NL8900742A

NL8900742A - Farmaceutische preparaten met een werking in het bijzonder op het hart en het cardiovasculaire systeem, alsmede werkwijze voor de bereiding ervan.

Info

Publication number: NL8900742A
Application number: NL8900742A
Authority: NL
Original assignee: Biorex Kft
Priority date: 1988-03-23
Filing date: 1989-03-23
Publication date: 1989-10-16
Also published as: CA1319607C; CH677732A5; SE8901041D0; HUT60436A; GB8906856D0; FR2628972B1; IT8919876A0; BE1003021A3; ES2014060A6; HU210122B; DE3909707A1; GB2216421A; SE8901041L; FI891438A0; LU87488A1; KR890014104A; IT1229205B; JPH0222228A; FI891438A; FR2628972A1

Description

* NL 35.858-Kp/ab %

Farmaceutische preparaten met een werking in het bijzonder op het hart en het cardiovasculaire systeem, alsmede werkwijze voor de bereiding ervan.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op farmaceutische preparaten met een werking in het bijzonder op de trombo-embolische toestand van het hart en het cardiovasculaire systeem.

5 Volgens een ander aspect van de uitvinding gaat het om een werkwijze voor de bereiding van deze preparaten.

Bekend is, dat C18-24 ω”3 onverzadigde vetzuren gunstige biologische eigenschappen bezitten. Van deze verbindingen zijn ecosapentaanzuur (EPA) en docosahexaanzuur 10 (DHA) uitstekend. Dyerberg en medewerkers [The Lancet 15, 117 (1978)] hebben gewezen op het belang en diverse biologische werkingen van beide zuren.

De werking, die gekoppeld is aan de belangrijke rol van meervoudig onverzadigde vetzuren, in het bijzonder van 15 EPA en DHA, bij de hyperlipidemia en trombotische aandoeningen zijn samengevat door Goodnight en medewerkers [Arteriosclerosis 2, 87 (1982) Review].

Farmaceutische preparaten met daarin EPA en DHA als werkzame bestanddelen zijn bijvoorbeeld beschreven in het 20 Duitse octrooischrift nr. 3.438.630 voor het verlagen van de bloedcholesterolspiegel, verder in de gepubliceerde Japanse octrooiaanvragen nrs. 58.08037 en 60.49097 tegen cerebrale sclerosis en voor het voorkomen van de trombusvorming bij patiënten, die lijden aan hartkwalen.

25 Er zijn diverse artikelen gewijd aan de bloed- plaatjesstreep-aggregatieremmende en dus de trombus-vorming remmende werking van EPA en DHA [Spencer and Caraega:

Prostagl. Leucotrienes and Med. 23, 129 (1986); Khapp et al.:

New Engl. Journ. of Med. 314, 937 (1986)].

30 De antivirale werking van EPA en DHA is beschreven in het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.513.008.

De werkzame bestanddelen van de visolie, bijvoorbeeld EPA en DHA zijn voorlopers van de biosynthese van de PG-3 reeks en zij remmen de vorming van schadelijke 89 00742.' ·? -2- metabolieten, zoals TXA2 en TXB2, afkomstig van de zogenaamde "arachidonic acid cascade", hetgeen een keten is van gecompliceerde biochemische processen, uitgaande van arachidonzuur.

5 Naast hun diverse gunstige werkingen hebben de meervoudig onverzadigde vetzuren de nadelige pathologische eigenschap, dat zij onderhevig zijn aan een spontane oxydatieve ontleding in het menselijke organisme en derhalve aanleiding geven tot de vorming van actieve aldehyden, zoals 10 malondialdehyde, die schadelijk is voor het organisme. Deze aldehyden zijn in staat in hoofdzaak de reactie aan te gaan met het bindweefsel op een in fysiologisch opzicht schadelijke manier, hetgeen kan leiden tot zogenaamde "ceroidal lipofuscinosis" van het centrale zenuwstelsel.

15 Onderzoekingen naar de biologische werkingen van micro-elementen en spore-elementen zijn in het laatste decennium gestart. Zo is het bekend geworden, dat selenium één van de belangrijkste en onontbeerlijke stoffen van het . levende organisme is. De gunstige werking van selenium is 20 voornamelijk gebaseerd op zijn activerende werking, gericht op het glutathion-peroxidase-enzym, aangezien selenium een onontbeerlijk bestanddeel vormt van de prosthetische groep van het glutathion-peroxidase-enzym. Dit enzym is de meest belangrijke endogene inhibitor van de schadelijke peroxi-25 datieprocessen.

Selenium heeft op zichzelf een hipotensieve werking, verbetert de ischemische, hypoxische en infarct bestanddeel van het hart en remt de ceroidale lipofuscinosis, terwijl het voorts ook een gunstige werking heeft op 30 periodontitis. Het heeft een significante antikankerwerking en vermindert de kans op de ontwikkeling van kankeraandoe-ningen; bovendien wordt dit als een mutagenesis-remmend middel beschouwd.

Selenium wordt in het organisme niet opgehoopt, 35 hetgeen betekent, dat het voortdurend dient te worden aangevuld. Dit betekent, dat selenium hoofdzakelijk in het organisme werd geïntroduceerd in de vorm van anorganische verbindingen, bijv. seleendioxide en natriumseleniet. Een aantal pathologische veranderingen of respectievelijk 8900742.

-3- * ziektes, zoals levernecrose, myonecrose, vernietiging van het erythrocyt membraan, interstitiële laesies, ST-toename in het ECG, Mulberry's hartsyndroom, kwashiorkor syndroom (proteïne malnutritie) en multiplex sclerosis blijken te zijn geïndu-5 ceerd door seleen deficiency.

Een uitgebreid rapport over de biologische werkingen van seleen werd gepubliceerd door Thressa en medewerkers fNutrition Review 35, 7 (1977)], Shamberger [J. of Env. Path, and Tox. 4, 305 (1980)] almede door Masukawa en 10 medewerkers [Experientia 39, 405 (1983)].

Organische seleenverbindingen kunnen verkregen worden door synthetische methoden, die zijn beschreven bijv. door Klaiman en Gönther in hun boek getiteld "Organic Selenium Compounds, Their Chemistry and Biology", John Wiley 15 and Sons, Inc. New York, 1973; bovendien kunnen organische seleenverbindingen bereid worden onder gebruikmaking van microorganismen. Volgens de laatstgenoemde methode worden de microorganismeh gekweekt op media, die zijn verrijkt met anorganische seleenverbindingen. Organismen, die geschikt zijn 20 voor dit doel nemen seleen op en introduceren dit in een metabolisme, zij binden het aan organische stoffen, meestal aan aminozuren of vetten. Dergelijke mogelijkheden zijn gepubliceerd door Danch and Chmielowsky [Pr. Nauk. Univ.

Slask Katowich 1, 57 (1985)] alsmede door Gennity en 25 medewerkers [Biochem. Biophys. Res. Commun. 118, 176 (1984)].

Van een aantal microorganismen is het bekend, dat ze in staat zijn sommige elementen, zoals seleen uit hun omgeving in te vangen en hen in hun eigen organisme op te slaan.

30 De bereiding van gist, dat is verrijkt met seleen, is beschreven in het Amerikaanse octrooischrift nr. 4.530.846 en in de gepubliceerde Japanse octrooiaanvragen nrs.

60.224451 en 57.174098.

De verrijking van seleen door andere microorganis-35 men, zoals bacteriën, actinomyceten en hyphomyceten, naast het gist, is beschreven in de gepubliceerde Japanse octrooiaanvrage nr. 78.148587.

Volgens de gepubliceerde Japanse octrooiaanvrage nr. 58.129954 wordt voorgesteld seleen-houdend gist vermengd met 8900741 ' , - 4 - plantaardige oliën te gebruiken voor de behandeling van seniliteit.

Het doel van de onderhavige uitvinding is het verschaffen van een nieuw farmaceutisch preparaat, dat werking 5 uitoefent op het hart en het cardiovasculaire systeem, waarbij mogelijkerwijs de gunstige voordelen van de natuurlijke organische seleen-houdende microorganismen combineert met die van DHA en ΕΡΆ en waarbij tegelijkertijd de nadelige eigenschappen van meervoudig onverzadigde vetzuren worden geëlimineerd.

10 De uitvinding is gebaseerd op de erkenning, dat het bovengestelde doel ter volle gerealiseerd kan worden en een preparaat, te gebruiken voor het elimineren van ceroidale lipofuscinosis, kan worden verkregen door gebruikmaking van een seleenhoudend microorganisme, dat uit oogpunt van humane 15 toepassing niet toxisch is, te zamen met meervoudig onverzadigde vetzuren.

Dienovereenkomstig heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een farmaceutisch preparaat, dat werking uitoefent op het hart en het cardiovasculaire systeem, dat 20 0,5 - 50 gew.% seleenhoudend microorganisme bevat alsmede 99,5 - 50 gew.% C]_g_24“vetzuren met tenminste twee onverzadigde bindingen en/of de derivaten ervan, eventueel vermengd met dragers en/of toevoegsels, die gewoonlijk worden toegepast in de farmaceutische industrie en eventueel met 25 antioxidantia.

Bovendien heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een werkwijze voor de bereiding van het bovengenoemde preparaat, met het kenmerk, dat 0,5 - 50 gew.% van een seleenhoudend microorganisme wordt gemengd met 99,5 - 50 30 gew.% Gig_24-vetzuren met daarin tenminste twee onverzadigde bindingen en/of derivaten ervan, en vervolgens eventueel met dragers en/of toevoegsels, die in de farmaceutische industrie gewoonlijk worden gebruikt, en eventueel met antioxidantia op een in de farmaceutische industrie op zichzelf 35 bekende wijze.

Het preparaat volgens de uitvinding bevat met voordeel eicosapentaanzuur (EPA) en docosahexaanzuur (DHA) alsmede een seleen-bevattende gist.

Als uitgangsmateriaal van de Ciq-24 ω-3-onverzadigde 89 00741.1 -5 -

J

vetzuren, dat één bestanddeel van het preparaat vormt, kan men gebruik maken van oliën afkomstig van diverse zee- en zoetwatervissen, voornamelijk makreel, kabeljauw, haring, sardine, pijl-inktvis alsmede van de lever van deze vissen, 5 bijv. levertraan en haaieleverolie.

Naast EPA en DHA bevatten de visoliën een grote hoeveelheid verzadigde vetzuren alsmede vetzuren, die in geringe mate onverzadigd zijn, alsmede andere niet-hydro-lyseerbare bestanddelen. De verwijdering van deze bestand-10 delen is zeer belangrijk, aangezien de dosis van de therapeutische preparaten, bereid uit de visoliën, de geïntroduceerde caloriehoeveelheid alsmede de triglyceridespiegel van het bloed aanzienlijk zouden verhogen. Bovendien kunnen de niet-hydrolyseerbare bestanddelen steroïden bevatten, zoals 15 cholesterol, vitamine D (en zijn provitamine) en/of vitamine A. Vitaminen D en A worden in het menselijke organisme Opgehoopt, met het gevolg, dat een voortgezette behandeling, vereist voor het gewenste effect, onmogelijk zou zijn door gebruikmaking van een preparaat, dat deze vitaminen bevat.

20 Dientengevolge dienen de bovengenoemde bestanddelen, zoals de verzadigde en deels onverzadigde vetzuren alsmede de niet-hydrolyseerbare bestanddelen, bijv. cholesterol, vitaminen A en D uit de visolie te worden verwijderd. Op deze wijze is de totale hoeveelheid EPA en DHA in de visolie verrijkt tot meer 25 dan 50 %.

Het is geschikt gebruik te maken van microorganis-mestammen, die voor het humane organisme niet toxisch zijn en die geschikt zijn voor humane consumptie. In de biotechnologie op ruime schaal toegepaste genera, zoals Lactobacillus, 30 Leukonostoc, Pediococcus, Acetobacter, Streptococcus, Torula, Kluyveromyces, Candida, Brettanomyces, Brevibacterium,

Saccharomyces, Torulopsis, Pichia, Hansenula, oidium,

Rhodotorula, Trichospora, Penicilium, Rhizopus, Mucor,

Honascus, Aspergillus, enz. die geschikt zijn voor humane 35 consumptie, zijn voor dit doel het meest geschikt.

Voor het remmen van de oxidatie van het preparaat volgens de uitvinding is het geschikt gebruik te maken van a-tocoferol (vitamine E), glutathion of de traditionele anti-oxidantia, zoals butylhydroxytolueen als actieve conserveer- 8300742 .' - 6 - * « middelen.

De in de farmaceutische industrie gewoonlijk toegepaste stoffen, zoals lactose, zetmeel of magnesiumstearaat kunnen gebruikt worden als vloeibare of vaste drager.

5 Farmaceutische onderzoekingen hebben aangetoond, dat het preparaat vrij is van de gezondheid beschadigende bijwerkingen, aangezien er geen verandering was waar te nemen in het microsomale enzymsysteem van de rattelever onder gebruikmaking van een honderdvoudige hoeveelheid van de gebrui-10 kelijke dosis. De hoeveelheid in het organisme opgehoopt door lipofuscine nam significant af vergeleken met de controle na behandeling met het preparaat. Betrokken op onderzoekingen, uitgevoerd met het preparaat volgens de uitvinding op vrouwtjes Wistarratten gedurende 6 weken werd een duidelijke 15 bloedplaatjes-aggregatie remmende werking waargenomen.

De optimale effectieve dagelijkse dosering (berekend voor een gemiddeld lichaamsgewicht van 70 kg) van het preparaat bedraagt 0,1 - 5 g. Het oliebestanddeel bevat 22 % EPA en 43 % DHA gemiddeld. De effectieve dagelijkse dose-20 ring bedraagt 100 - 300 /ug seleen.

De voornaamste voordelen van het preparaat volgens de uitvinding kunnen als volgt worden samengevat: 1. De gunstige eigenschappen van EPA en DHA alsmede die van seleen en gist zijn verenigd.

25 2. De schadelijke werkingen van de bekende visolie bevattende preparaten, die worden geïnduceerd door verzadigde lipidecomponenten, zoals sterolen, alsmede vitaminen A en D, zijn verminderd of geëlimineerd.

3. De mogelijkheid van "ceroidale lipofuscinosis", 30 tengevolge van de consumptie van meervoudig onverzadigde vetzuren, is afwezig.

4. Het preparaat bevat seleen als natuurlijke stof, verrijkt in een microorganisme, zoals bacteriën, fungi of gist; het seleen, toegediend te zamen met het specifieke 35 microorganisme wordt beter geresorbeerd en oefent zijn gunstige werking beter uit.

5. Seleen, gebonden in organische verbindingen, kan gemakkelijk worden bereid in grotere hoeveelheden, in het bijzonder verrijkte microorganismen, hoofdzakelijk in gist.

8900742: * - 7 - * 6. Het preparaat heeft een gunstige therapeutische werking in geval van atopische stoornissen en is geschikt voor de preventieve behandeling van eczeem, astma, allergische symptonen, allergische rhinitis en/of atopische stoornissen, 5 zoals migraine, Crohn's ziekte, ulceratieve colitis, otitis media, nefrotische syndroom en diabetes. Het is in het bijzonder geschikt voor de behandeling van stoornissen van het cardiovasculaire systeem: voor apoplectische aandoeningen, trombo-embolische toestanden, zoals beroerte, infarct en 10 Keshan-syndroom bij jonge patiënten alsmede voor de preventie van abnormale condities.

De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van de volgende niet-limitatieve Voorbeelden.

De ω“3 meervoudig onverzadigde vetzuren, die in het 15 preparaat volgens de uitvinding worden gebruikt, kunnen bereid worden volgens Voorbeeld I, terwij1 het microorganisme verrijkt met seleen bereid kan worden, zoals beschreven in Voorbeelden II tot VI. De farmaceutische preparaten volgens de uitvinding worden geïllustreerd door Voorbeelden VII-IX.

20 VOORBEELD I

8 kg 40% natriumhydroxide-oplossing werd bij 50 -60*C toegedruppeld aan 24 kg makreelolie, die werd opgelost bij 60*C in 16 1 methanol onder roeren. Dan werd het mengsel gedurende nog eens 45 min bij 60*C geroerd. Na toevoeging van 25 20 kg 15% zoutzuur aan de oplossing bij ca. 60°C werden de lagen afgezonderd, waarna de organische fase met 10 kg 15% zoutzuur werd gewassen en vervolgens met 180 1 heet leidingwater totdat de oplossing neutraal was. De fasen werden wederom gescheiden, gevolgd door toevoeging van 100 1 aceton aan 30 de oliefase, die vervolgens tot ca. 45°C werd verhit, waarna lithiumhydroxide, opgelost in 30 1 water, werd toegevoegd. Na 30 min roeren liet men het mengsel gedurende de nacht staan, waarna het mengsel werd afgefiltreerd en het acetonfiltraat werd ingedampt. Het residu werd aangezuurd door toevoeging 35 van ca. 8 kg 15% zoutzuur, waarna het mengsel 3x met hexaan werd geëxtraheerd, en de hexaanoplossing werd ingedampt.

Tijdens de gehele zuiveringsbewerking werd gebruik gemaakt van een stikstofatmosfeer. Hierbij werd 6,4 kg zuivere visolie verkregen.

8800742 * . - 8 - 1 kg van de op de boven beschreven wijze gezuiverde makreelolie werd bij 60eC toegedruppeld aan een oplossing van 3 kg ureum in 9 1 methanol. Het mengsel werd bij dezelfde temperatuur gedurende 2 uur geroerd en daarna afgekoeld. Dan 5 liet men het mengsel bij -10"C gedurende de nacht staan, waarna het mengsel werd afgefiltreerd en het filtraat werd ingedampt. Aan het residu werd 2,5 1 1:1 zoutzuur toegevoegd, welk mengsel gedurende 15 min werd geroerd. Na extractie met hexaan werd de hexaanfase met water tot neutraal gewassen, 10 boven watervrij natriumsulfaat gedroogd en ingedampt onder oplevering van 0,34 kg ω-3 onverzadigde vetzuren met een jood-getal van 315, welk produkt 24% EPA en 42% DHA bevatte.

VOORBEELD II

Porties van 2 1 gesteriliseerd, vloeibaar malt-15 extract kweekmedium werden overgebracht in glazen kolven van 5 1, waarna het medium werd verrijkt door toevoeging van 3 gew.% glucose. Na toevoeging van 5 /ug/ml natriumseleniet, werd het mengsel geïnoculeerd met Saccharomyces cerevisiae, waarna het mengsel onder beluchting gedurende 72 uur bij 32°c 20 werd gekweekt. Een extra hoeveelheid van 5 /ug/ml natriumseleniet werd aan de kweek toegevoegd in het 48ste uur van de kweek.

Na filtratie werden de cellen verscheidene keren met water gewassen, vervolgens bij 68 - 70eC gedroogd. Na microni-25 satie werd het seleengehalte bepaald aan de hand van atoomab-sorptie onder oplevering van een waarde van 2600 /ug/g.

VOORBEELD III

Porties van 100 ml vloeibaar gistextract kweekmedium werden overgebracht in Erlenmeyer kolven van 500 ml onder 30 steriele omstandigheden. Na toevoeging van 5 /ug/ml natriumseleniet werd het medium geïnoculeerd met de fungus Aspercril-lus sojae, waarna de kweken bij 28 - 30'C werden geschud. Er werd nog eens 5 /ug/ml natriumseleniet aan de kweek toegevoegd en wel op de 3de dag van de kweek. Na 5 dagen werd het droge 35 materiaal afgefiltreerd, gewassen en op de in Voorbeeld II beschreven wijze gedroogd. Na micronisatie werd het seleengehalte van het monster bepaald via atoomabsorptie en bleek 3000 /ug/g te zijn.

VOORBEELD IV

69 00 742." ί - 9 -

De in Voorbeeld III beschreven procedure werd herhaald, behalve dat als gist Torulopsis utilis werd gebruikt in plaats van de fungus. De tijdens de kweek verkregen micro-biële massa bevatte 1200 /ug/g seleen.

5 VOORBEELD V

Streptococcus thermophilus werd bij 45 eC gekweekt in een kweekmedium, bereid op de in Voorbeeld III beschreven wijze. Na kweken en opwerken bevatte het microbiële poeder 4200 /ug/g seleen.

10 VOORBEELD VI

De bacterie Lactobacillus mesenteroides werd op de in Voorbeeld III beschreven wijze gekweekt, behalve dat het medium werd aangevuld door toevoeging van 1% glucose en 2% calciumcarbonaat onder oplevering van een bacteriële massa, 15 die 3000 /Ug/g seleen bevatte.

VOORBEELD VII

10 g van een seleen-houdend gistpoeder (seleengehal-te: 2600 /ug/g) werd toegevoegd aan 150 g 65% verrijkte ma-kreelolie (deze bevatte 24% EPA en 42% DHA). Na homogeniseren 20 werd het mengsel geconserveerd door toevoeging van o,15 g vitamine E. Het aldus verkregen werkzame bestanddeel werd overgebracht in zachte gelatinecapsules en vervolgens in doordrukfolies verpakt.

VOORBEELD VIII

25 De werkwijze van Voorbeeld VII werd herhaald, be halve dat de volgende uitgangsmaterialen werden gebruikt: 400 g 65% verrijkte levertraan met een EPA-gehalte van 22% en DHA-gehalte van 43%; 100 g gistpoeder met een seleengehalte van 1200 /ug/g; en 0,4 g vitamine E. Het homogenisaat werd 30 overgebracht in capsules, die in staat waren 500 mg werkzaam bestanddeel per capsule op te nemen.

VOORBEELD IX

De in Voorbeeld VIII beschreven werkwijze werd herhaald, behalve dat 400 g 30% visolie (met daarin 18% EPA en 35 12% DHA) (geproduceerd door Hartens and Co., Bergen, Noorwegen werd gebruikt als visoliebestanddeel.

VOORBEELD X

De in Voorbeeld VIII beschreven werkwijze werd herhaald, behalve dat 400 g visolie met daarin 9,2% EPA en 10,4% 4900742..

< - 10 - t, DHA werd gebruikt als visoliebestanddeel.

VOORBEELD XI

Tabletten met de volgende samenstelling werden bereid onder gebruikmaking van bekende farmaceutische inrich-5 tingen en processen:

Levertraan verrijkt met EPA en DHA met daarin 0,1% vitamine E (met een DHA-gehalte van 43% en EPA-gehalte van 22%) 200,0 mg

Seleen-houdend gistpoeder 10 (seleengehalte: 1500 /ug/g) 86,0 mg lactose 140,0 mg zetmeel 60,0 mg polyvinylpyrrolidon 3,5 mg magnesiumstearaat 3,5 mg 15 Desgewenst kunnen tabletten worden voorzien van een laag van suiker of van een andere stof in een tabletteerma-chine.

*300742..

Claims

1. Farmaceutisch preparaat met een werking op het hart en cardiovasculaire systeem, met het kenmerk, dat dit preparaat 0,5 - 50 gew.% seleen-houdend microorganisme bevat naast 99,5 - 50 gew.% Cig-24 vetzuren 5 met tenminste twee onverzadigde bindingen en/of derivaten ervan, eventueel vermengd met dragers en/of toevoegsels, die in de farmaceutische industrie gewoonlijk worden gebruikt, en eventueel antioxidantia.

2. Preparaat volgens conclusie l,met het 10 kenmerk , dat het preparaat 5-35 gew.% seleen-houdend microorganisme en 95 - 65 gew.% onverzadigde vetzuren of derivaten ervan bevat.

3. Preparaat volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat het preparaat 15 - 25 gew.% seleen- 15 houdend microorganisme en 85 - 75 gew.% onverzadigde vetzuren bevat.

4. Preparaat volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat de onverzadigde vetzuren vetzuren zijn, die zijn geëxtraheerd uit de olie van zeevissen.

5. Preparaat volgens conclusie 1, m e t het kenmerk , dat dit preparaat als onverzadigde vetzuren 5,8,11,14,17-eicosapentaanzuur en 4,7,10,13,16,19-docosahe-xaanzuur bevat.

6. Werkwijze voor de bereiding van een farmaceu- 25 tisch preparaat met een werking op het hart en het cardiovasculaire systeem, met het kenmerk, dat 0,5 -50 gew.% van een seleen-houdend microorganisme wordt gemengd met 99,5 - 50 gew.% Cig_24 vetzuren met daarin tenminste twee onverzadigde bindingen of derivaten ervan alsmede met dragers 30 en/of toevoegsels, die in de farmaceutische industrie gewoonlijk worden gebruikt, en eventueel met antioxidantia op een voor de farmaceutische industrie gebruikelijke wijze.

7. Werkwijze volgens conclusie 6, m e t het kenmerk , dat 5-35 gew.% seleen-houdend microorganisme 35 wordt gemengd met 95 - 65 gew.% onverzadigde vetzuren.

8. Werkwijze volgens conclusie 6, m e t het 8900742. - 12 - kenmerk , dat 15 - 25 gew.% seleen-houdend microorga-nisme wordt gemengd met 85-75 gew.% onverzadigde vetzuren.

9. Werkwijze volgens conclusie 6, m e t het k e n m e r k , dat als onverzadigde vetzuren vetzuren 5 worden gebruikt, die zijn geëxtraheerd uit de olie van zeevissen.

10. Werkwijze volgens conclusie 6, m e t het kenmerk, dat als onverzadigde vetzuren 5,8,11,14,17-eicosapentaanzuur en 4,7,10,13,16,19-docosahexaanzuur worden 10 gebruikt. 8800742^