NL9001639A - Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen. - Google Patents

Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen. Download PDF

Info

Publication number
NL9001639A
NL9001639A NL9001639A NL9001639A NL9001639A NL 9001639 A NL9001639 A NL 9001639A NL 9001639 A NL9001639 A NL 9001639A NL 9001639 A NL9001639 A NL 9001639A NL 9001639 A NL9001639 A NL 9001639A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
fluorescein
nhch3
formula
me2so
ptf
Prior art date
Application number
NL9001639A
Other languages
English (en)
Original Assignee
Amc Amsterdam
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amc Amsterdam filed Critical Amc Amsterdam
Priority to NL9001639A priority Critical patent/NL9001639A/nl
Priority to DE69123251T priority patent/DE69123251T2/de
Priority to AU82863/91A priority patent/AU8286391A/en
Priority to DK91913437.9T priority patent/DK0539466T3/da
Priority to JP51258291A priority patent/JP3512792B2/ja
Priority to US07/975,586 priority patent/US5580990A/en
Priority to PCT/NL1991/000126 priority patent/WO1992001699A1/en
Priority to EP91913437A priority patent/EP0539466B1/en
Priority to ES91913437T priority patent/ES2097213T3/es
Priority to AT91913437T priority patent/ATE145403T1/de
Publication of NL9001639A publication Critical patent/NL9001639A/nl
Priority to US08/470,265 priority patent/US5714327A/en
Priority to GR970400266T priority patent/GR3022581T3/el
Priority to US08/910,070 priority patent/US5985566A/en
Priority to US09/131,625 priority patent/US6133038A/en
Priority to JP2003326524A priority patent/JP3947508B2/ja

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B11/00—Diaryl- or thriarylmethane dyes
    • C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F15/00—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic System
    • C07F15/0006—Compounds containing elements of Groups 8, 9, 10 or 18 of the Periodic System compounds of the platinum group
    • C07F15/0086—Platinum compounds
    • C07F15/0093—Platinum compounds without a metal-carbon linkage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means

Description

Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen.
Dergelijke Pt-houdende verbindingen zijn bekend uit Reedijk, J. Struct. Bonding (Berlijn), 67: 53-72.
Dit artikel beschrij ft de antitumorverbinding cis-Pt(NH3)2Cl2, welke verbinding een hoge affiniteit heeft voor (o.a.) eiwitten en DNA moleculen en met name blijkt een dergelijke verbinding een uitgesproken affiniteit te hebben voor het N7 stikstofatoom in de purinebasen Guanine en Adenine, alsmede voor zwavelgroepen in macromoleculen.
Door dissociatie van de twee chloorliganden ontstaan twee reactieve plaatsen, waarmee dergelijke platinaverbindingen crosslinks kunnen vormen tussen twee nabije Guanine- en/of Adeni-nebasen in dezelfde of tegenoverliggende DNA-strengen. Op dit mechanisme berust de toepassing van cis-platina als anti-tumor drug (cytostaticum).
Daarnaast zijn uit dezelfde literatuur verwante carbo-platinaverbindingen bekend, die eveneens een hoge affiniteit hebben voor o.a. eiwitten en DNA moleculen op soortgelijke wijze als cis-platinaverbindingen.
Daarentegen blijken enkelvoudig gechloreerde platinaverbindingen als Pt (dien) Cl hun affiniteit voor DNA te behouden maar vormen geen crosslinks en interfereren slechts in geringe mate met de baseparing van complementaire DNA-strengen, en zijn als zodanig niet anti-tumor actief.
Volgens het Amerikaanse octrooischrift No. 4.711.955 wordt in de huidige medisch-biologische praktijk, in het bijzonder de diagnostische praktijk, bij voorkeur DNA/RNA technologie toegepast wanneer niet-radioactieve nucleïnezuur-labelingstech-nieken ter beschikking staan. De bekende thans toegepaste niet-radioactieve labelingstechnieken voor DNA en RNA zijn globaal in te delen in twee categorieën.
1. Labeling welke verloopt via enzymatische of organische syntheseroutes; bijvoorbeeld biotine, bromodeoxyuridine (BrdU), digoxygenine, fluoresceine en peroxidase.
2. Labeling door directe chemische koppeling, zoals fotobiotine, AAF, kwik, sulfon-groepen.
Toepassing van dergelijke labels brengt een aantal problemen met zich mee, welke met name te maken hebben met de complexiteit van de labelingsprocedure, de soms beperkte lengte van de te labelen synthetische oligonucleotiden, het gebruik van gezondheids-schadelijke stoffen en de stabiliteit van het label, wanneer het gebonden is aan het nucleïnezuur.
De uitvinding beoogt thans platinahoudende verbindingen te verschaffen, bij toepassing waarvan de bovengenoemde nadelen op doeltreffende wijze zijn opgeheven.
Hiertoe verschaft de uitvinding een verbinding met de formule (Ptn(w) (x) (y) (z)} of (PtIV(u) (v) (w) (x) (y) (z)} respectievelijk met de structuurformule 1 of 2 van het formuleblad, waarin u, v, w, x, y en z al dan niet dezelfde al dan niet onderling verbonden liganden voorstellen, waarvan tenminste één een leaving ligand is en tenminste één van de overige een detecteerbare merkergroep voorstelt.
Een dergelijke verbinding, die op zichzelf nieuw is, en enerzijds is voorzien van een direct of indirect detecteerbare merkergroep, zoals bijvoorbeeld een hapteen, fluoresceïne of rhodamine en anderzijds is voorzien van een goede "leaving groep", is een bijzonder geschikt en nieuw DNA label met de algemene aanduiding PtM (Pt staat voor platina en M voor merkergroep) met unieke eigenschappen.
Gebleken is immers, dat een dergelijke verbinding spontaan en irreversibel hecht aan DNA in waterig milieu. Voorts is het zo, dat het aldus gelabelde DNA door alcoholprecipitatie kan worden gescheiden van de overtollige verbinding met de formule 1 of 2 van het formuleblad. Een belangrijk voordeel is, dat het aldus gelabelde DNA direct na hybridisatie kan worden gedetecteerd door middel van een fluorescentie-microscoop of indirect met een van de bekende immunohistochemische kleuringstechnieken.
De voordelen van de onderhavige platinahoudende verbindingen zijn kort samengevatï 1. Directe - bijna instant - labeling van macromoleculen zonder noodzaak van enzymatische of organosynthetische procedures.
2. Eenstapszuivering van gelabelde moleculen via een simpele routinetechniek.
3. Directe en/of indirecte detectie van gelabelde moleculen via vrijwel alle bekende (microscopische) technieken.
Als extra voordeel kan genoemd worden, dat voor specifieke doeleinden (bijvoorbeeld extra gevoelige in situ hybridisatie van RNA) een radioactieve (14C of 35S)-platinahoudende verbinding volgens de uitvinding als eenvoudige en snelle (niet enzymatische) labeling van probes kan worden toegepast, gevolgd door directe detectie door middel van autoradiografie.
Een andere belangrijke nieuwe toepassing van met de onderhavige verbindingen gelabelde probes is in situ hybridisatie in de elektronenmicroscoop, waarbij de hoge massa van het plati-na-atoom in de verbinding volgens de uitvinding zorg draagt voor een directe probe-specifieke lokale verhoging van de elektronendichtheid.
Als leaving ligande blijkt volgens de uitvinding (CH3)2SO, H20 of Cl bijzonder geschikt te zijn. Opgemerkt wordt, dat naast de zojuist genoemde voorkeurs leaving liganden in de verbinding met formule 1 respectievelijk formule 2 van het formuleblad de volgende groepen in aanmerking komen, Br', J' of F'? S042", N03‘, P043', C032', en analogen zoals ethylnitraat; fosfonaten, oxalaten, citraten en derivaten ervan; H20, ROH en RO', waarin R een organische restgroep is en gesubstitueerde sulfoxides R1R2SO, waarin R1 en R2 al dan niet gelijk aan elkaar een organische restgroep voorstellen.
Als de detecteerbare merkergroep in de verbindingen met formule 1 of 2 van het formuleblad verdient een fluorescerende groep in het algemeen de voorkeur. Een bijzondere voorkeur verdient fluoresceineisothiocyanaat (FITC) of tetramethylrhodaminei-sothiocyanaat (TRITC).
Een zeer geschikte verbinding volgens de uitvinding is {Pt (ethyleendiamine) (Me2SO) (f luoresceine-NH (CS) -NHCH3)}, hierna als PtF afgekort.
De nieuwe verbindingen volgens de uitvinding zijn bijzonder geschikt voor virus diagnostische doeleinden, bacterie diagnostische doeleinden, voor detectie van genetische afwijkingen, detectie van gen expressie enz.
Er zijn een aantal virussen bekend, die zich niet of zeer moeilijk in kweek laten brengen, en waarvan de serologische diagnostische methoden uiterst ingewikkeld zijn, of die buiten het lichaam erg labiel zijn en daarom ongeschikt in besmettings-testen.
Bij enkele van deze virussen kan de diagnose bovendien worden bemoeilijkt door de noodzaak tot differentiatie tussen een acuut stadium van de ziekte, dragerschap, of virus genoom insertie in het humane DNA. Door gebruik van DNA-probes zijn hiermee inmiddels vorderingen gemaakt. Sommige virussen hebben bovendien ernstige pathogene effecten, en worden in relatie gebracht met het ontstaan van maligne tumoren. De nauwkeurige detectie van deze virussen en het correleren met een klinische follow-up van patiënten is derhalve een belangrijke zaak.
In principe kunnen met DNA/RNA-probes virusstammen en subtypen van elkaar worden onderscheiden.
Detectiemethoden met behulp van gelabelde DNA- of RNA-probes lijken deze problemen te kunnen opvangen. Men heeft veel vorderingen gemaakt in de diagnose van zowel DNA- als RNA-virus-sen. Het voordeel van deze methoden is dat men direct het patien-tenmateriaal (uitstrijkjes, monsters van blaar-, neus- en andere vochten, weefselcoupes enz.) kan onderzoeken op de aanwezigheid van virus DNA/RNA. Ook retrospectieve studies hebben reeds belangrijke informatie opgeleverd over virale oorzaken van sterfte enz.
Voorts omvat de uitvinding een werkwijze voor de bereiding van Pt-houdende verbindingen volgens de uitvinding met de formule (Ptn(w) (x) (y) (z)} of PtIV(u) (v) (w) (x) (y) (z) respectievelijk met de structuurformule 1 of 2 van het formuleblad, waarin u, v, w, x, y en z de eerder vermelde betekenissen hebben, met het kenmerk, dat de Pt-houdende verbindingen op voor analoge verbindingen bekende wijze worden bereid.
De voorkeursverbinding volgens de uitvinding, te weten PtF wordt bereid door omzetting van fluoresceine-N=C=s met CH3NH2 in water, waarna de genoemde fluoresceine-NH(CS)NHCH3 uit de oplossing wordt neergeslagen door aanzuren tot een pH van 2-3, waarna het ontstane neerslag in water wordt gesuspendeerd en de pH van de suspensie op een waarde van 10-11 wordt ingesteld door toevoeging van een base, onder oplevering van een helder gele oplossing, aan welke oplossing {Pt(ethyleendiamine) (Me2SO) Cl} in water wordt toegevoegd en het reactiemengsel bij omgevingstemperatuur in het donker wordt geroerd, waarna het niet gereageerde fluoresceine-NH(CS)NHCH3 door aanzuren wordt neergeslagen en af gefiltreerd en tenslotte het filtraat wordt gevriesdroogd onder oplevering van {Pt(ethyleendiamine) (Me2SO) (fluoresceine-NH(CS) -NHCH3) } (PtF) .
Vervolgens strekt de uitvinding zich uit tot een diagnostische kit ten gebruike voor het detecteren van virussen, bacteriën, parasieten, genetische afwijkingen, gen expressie, welke kit een Pt-houdende verbinding volgens de uitvinding bevat.
De uitvinding wordt thans aan de hand van de volgende niet limitatieve voorbeelden nader toegelicht.
Voorbeeld I
Bereiding van PtF voor labelingsdoeleinden.
Eerst wordt fluoresceine-NH(CS)NHCH3 bereid door 100 mg fluoresceine-N=C=S te laten reageren met 1 ml CH3NH2 in 100 ml water. De reactie neemt onder continu roeren bij kamertemperatuur in het donker 1 uur in beslag. Het verkregen reactieprodukt, fluoresceine-NH(CS)NHCH3, wordt uit de oplossing neergeslagen door aanzuren met HC1 (1 mol/liter {M}) tot een pH van 2-3. Het neerslag wordt gewassen in water en dan verzameld.
Dan werd een suspensie van 100 mg (0.237 mmol) van het aldus verkregen fluoresceine-NH(CS)NHCH3 in 95 ml water met NaOH (1 M) op een pH van 10-11 gebracht, waarbij een helder gele oplossing werd verkregen. Aan deze oplossing werd 72 mg (0.178 mmol) [Pt(ethyleendiamine) (Me2SO)Cl]Cl in 5 ml water toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 5-10 minuten bij kamertemperatuur in het donker langzaam geroerd. Het niet gereageerde fluo-resceine-NH(CS)NHCH3 werd neergeslagen door aanzuren tot een pH van 2-3 met HC1 (1 M) en verwijderd door filtratie. Het helder gele filtraat werd gevriesdroogd onder oplevering van een stabiele droge verbinding {Pt(ethyleendiamine) (Me2S0) (fluoresceine-NH(CS)-NHCH3)}, afgekort PtF.
In beginsel kan op analoge wijze een reactie worden uitgevoerd met als uitgangsstof als boven vermeld met dien verstande dat fluoresceine vervangen wordt door bijvoorbeeld rhoda-mine, AMCA, biotine, digoxigenine of enig ander hapteen, welke zodanig gemodificeerd kan zijn dat er een dubbelgebonden zwavel (S) atoom, een -SR groep, een NR'R" groep of een ring stikstof (-N-) in voorkomt, waarin R'R", al dan niet aan elkaar gelijk, een organische restgroep voorstellen. (Ook H is mogelijk). Deze S- of N-atomen dienen dan als bindingsligand voor het platina (Pt) atoom.
Voorbeeld II
Nucleïnezuur-labeling met PtF.
De droge PtF verbinding werd opgelost in een concentratie van 1 mg/ml in gedestilleerd water, dat met NaOH op een pH van 9-10 werd gebracht.
Vervolgens werd DNA (enkel- of dubbel strengs) of RNA in een willekeurige concentratie (bijvoorbeeld 100 microgram/ml) opgenomen in laag zout buffer van een pH van ±8 (bijvoorbeeld 10 mM TRIS-HC1) en eventueel gefragmenteerd door ultrasonicatie.
Aan de aldus verkregen nucleinezuuroplossing werd een tienvoudige molaire overmaat aan PtF oplossing toegevoegd en na goed mengen werd het reactiemengsel 30 tot 60 minuten geïncu-beerd in het donker bij kamertemperatuur.
Aan het reactiemengsel werd vervolgens eentiende volume-deel van een NaAcetaat(3M) oplossing van een pH van 5.6 toegevoegd en na mengen werden vervolgens twee delen ethanol toegevoegd, waarna grondig werd geroerd en het reactievaatje vervolgens gedurende 15 minuten bij 80eC of gedurende 2 uur bij -20°C werd geïncubeerd.
Het PtF gelabelde nucleinezuur werd vervolgens neergeslagen door centrifugeren bij 10.000 x g gedurende 7 minuten. De verkregen pellet werd gewassen in 90% ethanol en het met PtF gelabelde nucleinezuur werd opgelost in de gewenste concentratie in een willekeurige buffer (bijvoorbeeld 10 mM TRIS-HC1, een pH van 7.5, 0.3 mM EDTA).
Het aldus met PtF gelabelde nucleinezuur is nu gereed voor gebruik.
Voorbeelden van het gebruik van met PtM gelabelde nucleinezuren: Voorbeeld III
Humaan papilloma-virus is niet te kweken, maar enkele subtypen (HPV 16/18) worden nadrukkelijk in verband gebracht met het ontstaan van maligne tumoren aan o.a. cervix en penis.
Door nu gezuiverd DNA van een dergelijk papillomavirus te labelen met PtM en vervolgens een in situ hybridisatieprocedu-re uit te voeren op cellen of weefsel van bijvoorbeeld de baar-moederhals kan de aanwezigheid van het risico dragende type papillomavirus zeer specifiek worden aangetoond door middel van een directe fluorescentieprocedure of een indirecte immunohisto-chemische procedure met anti-PtM antibodies.
Voorbeeld IV
a) Humaan papilloma-virus is niet te kweken, maar enkele subtypen (HPV 16/18) worden nadrukkelijk in verband gebracht met een grote kans op het ontstaan van maligne tumoren aan cervix en penis. Verder zijn o.a. probes ontwikkeld voor de detectie van DNA-(Vaccinia, Herpes simplex (HSV1/2, Epstein Barr, en adenovirus) en RNA-virussen (Rota virus, influenza A, Cocksackie B). Tot op heden is de diagnose van acute infectie met Hepatitus B virus alleen mogelijk door inoculatie van chimpansees (!), het virus kan namelijk niet in menselijke cellen worden gekweekt.
b) Ook Varicella zoster virus is zeer moeilijk te kweken: het duurt 5-14 dagen, voordat een kweek beoordeeld kan worden. Bovendien is het virus zeer labiel en kan tijdens het transport geïnactiveerd raken. Een negatieve test wil dus niet zeggen dat men de ziekte niet heeft. Daarenboven is VZV infectie op morfologische gronden ononderscheidbaar van infecties met Herpes Simplex Virus. Zelfs commercieel verkrijgbare antisera geven in immunohistochemische tests geen uitsluitsel, c) Cytomegalie virus is zeer moeizaam te kweken; diagnoses binnen 1 week zijn onmogelijk, binnen 6 weken geen uitzondering. CMV-infecties vormen een belangrijke bron van complicaties bij transplantatie-patienten en patiënten met verminderde afweer (AIDS). Een goede monitoring van deze patiënten is essentieel.
In bovenvermelde gevallen a, b en c, welke slechts als enkele van de vele mogelijke voorbeelden van virus diagnostiek gelden, kan de diagnostiek aanmerkelijk worden vereenvoudigd en versneld door toepassing van hybridisatietechnieken met PtM gelabelde probes. Voorbeeld V Bacterie-diagnostiek.
Het is recentelijk mogelijk gebleken om ook bacteriële nucleïnezuren met behulp van DNA-probes aan te tonen. Genen voor bacteriële toxines kunnen worden aangetoond; men kan evenwel niet onderscheiden of deze genen tot expressie komen. Snelle detectie van chromosomaal en plasmide gecodeerde virulentiefactoren (o.a. Listeria monocytogenes, Clostridium perfringens enterotoxine, Vibrio cholerae enterotoxine, E. coli enterotoxines en -invasivi- teit, Shigella en Yersinia enterocolitica enteroinvasiviteit) zijn belangrijke toepassingen bij de diagnose van voedselvergiftigingen en de kwaliteitscontrole in de levensmiddelenindustrie (eindproduktcontrole).
Detectie van Helicobacter (voorheen Campylobacter) pylori door DNA in situ hybridisatie met PtM-probes in maagbiop-ten van patiënten met gastritis is goed mogelijk.
Ook het DNA van Chlamydia trachomatis kan worden aangetoond in bijvoorbeeld een sandwich assay, of door middel van in situ hybridisatie.
Voorbeeld VI
Diagnostiek van parasitaire infecties.
Wereldwijd overlijden jaarlijks 2 miljoen mensen aan malaria. In principe is dit te voorkomen door tijdige correcte diagnostiek. De huidige (routine) microscopische methoden zijn vaak al te gecompliceerd voor derde-wereld landen. In de westerse wereld kan de moeilijke microscopische techniek worden uitgebreid met in situ hybridisatie op routine preparaten, gebruikmakend van PtM-probes. Hierdoor is de differentiële diagnostiek van malaria species aanmerkelijk te vereenvoudigen en uitvoerbaar door minimaal getraind personeel. In de derde-wereld is een op PtM gebaseerde dipstick test de aangewezen weg voor snelle eenvoudige diagnostiek.
Als analoge voorbeelden kunnen gelden infectieziekten veroorzaakt door Schistosomen, Trypanosomen, taxoplasmen, etc. Voorbeeld VII
Detectie van genetische afwijkingen.
De hybridisatietechniek met PtM-probes biedt de mogelijkheid tot prenatale diagnostiek van aangeboren afwijkingen in bijvoorbeeld vruchtwaterpunctaten en chorionbiosieën. Ook postnatale detectie van afwijkingen (bijvoorbeeld maligniteiten) is mogelijk, evenals uitbreiding van de HLA-typeringen ter diagnose van HLA-geassocieerde ziekten.
Restrictie fragment polymorfismen: Ieder menselijk genoom zal, wanneer het met restrictie-enzymen wordt behandeld, uiteenvallen in een groot aantal specifieke fragmenten: de re-strictie-fragmenten. Indien door een mutatie de base-volgorde verandert op een plaats waar een restrictie-enzym aangrijpt, zal dit leiden tot het ontstaan van afwijkende fragmenten. Deze fragmenten kunnen door middel van geschikte (PtF gelabelde) probes worden gedetecteerd door middel van DNA blotting methoden (bijvoorbeeld bij sikkelcel anemie, Duchenne spierdystrofie, cystic fibrosis, chorea van Huntingdon).
Directe detectie van afwijkend DNA met synthetische oligonucleotide probes kan geschieden wanneer de basevolgorde horend bij een DNA-afwij king bekend is (B-thalassemie, antithrom-bine III deficiëntie, groeihormonen deficiëntie, hemofilie B, PKU ... enz.).
Detectie van chromosoomveranderingen als translocaties, deleties, inversies en duplicaties in het menselijk karyotype kan door middel van in situ hybridisatie gevolgd door directe PtF fluorescentie, of door Southern blotting van restrictiefragmenten worden gedetecteerd.
Voorbeeld VIII
Detectie van gen expressie.
Het zichtbaar maken van de aanwezigheid van een cellulair antigeen met behulp van immunochemische technieken bewijst niet dat op dat moment het betreffende gen tot expressie komt. Evenmin geeft het aan of het aangetoonde produkt een intra- of extracellulaire herkomst heeft. Detectie van mKNA binnen een cel geeft directe informatie over het tot expressie komen van genen. Deze informatie kan gegevens opleveren over het functioneren van cellen, maar bijvoorbeeld ook behulpzaam zijn bij de diagnostiek.
Gezien de huidige problemen om deze RNA ISH (RISH) techniek uit te voeren met niet-radioactieve probes, is toepassing van het zeer directe PtM label de aangewezen weg om dergelijke diagnostiek uit te gaan voeren omdat de problemen met name voortkomen uit de noodzaak over een goed penetrerend immunohisto-chemisch detectiesysteem te beschikken. Dit laatste kan bij toepassing van directe PtM fluorescentie achterwege blijven.
Detectie van afwijkend mRNA als teken van erfelijke ziekten door middel van blotting met radioactieve cDNA probes is reeds voor een aantal aangeboren afwijkingen mogelijk gebleken. Niet radioactieve (of radioactieve) PtM labeling kan hier de snelheid en toepasbaarheid aanmerkelijk vergroten.
Met PtM-probes kan RISH of blotting worden toegepast in de diagnose van kanker door middel van detectie van specifieke gentranscripten (bijvoorbeeld calcitonine mRNA in schildklier metastasen, oncogen expressie in maligne tumoren), of het verlies van kiemlijn banden (verlies van heterozygotie) dan wel genrearrangering (lymphomen).

Claims (9)

1. Pt-houdende verbinding met de formule {Ptn(w) (x) (y)-(z) } of (PtIV(u) (v) (w) (x) (y) (z) } respectievelijk met de structuur-formule 1 of 2 van het formuleblad, waarin u, v, w, x, y en z al dan niet dezelfde al dan niet onderling verbonden liganden voorstellen, waarvan tenminste één een leaving ligand is en tenminste één van de overige een detecteerbare merkergroep voorstelt.
2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het leaving ligande (CH3)2SO, Cl of H20 is.
3. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de detecteerbare merkergroep een fluorescerende groep is.
4. Verbinding volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat de fluorescerende groep fluoresceine of tetramethylrhodamine voorstelt.
5. {Pt (ethyleendiamine) (Me2SO) (f luoresceine-NH (CS) --NHCH3) } (PtF) .
6. Werkwijze voor de bereiding van de Pt-houdende verbindingen volgens een der voorgaande conclusies, met de formule {Ptn(w) (x) (y) (z)} of PtIV(u) (v) (w) (x) (y) (z) respectievelijk met de structuur formule 1 of 2 van het formuleblad, waarin u, v, w, x, y en z de in conclusie 1 vermelde betekenissen hebben, met het kenmerk, dat de Pt-houdende verbindingen op voor analoge verbindingen bekende wijze worden bereid.
7. Werkwijze volgens conclusie 6, met het kenmerk, dat {Pt (ethyleendiamine) (Me2SO) (f luoresceine-NH (CS)-NHCH3) } (PtF) wordt bereid, met het kenmerk, dat fluoresceine-N=C=S wordt omgezet met CH3NH2 in water, waarna de genoemde fluoresceine-NH(CS)NHCH3 uit de oplossing wordt neergeslagen door aanzuren tot een pH van 2-3, waarna het ontstane neerslag in water wordt gesuspendeerd en de pH van de suspensie op een waarde van 10-11 wordt ingesteld door toevoeging van een base, onder oplevering van een helder gele oplossing, aan welke oplossing (Pt(ethyleendiamine) (Me2SO)Cl in water wordt toegevoegd en het reactiemengsel bij omgevingstemperatuur in het donker wordt geroerd, waarna het niet gereageerde fluoresceine-NH(CS)NHCH3 door aanzuren wordt neergeslagen en afgefiltreerd en tenslotte het filtraat wordt gevriesdroogd onder oplevering van {Pt (ethyleendiamine) (Me2SO) (f luoresceine-NH (CS)-NHCH3)) (PtF).
8. Toepassing van de Pt-houdende verbinding volgens een der voorgaande conclusies 1-5, voor medisch diagnostieke doeleinden van virus-, bacterie-, of parasitaire infectie, opsporen van genetische afwijkingen, detectie van gen expressie.
9. Diagnostische kit ten gebruike voor het detecteren van virussen, bacteriën, genetische afwijkingen, gen expressie, welke kit een Pt-houdende verbinding volgens een der voorgaande conclusies 1-5 bevat.
NL9001639A 1990-07-19 1990-07-19 Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen. NL9001639A (nl)

Priority Applications (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL9001639A NL9001639A (nl) 1990-07-19 1990-07-19 Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen.
EP91913437A EP0539466B1 (en) 1990-07-19 1991-07-16 Pt-CONTAINING COMPOUND, PROCESS FOR ITS PREPARATION, AND APPLICATION OF SUCH COMPOUNDS
ES91913437T ES2097213T3 (es) 1990-07-19 1991-07-16 Compuesto que contiene platino, procedimiento de preparacion de este compuesto y utilizacion de tales compuestos.
DK91913437.9T DK0539466T3 (da) 1990-07-19 1991-07-16 Pt-holdig forbindelse, fremgangsmåde til dens fremstilling og anvendelse af sådanne forbindelser
JP51258291A JP3512792B2 (ja) 1990-07-19 1991-07-16 Ｐｔ含有化合物、その合成方法及びこれらの化合物の応用
US07/975,586 US5580990A (en) 1990-07-19 1991-07-16 Pt-containing compound, process for its preparation, and application of such compounds
PCT/NL1991/000126 WO1992001699A1 (en) 1990-07-19 1991-07-16 Pt-CONTAINING COMPOUND, PROCESS FOR ITS PREPARATION, AND APPLICATION OF SUCH COMPOUNDS
DE69123251T DE69123251T2 (de) 1990-07-19 1991-07-16 Platinenthaltende verbindung, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung
AU82863/91A AU8286391A (en) 1990-07-19 1991-07-16 Pt-containing compound, process for its preparation, and application of such compounds
AT91913437T ATE145403T1 (de) 1990-07-19 1991-07-16 Platinenthaltende verbindung, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung
US08/470,265 US5714327A (en) 1990-07-19 1995-06-06 Platinum-containing compounds, methods for their preparation and applications thereof
GR970400266T GR3022581T3 (en) 1990-07-19 1997-02-19 Pt-CONTAINING COMPOUND, PROCESS FOR ITS PREPARATION, AND APPLICATION OF SUCH COMPOUNDS
US08/910,070 US5985566A (en) 1990-07-19 1997-08-12 Platinum-containing compounds, methods for their preparation and applications thereof
US09/131,625 US6133038A (en) 1990-07-19 1998-08-10 Platinum-containing compounds methods for their preparation and applications thereof
JP2003326524A JP3947508B2 (ja) 1990-07-19 2003-09-18 Ｐｔ含有化合物、その合成方法及びこれらの化合物の応用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL9001639 1990-07-19
NL9001639A NL9001639A (nl) 1990-07-19 1990-07-19 Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL9001639A true NL9001639A (nl) 1992-02-17

Family

ID=19857433

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL9001639A NL9001639A (nl) 1990-07-19 1990-07-19 Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen.

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5580990A (nl)
EP (1) EP0539466B1 (nl)
JP (2) JP3512792B2 (nl)
AT (1) ATE145403T1 (nl)
AU (1) AU8286391A (nl)
DE (1) DE69123251T2 (nl)
DK (1) DK0539466T3 (nl)
ES (1) ES2097213T3 (nl)
GR (1) GR3022581T3 (nl)
NL (1) NL9001639A (nl)
WO (1) WO1992001699A1 (nl)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19516196A1 (de) * 1995-05-08 1996-11-14 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zum quantitativen Nachweis von Nukleinsäuren
PT1019420E (pt) * 1995-05-09 2003-12-31 Kreatech Biotech Bv Metodos para a producao de ligandos baseados em platina para ligacao entre marcadores e moleculas bio-orgaicas na marcacao de moleculas bio-organicas com o fim de detectar substancias biologicas de interesse e conjuntos ("kits") de ensaios de diagnosticos
US5753207A (en) * 1995-08-21 1998-05-19 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Use of paramagnetic compounds to measure temperature and pH in vivo
US5953060A (en) * 1995-10-31 1999-09-14 Imec Vzw Method for reducing fixed pattern noise in solid state imaging devices
DE69714600T2 (de) * 1996-10-08 2003-03-27 Kreatech Biotech Bv Verfahren zur markierung von nukleotiden, markierte nukleotide und nuetzliche zwischenprodukte
FR2755146B1 (fr) * 1996-10-28 1998-12-04 Centre Nat Rech Scient Procede de pontage selectif et irreversible d'oligonucleotides platines sur de l'arn et ses applications
AU779689B2 (en) 1999-06-16 2005-02-03 Icos Corporation Human poly(ADP-ribose) polymerase 2 materials and methods
EP2325263B1 (en) 2000-09-29 2013-01-23 Life Technologies Corporation Modified carbocyanine dyes and their conjugates
EP1373572B1 (en) * 2001-03-02 2006-07-26 Stratagene California Compositions and methods using platinum compounds for nucleic acid labeling
EP1705254A3 (en) * 2001-03-02 2007-02-21 Stratagene California Compositions and methods using platinum for nucleic acid labeling
DK1262778T3 (da) * 2001-05-28 2008-02-18 Kreatech Biotech Bv Fremgangsmåde til differentieret mærkning ved anvendelse af platinkomplekser
JP4007000B2 (ja) 2001-12-25 2007-11-14 富士ゼロックス株式会社 導電性有機高分子
US20050014134A1 (en) * 2003-03-06 2005-01-20 West Jason Andrew Appleton Viral identification by generation and detection of protein signatures
CA2524258C (en) 2003-05-01 2012-08-07 Cornell Research Foundation, Inc. Carrier complexes comprising cationic peptides for delivering molecules to cells
CA2531123A1 (en) * 2003-07-02 2005-01-13 Perkinelmer Las, Inc. Assay and process for labeling and detection of micro rna and small interfering rna sequences
US20050095602A1 (en) * 2003-11-04 2005-05-05 West Jason A. Microfluidic integrated microarrays for biological detection
CA2567627C (en) 2004-05-20 2014-09-30 Quest Diagnostics Investments Incorporated Single label comparative hybridization
US7524672B2 (en) * 2004-09-22 2009-04-28 Sandia Corporation Microfluidic microarray systems and methods thereof
US7592139B2 (en) 2004-09-24 2009-09-22 Sandia National Laboratories High temperature flow-through device for rapid solubilization and analysis
US7569695B2 (en) * 2005-05-24 2009-08-04 Enzo Life Sciences, Inc. Dyes for the detection or quantification of desirable target molecules
US8357801B2 (en) 2005-05-24 2013-01-22 Enzo Life Sciences, Inc. Labeling of target molecules, identification of organelles and other applications, novel compositions, methods and kits
US8362250B2 (en) 2005-05-24 2013-01-29 Enzo Biochem, Inc. Fluorescent dyes and compounds, methods and kits useful for identifying specific organelles and regions in cells of interest
US7737281B2 (en) * 2005-05-24 2010-06-15 Enzo Life Sciences, Inc. C/O Enzo Biochem, Inc. Purine based fluorescent dyes
US20060292576A1 (en) * 2005-06-23 2006-12-28 Quest Diagnostics Investments Incorporated Non-in situ hybridization method for detecting chromosomal abnormalities
US8076074B2 (en) 2005-11-29 2011-12-13 Quest Diagnostics Investments Incorporated Balanced translocation in comparative hybridization
US7824858B2 (en) 2006-01-23 2010-11-02 Quest Diagnostics Investments Incorporated Assay for mycobacterium avium/intracellulare nucleic acid
US8163480B2 (en) * 2006-10-05 2012-04-24 Quest Diagnostics Investments Incorporated Nucleic acid size detection method
US8999634B2 (en) 2007-04-27 2015-04-07 Quest Diagnostics Investments Incorporated Nucleic acid detection combining amplification with fragmentation
EP2185573A4 (en) 2007-07-26 2011-12-07 Cellay Inc SPECIFIC PROBES OF HIGHLY VISIBLE CHROMOSOMES AND ASSOCIATED METHODS
US7507539B2 (en) 2007-07-30 2009-03-24 Quest Diagnostics Investments Incorporated Substractive single label comparative hybridization
US8093063B2 (en) * 2007-11-29 2012-01-10 Quest Diagnostics Investments Incorporated Assay for detecting genetic abnormalities in genomic nucleic acids
US9250249B2 (en) * 2008-09-08 2016-02-02 Enzo Biochem, Inc. Autophagy and phospholipidosis pathway assays
US9334281B2 (en) * 2008-09-08 2016-05-10 Enzo Life Sciences, Inc. Fluorochromes for organelle tracing and multi-color imaging
US8431416B2 (en) 2009-04-01 2013-04-30 Becton, Dickinson And Company Reactive heterocycle-substituted 7-hydroxycoumarins and their conjugates
EP2473563B1 (en) * 2009-08-31 2019-06-19 Promega Corporation Reactive cyanine compounds
US9133343B2 (en) 2009-11-30 2015-09-15 Enzo Biochem, Inc. Dyes and compositions, and processes for using same in analysis of protein aggregation and other applications
US8974651B2 (en) 2010-04-17 2015-03-10 C.C. Imex Illuminator for visualization of fluorophores
US20130203055A1 (en) 2010-06-03 2013-08-08 Joan Aurich-Costa Methods and kits for in situ detection of nucleotide sequences
US8623324B2 (en) 2010-07-21 2014-01-07 Aat Bioquest Inc. Luminescent dyes with a water-soluble intramolecular bridge and their biological conjugates
JP2014530009A (ja) 2011-09-29 2014-11-17 エーピーオー‐ティー ビー．ヴイ． 異常細胞を標的とする多重特異性結合分子
US9416153B2 (en) 2011-10-11 2016-08-16 Enzo Life Sciences, Inc. Fluorescent dyes
WO2013090386A2 (en) 2011-12-12 2013-06-20 Cellay, Inc. Methods and kits for room temperature in situ detection of a target nucleic acid in a biological sample
EP3335714A1 (en) 2011-12-30 2018-06-20 Quest Diagnostics Investments Incorporated Aptamers and diagnostic methods for detecting the egf receptor
US10946104B2 (en) 2012-01-13 2021-03-16 Apo-Tb.V. Aberrant cell-restricted immunoglobulins provided with a toxic moiety
US8877441B2 (en) 2012-10-31 2014-11-04 Cellay, Inc. Methods and kits for performing in situ hybridization
US20150126395A1 (en) 2013-11-07 2015-05-07 Cellay, Inc. Methods and Kits for Detecting a Prostate Carcinoma and Predicting Disease Outcomes for Prostate Cancers
US9835587B2 (en) 2014-04-01 2017-12-05 C.C. Imex Electrophoresis running tank assembly
CA2950428C (en) 2014-05-28 2022-11-29 Stealth Biotherapeutics Corp Therapeutic compositions including frataxin, lactoferrin, and mitochondrial energy generating enzymes, and uses thereof
EP3502132A1 (en) 2014-05-28 2019-06-26 Stealth BioTherapeutics Corp Therapeutic compositions including therapeutic small molecules and uses thereof
US9957393B2 (en) 2015-03-30 2018-05-01 Enzo Biochem, Inc. Monoazo dyes with cyclic amine as fluorescence quenchers
WO2017059338A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Cornell University Enzyme-responsive peptide nanofiber compositions and uses thereof
JP2019512573A (ja) 2016-03-28 2019-05-16 エーエーティー バイオクエスト インコーポレイテッド ポリフルオレノ［４，５−ｃｄｅ］オキセピンコンジュゲート及び分析物検出方法におけるそれらの使用
CA3052291A1 (en) 2017-02-09 2018-08-16 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-kir3dl1 antibodies
WO2019244107A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Daiichi Sankyo Company, Limited Compositions including cd3 antigen binding fragments and uses thereof
WO2021154933A1 (en) 2020-01-30 2021-08-05 Aat Bioquest, Inc. Uv excitable polyfluorene based conjugates and their use in methods of analyte detection
KR20230146521A (ko) 2021-01-13 2023-10-19 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 항체-피롤로벤조디아제핀 유도체 접합체
US20240115721A1 (en) 2021-01-13 2024-04-11 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-dll3 antibody-drug conjugate

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2422956A1 (fr) * 1978-04-13 1979-11-09 Pasteur Institut Procede de detection et de caracterisation d'un acide nucleique ou d'une sequence de celui-ci, et reactif enzymatique pour la mise en oeuvre de ce procede
US4376165A (en) * 1978-06-22 1983-03-08 Miles Laboratories, Inc. Method of preparing an enzyme-labeled ligand for use in specific binding assays and the labeled conjugate produced thereby
US4358535A (en) * 1980-12-08 1982-11-09 Board Of Regents Of The University Of Washington Specific DNA probes in diagnostic microbiology
US4711955A (en) * 1981-04-17 1987-12-08 Yale University Modified nucleotides and methods of preparing and using same
US5241060A (en) * 1982-06-23 1993-08-31 Enzo Diagnostics, Inc. Base moiety-labeled detectable nucleatide
US4490543A (en) * 1982-11-12 1984-12-25 University Of Northern Iowa Foundation Low toxicity radiation sensitizer
US4687732A (en) * 1983-06-10 1987-08-18 Yale University Visualization polymers and their application to diagnostic medicine
US4777129A (en) * 1983-12-12 1988-10-11 Molecular Diagnostics, Inc. Nucleic acid probe detectable by specific nucleic acid binding protein
US5175269A (en) * 1984-01-30 1992-12-29 Enzo Diagnostics, Inc. Compound and detectable molecules having an oligo- or polynucleotide with modifiable reactive group
ATE58378T1 (de) * 1984-12-10 1990-11-15 Johnson Matthey Inc Platinkomplexe.
AU3447289A (en) * 1988-04-13 1989-11-03 University Of Vermont And State Agricultural College, The Platinum-amine-sulfoxides as anti-tumor agents

Also Published As

Publication number Publication date
JP2004129659A (ja) 2004-04-30
AU8286391A (en) 1992-02-18
US5580990A (en) 1996-12-03
GR3022581T3 (en) 1997-05-31
JP3947508B2 (ja) 2007-07-25
JPH05508853A (ja) 1993-12-09
ATE145403T1 (de) 1996-12-15
DE69123251D1 (de) 1997-01-02
WO1992001699A1 (en) 1992-02-06
EP0539466B1 (en) 1996-11-20
EP0539466A1 (en) 1993-05-05
ES2097213T3 (es) 1997-04-01
DK0539466T3 (da) 1997-05-05
JP3512792B2 (ja) 2004-03-31
DE69123251T2 (de) 1997-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL9001639A (nl) Pt-houdende verbinding, werkwijze voor de bereiding ervan, alsmede toepassing van dergelijke verbindingen.
US6133038A (en) Platinum-containing compounds methods for their preparation and applications thereof
CA2123808C (en) Improved electrochemiluminescent label for dna probe assays
CA1317207C (en) Solution phase nucleic acid sandwich assay and polynucleotide probes useful therein
CA2724552C (en) Compositions and methods for detection of chromosomal aberrations with hybridization buffers comprising a polar aprotic solvent
JP2676535B2 (ja) 選択可能な切断部位を用いたポリヌクレオチドの測定
AU724320B2 (en) Methods for the production of platinum-based linkers between labels and bio-organic molecules, for labelling bio-organic molecules, for detecting biological substances of interest and diagnostic test kits
Bauman et al. Cytochemical hybridization with fluorochrome-labeled RNA. II. Applications.
JPH05508862A (ja) 大きな櫛型分枝状ポリヌクレオチド
EP0937090B1 (en) Methods for labeling nucleotides, labeled nucleotides and useful intermediates
JPS63152999A (ja) 非放射性核酸ハイブリッド形成プローブ
EP0662153A1 (en) Free radical scavengers useful for reducing autofluorescence in fixed cells
AU680412B2 (en) Probes for detecting common liveborn chromosomal aneuploidies
WO1995019449A1 (en) Populations of non-adjacent hybridization probes
WO1994002643A1 (en) Nucleic acid probes and uses thereof to detect double-stranded nucleic acids
WO1994002640A1 (en) Multi reporter-labeled nucleic acid probes
JPH06507318A (ja) 染色体構造および転位の検出方法
WO1995002699A1 (en) Analogues of reporter groups as backgroung reducers in hybridization assays

Legal Events

Date Code Title Description
A1B A search report has been drawn up
BV The patent application has lapsed