NO312055B1 - Anvendelse av [R-(Z)]-<alfa>-(metoksyimino)-<alfa>-(1- azabicyklo[2.2.2]okt-3-yl)acetonitril til fremstilling av etmedikament for å redusere amyloid <beta>-A4-dannelse hosAlzheimer's sykdom - Google Patents
Anvendelse av [R-(Z)]-<alfa>-(metoksyimino)-<alfa>-(1- azabicyklo[2.2.2]okt-3-yl)acetonitril til fremstilling av etmedikament for å redusere amyloid <beta>-A4-dannelse hosAlzheimer's sykdom Download PDFInfo
- Publication number
- NO312055B1 NO312055B1 NO19971899A NO971899A NO312055B1 NO 312055 B1 NO312055 B1 NO 312055B1 NO 19971899 A NO19971899 A NO 19971899A NO 971899 A NO971899 A NO 971899A NO 312055 B1 NO312055 B1 NO 312055B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- alzheimer
- disease
- alfa
- compound
- app
- Prior art date
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title 1
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 claims abstract description 38
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N methyl cyanide Natural products CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000007450 amyloidogenic pathway Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims abstract description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 9
- -1 acetonitrile compound Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor Human genes 0.000 description 4
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- HGMITUYOCPPQLE-IBGZPJMESA-N [(3r)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl] 2-hydroxy-2,2-diphenylacetate Chemical compound O([C@@H]1C2CCN(CC2)C1)C(=O)C(O)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HGMITUYOCPPQLE-IBGZPJMESA-N 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- CANZROMYQDHYHR-UHFFFAOYSA-N oxotremorine M Chemical compound C[N+](C)(C)CC#CCN1CCCC1=O CANZROMYQDHYHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 2
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- ZSTLCHCDLIUXJE-ZGBAEQJLSA-N (2S,5S)-2-methylspiro[1,3-oxathiolane-5,3'-1-azabicyclo[2.2.2]octane] hydrate dihydrochloride Chemical compound O.Cl.Cl.C1S[C@@H](C)O[C@@]21C(CC1)CCN1C2.C1S[C@@H](C)O[C@@]21C(CC1)CCN1C2 ZSTLCHCDLIUXJE-ZGBAEQJLSA-N 0.000 description 1
- WLYYOFJEBGHKEC-VQYXCCSOSA-N (e)-but-2-enedioic acid;1-(4-pyrrolidin-1-ylbut-2-ynyl)pyrrolidin-2-one Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.OC(=O)\C=C\C(O)=O.OC(=O)\C=C\C(O)=O.O=C1CCCN1CC#CCN1CCCC1.O=C1CCCN1CC#CCN1CCCC1 WLYYOFJEBGHKEC-VQYXCCSOSA-N 0.000 description 1
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 240000006711 Pistacia vera Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- HOBWAPHTEJGALG-JKCMADFCSA-N [(1r,5s)-8-methyl-8-azoniabicyclo[3.2.1]octan-3-yl] 3-hydroxy-2-phenylpropanoate;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.C([C@H]1CC[C@@H](C2)[NH+]1C)C2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1.C([C@H]1CC[C@@H](C2)[NH+]1C)C2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 HOBWAPHTEJGALG-JKCMADFCSA-N 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical group CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960002028 atropine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 108091007737 beta-secretases Proteins 0.000 description 1
- NZUPCNDJBJXXRF-UHFFFAOYSA-O bethanechol Chemical compound C[N+](C)(C)CC(C)OC(N)=O NZUPCNDJBJXXRF-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229960000910 bethanechol Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N carbachol Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOC(N)=O AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004484 carbachol Drugs 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000010217 densitometric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000003370 dye binding method Methods 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 108091007739 gamma-secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000038383 gamma-secretases Human genes 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000000472 muscarinic agonist Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012142 reagent concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- JOLJIIDDOBNFHW-UHFFFAOYSA-N xanomeline Chemical compound CCCCCCOC1=NSN=C1C1=CCCN(C)C1 JOLJIIDDOBNFHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950006755 xanomeline Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Denne oppfinnelsen vedrører anvendelse av [R-(Z)]a-(metoksyimino)-a-(1-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitril eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav ved fremstilling av et medikament for økning av amyloidforløper protein-behandling i en ikke-amyloidogen vei hos pasienter som lider av, eller med risiko for å utvikle, Alzheimers sykdom.
Amyloidforløperprotein (APP) er et integralt membranglykoprotein som kan behandles på flere måter. Spaltning med p- og y-sekretaser fører til slutt til frigjøring av p-amyloidprotein (pA4) som avsettes i hjernen hos personer med Alzheimers sykdom (AD). Alternativ spaltning med a-sekretase fører til frigjøring av ikke-amyloidogene APP-fragmenter. De muskarine agonister karbachol, betanechol, AF-102B og xanomelin er blitt vist å øke produksjonen av ikke-amyloidogene APP-fragmenter ved aktivering av m1 og/eller m3 reseptorsubtyper (Nitsch et al 1992, Buxbaum et al 1992, 1994, Haring et al 1994, Growdon 1994).
EP-A-0392803 (Beecham Group p.l.c.) beskriver bestemte azabicykliske forbindelser som øker acetylcholinfunksjonen gjennom en virkning på muskarine reseptorer i sentralnervesystemet, innbefattende [R-(Z)]-a-(metoksytmino)-a-(1-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitril (forbindelse (I)) og farmasøytisk akseptable salter derav, og fremgangsmåter ved hvilke slike forbindelser kan fremstilles.
WO-93/17018 beskriver alternative fremgangsmåter ved hvilke forbindelse (I) kan fremstilles.
Det er nå oppdaget at forbindelse (I) øker amyloidforløperprotein-behandling langs en ikke-amyloidogen vei og er derfor potensielt anvendelig ved behandling av Alzheimers sykdom ved reduksjon av |3A4-produksjon.
Ifølge den foreliggende oppfinnelse tilveiebringes anvendelsen av forbindelse (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav ved fremstilling av et medikament for økning av amyloidforløperprotein-behandling langs en ikke-amyloidogen bane hos pasienter som lider av, eller med risiko for å utvikle, Alzheimers sykdom. Oppfinnelsen tilveiebringer videre anvendelse av forbindelse (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, i behandlingen eller profylakse av Alzheimers sykdom ved reduksjon av pA4-produksjon.
Forbindelse (I) kan danne syreaddisjonssalter med sterke syrer. Uttrykket farmasøytisk akseptabelt salt omfatter solvater og hydrater.
Forbindelse (I) forelegges fortrinnsvis i en farmasøytisk blanding som omfatter forbindelse (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer.
Blandingen kan foreligge i form av tabletter, kapsler, pulvere, granulater, pastiller, suppositorier, rekonstituerbare pulvere eller flytende preparater såsom orale eller sterile parenterale løsninger eller suspensjoner.
For å oppnå konsistens for administrering foretrekkes det at en blanding er i form av en enhetsdose.
Enhetsdosepresentasjonsformer for oral administrering kan være tabletter og kapsler og kan inneholde vanlige eksipienter såsom bindemidler, f.eks. sirup, akasia, gelatin, sorbitol, tragakant eller polyvinylpyrrolidon; fyllmidler, f.eks. laktose, sukker, maisstivelse, kalsiumfosfat, sorbitol eller glycin; tablettsmøremidler, f.eks. magnesiumstearat; spreningsmidler, f.eks. stivelse, polyvinylpyrrolidon, natriumstivelsesglykollat eller mikrokrystallinsk cellulose; eller farmasøytisk akseptable fuktemidler såsom natriumlaurylsulfat.
Faste orale blandinger kan fremstilles ved vanlige metoder for blanding, fylling, tablettering e.L Gjentatte blandeoperasjoner kan brukes for å fordele det aktive middel i disse blandingene ved å anvende store mengder fyllmidler. Slike operasjoner er selvfølgelig vanlige på området. Tablettene kan belegges i henhold til velkjente metoder innen farmasøytisk praksis, spesielt med et enterisk belegg.
Orale flytende preparater kan foreligge i form av f.eks. emulsjoner, sirups, eller eliksirer, eller kan presenteres som et tørt produkt for rekonstituering med vann eller annen egnet bærer før bruk. Slike flytende preparater kan inneholde vanlige additiver såsom oppslemmingsmidler, f.eks. sorbitol, sirup, metylcellulose, gelatin, hydroksyetylcellulose, karboksymetylcellulose, aluminiumstearatgel eller hydrogenerte spiselig fett; emulgeringsmidler, f.eks. lecitin, sorbitanmonooleat eller akasia; ikke-vandige bærere (som kan innbefatte spiselige oljer), f.eks. mandelolje, fraksjonert kokosolje, oljeestere såsom estere av glycerol, propylenglykol eller etylalkohol; preserveringsmidler, f.eks. metyl- eller propyl-p-hydroksybenzoat eller sorbinsyre; og om ønsket vanlige smaks- eller fargemidler.
For parenteral administrering fremstilles fluide enhetsdoseringsformer ved å anvende forbindelsen og en steril bærer, og avhengig av konsentrasjonen som brukes, kan den enten være oppslemmet eller løst i bæreren. Ved fremstilling av løsninger kan forbindelsen løses i vann for injeksjon og filtersteriliseres før fylling i et egnet glass eller ampulle og lukning. Med fordel kan hjelpemidler såsom et lokalanestetikum, et preserveringsmiddel og buffermilder oppløses i bæreren. For å øke stabiliteten kan blandingen fryses etter fylling i glasset og vannet fjernes under vakuum. Parenterale løsninger fremstilles på hovedsakelig samme måte, unntatt at forbindelsen oppslemmes i bæreren i stédet for å løses, og sterilisering kan ikke utføres ved filtrering. Forbindelsen kan steriliseres ved eksponering for etylenoksyd før oppslemming i den sterile bærer. Med fordel inngår et overflateaktivt middel eller fuktemiddel i blandingen for å gjøre jevn fordeling av forbindelsen lettere.
Blandingen kan inneholde fra 0,1 til 99 vekt-%, fortrinnsvis fra 10-60 vekt-%, av det aktive materialet, avhengig av administreringsmetoden.
Dosen av forbindelsen vil variere på vanlig måte etter styrken av forstyrrelsen, vekten til den lidende, og forbindelsens relative effektivitet. Imidlertid, kan som en generell retningslinje egnede enhetsdoser være 5 til 300 |ig, f.eks. 10 til 200 u.g og slike enhetsdoser kan administreres mer enn én gang daglig, f.eks. to eller tre ganger daglig, slik at den totale daglige dose ligger \ området ca. 30 til 600 u.g, og slik terapi kan godt strekke seg gjennom flere år.
Innenfor de ovenfor angitte doseringsområder vises ingen uakseptable toksikologiske effekter for forbindelsen (I).
De følgende farmakologiske data illustrerer oppfinnelsen.
FARMAKOLOGISKE DATA
Amyloidforloperprotein-behandlende CHO-celler
Virkningen av forsøksforbindelsen på APP-behandling i kinesiske hamstereggstokk-(CHO)-celler transfektert med muskarine menneskereseptorer ble undersøkt ved å bruke Western-blotting-teknikker. Blots ble kvantifisert ved å bruke et laserdensitometer for å scanne de immunoreaktive bånd.
Materialer
CHO-cellene som var stabilt transfektert med muskarine menneskereseptorer (Bonner 1988) ble levert fra N.I.M.H. (Md. USA). Vevskulturmedier og reagenser var fra Gibco BRL (Scotland). Generelle laboratoriereagenser var fra Sigma Chemical Co. (Dorset). [R-(Z)]-a-(metoksyimino)-a-(1-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitrilmonohydroklorid er beskrevet i EP-A-0392803 som oksalatsaltet.
De følgende primære antistoffer ble brukt: 22C11 monoklonalt muse-antistoff (Boehringer Mannheim, Sussex, UK) som gjenkjenner en aminoterminal epitop av APP (Weidemann et al., 1989); anti pA4 1-25 polyklonalt kaninantistoff fremkalt mot rotte pA4 1-25; Ab54 polyklonalt kaninantistoff frembragt mot en karboksyterminal epitop av APP (aminosyrer 751-770 av APP770).
Det sekundære antistoff var anti-kanin- eller anti-muse-IgG (Sigma Chem. Co., Dorset, UK) etterfulgt av kanin- eller muse-peroksydase-anti-peroksydase (PAP) (Sigma Chem. Co., Dorset, UK). Substratet som ble brukt var "enhanced chemiluminescence kit" (ECL) (RPN2106, Amersham, Bucks, UK) og immunoreaktive bånd ble påvist ved å bruke Hyperfilm-ECL (Amersham, Bucks,
UK).
Metoder
Cellekultur
CHO-celler transfektert med muskarine menneskereseptor-subtyper hm1, hm2, hm3 og hm4 ble dyrket til sammenløp på vevskulturskåler (10 cm diameter i a-minimumsessensielt medium (aMEM) med ribonukleosider og deoksyribonukleosider, 10% kalvefosterserum, penicillin 100 enheter/ml og streptomycin 100 (ag/ml.
Cellebehandling med forsøksforbindelse
Celler ble dyrket til sammenløpning som ovenfor, så ble serumholdig medium fjernet etterfulgt av vasking av cellene to ganger i 5 ml serumfritt medium. Cellene ble så behandlet med 5 ml serumfritt medium inneholdende den tilsvarende konsentrajson av forsøksforbindelsen og inkubert ved 37°C i 3 timer.
De kondisjonerte medier ble samlet, plassert på is og proteaseinhibitorer tilsatt (1 mM fenylmetylsulfonylfluorid (PMSF), 5 mM etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), 1 |ag/ml leupeptin). Mediet ble så sentrifugert i 15 min. ved 3000 G og 4°C for å fjerne celleavfall. Supernatanten ble fjernet og konsentrert 100 ganger ved å bruke Centricon 10 konsentratorer (Amicon, Gloucestershire, UK) ved sentrifugering ved 3000G i 90 min. ved 4°C. Retentatet ble samlet og lagret i alikvoter med -20°C inntil det var klart for elektroforese.
Cellene ble vasket to ganger med 5 ml serumfritt medium, skrapet og sentrifugert i 5 min. ved 3000G og 4°C for å oppnå en celleklump. Supernatanten ble fjernet og celleklumpen oppslemmet i 6x volum lysebuffer (0,1M Tris pH7,5 inneholdende 1% Triton X100, 5mM EDTA, 1mM PMSF, 1 ug/ml leupeptin). Lysatet ble holdt på is i 30 min. med periodisk virvelblanding etterfulgt av sentrifugering i 5 min. ved 10000G og 4°C for å fjerne celleavfall. Supernatanten ble samlet og lagret i alikvoter ved -20°C inntil det var klart for elektroforese.
Proteinmåling
Cellelysat og konsentrerte kulturmedieprøver ble målt for protein før gelelektroforese for å sikre lik proteinbelastning mellom behandlinger på gelen. Proteinene ble målt ved Bradford fargestoffbindingsmetoden (Bradford, 1976) ved bruk av Bio-Rad (Herts, UK) fargereagenskonsentrat. Målingen ble utført i en mikrotiterplate med absorbans avlest ved 590 nm ved bruk av en Titretek Multiskan Plus Mkll-plateavleser med programvare for analyse av resultatene. Da forskjellige reagenser, spesielt detergenser, interfererer med Bradfordsmålingen, ble kalibreringer utført i den tilsvarende prøvebærer.
SDS-PAGE
Proteiner ble fraksjonert ved bruk av et Novex mini-gelsystem (R & D Systems Europe Ltd, Oxon, UK). En lik mengde protein ble påsatt for å sammenligne mellom behandlinger på den samme gel. Prøver ble fortynnet i 2x reduserende prøvebuffer inneholdende 0,1M Tris pH 6,8, 10% natriumdodecyl-sulfat (SDS), 0,1% bromfenolblått i glycerol og 50% p-merkaptoetanol. Proteinene ble adskilt på en 6% Tris-glycin polyakrylamidgel inneholdende SDS (Laemmli, 1970), i 90 minutter ved 100 volt. Proteinstandarder ble også tatt inn med kjent molekylvekt (Sigma).
Western Blot Analyse
Etter SDS-PAGE ble gelene vasket i 20 minutter i overføringsbuffer inneholdende 2,5 mM Tris, 19,2 mM glycin, 20% metanol ved pH 8,3. Proteinene ble overført fra gelen på Immobilon P polyvinylidendifluorid (PVDF) membran (Millipore, Herts, UK) ved bruk av et Bio-rad halvtørt system i 2 timer ved 0,8 mA/cm<2>. Etter overføring ble proteinene synliggjort på membranen ved farging med en 10% løsning av Ponceau S (Sigma) i 2 minutter. Dette ble avfarget ved skylling med destillert vann.
Membranen ble blokkert i fosfatbufret saltvann (PBS) inneholdende 0,1% Tween 20 og 5% tørrmelkpulver i minst 1 time ved romtemperatur. Dette ble etterfulgt av to 30 sekunders vasking i PBS 0,1% Tween 20 (PBST), og deretter ble primært antistoff inkubert natten over ved 4°C. Alle antistoffer ble fremstilt i PBST inneholdende 2% bovinserum albumin (Sigma). Membranene ble vasket i PBST i 1 minutt, etterfulgt av to 5 minutters vasker. Sekundært antistoff, anti-mus eller anti-kanin IgG (Sigma) ble tilsatt ved 1/3000 del eller 1/5000 dels fortynning henholdsvis i 1 time ved romtemperatur. Membranene ble vasket som ovenfor, og muse- eller kanin-peroksidase antiperoksidase (Sigma) tilsatt ved 1/3000 dels fortynning i 1 time ved romtemperatur. Et sluttvasketrinn var i bare PBS og deretter ble membranene overført til en ren skål for å tilsette ECL substrat (Amersham). De immunoreaktive bånd ble påvist på Hyperfilm-ECL (Amersham) som ble utviklet ved bruk av en automatisert prosessor (Kodak).
Densitometrisk Analyse
Nivåforandringer av APP ble målt ved bruk av et laserdensitometer. Immunoreaktive APP-bånd ble scannet ved bruk av en Pharmacia LKB Ultrascan XL knyttet til en computer med Gelscan XL programvare for behandling av data. Laserstrålen gikk gjennom prøven, og mengden av transmittert lys ble målt med fotodioden som derved bestemte hvor mye som var absorbert. Absorbans-avlesningene ble integrert og ga arealverdier under kurven. Resulater for bærer og forsøksforbindelse uttrykkes som middel av 3 eksperimenter ± midlere standard avvik (SEM).
Ligandebindingsstudier in vitro.
Cerebral cortex ble dissekert fra Hooded Lister hannrotter (Olac, U.K.) i 2,5 volumer (sammenlignet med våtvekt) iskald 50 mM Tris pH 7,7. Dette ble homogenisert, deretter sentrifugert ved 24.000 g i 15 minutter ved 4°C. Klumpen ble gjenoppslemmet i 2,5 volumer, og homogenisatene ble lagret i 1 ml alikvoter ved -20°C inntil bruk.
Inkubasjoner for [<3>H]-OXO-M binding ble fremstilt i et totalvolum på 2 ml iskald 50mM Tris, inneholdende 2 mM magnesiumklorid. [<3>H]-OXO-M acetat (New England Nuclear, spesifikk aktivitet 87 Ci/mmol) ble tilsatt i en konsentrasjon på 1,88 nM. Cortex homogenisat hadde en sluttkonsentrasjon på 300 volumer basert på opprinnelig våtvekt (ekvivalent med 0,145 mg protein/ml). Ikke-spesifikk binding ble definert ved å bruke 10 mikromolar (fiM) oksotremorin seskvifumarat. Inkuberinger ble utført til likevekt ved 37°C i mellom 30 og 40 minutter. Prøver ble filtrert gjennom Watman GF/B filtere for-vætet i 30 minutter i en 0,05% vandig løsning av polyetylenimin for å forhindre adsorbsjon av [<3>H]-OXO-M til glassfibere.
[<3>H]-QNB, spesifikk aktivitet 44 Ci/mmol, sluttkonsentrasjon 0,27 nM) binding ble utført tilsvarende, unntatt at magnesiumklorid ble utelatt, og fortynningen av homogenisatet ble øket til 1500 volumer (7,8 |ag protein/ml). Ikke-spesifikk binding ble definert med 1|iM atropinsulfat.
Bindingsdata for forbindelsen under undersøkelsen er fremlagt i Tabell 5.
Resultater
Ved bruk av metodene ovenfor ble virkningene av forsøksforbindelsen, Forbindelse (I) monohydroklorid, undersøkt på amyloid forløperprotein-behandling.
Full-lengde APP med en molekylvekt på 108 kD og to bånd utskilt APP med molekylvekt på 108 kD og 118 kD ble påvist i alle de transfekterte CHO-celler.
CHOhml
Full-lengde APP i cellemembranen ble redusert med Forbindelse (I) monohydroklorid over et doseområde 10"<6> - lO^M etter 3 timers behandling. I dyrkningsmediet økte forsøksforbindelsen utskilt APP 6-10 ganger gjennom konsentrasjonsområdet (Tabell 1).
CH0hm2
Det var ingen forandring i full-lengde APP i cellemembranen, men utskilt APP var doblet i dyrkningsmediet etter behandling med 1 x 10"<4>M Forbindelse (I) monohydroklorid i 3 timer (Tabell 2).
CHOhm3
Full-lengde APP i cellemembranen ble redusert med Forbindelse (I) monohydroklorid over doseområdet 10"6- lO^M etter 3 timers behandling. I dyrkningsmediet øket forsøksforbindelsen utskilt APP ca. 20 ganger gjennom konsentrasjonsområdet (Tabell 3).
CHOhm4
Det var ingen forandring i full-lengde APP i cellemembranen eller i utskilt APP i dyrkningsmediet etter behandling med 1 x 10"<4>M Forbindelse (I) monohydroklorid i 3 timer (Tabell 4).
Ligandebindingsstudier
Ligandebindingsdata (Tabell 5) viser at Forbindelse (I) monohydroklorid har et QNB/OXO-M-forhold på 22, indikativt for partielle agonistegenskaper (Brown et al. 1988).
Konklusjon
Forbindelse (I) monohydroklorid endrer APP behandling ved stimulering av m1 og m3 reseptor subtyper. Den økede frigjøring av utskilt APP, spesielt påvist med anti (3A4-1-25 antistoff (som ikke skulle gjenkjenne (3-sekretrase- spaltet APP), tyder sterkt på at denne må være langs en ikke-amyloidogen vei.
Således har Forbindelse (I) monohydroklorid potensiell anvendelse ved behandling av Alzheimers sykdom ved reduksjon av pA4- produksjon i hjernen som et resultat av øket ikke-amyloidogen APP-behandling.
Henvisninger
Bonner T (1988) NIH Patent nr. PB89-125652; US Appl-7-241 971 inni. 8.9.88 Bradford, M. (1976) Anal. Biochem., 72, 248-254.
Brown, F., Clark. M., Graves, D., Hatcher, J., McArthur, R., Riley, G. og Semple, J,
(1988) Drug Dev Res. 14, 343-347.
Buxbaum, J.D., Oishi, M., Chen, H.I.,Pinkas-Kramarski, R., Jaffe, E.A., Gandy, S.E. og Greengard, P. (1992) Proe. Nati. Acad. Sei., 89, 10075-10078. Buxbaum, J.D., Ruefli, A.A., Parker, CA. Cypress, A.M. og Greengard, P. (1994) Proe. Nati. Acad. Sei., 91, 4489-4493.
Growdon, J.H. (1994) «Muscarinic agonists: Effects on APP processing» 4th International Meeting on Alzheimer's Disease, Minneapolis, Juli 1994.
Haring, R., Gurwitz, D., Barg. J., Pinkas-Kramarski, R., Heldman, E., Pittel, Z., Wengier, A., Meshulam, H ., Marciano, D., Karton, Y. og Fisher, A. (1994) Biochem. Biophys. Res. Comm. 203(1), 652-658.
Laemmli, U.K. (1970) Nature, 227, 680-685.
Nitsch, R.M., Slack, B.E., Wurtman, R.J. og Growdon, J.H. (1992) Science, 258, 304-307.
Weidemann, A., Konig, G., Bunke, D., Fischer, P., Salbaum, J.M., Masters, CL. og Beyreuther, K. (1989) Cell, 57, 115-126.
I tabellene:
Tabell 1 - CHOhml doserespons.
Resulatene er middel av tre eksperimenter og uttrykt som forandringer fra APP-kontrollnivåer. (A 1-gang økning i utskilt APP = ingen forandring fra basis). Antistoffer som ble brukt var Ab54 i cellelysatene for å påvise full-lengde APP og 22C11 for å påvise utskilt APP.
Tabell 2 - CHOhm2 respons.
Antistoffene som ble brukt var som i Tabell 1. Resultatene er middel av tre eksperimenter og uttrykt som forandringer av kontroll-APP nivåer. (A 1-gangs økning i utskilt APP = ingen forandring fra basis).
Tabell 3 - CHOhm3 doserespons
Antistoffer som ble brukt var Ab54 i cellelysatene for å påvise APP med full lengde og anti pA4 1-25 for å påvise utskilt APP. Eksperimentene ble utført in triplo. Resultatene er middel av tre eksperimenter og uttrykt som forandringer fra kontroll APP-nivåer. (A 1-gangs økning i utskilt APP = ingen forandring fra basis).
Tabell 4 - CHOhm4 respons
Antistoffene som ble brukt var som i Tabell 3.
Resultatene er middel av tre eksperimenter og uttrykt som forandringer fra kontroll APP-nivåer. (A 1-gangs økning i utskilt APP = ingen forandring fra basis).
OXO-M=Oksotremorin-M, agonist-ligande
QNB = Kinuclidinylbenzilat, antagonist-ligande
QNB/OXO-M forhold er en retningslinje for den funksjonelle virkningsgrad av forbindelsene. Forhold større enn 100 har sammenheng med fullstendige agonister, antagonister gir forhold nær til enhet, og mellomliggende verdier viser partielle agonister.
Claims (3)
1. Anvendelse av [R-(Z)]a-(metoksyimino)-a-(1-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitril eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav ved fremstilling av et medikament for økning av amyloidforløper proteinbehandling i en ikke-amyloidogen vei hos pasienter som lider av, eller med risiko for å utvikle, Alzheimers sykdom.
2. Anvendelse av [R-(Z)]a-(metoksyimino)-a-(1-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitril eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav til fremstilling av et medikament for behandling eller profylakse av Alzheimers sykdom ved redusering av pA4 produksjon.
3. Anvendelse ifølge de foregående krav, hvori det farmasøytisk akseptable salt er monohydrokloridet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9421472A GB9421472D0 (en) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | Novel methods |
| PCT/EP1995/004082 WO1996012486A1 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-17 | Use of [r-(z)]-alpha-(methoxyimino)-alpha-(1-azabicyclo [2.2.2] oct-3-yl) acetonitrile to reduce amyloid beta a4 formation in alzheimer's disease |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO971899L NO971899L (no) | 1997-04-24 |
| NO971899D0 NO971899D0 (no) | 1997-04-24 |
| NO312055B1 true NO312055B1 (no) | 2002-03-11 |
Family
ID=10763350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19971899A NO312055B1 (no) | 1994-10-25 | 1997-04-24 | Anvendelse av [R-(Z)]-<alfa>-(metoksyimino)-<alfa>-(1- azabicyklo[2.2.2]okt-3-yl)acetonitril til fremstilling av etmedikament for å redusere amyloid <beta>-A4-dannelse hosAlzheimer's sykdom |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5891887A (no) |
| EP (1) | EP0786998B1 (no) |
| JP (1) | JPH10509697A (no) |
| KR (1) | KR100393365B1 (no) |
| CN (1) | CN1085529C (no) |
| AT (1) | ATE214926T1 (no) |
| AU (1) | AU698695B2 (no) |
| BG (1) | BG101500A (no) |
| BR (1) | BR9509433A (no) |
| CZ (1) | CZ287370B6 (no) |
| DE (1) | DE69526102T2 (no) |
| DK (1) | DK0786998T3 (no) |
| ES (1) | ES2173977T3 (no) |
| GB (1) | GB9421472D0 (no) |
| HK (1) | HK1002057A1 (no) |
| HU (1) | HUT77007A (no) |
| NO (1) | NO312055B1 (no) |
| NZ (1) | NZ295155A (no) |
| PT (1) | PT786998E (no) |
| SK (1) | SK50497A3 (no) |
| WO (1) | WO1996012486A1 (no) |
| ZA (1) | ZA958946B (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU751607B2 (en) * | 1995-07-29 | 2002-08-22 | Smithkline Beecham Plc | Method of treatment of dementia |
| GB9619074D0 (en) * | 1996-09-12 | 1996-10-23 | Smithkline Beecham Plc | Composition |
| DE19641180A1 (de) * | 1996-09-24 | 1998-03-26 | Schering Ag | Verfahren zur Darstellung von APP-Sekretase Modulation und deren Verwendung als Mittel zur Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung |
| IL138192A0 (en) | 1998-03-11 | 2001-11-25 | Smithkline Beecham Plc | Controlled release oral dosage forms |
| GB9815383D0 (en) * | 1998-07-15 | 1998-09-16 | Smithkline Beecham Plc | Novel method of treatment |
| US6245884B1 (en) * | 1998-10-16 | 2001-06-12 | Vivian Y. H. Hook | Secretases related to alzheimer's dementia |
| US7816149B2 (en) * | 2004-03-29 | 2010-10-19 | Applied Photonics Worldwide, Inc. | Nanobioprocessor for protein and cell therapy |
| GB0428170D0 (en) * | 2004-12-23 | 2005-01-26 | Biopartners Ltd | Mono and Combination Therapy |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0392803B1 (en) * | 1989-04-13 | 2004-06-16 | Beecham Group p.l.c. | Novel compounds |
| US5242932A (en) * | 1991-12-17 | 1993-09-07 | The Rockefeller University | Treatment of amyloidosis associated with alzheimer disease |
| US5385915A (en) * | 1990-05-16 | 1995-01-31 | The Rockefeller University | Treatment of amyloidosis associated with Alzheimer disease using modulators of protein phosphorylation |
| JPH0725786A (ja) * | 1990-05-16 | 1995-01-27 | Univ Rockefeller | アルツハイマー病を伴うアミロイドーシスの治療 |
| MX9300875A (es) * | 1992-02-20 | 1993-08-31 | Smithkline Beecham Plc | Procedimiento para la preparacion de compuestos azabiciclicos. |
| WO1994009370A1 (en) * | 1992-10-09 | 1994-04-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Release of alzheimer amyloid precursor stimulated by activation of muscarinic acetylcholine receptors |
| GB9409705D0 (en) * | 1994-05-14 | 1994-07-06 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
-
1994
- 1994-10-25 GB GB9421472A patent/GB9421472D0/en active Pending
-
1995
- 1995-10-17 HU HU9701815A patent/HUT77007A/hu unknown
- 1995-10-17 CZ CZ19971251A patent/CZ287370B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-10-17 ES ES95936515T patent/ES2173977T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-17 BR BR9509433A patent/BR9509433A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-10-17 US US08/836,013 patent/US5891887A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 AU AU38431/95A patent/AU698695B2/en not_active Ceased
- 1995-10-17 DK DK95936515T patent/DK0786998T3/da active
- 1995-10-17 WO PCT/EP1995/004082 patent/WO1996012486A1/en active IP Right Grant
- 1995-10-17 AT AT95936515T patent/ATE214926T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-10-17 EP EP95936515A patent/EP0786998B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-17 JP JP8513628A patent/JPH10509697A/ja not_active Ceased
- 1995-10-17 PT PT95936515T patent/PT786998E/pt unknown
- 1995-10-17 NZ NZ295155A patent/NZ295155A/en unknown
- 1995-10-17 CN CN95196837A patent/CN1085529C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 SK SK504-97A patent/SK50497A3/sk unknown
- 1995-10-17 DE DE69526102T patent/DE69526102T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 KR KR1019970702700A patent/KR100393365B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-10-23 ZA ZA958946A patent/ZA958946B/xx unknown
-
1997
- 1997-04-24 NO NO19971899A patent/NO312055B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-05-20 BG BG101500A patent/BG101500A/xx unknown
-
1998
- 1998-02-05 HK HK98100893A patent/HK1002057A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK1002057A1 (en) | 1998-07-31 |
| AU3843195A (en) | 1996-05-15 |
| HUT77007A (hu) | 1998-03-02 |
| NZ295155A (en) | 2000-07-28 |
| GB9421472D0 (en) | 1994-12-07 |
| CN1085529C (zh) | 2002-05-29 |
| ES2173977T3 (es) | 2002-11-01 |
| ZA958946B (en) | 1996-08-20 |
| NO971899L (no) | 1997-04-24 |
| DE69526102T2 (de) | 2002-10-31 |
| NO971899D0 (no) | 1997-04-24 |
| BG101500A (en) | 1998-01-30 |
| BR9509433A (pt) | 1997-09-16 |
| ATE214926T1 (de) | 2002-04-15 |
| KR100393365B1 (ko) | 2003-12-18 |
| DK0786998T3 (da) | 2002-07-15 |
| EP0786998A1 (en) | 1997-08-06 |
| CZ125197A3 (en) | 1997-07-16 |
| EP0786998B1 (en) | 2002-03-27 |
| CN1170365A (zh) | 1998-01-14 |
| KR970706816A (ko) | 1997-12-01 |
| SK50497A3 (en) | 1997-09-10 |
| CZ287370B6 (en) | 2000-11-15 |
| WO1996012486A1 (en) | 1996-05-02 |
| AU698695B2 (en) | 1998-11-05 |
| DE69526102D1 (de) | 2002-05-02 |
| MX9703077A (es) | 1997-07-31 |
| JPH10509697A (ja) | 1998-09-22 |
| PT786998E (pt) | 2002-09-30 |
| US5891887A (en) | 1999-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Giannoni et al. | Early administration of RS 67333, a specific 5-HT4 receptor agonist, prevents amyloidogenesis and behavioral deficits in the 5XFAD mouse model of Alzheimer’s disease | |
| US6660725B1 (en) | Method and composition for modulating amyloidosis | |
| KR101591206B1 (ko) | 치료적 특성을 갖는 베타 1-42 특이적인 단일클론성 항체 | |
| US20020173511A1 (en) | Serotonergic compositions and methods for treatment of mild cognitive impairment | |
| WO2009059277A1 (en) | Synergistic modulation of microglial activation by nicotine and thc | |
| JP2009525025A (ja) | ニューロンニコチン受容体リガンドおよびその使用 | |
| EP0979086A2 (en) | Method and composition for modulating amyloidosis | |
| NO312055B1 (no) | Anvendelse av [R-(Z)]-<alfa>-(metoksyimino)-<alfa>-(1- azabicyklo[2.2.2]okt-3-yl)acetonitril til fremstilling av etmedikament for å redusere amyloid <beta>-A4-dannelse hosAlzheimer's sykdom | |
| KR20140019361A (ko) | 유효량의 （3ａＲ）－1，3ａ，8－트리메틸－1，2，3，3ａ，8，8ａ－헥사히드로피롤로〔2，3－ｂ〕인돌－5－일 페닐카바메이트 및 이의 제조방법 | |
| Garner et al. | Lens epithelium and fiber Na, K-ATPases: distribution and localization by immunocytochemistry | |
| Hantson et al. | Fatal encephalopathy after otoneurosurgery procedure with an aluminum-containing biomaterial | |
| CA2203670A1 (en) | Use of ¬r-(z)|-alpha-(methoxyimino)-alpha-(1-azabicyclo ¬2.2.2| oct-3-yl) acetonitrile to reduce amyloid beta a4 formation in alzheimer's disease | |
| WO2008057599A2 (en) | Methods for the treatment of abeta related disorders and compositions therefor | |
| CN112336729A (zh) | 坎帕罗酮在制备预防或治疗淀粉样脑血管病药物中的应用 | |
| MXPA97003077A (en) | Use of acetonitrila [r- (z)] - alpha- (metoximino) -alfa- (1-azabiciclo [2.2.2.] oct-3-ilo) to reduce the formation of beta a4 amylide in alzhei's disease | |
| CA2754416A1 (en) | Novel medicament for treating cognitive impairment | |
| WO2004028540A1 (ja) | 抗神経変性薬 | |
| EP1104301B1 (en) | Treatment of psychosis or neuropsychiatric symptoms associated with Alzheimer's Disease | |
| LoY et al. | Alzheimer's disease: Behavioral management | |
| CN118105463A (zh) | 脂肪脱细胞活性蛋白在抗阿尔兹海默症中的应用 | |
| Marchetti-Gauthier et al. | Early administration of RS 67333, a specific 5-HT 4 receptor agonist, prevents amyloidogenesis and behavioral deficits in the 5XFAD mouse model of Alzheimer’s disease | |
| EP1277478A1 (en) | Medicinal compositions for suppressing beta-amyloid production | |
| MXPA01000466A (en) | Method of treatment |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |