NO158219B - Fremgangsmaate for fremstilling av et krystallinsk hemi-syresalt av et cefalosporinderivat. - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et krystallinsk hemi-syresalt omfattende et molekyl av 73—[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyimino-acetamido]-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre [i det følgende betegnet forbindelse (I)]

og et halvt molekyl HC1.

Forbindelse (I) har en høy antibiotisk virkning (Ochiai,

Aki, Moritomo, Okada og Matsushita: Chemical and Pharma-ceutical Bulletin 25, 3115 (1977)). Denne forbindelse og andre cefalosporinderivater er vanligvis ustabile overfor varme, lys, syre, alkali osv., og det er alminnelig er-

kjent at man må være meget forsiktig når man behandler disse forbindelser (dvs. ved isolering, rensing, lagring, osv.). De omfattende studier som er foretatt i forbindelse med foreliggende oppfinnelse viser at når forbindelse (I) omsettes med HCl, oppnås uventet et krystallinsk hemi-syresalt omfattende et molekyl av forbindelse (I) og et halvt molekyl HC1, og at det således oppnådde krystallinske hemi-syresalt har høy stabilitet.

Det krystallinske hemi-syresalt omfattende et molekyl av forbindelse (I) og et halvt molekyl av HC1 fremstilles ved omsetning av forbindelse (I), eller et salt eller en ester derav, med HCl.

Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således tilveie-

bragt en fremgangsmåte for fremstilling av et krystallinsk hemi-syresalt omfattende et molekyl 70-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(1-metyl-lH-tetrazol-5-yl]cef-3-em-4-karboksylsyre og et halvt molekyl HCl og vann i en mengde på 0-3,2%, og denne fremgangs-

måte er kjennetegnet ved at man omsetter 70-[ 2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(1-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre eller et salt eller en lett spaltbar ester derav, med HCl i en mengde på 0,5-10 mol i forhold til ett mol av nevnte utgangs-materiale uttrykt som nevnte karboksylsyre i et vandig opp-

løsningsmiddel og, om nødvendig, bringer det således oppnådde produkt i kontakt med vann og regulerer vanninnholdet ved tørking av nevnte krystallinske hemi-syresalt i luft eller ved bruk av et tørkemiddel.

Det er kjent å fremstille forbindelse (I) i den frie form eller som dens natriumsalt. Det har imidlertid ikke tidligere vært beskrevet eller rapportert noe om den konkrete metode for fremstilling av nevnte forhindelse (I) i form av syresalt. For fremstilling av syresalter har det tidligere vært ansett at,cefaloforbindelser inkludert forbindelse (I) ville forårsake vanskelige problemer fordi de er stabile i vandig oppløsning eller sur oppløsning slik at de har y tendens til å bli dekomponert eller laktonisert (The Journal of Antibiotics, vol. XXVIII, 1000-1002 (1974); J.M.C. 8 22

(1965): J.M.C. 10 966 (1967)). Man har utført forsknings-arbeid for å oppnå cefalosporinprodukter som har en langt bedre stabilitet, er lette å håndtere og kan lagres stabilt i lengde tidsrom, og har uventet funnet (i motsetning til konvensjonell kunnskap eller forventning) at når HCl-syre (sterk) og forbindelse (I) omsettes under spesielle molare mengdeforhold, så oppnås et krystallinsk salt bestående av et molekyl av forbindelse (I) og 1/2 molekyl HCl istedenfor monosaltet. Videre er det også blitt funnet at et slikt krystallinsk 1/2 saltsyresalt er meget stabilt sammenlignet med kjente former, dvs. den frie formen eller natriumsalt-fcrmen av forbindelse (I). Det er videre blitt funnet at når vanninnholdet reguleres innen et spesielt område, så blir stabiliteten enda gunstigere.

Forbindelse (I) kan i foreliggende fremgangsmåte anvendes

som sådan, dvs. i fri form, eller etter omdannelse på konvensjonell måte til et salt, f.eks. med et alkalimetall (f.eks. natrium, kalium eller litium), et jordalkalimetall (f.eks. kalsium- eller magnesium), en organisk base (f.eks. trietylamin eller dietylamin) eller en lett spaltbar ester

(f.eks. silylester). Natriumsaltet er spesielt hensiktsmessig. Det andre utgangsmaterialet, HCl, kan anvendes i gassform, men det benyttes vanligvis mer hensiktsmessig i form av en oppløsning i et oppløsningsmiddel slik som vann. Således anvendes i alminnelighet saltsyre. Reaksjonen utføres i et oppløsningsmiddel. Det mest foretrukne opp-løsningsmiddel er vann, men en blanding av vann og ett eller flere organiske oppløsningsmidler kan likeledes anvendes. De organiske oppløsningsmidler kan f.eks. være C^_^ alkoholer slik som metanol, etanol, n-propanol eller iso-propanol; Cj~ —yQ ketoner slik som aceton eller metyletylketon; etere slik som tetrahydrofuran og dioksan; acetonitril;

og andre vannoppløselige oppløsningsmidler. Etanol og aceton er spesielt foretrukne. Andelen av HCl avhenger av formen av det andre utgangsmaterialet, typen av opp-løsningsmiddel som benyttes, osv., men er minst et halvt mol til et mol av forbindelse (I), og opptil 10 mol til et mol av forbindelse (I). Når forbindelse (I) anvendes i sin frie form, anvendes således HCl i en mengde på

0,5 til 10 mol, fortrinnsvis 1 til 5 mol til et mol av forbindelse (I). Når et alkalimetallsalt, et jordalkali-metallsalt eller et organisk basesalt av forbindelse (I) anvendes, er det foretrukket å benytte ytterligere 1-2

mol HCl for å omdanne et slikt salt til den frie form. Reaksjonen utføres i alminnelighet ved 0-40°C og fortrinnsvis ved 10-30°C. Reaksjonstiden bør variere med renheten av utgangsmaterialene og typen av urenheter. Når renheten av forbindelse (I) eller et salt eller en ester derav er f.eks. 80% eller høyere, er reaksjonstiden fra 30

min. til 24 timer, og fortrinnsvis fra 30 min. til 16 timer. Reaksjonsproduktet kan isoleres, eksempelvis ved filtrering eller sentrifugering. Avhengig av mengden av HCl og typen eller mengden av benyttet oppløsningsmiddel er det tilfeller hvorved det oppnådde krystallinske salt omfatter et molekyl av en forbindelse (I) og et molekyl HCl. I slike tilfeller kan det ønskede produkt lett oppnås ved å bringe det krystallinske salt i kontakt med vann, f.eks. ved å vaske det med vann eller en blanding

av vann og ett eller flere organiske oppløsningsmidler.

Det krystallinske salt omfattende et molekyl av forbindelse (I) og et molekyl HCl vaskes mer spesielt med 5-50 ganger så stort volum som vann, eller en blanding av vann og ett eller flere organiske oppløsningsmidler, eller hensettes eller omrøres i en lignende mengde vann eller en blanding av vann og ett eller flere organiske oppløsningsmidler ved 0-30°C i et tidsrom på fra 5 min. til 2 timer for oppnåelse av den ønskede forbindelsen. Det antas at siden det krystallinske salt omfattende et molekyl av forbindelse (I) og et molekyl HCl er et salt av svak base,

kan kontakt mellom saltet og overskudd vann eller en blanding av vann og ett eller flere oppløsningsmidler re-sultere i en dissosiasjon av saltet til forbindelse (I)

og HCl, fulgt av ytterligere omdannelse til den ønskede stabile forbindelse.

Det resulterende krystallinske hemisyresalt omfattende

et molekyl av forbindelse (I) og et halvt molekyl HCl kan inneholde vann og/eller organisk oppløsningsmiddel som et krystall-oppløsningsmiddel eller som et ved-hengende oppløsningsmiddel, og et slikt salt omfattes også av foreliggende oppfinnelse. Mengden av vann som fore-ligger, er vanligvis ikke over 3%, men jo mindre vann som inneholdes, jo høyere er krystallenes stabilitet. Vanninnholdet kan reguleres ved tørking av krystallene i luft eller under anvendelse av et tørkemiddel slik som silisiumdioksydgel eller fosforpentoksyd under redusert trykk.

Det foretrukne vanninnhold er 0,05-1%, og for oppnåelse

av bedre resultater 0,1-0,5%. Når ett eller flere organiske oppløsningsmidler inneholdes i saltet, kan de om ønsket fjernes ved å bringe en fuktig gass eller luft i kontakt.med krystallene for å fjerne slike oppløsnings-midler .

Ved elementæranalyse er det bekreftet at den således oppnådde forbindelse omfatter et molekyl av forbindelse (I) og et halvt molekyl HCl, og ved mikroskopisk eller pola-risasjons-mikroskopisk observasjon, røtgenstrålediffraksjon o.l. er forbindelsen påvist å være krystallinsk. Det infrarøde absorpsjonsspektrum for krystallene viser dessuten skarpe topper som ikke er absorbert for amorfe pulvere. Dette krystallinske hemi-syresalt som omfatter et molekyl av forbindelse (I) og et halvt molekyl HCl, er stabilt, forandrer ikke sin krystallinske form selv ved tørking, og er desuten tungt oppløselig i vann,

slik at det har mange fordeler slik som lang lagringstid.

Det krystallinske hemi-syresalt fremstilt ifølge oppfinnel-sen kan adminstreres oralt som sådan, eller det kan alter-nativt anvendes parenteralt eller eksternt i form av en oppløsning i destillert vann ved hjelp av et ikke-toksisk alkalihydroksyd eller alkalisalt, f.eks. natriumhydrogenkarbonat, natriumkarbonat eller trinatriumfosfat for innstilling av den vandige oppløsning til en ønsket pH-verdi, ionetype eller ionestyrke. En vandig oppløsning inneholdende 3/4 mol natriumkarbonat for hvert mol av det krystallinske hemi-syresalt kan f.eks. ikke bare anvendes som et utvendig desinfeksjonsmiddel eller steriliserings-middel for desinfeksjon av kirurgisk apparatur, sykestuer, drikkevann, etc, men som et terapeutisk middel i nedenstående og andre anvendelser. For behandling av infeksjonssyksommer forårsaket av gram-positive bakterier (f.eks. Staphylococcus aureus) eller gram-negative bakterier (f.eks. Escherichia coli, Klebsiella pneumonae, Proteus vulgaris eller Proteus morganii) i varmblodige dyr slik som mennesker eller hunder kan således en vandig oppløsning fremstilt som angitt ovenfor adminsitreres intramuskulært eller intravenøst. Når en slik vandig oppløsning anvendes som et utvendig des-inf eks jonsmiddel for kirurgiske instrumenter, prepareres den slik at den inneholder 100<y som oppløsningsmiddel-fritt produkt pr. ml og påføres de kirurgiske instrumentene. For behandling av urinveier infisert med Escherichia coli hos mennesker kan den vandige oppløsning administreres intravenøst i en daglig dose på omkring 2,5-25 mg/kg som oppløsningsmiddelfritt produkt i 3 oppdelte doser daglig. Det krystallinske hemi-syresalt omfattende forbindelse (I) og HCl og det ikke-toksiske alkalihydroksyd eller alkalisalt kan lagres uavhengig eller i blanding, eller under en inert gass eller under redusert trykk i en forseglet beholder. Disse produkter blir på bestilling oppløst i sterilt destillert vann eller et ekvivalent middel.

Nedenstående eksempler illustrerer foreliggende oppfinnelse ytterligere.

Referanseeksempel 1

Antimikrobiell virkning for det angjeldende produkt i opp-løsningsmiddelfri form (minimum inhiberende konsentrasjoner). Forsøk foretatt ved bruk av en oppløsning oppnådd ved opp-løsning av krystallinsk 1/2 HCl-salt av forbindelse (I) i en fortynnet vandig HCO^-oppløsning.

Antimikrobielt spektrum (agar-fortynning)

Staphylococcus aureus FDA 209P:

1,56 mcg/ml

Staphylococcus ayreus 1840:

3,13 mcg/ml

Escherichia coli NIHJ-2:

0,1 mcg/ml

Escherichia coli 0-111:

0,024 mcg/ml

Escherichia coli T-7:

0,39 mcg/ml

Klebsiella pneumoniae DT:

0,0 24 mcg/ml

Proteus vulgaris IFO 3988:

0,024 mcg/ml

Proteus morganii IDO 3168:

0,1 mcg/ml

Proteus mirabilis GN4359:

0,05 mcg/ml

Proteus rettgeri TN336:

<0,012 mcg/ml

Citrobacter freundii GN1706:

0,20 mcg/ml

Det forstås at det krystallinske hemi-syresalt omfattende

et molekyl av forbindelse (I) og 1/2 molekyl HCl kan anta tautomere strukturer med hensyn tik sin 2-aminotiazol-4-yl-gruppe, dvs. 2-aminotiazol-formen og 2-iminotiazolin-formen. Mens foreliggende oppfinnelse omfatter begge disse tautomere former, er 2-aminotiazol-formen her angitt i alle henvisninger til denne forbindelsen.

Eksempel 1

I 3,3 1 vann oppløses 16 5,0 g av natriumsaltet av 70-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre og under omrøring av oppløsningen ved 25,5°C tilsettes dråpevis 0,3 1 av en 10% vandig oppløsning av HCl. I løpet av tilsetningen utskilles den ovennevnte karboksylsyre som et fargeløst bunnfall og oppløses deretter. Ettersom denne oppløsning omrøres i en time, dannes fargeløse krystaller. Krystallene oppsamles ved filtrering (pH for filtrat 1,1), vaskes med vann, dreneres godt, tørkes over silisiumdioksydgel (blått) ved 25°C i en eksikator evakuert med en vakuumpumpe (ca. 1 mm Hg) i 5 timer, og hensettes i 24 timer under redusert trykk, hvorved 154,5 g av krystallene av den ønskede karboksylsyre-1/2 HCl oppnås.

Elementanalyse (ci6H17N9°5<S>3• l/2 HCl.1/2 H20)

Beregnet: C 35,67; H 3,46; N 23,40; S 17,85; Cl 3,29 Funnet: C 35,78; H 3,41; N 23,46; S 17,88; Cl 3,46

Vanninnhold (Karl-Fischer-metode, K.F.): 2,1% (beregnet 1,7%) NMR (90 MHz, DMSO-dJ D 6: 3,54, 3,79 (hver 1H, dublett, J=18Hz), 3,89 (3H, singlett), 3,91 (3H, singlett), 4,18, 4,36 (hver 1H, dublett, j=13Hz), 5,09 (hver 1H, dublett, J=5Hz), 5,71 (1H, kvartett, J=5, 9Hz), 6,80 (1H, singlett), 9,65 (1H, dublett, J=9Hz).

IR (KBr)cnf<1>: 1780 (3-laktam) (Fig. 2).

Pulverrøntgen^-stråle-dif f raks jonsmønster (Fig. 1; CuKa,

40kV, 45mA) for dette produkt skyldes dets krystallinitet med interplanare mellomrom på 9,1Å, 6,7Å, 6,5Å, 5,0Å, 4,1Å, 3,9Å, 3,7Å, 3,5Å, 3,4Å, 3,3Å, 3,2Å.

En del av ovennevnte produkt tørkes over & 2®5 ve(^ 25°C i en eksikator evakuert med en vakuumpumpe (ca. 1 mm Hg) i 5 timer, og hensettes i 16 timer under redusert trykk, hvorved vanninnholdet reduseres til 0,3% (K.F.). Pulver-røntgenstråle-diffraksjonsmønsteret og IR for denne forbindelsen er i overensstemmelse med mønsteret og spekteret for den ovennevnte forbindelse med et vanninnhold på 2,1%. Den udekompo-nerte del av denne forbindelse var etter henstand ved 40°C

i en måned ikke mindre enn 98%.

Eksempel 2

I 18 ml vann suspenderes 1,00 g 73-[2-(2-aminotiazol-4,yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetoamido]-3-](l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)-tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre, og under omrøring ved 25°C tilsettes 2 ml av en 10% vandig oppløsning av HCl. Den resulterende oppløsning omrøres ved denne temperatur i 30 min., hvorved fargeløse krystaller utskilles. Krystallene oppsamles ved filtrering, vaskes med vann og tørkes i luft. Ved hjelp av ovennevnte metode oppnås 0,73 g av karboksylsyre-1/2 HC1-saltet (vanninnhold 3,2% (K.F.)).

Ved analyse av pulver-røntgenstråle-diffraksjonsmøster og IR finnes det at denne forbindelse er i overensstemmelse med forbindelsen i eksempel 1.

Eksempel 3

En blanding av 5 ml aceton og 1 ml vann oppløses i

0,50 g 7&-[2-(2-aminotiazol)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)-tiometyl]-cef-3-em-4-karboksylsyre. Mens oppløsningen omrøres ved 23°C, tilsettes 0,15 ml av en 10% vandig oppløsning av HCl. Blandingen omrøres i 1,5 timer, og de resulterende fargeløse krystaller oppsamles ved filtrering, vaskes med aceton og tørkes over P2°5 vec^ romtemperatur under redusert trykk (ca. 1 mm Hg) i ca. 3 timer. Ved hjelp av den oven-

nevnte metode oppnås 0,23 g av karboksylsyre-1/2 HCl-

saltet (vanninnhold 1,8%)(K.F.)).

Elementanalys<e> (<C>16H17N9°5<S>3•<1/>2 HCl.1/2 H20.1/6(CH3)2CO) Beregnet: C 36,13; H 3,58; N 22,98; S 17,53; Cl 3,23

Funnet: C 36,51; H 3,41; N 23,35; S 17,51; Cl 2,81

NMR-spekteret for dette produkt viser at det er solvalisert med 1/6 mol aceton. Pulver-røntgenstråledifraksjonsmønsteret og IR-spekteret for den ovenfor angitte forbindelse er i overensstemmelse med mønsteret og spekteret for forbindelsen oppnådd i eksempel 1.

Eksempel 4

(I) I 720 ml aceton suspenderes 78,5 g 70-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(1-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre,

og under avkjøling ved 5°C og omrøring, tilsettes 72 ml vann. Den således oppnådde oppløsning filtreres gjennom "Celite" og vaskes med en blanding av aceton (65 ml) og vann (3 ml). Filtratet og vaskevannet kombineres og under avkjøling ved 5°C og omrøring tilsettes 23 ml 12N

HCl. Blandingen omrøres i 1,5 timer og etter fjerning av kjøleapparaturen, foretas ytterligere krystaller oppsamlet med et glassfilter og vaskes med 500 ml aceton. En fuktig nitrogengass som fremstilles ved føring av nitrogengass gjennom en flaske inneholdende vann, føres over nevnte krystaller i en mengde på 1,9-3,3 l/min. i 10 timer. Krystallene (vanninnhold 8,9% målt for en prøve ved hjelp av K.F.-metoden) tørkes over silisiumdioksyd-

gel (blått) i en eksikator under redusert trykk. Ved hjelp av den ovenfor angitte metode oppnås 65,0 g av nevnte karboksylsyre-monohydroklorid.

Elementanalyse (C-^gH^^NgO^S^ . HCl. 1 1/2 H20)

Beregnet: C 33,42; H 3,68; N 21,92; S 16,73; Cl 6,17 Funnet: C 33,59; "H 3,56; "~N 22,16; S 16,79; Cl 5,94

Dette produkt inneholder 4,6% vann (K.F. beregnet 4,7%)

og 110 ppm aceton.

NM R (90 MHz, DMSO-dg) 6: 3,57, 3,81 (hver 1H, dublett, J=18Hz), 3,93 (6H, singlett), 4,19, 4,38 (hver 1H, dublett, J=13Hz), 5,12 (1H, dublett, J=5Hz), 5,73 (1H, kvartett,

J=5, 9Hz), 6,90 (1H, singlett), 9,78 (1H, dublett, J=5Hz).

IR(KBr)cm<-1>: 1770 (3-laktam).

Pulver-røntgenstråle-diffraksjonsmønsteret for dette produkt bekrefter dets krystallinitet. (2) I 2 ml vann duspenderes 0,20 g av karboksylsyre-monohydrokloridet oppnådd i (1), og suspensjonen omrøres ved 26°C i 10 min. (I løpet av omrøringen observeres en endring i krystallformen.) De resulterende krystaller oppsamles ved filtrering, vaskes med vann og tørkes over P2O5 under redusert trykk (ca. 1 mm Hg) i ca. 5 timer.

Ved hjelp av den ovenfor angitte metode oppnås 0,17 g av nevnte karboksylsyre-1/2 HCl (vanninnhold 0,9% (K.F.)).

Elementanalys<e> (C16H17N9°5S3• 1/ 2 HCl.1/4 H20)

Beregnet: C 35,97; H, 3,40; N 23,59; Cl 3,32

Funnet: C 35,95; H 3,11; N 23,49; Cl 3.08.

Pulver-røntgenstråle-diffraksjon og IR-analyser viser at dette produkt er identisk med forbindelsen oppnådd i eksempel 1.

Forsøk I

Sammenlignende stabilitetstest

(A) 7(3-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyimino-

a etamido]-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre (forbindelse I), 1/2 HCl, ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1T (se data i eks. 1).

(B) Fremstilling av forbindelse (I)

Denne fremstilling ble foretatt i halv målestokk

ifølge metoden i eksempel 14 i US patent 4.166.115 hvor 7-amino-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4- karboksylsyre ble benyttet istedenfor 7-aminocefalosporan-syre.

Fosforoksyklorid (1,9 g) ble tilsatt dråpevis ved 5- 8°C til en suspensjon av 2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoeddiksyre (2,0 g) i tørt etylacetat (20 ml). Etter omrøring i 30 min. ved ca. 5°C ble bis(trimetylsilyl) acetamid (0,43 g) tilsatt dertil ved den samme temperaturen. Etter omrøring i 10 min. ved den samme temperaturen ble fosforoksyklorid (1,9 g) tilsatt dråpevis dertil ved 5-8°C hvoretter blandingen ble omrørt i 30 min. ved den samme temperaturen. Tørr dimetylformamid (0,8 g) ble tilsatt dråpevis dertil ved 5-7°C, hvoretter den resulterende blanding ble omrørt i 30 min. ved den samme temperaturen for oppnåelse av en klar oppløsning. På den annen side ble natriumacetat (1,65 g) tilsatt til en oppløsning av 7-amino-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre (1,6 g). i en vandig oppløsning (10 ml) av natriumbikarbonat (0,85 g) og deretter ble aceton (10 ml) tilsatt dertil. Til denne oppløsning ble den ovenfor oppnådde etylacetatoppløsning tilsatt dråpevis under omrøring ved 0-5°C idet pH-verdien for denne oppløsningen ble holdt ved 7,0-7,5 med 20% vandig oppløsning av natriumkarbonat. Blandingen ble omrørt i en time ved den samme temperaturen. Et uoppløselig materiale ble frafiltrert, og det vandige laget i filtratet ble . fraseparert. Det vandige laget ble konsentrert under redusert trykk for å fjerne de organiske oppløsningsmidlene, justert til pH 4,5 med natriumbikarbonat og underkastet kolonnekromatografi på "Diaion HP-20"-harpiks ved bruk av 25% vandig oppløsning av isopropyl-alkohol som elueringsmiddel. Eluatet ble lyofilisert for oppnåelse av forbindelse (I) (1,5 g).

(C) Fremstilling av natriumsalt av forbindelse (I)

I 22 ml tørr tetrahydrofuran ble det oppløst

500 mg av 2-(2-kloracetamidotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksy-iminoeddiksyre og 182 mg trietylamin ble tilsatt under omrøring. Denne blanding ble avkjølt til -10°C og 245 mg isobutylklorformiat ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble omrørt ved denne temperaturen i 2 timer. Den resulterende oppløsning av blandet syreanhydrid ble tilsatt 182 mg trietylamin sammen med en oppløsning (isavkjølt)

av 590 mg 7-amino-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]-cef-3-em-4-karboksylsyre i 18 ml 50% vandig tetrahydrofuran. Blandingen ble omrørt under isavkjøling i 1 time og ved romtemperatur i 2 timer. Deretter ble mesteparten av tetrahydrofuranen avdestillert under redusert trykk, og resten ble fortynnet med 100 ml vann og med 40 ml etylacetat. Deretter ble det vandige laget under omrøring justert til

pH på ca. 2 med IN HCl. De to lagene ble adskilt og vannlaget ble ekstrahert med 60 ml etylacetat. Etylacetat-lagene ble oppsamlet, vasket med 50 ml av en mettet, vandig oppløsning av natriumklorid og tørket. Etylacetatet ble avdestillert for oppnåelse av 700 mg 7-[2-(2-kloracetamido-tiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(1-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre som en viskøs olje.

■ Hele mengden av det ovenfor nevnte produkt ble oppløst i 15 ml tetrahydrofuran, fulgt av tilsetning av 226 mg tiourea og 406 mg natriumacetattrihydrat. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer. Etter reaksjonen ble bunnfallet oppsamlet ved filtrering,

vasket med eter og oppløst i 10 ml vann. Oppløsningen ble justert til pH på ca. 7,0 med natriumhydrogenkarbonat og renset ved kolonnekromatografi på "Amberlite XAD-2". Ved den ovenfor angitte metode ble det oppnådd 125 mg natrium-

salt av forbindelse (I) som et hvitt pulver.

Elementanalyse for C16H16<Ng0>5<S>3<N>a.2H20

Beregnet: C, . 33,75; H, 3,54; N, 22,13

Funnet: C, 34,18; H, 3,57; N, 21,79 NMR-spektrum (60 MHz, i D20): 3,59 ppm (2H, kvartett, 2-CH2), 3,93 ppm (3H, singlett, = N0CH3), 3,98 ppm (3H, singlett, N-CH3), 4,08 ppm (2H, kvartett, 3-GH2), 5,12 ppm (1H, dublett, 6-H), 5,72 ppm (1H, dublett, 7-H), 6,93 ppm (1H, singlett, tiazol 5-H)

Produktene oppnådd i (A), (B) og (C)

ble lagret i en forseglet ampulle ved 60°C i en uke og deretter ble den prosentvise rest av forbindelse (I) bestemt ved hjelp av væskekromatografi. De prosentvise rester var som følger:

Forsøk II

Stabilitet for forbindelse (I) - 1/2 HCl-salt

ved forskjellige fuktlghetsinnhold

En del av 1/2 HCl-saltet av forbindelse (I) fremstilt ifølge eksempel 1 ble dehydratisert og tørket på samme måte som i eksempel 1 og ble deretter hensatt for gradvis fuktighetsabsorpsjon. Ved forskjellige fuktighets-absorpsjoner, dvs. 1,0%, 1,4%, 1,6%, 2,6% og 3,29% (mak-simum fuktighetsabsorpsjon eller 1 molekvivalent), ble det tatt prøver. Disse prøvene ble lagret ved 40°C, 50°C og 60°C i forskjellige tidsperioder. Deretter ble rest-prosenten målt for hver prøve ved hjelp av HPLC (høyeffektiv væskekromatografi) og ved sylinderplatemetoden. (bioanalyse). Resultatene er angitt i nedenstående tabell som illustrerer den tendens, at stabiliteten nedsettes etter hvert som fuktig fuktighetsinnholdet øker.

Claims (1)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av et krystallinsk hemi-syresalt omfattende et molekyl 70-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(1-metyl-lH-tetrazol-5-yl)tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre og et halvt molekyl HCl og vann i en mengde på 0-3,2%, karakterisert ved at man omsetter 70-[2-(2-aminotiazol-4-yl)-(Z)-2-metoksyiminoacetamido]-3-[(l-metyl-lH-tetrazol-5-yl)-tiometyl]cef-3-em-4-karboksylsyre eller et salt eller er lett spaltbar ester derav, med HCl i en mengde på 0,5-10 mol i forhold til ett mol av utgangsmaterialet uttrykt som nevnte karboksylsyre i et vandig oppløsningsmiddel og,

   om nødvendig, bringer det således oppnådde produkt i kontakt med vann og regulerer vanninnholdet ved tørking av nevnte krystallinske hemi-syresalt i luft eller ved bruk av et tørkemiddel.