NL8302309A - Cefalosporinen, preparaten die ze bevatten, en werkwijzen voor de bereiding daarvan. - Google Patents

Description

Cefalosporinen, preparaten die ze bevatten, en werkwijzen voor de bereiding daarvan.

Deze uitvinding betreft verbeteringen op het gebied der cefalosporinen, en meer in het bijzonder nieuwe verbindingen met waardevolle antibiotische werking.

De cefalosporinen worden in deze beschrij-5 ving, conform het artikel in J. Am. Chem. Soc. 84 (3962) 3400, beschreven als afgeleid van een kern "cefem" die het ringskelet van de cefalosporinen met één dubbele binding voorstelt.

Cefalosporinen worden veel gebruikt voor de behandeling van ziekten van mens en dier die door pathogene 10 bacteriën veroorzaakt worden, en zijn vooral nuttig bij de behandeling van ziekten door bacteriën die tegen andere antibiotica zoals penicillinen resistent zijn, en voor de behandeling van voor penicilline gevoelige patiënten. In vele gevallen is het wenselijk een cefalosporine te gebruiken dat zowel tegen 15 gram-positieve als tegen grammegatieve microorganismen werkt, en veel werk is al gericht op het ontwikkelen van diverse cefalosporinen met breed spectrum.

Zo is bijvoorbeeld in het Britse octrooi-schrift 1.399.086 een nieuwe klasse cefalosporinen beschreven met 20 op de 7g-plaats een veretherde d-oximinoacylamido-groep, waarvan de oximino-groep de syn-configuratie heeft. Deze klasse van antibiotica wordt gekenmerkt door een hoge anti-bacteriële werking tegen een reeks gram-positieve en grammegatieve organismen, gepaard aan een bijzonder hoge stabiliteit tegen de 25 g-lactamasen die uiteenlopende gram-negatieve organismen vormen.

De ontdekking van deze groep van verbindingen heeft tot verder speurwerk in hetzelfde gebied geleid, om verbindingen met nog betere eigenschappen te vinden, bijvoorbeeld tegen bepaalde groepen van organismen, vooral grammegatieve 20 organismen.

In het Britse octrooischrift J.453.049 is 6302309 te 2

t I

onder meer de verbinding (6R, 7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)- 2- (furyl-2)-2-methoxyiminoaceetamido_/-3-cefem-4-carbonzuur beschreven, die nu onder de triviaalnaam "cefuroxime" bekend is.

In het Britse octrooischrift 1.604.971 is 5 een groot aantal cefalosporinen beschreven waarvan de zijketen op de 7g-plaats onder meer de 2-(2-aminothiazoly1-4)-2-(ver-etherd oxyimino)aceetamido-groep kan zijn, waarbij de verethe-rende groep onder heel veel meer een door cycloalkyl gesubstitueerde alkyl-groep kan zijn, hoewel er geen enkel bepaald voor-10 beeld op een verbinding met zofn groep gericht is. De groep op de 3-plaats kan ook uit een groot aantal alternatieven gekozen worden, en een mogelijke 3-substituent is een eventueel gesubstitueerde carbamoyloxymethyl-groep. Andere cefalosporinen met een 2-(2-aminothiazolyl-4)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido-15 groep op de 7(3-plaats zijn onder, meer beschreven in de Britse octrooischriften 1.584.398 en 2.029.824.

Nu werd gevonden dat men door combinatie van een (Z) -2-(2-aminothiazoly 1-4) -2- (cyclopropyImethoxyimino)-aceetamido-groep op de 78-plaats in combinatie met bepaalde 20 groepen op de 3-plaats cefalosporinen met hierna meer in detail te beschrijven bijzonder voordelige werkingen tegen een grote reeks van veel voorkomende pathogene organismen krijgt.

Deze uitvinding verschaft dan ook cefalosporinen volgens de algemene formule 1., waarin R^ een waterstof-25 atoom of een (J-chloorethyl-groep voorstelt, alsmede de niet- taxsiche zouten en de niet-toxische, metabolisch labiele esters daarvan.

De verbindingen volgens de uitvinding zijn syn-isomeren. De aanduiding "syn" slaat op de stand van de 3Q cyclopropylmethoxy-groep ten opzichte van de carboxamido-groep.

Het gaat hier dus om verbindingen waarin de groep op de 78-plaats de configuratie volgens formule 2 heeft. Men zal begrijpen dat, daar de verbindingen volgens de uitvinding geometrische isomeren zijn, enig vermengen met het overeenkomstige anti-35 isomeer kan optreden.

Binnen het kader van deze uitvinding liggen 8302309 _ W w 3 ook de solveten (vooral de hydraten) van de verbindingen volgens formule 1 en hun niet-toxische zouten. Ook vallen daar onder de niet-toxische zouten en solvaten van de metabolisch labiele esters van verbindingen volgens formule 1. Men zal inzien dat de 5 solvaten natuurlijk farmacologisch aanvaardbaar moeten zijn.

De verbindingen volgens deze uitvinding kunnen in tautomere vormen voorkomen (bijvoorbeeld wat de 2-amino-thiazolyl-groep betreft) en men begrijpt dat zulke tautomere vormen, bijvoorbeeld de 2-iminothiazolinyl-vorm ook binnen het 10 kader van deze uitvinding vallen.

De verbindingen volgens de uitvinding vertonen zowel in vitro als in vivo een breed spectrum van antibiotische werkzaamheid» Ze hebben sterke werking tegen zowel gramrpositieve als tegen gram-negatieve organismen, waaronder 15 vele β-lactamase vormende stammen. De verbindingen hebben ook een hoge stabiliteit in aanwezigheid van (3-lactamasen van uiteenlopende gram-negatieve en gramrpositieve organismen.

Verbindingen volgens de uitvinding bleken .sterke activiteit te vertonen tegen stammen van Staphylococcus 20 aureus, Staphylococcus epidermidis en Streptococcus-stammen, waaronder ook penicillinase vormende stammen van deze gramrpositieve bacteriën. Dat gaat gepaard met een hoge werking tegen diverse leden van de familie der Enterobacteriaceae (te weten tegen stammen van Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, 25 Enterobacter cloacae, Serratia marcescens, Proteus mirabilis en de indool-positieve Proteus-soorten zoals P. vulgaris, P.mor-ganii en de Providence-stammen), tegen stammen van Haemophilus influenzae en Acinetobacter caleoaceticus alsmede een goede werking tegen Pseudomonas-soorten. Deze combinatie van hoge wer-30 king tegen gramrpositieve organismen met een goede werking tegen grammegatieve organismen, zoals bij de verbindingen volgens deze uitvinding, is bijzonder ongewoon.

Niet-tcsxische zouten die men kan vormen door reactie van de carboxyl-groep in deze verbinding met anorgani-35 sche basen omvatten de alkalimetaal-zouten (bijv. van natrium-en kalium), de aardalkalimetaal-zouten (bijv. van calcium), 8302309 “ » i 4 de zouten van aminozuren (bijv. van lysine en arginine) en de zouten van organische basen (bijv. procaine, fenylethylbenzyl-amine, dibenzylethytleendiamine, ethanolamine, diethanolamine en N-methylglucosamine). Andere niet-toxische zouten zijn de 5 zuuradditie-zouten, bijv. met zoutzuur, broomwaterstofzuur, zwavelzuur, salpeterzuur, fosforzuur, mierenzuur en trifluor-azijnzuur. De zouten kunnen ook in de vorm van resinaten zijn, bijvoorbeeld gevormd met een door divinylbenzeen verknoopt polystyreen dat amino- of kwatemaire ammonio-groepen of sulfo-10 groepen heeft, of met een hars dat carboxyl-groepen heeft (bijv. polyacrylzuur). Oplosbare zouten (bijv. die van alkalimetalen zoals natrium) kunnen in therapeutische toepassingen gebruikt worden wegens de snelle verdeling van zulke zouten over het lichaam na toediening. Indien echter voor een bepaalde toepassing 15 onoplosbare zouten van verbindingen volgens formule 1 gewenst zijn, bijvoorbeeld voor preparaten met vertraagde werking, kunnen zulke zouten op gebruikelijke wijze bereid worden, bijvoorbeeld uitgaande van de geëigende organische aminen.

Onder de niet-toxische, metabolisch labiele 20 esters, die men kan vormen door verestering van de carboxyl- groep in een moederverbinding volgens formule 3 vallen de acyl-oxyalkyl-esters zoals acetaxymethyl-, acetoxyethyl- en piyaloyl-oxymethyl-esters, en alkaxycarbonyloxyalkyl-esters, bijy. lagere alkoxycarbonyloxyethyl-esters zoals een ethaxycarbonyloxy-25 ethyl-ester. Naast deze esters vallen binnen het kader van de uitvinding ook andere fysiologisch gelijkwaardige verbindingen, dat zijn fysiologisch aanvaardbare verbindingen die net als de metabolisch labiele esters in vivo in een moederverbinding volgens formule 3 overgaan.

30 Deze en andere derivaten, zoals de zouten van p-tolueensulfonzuur en methaansulfonzuur en de t-butyl- en difenylmethyl-esters kunnen ook als tussenprodukten dienen bij de bereiding en/of zuivering van deze verbindingen volgens formule 3, bijvoorbeeld in de hierna te beschrijven bereidingswijze. 35 Een bevoorkeurde verbinding volgens de uit vinding is (6R,7R)-7/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)-2-cyclopropyl- 8302309 r «· * · 5 me tho2^iminoaceetamido_/-3-carbanioylox7me thy l-3-cefem-4-carb onzuur en de niet-toxische zouten en niet-toxische, metabolisch labiele esters daarvan.

De verbindingen volgens de uitvinding kun-5 nen gebruikt worden voor het behandelen van uiteenlopende ziekten die door pathogens bacteriën in mens en dier veroorzaakt worden, zoals infecties van de ademhalingswegen en de urinewegen.

De uitvinding betreft ook een werkwijze voor het. bereiden van de hierboven gedefinieerde verbindingen volgens 10 de algemene formule 1 en hun niet-toxische zouten en hun niet-toxische, metabolisch labiele esters. Daartoe bereidt men een verbinding volgens de formule 3, fraarin de hierboven voor Rj gegeven betekenis heeft of een N-beschermende groep is, bijv. een labiele groep zoals een acyl-groep, en in het bijzonder 15 lager alkanoyl zoals acetyl, met halogeen gesubstitueerd lager alkanoyl zoals mono-, di- of feriehlooracetyl, of een chloor-sulfonyl- of broomsulfonyl-groep zoals 2,2,2-trichloorethoxy-carbonyl, waarin een halogeenatoom of een carboxylb1okkerende groep voorstelt, bijv. de rest van een ester vormende alifati-20 sche of aralifatische alkohol of van een ester vormend fenol, silanol of stannanol is, waarin R^ een amino- of beschermde amino-groep is, B een zwavelatoom of een sulfaxyde-brug is en de stippellijn aangeeft dat er een dubbele binding tussen atomen 2 en 3 of tussen 3 en 4 zit) of een zout daarvan doordat men 25 (A) een verbinding volgens formule 4 (waarin R£, R^, B en de stippellijn de hierboven gegeven betekenissen hebben) of een zout daarvan (bijv, met een anorganisch zuur zoals HG1, HBr, I^SO^, HNO^ of H^PO^ of met een organisch zuur’ zoals methaan-sulfonzuur of p—tolueensulfonzuur) of een 7-N-silyl-derivaat daar-30 van, acyleert met een zuur volgens formule 5 (waarin R^ de hierboven gegeven betekenis heeft) of een zout daarvan, of met een daarmee overeenkomstig acyleringsmiddel, of laat men (B) een verbinding volgens formule 6 (waarin R^, R^, B en de stippellijn de hierboven gegeven betekenissen hebben) 35 of een zout daarvan reageren met een acyleringsmiddel dat tot de groep -CI^OCONin·^ op de 3-plaats leidt (waarin R2 de hierboyen 3302309 - · * 6 gegeven betekenis beeft) waarna zo nodig en/of desgewenst één der volgende bewerkingen uitgevoerd worden: 2 . 3 i) omzetting van een Δ -isomeer m het gewenste Δ -isomeer, ii) reductie van een verbinding waarin B een sulfoxyde-brug is 5 tot een verbinding waarin B een zwavelatoom is, iii) omzetting van een carboxyl-groep in een niet-toxische, metabolisch labiele ester-groep, iv) vorming van een niet-toxisch zout, en v) verwijdering van eventuele earboxyl-blokkerende en/of N-be- 10 schermende groepen.

Bovengenoemde bewerkingen i) t/m v) kunnen op gebruikelijke wijzen gebeuren.

Bij de hierboven genoemde werkwijze (A) is de uitgangsstof volgens formule 4 bij voorkeur een verbinding 15 waarin B een zwavelatoom is en de stippellijn een dubbele binding tussen atomen 3 en 4 aangeeft.

Hierbij te gebruiken acyleringsmiddelen omvatten de zuurhalogeniden, vooral de zuurchloriden en -bromiden. Zulke acyleringsmiddelen kunnen bereid worden door 20 een zuur volgens formule 5 met PCl^, SOCl^ of oxalylchloride te laten reageren. Acy leringen net zuurhalogeniden kunnen in waterige en niet-waterïge media gebeuren, het beste bij temperaturen tussen -50° en +50°C, bij voorkeur tussen -40° en +30°C, desgewenst in aanwezigheid van een zuurwegvangex. Geschik-25 te media zijn waterige ketenen zoals water/aceton, waterige alkoholen zoals water/ethanol·, esters zoals ethylacetaat, halo-geenkoolwaterstoffen zoals dichloormethaan, amiden zoals di-methylaceetamiden, nitrillen zoals acetonitril, en mengsels van twee of meer van zulke oplosmiddelen. Geschikte zuurwegyangers 30 zijn tertiaire aminen (bijv. triëthylamine en dimethylaniline), anorganische basen (bijv. CaCO^ en NaHCO^) en oxiranen zoals de lagere alkeenoxyden (bijvoorbeeld ethyleenoxyde en propyleen-oxyde) die bij de acy lering vrijkomend HHal binden.

Bij de bereiding van verbindingen volgens 35 formule 1 door acylering kunnen de zuren volgens formule 4 zelf als acyleringsmiddelen dienen. Acyleringen met zuren volgens 8302309 » * 7 formule 5 gebeuren bij voorkeur in aanwezigheid van een conden-satiemiddel, bijv, een carbodiimide zoals ITjN’-dicyclohexyl·-carbodiimide of N-ethyl-N'-Y-dimethylaminopropylcarbodiimide, een carbonyl-verbinding zoals carbonyldiimidazool of een isoxa-5 zoliumrzout zoals N-ethyl-5-fenylisoxazolium-perchloraat.

Het acyleren kan ook gebeuren met andere amide vormende derivaten van zuren volgens formule 5, zoals bijvoorbeeld een geactiveerde ester, een symmetrisch anhydride of een gemengd anhydride (bijv, dat met pivalinezuur of dat wat men 10 door reactie met een alkylhalogeenformiaat verkrijgt). Gemengde anhydriden kunnen ook met fosforzuren ontstaan, (bijv. met orthofosforzuur of fosforigzuur), met zwavelzuur of met alifatische en aromatische sulfonzuren (bijv. met p-tolueen-sulfonzuur). Een geactiveerde ester kan geschikt in situ ge-15 vormd worden, bijvoorbeeld met behulp van 1 -hydroxybenzotria- zool; anderszins kan de geactiveerde ester ook vooraf bereid zijn. Acyleringen met vrije zuren of de bovengenoemde amide-vormende derivaten gebeuren het beste in watervrije media, bijv. dichloormethaan, tetrahydrofuran, dimethylformamide of aceto-20 nitril.

Een andere wijze van activering is bijvoorbeeld de reactie van een zuur volgens formule 5 met een vooraf bereide oplossing of suspensie die ontstaat door een carbonyl-halogenide (vooral oxalylchloride of fosgeenj of een foaforyl-25 halogenide zoals POCl^ aan een oplossing van een tertiair amide zoals Ν,Ν-dimethylformamide in een halogeehkoolwaterstof zoals dichloormethaan toe te voegen. De geactiveerde vorm van het zuur volgens formule 5 kan men dan in een geschikt oplosmiddel of mengsel van oplosmiddelen (bijv. een alkanol zoals waterig 30L ethanol of spiritus uit de handel) met een 7-amino-yerbinding volgens formule 3 te laten reageren. Die acylering kan geschikt gebeuren bij temperaturen tussen -50° en +50°C, bij voorkeur tussen -40° en +30°G, desgewenst in aanwezigheid van een zuur-wegvanger, bijv. een der hierboven genoemde zoals triethyl-35 amine. Desgewenst kunnen deze acyleringen gebeuren in aanwezigheid van een katalysator zoals 4-dimethylaminopyridine.

8302309 - m *» 8

De zuren volgens formule 5 en de daarmee overeenkomstige acyleringsmiddelen kunnen desgewenst bereid en gebruikt worden in de vorm van hun zuuradditiezouten. Bijvoorbeeld kunnen de zuurhalogeniden geschikt als hydrochloriden 5 gebruikt worden, en de zuurbromiden als hun hydrobromiden.

Carbamoylering van de 3-hydroxymeth.yl-verbindingen volgens formule 6 kan met gebruikelijke methoden onder toepassing van geschikte carbamoyleringsmiddelen gebeuren. Zulke geschikte carbamoyleringsmiddelen zijn de isocyanaten vol-10 gens de formule R^-NCO (waarin R,- een labiele substituent of een methyl- of 2-chloorethyl-groep is) waardoor een verbinding ontstaat met op de 3-plaats een substituent volgens de formule -C^O-CO-NHR,. (waarin R,. de hierboven gegeven betekenis heeft).

De labiele groep R^ kan vervolgens gesplitst worden, bijv. door 15 hydrolyse, waardoor een 3-carbamoyloxymethyl-groep ontstaat.

Voorbeelden labiele groepen R,. die gemakkelijk later te splitsen zijn omvatten de hierboven als voorbeelden van groepen genoemde groepen. Zulke labiele groepen kunnen in het algemeen afgesplitst worden door katalyse met zuur of met base (bijv. een 20 basische hydrolyse met NaïïCO^)»

Het reactieprodukt kan op uiteenlopende wijzen gescheiden worden van het reactieprodukt, dat bijv. onveranderde uitgangsstoffen en andere produkten bevat, waaronder herkristalliseren, ionoforese, kolomchromatografie en het ge-25 bruik van ionenwisselaars (bijv. chromatografie over een kolom ionenwisselaar) of maeroreticulaire harsen.

Een op de werkwijze volgens de uitvinding 2 verkregen L -cefalosporme-ester kan desgewenst m het over- 3 eenkomstige, gewenste £ -derivaat omgezet worden, bijv. voor 2 30 behandeling van de Δ -ester met een base zoals pyridine of triëthylamine.

Ook kan een 2-cefem-reactieprodukt tot het overeenkomstige 3-cefem-J-oxyde geoxydeerd worden, bijv. met een perzuur zoals perazijnzuur of m-chloorperbenzoëzuur, waarna het 35 ontstane sulfoxyde tot het overeenkomstige, gewenste 3-cefem- sulfide gereduceerd wordt op de hierna nog te beschrijven wijze.

8302309 “ m · 9

Indien een verbinding -verkregen wordt waarin B een sulfoxyde-brug is kan die in het overeenkomstige sulfide omgezet worden, bijvoorbeeld door reductie van het in situ door reactie met bijv. acetylchloride gevormde acylaxy-5 sulfonium- of alkoxysulfonium-zcrut, welke reductie bijv. met natriumdithioniet of met jodide-oplossing (KJ in een met water mengbaar oplosmiddel zoals azijnzuur, aceton, tetrahydrofuran, dioxaan, dimethylformamide of dimethylaceetamide) gebeurt. De reactie kan bij een temperatuur tussen -20° en +50°C gebéuren.

10 Ïietabolisch labiele esters van de verbin dingen volgens formule 1 kunnen bereid worden door reactie van een verbinding volgens formule 1 of zout of beschermd derivaat daarvan met een geëigend veresteringsmiddel zoals een acyloxy-alkylhalogenide of alkoxycarbonyloxyalkylhalogenide (bijv. het 15 jodide), geschikt in een inert organisch oplosmiddel zoals dime-thylformamide of aceton, indien nodig gevolgd door verwijdering van eventuele Beschermende groepen.

Zouten van de verbindingen volgens formule 1 met basen kunnen gevormd worden door reactie van een zuur vol-20 gens formule 1 met een geëigende base. Bijvoorbeeld kan het natrium- of kalium-zout bereid worden met behulp van het overeenkomstige 2-ethylhexanoaat of bicarbonaat. Zuuradditie-zouten kunnen bereid worden door een verbinding volgens formule I of een metabolisch labiele ester daarvan met het geëigende zuur cm 25 te zetten.

Indien een verbinding volgens formule 1 als een mengsel van isameren verkregen wordt kan het syn-isameer daaruit op gebruikelijke wijzen afgescheiden worden, zoals door kristalliseren of door chromatografie.

30 Indien verbindingen volgens de algemene for mule 5 of de amide vormende derivaten daarvan, zoals zuurhaloge-niden en anhydriden, als uitgangsstoffen bij de bereiding van verbindingen volgens de algemene formule J gebruikt worden verkeren zij bij voorkeur in de syn—vorm of in de vorm van mengsels die 35 voor ten minste 90 Z syn-isameer zijn.

De zuren volgens formule 5 kunnen bereid 8302309 10 worden, door verethering van een verbinding volgens formule 7, (waarin de eerder gegeven betékenissen heeft en Rg waterstof of een carbosyl-blokkerende groep voorstelt) of een zout daarvan, en wel door selectieve reactie met een verbinding volgens 5 de algemene formule 8, waarin T halogeen (zoals chloor, broom of jodium), sulfaat of sulfonaat (zoals tosylaat) is, gevolgd door het verwijderen van een eventuele carboxy1-blokkerende groep Rg. Het scheiden der isomeren kan zowel voor als na een dergelijke verethering gebeuren. De verethering gebeurt geschikt 10 in aanwezigheid van een base zoals K^CO^ of NaH, en bij voorkeur in aanwezigheid van een organisch oplosmiddel, bijv. dimethyl-sulfoxyde, een cyclische ether, zoals tetrahydrofuran of dioxaan, of een tertiair amide, zoals dimethylformamide. Onder die amr standigheden blijft de configuratie van de oxirdno-groep in 15 wezen onveranderd. Als de verbinding volgens formule 7 gebruikt wordt in de vorm van een vrij zuur of een zout met een base gebeurt de verethering in het algemeen in aanwezigheid van een sterke base, bijv, kalium-t-bütylaat, waarbij men genoeg base toevoegt om een dianion te vormen. "Verder moet de reactie in 20 aanwezigheid van een base gebeuren als men het zuuradditie- zout van een verbinding volgens formule 7 inzet, waarbij men dan genoeg base toevoegt om het zuur in kwestie snel te neutraliseren.

Zuren volgens· formule 5 kunnen ook bereid 25 worden door reactie van een verbinding volgens formule 9 (waarin R^ en Rg de eerder gegeven betekenissen hebben) met de verbinding volgens formule 10, gevolgd door verwijdering van een eventuele carboxyl blokkerende groep Rg, en, indien nodig, het scheiden van syn- en anti-isomeren.

30 De zuren volgens formule 6 kunnen op gebrui kelijke wijzen in de overeenkomstige zuurhalogeniden en anhy-driden omgezet worden, bijvoorbeeld zoals hierboven al beschreven is.

De uitgangsstoffen volgens formule 6 kunnen 35 bereid worden met methoden analoog aan die beschreven in het

Britse octrooischrift 1.474.519 en het Amerikaanse octrooischxift 8302309 η 3.976.546. Ook kunnen ze bereid worden door de overeenkomstige 7-amino-3-hydroxymethy1-verbindingen te acyleren, bijvoorbeeld analoog aan de hierboven beschreven werkwijze (A).

Met moet inzien dat het bij sommige van de 5 hierboven beschreven omzettingen nodig kan zijn gevoelige groei-pen in het molecuul in kwestie te beschermen om ongewenste nevenreacties te voorkomen. Bijvoorbeeld kan het bij elk der hierboven besproken reacties nodig zijn de Nl^-groep van het amino-thiazolyl-gedeelte te beschermen, bijv. door tritylering, acy-10 lering (ehlooracetylering of formylering), protonering of op elke andere bekende wijze. De Beschermende groep kan daarna op elke bekende wijze die niet tot afbraak van de gewenste verbinding leidt verwijderd worden, Bijv. in het geval van de trityl-groep met een (eventueel halogeen bevattend) carbonzuur, bijv.

15 met azijnzuur, mierenzuur, ehloorazijnzuur of trifluorazijnzuur, of met een anorganisch, zuur zoala HC1, of met een mengsel daarvan, bij voorkeur in aanwezigheid van een protisch oplosmiddel zoals water of, in het geval van de chlooracetyl-groep, door behandeling met thioureum.

20 Bij de bereiding van verbindingen volgens formule 1 of bij de bereiding van de nodige uitgangsstoffen optredende carboxyl blokkerende groepen moeten in elke fase van de reeks reacties gemafckelijk afgesplitst kunnen worden, bet beste in de laatste fase. Het kan echter in sommige gevallen 25 aantrekkelijk zijn niet-toxische, metabolisch labiele carboxyl-blokkerende groepen zoals acyloxymethyl en acyloxyethyl (bijv. acetoxymethyl, acetoxyethyl of pivaloyloxymethyl) of alkoxy-carbonyloxyalkyl-groepen (bijv. ethoxycarbonylaxyethyl) te gebruiken en deze in het eindprodukt te houden zodat men een ester 30 van een verbinding volgens formule 1 verkrijgt.

Geschikte carboxyl-blekkerende groepen zijn in de techniek welbekend, een lijst van representatieve groepen vindt men in het Britse octrooischrift 1.399.086, Bevoorkenrde geblokkeerde carboxyl-groepen zijn de arylalkoxycarbonyl-groepen 35 zoals p-methaxybenzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl en difenylmethoxycarbonyl, lagere alkoxycarbonyl-groepen zoals t-butoxycarbonyl, en lagere halogeenalkoxycarbonyl-groepen zo- 8302309 * : · * 12 als 2,2,2-trichloorethoxycarbonyl. De carboxyl-blokkerende groep kan vervolgens op één der uit de literatuur bekende wijzen afgesplitst worden, bijv. is in vele gevallen door zuur of base gekatalyseerde hydrolyse toepasbaar, en eveneens enzymatische 5 hydrolyse.

De antibiotica volgens de uitvinding kunnen op elke bekende wijze voor toediening geformuleerd worden, analoog met andere antibiotica, en dus vormen farmaceutische preparaten die een antibioticum volgens de uitvinding bevatten 10 en geschikt gemaakt zijn voor toepassing in mens of dier een ander aspect van deze uitvinding. Dergelijke preparaten kunnen op gebruikelijke wij zen met behulp van de nodige farmaceutische dragers en hulpstoffen voor gebruik gereed gemaakt worden.

De antibiotica volgens de uitvinding kunnen 15 bijvoorbeeld voor injectie geformuleerd zijn en dan de vorm hebben van eenheidsdoses in ampullen of in porties voor meerdere doses, zo nodig met een conserveringsmiddel daarbij. De preparaten kunnen ook de vorm van suspensies, oplossingen of emulsies in olie of water hebben, en kunnen formuleringshulpstof-20 feu bevatten zoals· suspensiemiddelen, stabilisatoren, en/of dispersiemiddelen. Anderszins kan de actieve stof ook in de vorm van een poeder zi jn dat vlak voor gebruik met een geschikte vloeistof, bijv. steriel, pyrogeenvrij water, aangemaakt wordt.

Desgewenst kan zo’n poeder een geëigende 25 niet-taxische basis hebben om de oplosbaarheid van de actieve stof in water te verbeteren en/of er zeker van te zijn dat bij aanmaken van het poeder met water de pH van het resultaat fysiologisch aanvaardbaar is. Anderszins kan de basis ook aanwezig zijn in het water waarmee het poeder aangemaakt moet worden.

30 De basis kan bijvoorbeeld een anorganische zoals natriumcarbo, naat, bicarbonaat of acetaat zijn of een anorganische base zoals lysine of lysine-acetaat.

De preparaten kunnen ook in een voor resorp-tie uit het maagdarmkanaal geschikte vorm gebracht worden, 35 bijvoorbeeld als tabletten, capsules, stropen of suspensies yoor orale toediening of als zetpillen.

8302309 w 13

Preparaten, voor veterinaire toepassing kunnen bijvoorbeeld voor injectie in de uiers geformuleerd worden, hetzij snelwerkend hetzij met vertraagde werking-

De preparaten kunnen vanaf 0,1 % (bijv, 0,1 5 tot 99 %) aan actieve stof bevatten, afhankelijk van de wijze van toediening. Als het om eenheidsdoses gaat zal elke eenheid bij voorkeur 100 tot 3000 mg actieve stof bevatten, bijv. tussen 200 en 2000 mg. Bij het behandelen van volwassen mensen zal men bij voorkeur per dag tussen 200 en 12.000 mg toedienen, 10 bijv. tussen 1000 en 9000 mg per dag, onder meer afhankelijk van de aard van de infectie en de wijze en de frequentie van de toediening. In het algemeen zal men intraveneuze of intramus-culaire toediening toepassen, bijvoorbeeld met 400 tot 4000 mg per dag aan actieve stof, Bij het behandelen van Pseudomonas-15 infecties kunnen hogere dagelijkse doses nodig zijn. Men zal inzien dat in sommige gevallen, bijvoorbeeld bij het behandelen van pasgeborenen, kleinere doseringseenheden en kleinere dagelijkse toedieningen wenselijk kunnen zijn.

De antibiotica volgens de uitvinding kun-20 nen in combinatie met andere therapeutische stoffen zoals antibiotica (bijv. penicillinen of andere cefalosporinen) toegediend worden.

De nu volgende voorbeelden lichten de uitvinding toe. "Sorbsil U30" is silicagel van de firma Joseph 25 Crosfield & Son te Warrington, Lancashire, Groot-Brittannië. "DMS0" staat voor dimethylsulfoxyde.

Preparaat 1

Ethyl-(Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylaminothiazolyl-4)- acetaat.

30 Een mengsel van 30 g ethyl-(Z)-2-hydroxy- imino-2-(2-tritylaminothiazolyl-4)acetaat.HCl, 13,5 g cyclo-propylmethylbromide, 150 ml dimethylsulfoxyde en 30 g K^CO^ werd 7 uur onder stikstof bij 21°G geroerd, en daarna over dichloormethaan en water verdeeld. De waterlaag werd met nog 35 meer dichloormethaan geëxtraheerd en de verzamelde organische oplossingen werden met water gewassen. Na drogen op MgSO^ werd de oplossing geconcentreerd en op een kolom van 200 g Sorbsil 8302309 ^ * J4 U30 gebracht. Deze kolom werd met ethylacetaat in petroleum- ether van 4Q-60°C geëlueerd, met ethylacetaat-gehalten van 10 tot 30 %. Droogdampen van de geëigende fracties gaf 20,9 g van de in de titel genoemde verbinding met (in ethanol) bij 5 234,5 nm (e!* - 403), λ. bij 254,5 nm (E?* = 302), 259,5 < m 1 om inr« x cjn *» nm (E, = 267), 265 nm ( E.1/o * 229), 271,5 nm (E, = 190)

Icm Icm Icm en 294 nm (E, - lil), V (CHBrJ bij 3398 (NH), 1730 1 cm v (ester), en 1593 en 1491 cm X (aromatische dnbbele bindingen). Preparaat 2 10 (Z)-2-cyclopropylmetho;xyimino-2-(2-trityl·aminothiazolyl-4)-azijnzuur.

Van preparaat 1 werd 20 g opgelost in 200 ml ethanol en 3,12 g NaOH in 40 ml water werd toegevoegd. Het mengsel werd 45 minuten onder terugvloeikoeling gekookt, waarbij 15 een neerslag ontstond. Enig ethanol (ca 150 ml) werd afgedestilleerd en het residu afgekoeld. Het mengsel werd nu verdeeld over dichloormethaan en 70 ml 2N HC1 in water. De organische laag werd met water gewassen, waarbij elke waterlaag met CH^Cl^ teruggeëxtraheerd werd. De gecombineerde organische lagen werden 20 met MgSO^ gedroogd en drooggedampt. Dit gaf 20 g van de in de titel genoemde verbinding met 1» ^ (in ethanol) bij 234,5 nm (E*% = 383), 259,5 nm = 242), 266,5 nm (E^% - 226) en

Mem *L * Icm ’ Icm .

272,5 nm (E, = 217); v (Nujol) bij 3260 (NH) en J685 on icm max (zuur).

25 Preparaat 3 (a) (6R,7R)-3-(N-^iethylcarbamoyloxymethyl)-7-(thienyl-2)ace&t-amido-3-cefem-4-carbonzuur

Aan een oplossing van 3,54 g (6R,7R)-3-hydroxymethyl-7-(thienyl-2)aceetamido-3-cefem-4-carbonzuur in 30 150 ml droog Ν,Ν-dimethylformamidé werden onder roeren bij 0 tot 5°C eerst 2,8 ml triethylamine en daarna 5,0 ml methylisocyanaat toegevoegd. Na 3 uur 15 minuten roeren op 4°C werd de oplossing in 1 liter 3 % NaHCO^-op los sing uitgeschonken, en die vloeistof werd met ethylacetaat gewassen. De waterfase werd met ethyl-35 acetaat overdekt en de pH werd met orthofosforzuur tot 2,0 verlaagd. Na omschudden, ontmengen en aftappen werd de waterlaag 8302309 15 verder met ethylacetaat ui.tgetrokken. De organische extracten werden met 0,5 N zoutzuur en met verzadigde pekel gewassen, gedroogd en drooggedampt, wat 1,39 g van het in de titel genoemde zuur gaf met v (Nujol) bij 3420 en 3270 (NH), 2600 en fflaX ~ 5 1728 (C02H, 1760 (β-lactam), 1702 en 1530 cm (C0NH); τ (in DMS0-dg) bij 0,81 (d, J 9 H2, NH), ca 2,50 (aromatische protonen), 4,24 (dd, J5 en 9 Hz, C7-H), 6,16 (s, CH2C0NH), 6,41 (C2-CH2) en 7,37 (d, J5 Hz, CH^NH)» (b) Difenylmethyl-(6R, 7R)-3-(N-methyIcarbamoyloxymethy 1) -7-10 (thienyl-2)aceetamido-3-cefem-4-carboxylaat.

Aan een suspensie van 2,0 g (6R,7R)-3-(N-methyIcarbamoyloxymethy1)-7-(thienyl-2)aceetamido-3-cefem-4-carbonzuur in 50 ml tetrahydrofuran werd onder roeren bij 20°C 15 ml 0,28 M difenyldiazomethaan in dichloormethaan toegevoegd.

15 Na 2 uur roeren op 20°C werd nog 1,0 ml 1,44 M difenyldiazomethaan in dichloormethaan toegevoegd, en een uur later nog eens. Na in totaal 4 uur reactie werd het reactiemengsel drooggedampt. Het residu werd met diethylether opgêroerd en gefiltreerd. De vaste stof werd met een beetje diethylether uitgewassen en ge-20 droogd, wat 2,75 g van de in de titel genoemde verbinding gaf, met v (in Nujol) bij 3354 en 3310 (NH), 1790 (β-lactam),

1704 en 1536 (NHC02R), 1656 en 1536 cm"J (amide); τ (in DMSO-dg) bij 0,78 (d, J 9 Hz, CH2C0NH), ca. 2,2 tot ca 2,9 (thienyl- en difenyl-protonen + NHCH^}, 3,00 (s, CH(CgH^-)2) en 7,39 (d, J 5 25 Hz, NHCH3). yoorbeeld I

(a) Difenylmethyl-(6R,7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2- (2-tritylaminothiazoly 1-4) aceetamido_/- 3-cefem-4-carboxylaat._ 30 Aan een oplossing van 0,38 ml N,N-di- methylformamide in 10 ml dichloormethaan werd bij 20° onder roeren en onder stikstof 0,37 ml oxalylchloride toegevoegd. Na 5 minuten werd het mengsel weer tot -20oc afgekoeld. Nu werd 1,94 g (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylaminothiazolyl-4)azijn-35 zuur toegevoegd en de oplossing werd 10 minuten onder roeren op 0°C gehouden, voordat men het weer tot -20°C afkoelde. Nu werd 8302309 .16 een suspensie van 1,76 g (6R, 7R)-7-amino-3-carbamoyloxyethyl-3-cefem-4-carboxylaat in 10 ml dichloormethaan dat 1,26 ml Ν,Ν-dimethylaniline bevatte toegevoegd. Men liet het mengsel over 12 uur onder roeren tot 21 °C opwarmen. Na verdunnen met 5 Cï^C^ werd met verdund zoutzuur en water gewassen, waarbij elke wasvloeistof met teruggeëxtraheerd werd, en de ge combineerde extracten werden op MgSO^ gedroogd en tot een klein volume ingedampt. Dat werd op een kolom van 70 g Sorbsil U30 gebracht en met een gradiënt van ethylacetaat in petroleum-J0 ether (van 10 X naar 100 % ethylacetaat) geëlueerd. Het eluaat werd drooggedampt, wat 3,03 g van de in de titel genoemde verbinding als schuim gaf, / α_7^β 10,7° (c 1,03 in CHCl^) ·

Xinfl bij 238,5 m (ElL S 278)’ 258,5 (ElL = 227)’ 264,5 = 212), 271,5 (e3* - 186) en 296,5 (E^ - 88).

1 cm 1 cm 1 cm 15 (b) Trifluoracetaat van (6R,7R)-7-/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)- 2-cyclopropylmethoxyiminoaceetamido_/-3-carbamoyloxymethyl-3- cefem-4-carbonzuur. __

Van het produkt van stap (a) werd 2,86 g opgelost in 6 ml anisool en 24 ml trifluorazijnzuur werd bij 20 21°C onder roeren toegevoegd. Na 1,25 uur werd 1,5 ml water toe gevoegd. Na 5 minuten werd de oplossing tot het halve volume ingedampt en werd ca 100 ml diïsopropylether toegevoegd. Het ontstane neerslag werd afgefiltreerd, met diisopropylether gewassen en aan de lucht gedroogd. Deze stof werd in 7 ml mieren-25 zuur opgelost en 3 ml water werd toegevoegd. Na 1,5 uur werd de oplossing tot een olie drooggedampt, die bij oproeren met diisopropylether 1,50 g van de in de titel genoemde verbinding gaf. / = +34,1 (c = 0,7 in chloroform); bij 235 nm (κίΐ, - 308), λ. „ bij 249,5 urn (E?* = 281) en 293,5 nm (E^ = Icm inri icm 4 cm 30 117).

Voorbeeld II

(a) (6R,7R)-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-(2-trityl-aminothiazolyl-4)aceetamido_7-3-hydroxymethyl-3-ce£em-4- carb onzuur._ ' _ ' 35 Aan een oplossing van 0,48 ml N,N-dimethyl- formamide in 13 ml dichloormethaan van -20°C werd onder stik- 8302309 17 stof 0,50 ml oxalylchloride toegevoegd. Na 10 minuten roeren op 0°C en weer afkoelen tot -20°C werd 2,528 g (Z)-2-(cyclo-propyImethoxyimino)-2r(2-tritylaminothiazoly 1-4) azijnzuur toegevoegd, Na nog 20 minuten roeren op 0°C werd de oplossing gecom-5 bineerd met een oplossing van 1,110 g (6R,7R)-7-amino-3-hydroxy-methyl-3-cefem-4-carbonzuur in een mengsel van 20 ml spiritus, 2 ml water en 5 ml triethylamine van 0°C, Na 30 minuten roeren op 0°C werd het geheel drooggedampt, Het vaste residu werd met 20 ml water, 20 ml ethylacetaat en 20 ml 4-methylpentanon-2 op-10 geroerd, en de pH van dit mengsel werd met 20 % fosforzuur op 3,(j|ingesteld. De vaste stof werd af gefiltreerd, achtereenvolgens met water, ethylacetaat en ether gewassen en gedroogd. Aldus werd 1,736 g van de in de titel genoemde verbinding verkregen als e _2o o solvaat met 0,67 mol triethylamine; / α /Z. - +39 (c * 0,75 in “ ~ . 1% 15 DMSO); u.v.-spectrum (Ln ethanol)had "λ bij 238 nm (E-.

«ψ· TBëCïSi -i C1II

327) en λ. bij 259 nm (E* = 250).

mil 1 cm _ (b) Natriunr-zout van (6R,7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)-2-cyclo-propy toethoxyimino-2- (2-tri tylaminothiazo ly 1-4) aceetamido_/-3-cefem-4-carbonzuur.

20 Een oplossing van 150 mg chloorsulfonyl- isocyanaat in 1 ml aceton van -10°C werd onder stikstof toegevoegd aan een oplossing van 565 mg van het produkt van preparaat 3 in 5 ml aceton van -20°C, Na 15 minuten werd de suspensie bij 0°C geroerd. Na 1 uur werd nog eens 150 mg chloorsulfonyl-25 isocyanaat in 1 ml ethylacetaat toegevoegd en na nog een uur roeren nog een portie van 150 mg chloorsulfonylisocyanaat, en vervolgens lml water van 0°C. Na nog een uur roeren op 10 tot 20°C had men een oplossing waarvan de pH met waterige NaOH-oplossing op 2,5 ingesteld werd. Deze oplossing werd met ethylacetaat uit-30 getrokken en het extract werd geconcentreerd. Er werd nug 62 mg vaste stof afgefiltreerd en het filtraat werd ingedampt tot 0,47 g schuim. Een deel hiervan (0,42 g) werd in 10 ml aceton opgenomen en geroerd met 0,57 ml 1 M natrium-2-ethylhexanoaat die tot 2 ml verdund was. Dit gaf 225 mg van de in de titel ge-35 noemde verbinding, waarvan het u.v,-spectrum buigingen bij 236 nm (E^ = 333) en 259 nm (E^ = 255) had.

1 cm i cm 8302309 * *v ♦ 18- (c) (6R,7R)-7-/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)-2-cyclopropylmethaxy-iminoaceetamido_/-3-carbamoylQxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur.

Een oplossing van 136 mg van het in stap (a) verkregen produkt in 1,5 ml mierenzuur werd met 0,5 ml water 5 verdund en 1 uur op 20°C geroerd. De vaste stof werd afgefiltreerd en met mierenzuur /water 3:1 uitgewassen. Het filtraat werd drooggedampt tot een gom die bij oproeren met ether 74 mg van het in de titel genoemde zuur gaf; het u.v.-spectrum daar- van in ethanol had een λ _ bij 237 nm (E.. «* 321) en λ. -« bij ^ m TH3X 1 cm xxixl 10 257 nm (E, - 256); V (in Nujol) 3700 tot 2500 (NEL, NH, i cm mam z OH en water), 1768 (8-lactam), 1710 (C02H en carbamaat) en * 1560 en 1530 cm ^ (amide).

Voorbeeld III

(a) (6R,7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)-2-eyclopropyl-15 methoxyimino-2- (2-tri tylaminothiazoly 1-4) aceetamido_/-3-cefem- 4-carbonzuur. __' .......

Aan een oplossing van 0,38 ml N,N-dimethyl-formamide in 10 ml dichloormethaan werd bij -10°C onder roeren en onder stikstof 0,37 ml oxalylchloride toegevoegd-. Na 10 minu-20 ten roeren onder koeling met ijswater werd weer tot -20°C af gekoeld en werd 1,94 g (Z)-2-eyclopropylmethoxyim£no-2-(2-tritylaminothiazoly 1-4) azijnzuur toegévoegd. Na weer IQ minuten roeren onder koeling met ijswater werd de oplossing onder hevig roeren gecombineerd met een oplossing van 1,09 g (6R,7R)-7-amino-3-25 earbamoyloxymethyl-3-cefem-4-carB.onzuur in een mengsel van 12 ml spiritus, 3 ml water en 2,4 ml triethylamine. Na 5 minuten werd de oplossing over water en dichloormethaan verdeeld. Verdund zoutzuur werd toegevoegd om de pH. van de waterlaag beneden 2 te krijgen. De waterlaag werd met meer dichloormethaan uitgetrok-30 ken en de verzamelde organische lagen met water gewassen, op MgSO^ gedroogd en drooggedampt. Het residu werd met diethyl-ether opgeroerd wat 2,32 g van de in de titel genoemde verbinding gaf, met / et + 15,88° (c = 0,69 in CHClO ï V (in Nujol) bij 3540 tot 3100 (NH, NH^, OH en water), 1785 (0-lactam), 35 1720 (zuur en carbamaat) en 1683 en 1510 cm ^ (amide).

8302309 19 (b ) 1 -Acetoxy-1 -ethyl- (6R, 7R) -3-earbamoyloxymethy 1—7—/ (Z) -2-cyclopropylmethcocyimino-2- (2-tritylaminothiazoly 1-4) aceetamido_/- 2-cefenr-4-carboxylaat._

Een mengsel van 1,1 g (6R,7R)-3-carbamoyl-5 oxymethyl-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylamino-thiazolyl-4)aceetamido_/-3-cefemr-4-earbonzuur, 105 mg l^CO^ en 5 ml dimethylformamide werd onder stikstof en onder koeling met ijswater geroerd. Na 5 minuten werd 300 mg 1-acetoxyethylbramide toegevoegd. Na een uur op ijsbad-temperatuur en 2,5 uur op 21°C 10 werd het mengsel over ethylacetaat en waterig zoutzuur verdeeld. De waterlaag werd met meer ethylacetaat uitgetrokken en de verzamelde organische lagen met pekel gewassen, op MgSO^ gedroogd en tot een schuim drooggedampt, Dit werd gechromatografeerd over 50 g Sorbsil 1130 met 10 tot 70 % ethylacetaat in petroleumr 15 ether van 40-60°C. Dat gaf 840 mg van de in de titel genoemde verbinding met v (in CHBr„) bij 3538, 3403 (NR en NH_), 1785 (0-lactam), 1730 (ester en carhamaat) en 1688 en 1513 cm (amide); τ (in CDCl^) o.m. bij 3,04 (NE en OCHCH^), 3,22 (thiazool-proton), 4,19 en 4,70 (7-H en 6-H), 4,8 tot 5,6 20 (3CH2 en NH^) en 5,90 (-CH^O).

(c) (l-acetoxyethyl)-(lS'. 6R, 7R)-3-carbamoy 1 axymethy 1-7-/ (Z)- 2- cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylaminothiazoly1-4)aceetamido7~ 3- cefem-4-carboxylaat-oxyde. _~

Van het produkt van stap (b) werd 2,7 g 30 25 minuten onder koeling met ijswater geroerd met een oplossing van 734 mg 3-chloorperbenzoizuur in 20 ml dichloormethaan. De oplossing werd met NaHCO^-oplossing en met water gewassen, waarbij de waswaters steeds met dichloormethaan teruggeëxtraheerd werden. De verzamelde organische lagen werden op MgSO^ gedroogd en ge-30 concentreerd. Het residu werd gezuiverd door chromatografie over 50 g Sorbsil met een 1:1 mengsel van ethylacetaat en petroleumether van 40-60°C, en daarna met puur ethylacetaat.

Dat gaf 2,26 g van de in de titel genoemde verbinding met +47,7° (c » 0,75 in CHC13). (in Nujol) bij 3700- 35 3100 (NE en NH„), 1789 (β-lactam), 1729 (ester), 1705 (carbamaat), ^ -1 1698 en 1520 (amide) en 1069 cm (sulfoxyde).

8302309 . w # 20 (d) (3-aceto.xyethyl)-(6R,7R)-3-carbamoylo:xymethyl-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethcocyimno—2-(2-tritylaminothiazolyl-4)aceetamido_/- 3-cefem-4-carboxylaat._

Van het prodxikt van stap (c) werd 2,1 g 5 opgelost in 35 ml dimethylformamide en 1,63 g kalium jodide werd onder roeren en koeling met ijs toegevoegd, en vervolgens 0,35 al acetylchloride. Na ongeveer een uur werd nog 0,17 ml acétyl-chloride toegevoegd. Na nog eens 30 minuten werd de oplossing over ethylacetaat en een waterige natriummetabisulfiet-oplossing 10 verdeeld. De waterlaag werd met meer ethylacetaat nitgetrokken en de organische lagen werden samen achtereenvolgens uitgewassen met verdund zoutzuur en tweemaal met pekel. Na drogen op MgSO^ werd de oplossing geconcentreerd en het residu over 50 g Sorbsil gechromatografeerd met 50 tot 70 % ethylacetaat in 15' petroleumether van 40-60°C. Dat gaf 1,73 g van de in de titel genoemde verbinding met / a_/^ 88 +23,1 (c 1,1 in CECl^) 5 v (in CHEr0) bij 3540, 3403 (NH en NH0), 1793 (β-lactam), USX J z , 3752 en 1732 (esters) 3720 (carbamaat) en 3689 en 3537 cm (amide).

20 (e) (l-acet02eyeth.yl)-(6R,7R)-7-/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)-2- cyclopropylmetfroxyiminoaceetamido_7-3-carbamoylcKymethyl-3- cefem-4-carboyylaat._____'

Aan een oplossing van 1,5 g (1-acetoxyethyl)-(6R,7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-25 (2-tritylaminothiazolyl-4)aceetamido_/-3-cefem-4-carboxylaat in 15 ml mierenzuur werd 7,5 ml water toegevoegd. Na 1 { uur op 23°C werd het mengsel gefiltreerd en de filterkoek met mieren-zuur/water uitgetrokken. De filtraten werden samen geconcentreerd en het residu in isopropanol opgenomen. Dat werd drooggedampt en 30 dat residu werd over ethylacetaat en waterige NaHCO^-oplossing verdeeld. De waterlaag werd met meer ethylacetaat uitgetrokken en de organische lagen werden samen met pekel gewassen en op MgS04 gedroogd. Na droogdampen werd het residu met 5 ml isopropanol opgeroerd wat 540 mg van de in de titel genoemde yerbin-35 ding gaf met /"et 7? » +37,9° (c = 3,2 in CHC1J; λ (ethanol) bij 238,5 nm (E^ = 287), λ. „ bij 256 nm (E^* = 249) en J ’ Icm mfl J Icm 8302309 21 5 φ bij 280 nm (E.1% - 179),

Voorbeeld IV

(a) (1-ethoxycarbonyloxyethy 1)-(6R, 7R) -3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylaminothiazolyl-4)- 5 aceetamido /-3-cefem-4-carboryIaat._

Een oplossing van 1,1 g- (6R, 7R)-3-carbamoyloxymethyl-7-/ (Z) -2- cyclopropylmethoxyimino-2-(2-tritylaminothiazolyl-4)aceetamido^/- 3-cefem-4-carbonzuur in 5 ml dimethylformamide werd onder stikstof en onder koeling met ijswater met 105 mg K^CO^ geroerd. Na 10 minuten werd l-(eth.oxycarbonylaxy)ethylbromide toegevoegd. Na nog een uur liet men het mengsel in 3 uur onder roeren tot 21 °C opwarmen. Dat mengsel werd over ethylacetaat en waterig zoutzuur verdeeld. De waterlaag werd met meer ethylacetaat uitge-txokken en de organische lagen werden samen tweemaal met pekel 15 gewassen op MgSO^ gedroogd en geconcentreerd. Het residu werd over 50 g Sorb si 1 geehromatografeerd met 10 tot 60 % ethylacetaat in petroleumether van 40 tot 60°C. Dat gaf 930 mg yan de in de titel genoemde verbinding met / a_/^ = +44,0° (c * 1,36 in CHC1-); λ (in ethanol) bij 230 nm (E^A a 312), λ. .. bij 20 236 nm (E1Z - 295) en 259 nm (E?% - 226).

I cm i cm (b) 1-(ethoxycarbonyloxy)-ethyl-(6R, 7R) -7-/ (Z)-2-(2-amino- thiazolyl-4)-2-cyclopropylmethoxyiminoaceetamido_/-3-carbamoyl-ozymethyl-3-cefemr4-carbomylaat._

Van het produkt van stap (a) werd 810 mg 25 opgelost in 8 ml mierenzuur en onder roeren werd bij 21 °C 4 ml water toegevoegd. Na 1 uur en 15 minuten werd het neerslag af gefiltreerd en de_filterkoek met mierenzuur /water 2:1 uitgetrokken. De filtraten werden samen geconcentreerd en het residu met diethylether opgeroerd wat 340 mg van de in de titel genoemde 30 verbinding gaf met / ct_7^e +56,35° (c = 1,3 in CHCl^ + 1 drup DMSO); v (in Nujol) bij 3700-3100 (NH0+NH), 1768 (g-lactam), ΙΠ3Χ « 1722 (ester), 1704 (carbamaat) en 1678 en 1535 cm (amide).

Voorbeeld V

(a) Difenylmethyl-(6R,7R)-7-/ (Z)-2-cyclopropylmethoxyimino-2-35 (2-tritylaminothiazolyl-4)aceetamido_/-3-(N-methylearbamoyloxy-rnethy 1) -3-cef em-4-carb onzuur. ___ 8302309 0 , 22

Een oplossing van 500 mg difenylmethyl-(6B.,7R)-3-(N-methylcarbamoyloxymethyl)-7-(thienyl-2)aceetamido-3-cefem-4-carboxylaat in 26 mil dichloormethaan werd onder stikstof tot 5°G afgekoeld en 0,11 ml pyridine werd toegevoegd, en 5 daarna 0,28 g PCI,.. Het mengsel werd lg uur op 5°C geroerd en nog 51 mg PCl^ en 0,02 ml pyridine werden toegevoegd. Na iiog 30 minuten roeren werd het mengsel van 5°C onder stikstof uitgeschonken in een oplossing van 0,87 ml butaandiol-J,3 in 8,7 ml dichloormethaan, ook van 5°C. Na 40 minuten roeren op 5°C j0 werd 8,7 ml water toegevoegd, èn na 50 minuten roeren op 10°C

werd de organische laag afgescheiden. De waterlaag werd met meer dichloormethaan uitgetrokken en de organische lagen werden samen gedroogd en tot een klein volume geconcentreerd. Dat gaf een oplossing van difenylmethy 1-(6R,7R)-7-amino-3-(N-methyIcaxbamoy 1-15 axymethyl)-3-eefem-4-carboxylaat (oplossing A).

Aan een oplossing van 0,09 ml N,N-dimethyl-formamide in 2,3 ml dichloormethaan werd bij -20°C 0,09 ml oxa-lylchloride toegevoegd. Het mengsel werd 1 minuut op -20°C geroerd, dan 10 minuten in een ij shad en tenslotte weer tot -20f°C 20 afgekoeld. Nu werd 440 mg (Z)-2-cyc 1 opropylmethoxy imino-2-(2-tritylaminothiazoly1-4)azijnzuur toegevoegd en na 10 minuten roeren onder koeling met een ijsbad werd weer tot -20°C afgekoeld (oplossing B).

Oplossing A (ea 5 ml) werd met Q,28 ml 25 Ν,Ν-dimethylaniline gecombineerd en dan snel bij oplossing B.

van -20°C toegevoegd. Na 10 minuten roeren op 0°C liet men tot kamertemperatuur opwarmen. Na 30 minuten roeren op kamertemperatuur werd het mengsel met dichloormethaan verdund en met 2 N zoutzuur en dan met water gewassen. De organische laag werd 30 afgescheiden, gedroogd en drooggedampt. Het aldus verkregen ruwe produkt werd over silicagel gechromatografeerd met een mengsel van ethylacetaat en petroleumether van 40-60°C. Dat gaf 0,443 g van de in de titel genoemde verbinding als een schuim met Γα = +28,6° (c = 1,05 in DMSO); v (in CHBrJ hij 3456 en — — v max o 35 3400 (NE), 1790 (fj-lactam), 1728 (ester), 1688 (0C0NHCH ), 4683 en 1516 (amide) en 753 en 739 cm (fenyl).

8302309 23 (b) (6R, 75.)-7-/ (Z)-2-(2-amxnothiazalyl-4)-2-cyclopropyl-methoxyiminoaceetamido_7-3- (N-rmethy lcarbamoy loxymethyl) -3- cef em-4-carbonzuur« ..........................

Een oplossing van 0,34 g van het produkt 5 van stap (a) in 3,6 ml trifluorazijnzuur werd 5 minuten op 5°C en 35 minuten op kamertemperatuur geroerd. De oplossing werd met dixsopropylether verdund en de dan ontstane vaste stof afgefiltreerd, met diïsopropylether uitgewassen en gedroogd. Dat werd opgelost in een mengsel van 2 ml 98 % mierenzuur en 1,0 10 ml water werd toegevoegd. Na 30 minuten roeren werd het ontstane neerslag afgefiltreerd en de filterkoek met mierenzuur/ water-mengsel uitgewassen. Het filtraat werd geconcentreerd en dixsopropylether werd toegevoegd. De vaste stof die nu neersloeg werd opgevangen, met dixsopropylether uitgewassen en gedroogd, 15 wat 93 mg van de in de titel genoemde verbinding gaf, met l" a_/D * +25,0° (c = 0,60 in DMSO); \>may (in Nujol) bij 3700 tot 2.100 (NH + NH^ + OH), 1776 (0-laetam), 1660 en 1543 (amide) en 1720 tot 1600 cm-1 (OCONHCEj + C0“ + COjH) .

Voorbeeld 71 20 Droog poeder voor injectie.

Steriel natrium-zout van (6R,7R)-7-/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)-2-cyclopropylmethoxyiminoaceetamido_/-3-carbamoyloxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur wordt aseptisch in glazen ampullen afgevuld, zodanig dat de inhoud van elke ampul over-25 eenkomt met 1,0 g van het antibioticumzuur. De bovenstaande ruimten worden met steriel stikstof uitgespoeld en de ampullen worden met rubber schuifjes of stoppen en metalen doppen gesloten, die met krimp opgebracht worden. Dit produkt kan aangemaakt worden door het vlak voor toedienen in water voor injecties of in 30 een andere geschikte steriele vloeistof op te lossen.

Het bovengenoemde natrium—zout kan op gebruikelijke wijze bereid worden, bijvoorbeeld door de verbinding van voorbeeld II met een geëigende base te laten reageren. Voorbeeld VII

35 Droog poeder voor injectie.

8302309 m 24 (6R,7R)-7-/ (Z)-2-(2-aminothiazolyl-4)-2- 1,00 g cyclopropylmethoxyiminoaceetamido_/-3-carbamoyloxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur Natriumcarbonaat (watervrij) 0,140 g 5 Meng het steriele eefalosporine aseptisch in een poedermenger met het natriumcarbonaat. Vul dit mengsel aseptisch in glazen ampullen, zodat de inhoud van elke ampul overeenkomt met 506 mg eefalosporine. Spoel de bovenstaande ruimten met steriel stikstof uit en sluit de ampullen met rubber 10 schijfjes of stoppen en daaroverheen onder krimp metalen doppen. Dit produkt kan aangemaakt worden door het vlak voor toedienen op te lossen in water voor injectie of een andere geschikte steriele vloeistof.

15 8302309

Claims (6)

1, Cefalosporine volgens de algemene formule 1, waarin Rj een waterstofatoom of een methyl- of 5 2-chloorethyl-groep voorstelt, en de niet-toxische zouten en de niet-toxische, metabolisch labiele esters daarvan.

2. De verbinding volgens conclusie 2 waarin Rj waterstof is, en de niet-toxische zouten en de niet-toxische, metabolisch labiele esters daarvan,

3. Aan de amino-groep en/of de carbaxyl- groep geblokkeerde vormen van de verbindingen volgens conclusie J of 2.

4. Werkwijze voor de bereiding van een ver- (A) binding volgens formule 1, met het kenmerk, dat men een verbin-15 ding volgens formule 4, waarin R£ de in conclusie 1 aan Rj toegekende betekenissen heeft of een N-beschermende groep is, R^ een waterstofatoom of een carboxyl-blokkerende groep voorstelt, B een zwavelatoom of een sulfoxyde-brug is en de stippellijn aangeeft dat er tussen atomen 2 en 3 of tussen 3 en 4 een dubbele 20 binding zit, of een zout of een 7-N-silyl-derivaat daarvan acy-leert met een verbinding volgens formule 5, waarin R^ een amino-of beschermde amino-groep is, of een zout daarvan, of met een daarmee overeenkomstig acylerittgsmiddel, of dat men ( B) een verbinding volgens formule 6, waarin R^, R^, 25. en de stippellijn de eerder gegeven betekenissen hebben, of een zout daarvan, laat reageren met een acyleringsmiddel dat tot een groep -CH^O-CO-NHR^ °P de 3-plaats leidt, waarin R^ de eerder gegeven betekenis heeft, waarna zo nodig en/of desgewenst een der volgende bewerkingen 3Q uitgevoerd worden: 2 3 i) omzetting van een Λ. -isomeer in het gewenste £ -isomeer, ii) reductie van een verbinding waarin B een sulfaxyde-brug is tot een verbinding waarin B een zwavelatoom is, iii) omzetting van een carhoxyl-groep in een niet-toxische, 35 metabolisch labiele ester-groep, ivj -vorming van een niet-toxisch zout, en Ö 3 0 2 3 0 9 / ν) verwijdering van eventuele carbaxyl-blokkerende en/o£ N-be-schermende groepen.

5. Farmaceutisch, preparaat dat als werkzame stof een verbinding volgens een der conclusies 1, 2 of 3 5 bevat,

6. Nieuwe verbinding volgens beschrijving en/of voorbeelden, » 8302309 ^ s. NlHa Λ Γ \ —/ - ƒ = = L=Lc^CO-NH- II A -4—f5^ ιι Ν\ ƒ J— Ν V-C^OCONHR, . ACH _*Ί OCHa-<1 ο Τ och2—<^J A COOH t 0 R* r Z A. S N LLC_/ Ϊ * I a —ΗΛ N } NvA^-CHiOCONHRa 0CH2—<1 0 1 . C00R3 3 Η H = = R4 H^N Ξ-iAA 1 J— NxJ—CHi- Οχ Rg I C— N ' \===d-, C-rCOOH A 0/ Η I 0 or3 n 4. noch^—<^J Rit A S N MW.· \ / = Ξ l=L-C CO .NH —-:-£^B\ N J-N^pjLcHeOH T^CHi—<] \-CHa—<J C—ORs 8 0 0 R* I Ra S^N ' A \=/-OCOOR, s\ ,N ,° Η,Ν-0-CH,-^ II '-A \ c\ 10 ™ 7 9 8302309 Glaxo Group Limited, Londen., Groot Brittannië