64 (m, 3H), 1.71 (s, 3H), 1.89 (s, 1H), 2.31 (q, J = 7.4 Hz, 3H), 2.39 (td, J = 12.5, 6.2 Hz, 1H), 3.20-3.07 (m, 1H), 3.63-3.54 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 5.60 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.19 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.56, 24.74, 28.62, 33.79, 34.53, 38.62, 56.32, 68.31, 123.08, 134.75, 147.40, 151.44, 172.82, 173.03.

Příklad 8b: (R)-4-((9H-pum-6-yt)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (S)-5-(l,2-dithiolan-3yt)pentanoát (S-TA-tZ) ) - sloučenina 3

Připraven stejným postupem jako odpovídající R-izomer. Výtěžek: 24 %. Sumární vzorec: C18H25N5O2S2; MH: 407,56 g mol’¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 408,32; HPLC-UV: 97 %; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.37 (m, 2H), 1.54 (m, 6H), 1.71 (s, 3H), 1.75 (s, 2H), 1.86 (m, 3H), 2.37 (m, 4H), 3.20-3.12 (m, 2H), 3.62 (s, 1H), 4.26 (m, 3H), 4.42 (s, 1H), 4.48 (s, 2H), 5.62 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 8.65-8.54 (m, 3H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.36, 24.23, 28.63, 33.63, 34.47, 38.51, 57.16, 68.16, 134.60, 147.53, 172.86.

-21 CZ 2023 - 259 A3

Příklad 9: (2)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yt)-9H-purin-6-yí)aminG)but-2-en-l-yl-5((R)-l,2-dithiolan-3-yt)pentanoát (R-lA-cisZ-FHF) ) - sloučenina 10

Připraven stejným postupem jako odpovídající (E) - izomer (viz Příklad 7a). Výtěžek: 84 %. Sumární vzorec: C₂3H₃₃N5O₃S₂; MH: 491,68 g mol¹; MS ESI+ [M+H]+ 492,40; HPLC-UV: 97 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.17-1.43 (m, 2H), 1.48-1.64 (m, 6H), 1.71 (s, 3H), 1.811.99 (m, 3H), 2.42-2.23 (m, 6H), 3.20-3.07 (m, 4H), 3.45 (m, 1H), 3.54 (s, 1H), 4.01-3.91 (m, 2H), 4.12 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 5.63-5.56 (m, 2H), 7.95 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.33 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.47, 23.04, 24.77, 25.08, 28.61, 28.81, 30.58, 33.82, 34.40, 34.52, 38.61, 56.53, 68.20, 68.80, 81.34, 126.08, 132.18, 139.20, 152.92, 173.06.

Příklad 10: (Z)-4-((9H-puňn-6-yi)amino)-2-methylbut-2-en-l-yl (R)-5-(l,2-dithiolan-3yt)pentanoát (R-FA-cis2) - sloučenina 2

Připraven stejným postupem jako odpovídající (E) - izomer (viz Příklad 8a). Výtěžek: 80 %. Sumární vzorec: CisH₂5N5O₂S₂; Molární hmotnost: 407,56 g mol^-1; MS ESI+ [M+H]⁺ 408,32; HPLC-MS (ESI+): 95 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.35 (m, 4H), 1.53 (m, 2H), 1.64 (m, 3H), 1.71 (s, 3H), 1.89 (s, 1H), 2.31 (q, J = 7.4 Hz, 3H), 2.39 (td, J = 12.5, 6.2 Hz, 1H), 3.203.07 (m, 1H), 3.63-3.54 (m, 1H), 4.12 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 5.60 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.19 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 14.56, 24.74, 28.62, 33.79, 34.53, 38.62, 56.32, 68.31, 123.08, 134.75, 147.40, 151.44, 172.82, 173.03

Příklad 11a: 4-((9H-purin-6-yt)amino)-2-methylbulyl 5-((R)-l,2-dithiolan-3-yí)pentanoát (R-FADHZ-FHF) - sloučenina 13

Reakční schéma

V baňce o objemu 50 ml byl rozpuštěn 6-chlor-9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin (0,332 g; 10’³ mol) v 11 ml DCM. Postupně byly přidávány další suroviny: kyselina thioktová (0,224 g; 10' ³ mol), DCC (0,224 g; 10³ mol) a DMAP (0,0133 g; 0,1 x 10³ mol). Reakční směs byla inertizována dusíkem a míchána do druhého dne. Průběh reakce byl kontrolován pomocí TLC (mobilní fáze: chloroform:methanol 19:1). Reakční směs byla zfiltrována a promyta DCM (2x1 ml). Vyloučený vedlejší produkt DCU byl odfiltrován. Filtrát byl odpařen na RVO na nažloutlý, olejovitý odparek, který byl rozpuštěn ve 20 ml ethylacetátu. Následně byla provedena extrakce 2% hydrogenuhličitanem sodným (3x1 ml) a vodou (3x5 ml). Dále byla provedena extrakce 1% kyselina citrónovou (3x1 ml) a nasyceným roztokem NaCl (2x1 ml). Organická fáze byla sušena bezv. síranem hořečnatým a zahuštěna na RVO na nažloutlý, olejovitý produkt. Surový produkt byl přečištěn sloupcovou chromatografií na silikagelu. Výtěžek: 58 %. Sumární vzorec:

-22 CZ 2023 - 259 A3

C23H33N5O3S2; Molární hmotnost: 493,68 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 494,29; TLC mobilní fáze: chloroform:methanol (19:1); HPLC-UV: 95 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.17-1.28 (m, 2H), 1.30-1.45 (m, 3H), 1.48-1.59 (m, 6H), 1.59-1.78 (m, 4H), 1.81-1.99 (m, 3H), 2.42-2.23 (m, 6H), 3.13 (m, 3H), 3.58 (m, 1H), 3.67 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 4.00 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 8.24-8.22 (m, 1H), 8.33 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 17.19, 23.04, 24.77, 24.91, 25.07, 25.19, 25.96, 28.64, 28.81, 30.42, 30.57, 30.89, 32.25, 33.90, 34.53, 34.65, 38.60, 52.80, 56.55, 67.68, 68.55, 139.03, 173.75.

Příklad 11b: 4-((9H-purin-6-yi)amino)-2-methylbulyl 5-((S)-l,2-dithiolan-3-yi)pentanoát (S-ΊΑDHZ-FHF) - sloučenina 14

Připraven stejným postupem jako odpovídající (R) - izomer (viz Příklad 11a). Výtěžek: 63 %. Sumární vzorec: C23H33N5O3S2; Molární hmotnost: 493,68 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 494,29; HPLC-UV: 97 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.23 (s, 2H), 1.65 (s, 4H), 1.87-1.69 (m, 3H), 1.94 (m, 2H), 2.28 (m, 3H), 2.40-2.34 (m, 1H), 3.12-3.06 (m, 1H), 3.19-3.14 (m, 1H), 3.57 (m, 2H), 3.67 (m, 1H), 3.90 (m, 2H), 4.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.62 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.33 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 17.19, 23.04, 24.77, 25.07, 28.64, 30.42, 30.57, 33.08, 33.90, 34.53, 37.97, 38.36, 38.60, 56.98, 67.84, 68.64, 81.32, 138.81, 173.46.

Příklad 12a: 4-((9H-puňn-6-yi)aminG)-2-methylbuíyl 5-((R)-l,2-dithiolan-3-yí)pentanoát hydrochlorid (R-FA-DHZ. HC) - sloučenina 5

Reakční schéma

R-TA-DHZ-THP (Příklad 11a; 0,245 g; 0,4 x 10-3 mol) byla rozpuštěna v dioxanu (9,8 ml) za stálého míchání a chlazení studenou vodou. Do reakční směsi byla následně dávkován 4 M HC1 v dioxanu (2,2 ml). Po 2 hodinách byla provedena kontrolní TLC; mobilní fáze: chloroform:methanol:25% roztok amoniaku (9:1:0,05). Reakční směs byla ponechána 1 hod míchat za laboratorní teploty a poté byla zahuštěna na RVO na pevný produkt, který byl zpracován s diethyletherem a poté izolován filtrací, promytím diethyletherem (2x3 ml) a vysušením do konstantní hmotnosti. Výtěžek: 56 %. Sumární vzorec: C18H27N5O2S2 x HC1; Molární hmotnost: 445,62 g mol¹ (hydrochlorid); MS ESI+ [M+H]⁺ 410,28; Bod tání: 151,5 - 153,9 °C; HPLC-UV: 95 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.35 (m, 2H), 1.51 (m, 7H), 1.63 (m, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.89 (m, 3H), 2.31-2.28 (m, 3H), 2.39 (m, 1H), 3.13 (m, 2H), 3.37-3.27 (m, 1H), 3.66 (m, 4H), 3.93 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 8.58 (s, 1H), 8.64 (s, 1H); ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 17.01, 24.76,28.64, 30.10, 32.55,33.80, 34.32, 35.11, 38.68, 56.36, 67.04, 68.67,143.50,147.25,173.66.

-23 CZ 2023 - 259 A3

Příklad 12b: 4-((9H-purin-6-yt)aminG)-2-methylbuiyl 5-((8)-1,2-dithiolan-3-yi)pentanoát hydrochlorid (S-1A-DHZ. HC) - sloučenina 6

Připraven stejným postupem jako odpovídající (R) - izomer (viz Příklad 12a). Výtěžek: 86 %. Sumární vzorec: C18H27N5O2S2 x HC1. Molární hmotnost: 445,62 g mol¹; MS ESI+ [M+H]⁺ 410,28; Bod tání: 145,1 - 147,6 °C; HPLC-MS (ESI+): 95 %+; 'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.34 (m, 2H), 1.49 (m, 6H), 1.69 (m, 2H), 1.87 (m, 3H), 2.28 (m, 2H), 2.38 (m, 1H), 3.11 (m, 2H), 3.27 (m, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.61 (s, 1H); část spektra v oblasti δ 3,3 - 4,2 ppm nelze vyhodnotit. ¹³C-NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ 16.98, 24.75, 28.62, 30.34, 32.27, 33.88, 34.49, 38.59, 56.58, 66.85, 68.65, 143.68, 146.60, 147.49, 173.29.

Tabulka 1. Příklady připravených purinových derivátů.

SUBSTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZA [%C; %H; %N]	MS ANALÝZA [M+H]+
Látka	N6
1	(£')-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yl)-R-TA	53,1; 6,2; 17,2	408
2	(Z)-{4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -yl)-R-TA	53,1; 6,2; 17,2	408
3	(EH4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yli-S-TA	53,1; 6,2; 17,2	408
4	(Z)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-l-yl)-S-TA	53,1; 6,2; 17,2	408
5	(4-hydroxy-3-methylbut-1 -yl)-R-TA	52,8; 6,7; 17,1	410
6	(4-hydroxy-3-methylbut-1 -yl)-S-TA	52,8; 6,7; 17,1	410
7	4-hyd roxy benzyl-R- T A	55,9; 5,4; 16,3	430
8	4-hyd roxy benzyl- S-TA	55,9; 5,4; 16,3	430

R-TA = kyselina R-(+)-alfa-thioktová

S-TA = kyselina S-(-)-alfa-thioktová

Tabulka 2. Příklady připravených 9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl) purinových derivátů.

SUBTITUENTY NA PURINU	CHN ANALÝZA	MS ANALÝZA
Látka .V	[%C; %H; %N]	[M+H]+

9	(£)-(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -yl)-RTA	56,2; 6,8	14,2	492
10	(Z)-(4-hydiOxy-3-methylbut-2-en-1 -yl)-R-TA	56,2; 6,8	14,2	492
11	(E)-{4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1 -yl)-S-TA	56,2; 6,8	14,2	492
12	(ZM4-hydiOxy-3-methylbut-2-en-1 -yD-S-TA	56,2; 6,8	14,2	492
13	(4-hydroxy-3-m.ethylbut-1 -yl)-R-TA	56,0; 7,2	14,2	494
14	(4-hydroxy-3-m.ethylbut-1 -yl)-S-TA	56,0; 7,2	14,2	494
15	4-hyd roxy b enzyl-R- T A	58,5; 6,1	13,6	514
16	4-hyd roxy benzyl-S-TA	58,5; 6,1	13,6	514

R-TA = kyselina R-(+)-alfa-thioktová

S-TA = kyselina S-(-)-alfa-thioktová

Příklad 13: Ochrana buněk proti toxickému působení železa

-24 CZ 2023 - 259 A3

Schopnost připravených látek chránit lidské buňky proti toxickému působení železa aplikovaného ve formě citronanu amonno-železitého v koncentraci 10 mM byla hodnocena pomocí resazurinového testu po 3 denní expozici. Látky byly přidány 24 hodin před přidáním stresoru.

Lidské kožní fibroblasty byly kultivovány v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky bu byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytoprotekce byly buňky vysety do 384 jamkových desek ve 30 μl média, kde byla glukóza nahrazena za galaktózu (1500 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v DMSO. Jako kontrola bylo použito DMSO. Po 8 hodinách byl přidán 3-krát koncentrovaný stresor v kultivačním médiu. Každá látka byla testována alespoň v heptaplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresorů, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 3 hodinové inkubaci.

Výsledky experimentu ukazuje *Tabulka 3, ze které je patrný protektivní účinek látek dle tohoto vynálezu. U prekurzorů bez navázané thioktové kyseliny nebyla pozorována cytoprotektivní aktivita.

Tabulka 3. Ochrana proti toxickému působení železa. Hodnoty viability jsou vyjádřeny relativně ke kontrole neovlivněné stresorem.

číslo látky	koncentrace [μΜ]	přítomnost stresoru	průměrná viabilita	střední chyba průměru
kontrola		-	1	0,03
kontrola		+	0,8	0,03
1	10	+	0,95	0,08
3	50	+	1	0,03
5	10	+	1,01	0,05
6	50	+	1,01	0,05
6	10	+	1,06	0,05
7	10	+	0,96	0,06
8	50	+	1,05	0,03
11	10	+	1,03	0,03
13	50	+	0,94	0,03
16	10	+	1,05	0,05
16	50	+	1,05	0,03
9-THP-DHZ	10	+	0,7	0,07
9-THP-DHZ	50	+	0,79	0,05
9-THP-pT	10	+	0,76	0,06
9-THP-pT	50	+	0,69	0,07
9-THP-tZ	10	+	0,82	0,05
9-THP-tZ	50	+	0,75	0,03
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	10	+	0,83	0,04
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	50	+	0,71	0,09
trans-zeatin	50	+	0,8	0,04
trans-zeatin	10	+	0,77	0,08

- 25 CZ 2023 - 259 A3

Příklad 14: Ochrana kožních buněk proti oxidativnímu stresu

Schopnost připravených látek chránit lidské buňky proti působení induktoru oxidativního stresu buthionin-L-sulfoximinu (300 a 900 μΜ) byla hodnocena pomocí resazurinového testu po 3 denní expozici. Látky byly přidány 24 hodin před přidáním stresoru.

Lidské kožní fibroblasty byly kultivovány v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/1), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek, ml penicilinu a 100 pg/ml streptomycinu. Buňky bu byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytoprotekce byly buňky vysety do 384 jamkových desek ve 30 μΐ média, kde byla glukóza nahrazena za galaktózu (1500 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v DMSO. Jako kontrola bylo použito DMSO. Po 8 hodinách byl přidán 3-krát koncentrovaný stresor v kultivačním médiu. Každá látka byla testována alespoň v heptaplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresorů, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 3 hodinové inkubaci.

Výsledky experimentu ukazuje Tabulka 4, ze které je patrný protektivní účinek látek dle tohoto vynálezu. U prekurzorů bez navázané thioktové kyseliny nebyla pozorována cytoprotektivní aktivita.

Tabulka 4. Ochrana proti oxidativnímu stresu vyvolanému působením buthionin-L-sulfoximinu. Hodnoty viability jsou vyjádřeny relativně ke kontrole neovlivněné stresorem.

číslo látky	koncentrace [μΜ]	přítomnost stresoru	průměrná viabilita - BSO 300 μΜ	střední chyba průměr - BSO 300 pM	průměrná viabilita BSO 900 pM	střední chyba průměr - BSO 900 pM
kontrola		-	1	0,02	1	0,03
kontrola		+	0,54	0,03	0,22	0,02
1	10	+	0,9	0,04	0,77	0,05

-26CZ 2023 - 259 A3

1	50	+	0,97	0,04	0,91	0,02
3	10	+	0,92	0,04	0,86	0,05
3	50	+	0,92	0,06	0,89	0,04
5	50	+	0,89	0,05	0,85	0,01
5	10	+	0,86	0,04	0,57	0,07
6	50	+	0,89	0,06	0,84	0,02
6	10	+	0,86	0,04	0,54	0,15
7	50	+	0,83	0,04	0,79	0,02
7	10	+	0,8	0,04	0,44	0,04
8	10	+	0,85	0,04	0,72	0,03
8	50	+	0,85	0,04	0,83	0,03
9	50	+	0,94	0,04	0,9	0,04
9	10	+	0,87	0,04	0,75	0,05
11	10	+	0,7	0,06	0,42	0,03
11	50	+	0,81	0,04	0,78	0,02
13	50	+	0,86	0,05	0,89	0,03
13	10	+	0,89	0,05	0,84	0,04
14	50	+	0,85	0,04	0,84	0,03
14	10	+	0,87	0,04	0,71	0,04
15	50	+	0,85	0,04	0,86	0,03
15	10	+	0,81	0,04	0,6	0,05
16	10	+	0,89	0,04	0,76	0,05
16	50	+	0,85	0,03	0,85	0,03
9-THP-DHZ	10	+	0,66	0,06	0,21	0,02
9-THP-DHZ	50	+	0,44	0,07	0,19	0,02
9-THP-pT	10	+	0,63	0,03	0,3	0,03
9-THP-pT	50	+	0,43	0,01	0,11	0,01
9-THP-tZ	10	+	0,63	0,05	0.27	0.02
9-THP-tZ	50	+	0,61	0,06	0,17	0,05
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	10	+	0,54	0,05	0,13	0,02
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	50	+	0,32	0,04	0,03	0,01
trans-zeatin	10	+	0,49	0,06	0,36	0,04
trans-zeatin	50	+	0,56	0,03	0,33	0,04

Příklad 15: Ochrana buněk sítnice proti působení induktoru feroptózy erastinu

Schopnost připravených látek chránit lidské buňky odvozené ze sítnice proti působení induktoru 5 feroptózy erastinu byla hodnocena pomocí resazurinového testu po 3 denní expozici. Látky byly přidány 24 hodin před přidáním stresoru.

Buňky ARPE-19 byly kultivovány v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol 10 glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytoprotekce byly buňky vysety do 96 jamkových desek v 80 pl média (5000 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v 10 pL testovacího média. Jako kontrola bylo použito DMSO. Po 6 hodinách byl přidán stresor v 10 pL testovacího média. Finální

- 27 CZ 2023 - 259 A3 koncentrace testované látky byla 50 μΜ. Každá látka byla testována alespoň v triplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresorů, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 1 hodinové inkubaci. Výsledky experimentu ukazuje Tabulka 5, ze které je patrný protektivní účinek látek dle tohoto vynálezu.

Tabulka 5. Ochrana proti působení induktoru feroptózy. Efekt je vyjádřen jako poměr signálu resazurinu, který odpovídá viabilitě, pro testovanou látku (50 μΜ) a kontrolu.

Číslo látky	koncentrace stresoru [μΜ]	poměr signálu resazurinu testovaná látka (50 μΜ) / kontrola
1	0,63	2,1
5	0,63	2,2
7	1,25	>10
9	2,5	>10
10	2,5	10
15	1,25	>10
trans-zeatin	0,63	1,0
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	0,63	0,8

Příklad 16: Ochrana buněk s mitochondriální dysfunkcí proti feroptóze

Schopnost připravených látek chránit lidské buňky s mitochondriální dysfunkcí proti feroptóze. Buněčná linie odvozená z pacientů s Friedreichovou ataxií byla kultivován v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek,ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky bu byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytoprotekce byly buňky vysety do 96 jamkových desek ve 80 μl média, kde byla glukóza nahrazena za galaktózu (5000 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v 10 μL testovacího média. Jako kontrola bylo použito DMSO. Po 6 hodinách byl přidán stresor erastin v 10 μL testovacího média. Finální koncentrace testované látky byla 50 μΜ. Každá látka byla testována alespoň v triplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresoru, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 1 hodinové inkubaci.

Výsledky experimentu ukazuje Tabulka 6, ze které je patrný protektivní účinek látek dle tohoto vynálezu.

Tabulka 6. Ochrana proti působení erastinu, induktoru feroptózy. Efekt je vyjádřen jako poměr signálu resazurinu, který odpovídá viabilitě, pro testovanou látku (50 μΜ) a kontrolu.

- 28 CZ 2023 - 259 A3

Číslo látky	koncentrace stresoru [μΜ]	poměr viability testovaná látka/kontrola
1	2.5	>10
5	5	>10
7	0,63	8,0
9	10	>10
10	2,5	6,6
15	5	>10
trans-zeatin	0,63	1,0
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	0,63	0,9

Příklad 17: Ochrana buněk s mitochondriální dysfunkcí proti oxidativnímu stresu

Byla zkoumána schopnost připravených látek chránit lidské buňky s mitochondriální dysfunkcí proti feroptóze a oxidativnímu stresu. Buněčná linie odvozená z pacientů s Friedreichovou ataxií byla kultivován v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky bu byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytoprotekce byly buňky vysety do 96 jamkových desek ve 80 μl média, kde byla glukóza nahrazena za galaktózu (5000 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v 10 μL testovacího média. Jako kontrola bylo použito DMSO. Po 6 hodinách byl přidán stresor erastin v 10 μL testovacího média. Finální koncentrace testované látky byla 50 μΜ. Každá látka byla testována alespoň v triplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresoru, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 1 hodinové inkubaci.

Výsledky experimentu ukazuje Tabulka 7, ze které je patrný protektivní účinek látek dle tohoto vynálezu.

Tabulka 7. Ochrana proti oxidativnímu stresuvyvolanému působením buthionin-L-sulfoximinu.

Efekt je vyjádřen jako poměr signálu resazurinu, který odpovídá viabilitě, pro testovanou látku (50 μΜ) a kontrolu.

Číslo látky	koncentrace stresoru [μΜ]	poměr viability testovaná látka/kontrola
1	100	4,9
5	100	4,1
7	100	5,3
9	100	3,9
10	100	4,9
15	100	5,3
trans-zeatin	100	1,1
N6-(4- hydroxybenzyl)adenin	100	0,9

Příklad 18: Hodnocení vlivu na viabilitu nenádorových lidských buněk

- 29 CZ 2023 - 259 A3

Bezpečnost připravených látek byla hodnocena na nenádorových lidských liniích.

Buňky GM4078, GM3816, BJ, HaCaT a ARPE-19 byly kultivovány v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek/ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky bu byly pasážovány 2x týdně. Pro hodnocení cytotoxicity byly buňky vysety do 384 jamkových desek ve 30 μΕ Po 24 hodinách byly přidány látky (6 koncentrací, maximu 100 μ^L) v 15 μL testovacího média. Každá látka a koncentrace byla testována alespoň v triplikátu. Po 72 hodinovém působení kombinace testovaných látek a stresoru, byl do jamek mikrotitrační desky přidán roztok resazurinu v testovacím médiu do konečné koncentrace 0,0125 mg/ml Fluorescence (λ excitace 544 nm, λ emise 590 nm) byla měřena po 1 hodinové inkubaci.

Výsledky experimentu ukazuje Tabulka 8, ze které je patrný příznivý profil toxicity ve srovnání se známými induktory Nrf2.

Tabulka 8. Hodnocení bezpečnosti připravených látek na nenádorových liniích

číslo látky	IC50 [μΜ] pro GM4078	IC50 [μΜ] pro GM3816	IC50 [μΜ] pro BJ	IC50 [μΜ] HaCaT	IC50 [μΜ] pro ARPE-19
1	>100	>100	>100	>100	>100
3	>100	>100	>100	>100	>100
5	>100	>100	>100	>100	>100
6	>100	>100	>100	>100	>100
7	>100	>100	>100	>100	>100
8	>100	>100	>100	>100	>100
9	>100	>100	>100	>100	>100
11	>100	>100	>100	>100	>100
13	>100	>100	>100	>100	>100
14	>100	>100	>100	>100	>100
15	>100	>100	>100	>100	>100
16	>100	>100	>100	>100	>100
N6isopentenyladenosine	0,6		1,1	5,3	7,2
N6-benzyladenosine	0.8		2,4		6,3
N6furfuryladenosine	1,3		2,0		4,1

Příklad 18: Hodnocení schopnosti připravených látek snižovat oxidativní stres.

Schopnost připravených látek snižovat oxidativní stres byla sledována v buňkách ARPE-19 obarvených fluorescenční próbou pro reaktivní kyslíkové formy dichlorofluorescein diacetátem pomocí průtokové cytometrie.

Buňky ARPE-19 byly kultivovány v inkubátoru (37 °C, obsah CO2 5,5 %) v plastových Petriho miskách v médiu DMEM s obsahem glukózy (4,5 g/l), 10 % fetálního bovinního séra, 2 mmol glutaminu, 100 jednotek,ml penicilinu a 100 μg/ml streptomycinu. Buňky byly pasážovány 2x týdně. Pro experiment byly buňky vysety do 12-jamkových desek ve 10 ml média (50000 buněk na jamku). Ochranné látky byly přidány po 24 hodinách v DMSO do finální koncentrace 50 μΜ. Po dalších 24 hodinách byl přidán erastin v DMSO (10 μΜ) na 4 hodiny.

- 30 CZ 2023 - 259 A3

Poté byly buňky promyty v PBS a byl přidán 10 uM dichlorofluorescein diacetát v PBS na 30 minut. Po promytí v PBS byly buňky ztrypsinizovány, promyty v PBS a resuspendovány v 300 pL PBS. Intenzita zelené fluorescence odpovídající koncentraci kyslíkových radikálů byla hodnocena v alespoň 5000 buňkách na cytometru. Hodnoty jsou vztaženy k hodnotám pro kontrolní buňky bez protektivní látky vždy na stejné 12-jamkové desce. Výsledky ukazuje tabulka 8.

Tabulka 8:

číslo látky	Relativní intenzita signálu reaktivních kyslíkových forem (kontrola odpovídá hodnotě 1)
1	0,77
3	0,66
8	0,80
9	0,62
11	0,80
16	0,76

V příkladech provedení jsou hodnoty v procentech uváděny v hmotnostních procentech, není-li uvedeno jinak.

Látky, které jsou uváděny v tabulkách, ale nespadají do rozsahu vynálezu, jsou srovnávací látky známé ze stavu techniky.

Příklady formulací:

Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g látky obecného vzorce I jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: 250 g Účinná látka + 21 g Lauroglycol

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v Lauroglykol® (propylenglykol laurát, Gattefossé SA, Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Měkké tobolky

5000 měkkých želatinových tobolek, z nichž každá obsahuje 0,05 g látky obecného vzorce I jako účinnou látku, se připraví následujícím způsobem:

Složení: 250 g účinné složky v 1 1 PEG 400, 1 litr Tween 80.

Postup přípravy: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylenglykol o mh mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem lne., Inc., USA. , dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Gelový přípravek

Složky jsou uvedeny v gramech na 100 g.

-31 CZ 2023 - 259 A3

látka	Obsah
Látka obecného vzorce I	1.0 g
Butylhydroxytoluenum	0.2 g
Butylparaben	0.2 g
Diethylenglykol monoethyl ether	10.0 g
Silica colloidalis anhydrica	5.0 g
Propylenglykol laurát	83.6 g

Gel této konzistence může být navíc modifikován přidáním oxidu křemičitého, colloidalis anhydrica.

Kožní mast

Složky masti jsou uvedeny v gramech na 200 g:

Látka	Obsah
Látka obecného vzorce I	2.0 g
Butylhydroxytoluenum	0.4 g
Butylparaben	0.4 g
Diethyleneglycol monoethyl ether	20.0 g
Glycerol dibehenate	44.0 g
Propylene glycol laurate	133.2 g

Doporučený postup:

Fáze A: 2 g látky obecného vzorce I rozpustí ve 20 g Transcutol P za stálého míchání při teplotě místnosti v oddělené skleněné nebo nerezové nádobě. Proces rozpouštění může být urychlen zahříváním roztoku na maximální teplotu 40 °C.

Fáze B: 0.4 g Nipanox BHT a 0,4 g Nipabutyl se rozpustí za stálého míchání ve 133,2 g Lauroglycolu FCC při teplotě přibližně 70 °C, v další samostatné skleněné nebo nerezové nádobě. Čirý olejovitý roztok se zahřívá na teplotu přibližně 80 °C a 44 g Compritol 888 ATO se taví v něm, za stálého míchání. Čirý olejovitý roztok se ochladí na cca 60 °C za stálého míchání a ochlazení a smísí se s fází A. Vzniklá bělavá mast je rozdělena na přibližně 15 g porce a plní se do předem připravených plastových nádob.

Přípravek pro lokální aplikaci na kůži

Prostředek pro místní aplikaci na kůži obsahuje následující složky podle hmotnostních %:

Aktivní složka:	Látka obecného vzorce I 0,1%
Olejová fáze:	Cetylalkohol 5,0% Glycerylmonostearát 15,0% Sorbitanmonooleát 0,3% Polysorbát 80 USP 0,3%
Vodná fáze:	Methylcelulózová 100 cps 1.0% Methylparaben 0,25%

- 32 CZ 2023 - 259 A3

Propylparaben 0,15%

Vyčištěná voda q.s. na 100%

Methylparaben a propylparaben se rozpustí v horké vodě a následně se v ní disperguje i 5 methylcelulóza. Směs se pak ochladí na 60 °C, dokud se methylcelulóza nerozpustí. Směs se potom zahřívá na 72 °C a přidá se do olejové fáze, která se zahřívá na teplotu 70 °C za stálého míchání. Látka obecného vzorce I se přidá při teplotě 35 °C a výsledná směs se míchá až do okamžiku rozptýlení.

Claims (7)

1. Estery substituovaných adeninů a kyseliny thioktové obecného vzorce I,

(I)

ve kterém R1 je vybráno z přičemž obsahuje-li substituent R1 benzenové jádro, může být toto benzenové jádro volitelně dále substituováno jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými z methyl, methoxy, fluor a chlor;

R2 je vybráno z H, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

2. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vybrané ze skupiny: 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methoxyfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-3-methoxyfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methylfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-fluorfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát

5-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methoxyfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 5-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-2-methylfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-4-methoxyfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-6-methoxyfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-6-methylfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-5-methylfenyl 5-(l,2-dithiolan-3-yl)pentanoát,

-34CZ 2023 - 259 A3

2-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)-5-fluorfenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (Z)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E/Z) )-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1 -yl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 3-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 2-methoxy-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

3-methoxy-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methyl-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-fluoro-4-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methoxy-5-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methyl-5-(((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát (E)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát (Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1 -yl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát, (E/Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2-dithiolan3-yl)pentanoát,

2-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

3-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

4-(((9-(9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methoxy-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan3-yl)pentanoát,

3-methoxy-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan3-yl)pentanoát,

2-methyl-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-fluoro-4-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát,

2-methoxy-5-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan3-yl)pentanoát,

2-methyl-5-(((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl 5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát (E)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2dithiolan-3 -yl)pentanoát, (Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2dithiolan-3 -yl)pentanoát, (E/Z)-2-methyl-4-((9-(tetrahydro-2H-pyran-2-yl)-9H-purin-6-yl)amino)but-2-en-1-yl 5-(1,2dithiolan-3 -yl)pentanoát.

3. Sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vybrané ze skupiny: 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (R)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (S)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-(((9H-purin-6-yl)amino)methyl)fenyl (RS)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (R)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (S)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E)-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (RS)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát,

- 35 CZ 2023 - 259 A3 (E/Z-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (R)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E/Z-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (S)-5-(1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, (E/Z-4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbut-2-en-1-yl (RS)-5-(1,2-dithiolan-3yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((R)- 1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((S)-1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát, 4-((9H-purin-6-yl)amino)-2-methylbutyl 5-((RS)-1,2-dithiolan-3-yl)pentanoát.

4. Sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro použití v medicíně.

5. Sloučeniny podle kteréhokliv z nároků 1 až 3 pro použití pro léčbu chorob vybraných ze skupiny zahrnující diabetes, diabetes mellitus 2. typu, zánětlivá onemocnění, aterosklerózu, radiační poškození, reperfuzní poranění, rakovinu, ischemicko-reperfuzní poškození různých orgánů (mrtvice, srdeční infarkt, posttransplantační poranění), hypoxii, Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, amyotrofickou laterální sklerózu (ALS), chronickou obstrukční plicní nemoc, idiopatickou plicní fibrózu, hypertenzi, syndrom systémové zánětlivé odpovědi, onemocnění koronárních tepen, ztrátu sluchu, Meniérovu chorobu, sepsi, Huntingtonovu chorobu, Friedreichovu ataxii (FA), Leberovu hereditární optickou neuropatii (LHON), mitochondriální encefalomyopatii, laktátovou acidózu, epizody podobné mrtvici (MELAS), myoklonickou epilepsii s roztřepenými červenými vlákny (MERRF), Leighův syndrom, aceruloplasminemii, Wilsonovu chorobu, kardiomyopatii a onemocnění sítnice a oka.

6. Sloučeniny podle kteréhokliv z nároků 1 až 3 pro použití pro léčbu chorob vybraných ze skupiny fotokeratokonjunktivitidy, Stargardtovy choroby, fotokeratitidy, onemocnění pingueculae a pterygie, katarakty, keratopatie, glaukomu, ischemických retinopatií, okluze retinální žíly, makulární degenerace, glaukomu, ischemicko-reperfuzního poškození sítnice, retinitis pigmentosy a diabetické retionpatie.

7. Kosmetické použití sloučenin podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro zpomalení projevů stárnutí a zlepšení vzhledu kůže.