NL192722C

NL192722C - Werkwijze ter bereiding van een farmaceutisch preparaat.

Info

Publication number: NL192722C
Application number: NL8105334A
Authority: NL
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1980-11-29
Filing date: 1981-11-25
Publication date: 1998-01-06
Also published as: NL192722B; FR2494964B1; DK171070B1; IT8168548A0; NL8105334A; FR2494964A1; DK527581A; CA1195930A; US4425356A; GB2088715A; DE3147311A1; BE891275A; CH649467A5; IT1146721B; GB2088715B; DE3147311C2

Description

1 192722

Werkwijze ter bereiding van een farmaceutisch preparaat

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter bereiding van een farmaceutisch preparaat, waarbij men ten minste een verbinding met de formule van het formuleblad, waarin R1 gelijk is aan

5 /H

° = O of

N OH

en R2 en R3 elk afzonderlijk een waterstofatoom of een van een carbonzuur afgeleide acylgroep zijn, opneemt in een farmaceutisch aanvaardbare drager.

10 De verbindingen volgens de formule van het formuleblad omvatten antibiotische stoffen, die de

antibioticagroep T-2636 vormen, welke groep van antibiotica geïsoleerd wordt uit de cultuur van Streptomy-ces rochei var. volubilis en te zamen worden aangeduid als lankacidinen, alsmede derivaten hiervan. Voor wat onder andere betreft lankacidine A (R1: = O, R2 : H, R3: COCH3), lankacidine C (R1: = O, R2 : H, R3: H), lankacidinol A

15 /H

(R1: , R2: H, R3: COCH3) en lankacidinol

OH

/ H

2D (R1: ^ , R2: H, R3: H), worden het organisme dat deze stoffen kan vormen, werkwijzen ter bereiding

OH

hiervan en fysicochemische en biologische eigenschappen hiervan, bijvoorbeeld beschreven in Journal of Antibiotics, 24,1-41 (1971). Lankacidine A 8-propionaat R1 : = O, R2: COCH2CH3, R3: COCH3), lankaci-25 dine C 8-acetaat (R1: = O, R2 : C0CH3, R3 : H), lankacidine C 8-propionaat (R1: = O, R2 : C0CH2CH3, R3 : H), lankacidine C 14-propionaat (R1 : O, R2 : H, R3 : COCH^Hg), lankacidine C 8,14-diacetaat (R1: = O, R2 en R3 : C0CH3), lankacidine C 8, 14-dipropionaat (R1 : = O, R2 en R3 : COCH2CH3) lankacidine C 8-benzoaat (R1: = O, R2: COPh, R3 : H), lankacidine C 14-benzoaat (R1 : = O, R2 : H, R3: COPh), lankacidine C 14-fenylpropionaat (R1 : = O, R2 : H, R3 : COCH2CH2Ph) en lankacidine C 14-nicotinaat (R1 : 30 = O, R2 : H, R3 : nicotinoyl, worden beschreven in Journal of Antibiotics, 26, 647-657 (1973). Lankacidine C 14-formiaat (R1 : = O, R2: H, R3 : COH) wordt beschreven in het Amerikaanse octrooischrift 3.626.055.

Het organisme Streptomyces rochei var. volubilis, dat in staat is lankacidine A, lankacidine C, lankacidinol A en lankacidinol te vormen, is gedeponeerd bij het "Institute for Fermentation” (Osaka) en de "American Type Culture Collection” onder respectieve nummers IFO 12507 en ATCC 21250.

35 De antibiotica T-2636-A, T-2636-B, T-2636-C en T-2636-D zijn voorts bekend uit het Franse geneesmiddeloctrooi 8.303 M. Volgens deze publicatie bezitten de genoemde antibiotica een antibacterïële werking tegen Gram-positieve bacteriën en zijn in het bijzonder geschikt voor de topische behandeling van pyrogene bacteriën zoals stafylococcen.

Gebleken is nu, dat de verbindingen met de formule van het formuleblad werkzaam zijn tegen Trepo-40 nema hyodysenteriae, de pathogene bacterie die varkensdysenterie veroorzaakt, en derhalve kunnen worden toegepast voor de profylaxe en behandeling van varkensdysenterie.

De werkwijze volgens de uitvinding wordt hierdoor gekenmerkt dat als drager vast varkensvoer wordt toegepast ter verkrijging van een preparaat voor de profylaxe en behandeling van varkensdysenterie.

Varkensdysenterie is een ingewandsziekte bij varkens, die veroorzaakt wordt door Treponema hyodysen-45 teriae, waarvan bloederige, slijm bevattende diarree een overheersend symptoom is. In de meeste landen met varkensteelt komt deze ziekte veelvuldig voor. Eenmaal uitgebroken wordt deze ziekte over een groot gebied verspreid en is dan moeilijk te bestrijden. De ziekte veroorzaakt daar, waar grote kudden gehouden worden een sterk verminderde benutting van het voer, hetgeen bijdraagt aan ernstige economische verliezen.

50 Volgens de uitvinding bereid varkensvoer dat de verbindingen met de formule volgens het formuleblad bevat, heeft een duidelijke profylactische en therapeutische werking op varkensdysenterie, bevordert de groei van varkens en verbetert de benutting van het voer, waardoor de productiviteit van het fokken van varkens verhoogd wordt.

De van een carbonzuur afgeleide acylgroep, die wordt voorgesteld door de symbolen R2 en R3 in de 55 algemene formule van het formuleblad, is bij voorkeur een vetzuurrest met 1-7 koolstofatomen, bijvoorbeeld een formyl-, acetyl-, propionyl-, butyryl-, isobutyryl-, valeryl-, of hexanoylrest of een rest van een aromatisch carbonzuur (bijvoorbeeld de benzoylrest, een rest van een hetero-aromatisch carbonzuur zoals 192722 2 de nicotinoylrest. Deze rest van een laag vetzuur kan gesubstitueerd zijn door een fenylgroep aan het eindstandige koolstofatoom hiervan (bijvoorbeeld de fenylacetyl- of fenylprorionylrest).

Met name worden die verbindingen met de formule van het formuleblad toegepast, waarin elk der symbolen R2 en R3 een waterstofatoom of een C2-C4-vetzuurrest voorstelt. Onder andere gebruikt men bij 5 voorkeur lankacidine A, lankacidine C, lankacidine C 14-propionaat, lankacidine C 8-acetaat, lankacidine C 8-propionaat, lankacidinol A, lankacidinol en mengsels hiervan. De toepassing van lankacidine A en/of lankacidine C is in het bijzonder van voordeel.

Verder kunnen ook fermentatiemedia, verkregen door kweken van het bovengenoemde organisme Streptomyces rochei var. volubilis, als gedroogde producten of extracten hiervan toegepast worden.

10 In het algemeen wordt een verbinding met de formule van het formuleblad opgenomen in voer of eerst in een voormengsel dat in het toe te dienen voer wordt opgenomen. Voorbeelden van vaste verdunningsmid-delen (aanlengmiddelen) zijn basis-voeder-materialen voor varkens zoals meel uit granen, sojameel, raapzaadmeel, kaf, rijstzemelen, bataatpoeder, aardappelpoeder, suikers, gist en vismeel. Voorts anorganische materialen zoals talk en klei.

15 Geschikte hulpmiddelen kunnen in geschikte hoeveelheden worden toegevoegd. Verder kan een antisepticum, fungicide, antibioticum, gistpreparaat en/of lactobaciliuspreparaat worden toegepast. De samenstelling kan ook vitaminen, mineralen, sporen elementen en aminozuren bevatten.

Het materiaal van de uitvinding bevat in de vorm van voer met voordeel als aaniengmiddel maïsmeel en/of sojameel en in de vorm van een voormengsel met voordeel één of meer minerale stoffen die in een 20 toe te dienen voer aanwezig dient te zijn.

De onderhavige verbindingen met de formule volgens het formuleblad kunnen met voordeel eerst opgenomen worden in een voormengsel en aan varkens worden toegediend in de vorm van een mengsel van dit voormengsel met aanlengmiddelen. Een dergelijk voormengsel kan met voordeel een verbinding vlg. de formule volgens het formuleblad in een gewichtsconcentratie van circa 0,5 - 80 % en bij voorkeur circa 1 25 - 50 % bevatten.

De dosis van de onderhavige verbinding met de formule van het formuleblad in het voer wordt meestal zo gekozen, dat de varkens daarvan een hoeveelheid van circa 0,025 - 25 mg per kg lichaamsgewicht binnen krijgen. In de praktijk wordt een voer, dat een verbinding met de formule van het fomuleblad in een gewichtsconcentratie van circa 0,5 - 500 ppm bevat, oraal ad libitum aan varkens toegediend.

30 Meer in het bijzonder verdient het voor de profylaxe van varkensdysenterie de voorkeur een verbinding met de formule van het formuleblad toe te dienen in een dosis van circa 0,05 - 25 mg/kg/dag, hetgeen geschikt kan geschieden door een verbinding met de formule van het formuleblad in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 1 - 500 ppm, bij voorkeur 2 - 200 ppm. Voor het behandelen van varkensdysenterie verdient het de voorkeur in een verbinding met de formule van het formuleblad toe te 35 dienen in een dosis van circa 1-25 mg/kg/dag, hetgeen geschikt kan geschieden door zo’n verbinding in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 2 - 500 ppm, bij voorkeur circa 2,5 - 200 ppm. Voor het verhogen van de productiviteit bij het fokken van varkens verdient het de voorkeur circa 0,025 - 10 mg/kg/dag van een verbinding met de formule van het formuleblad toe te dienen door zo’n verbinding in een voeder op te nemen in een concentratie van circa 0,5 - 200 ppm, bij voorkeur circa 1-100 ppm.

40 De toxiciteit van de verbindingen met de formule van het formuleblad in dieren is zeer gering.

De onderstaande voorbeelden waarin proeven en doseringsvormen worden beschreven, lichten de uitvinding nader toe.

Beproevingsvoorbeeld / 45 Men onderzocht verschillende middelen op hun antibacteriële werkzaamheid in vitro tegen Treponema hyodysenteriae, de pathogene bacterie die varkensdysenterie veroorzaakt, volgens de methode voor het bepalen van de gevoeligheid van Treponema hyodysenteriae voor geneesmiddelen (Kashiwazaki c.s., uittreksel van een verhandeling op de 82ste vergadering van het Japanse Genootschap voor Veterinaire Wetenschap, blz. 101, 1976). De verkregen resultaten zijn in Tabel A gegeven. Lankacidine C vertoonde 50 een sterke anti-bacteriële werkzaamheid, terwjjl andere antibiotica, die ter vergelijking werden gebruikt, alle onwerkzaam waren.

3 192722

TABEL A

Minimum remmende concentratie (pg/ml)

5 Middel \ Stam CD1 DJ70P1 MK-2 78/A

Lankacidine C 3,13 3,13 3,13 3.13

Erythromycine >100 >100 >100 >100

Spiramycine >100 >100 >100 >100 10 Oleandomycine >100 >100 >100 >100

Leucomycine >100 >100 >100 >100

Maridomycine >100 >100 >100 >100

Lincomycine 50 50 50 50 15 (1) Stammen: Deze stammen behoren tot Treponema hyodysenteriae en werden geïsoleerd uit de bloederige slijm bevattende feces van Japanse varkens met dysenterie.

(2) Bepaling van de antimicrobiële werkzaamheid: Agar-verdunningsmethode.

(3) Hoeveelheid entmateriaal: Een lusje bacteriesuspensie (106 CFU/ml).

20 (4) Kweekomstandigheden: GasPak anaëroob systeem (BBL), 37 °C, 2 dagen.

Beproevingsvoorbeeld II

Verbindingen met de formule van het formuleblad werden volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld I onderzocht op hun anti-bacteriële werkzaamheid in vitro. De resultaten zijn in Tabel B gegeven. 25 Deze verbindingen vertoonden een sterke anti-bacteriële werkzaamheid tegen Treponema hyodysenteriae, ofschoon er enig onderling verschil bleek voor wat betreft hun MIC-waarden (minimum remmende concentratie).

TABEL B

30 -

Verbinding vlg. Stam Minimum remmende concentratie (pg/ml) formuleblad DJ70P1 MK-2 78/A CD-1 35 -

Lankacidine A 6,25 3,13 3,13 6,25

Lankacidine C 3,13 1,56 1,56 1,56

Lankacidinol A 25 25 12,5 25

Lankacidinol 25 25 12,5 12,5 40 Lankacidine C 8-acetaat 0,78 0,39 0,39 0,39

Lankacidine C 8-propionaat 1,56 1,56 1,56 1,56

Lankacidine C 14-propionaat 3,13 1,56 1,56 3,13

Opmerking: De proefomstandigheden waren dezelfde als in Beproevingsvoorbeeld I (Tabel A).

45 Beproevingsvoorbeeld III

Verbindingen met de formule van het formuleblad werden volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld I onderzocht op hun antibacteriële werkzaamheid in vitro. De resultaten zijn in Tabel C gegeven. Alle verbindingen vertoonden een sterke antibacteriële werkzaamheid tegen Treponema hyodysenteriae.

192722 4

TABELC

Stam \ Verbinding volgens Minimumremmende concentratie (jug/ml) formuleblad 5 - DJ70P1 MK-2 78/A CD-1

LankacidineA 3,13 6,25 3,13 6,25

Lankacidine C 8-butyraat 0,78 0,78 0,78 0,78 10 Lankacidine C 8-isobutyraat 3,13 6,25 6,25 6,25

Lankacidine C 8-valeraat 1,56 3,13 1,56 3,13

Lankacidine C 8-benzoaat 0,1 0,1 0,1 0,1

Lankacidine C 14-butyraat 1,56 3,13 0,78 1,56

Lankacidine C 14-isobutyraat 12,5 25 12,5 25 15 Lankacidine C 14-valeraat 3,13 6,25 3,13 6,25

Lankacidine C 14-benzoaat 6,25 6,25 6,25 6,25

Lankacidine C 14-formiaat 6,25 6,25 6,25 12,5

Lankacidine C 8,15-diacetaat 3,13 1,56 3,13 3,13

Lankacidine C 8,14-dipropionaat 0,78 0,78 0,78 1,56 20 Lankacidine C 8,14-dibutyraat 3,13 3,13 1,56 3,13

Lankacidine A 8-propionaat 6,25 6,25 6,25 6,25

Beproevingsvoorbeeld IV

25 Lankacidine A, lankacidine C, lankacidine C 8-acetaat, lankacidine C 14-propionaat, lankacidinol A en lankacidinol werden onderzocht op hun werkzaamheid tegen varkensdysenterie met een proef waarbij muizen met varkensdysenterie werden geïnfecteerd.

Men voerde een soortgelijke proef uit als bijvoorbeeld beschreven door Joens c.s. in Infection and Immunity, 25 757—760 (1979), American Journal of Veterinary Research, 4T 1225-1226 (1980) en 30 Veterinary Record, 107, 527-529 (1980), waarbij muizen werden geïnfecteerd met varkensdysenterie. Een veldisolaat van Treponema hyodysenteriae, dat anaëroob gekweekt werd op een Trypticase-soja-agar(BBL)-piaat, waaraan 5 % gedefibrineerd paardebloed was toegevoegd, werd samen met het kweekmedium fijngemaakt en verdund (2x) met Trypticase-sojabouillon (BBL). Deze infecterende verdunning werd intragastrisch bij muizen geënt. Elke te onderzoeken verbinding werd in een 5 %’s oplossing van arabische 35 gom gesuspendeerd en van de eerste dag tot de vierde dag na het infecteren gedwongen oraal toegediend. Zeven dagen na het infecteren werd de blindedarm onderzocht op beschadigingen; de blindedarm werd samen met de inhoud fijngemaakt en onderworpen aan een bepaling van Treponema hyodysenteriae. De resultaten zijn Tabel D samengevat. Bij elk van de groepen waaraan geneesmiddel was toegediend, bleek een voortreffelijke werkzaamheid.

40

TABELD

Middel Dosis (mg/kg/dag) Aantal muizen Aantal muizen met waarbij het beschadigingen 45 pathogene van blindedarm/ organisme werd aantal onderzochte vastgesteld/ muizen aantal onderzochte muizen 50 -

Geïnfecteerde controle - 5/5 3/5

LankacidineA 5 1/5 0/5

Lankacidine C 5 1/5 0/5

Lankacidine C 8-acetaat 5 0/5 0/5 55 Lankacidine C 14-propionaat 5 1/5 0/5

Lankacidinol A 5 1/5 0/5 5 192722 TABEL D (vervolg)

Middel Dosis (mg/kg/dag) Aantal muizen Aantal muizen met waarbij het beschadigingen 5 pathogene van blindedarm/ organisme werd aantal onderzochte vastgesteld/ muizen aantal onderzochte muizen 10 --

Lankacidinol 5 0/5 0/5

Beproevingsvoorbeeld V

15 Men onderzocht lankacidine C op zijn werkzaamheid tegen varkensdysenterie onder proef-infectie-omstandigheden. Men gebruikte 12 6 weken oude ”Landrace”-varkens (4 per groep). Het te onderzoeken geneesmiddel werd in een concentratie van 100 ppm zonder antibiotica gemengd met het in de fokkerij aangemaakte beginvoer voor jonge varkens. Het voer werd ad libitum aan de dieren ter beschikking gesteld. Het infecteren van de varkens werd uitgevoerd door directe intragastrische toediening aan de SPF-varkens 20 van een entmateriaal dat bereid was door vooraf anaëroob kweken van de Treponemahyodysenteriae-stam 78/A op een 5 % paardebloed bevattende agar-plaat, fijnmaken samen met het kweekmedium en mengen met fosfaatbuffer waaraan 5 % mucine was toegevoegd. Men verzamelde de inhoud van de dikke darm en slijmvlies van varkens die kenmerkende symptonen van varkensdysenterie ontwikkelden, en dit materiaal werd verdund (2x) met fosfaatbuffer waaraan 5% mucine was toegevoegd. Deze verdunning werd als 25 uiteindelijk entmateriaal gebruikt, en men injecteerde 100 ml van de verdunning direkt in de maag van proefvarkens met een leeftijd van 7 weken (aan welke varkens gedurende 24 uren vóór het infecteren voer werd onthouden). Aan de varkens werd gedurende 21 dagen na het infecteren voer gegeven. De verkregen resultaten zijn in Tabel E samengevat. Terwijl maridomycine onwerkzaam bleek, vertoonde lankacidine C een voortreffelijke werkzaamheid tegen varkensdysenterie.

30

TABEL E

Groep Geïnfecteerde Lankacidine C Maridomycine 100 controle 100 ppm ppm 35 -

Varkensdysenterie

Aantal varkens dat tekenen van infectie 4/4 0/4 3/4 vertoonde/aantal gebruikte varkens

Aantal dagen dat slijm bevattende, 8,5 0 5,5 40 bloederige ontlasting werd waargenomen (gedurende de proefperiode van 21 dagen)

Aantal dagen dat diarree werd waarge- 14,8 0 11,0 nomen (gedurende de proefperiode van 45 21 dagen)

Aantal varkens waarbij het pathogene organisme werd vastgesteld

In feces 4 0 4

In slijmvlies van dikke darm 4 0 4 50 Aantal varkens dat beschadigingen van 4 o 4 de dikke darm vertoont

Resultaten van de toediening van het voer 55 Lichaamsgewicht (kg)

Ten tijde van infectering 12,5 13,6 12,8 192722 6 TABEL E (vervolg)

Groep Geïnfecteerde Lankacidine C Maridomycine 100 controle 100 ppm ppm 5 -

Ten tijde van voltooiing van de proef 17,8a 28,5b 21,905

Toename lichaamsgewicht (gram/dag) 2518 708b 430ab

Opname voer (kg) 16,3 27,5 18,8

Omzetting voer 3,07 1,85 2,09 10 -

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van infectering tot autopsie. Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05); bijvoorbeeld significant verschil tussen a en b, geen 15 significant verschil tussen b en ab.

Beproevingsvoorbeeld VI

Men onderzocht lankacidine C in concentraties van 100 ppm en minder in voer volgens dezelfde methode als in Beproevingsvoorbeeld V, waarbij vergeleken werd met Carbadox, een gebruikelijk middel 20 tegen varkensdysenterie (zie "Diseases of Swine, 7e ed., blz. 609). De verkregen resultaten zijn in Tabel F samengevat. Uit de resultaten van de toediening van het voer bleek dat lankacidine C een iets beter middel tegen varkensdysenterie is dan Carbadox.

TABEL F

25 -

Groep Niet- Geinfec- Lankacidine C Carbadox geinfec- teerde 50 ppm teerde controle controle --—- 30 (zonder 10 ppm 50 ppm 100 ppm genees middel)

Varkensdysenterie 35 Aantal varkens dat 0/4 4/4 0/4 0/4 0/4 0/4 tekenen van infectering vertoont/aantal gebruikte varkens

Aantal dagen dat slijm 0 9,5 0 0 0 0 40 bevattende bloederige ontlasting werd waargenomen (gedurende de proefperiode van 21 45 dagen)

Gemiddeld aantal dagen 0,5 14,3 0 0 0 3,0 dat diarree werd waargenomen (gedurende de 50 proefperiode van 21 dagen)

Aantal varkens waarbij het pathogene organisme werd 55 vastgesteld

In feces 0 4 0 0 0 0 7 192722 TABEL F (vervolg)

Groep Niet- Geinfec- Lankacidine C Carbadox geinfec- teerde 50 ppm 5 teerde controle controle --——— -- (zonder 10 ppm 50 ppm 100 ppm geneesmiddel) 10 -

In slijmvlies van dikke 0 4 0 0 0 0 darm

Aantal varkens dat 0 4 0 0 0 0 beschadigingen van de 15 dikke darm vertoont

Resultaten van de toediening van het voer Lichaamsgewicht (kg) 20 Ten tijde van interfering 11,1 10,2 10,5 11,1 11,1 11,1

Ten tijde van voltooiing 22,7a 13,0b 20,7a 25,3® 25,5® 21,0® van de proef

Toename lichaamsge- 551®**= 133d 484®c 673ab 689b 473c wicht (g/dag) 25 Opname voor (kg) 21,7 9,7 18,4 25,3 25,6 20,7

Omzetting voer 1,87 3,45 1,81 1,79 1,77 2,08

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van 30 infectering tot autopsie. Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05); bijvoorbeeld significant verschil tussen abc en d, geen significant verschil tussen abc en ac.

Beproevingsvoorbeeld VII

35 Volgens de werkwijze van Beproevingsvoorbeeld VI onderzocht men de werking van 10 ppm lankacidine A en 10 ppm lankacidine C 14-propionaat tegen varkensdysenterie. De verkregen resultaten zijn in Tabel G samengevat. Lankacidine A en lankacidine C 14-propionaat bleken beide duidelijk werkzaam te zijn tegen varkensdysenterie.

40 TABEL G

Groep Niet- Geinfec- Lankaci- Lankaci- Carbadox 50 geinfec- teerde dine A10 dine C ppm teerde controle ppm 14-propionaat 45 controle 10 ppm (zonder genees middel) 50 Varkensdysenterie

Aantal varkens dat tekenen 0,4 4/4 0/4 0/4 0/4 van infectering vertoonde/ aantal gebruikte varkens 192722 8 TABEL G (vervolg)

Groep Niet- Geinfec- Lankaci- Lankaci- Carbadox 50 geinfec- teerde dine A10 dine C ppm 5 teerde controle ppm 14-propionaat controle 10ppm (zonder geneesmiddel) 10 -----—

Aantal dagen dat slijm 0 11,3 0 0 0 bevattende bloederige ontlasting werd waargenomen (gedurende de 15 proefperiode van 21 dagen)

Aantal dagen dat diarree 0 15,3 0 0 0 werd waargenomen (gedurende de proefperiode van 21 dagen) 20 Aantal varkens waarbij het pathogene organisme werd vastgesteld

In feces 0 4 0 0 0

In slijmvlies van dikke 0 4 0 0 0 25 darm

Aantal varkens dat 0 4 0 0 0 beschadigingen van dikke darm vertoont 30 Resultaten van de toediening van het voer Lichaamsgewicht (kg)

Ten tijde van infectering 10,7 10,8 11,0 11,4 11,1

Ten tijde van voltooiin van 22,8 16,0 22,9 23,1 22,7 35 de proef

Toename lichaamsgewicht 5763 248b 567a 572® 552® (g/dag)

Opname voer (kg) 21,2 12,7 21,0 21,1 21,2

Omzetting voer 1,75 2,44 1,76 1,81 1,83 40 -

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier voor de periode van 21 dagen van infectering tot autopsie. Verschillende letters op dezelfde regel geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05).

45

Beproevingsvoorbeeld VHI

Deze proef werd uitgevoerd onder de omstandigheden van zogenaamde therapeutische toediening.Men begon onmiddellijk met de toediening toen de varkens klinische tekenen van varkensdysenterie vertoonden. De methode van infectering was dezelfde als in Beproevingsvoorbeeld V. Men nam 5 varkens die op 50 dezelfde dag (6e dag) na de infectering tekenen van de ziekte vertoonden. Gelijktijdig met het vertonen van deze tekenen werd aan de varkens een voer ter beschikking gesteld dat 50 ppm lankacidine C bevatte. De verkregen resultaten zijn in Tabel H gegeven. In alle gevallen werd geen slijm bevattende bloederige diarree meer waargenomen op de dag volgende op de dag van de toediening en de ontlasting was los of normaal. Na twee dagen lag het getelde aantal levensvatbare pathogene organismen in de feces beneden de 55 detectiegrens (102 CFU/g). Uit autopsie, uitgevoerd 15 dagen nadat de tekenen van de ziekte zich openbaarden (9 dagen na stopzetting van de toediening), bleek dat geen beschadigingen van de dikke darm aanwezig waren, terwijl het pathogene organisme niet gedetecteerd kon worden.

9 192722 TABEL Η

Varken No. 1 2 3 4 5 5 ——___________—__

Aantal dagen _ , . . , Toestand Toestand Toestand Toestand Toestand na net zich ^ van feces van feces van feces van feces van feces openbaren van tekenen van de (Aantal (Aantal pa- (Aantal pa- (Aantal pa- (Aantal pa- 1q ziekte pathogene thogene or- thogene or- thogene or- thogene or- organismen) ganismen) ganismen) ganisraen) ganismen) 0* © (8,0) © (6,0) © (7,1) © (6,8) © (7,1) 1* 0 (M) O (2,3) 0 CM) 0 (2,0) O (2,0) IQ ______ . ________ 2* I o (-) o (-) o (- )| o (-) o (-) ï* o ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) O ( - ) 20 n* 0(-)0(-)0(-) O ( - )' O ( - ) 5* 0(-)0(-)0(-)0(-)0(-) 6* 0(-)0(-)0(-) O ( - ) O ( - ) 25------ 7 O ( - ) O ( - ) | O ( - ) O ( - ) O ( - ) 8 O ( - ) O ( - ) O(-) O(-) O(-) 30 9 O(-) 0(-)0(-)0(-)0(-) 10 0(-)0(-)0(-)0(-)0(-) ïï O(-) 0(-)0(-) 0(-)0(-) - _ _ 12 0(-)0(-)0(-) O ( - ), O ( - ) 13 0(-)0(-)0(-)0(-)0(-) 1Ί 0(-)0(-)0(-)0(-)0(-) (Autopsie) O < - > O <-> O < - ) O t - )' O t - )

Iikkeadafnin9en negatief negatief negatief negatief negatief 45 ^antal pathogend ( - \ ( - } ( - } ( - } ( - } byganismen m vJ \ ) \) \ — ) joiRke darm_____________

De toestand van de feces wordt aangegeven volgens de volgende vier waarderingen: O - normaal; φ -los; φ - diarree; ©- slijmachtig en bloederig. De waarden voor het aantal getelde levensvatbare organis-50 men zijn uitgedrukt in log/g; (-) betekent dat het aantal getelde organismen beneden de detectiegrens (102 CFU/g) ligt. Het symbool * geeft de dagen aan, waarop het voer met 50 ppm lankacidine C werd verstrekt.

Beproevingsvoorbeeld IX

Op dezelfde wijze als in Beproevingsvoorbeeld VIII onderzocht men lankacidinen op hun therapeutische 55 effecten voor wat betreft varkensdysenterie onder therapeutische omstandigheden. De effecten werden op basis van de toestand van de feces beoordeeld. De verkregen resultaten zijn in Tabel I gegeven; uit deze resultaten blijkt dat lankacidine A, lankacidine C en lankacidine C 14-propionaat therapeutisch werkzaam 192722 10 zijn in een dosis van 50 ppm.

TABEL I

5

Geïnfecteerde Groep waaraan Groep waaraan Groep waaraan controle lankacidine A lankacidine C lankadicine C

Groep (zonder ge- is toegediend is toegediend 14-propionaat neesmiddel) (50 ppm) (50 ppm) is toegediend 10 (50 ppm)

Aantal varken hirzich No. 1 2 3 I» 5 6 7 8 9 ίο n 12 13 1Ü 15 16 openbaren_________________ van teke » 2iek£d* 56X6 + + + o* oooooooooooooo©©

Ifi- ©©©©0ΟΟΟΟΟΟΦΦΟΦΟ 20 2* ©©©©oooooooooooo 3* ©©©©oooooooooooo 4* ©©©©oooooooooooo 25 5* ©©©©oooooooooooo 6* ©©©©oooooooooooo 7 ©©©©oooooooooooo 8 ©©©©oooooooooooo

10 ©©©©oooooooooooo 11 ©©©©oooooooooooo 12 ©©©©oooooooooooo 13 ©©©©oooooooooooo 14 ©©©©oooooooooooo 15 ©©©©oooooooooooo 40 16 ©©©©oooooooooooo 17 ©©©©oooooooooooo .18 ©©©©oooooooooooo 45 19 ©©©©oooooooooooo 20 ©©©©oooooooooooo 21 __^_©_ ©©cooooooo ooooj 50

De toestand van de feces werd aangegeven volgens de volgende vier waarderingen: Q - normaal; φ- los; © - diarree; ©— slijmachtig en bloederig. Het symbool * geeft de dagen aan waarop het voer met 50 ppm van het geneesmiddel verstrekt werd.

Zoals duidelijk uit de resultaten van de bovenstaande Beproevingsvoorbeelden I—IX blijkt, hebben de 55 verbindingen volgens de formule van het formuleblad een bijzonder voortreffelijke werking als middel voor het voorkomen en behandelen van varkensdysenterie en zijn deze verbindingen superieur aan soortgelijke antibiotische middelen tegen varkensdysenterie die reeds in de handel zijn; derhalve zijn deze verbindingen 11 192722 zeer geschikt voor vee.

Beproevingsvoorbeeld X

5 Men onderzocht het effect van verbindingen volgens de formule van het formuleblad op de groei van varkens onder omstandigheden waarin varkensdysenterie afwezig was. Men gebruikte 40 één maand oude ”Landrace”-varkens (5 worpen) in groepen die elk bestonden uit 8 dieren (4 mannelijke en 4 vrouwelijke). Lankacidine C werd in concentraties van 0 (controle), 1, 2,5, 5 en 10 ppm toegevoegd aan beginvoer zonder anti-bacterieel middel gedurende de periode vanaf het begin van de proef tot de varkens een leeftijd 10 van 3 maanden hadden bereikt, en aan voer voor het onderzoek van varkens op' hun vieesproduktie (eveneens vrij van anti-bacterieel middel) gedurende de periode vanaf de leeftijd van 4 maanden tot de leeftijd van 6 maanden (einde). In elke groep werd lankacidine C dus continu gedurende 5 maanden in het dieet toegediend.

Zoals blijkt uit de in Tabel J samengevatte resultaten nam de groei van de varkens bijna evenredig toe 15 met de toegevoegde hoeveelheid lankacidine C, en daarmee werd de benutting van het voer verbeterd. De verbindingen met de formule van het formuleblad zijn derhalve zelfs onder gebruikelijke voeder-omstandigheden geschikt voor het verhogen van de vieesproduktie van varkens.

TABELJ

20 -

Groep Controle Lankacidine C

1 ppm 2,5 ppm 5 ppm 10 ppm 25 Lichaamsgewicht (kg)

Bij het begin 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4

Bij voederwisseling 31,7a 32,7a 34,2ab 36,9b 37,5b

Aan het einde 101,4a 102,4315 104,6ab 109,08*1 110,2b

Toename lichaamsgewicht 30 (kg)

Gedurende periode van het 24,3a 25,4ab 26,b 29,5b 30,1b beginvoer

Gedurende gehele periode 94,0° 95,0** 97,2ab 101,7ab 102,8b

Opname voer (kg) 35 Gedurende periode van het 49,9 49,4 49,1 50,7 51,2 beginvoer

Gedurende gehele periode 280,2 275,6 278,0 284,6 284,8

Omzetting voer

Gedurende periode van het 2,05 1,95 1,83 1,72 1,70 40 beginvoer

Gedurende gehele periode 2,98 2,90 2,86 2,80 2,77

De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier. Verschillende letters op dezelfde regel 45 geven aan dat een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05); bijvoorbeeld significant verschil tussen a en b, geen significant verschil tussen ab en a of tussen ab en b.

Beproevingsvoorbeeld XI

Bij deze proef gebruikte men 48 35 dagen oude ”Landrace”-varkens (6 worpen) in 6 groepen van elk 8 50 dieren (4 mannelijke en 4 vrouwelijke). Lankacidine A werd in concentraties van 0 (controle), 1, 2,5, 5,10 en 20 ppm toegevoegd aan beginvoer zonder anti-bacterieel middel gedurende jde periode vanaf het begin van de proef tot de leeftijd van de varkens 3 maanden bedroeg, en aan voer voor het onderzoek van varkens op hun vieesproduktie (eveneens vrij van anti-bacterieel middel) gedurende de periode vanaf de leeftijd van 4 maanden tot de leeftijd van 6 maanden (einde).

55 De gegevens betreffende de groei, die werden verkregen bij de proef van 5 maanden continue toediening, zijn in Tabel K samengevat. De groei van de varkens nam evenredig toe met de verhoging van de toegevoegde hoeveelheid lankacidine A, en daarmee werd de benutting van het voer verbeterd.

Claims

192722 12 TABEL K Groep Controle Lankacidine A 5. ppm 2,5 ppm 5 ppm 10 ppm 20 ppm Lichaamsgewicht (kg) Bijhet begin 9,91 9,18 9,16 9,16 9,15 9,18 Bij voederwisseling 32,9a 34,03* 34,630 36,1ab 36,7b 37,4b

10 Aanhet einde 108,2s 111,630 113,530 118,3ab 120,5b I23,4b Toename lichaamsgewicht (kg) Gedurende periode van 23,73 24,836 25,430 26,9313 27,6b 28,2b het beginvoer

15 Gedurende gehele 99,03 102,4ab 104,4* 109,1ab 111,4b 114,2b periode Opname voer (kg) Gedurende periode van 48,2 48,1 47,6 47,6 47,7 48,2 het beginvoer

20 Gedurende gehele 290,1 294,9 295,3 304,3 305,2 310,6 periode Omzetting voer Gedurende periode van 2,03 1,94 1,87 1,77 1,73 1,71 het beginvoer

25 Gedurende gehele 2,93 2,88 2,83 2,79 2,74 2,72 periode De bovenstaande gegevens zijn alle de gemiddelde waarde per dier. Verschillende letters op dezelfde regel 30 geven aan dat er een significant verschil bestaat tussen de bijbehorende waarden (P<0,05).

1. Werkwijze per bereiding van een farmaceutisch preparaat, waarbij men ten minste een verbinding met de formule van het formuleblad, waarin R1 gelijk is aan /H = O of X OH 40 en R2 en R3 elk afzonderlijk een waterstofatoom of een van een carbonzuur afgeleide acylgroep zijn, opneemt in een farmaceutisch aanvaardbare drager, met het kenmerk, dat als drager vast varkensvoer wordt toegepast ter verkrijging van een preparaat voor de profylaxe en behandeling van varkensdysenterie. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat men het preparaat 1-500 dpm van een verbinding met de formule van het formuleblad doet bevatten. Hierbij 1 blad tekening