NO309429B1 - Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid - Google Patents

Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid Download PDF

Info

Publication number
NO309429B1
NO309429B1 NO913020A NO913020A NO309429B1 NO 309429 B1 NO309429 B1 NO 309429B1 NO 913020 A NO913020 A NO 913020A NO 913020 A NO913020 A NO 913020A NO 309429 B1 NO309429 B1 NO 309429B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
ser
phe
rha
leu
pro
Prior art date
Application number
NO913020A
Other languages
English (en)
Other versions
NO913020L (no
NO913020D0 (no
Inventor
Wolfgang Koenig
Juergen Sandow
Cenek Kolar
Original Assignee
Hoechst Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Ag filed Critical Hoechst Ag
Publication of NO913020D0 publication Critical patent/NO913020D0/no
Publication of NO913020L publication Critical patent/NO913020L/no
Publication of NO309429B1 publication Critical patent/NO309429B1/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K7/00Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Naturlig forekommende gonadoliberin (Gn-RH) fra forskjellige arter er dekapeptider med følgende strukturer:
[h- (human), p- (svin), o- (sau): Biochem. Biophys. Res. Commun. 43 (1971) 1334; g- (høne-1): South Africa J. Science 78 (1982) 124; g- (høne-II): Proe. Acad. Sei. USA 81 (1984) 3874; sa- (lachs): Proe. Nati. Acad. Sei. USA 80 (1983) 2794; pe- (Neunauge): J. Biol. Chem. 261 (1986) 4812-4819.]
Gn-RH blir i pattedyr hovedsakelig dannet i hypotalamus og bevirker i hypofysen til utskillelse av lutropin (LH) og folitropin (FSH).
Konkurrerende antagonister av Gn-RH hemmer over blokkeringen av Gn-RH-reseptorer dannelse av LH og FSH og dermed også syntesen av østrogen i hunndyr hhv. damer eller testosteron i hanndyr hhv. menn. I litteraturen er tallrike Gn-RH-antagonister blitt beskrevet [J.J. Nestor, Jr. et al. i: LH-RH and ints analogues (F. Labrie et al., eds.) Elsevier Science Publishers B.V. 1984, s. 24-35; A.S. Dutta, Drugs of the Future 13 (1988) 761-787.], og disse inneholder for det meste basiske aminosyrer i posisjon 6. Gjennom denne basiske ladningen i posisjon 6 blir peptidene mere vannoppløselige. Et negativt ledsagende fenomen ved denne basiske gruppen er derimot en histaminfrigjørende virkning. "Nal-Glu", der Arg i posisjon 5 ble erstattet og står i posisjon 6 D-4-p-metoksy-benzoyl-2-amino-smørsyre, har en sterk redusert histaminfri-gjøring [A. Phillips et al., Life Sei. 41 (1987) 2017-2022]. Lave basiske substitusjoner i posisjon 6, som f.eks. D-nikotinoyl-lysin [K. Folkers et al., Z. Naturforsch. 42b
(1987) 101-106; A. Ljungqvist et al., Biochem. Biophys.
Res.Commun. 148 (1987) 849-856]. D-citrullln eller D-hornocltrullin [S. Bajusz et al. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 85 (1988) 1637-1641] produserer likeledes histaminfrigjørin-gen.
I EP-A-263 521 (HOE 86/F 253) ble det gjennom substitusjon med glykosylerte sukkerforbindelser både oppnådd Gn-RH-agonister og Gn-RH-antagonister med gunstige egenskaper. For det første kunne vannoppløsligheten bli forbedret og for det andre kunne den anafylaktiske virkningen, som først og fremst fremkom for Gn-RH-antagonister bli redusert.
Gjennom erstatning av arginin i posisjon 8 med andre basiske aminosyrer som Nc-isopropyl-L-lysin [A. Ljungqvist et al., Biophys. Res. Commun. 148 (1987) 849-856] eller Ng.Ng'-dietyl-L-hornoarginin [C.-H. Less et al. Life Sei. 45 (1989) 697-702] kunne histaminfrigjøringen under bevaring av den antagonistiske virkningen bli redusert. Man gikk tidligere ut i fra at for reseptorbinding av Gn-RH i pattedyr har den basiske ladningen i posisjon 8 en viktig rolle (E. Hazum og P.M. Conn, Endocrine Reviews 9 (1988) 379-386).
Oppgaven som omfatter å redusere histaminfrigjøringen ved bevaring av den antagonistiske virkningen blir overraskende løst ved at i forhold til allerede kjent teknikk utveksles et Gn-RH-derivat inneholdende basisk ladning i posisjon 8 med glykosylert L-serin.
Oppfinnelsen vedrører en analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive peptider med den generelle formel I, kjennetegnet ved
der
X betyr (C2~Cg)-alkanoyl;
A betyr D-Nal (2), D-Phe eller D-Trp, der aromaten eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, C^- C^-alkyl og C^-C4-alkoksy;
B betyr D-Phe, som eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, amino, Ci-C4-alkyl og Ci-C4-alkoksy;
C betyr D-Pal (3), D-Phe eller D-Trp, der aromatet av D-Phe og D-Trp eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, Ci-C4-alkyl og Ci-C4-alkoksy;
D betyr Tyr eller His;
E betyr D-SerCR<1>);
F betyr Leu, Trp eller Phe;
G betyr L-SerCR<1>);
H betyr Gly-NH2-, D-Ala-NH2eller Azagly-NH2;
R<*>betyr en glykosylrest;
samt fysiologisk tålbart salt derav, kjennetegnet ved at peptidene bygges opp ved fragmentkobling hvor man kondenserer et fragment med N-terminal fri aminogruppe med et fragment med C-terminal fri karboksylgruppe, avspalter en eller flere eventuelt temporært innførte beskyttelsesgrupper, og overfører det på denne måten oppnådde peptidet til fysiologisk tålbare salt derav.
R<1>kan eksempelvis være en glukofuranosyl- eller glukopyrano-syl-rest som kan avledes fra naturlig forekommende aldo-tetroser, aldopentoser, oligosakkarider, som di- og trisak-karider, samt stereoisomerer derav.
Disse glykosylrestene R<1>er avledet spesielt fra naturlig forekommende D- eller L-monosakkarider, i mikroorganismer, planter, dyr eller mennesker som ribose (Rib), arabinose (Åra), Xylose (Xyl), lyksose (Lyx), Allose (All), altrose (Alt), glukose (Gle), Mannose (Man), gulose (Gul), idose (Ido), galaktose (Gal), Talose (Tal), erytrose (Ery), treose (Thr), psikose (Psi), fruktose (Fru), sorbose (Sor), tagatose (Tag), xylulose (Xyu), fukose (Fuc), ramnose (Rha), olivose (Oli), oliose (Olo), mykarose (Mye), rodosamin (RN), N-acetyl-glukosamin (GlcNAc), N-acetyl-galaktosamin (GalNAc), N-acetyl-mannosamin (ManNAc) eller disakkarider, som maltose (Mal), laktose (Lac), cellobiose (Cel), gentibiose (Gen), N-acetyl-laktosamin (LacNAc), chitobiose (Chit), p<->galakto-pyranosyl-(1-3)- eller -(1-4)-N-acetyl-glukosamin, samt syntetiske derivater derav, som 2-desoksy-, 2-amino-, 2-acetamido- eller 2-halogeno-, fortrinnsvis bromo- og jod-sukker.
Dersom ikke annet er angitt, står aminosyrene uten stereobe-skrivelse for L-aminosyrer. Under fysiologisk tålbare salter forstår man spesielt slike med uorganske syrer, som HC1, HBr, H2SO4» , H3PO4• eller organiske syrer, som eddiksyre, maleinsyre, fumarsyre, vinsyre, sitronsyre.
Valg av beskyttelsesgrupper og syntesestrategi blir bestemt av typen og konfigurasjonen til aminosyrene samt koblingsbe-tingelser. Egnede fremgangsmåter er eksempelvis beskrevet i EP-A 263 521 og er de generelle fremgangsmåtene innen peptidkjemi (Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Bind 125) gjennom trinnvis oppbygning fra den C-terminale enden eller ved segmentkondensasjon. Syntese av serin-glykosider er beskrevet i EP-A 263 521.
For å holde den mulige rasemiseringen ved segmentkondensa-sjonen så lav som mulig, blir det her fortrinnsvis arbeidet med dicykloheksylkarbodiimid (DCC) under tilsetning av 3- hydroksy-4-okso-3,4-dihydro-l,2, 3-benzotriazin (HOObt). Som amino-beskyttelsesgrupper anvendes fortrinnsvis den gjennom katalytisk hydrering avspaltbare Z-resten eller Fmoc-resten som er avspaltbar ved sekundært amin.
Som spesielt gunstig er en segment-kobling ifølge skjemaet
Syntesen blir illustrert ved hjelp av følgende reaksjons-skjema. Gn-RH-antagonistene fremstilt ifølge oppfinnelsen virker hemmende på dannelsen av ganadotropin lutropin og follitropin og dermed også på syntesen av testosteron og østrogen. De kan bli anvendt som høydoserte Gn-RH-agonister ved gonadotropin-og steroid-avhengige sykdommer som eksempelvis beskrevet i EP-A 263 521, samt ved svangerskapskontroller, Pubertas precox, ved behandling av testosteron- og østrogen-avhengige tumorer som f.eks. prostatakreft og brystkreft; ved behandling av endometriose og myomer. Videre beskytter peptidene fremstilt ifølge oppfinnelsen kimkjertlene for røntgenstråling. Fordelene med antagonistene i forhold til de høydoserte agonistene er at den primære stimuleringsfasen til agonistene blir unngått.
Gn-RH-antagonistene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan bli applisert parenteralt, intranasalt eller som implantat som eksempelvis beskrevet i EP-A 263 521. Foretrukne anvendelses-former i mennesker er intranasal applikasjon eller anvendelse av implantater.
Ved hjelp av en doseringsforstøver blir det via en spraydyse oppløst omtrent 0,02-0,2 ml av en bufferoppløsning i den nødvendige mengden av virkestoffet og sprayet i nesen. Ved en parenteral applikasjon, kan doseringen bli senket med en tierpotens i forhold til den intranasale dosen.
Antagonistene ifølge oppfinnelsen blir applisert i voksne mennesker intranasalt i doser på 1-10 mg. Enkeltdosen i implantater utgjør omtrent 5-50 mg for et tidsrom på 4-8 uker. Ved parenteral applisering 0,1-1 mg/dag.
Peptidene fremstilt ifølge oppfinnelsen ble utprøvet på hannrotter ved hjelp av vedvarende infusjon (MINIPUMPS) på atropisk virkning av androgenavhengige organer og på LH- og testosteron-senkende virkning i serum og blod. I hunnrotter ble den ovulasjonshemmende virkningen undersøkt. Histamin-frigjøringen ble undersøkt i peritonealmastceller fra rotter.
Testosteronsenkende virkning:
Den testosteronsenkende virkningen ble undersøkt i hannrotter i løpet av subkutan infusjon i løpet av 7 dager. Den biologiske virkningen på androgenavhengige organer og serumtestosteron ble oppført. Testforbindelsene ble admini-strert gjennom subkutan infusjon ved hjelp av minipumper i en rate på 30-120 ug/dag i 7 dager. Testforbindelsene ble oppløst i steril, 5% mannitoppløsning. Minipumpene ble implantert subkutant i nærheten av ryggen under narkose og ved sterile betingelser.
Serumtestosteron ble ekstrahert med dietyleter og bestemt ved hjelp av spesifikk RIA.
Testosteron-senkende virkning gjennom minipumpe-infusjon
Ovulasjonshemmende virkning:
Den ovulasjonshemmende virkningen ble testet i umodne hunnrotter som var blitt forbehandlet med PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin), for å indusere folikkelmodning. Spontan ovulasjon ble forhindret med barbiturat (Fenobarbital). En testdose på 800 ng LHRH ble injisert 2 timer etter antagnos-ten subkutant. Testforbindelsene, oppløst i 5% mannitoppløs-ning, ble injisert subkutant. Neste dag ble egglederen dissektert ut og farget med patentblå og de rørformige eggcellene ble tellet under mikroskop. Dosen av den ovulasjonshemmende virkningen til antagonistene (ED 100) ble bestemt. Rotte-antiovulasjonsanalyse
Histaminfrigjøring:
a) Tilberedning av den peritoneale cellesuspensjon Wistarotter ble avlivet. 50 ml av en 0,9$ NaCl-oppløsning
ble injisert i bukhulen og etter lett massasje ble bukhinnen åpnet. Væsken som inneholder de peritoneale cellene ble sugd ut ved hjelp av en Pasteurpipette og til slutt sentrifugert. De uttatte cellene ble videre suspendert og etter undersøkelse av levedyktighet fortynnet til IO<6>mastceller/ml.
b) Behandling av mastceller 150 ul av de løste gonadoliberin-antagonistene ble tilsatt
til en suspensjon av IO<5>mastceller i 150 ul 0,9$ NaCl-oppløsning. Etter 30 minutters inkubasjon ved 37°C ble reagensrøret sentrifugert og supernatanten tatt av. LHRH-antagonisten Ac-D-Nal-D-p-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Arg-Pro-Azagly-NH2, kjent som en forbindelse som induserer histaminfrigjøringen av mastceller, ble anvendt som sammenligningsforbindelse. For bestemmelse av den totale histaminfrigjøringen (100$) ved mastcelle-suspensjonene hurtig kokt over en bunsenbrenner.
c) HPLC-bestemmelse av histaminnivået
En modifisert form av metodene beskrevet av Skofitsch et
al. (J. Chromatographie, 226, 53-59, 1981) og Siraganian og Hook (i Manual of Clinical Laboratory Immunology; eds:
Rose et al. American Society of Microbiology, Washington D.C., side 675, 1986) ble anvendt. I korte trekk ble det til 250 ul supernatant tilsatt 100 ul av en IN NaOH og 100 pl % ortoftaldialdehyd tilsatt og grundig omristet. Etter en reaksjonstid på 2 minutter ble fluoroforen omdannet til et sterkere fluoreserende og stabilt produkt gjennom surgjøring med 50 ul 3N HC1. Fra supernatanten ble 10 pl injisert på Chromspher C8 kolonnen (Chrompak FRW) av HPLC-systemet. Dette systemet består av en kromatograf SP 8100 (Spectra Physics) og en integrator SP 4270 (Spectra Physics) og en fluorescens-detektor LS-1 (Perkin Eimer). Fluorescensen ble ført opp ved ved 360 nm eksitasjon og 450 nm emissjonsbølgelengder. Histaminfrigjøring av peritoneale mastceller (pl/ml) (Resultatene er i prosent relativt til totalverdien av histaminfrigjøringen gjennom lysering av mastcellene ved koking)
Ytterligere anvendte forkortelser:
Eksemplene nedenfor beskriver foreliggende oppfinnelse.
EKSEMPEL 1
la. H-Ser[Rha(Ac3)]-0H
Til en oppløsning av 30 g (50 mmol) Fmoc-Ser[Rha(Ac3)]-0H i 150 ml dimetylformamid tilsetter man under omrøring 55 ml dietylamin. Etter 10 minutter blir oppløsningen redusert i høyt vakuum og resten pulverisert med MTB-eter. Presipitatet blir suget ut og vasket med MTB-eter. Substansen blir tørket i høyt vakuum.
Utbytte: 17,13 g (91#)
[a]D<26>= -31° (c=l, i iseddik)
lb. Fmoc-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-0H
Til en suspensjon av 17 g (45 mmol) H-Ser[Rha(Ac3)]-0H i 100 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C og under omrøring 20,4 g Fmoc-Leu-OObt. Etter 1 time er alt oppløst. Dette lar man stå over natten ved romtemperatur og reduserer dette i høyt vakuum. Resten blir oppløst i eddikester og etter hverandre utristet med 3 ml mettet NaHC03-oppløsning, vann, 2 ml med KHSO^buffer og 2 ganger med vann. Eddikesterfasen blir tørket over Na2S04, inndampet og resten felles ut av dietyleter/petroleter. Bunnfallet blir enda en gang digerert med petroleter og avsuget.
Utbytte: 22,2 g (69$)
[a]D<26>= -20° (c=l, i iseddik)
lc. Fmoc-Leu-Ser[Rha(Ac3)] -Pro-Azagly-NHtø
Til en oppløsning av 5 g HCIO4'H-Pro-Azagly-NH2(16,4 mmol), 11,7 g Fmoc-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-0H og 2,7 g HOObt i 60 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0"C under omrøring 2 ml N- etylmorfolin og 3,5 g DCC. Etter omrøring i 1 time ved 0"C lar man dette stå over natt ved romtemperatur. Den andre dagen blir presipitatet sugd ut og filtratet redusert. Resten blir løst opp i eddikester og etter hverandre vasket med vann, 2 ganger med mettet NaHC03-oppløsning, vann, 2 ganger med KHS04-buffer og vann, tørket over Na2S04. Oppløsningen blir redusert i vakuum og resten pulverisert med dietyleter.
Utbytte: 11,87 g (83*)
[a]D26= -54,8° (c-1, i iseddik)
ld. H-Leu-Ser [Rha(Ac3)] -Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 11,9 g (13,7 mmol) Fmoc-Leu-Ser[Rha(AC3)]-Pro-Azagly-NH2i 90 ml dimetylformamid tilsetter man under omrøring ved romtemperatur 15 ml dietylamin. Etter 10 minutter reduseres dette i høyt vakuum og resten blir pulverisert med dietyleter. Presipitatet blir sugd av og vasket med MTB-eter.
Utbytte: 7,71 g (87*)
le. Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)] -Leu-Ser[Rha(Ac3)] -Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 7,71 g (12 mmol) H-Leu-Ser[Rha(Ac3 )]-Pro-Azagly-NH2, 7,2 g Fmoc-D-Ser [Rha( Ac3)] og 1,68 g HOBt i 60 ml dimetylformamid tilsetter man under omrøring ved 0°C 2,52 g DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Dette blir opparbeidet som i eksempel lc. For videre rensing blir forbindelsen kromatografert på kiselgel i metylenklorid/aceton (9:1) og metylenklo-rid/metanol (9:0,5).
Utbytte: 11,55 g (78*)
lf. H-D-Ser [Rha( Ac3)] -Leu-Ser [Rha( Ac3)] -Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 4,75 g (3,87 mmol) Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2i 30 ml dimetylformamid tilsetter man ved romtemperatur og omrøring 4,2 ml dietyl amin. Etter 10 minutter blir dette redusert i høyt vakuum og resten blir pulverisert med dietyleter 2 ganger.
Utbytte: 3,46 g (89*)
[a]D2<6=>-63" (c=2, i iseddik)
lg. Z-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
44,7 g (151,4 mmol) Z-Ser(tBu)-OH, 49,9 g (151,3 mmol) H-Tyr(tBu)-OtBu-HC1 og 20,4 g (151,1 mmol) HOBt blir løst opp i 200 ml dimetylformamid. Ved 0°C tilsetter man under omrøring 19.4 ml (151,6 mmol) N-etylmorfolin og 33,3 g (151,4 mmol) DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå ved romtemperatur over natt. Presipitatet blir sugd ut og filtratet redusert. Resten blir oppløst i eddikester og vasket etter hverandre med vann, KHSC^/KgSO/^-buffer, NaHC03~oppløsning og vann ekstrahert, tørket over Na2S04og redusert.
Utbytte: 87 g olje (100,8*)
lh. H-Ser-(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu•HC1
87,3 g (153 mmol) Z-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu blir oppløst i 600 ml metanol og omsatt med Pd/C-katalysator. Med autotitrator blir under tilsetning av metanolisk saltsyre ved pH 4,8 og gjennomledning av hydrogen hydrert. Etter endt hydrering blir katalysatoren sugd av over kiselgur og filtratet redusert og resten pulverisert med petroleter. Dette blir sugd av tørket over P2O5i høyvakuum.
Utbytte: 55,8 g (77*)
[a]]]<26>= +1.6° (c=l, i metanol)
Smp.: 109-111°C
li. Fmoc-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
48.5 g (102,5 mmol) H-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-0tBu-HC1 , 43,75 g (102,5 mmol) Fmoc-D-Trp-0H og 13,83 g (102,4 mmol) HOBt blir løst i 200 ml dimetylformamid. Ved 0°C tilsetter man under
omrøring 13,1 ml (102,4 mmol) N-etylmorforolin og 22,55 g (102,5 mmol) DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Deretter blir presipitatet sugd ut og filtratet redusert. Resten blir løst opp i eddikester og vasket etter hverandre med vann, KHSO4/K2SO4-buffer, NaHC03~oppløsning og omristet, tørket over Na2S04og redusert.
Utbytte: 93,0 g olje (107*, inneholder enda DC-urinstoff)
lk. H-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
93,0 g (ca. 102 mmol) Fmoc-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu blir oppløst i 500 ml dimetylformamid. Til dette tilsetter man under omrøring 114,5 ml dietylamin, lar dette reagere i 10 minutter ved romtemperatur og reduserer dette i høyt vakuum. Resten blir pulverisert 3 ganger med petroleter og 2 ganger med dietyleter. Etter avdestillering av dietyleteren blir dette fordelt mellom eddikester og vann. Eddikesteren blir etter tørking over Na2S04destillert ut og resten pulverisert 2 ganger med dietyleter.
Utbytte: 72,5 g (114*) olje
11. Fmoc-D-p-Cl-Phe-OH
118,0 g (519 mmol) H-D-p-Cl-Phe-OH blir suspendert i 2000 ml dioksan/vann (1:1). Til dette tilsetter man 123 g NaHC03(1464 mmol) og 164,5 g (488 mmol) Fmoc-ONSu. Blandingen blir omrørt i 5 timer ved romtemperatur og latt stå over natt ved denne temperaturen. Det lille presipitatet blir sugd av, dioksanet blir destillert ut, surgjort med 2N HC1 (pH 2-3) og presipitatet sugd ut og omfattende vasket med vann. Fra 5 1 isopropanol blir forbindelsene omkrystallisert. Etter henstand i 3 timer ved 4°C blir det sugd av og presipitatet behandlet med petroleter og isopropanolet fjernet.
Utbytte: 167,6 g (Charge I, inneholder 0,76* Fmoc-L-pCl-Phe-OH)
Smp.: 172-174°C
[a]D2<6=>+22,3° (c=l, i dimetylformamid)
lm. Fmoc-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
72,5 g (ca. 100 mmol) H-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-0tBu, 42,2 g (100 mmol) Fmoc-D-p-Cl-Phe-OH og 13,5 g (100 mmol) HOBt blir løst opp i 400 ml dimetylformamid. Til dette tilsetter man ved 0°C under omrøring 20,6 g (100 mmol) DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. DC-urinstoffet blir sugd av filtratet redusert. Resten blir løst opp i eddikester, på ny filtrert og etter hverandre ekstrahert med vann, NaHC03-oppløsning og vann, tørket over NagS04og redusert. Resten blir løst opp i dietyleter og videre utfelt med petroleter. Resten blir løst opp i 500 ml metanol, filtrert og 1,5 ml vann blir dråpevis tilsatt. Det krystallinske presipitatet blir sugd av og tørket over P2O5i høyt vakuum.
Utbytte: 80 g (77,8*)
[a]D2<6=>+4,9° (c=l, i metanol)
Smp.: 96-98°C
ln. H-D-p-C1-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu 80 g (77,9 mmol) Fmoc-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu blir løst i 600 ml dimetylformamid. Dertil tilsettes ved romtemperatur 80 ml dietylamin. Etter 20 minutters reaksjonstid ved romtemperatur blir dette redusert i høyt vakuum og resten blir pulverisert med petroleter. Dette blir gjentatt to ganger. Deretter blir forbindelsen løst opp i dietyleter, filtrert fra det uoppløslige og redusert. Dette forløpet blir gjentatt 2 ganger.
Utbytte: 64,9 g olje (104,9*)
lo. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu 64,9 g (ca. 77,9 mmol) H-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu, 19,8 g (76,95 mmol) Ac-D-Nal-OH og 12,46 g (76,4 mmol)
HOObt blir oppløst opp i 500 ml dimetylformamid. Ved 0°C tilsetter man under omrøring 16,93 g (76,95 mmol) DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Deretter blir DC-urinstoffet sugd ut, filtratet redusert og resten pulverisert med eddikester. Presipitatet blir sugd av og tørket.
Utbytte: 47,9 g (59*)
Smp.: 224-228° under dekomponering
[a]D2<6>= -12,6° (c=l, i 90* eddiksyre)
lp. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-OH
47,6 g (45,6 mmol) Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser(tBu)-Tyr( tBu)-0tBu blir redusert i en blanding av 350 ml 90* vandig trifluoreddiksyre og 35 ml 1,2-dimerkaptoetan ved romtemperatur og resten blir pulverisert med dietyleter og sugd av. For ytterligere rensing blir forbindelsen oppløst varm i isopropanol og utfelt med petroleter.
Utbytte: 33,67 g
Smp.: 196°C under dekomponering (sintret ved 159°C)
[a]D2<6=>-3,5° (c=l, 1 metanol)
lq. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Rha( Ac 3 )]-Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 1 g (1 mmol) H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Rha(Ac3 )] -Pro-Azagly-NH2 , 875 mg Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-OH og 163 mg HOObt i 4 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C under omrøring 210 mg DCC. Etter 1 time ved 0°C lar man dette stå over natt ved romtemperatur. Den andre dagen blir presipitatet sugd ut og filtratet redusert. Resten blir redusert og pulverisert med MTB-eter. Råforbin-delsen blir kromatografert i metylenklorid/metanol/eddiksyre/vann (9:1:0,1:0,1).
Utbytte: 1,09 g (59*)
[a]D2<6=>-48,5° (c=l, i iseddik)
Ir. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser(Rha)-Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 400 mg (0,21 mmol) Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser [Rha( Ac3)] -Leu-Ser [Rha(Ac3 )] -Pro-Azagly-NH2i 4 ml 90* vandig metanol tilsetter man ved romtemperatur og under omrøring 360 mg K2C03. Dette blir omrørt i 10 minutter, surgjort med KHSOjj-buffer og 2 ganger ekstrahert med n-pentanol. De samlede n-pentanolfasene blir redusert og renset på kiselgel i n-butanol/iseddik/vann (63:9,5:27,5) ved kromatografi.
Utbytte: 112 mg (27*)
[a]D2<6=>-38,2" (c=l, i iseddik)
EKSEMPEL 2
Ac-D-Nal -D-p-Cl-Phe-Pal-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser(Rha)-Pro-Azagly-NH2
2a. Fmoc-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
Til en oppløsning av 3,88 g Fmoc-D-Pal-OH (10 mmol), 4,73 g HC1-H-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu og 1,25 g HOBt i 40 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C under omrøring 1,3 ml etylmorfolin og 2,2 g DCC. Det blir omrørt i 1 time ved 0°C og blir latt stå over natt ved romtemperatur. Presipitatet blir sugd av og resten oppløst i eddikester. Etter hverandre blir dette ekstrahert med vann, mettet NaHC03-oppløsning, KHS04~buffer og vann, tørket over natriumsulfat og redusert.
Utbytte: 3,74 g (46,3*)
Smp.: 86-88°C
[a]D2<3=>+10,1° (c=l, i MeoH)
2b. H-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
Til en oppløsning av 3,74 g Fmoc-D-Pal-Ser(tBu)-0tBu i 20 ml dimetylformamid tilsetter man ved romtemperatur 4,8 ml dietylamin. Etter 10 minutter blir dette redusert og resten pulverisert etter hverandre med 2 ml petroleter og løst opp i dietyleter. Utfelt presipitat blir sugd av og dietyleter-oppløsningen blir redusert.
Utbytte: 2,7 g olje
2c. Fmoc-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser(tBu )-Tyr(tBu )-OtBu Til en oppløsning av ovennevnte 2,7 g H-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu, 2,16 g Fmoc-p-Cl-D-Phe-OH og 0,62 g HOBt i 30 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C under omrøring 1,02 g DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Presipitatet blir sugd av og filtratet redusert og resten blir opparbeidet som i eksempel 2a. Resten blir felt ut av dietyleter/petroleter.
Utbytte: 3,25 g
Smp.: 98-102°C
[a]D2<3=>+12,0°(c=l, i MeOH)
2d. H-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser (tBu )-Tyr (tBu )-OtBu 3,0 g Fmoc-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-0tBu blir som i eksempel 2b omsatt med 3,1 ml dietylamin i 50 ml dimetylformamid.
Utbytte: 1,6 g olje
2e. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu
Til en oppløsning av ovennevnte 1,6 g H-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser( tBu)-Tyr (tBu)-OtBu, 0,5 g Ac-D-Nal-OH og 0,32 g HOObt i 20 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C og under omrøring 0,43 g DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Presipitatet blir sugd av og filtratet redusert. Resten blir etter pulverisering med eddikester sugd av.
Utbytte: 1,43 g
Smp.: 208-210°C
[a]D23=7,0°(c=l, i iseddik)
2f. Åc-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-OH-trifluoracetat 1,4 g (1,39 mmol) Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-OtBu blir ført inn i en blanding av 15 ml 90* vandig trifluoreddiksyre og 1,5 ml 1,2-dimerkaptoetan. Dette blir latt stå i 1 time ved romtemperatur og inndampet. Resten blir pulverisert med dietyleter og sugd av.
Utbytte: 1,1 g
Smp.: 264°C (under dekomponering)
2g. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Rha(Ac3)]-Pro-Azagly-NHg
Til en oppløsning av 1 g (1 mmol) H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Rha(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2 , 838 mg ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-OH-trifluoracetat og 163 mg HOObt i 4 ml dimetylformamid tilsetter man 0,13 ml N-etylmorfolin og 210 mg DCC. Dette blir opparbeidet som beskrevet i eksempel lq, men uten kolonnerensning.
Utbytte av råforbindelse: 1,55 g (85*)
2h. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser (Rha)-Pro-Azagly-NH2
Til en oppløsning av 1,5 g (0,8 mmol) rå Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser [Rha( Ac3 )] -Leu-Ser [Rha(Ac3 )]-Pro-Azagly-NH2i 15 ml 90* vandig metanol tilsettes under omrøring ved romtemperatur 1,4 g K2C03. Dette blir opparbeidet som beskrevet i eksempel lr.
Råmaterialet blir kromatografert på kiselgel i metylenklorid-/metanol/vann/eddiksyre (20:4:1,5:5) og metanol/vann/eddiksyre (1:1:1).
Utbytte: 270 mg (22*)
[a]D<26=>-45°(c=l, i iseddik)
EKSEMPEL 3
Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser(Xyl )-Pro-Azagly-NH2
3a. H-Ser[Xyl(Ac3)]-0H
16,37 g Fmoc-Ser[Xyl(Ac3)]-OH blir omsatt i 100 ml dimetylformamid analogt eksempel la med 30,8 ml dimetylamin.
Utbytte: 9,65 g (95*)
3b. Fmoc-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-0H
9,65 g (26,65 mmol) H-Ser[Xyl(Ac3)]-0H blir analogt eksempel lb omsatt med 12 g Fmoc-Leu-OObt i 70 ml dimetylformamid.
Utbytte: 12,8 g (69*)
3c. Fmoc-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2
12,8 g (18,65 mmol) Fmoc-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-0H blir analogt eksempel lc omsatt med 5,7 g HCIO4•H-Pro-Azagly-NH2 , 3,04 g HOObt, 2,36 ml N-etylmorfol in og 3,91 g DCC.
Utbytte: 11,6 g (73*)
3d. H-Leu-Ser [Xyl(Ac3)] -Pro-Azagly-NH2
11,6 g (13,8 mmol) Fmoc-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir analogt eksempel ld omsatt med 15,2 ml dietylamin i 100 ml dimetylformamid.
Utbytte: 7,47 g (86*)
3e. Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)] -Leu-Ser[Xyl(Ac3)] -Pro-Azagly-NH2 7,47 g H-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir analogt eksempel le omsatt med 7,25 g Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-0H, 1,7 g HOBt og 2,54 g DCC.
Utbytte: 10,48 g (71*)
[a]D<26=>-57° (c=l, i iseddik)
3f. H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2
2 g (1,65 mmol) Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NHg blir omsatt analogt eksempel lf med 1,8 ml dietylamin i 15 ml dimetylformamid.
Utbytte: 1,47 g (90*)
[a]D26= -68°(c=l, i iseddik)
3g. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-Trp-Ser-Try-D-Ser(Rha)-Leu-Ser(Xyl )-Pro-Azagly-NHg
990 mg (1 mmol) H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser(Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir analogt eksepel lq omsatt med 875 mg Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Try-OH, 163 mg HOObt og 210 mg DCC.
Utbytte: 1,07 g (59*)
[a]D2<6=>-45° (c=l, i iseddik)
3h. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Try-D-Ser(Rha)-Leu-Ser (Xyl )-Pro-Azagly-NH2
560 mg (0,3 mmol) Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Trp-Ser-Try-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Xyl(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir omsatt analogt eksempel lr med 497 mg K2C03i 5 ml 90* vandig metanol.
Utbytte: 80 mg (26*)
[a]D26=-39° (c=l, i iseddik)
EKSEMPEL 4
Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Try-D-Ser (Rha)-Leu-Ser (Fuc) - Pro-Azagly-NH2
4a. H-Ser[Fuc(Ac3)]-0H
11,82 g (19,73 mmol) Fmoc-Ser[Fuc(Ac3)]-0H blir omsatt
analogt eksempel la med 21,7 ml dietylamln 1 50 ml dimetylformamid.
Utbytte: 7,08 g (95*)
4b. Foc-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-OH
7,08 g (18,78 mmol) H-Ser-[Fuc(Ac3)]-0H blir omsatt analogt eksempel lb med 8,41 g Fmoc-Leu-OObt i 100 ml dimetylformamid.
Utbytte: 8,23 g (68*)
4c. Fmoc-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NItø
8,2 g (11,51 mmol) Fmoc-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-0H blir analogt eksempel lc omsatt med 3,5 g HCIO4'H-Pro-Azagly-NH2, 1,88 g HOObt, 1,46 mol N-etylmorf ol in og 2,42 g DCC i 60 ml dimetylformamid.
Utbytte: 6,87 g (69*)
4d. H-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2
6,87 g (7,93 mmol) Fmoc-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir omsatt analogt eksempel ld med 8,7 ml dietylamin i 50 ml dimetylformamid.
Utbytte: 4,49 g (88*)
4e. Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH24,49 g (6,97 mmol) H-Leu-Ser(Fuc)-Pro-Azagly-NH2blir omsatt analogt eksempel le med 4,18 g Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-0H, 976 mg HOBt og 1,47 g DCC i 40 ml dimetylformamid.
Utbytte: 6,64 g (77*)
[a]D<26>= -23,3°(c-1, i iseddik)
4f. H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2
6,6 g (5,38 mmol) Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir omsatt analogt eksempel lf med 6 ml dietylamin i 20 ml dimetylformamid.
Utbytte: 4,82 g (90*)
[a]D26= -45°(c-1, i iseddik)
4g. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Try-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Fuc (Ac 3 )]-Pro-Azagly-NH2 1 g (1 mmol) H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Fuc(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2bli omsatt analogt eksempel 2g med 838 mg Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-OH-trifluoracetat, 0,13 ml N-etylmorfolin, 163 mg HOObt og 210 mg DCC i 4 ml dimetylformamid.
Utbytte: 1,35 g (74*)
4h. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser(Rha) -Leu-Ser (Fuc)-Pro-Azagly-NH2
1,35 g Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-Azagly-NH2blir omsatt analogt eksempel 2h med 1,24 g K2C03i 15 ml 90* metanol.
Utbytte: 170 mg (15*)
[a]D2<6>=-17,3°(c-1, i iseddik)
EKSEMPEL 5
Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser(Rha)-Pro-D-Ala-NH2
5a. Fmoc-Pro-D-Ala-NH2
Til en oppløsning av 5,4 g (16 mmol) Fmoc-Pro-OH, 2 g HC1-H-D-Ala-NH2og 2,24 g HOBt i 30 ml dimetylformamid tilsetter man ved 0°C under omrøring 3,36 g DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Presipitatet blir sugd av og filtratet redusert. Resten blir løst opp i eddikester og ristet etter hverandre med vann, 2 ganger med mettet NaHC03-oppløsning, vann, KHSC^-buffer og vann. Dette fører til at Fmoc-Pro-D-Ala-NH2faller ut i eddikesterfasen og blir sugd av. Eddikestermorvæsken blir redusert og fluoriscert med dietyleter og sugd av.
Samlet utbytte: 5,76 g (88*)
[a]D26= -29°(c=l, i eddikester)
5b. H-Pro-D-Ala-NH2
Til en oppløsning av 5,66 g (13,9 mmol) Fmoc-Pro-D-Ala-NH2i 30 ml dimetylformamid tilsetter man ved romtemperatur 15,3 ml dietylamin. Etter 6 minutter blir oppløsningen redusert i høyt vakuum. Resten blir pulverisert med dietyleter.
Utbytte: 2,47 g (96*)
5c. Fmoc-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NHg
Til en oppløsning av 9,5 g (13,35 mmol) Fmoc-Leu-Ser [Rha(Ac3)] -0H, 2,4 g H-Pro-D-Ala-NH2og 2,17 g HOOBt tilsetter man ved 0°C og under omrøring 2,8 g DCC. Dette blir omrørt i 1 time ved 0°C og latt stå over natt ved romtemperatur. Presipitatet blir sugd av filtratet redusert. Resten blir løst opp i en blanding av eddikester/pentanol (10:2) og vasket etter hverandre med vann, 2 ganger med mettet NaHC03-oppløsning, vann, KHSO^buffer og vann. Den organiske fasen blir tørket over Na2S04og redusert. Resten blir feilt ut av dietyleter/petroleter og sugd av.
Utbytte: 7,75 g (66*)
[a]D<26>= -38° (c=l, i iseddik)
5d. H-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NH2
7,7 g Fmoc-Leu-Ser[Rha(Ac3 )]-Pro-D-Ala-NH2 blir omsatt analogt eksempel ld med 9,7 ml dietylamin i 30 ml dimetylformamid .
Utbytte: 5,25 g (90*)
5e. Fmoc-D-Ser [Rha(Ac3)] -Leu-Ser[Rha(Ac3)] -Pro-D-Ala-NH2
5,2 g (8,8 mmol) Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-0H blir omsatt analogt eksempel le med 5,25 g H-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NHg, 1,23 g HOBt og 1,84 g DCC i 50 ml dimetylformamid.
Utbytte: 8,01 g (73*)
[a]D<26>= -43,3° (c-1, i iseddik)
5f. H-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NH2
4 g (3,23 mmol) Fmoc-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NH2blir omsatt analogt eksempel lf med 3,6 ml dietylamin i 10 ml dimetylformamid.
Utbytte: 2,98 g (91*)
[a]D26= -49°(c-1, i iseddik)
5g. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser[Rha(Ac3)]-Leu-Ser [Rha(Ac3)]-Pro-D-Ala-NH2
838 mg (1 mmol) Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-OH-trifluoracetat blir omsatt analogt eksempel 2g med 1 g H-D-Ser [Rha(Ac3)]-Leu-Ser[Rha(Ac3 )]-Pro-D-Ala-NH2, 163 mg HOObt, 0,13 ml N-etylmorfolin og 210 mg DCC i 9 ml.
Utbytte: 1,36 g (74*)
[a]D<26>= -25° (c-1, i iseddik)
5h. Ac-D-Nal-D-p-Cl-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Ser(Rha)-Leu-Ser (Rha)-Pro-D-Ala-NH2
1,34 g (0,74 mmol) blir omsatt analogt eksempel 2h med 1,24 g K2CO3i 15 ml 90* vandig metanol.
Utbytte: 230 mg (20*)
[cx]D<26=>-36°(c-1, i iseddik)

Claims (2)

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid med generell formel I
der X betyr (C2-Cg)-alkanoyl; A betyr D-Nal (2), D-Phe eller D-Trp, der aromaten eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, C^- C^-alkyl og C^-C4~alkoksy; B betyr D-Phe, som eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, amino, C^-C4-alkyl og C^-C^-alkoksy; C betyr D-Pal (3), D-Phe eller D-Trp, der aromatet av D-Phe og D-Trp eventuelt kan være substituert med en eller to like eller forskjellige rester fra rekken brom, klor, fluor, nitro, C^-C4-alkyl og Ci-C4~alkoksy; D betyr Tyr eller His; E betyr D-SerCR<1>); F betyr Leu, Trp eller Phe; G betyr L-SerU<1>); H betyr Gly-NH2-, D-Ala-NH2eller Azagly-NH2; R<1>betyr en glykosylrest; samt fysiologisk tålbart salt derav,karakterisert vedat peptidene bygges opp ved fragmentkobling hvor man kondenserer et fragment med N-terminal fri aminogruppe med et fragment med C-terminal fri karboksylgruppe, avspalter en eller flere eventuelt temporært innførte beskyttelsesgrupper, og overfører det på denne måten oppnådde peptidet til fysiologisk tålbare salt derav.
2. Analogifremgangsmåte ifølge krav 1 hvor X betyr acetyl; A betyr D-Nal(2); B betyr D-Phe(p-Cl); C betyr D-Pal(3) eller D-Trp; D betyr Tyr; E betyr D-SerU<1>); F betyr Leu; H betyr D-Ala-NHg eller azagly-NHg; eller fysiologisk tålbart salt derav,karakterisert vedat tilsvarende utgangsmaterialer anvendes.
NO913020A 1990-08-04 1991-08-02 Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid NO309429B1 (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4024779 1990-08-04

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO913020D0 NO913020D0 (no) 1991-08-02
NO913020L NO913020L (no) 1992-02-05
NO309429B1 true NO309429B1 (no) 2001-01-29

Family

ID=6411646

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO913020A NO309429B1 (no) 1990-08-04 1991-08-02 Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid

Country Status (17)

Country Link
US (1) US5434138A (no)
EP (1) EP0477499B1 (no)
JP (1) JP3164844B2 (no)
KR (1) KR100191700B1 (no)
AT (1) ATE100822T1 (no)
AU (1) AU641035B2 (no)
CA (1) CA2048407C (no)
DE (1) DE59100945D1 (no)
DK (1) DK0477499T3 (no)
ES (1) ES2062628T3 (no)
IE (1) IE65965B1 (no)
IL (1) IL99062A (no)
NO (1) NO309429B1 (no)
NZ (1) NZ239233A (no)
PT (1) PT98533B (no)
TW (1) TW205046B (no)
ZA (1) ZA916097B (no)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5691314A (en) * 1996-03-18 1997-11-25 The Medical College Of Hampton Roads Adjunctive therapy
CN1301771A (zh) * 1999-12-27 2001-07-04 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人促性腺释放激素11和编码这种多肽的多核苷酸
US11805833B1 (en) * 2019-05-10 2023-11-07 Julie Vahos Flexible hair extension with form retention capability
WO2023101490A1 (ko) * 2021-12-01 2023-06-08 애니젠 주식회사 가니렐릭스의 신규한 제조방법

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS54148722A (en) * 1978-05-12 1979-11-21 Takeda Chem Ind Ltd Nonapeptide and its preparation
US5073624A (en) * 1985-04-09 1991-12-17 Administrators Of The Tulane Educational Fund Therapeutic decapeptides
US4661472A (en) * 1985-05-09 1987-04-28 The Salk Institute For Biological Studies GnRH antagonists IX
DE3634435A1 (de) * 1986-10-09 1988-04-14 Hoechst Ag Analoga von gonadoliberin mit verbesserter loeslichkeit, verfahren zu deren herstellung, diese enthaltende mittel und ihre verwendung
US4801577A (en) * 1987-02-05 1989-01-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH useful as LHRH antagonists
US5110904A (en) * 1989-08-07 1992-05-05 Abbott Laboratories Lhrh analogs
GB2218102B (en) * 1988-04-08 1992-09-16 Sandoz Ltd Calcitonin peptide derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
IL99062A (en) 1995-07-31
ATE100822T1 (de) 1994-02-15
JP3164844B2 (ja) 2001-05-14
DE59100945D1 (de) 1994-03-10
NZ239233A (en) 1993-09-27
PT98533A (pt) 1992-06-30
IE912769A1 (en) 1992-02-12
ES2062628T3 (es) 1994-12-16
DK0477499T3 (da) 1994-05-30
CA2048407A1 (en) 1992-02-05
ZA916097B (en) 1992-04-29
NO913020L (no) 1992-02-05
KR920004417A (ko) 1992-03-27
EP0477499A1 (de) 1992-04-01
IE65965B1 (en) 1995-11-29
IL99062A0 (en) 1992-07-15
AU8154891A (en) 1992-02-06
TW205046B (no) 1993-05-01
PT98533B (pt) 1999-01-29
US5434138A (en) 1995-07-18
KR100191700B1 (ko) 1999-06-15
JPH05148299A (ja) 1993-06-15
EP0477499B1 (de) 1994-01-26
CA2048407C (en) 2001-10-23
AU641035B2 (en) 1993-09-09
NO913020D0 (no) 1991-08-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR930008095B1 (ko) Lhrh 길항제로서 유용한 lhrh의 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체
CA2022444C (en) Lhrh analogs
KR850001158B1 (ko) 펩타이드의 제조방법
KR0161972B1 (ko) 크기가 감소된 lhrh 동족체
EP1003774B1 (en) GnRH ANTAGONISTS BEING MODIFIED IN POSITIONS 5 AND 6
EP0049628B1 (en) Nonapeptide and decapeptide analogs of lhrh, useful as lhrh antagonists, methods of making them, and their pharmaceutical uses
EP0097031B1 (en) Nonapeptide and decapeptide analogs of lhrh useful as lhrh antagonists, their preparation and compositions containing them
US20060276626A1 (en) Methods for the production of peptide derivatives
US5300492A (en) LHRH analogs
DK149046B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af lhrh-analoge nonapeptid- ogdecapeptidderivater eller farmaceutisk acceptable salte deraf
HU204849B (en) Process for producing gnrh-antagonist decapeptide derivatives
HUT62015A (en) Process for producing cyclic gonadotropin releasing hormone antagonists
WO1989007450A1 (en) Lhrh analogs
NO309429B1 (no) Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt peptid
HU185427B (en) Process for preparing antagonists of hormone releasing luteinizing hormone
HU190949B (en) Process for producing peptides antagonistic with hormones for releasing gonadotropine
CN112500455A (zh) 一种多肽固液组合合成戈那瑞林的方法
KR0142195B1 (ko) 고나도리베린의 경쟁적 길항제