NL8105334A - Middel voor de profylaxe en de behandeling van varkensdysenterie. - Google Patents

Description

A

* S 4001-232 p & c

Middel voor de profylaxe en de behandeling van varkensdysenterie.

De uitvinding heeft betrekking op een verbetering voor de varkensfok-kerij.

Meer in het bijzonder verschaft de uitvinding een werkwijze voor de profylaxe en de behandeling van varkensdysenterie of voor het verbeteren 5 van de produktiviteit bij het fokken van varkens, volgens welke werkwijze men aan varkens één of meer verbindingen volgens de formule van het formu-

1 H

leblad toedient, in welke formule R =0 of<* voorstelt, en elk der sym-

2 3 OH

bolen R en R een waterstofatoom of een van carbonzuur afgeleide acyl- groep is. Verder verschaft de uitvinding een preparaat voor de profylaxe 10 en de behandeling van varkensdysenterie of voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van varkens, welk preparaat een verbinding volgens de formule van het formuleblad bevat. Andere aspecten van de uitvinding blijken uit de onderstaande beschrijving.

Varkensdysenterie is een epidemische ingewandsziekte bij varkens, die 15 veroorzaakt wordt door Treponema hyodysenteriae, waarvan bloederige, slijm bevattende diarree een overheersend symptoom is. In de meeste landen met varkensteelt komt deze ziekte veelvuldig voor. Eenmaal uitgebroken wordt.deze is, dan ziekte over het gehele gebied verspreid enrbuitengewoon moeilijk uit te schakelen, en veroorzaakt daar waar grote kudden gehouden worden een sterk 20 verminderde benutting van het voer, hetgeen bijdraagt aan ernstige economische verliezen.

Tot nu toe zijn verscheidene geneesmiddelen toegepast voor de profylaxe en behandeling van varkensdysenterie, maar geen van deze geneesmiddelen is volledig bevredigend gebleken, omdat sommige hiervan niet voldoende werk-25 zaam zijn, terwijl de werking van andere geneesmiddelen vergezeld gaat van ernstige ongewenste effecten of deze geneesmiddelen vermoed worden onveilig, in het bijzonder carcinogeen, te zijn.

Als resultaat van intensief onderzoek is nu verrassenderwijs gebleken dat de verbindingen met de formule volgens het formuleblad een duidelijke 30 profylactische en therapeutische werking op varkensdysenterie hebben, welke werking met de tot nu toe toegepaste geneesmiddelen nooit is verkregen; verder is gebleken dat de verbindingen met de formule volgens het formuleblad de groei van varkens bevorderen en de benutting van het voer verbeteren, waardoor de produktiviteit van het fokken van varkens verhoogd wordt.

35 De verbindingen volgens de formule van het formuleblad kunnen veilig toegepast worden in de varkensfokkerij, en zijn derhalve zeer geschikt voor vee.

De verbindingen volgens de formule van het formuleblad omvatten anti- ' 01 0 5 3 3 4 Γ -jü - 2 - biotische stoffen, die de antibioticagroep T-2636 vormen, welke groep van antibiotica geïsoleerd wordt uit de cultuur van Streptomyces rochei var.

volubilis en tezamen worden aangeduid als lankacidinen, alsmede derivaten 1 2 hiervan. Voor wat onder andere betreft lankacidine A (E : =0, R : H,

5 R^: COCH,) , lankacidine C (R1: =0, R2: H, R2: H), lankacidinol A (R1: <T

2 i 1 H 2 3 OH

R : H, R3: COCH,) en lankacidinol (R : <^ , R : H, R : H), worden het

Ó OH

organisme dat deze stoffen kan vormen, werkwijzen ter bereiding hiervan en fysico-chemische en biologische eigenschappen hiervan bijvoorbeeld beschreven in Journal of Antibiotics, 24, 1-41 (1971); voor wat onder andere be- 12 3 10 treft lankacidine A 8-propionaat (R ; =0, R :C0CH CH , R : COCH ), lankaci-

12 3 1 J

dine C 8-acetaat (R : =0, R : COCH , R ; H), lankacidine C 8-propionaat 1 2 3 3 1 2 (R : =0, R : C0CH.CH,, R : H) , lankacidine C 14-propionaat (R : =0, R : H, 3 2 J 12 3 R : COCH CH-), lankacidine C 8,14-diacetaat (R: =0, R , R : COCH ), lapka-

10 12 3 J

cidine C 8,14-dipropionaat (R : =0, R , R : COCH CH,) lankacidine C 8-ben- 12 3 1 J 1 2 15 zoaat (R : =0, R : COPh, R : H) , lankacidine C 14-benzoaat (R : =0, R : H, R2: COPh), lankacidine C 14-fenylpropionaat (R*: =0, R2: H, R2ï COCH.CH„Ph)

12 3 ^ I

en lankacidine C 14-nicotinaat (R : =0, R : H, R : nicotinoyl) , worden werkwijzen ter bereiding hiervan en fysico-chemische en biologische eigenschappen hiervan bijvoorbeeld beschreven in Journal of Antibiotics, 26_, 647-657 1 2 3 20 (1973); voor wat betreft lankacidine C 14-formiaat (R ; =0, R : H, R ; COH) worden een werkwijze ter bereiding hiervan en fysico-chemische eigenschappen hiervan bijvoorbeeld beschreven in het Amerikaanse octrooischrift 3.626.055.

Het organisme Streptomyces rochei var. volubilis, dat in staat is 25 lankacidine A, lankacidine C, lankacidinol A en lankacidinol te vormen, is gedeponeerd bij het "Institute for Fermentation" (Osaka) en de "American Type Culture Collection" onder respectievelijk . nummers IFO 12507 en ATCC 21250.

De van een carbonzuur afgeleide acylgroep, die wordt voorgesteld door 2 3 30 de symbolen R en R in de algemene formule van het formuleblad, is bij voorkeur een rest van een laag vetzuur (in het bijzonder met 1-7 koolstof-atomen, bijvoorbeeld formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, vale-ryl, hexanoyl) of een rest van een aromatisch carbonzuur (bijvoorbeeld een rest van een arylcarbonzuur zoals- benzoyl, een rest van een hetero-aroma-35 tisch carbonzuur zoals nicotinoyl). Deze rest van een laag vetzuur kan gesubstitueerd zijn door een fenylgroep aan het eindstandige koolstofatoom hiervan (bijvoorbeeld fenylacetyl, fenylpropionyl, enz.).

In het bijzonder de voorkeur verdienende voorbeelden van verbindingen volgens de formule van het formuleblad, die volgens de uitvinding kunnen 8105334 - 3 - * * 2 3 worden toegepast, zijn die verbindingen waarin elk der symbolen R en R een waterstofatoom of een C^-C^-vetzuurrest voorstelt. Onder andere gebruikt men bij voorkeur lankacidine A, lankacidine C, lankacidine .C 14-pro-pionaat, lankacidine C 8-acetaat, lankacidine C 8-propionaat, lankacidinol 5 A, lankacidinol en mengsels hiervan. De toepassing van lankacidine A en/of lankacidine C is in het bijzonder van voordeel.

Het volgens de uitvinding voor varkens toe te passen preparaat kan één verbinding volgens de formule van het formuleblad of gelijktijdig twee of meer verbindingen volgens de formule van het formuleblad, bijvoorbeeld 10 een mengsel van een overwegende hoeveelheid lankacidine A met lankacidine C, bevatten. Verder kunnen ook fermentatiemedia, verkregen door kweken van het bovengenoemde organisme Streptomyces rochei var. volubilis, als gedroogde produkten of extracten hiervan toegepast worden.

Het preparaat voor het voorkomen of behandelen van varkensdysenterie 15 of voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van varkens kan bereid worden door een verbinding volgens de formule van het formuleblad te verwerken tot doseringsvormen zoals poeders, korrels, tabletten, vloeistoffen, pasta's,-capsules, injecteerbare oplossingen, enz.,..samen met een vast of vloeibaar verdunningsmiddel, zonder een verdunningsmiddel of na 20 stabilisatie door bekleden, of door een verbinding volgens de formule van het formuleblad toe te voegen aan voer of drinkwater, en wel direkt of na dispergering in een verdunningsmiddel ter bereiding van een voormengsel.

Het aanlengmiddel kan vast of vloeibaar zijn.

Men kan ieder aanlengmiddel gebruiken dat op zich fysiologisch aan-25 vaardbaar is; bij voorkeur gebruikt men een aanlengmiddel dat als voer of als bestanddeel hiervan kan dienen. In het algemeen wordt een verbinding volgens de formule van het formuleblad opgenomen in voer of in een voormengsel dat in het toe te dienen voer wordt opgenomen. Voorbeelden van vaste verdunningsmiddelen (aanlengmiddelen) zijn basis-voedermaterialen voor 30 varkens zoals gerstbloem, tarwebloem, roggebloem, maïsmeel, sojabloem, sojameel, raapzaadmeel, kaf, rijstzemelen, ontvette rijstzemelen, bataat-poeder, aardappelpoeder, sojakoek, zetmeel, lactose, saccharose, glucose, fructose, gist, afvalgist, vismeel, enz.; en anorganische materialen zoals talk, witte klei en klei. Het vloeibare verdunningsmiddel is bijvoorbeeld 35 water, fysiologische zoutoplossing of een fysiologisch aanvaardbaar organisch oplosmiddel.

Geschikte hulpmiddelen, zoals een emulgeermiddel, dispergeermiddel, suspendeermiddelbevochtigingsmiddel, verdikkingsmiddel, geleringsmiddel, oplosbaarmakend middel of stabiliseermiddel, kunnen in geschikte hoeveel- 8105334 - 4 - * *

V

r heden worden toegevoegd. Verder kan een antisepticum, fungicide, antibioticum, gistpreparaat 'en/of lactobacilluspreparaat worden toegepast. De samenstelling kan ook vitaminen, mineralen en aminozuren bevatten. Voorbeelden van minerale materialen zijn mangaan (bijvoorbeeld mangaancarbonaat, 5 mangaansulfaat), ijzer (bijvoorbeeld ferrofumaraat, ferrosulfaat), cobalt (bijvoorbeeld cobaltosulfa'at, cobaltochloride), koper (bijvoorbeeld cupri-sulfaat, cuprifosfaat, cuprichloride), zink (bijvoorbeeld zinkcarbonaat, zinkchloride), jood (bijvoorbeeld calciumjodaat, calciumjodide, natrium-jodide). Voorbeelden van vitaminen zijn in water onoplosbare vitaminen 10 (bijvoorbeeld vitamine A, vitamine D^) en in water oplosbare vitaminen (bijvoorbeeld vitamine B , vitamine C), en voorbeelden van aminozuren zijn essentiële aminozuren (bijvoorbeeld D,L-methionine, lysine).

Het materiaal van de uitvinding bevat in de vorm van voer met voordeel als aanlengmiddel maismeel en/of sojameel en in de vorm van een voor-15 mengsel met voordeel één of meer minerale stoffen die in een toe te dienen voer aanwezig dienen te zijn.

De onderhavige verbindingen met de formule volgens het formuleblad kunnen met voordeel opgenomen worden in een voormengsel en aan varkens worden toegediend in de vorm van een mengsel van het voormengsel' met aanleng-20 middelen. Een dergelijk voormengsel kan met voordeel een verbinding vlg.de formule volgens het formuleblad in een gewichtsconcentratie van circa 0,5 - 80 % en bij voorkeur circa 1 - 50 % bevatten.

Het preparaat dat een verbinding volgens de formule van het formuleblad bevat, kan bijvoorbeeld bereid worden door een verbinding met de for-25 mule van het formuleblad en de bovengenoemde aanlengmiddelen te mengen.

Het voormengsel van de uitvinding kan verkregen worden door verder mengen met één of meer minerale stoffen.

Het preparaat is bij voorkeur een vaste stof gezien de praktische toepassing, dat wil zeggen voor het stabiliseren van de verbinding volgens de 30 formule van het formuleblad, de verdeling en de toediening.

De juiste dosis van de onderhavige verbinding volgens de formule van het formuleblad voor de profylaxe of behandeling van varkensdysenterie of voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van varkens, kan geschikt gekozen worden in afhankelijkheid van de leeftijd en de toestand 35 van de varkens, de wijze van toediening, enz.

In het algemeen wordt een verbinding volgens de formule van het formuleblad oraal aan varkens toegediend in een hoeveelheid van circa 0,025 -25 mg per kg lichaamsgewicht; in de praktijk wordt een voer, dat een verbinding met de formule van het formuleblad in een gewichtsconcentratie van 8105334 - 5 - circa 0,5 - 500 ppm bevat, oraal ad libitum aan varkens toegediend.

Meer in het bijzonder verdient het voor de profylaxe van varkens-dysenterie de voorkeur een verbinding volgens de formule van het formuleblad toe te dienen in een dosis van circa 0,05 - 25 mg/kg/dag, hetgeen ge-5 schikt kan geschieden door een verbinding volgens de formule van het formuleblad in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 1 - 500 ppm, bij voorkeur 2 - 200 ppm. Voor het behandelen van varkensdysenterie verdient het de voorkeur een verbinding volgens de formule van het formuleblad toe te dienen in een dosis van circa 1 - 25 mg/kg/dag, hetgeen ge-10 schikt kan geschieden door een verbinding volgens de formule van het formuleblad in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 2 - 500 ppm en bij voorkeur circa 2,5 - 200 ppm. Voor het verhogen van de produktivi-teit bij het fokken van varkens verdient het de voorkeur circa 0,025 -10 mg/kg/dag van een verbinding volgens de formule van het formuleblad toe 15 te dienen door deze verbinding in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 0,5 - 200 ppm en bij voorkeur circa 1 - 100 ppm.

De toxiciteit van de verbindingen volgens de formule van het formuleblad in dieren is zeer gering. Zo is bijvoorbeeld bij proeven ter bepaling van de acute toxiciteit bij muizen gebleken dat de LD^-waarde (oraal) meer 20 dan 10.000 mg/kg bedroeg voor lankacidine C, lankacidine C 14-propionaat en lankacidine A; de intraperitonale LD -waarde bedroeg 8000 - 10.000 mg/kg 50 voor lankacidine A, meer dan 10.000 mg/kg voor lankacidine C 14-propionaat en 4500 mg/kg voor lankacidine C.

Dit feit wijst niet alleen op een grote mate van veiligheid voor men-25 sen die betrokken zijn bij de bereiding en.,distributie, maar betekent tevens een grotere tolerantie van het behandelde dier. Wanneer een verbinding volgens de formule van het formuleblad in voeder wordt toegediend, doet zelfs een sterke mate van inhomogeniteit in het mengsel niet in belangrijke mate afbreuk aan de veiligheid van het middel voor de behandelde dieren.

30 De onderstaande niet-beperkende voorbeelden waarin proeven en doserings- vormen worden beschreven, lichten de uitvinding nader toe.

Beproevingsvoorbeeld I

Men onderzocht verschillende middelen op hun antibacteriële werkzaamheid in vitro tegen Treponema hyodysenteriae, de pathogene bacterie die 35 varkensdysenterie veroorzaakt, volgens de methode voor het bepalen van de gevoeligheid van Treponema hyodysenteriae voor geneesmiddelen (Kashiwazaki c.s., uittreksel van een verhandeling op de 82ste vergade ring van het Japans Genootschap voor Veterinaire Wetenschap, blz. 101, 1976). De verkregen resultaten zijn in Tabel A gegeven. Lankacidine C vertoonde 8105334 - 6 - * ΐ een sterke anti-bacteriële werkzaamheid, terwijl andere antibiotica, die ter vergelijking werden gebruikt, alle onwerkzaam waren.

TABEL A

Minimum remmende concentratie 5 (pg/ml)

Middel ^ Stam CDl DJ70P1 MK-2 78/A

Lankacidine C 3,13 3,13 3,13 3,13

Erythromycine 100 'y' 100 100 100

Spiramycine ^>100 ^>100 100 ^>100 10 Oleandomycine 100 'ye 100 100 100

Leucomycine 100 100 > 100 100

Maridomycine 100 y" 100 > 100 100

Lincomycine 50 50 50 50 (1) Stammen: Deze stammen behoren tot Treponema hyodysenteriae en werden 15 geïsoleerd uit de bloederige slijm bevattende feces van Japanse var kens met dysenterie, (2) Bepaling van de antimicrobiële werkzaamheid: Agar-verdunningsmethode.

g (3) Hoeveelheid entmateriaal: Een lusje bacteriesuspensie (10 CFü/ml).

(4) Kweekomstandigheden: GasPak anaëroob systeem (BBL), 37eC, 2 dagen.

20 Beproevingsvoorbeeld II

Representatieve verbindingen volgens de formule van het formuleblad werden volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld I onderzocht op hun anti-bacteriële werkzaamheid in vitro. De resultaten zijn in Tabel B gegeven. Deze verbindingen vertoonden een sterke anti-bacteriële werkzaam-25 heid tegen Treponema hyodysenteriae, ofschoon er enig onderling verschil bleek voor wat betreft hun MIC-waarden (minimum remmende concentratie).

8105334 \ » * - 7 -

TABEL· B

Stam Minimum remmende concentratie ^(jig/ml)

Verbinding ___

vlg. formule-^^·-^ DJ70P1 MK-2 78/A CD-I

5 Lankacidine A 6,25 3,13 3,13 6,25

Lankacidine C 3,13 1,56 1,56 1,56

Lankacidinol A 25 25 12,5 25

Lankacidinol 25 25 12,5 12,5

Lankacidine C 0,78 0,39 0,39 0,39 10 8-acetaat

Lankacidine C 1,56 1,56 *1,56 1,56 8-propionaat

Lankacidine C .3,13 1,56 1,56 3,13 14-propionaat ___ 15 Opmerking: De proef omstandigheden waren dezelfde als in Beproevingsvoorbeeld I (Tabel A) .

Beproevingsvoorbeeld III

Verbindingen volgens de formule van het formuleblad werden volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld I onderzocht op hun antibacte-20 riële werkzaamheid in vitro. De resultaten zijn in Tabel C gegeven. Alle verbindingen vertoonden een sterke antibacteriële werkzaamheid tegen Treponema hyodysenteriae.

8105334 - 8 -

TABEL C

' Minimum remmende concentratie

Verbinding^ Stam (pg/ml) volgens

formuleblad . DJ70P1 MK-2 - 78/A CD-I

5 Lankacidine A 3,13 6,25 3,13 6,25

Lankacidine C 8-butyraat 0,78 0,78 0,78 0,78

Lankacidine C 8-isobutyraat 3,13 6,25 6,25 6,25

Lankacidine C 8-valeraat 1/56 3,13 1,56 3,13

Lankacidine C 8-benzoaat 0,1 0,1 0,1 0,1 10 Lankacidine C 14-butyraat 1,56 3,13 0,78 1,56

Lankacidine C 14-isobutyraat 12,5 25 12,5 25

Lankacidine C 14-valeraat 3,13 6,25 3,13 6,25

Lankacidine C 14-benzoaat 6,25 6,25 6,25 6,25

Lankacidine C 14-formiaat 6,25 6,25 6,25 12,5 15 Lankacidine C 8,15-diacetaat 3,13 1,56 3,13 3,13

Lankacidine C 8,14-dipropionaat 0,78 0,78 0,78 1,56

Lankacidine C 8,14-dibutyraat 3,13 3,13 1,56 3,13

Lankacidine A 8-propionaat 6,25 6,25 6,25 6,25

Beproevingsvoorbeeld IV

20 Lankacidine A, lankacidine C,. lankacidine C 8-acetaat, lankacidine C

14-propionaat, lankacidinol A en lankacidinol werden onderzocht op hun werkzaamheid tegen varkensdysenterie met een proef waarbij muizen met varkensdysenterie werden geïnfecteerd.

Men voerde een soortgelijke proef uit als bijvoorbeeld beschreven 25 door Joens c.s. in Infection and Immunity, 25, 757-760 (1979), American Journal of Veterinary Research, 41, 1225-1226 (1980) en Veterinary Record, 107, 527-529 (1980), waarbij muizen werden geïnfecteerd met varkensdysenterie. Een veldisolaat van Treponema hyodysenteriae, dat anaëroob gekweekt werd op een Trypticase-soja-agar (BBL).T-plaat,, waaraan 5 % gedefibrineerd 30 paardebloed was toegevoegd, werd samen met het kweekmedium fijngemaakt en verdund (2x) met Trypticase-sojabouillon (BBL). Deze infecterende verdunning werd intragastrisch bij muizen geënt. Elke te onderzoeken verbinding werd in een 5-%'s oplossing van arabische gom gesuspendeerd en van de eerste 8105334 - 9 - dag tot de vierde dag na het infecteren gedwongen oraal toegediend. Zeven dagen na het infecteren werd de blindedarm onderzocht op beschadigingen; de blindedarm werd samen met de inhoud fijngemaakt en onderworpen aan een bepaling van Treponema hyodysenteriae. De resultaten zijn in Tabel D samen-5 gevat. Bij elk van de groepen waaraan geneesmiddel was toegediend, bleek een voortreffelijke werkzaamheid.

TABEL D

Aantal muizen waarbij Aantal muizen met Dosis iej5athogene organisme beschadigingen van 10 Middel (mg/kg/dag) werd vastgesteld/aan- blindedarm/aantal tal onderzochte muizen onderzochte muizen

Geïnfecteerde - 5/5 3/5 controle

Lankacidine A 5 1/5 0/5

Lankacidine C 5 1/5 0/5 15, Lankacidine C 5 0/5 0/5 8-acetaat

Lankacidine C 5 1/5 ' 0/5 14-propionaat

Lankacidinol A 5 1/5 0/5 20 Lankacidinol 5 0/5 0/5

Beproevingsvoorbeeld V

Men onderzocht lankacidine C op zijn werkzaamheid tegen varkensdysen-terie onder proef-infectie-omstandigheden. Men gebruikte 12 6 weken oude "Landrace"-varkens (4 per groep). Het te onderzoeken geneesmiddel werd in een concentratie van 100 ppm zonder antibiotica gemengd met het in de 25 fokkerij aangemaakte beginvoer voor jonge varkens. Het voer werd ad libitum aan de dieren ter beschikking gesteld. Het infecteren van de varkens werd uitgevoerd door direkte intragastrische toediening aan de SPF-varkens van een entmateriaal dat bereid was door vooraf anaëroob kweken van de Treponema hyodysenteriae-stam 78/a op een 5 % paardebloed bevattende agar-30 plaat, fijnmaken samen met het kweekmedium en mengen met fosfaatbuffer waaraan 5 % mucine was toegevoegd. Men verzamelde de inhoud van de dikke darm en slijmvlies van varkens die kenmerkende tekenen van varkensdysente-rie ontwikkelden, en dit materiaal werd verdund (2x) met fosfaatbuffer waaraan 5 % mucine was toegevoegd. Deze verdunning werd als uiteindelijk 35 entmateriaal gebruikt, en men injecteerde 100 ml van de verdunning direkt 8105334 -lO- in de maag van proef varkens met een leeftijd van 7 weken (aan welke varkens gedurende 24 uren vóór het infecteren voer werd onthouden). Aan de varkens werd gedurende 21 dagen na het infecteren voer gegeven. De verkregen resultaten zijn in Tabel E samengevat. Terwijl maridomycine onwerkzaam 5 bleek, vertoonde lankacidine C een voortreffelijke werkzaamheid tegen var-kensdysenterie.

TABEL E

~~~~~—’ Groep Geïnfecteerde Lankacidine C Maridomycine controle 100 ppm 100 ppm 10 Varkensdysenterie

Aantal varkens dat tekenen van infectie vertoonde/ 4/4 0/4 3/4 aantal gebruikte varkens

Aantal dagen dat slijm be-15 vattende, bloederige ontlasting werd waargenomen 8,5 0 5,5 . (gedurende de proefperiode van 21 dagen)

Aantal dagen dat diarree 20 werd waargenomen (gedurende de proefperiode van 21 dagen 14,8 0 11,0

Aantal varkens waarbij het pathogene organisme werd vastgesteld 25 In feces 4 0 4

In slijmvlies van dikke 40 4 darm

Aantal varkens dat beschadigingen van de dikke darm verr 30. toont 4 0 4

Resultaten van de toediening van het voer

Lichaamsgewicht (kg)

Ten tijde van infectering 12,5 13,6 12,8 35 Ten tijde van voltooiing van de proef 17,8a 28,5 21,9

Toename lichaamsgewicht 251 708 430 (gram/dag)

Opname voer (kg) 16,3 27,5 18,8 40. Omzetting voer 3,07 1,85 2,09 "V' De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van 8105334 - 11 - infectering tot autopsie.

Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een signficant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P < 0,05); bijvoorbeeld significant verschil tussen a en b, geen significant verschil tussen b en 5 ah.

Beproevingsvoorbeeld IV

Men onderzocht lankacidine C in concentraties van 100 ppm en minder in voer volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld V, waarbij vergeleken werd met Carbadox, een gebruikelijk middel tegen varkensdysente-10 rie. De verkregen resultaten zijn in Tabel F samengevat, üit de resultaten van de toediening van het voer bleek dat lankacidine C een beter middel tegen varkensdysenterie is dan Carbadox.

8105334 - 12 -

TABEL F

Groep Niet-gein- Geinfec- Lankacidine C larbadox fecteerde teerde --t--50 ppm controle controle 10 ppm 50 ppm 100 ppm 5 (zonder ge- neesmiddel)

Varkensdysenterie

Aantal varkens dat tekenen van infecte-10 ring vertoont/aantal gebruikte varkens 0/4 4/4 0/4 0/4 0/4 0/4

Aantal dagen dat slijm bevattende bloederige ontlasting 15 werd. .waargenomen ('gedurende de proefpe-..

riode van 21 dagen) 0 9,5 0 0 0 0

Aantal dagen dat diarree werd waarge-20 nomen (gedurende de proefperiode van 21 dagen) 0,5 14,3 0 0 0 3,0

Aantal varkens waarbij het pathogene 25 organisme werd vastgesteld

In feces 0 40000

In slijmvlies van dikke darm 0 4 0 0 0 0 30 Aantal varkens dat beschadigingen van de dikke darm vertoont 0 4 0 0 0 0

Resultaten van de 35 toediening van het voer_

Lichaamsgewicht (kg)

Ten tijde van infectering 11,1 10,2 10,5 11,1 11,1 11,1 40 Ten tijde van voltooiing van de .

proef 22,7a 13,0b 20,7a 25,3a 25,5a 21,Qa

Toename lichaamsge- wicht (g/dag) 551^° 133d 484aC 673^ 689b 473° 45 Opname voor (kg) 21,7 9,7 18,4 25,3 25,6 20,7

Omzetting voer 1,87 3,45 1,81 1,79 1,77 2,08 8105334

Ir t - 13 —

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van infectering tot autopsie.

Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P <0,05); bijvoorbeeld 5 significant verschil tussen abc en d, geen significant verschil tussen abc en ac.

/

Beproevingsvoorbeeld VII

Volgens de werkwijze van Beproevingsvoorbeeld VI onderzocht men de werking van 10 ppm lankacidine A en 10 ppm lankacidine C 14-propionaat 10 tegen varkensdysenterie. De verkregen resultaten zijn in Tabel G samenge-vat. Lankacidine A en lankacidine C 14-propionaat bleken beide duidelijk werkzaam te zijn tegen varkensdysenterie.

TABEL- G

Groep' Niet-gein- Geinfec- Lankaci.-. „Lankaci- Carbadox 15 fecteerde teerde dine A. /- -dine- C - 5Q ppm controle controle 10 ppm 14-pro-(zonder ger- pionaat neesmiddel) 10 ppm

Varkensdysenterie 20 Aantal varkens dat tekenen van infectering vertoonde/ aantal gebruikte varkens 0,4 4/4 0/4 0/4 0/4

Aantal dagen dat slijm bevattende bloederige ont-25 lasting werd waargenomen (gedurende de proefperiode van 21 dagen) 0 11,3 0 0 0

Aantal dagen dat diarree werd waargenomen (gedu-30 rende de proefperiode van 21 dagen) 0 15,3 0 0 0

Aantal varkens waarbij het pathogene organisme werd vastgesteld 35 In feces 0 4 0 0 0

In slijmvlies van dikke darm 0 4 0 0 0

Aantal varkens dat beschadigingen van dikke darm 40 vertoont 0 4 0 0 0 ----- * 8105334 - 14 - TABEL G (vervolg)

Niet-geiii-· · Geinfec- Lankaci- Lankaci- Carbadox ^—. Groep facteerde teerde dine A dine C 50 ppm controle controle 10 ppm 14-pro-5 's. (zonder ge- pionaat neesmiddel) 10 ppm

Resultaten van de toediening van het, voer_

Lichaamsgewicht (kg) 10 Ten tijde van infecte- ring , 10,7 10,8 11,0 11,4 11,1

Ten tijde van voltooiing van de proef 22,8 16,0 22,9 23,1 22,7

Toename lichaamsgewicht .

15 (g/dag) 576a 248^ 567a 562a 552a

Opname voer (kg) 21,2 12,7 21,0 21,1 21,2

Omzetting voer 1,75 2,44 1,76 1,81 1,83

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van infectering tot autopsie.

20 Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een...signifi- ii-cant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05).

Beproevingsvoorbeeld VIII

Deze proef werd uitgevoerd onder de omstandigheden van zogenaamde therapeutische toediening. Men begon onmiddellijk met de toediening toen 25 de varkens klinische tekenen van varkensdysenterie vertoonden. De methode van infectering was dezelfde als in Beproevingsvoorbeeld V. Men nam 5 var= kens die op dezelfde dag (6e dag) na de infectering tekenen van de ziekte vertoonden. Gelijktijdig met het vertonen van deze tekenen werd aan de varkens een voer ter beschikking gesteld dat 50 ppm lankacidine C bevatte. 30 De verkregen resultaten zijn in Tabel H gegeven. In alle gevallen werd geen slijm bevattende bloederige diarree meer waargenomen op de dag volgende op de dag van de toediening en de ontlasting was los of normaal. Na twee dagen lag het getelde aantal levensvatbare pathogene organismen in de 2 feces beneden de detectiegrens (10 CFü/g). Uit autopsie, uitgevoerd 35 15 dagen nadat de tekenen van de ziekte zich openbaarden (9 dagen na stop zetting van de toediening) , bleek dat geen beschadigingen van de dikke damn aanwezig waren, terwijl het pathogene organisme niet gedetecteerd kon worden.

8105334 .- - 15 - TABEL· Η

Varken No. 1 2 3 4 5

Aantal dagen toestand Toestand Toestand Toestand Toestand na het zich _ _ - „ _ _ , van feces van feces van feces van feces van feces 5 openbaren van tekenen van de (Aantal (Aantal pa- (Aantal pa- (Aantal pa- (Aantal pa- ziekte pathogene thogene or- thogene or- thogene or- thogene or- orgamsmen) ganismen) ganismen) ganismen) ganismen) 0* . © (8,0) o (6,0) © (7,1) © (6,8) © (7,1) 10 ï* ' φ (4,3) O (2,3) Φ (4,4) φ (2,0) O (2,0) 2* I O ( - ) O (-) O (-) O ( - ) O (-) 3* o ( - ) O (-) O ( - ) | O (-) O ( - ) 4» O ( - ) o ( - ) o ( - ) O ( - )' Q (-) 5* O ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) 15·· 6*~ O ( - ) o (-) O (-) O ( -). O ·( -) 7 O ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) 8 O ( - ) O (-)'O ( - ) O ( -) O ( - ) 9 O (-) O (-) O (-) O <-) O (-) ' ïo O(-) OC-) O (-) O ( -) O (- ) 20 ü O. ( - ) O (-) O (-) O (-) O ( - ) ü : O(-) O(-) O (-) O ( - ) O (-) 13 O (-) O (-) O ( - ) O ( - ) O ( - ) 14 0(-)0(-)0(-) O ( - ) O ( - ) ,5,(fe&Le) ~Ö C-) O ¢-) O (-> O <-)' O - iikkeadarnngen negatief' negatief-, negatief . negatief . negatief

Aantal pathogene. / \ / \ r \ / _ \ \ · Dïrganismen in, - J \ ~ J \ ~ ) v ) \ ) 3Q .&LSkS-_Qa333------

De toestand van de feces wordt aangegeven volgens de volgende vier waarde-ringen:(^) - normaal;(T)- los; (JD~·-diarree; (O) - slijmachtig en bloederig.

De waarden voor het aantal getelde levensvatbare organismen zijn uitgedrukt in log/g; (-) betekent dat het aantal getelde organismen beneden de detec-35 tiegrens (102 CFU/g) ligt.

Het symbool & geeft de dagen aan waarop het voer met 5Q ppm lankacidine C ----werd verstrekt.

_ 8105334 - 16 -

Beproevingsvoorbeeld IX

Op dezelfde wijze als in Beproevingsvoorbeeld VIII onderzocht men lankacidinen op hun therapeutische effecten voor wat betreft varkens-dysenterie onder therapeutische omstandigheden. De effecten werden op 5 basis van de toestand van de feces beoordeeld. De verkregen resultaten zijn in Tabel I'gegeven; uit deze resultaten blijkt dat lakacidine A,'' lankacidine C en lankacidine C 14-propionaat therapeutisch werkzaam zijn in een dosis van 50 ppm.

TABEL· I

.10 Geïnfecteerde Groep waaraan Groep waaraan Groep waaraan

controle lankacidine A lankacidine C lankadicine C

! Groep (zonder ge- is toegediend is toegediend 14-propionaat - ; neesmiddel) (50 ppm) (50 ppm) is toegedierid i - (50 ppm) 15 Aantal vavlcpn ; dagen·, na ^ ' n l 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 het zich No.

opeiibaien . --------------------- van teke· · 20 sexe ö* ΟΟΟ.ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΟΘΟ

. 1»— 000.0000000 0 (D* Φ O Φ O

2¾ OOOOOOOOOOOOOOOO

25 3*‘ oooooooooooooooo 4* oooooooooooooooo 5* oooooooooooooooo 6* oooooooooooooooo 7 oooooooooooooooo 30 8 oooooooooooooooo 9 0000 0-00000000 o o o 10 oooooooooooooooo 11 oooooooooooooooo ! 12 oooooooooooooooo

35 13 OOOOOOOOOOOOOOOO

14 <D O O Q o O O O O O O o'o O o O

15 OOOOOOOOOOOOOOOO

16 OOOOOOOOOOOOOOOO

17 OOOOOOOOOOOOOOOO

40 18 o O © O O O O O O O o o o o O O

19 oooooooooooooooo :...... 20 ooooooooooooooo o ..... 21 o o © o o o o o o o o o o o o o 8105334 ν· £ - 17 -

De toestand van de feces werd aangegeven volgens de volgende vier waarderingen: (3 ~ normaal; (T) - los; QJ) - diarree; (Q) - slijmachtig en bloederig. Het symbool i geeft de dagen aan waarop het voer met 50 ppm van het geneesmiddel verstrekt werd.

5 Zoals duidelijk uit de resultaten van de bovenstaande Beproevings- voorbeelden Ι-τΙΧ blijkt, hebben de verbindingen volgens de formule van het formuleblad een bijzonder voortreffelijke werking als middel voor het voorkomen en behandelen van varkensdysenteriè en zijn deze verbindingen superieur aan soortgelijke antibiotische middelen tegen varkensdysenterie 10 die reeds in de handel zijn; derhalve zijn deze verbindingen zeer geschikt voor vee.

Beproevingsvoorbeeld X

Men onderzocht het effect van verbindingen volgens de formule van het formuleblad op de groei van varkens onder omstandigheden waarin varkens-15 dysenterie afwezig was. Men gebruikte 40 één maand oude "Landrace"-varkens (5 worpen) in groepen die elk bestonden uit 8 dieren (4 mannelijke en 4 vrouwelijke). Lankacidine C werd in concentraties van 0 (controle), 1, 2,5, 5 en 10 ppm toegevoegd aan beginvoer zonder anti-bacterieel middel gedurende de periode vanaf het begin van de proef tot de varkens een leef-20 tijd van 3 maanden hadden bereikt, en aan voer voor het onderzoek van varkens op hun vleesproduktie (eveneens vrij van anti-bacterieel middel) gedurende de periode vanaf de leeftijd van 4 maanden tot de leeftijd van 6 maanden (einde). In elke groep werd lankacidine C dus continu gedurende 5 maanden in het dieet toegediend.

25 Zoals blijkt uit de in Tabel J samengevatte resultaten nam de groei van de varkens bijna evenredig met de toegevoegde hoeveelheid lankacidine C toe, en daarmee werd de benutting van het voer verbeterd. De verbindingen volgens de formule van het formuleblad zijn derhalve zelfs onder gebruikelijke voederomstandigheden geschikt voor het verhogen van de vleesproduktie 30 van varkens.

8105334 * «r

- 18 -TABEE J

' Groep _Lankacidine C __ ' Controle ~7 „ _ I 71 1 ppm 2,5 ppm 5 ppm 10 ppm 5 Lichaamsgewicht (kg)

Bij het begin ’ 7,4 7,4 7)4 7,4 7,4

Bij voederwisseling 31,7a 32,7a 34,23^ 36,9b 37,5b

Aan het einde 101 f4a 102,4^ 104,6^ 109,0313 110,2b

Toename lichaamsgewicht (kg) 10 Gedurende periode van . , het beginvoer 24,3a 25,430 26,9b 29,5 30,1

Gedurende gehele periode 94,0a 95,03^ 97,23^ 101,73^ 102,8b

Opname voer (kg)

Gedurende periode van 15 het begingvoer 49,9 49,4 49,1 50,7 51,2

Gedurende gehele periode 280,2 275,6 278,0 284,6 284,8

Omzetting voer Gedurende periode van het beginvoer 2,05 1,95 1,83 1,72 1,70 20 Gedurende gehele periode 2,98 2,90 2,86 2,80 2,77

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier. Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05); bijvoorbeeld significant verschil tussen a en b, geen significant verschil tussen ab en:.a..of tussen 25 ab en b.

Beproevingsvoorbeeld XI

Bij deze proef gebruikte men 48 35 dagen oude "Landrace"-varkens (6 worpen) in 6 groepen van elk 8 dieren (4 mannelijke en 4 vrouwelijke) . Lankacidine A werd in concentraties van 0 (controle), 1, 2,5, 5, 10 en 30 20 ppm toegevoegd aan beginvoer zonder anti-bacterieel middel gedurende de periode vanaf het begin van de proef tot de leeftijd van de varkens 3 maanden bedroeg, en aan voer voor het onderzoek van varkens op hun vleespro-duktie (eveneens vrij van anti-bacterieel middel) gedurende de periode vanaf de leeftijd van 4 maanden tot de leeftijd van 6 maanden (einde).

35 De gegevens betreffende de groei, die werden verkregen bij de proef van 5 maanden continue toediening, zijn in Tabel K samengevat. De groei van de varkens nam evenredig toe met de verhoging van de toegevoegde hoe-· veelheid lankacidine A, en daarmee werd de benutting van het voer verbeterd.

8105334 Λ - 19 - TABEL Κ

^—____^ Groep Con- Lankacidine A

trole j ppm 2,5ppm 5 ppm 10 ppm 20 ppm 5 Lichaamsgewicht (kg)

Bij het begin 9,91 9,18 9,16 9,16 9,15 9,18

Bij voederwisseling 32,9a 34,03^ 34,63^3 36,l3*3 36,7° 37,4b

Aan het einde 108,23 111,6313 113,53^ 118,3313 120,513 123,4b roename lichaamsgewicht (kg) 10 Gedurende periode van . ' , het beginvoer 23/23 24,830 25,4 26',9 27,6 28,2

Gedurende gehele periode 99,03 102,4313 104,4313 109,1313 111,413 114,213

Opname voer (kg)

Gedurende periode van het 15 beginvoer 48,2 48,1 47,6 47,6 47,7 48,2

Gedurende gehele periode 290,1 294,9 295,3 304,3 305,2 310,6

Omzetting voer ’

Gedurende periode van het beginvoer 2,03 1,94 1,87 1,77 ' 1,73 1,71 20 Gedurende gehele periode 2,93 2,88 2,83 2,79 2,74 2,72

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier. Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05).

Voorbeeld 1 25 Door een verbinding volgens de formule van het formuleblad in een te kiezen concentratie op te nemen in het onderstaande basisvoer of in een deel van de materialen hiervoor, kan voer voor het voorkomen of behandelen van varkensdysenterie of voor het verhogen van de produktiviteit in de varkensfokkerij verkregen worden.

30 Voorbeeld 2

Door een verbinding volgens de formule van het formuleblad in een te kiezen concentratie op te nemen in het onderstaande vitaminen-mineralen-mengsel a) of b) en basis-voedermateriaal (bijvoorbeeld ontvette rijst-zemelen) samen met aminozuur (bijvoorbeeld D,L-methionine, lysine-hydro-35 chloride), kunnen voormengsels volgens de uitvinding verkregen worden.

8 f 0 5 3 34

# V

- 20 -

Samenstelling van basisvoer (%)

Bij het begin Voor voor vlees-

Materialen toegediende "melk" produktieproef

Maïsmeel 20,0 22,0 5 Milo 22,0

Gerstbloem 19,0 22,0

Tarwebloem 14,0

Sojabloem 4,0

Tarwezemelen 6,8 12,0 10 Ontvette rijstzemelen 4,0 4,0

Vismeel 3,0 4,0

Sojameel 5,0 4,0

Gedroogde taptemelk 9,78

Gedroogde wèi 5,0 15 Luzememeel 2,5

Glucose 5,0

Gist voor voeder 2,0

Poedervormig vet 1,5

Calciumcarbonaat 1,5 20 Natriumchloride 0,5

Calciumtrifosfaat . 0,7 0,8

Saccharine 0,02

Vitaminen-mineralenmengsel 0,2 ; 0,4 DL-methionine 0,1 25 Totaal 100,0 100,0 a) Bevat per kg: 2.500.000 IE vitamine A, 500.000 IE vitamine , 0,75 g vitamine E, 1 g vitamine B^.nitraat, 1,5 g vitamine B^, 0,25 g vitamine Β^, 1 mg vitamine B^/ ^»5 9 calciumpantothenaat, 7,5 g nicotine-amide, 50 g chóline-chloride, 50 g ijzer, 5 g koper, 25 g zink, 15 g mangaan, 30 0,25 g cobalt en 0,1 g jood.

b) Men gebruikte de volgende mengsels A, B en C, gemengd in een gewichtsverhouding van 0,15:0,15:0,1.

Mengsel A: 5 % mangaan, 5 % ijzer, 1 % kóper, 6 % zink en 0,1 % jood. Mengsel B: 10.000 IE vitamine A en 2000 IE vitamine per gram.

35 Mengsel C: 1 g vitamine B^.nitraat, 7 g vitamine B^, 0,5 g vitamine Bg, 6 g nicotine-amide, 10,9 g calciumpantothenaat en 57,6 g choline-hydro-chloride per kg; aangevuld met 10 pg vitamine B^· 8105334

Claims (19)

1 H 2 3 waarin R =0 of <T0H voor stelt en elk der symbolen R en R een waterstofatoom of een van een carbonzuur afgeleide acylgroep is, toedient.

1 H 2 3 blad, waarin R =0 of <T0H voorstelt, en elk der. symbolen R en R een waterstofatoom of een van een carbonzuur afgeleide acylgroep is, en een fysiologisch aanvaardbaar aanlengmiddel bevat.

1. Samenstelling voor de profylaxe of behandeling van varkensdysenterie of voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van varkens, met het kenmerk dat de samenstelling als actief bestanddeel een doelmatige 5 hoeveelheid van één of meer verbindingen volgens de formule van het formule-

2. Samenstelling volgens conclusie 1, met het kenmerk dat de samen-10 stelling vast is.

3. Samenstelling volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk dat de samenstelling een voormengsel is dat het actieve bestanddeel in een concentratie van circa 0,5 - 80 gew.% bevat.

4. Samenstelling volgens conclusie 3, met het kenmerk dat het voor-15 mengsel als aanlengmiddel een basis-voedermateriaal voor varkens bevat.

5. Samenstelling volgens conclusie 3 of 4, met het kenmerk dat het voormengsel verder één of meer minerale materialen bevat.

6. Samenstelling volgens conclusie 1 of 2, met het kenmerk dat de samenstelling een voer is dat als aanlengmiddel een basis-voedermateriaal 20 voor varkens bevat.

7. Samenstelling volgens conclusie 6, met het kenmerk dat het basis-voedermateriaal ten minste in hoofdzaak gevormd wordt door maïsmeel en/of sojameel.

8. Samenstelling volgens conclusie 6 of 7, met het kenmerk, dat de ge-25 wichtsconcentratie van het actieve bestanddeel circa 0,5 - 500 ppm bei draagt.

9. Samenstelling volgens conclusie 8 voor de profylaxe van varkensdysenterie, met het kenmerk dat de gewichtsconcentratie van het actieve bestanddeel circa 1 - 500 ppm bedraagt.

10. Samenstelling volgens conclusie 8 voor het behandelen van varkens dysenterie, met het kenmerk dat de gewichtsconcentratie van het actieve bestanddeel circa 2 - 500 ppm bedraagt.

11. Samenstelling volgens conclusie 8 voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van varkens, met het kenmerk dat de gewichtsconcen- 35 tratie van het actieve bestanddeel circa 0,5 - 200 ppm bedraagt.

12. Samenstelling volgens conclusies 1-11, met het kenmerk dat R* 2 3 =0 voorstelt en elk der symbolen R en R een waterstofatoom of een rest van een laag vetzuur is. 2

13. Samenstelling volgens conclusie 12, met het kenmerk dat R een 8ÏÖ5334 3 - 22 - waterstofatoom en R een C2~C^-vetzuurrest is.

14. Samenstelling volgens conclusies 1-11, met het kenmerk dat het actieve bestanddeel lankacidine A is.

15. Samenstelling volgens conclusies 1-11, met het kenmerk dat het 5 actieve bestanddeel een mengsel van een overwegende hoeveelheid lankacidine A metllankacidine C is.

16. Werkwijze voor het bereiden van een samenstelling voor de profylaxe of behandeling van varkensdysenterie of voor het verhogen van de produkti-viteit bij het fokken van varkens, met het kenmerk dat men een doelmatige 10 hoeveelheid van één of meer verbindingen volgens de formule van het for- muleblad, waarin R =0 of voorstelt en elk der symbolen R en R OH een waterstofatoom of een van een carbonzuur afgeleide acylgroep is, mengt met een fysiologisch aanvaardbaar aanlengmiddel.

17. Werkwijze voor het verhogen van de produktiviteit bij het fokken van 15 varkens of voor de profylaxe of behandeling van varkensdysenterie, met het kenmerk dat men aan varkens als actief bestanddeel een doelmatige hoeveelheid van één of meer verbindingen volgens de formule van het formuleblad,

18. Werkwijze volgens conclusie 17, met het kenmerk dat men'de verbin ding oraal toedient in een dagelijkse dosis van circa 0,025 - 25 mg.per kg lichaamsgewicht.

19. Werkwijze volgens conclusie 17, met het kenmerk dat men een voer, dat de verbinding bevat, ad libitum oraal toedient. 8105334