NL192041C - Geneesmiddel met antibacteriële werking, alsmede 7-£2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)-aceetamido|-3-cefem -4-carbonzuurderivaten. - Google Patents

Description

1 192041

Geneesmiddel met antlbacteriële werking, alsmede 7-[2-(2-amlnothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxylmino)-aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten

De uitvinding heeft betrekking op een geneesmiddel met antlbacteriële werking dat als werkzaam bestand· 5 deel een 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)-aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaat bevat.

Een dergelijk geneesmiddel is bekend uit de Nederlandse octrooiaanvrage 75 14811. De in deze publikatie beschreven werkzame bestanddelen zijn 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(gesubstitueerd) aceetamido]-3-CH2R4-3-cefem-4-carbonzuurderivaten, waarin de substituent aan positie 2 van de aceetami-10 dorest een aminogroep of een daarin om te zetten groep zoals een eventueel beschermde hydroxyimino-groep, bijvoorbeeld de methoxyiminogroep, kan zijn. R4 is waterstof of een rest van een nucteofiele verbinding zoals een acylgroep, doch bij voorkeur een mercaptogroep die gebonden is aan een heterocyclische ring met 5 of 6 atomen.

Voorts is tijdens een lezing van P. C. Cherry op een op 28-30 juni 1976 te Cambridge gehouden 15 symposium, waarvan een verslag te vinden is in J. Elks, Recent Advances in the Chemistry of β-Lactam Antibiotics (1977), blz. 145-152, gewezen op de gunstige antlbacteriële eigenschappen van synisomeren van 7-[2-(<desgewenst veretherd> oxyimino)-2-arylaceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten, waarin de arylgroep aan positie 2 van de aceetamidorest een fenyl·, thiënyl- of furylgroep is. De veretherende groep aan de oxyiminorest is met name een koolwaterstofgroep of een met een carboxylgroep gesubstitueerde 20 koolwaterstofgroep. Een verder onderzoek van de verschillende verbindingen heeft geleid tot de keuze van het natriumzout van 3-carbamoyloxy-methyl-7-[2-(2-furyl)-2-(methoxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-caibonzuur ais breedspectrum antibioticum voor parenteraal gebruik.

Uit de Franse gepubliceerde octrooiaanvrage 2.315.933 zijn 3-acetoxymethyl-7-[2-(1 of 2-aminocar-bonylalkoxyimino)-2-R-aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten bekend, waarin de substituent R een 25 fenyl-, thiënyl- of furylgroep is. Deze verbindingen hebben een goede antlbacteriële werking tegen een breed spectrum van micro-organismen.

Men heeft nu gevonden, dat bepaalde 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuurderivaten een onverwacht veel betere antlbacteriële werkzaamheid bezitten dan de bovengenoemde bekende cefalosporanzuurderivaten.

30 De uitvinding heeft derhalve betrekking op het in de aanhef omschreven geneesmiddel met antibacteriële werking, met kenmerk, dat het werkzame bestanddeel bestaat uit ten minste een verbinding met de algemene formule 1 van het formuleblad, waarin R, een groep is met de formule -C02R'r waarin R', een alkylgroep met 1-3 koolstofatomen, een waterstofatoom of een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organische stikstofbase voorstelt, of R, een cyaangroep of 35 een groep met de formule -CONH2 voorstelt, A een waterstofatoom of een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organische stikstofbase voorstelt, R' een R" al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een alkylgroep met 1-3 koolstofatomen voorstellen, en de groep met de formule -OCR'R"R, zich in de syn-positie bevindt, waarbij, wanneer Rn een groep met de formule -C02R'1 voorstelt, A hetzelfde voorstelt als R',, tenzij R'·, een alkylgroep voorstelt.

40 Opgemerkt wordt, dat in de oudere, op 14 oktober 1977 ter inzage gelegde Nederlandse octrooiaanvrage 77 03969 7-[2-(beschermende imino)-(2-(gesubstitueerde aryl)aceetamido]3-cefem-carbonzuurverbindingen zijn beschreven, waarin de beschermde iminogroep aan positie 2 onder andere een 1 -carboxyalkyl-oxyiminogroep en de gesubstitueerde arylgroep aan positie 2 onder andere een 2-aminothiazool-4-ylgroep kan zijn terwijl aan de 3-plaats een acetoxymethylgroep aanwezig kan zijn.

45 In deze oudere octrooiaanvrage 77 03969 zijn echter geen verbindingen beschreven, die tegelijkertijd een 1 -carboxy-alkyloxyiminogroep en een 2-aminothiazool-4-ytgroep aan positie 2 van de aceetamidorest bevatten, terwijl bij geen van de verbindingen met een 1-carboxyalkylaxyiminogroep op de 3-plaats een acetoxymethylgroep aanwezig was.

Uit vergelijkende proeven is gebleken, dat de verbindingen met de formule 1 volgens de onderhavige 50 uitvinding, die tegelijkertijd een bepaalde 1-carboxyalkyloxyiminogroep en een 2-aminothiazool-4-ylgroep bevatten, een onverwacht grotere antibacteriële werkzaamheid bezitten dan in octrooiaanvrage 77 03969 beschreven verbindingen, die hetzij zulk een 1-carboxylalkyloxyiminogroep doch in de plaats van een 2-aminothiazooM-ylgroep een 3-chloor-4-hydroxyfenylgroep bevatten, hetzij een 2-aminothiazool-4-ylgroep doch niet zulk een 1 -carboxyalkyloxyiminogroep bevatten maar een methyloxyiminogroep.

55 De geneesmiddelen volgens de uitvinding bezitten een zeer goede antibiotische werking, zowel tegenover grampositieve bacteriën, zoals Staphylococcus, met name een penicilline-restistente Staphylococcus, en Streptococcus, als tegenover gram-negatieve bacteriën, zoals Eschetichiaooli, Klebsiella, Salmonetla 192041 2 en Proteus.

Ze kunnen derhalve in het bijzonder toegepast worden voor de behandeling van aandoeningen, teweeggebracht door bacteriën, bijvoorbeeld door Staphylococcus veroorzaakte aandoeningen.

De verbindingen met de formule 1 kunnen tevens toegepast worden als werkzaam bestanddeel in 5 geneesmiddelen voor de behandeling van infecties met E. coli en daarmee gepaard gaande infecties, infecties met Proteus, Klebsiella en Salmonella, en andere door gram-negatieve bacteriën veroorzaakte aandoeningen.

Voor de bereiding van geneesmiddelen past men bij voorkeur de volgende verbindingen met de formule 1 toe: 10 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-ethoxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl) 2-<(1 -carboxy-1 -methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-15 4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan.

Het dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazooi-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer bezit in het bijzonder een zeer goede werkzaamheid tegen gram-negatieve bacteriën.

De geneesmiddelen volgens de uitvinding kunnen oraal, rectaal, parenteraal, intramusculair of door 20 plaatselijk aanbrengen op de huid en de slijmvliezen toegediend worden. Zij kunnen vast of vloeibaar zijn, de gebruikelijke voor toediening aan mensen geschikte vormen bezitten, en worden volgens gebruikelijke methoden bereid. Het werkzame bestanddeel of de werkzame bestanddelen kunnen hierin opgenomen worden met gewoonlijk voor dergelijke farmacologische samenstellingen toegepaste excipiëntia, zoals talk, arabische gom, lactose, zetmeel, magnesiumstearaat, cacaoboter, al dan niet waterige dragers, vette stoffen 25 van dierlijke of plantaardige afkomst, paraffine-derivaten, glycolen, verschillende bevochtigingsmiddelen, dispergeermiddelen of emulgatoren en conserveermiddelen.

De toegediende dosis varieert afhankelijk van de behandelde aandoening, de betreffende patiënt, de wijze van toediening en het betreffende produkt met formule 1. De dosis kan bijvoorbeeld tussen 0,250 en 4 g per dag bedragen bij orale toediening aan mensen in het geval van het hierna in voorbeeld III, VII of IX 30 beschreven produkt, of tussen 0,500 en 1 g, driemaal per dag, bij intramusculaire toediening.

De uitvinding heeft tevens betrekking op 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten geschikt voor toepassing als werkzaam bestanddeel in de bovengenoemde geneesmiddelen, met het kenmerk, dat deze 3-cefem-4-carbonzuurderivaten verbindingen zijn met de algemene formule 1, waarin R.,, A, R' en R" de hierboven genoemde betekenissen bezitten en de groep 35 met formule -OCR'R"R 1 zich in de syn-positie bevindt.

Wanneer R1 een groep met de formule -CC^R', voorstelt, zijn betekenissen van R', waaraan de voorkeur wordt gegeven, een equivalent van natrium, kalium, lithium, calcium, magnesium, trimethylamine, diëthyla-mine, triëthylamine, methylamine, propylamine, Ν,Ν-dimethylethanolamine, tris-(hydroxymethyl)aminomethaan, arginine en lysine.

40 De uitvinding heeft in het bijzonder betrekking op een of meer van de volgende 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten met de algemene formule 1: 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-ethoxycarbonylmethyloxyimino)-aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-car-bonzuur, syn-isomeer; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)-aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-45 carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan; 7-[2-2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1-carboxy-1-methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan.

De eerdergenoemde verbindingen met de formule 1 kunnen bestaan in de door de formule 1 aangegeven vorm of in de vorm van verbindingen met de formule 1z.

50 De verbindingen met de formule 1 kunnen bereid worden door een verbinding met de formule 2, waarin A' een waterstofatoom of een gemakkelijk door zure hydrolyse of door hydrogenolyse te verwijderen estergroep voorstelt, te laten reageren met een zuur met de formule 3 of een functioneel derivaat van dit zuur, waarin R2 een gemakkelijk door zure hydrolyse of hydrogenolyse te verwijderen groep of een chlooracetylgroep is, Ra een groep is met de formule •C02R"1, waarin R", een alkylgroep met 1-3 koolstof-55 atomen of een gemakkelijk door zure hydrolyse of door hydrogenolyse te verwijderen estergroep voorstelt, ofwel R3 een cyaangroep of een groep met de formule -CONH2 voorstelt, R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten en de groep met de formule -OCR'R"Ra zich in de syn-positie bevindt, onder vorming 3 192041 van een verbinding met formule 1', waarin R2, R3, R', R" en A' de eerdergenoemde betekenissen bezitten en de verkregen verbinding met de formule 1' om te zetten met één of meer zure hydrolyse-middelen, hydrogenolyse-middelen of met thioureum, afhankelijk van de betekenissen van R2, R"1 en A', onder vorming van een verbinding met formule 1a, waarin R4 een groep is met formule -C02R"2, waarin R"2 een 5 alkylgroep met 1-3 koolstofatomen of een waterstofatoom voorstelt, ofwel R4 een cyaangroep of een groep met de formule -CONH2 voorstelt en R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten, overeenkomende met een verbinding met de formule 1, waarin R, de betekenis van R4 bezit en A een waterstofatoom voorstelt, waarna men de verbinding met de formule 1a eventueel volgens gebruikelijke methoden omzet in een zout onder vorming van een verbinding met de formule 1b, waarin Rs een groep met de formule 10 -C02R"3 is, waarin R"3 een alkylgroep met 1-3 koolstofatomen of een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organische stikstof base voorstelt, of R5 een cyaangroep of een groep met de formule -CONH2 voorstelt, A" een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organische stikstofbase voorstelt, waarbij, wanneer Rs een groep met de formule -C02 R"3 voorstelt, en waarin R"3 een equivalent van een alkalimetaal, aardalkalimetaal, magnets sium, ammoniak of een organische stikstofbase voorstelt, A" hetzelfde voorstelt als R"3 , en R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten, overeenkomende met een verbinding met de formule 1, waarin R1 de betekenis van R5 en A die van A" bezit.

Als gemakkelijk door zure hydrolyse of hydrogenolyse te verwijderen groep R2 kunnen genoemd worden: tert-butoxy-carbonyl, trityl, benzyl, dibenzyl, trichloorethyl, carbobenzyloxy, formyl, trichloorethoxycarbonyl of 20 2-tetrahydropyranyl.

Als gemakkelijk door zure hydrolyse of hydrogenolyse te verwijderen estergroepen R", kunnen genoemd worden: benzhydryl, tert.-butyl, benzyl, paramethoxybenzyl en trichloorethyl.

A' kan een willekeurige van de voor R"., genoemde gemakkelijk door zure hydrolyse of hydrogenolyse te verwijderen estergroepen zijn.

25 Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm van de zojuist beschreven werkwijze behandelt men de verbinding met de formule 2 met een functioneel derivaat van het zuur met de formule 3, zoals het anhydride of zuurchloride, waarbij het benodigde anhydride in situ gevormd kan worden door inwerking van isobutylchloorformiaat of dicyclohexylcarbodiïmide op het zuur. Men kan tevens gebruikmaken van andere functionele derivaten van het zuur met de formule 3, zoals het azide, een amide of een actieve ester, 30 bijvoorbeeld een ester gevormd met hydroxysuccinimide, paranitrofenol of 2,4-dinitrofenol. Wanneer de reactie van de verbinding met de formule 2 uitgevoerd wordt met een halogenide van het zuur met de algemene formule 3 of met een met isobutylchloorfoimiaat gevormd anhydride, werkt men bij voorkeur in aanwezigheid van een basische verbinding. Als basische verbinding kunnen bijvoorbeeld een alkalimetaal-carbonaat of een tertiaire organische base, zoals N-methylmorfoline, pyridine of triêthylamine gekozen 35 worden.

De omzetting van de verbindingen met de formule 1' in verbindingen met de formule 1a heeft ten doel om de substituent R2 te vervangen door een waterstofatoom, de substituent R"1t wanneer deze een gemakkelijk door zure hydrolyse of door hydrogenolyse te verwijderen estergroep voorstelt, te vervangen door de groep R"2, die een waterstofatoom voorstelt, en de substituent A', wanneer deze een gemakkelijk door zure 40 hydrolyse of door hydrogenolyse te verwijderen estergroep voorstelt, te vervangen door een waterstofatoom. Wanneer R2 een chlooracetylgroep voorstelt, behandelt men de verbinding met de formule 1' met thioureum en eventueel met een of meer zure hydrolysemiddelen of hydrogenolysemiddelen afhankelijk van de betekenissen van R" en A'. De reactie met thioureum wordt bij voorkeur uitgevoerd in neutraal of zuur milieu, overeenkomstig een voorschrift van M. Masakics in J. Am. Chem. Soc. 90,4503-4509 (1968).

45 Als zuur hydrolysemiddel, waarmee men de verbindingen met de formule 1' eventueel behandelt, kunnen genoemd worden: mierezuur, trifluorazijnzuur of azijnzuur. Deze zuren kunnen watervrij of in een waterige oplossing toegepast worden. Men kan tevens gebruikmaken van de combinatie zink-azijnzuur. Bij voorkeur gebruikt men een zuur hydrolysemiddel ter verwijdering van de tert-butoxycarbonyl- of tritylgroepen, die de groep R2 kan voorstellen, of van de benzhydryl·, tertbutyl- of paramethoxybenzylgroepen die A' en R", 50 kunnen voorstellen. De combinatie zink-azijnzuur wordt bij voorkeur toegepast ter verwijdering van de trichloorethylgroep, die R2, R", en A' kunnen voorstellen.

Men gebruikt een hydrogenolysemiddel, zoals waterstof in aanwezigheid van een katalysator, bij voorkeur ter verwijdering van de dibenzyl- en carbobenzyloxygroepen, die R2 kan voorstellen, en van de benzylgroep, die R"., en A' kunnen voorstellen.

55 De omzetting van een verbinding met de formule 1a in een zout met de formule 1b kan volgens gebruikelijke methoden uitgevoerd worden, bijvooibeeld door inwerking van natriumhydroxyde, kalium-hydroxyde, natriumwaterstofcarbonaat, natriumacetaat, natriumethylhexanoaat of het natriumzout van 192041 4 diëthylazijnzuur op een zuur met de formule 1a. De omzetting in een zout kan eveneens uitgevoerd worden door inwerking van ammoniak of een organische stikstofbase, zoals triëthylamine, diëthylamine, trimethyla-mine, propylamine, Ν,Ν-dimethylethanolamine of tris-hydroxymethyl)aminomethaan. De zoutvorming kan tevens tot stand gebracht worden door inwerking van arginine of lysine.

5 Voor de bereiding van de zouten kunnen tevens solvaten van de vrije zuren met de formule 1a toegepast worden als uitgangsverbindingen in plaats van de overeenkomstige vrije zuren.

Deze zoutvorming wordt bij voorkeur uitgevoerd in een oplosmiddel of een mengsel van oplosmiddelen, zoals water, diëthylether, methanol, ethanol of aceton. De zouten worden verkregen in amorfe of kristallijne vorm, afhankelijk van de toegepaste reactieomstandigheden. Kristallijne zouten worden bij voorkeur bereid 10 door de vrije zuren met de formule 1a te laten reageren met een van de bovengenoemde zouten van alifatische carbonzuren, bij voorkeur natriumacetaat.

De benodigde uitgangsverbindingen met de formule 3 kunnen worden bereid door in aanwezigheid van een sterke base een verbinding met de formule 4 waarin R2 de eerder genoemde betekenis heeft en de groep -OH zich in de syn-positie bevindt, te laten reageren met een verbinding met de formule 5, waarin Hal 15 een halogeenatoom voorstelt en R', R" en R3 de eerder genoemde betekenissen hebben. Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm van deze werkwijze gebruikt men als steike base kalium-tert.butanolaat, natriumhydride of alcoholische kaliloog. Het toegepaste halogenide is bij voorkeur het bromide, doch men kan tevens gebruik maken van het chloride of jodide.

De bij de hierboven beschreven werkwijze ter bereiding van verbindingen met de formule 1 als tussen-20 produkt verkregen verbindingen met de formule V in de vorm van de syn-isomeer kunnen ook worden bereid door een verbinding met de formule 5 waarin Ha, R', R" en R3 de eerder genoemde betekenissen bezitten, in aanwezigheid van een base te laten reageren met een verbinding met de formule 6, in de vorm van de synisomeer, waarin R2 en A' de eerdergenoemde betekenissen bezitten. Volgens een voorkeursuitvoeringsvorm van deze werkwijze gebruikt men als base triëthylamine, pyridine of zilveroxyde. Het voor 25 de reactie toegepaste oplosmiddel is bij voorkeur methyleenchloride, benzeen, acetonitril, ethylacetaat, tetrahydrofuran, dioxan, chloroform of dimethylformamide.

De in verband met de zojuist beschreven bereiding benodigde verbinding met de formule 6 kan worden verkregen door reactie van isopropenylmethylether met de formule 6a met een verbinding met de formule 4 in de vorm van de syn-isomeer, waarin R2 de eerder genoemde betekenis heeft, onder vorming van een 30 zuur met de formule 8, waarna men dit zuur, of een functioneel derivaat ervan, omzet met een verbinding met de formule 2, waarin A' de eerder genoemde betekenis heeft, onder vorming van een verbinding met de formule 9, waarin R2 en A' de eerdergenoemde betekenissen bezitten, vervolgens een verbinding met de formule 9, waarin A' een waterstofatoom voorstelt, eventueel volgens gebruikelijke methoden verestert onder vorming van een verbinding met de formule 9, waarin A' een gemakkelijk door zure hydrolyse of 35 hydrogenolyse te verwijderen estergroep voorstelt, en ten slotte de verkregen verbinding met de formule 9 onder gematigde omstandigheden behandelt met een zuur onder vorming van de verbinding met de formule 6.

De reactie van isopropenylmethylether met de verbinding met de formule 4 wordt eventueel uitgevoerd in aanwezigheid van een zuur, bijvoorbeeld paratolueensulfonzuur. Men kan tevens als uitgangsverbinding 40 gebruikmaken van een zout van de verbinding met de formule 4 met een anorganisch zuur, zoals het waterstofchloridezout. In dat geval is de aanwezigheid van een zuur niet noodzakelijk. Na de omzetting tot een verbinding met de formule 8 verwijdert men het zuur door neutralisatie met een base, zoals pyridine.

De condensatie van de verbinding met de formule 8 met 7-aminocefalosporanzuur of een van zijn esters met de formule 2 wordt uitgevoerd onder de eerder beschreven omstandigheden voor de reactie van de 45 verbinding met de formule 3 met dezelfde verbindingen met de formule 2. De eventuele verestering van de verbindingen met de formule 9, waarin A' een waterstofatoom voorstelt, wordt onder gebruikelijke omstandigheden uitgevoerd. Men kan bijvoorbeeld gebruikmaken van een diazoverbinding, zoals difenyldiazome-thaan.

De omzetting van de verbindingen met de formule 9 in verbindingen met de formule 6, waarbij de 50 beschermende 1-methyl-1-methoxyethylgroep van het oxim wordt verwijderd, wordt uitgevoerd in zuur milieu onder voldoende milde omstandigheden, zodat de beschermende groepen R2 en A', die eveneens in zuur milieu afgesplitst kunnen worden, niet aangetast worden. Hiertoe voert men de reactie bijvoorbeeld uit onder toepassing van zoutzuur van ongeveer 1 of 2N bij kamertemperatuur gedurende een tijd tussen ongeveer 30 min. en enkele uren.

55 Wanneer in de formule 1 R1 een groep met de formule -CONH2 voorstelt, is een geschikt uitgangsmateriaal een verbinding met de formule 3', in de vorm van de syn-isomeer, waarin R2, R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten. Dit uitgangsmateriaal kan worden bereid door een verbinding met 5 192041 de formule 10, in de vorm van de syn-isomeer, waarin alk en alkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstelt, en R2 de eerder genoemde betekenis heeft, in aanwezigheid van een base te behandelen met een verbinding met de formule 5', waarin Hal, R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten en alk1 een alkylgroep met 1 -4 koolstofatomen voorstelt, onder vorming van een verbinding met de formule 11, die men 5 daarna behandelt met een base en vervolgens met een zuur onder vorming van een verbinding met de formule 12. Het verkregen carbonzuur met de formule 12 wordt eerst omgezet in een reactief derivaat ervan en vervolgens behandeld met ammoniak onder vorming van een verbinding met de formule 13, die men daarna behandelt met een base en vervolgens met een zuur onder vorming van de gewenste verbinding met de formule 3'.

10 Volgens een voorkeursuitvoeringsvoim van deze werkwijze voert men de reactie van de verbinding met de formule 5' met de verbinding met de formule 10 uit in aanwezigheid van een base, zoals kalium-carbonaat, natriumhydroxyde, kaliumhydroxyde of triëthylamine. Als halogenide met de formule 5' gebruikt men bij voorkeur het bromide, doch men kan tevens het chloride of jodide toepassen.

De omzetting van de verbinding met de formule 11 in een verbinding met de formule 12 wordt uitgevoerd 15 onder milde omstandigheden om de groep met de formule -C02 alk niet te verzepen. Men kan derhalve bijvoorbeeld werken in aanwezigheid van ongeveer 1 enkele equivalent van natriumhydroxyde, kaliumhydroxyde of bariumhydroxyde en bij voorkeur bij een temperatuur van een ijsbad gedurende ongeveer 1 uur. Het zuur, dat men vervolgens gebruikt, is bij voorkeur verdund zoutzuur. Men kan echter ook verdund zwavelzuur of azijnzuur gebruiken.

20 Het reactieve derivaat van het zuur met de foimule 12, dat men bij het bereiden van het amide met de formule 13 bij voorkeur toepast, is het gemengde anhydride, dat bijvoorbeeld in situ gevormd wordt door inwerking van isobutylchloorformiaat. Men kan echter ook andere reactieve verbindingen toepassen, zoals de actieve esters die bijvoorbeeld gevormd worden met hydroxysuccinimide, para- of ortho-nitrofenol of 2,4-dinitrofenol, of het symmetrische anhydride, dat gevormd wordt door inwerking van een carbodiïmide, 25 zoals dicyclohexylcarbidiïmide.

Het verzepen van de verbinding met de formule 13 en het vervolgens opnieuw aanzuren worden onder gebruikelijke omstandigheden uitgevoerd. Men gebruikt bijvoorbeeld als base natriumhydroxyde en zuurt opnieuw aan met zoutzuur.

Wanneer in de formule 1 R1 een cyaangroep voorstelt, is een geschikt uitgangsmateriaal een verbinding 30 met de formule 3", in de vorm van de syn-isomeer, waarin R2, R' en R" de eerdergenoemde betekenissen bezitten. Dit uitgangsmateriaal kan worden bereid door een verbinding met de formule 4, in de vorm van de syn-isomeer, in aanwezigheid van een base te behandelen met twee equivalenten van een verbinding met de formule 14 onder vorming van een verbinding met de formule 15, die men daarna behandelt met een base en vervolgens met een zuur onder vorming van de gewenste verbinding met de formule 3".

35 Volgens een voorkeursuitvoetingsvorm van deze werkwijze voert men de additie van de verbinding met de formule 14 aan de verbinding met de formule 4 uit in aanwezigheid van een base, zoals kalium-carbonaat, natriumhydroxyde, kaliumhydroxyde of triëthylamine. De verzeping van de verbinding met de formule 15 wordt uitgevoerd onder normale verzepingsomstandigheden, gevolgd door opnieuw aanzuren. Men kan bijvoorbeeld gebruikmaken van natriumhydroxyde gevolgd door zoutzuur.

40 De als uitgangsverbinding benodigde verbindingen met de formule 3 kunnen tevens worden bereid door een verbinding met de formule 10, waarin 1¾ de eerder genoemde betekenis heeft, in aanwezigheid van een base te laten reageren met een verbinding met de formule 5, waarin Hal, R', R" en Ra de eerdergenoemde betekenissen bezitten, onder vorming van een verbinding met de formule 16, die men daarna behandelt met een base en vervolgens met een zuur onder vorming van de gewenste verbinding met de 45 formule 3. De voor de condensatie van de verbinding met de formule 5 en de verbinding met de formule 10 toegepaste base is bij voorkeur kaliumcarbonaat. Men kan echter andere basen, zoals natriumhydroxyde, kaliumhydroxyde of triëthylamine toepassen. De verzeping van de verbinding met de formule 16 ter vorming van de verbinding met de formule 3 wordt zodanig uitgevoerd, dat de door R3 voorgestelde groep met de formule -CC^R", niet zelf verzeept wordt. Bijvoorbeeld kan men als base gebruikmaken van methanolische 50 kaliloog en vervolgens opnieuw aanzuren met zoutzuur.

Wanneer de omzetting volgens de eerder beschreven werkwijze van de verbindingen met de formule 1' in verbindingen met de formule 1a uitgevoerd wordt met behulp van een zuur, zoals trifiuorazijnzuur, kunnen de verbindingen met formule 1a geïsoleerd worden in de vorm van zuuradditiezouten met de aminogroep van de aminothiazoolring. Indien gewenst verkrijgt men de overeenkomstige vrije basen met de formule 1a 55 door inwerking van ongeveer 1 equivalent van een base, zoals pyridine.

De in het voorafgaande als uitgangsverbindingen genoemde verbindingen met de de formules 4 en 10 zijn beschreven in de op 26 juli 1977 ter inzage gelegde Nederlandse octrooiaanvrage 7700706. De 192041 6 verbindingen met de formule 5 kunnen verkregen worden door halogenering van verbindingen met de formule 17, waarin R, een groep is met de formule -C02 R6, waarin R6 een alylgroep of een waterstofatoom voorstelt, of een cyaangroep voorstelt, volgens gebruikelijke methoden. De verbindingen met de formule 5, waarin R3 een groep met de formule -CONH2 voorstelt, kunnen verkregen worden door de overeenkomstige 5 zuren om te zetten in amiden.

De uitvinding zal nader toegelicht worden door de hierna volgende, niet beperkende voorbeelden. Vootbeeld l: 7-[2-(2*aminothiazool-4-yl)-2-ethoxycarbonyl-methyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-car-10 bonzuur, syn-isomeer

Trap A ethyl 2-(2-aminothialzool-4-yl)-2-(hydroxyimino)acetaat, syn-isomeer

Men lost 0,8 g thioureum op in 2,4 cm3 ethanol en 4,8 cm3 water. Men voegt in 5 min. een oplossing van 2 g ethyl 4-chloor-2-hydroxyimino-acetylacetaat toe, en roert 1 uur bij kamertemperatuur. Men dampt het 15 grootste gedeelte van de ethanol af onder verminderde druk en neutraliseert tot pH 6 door toevoeging van vast natriumwaterstofcarbonaat. Men koelt, zuigt af, wast met water en droogt onder verminderde druk bij 40eC. Men verkrijgt 1,32 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 232°C.

Elementair-analyse voor C5HB03N3S:

Berekend: C% 39,06 H% 4,21 N% 19,52 S% 14,9 20 Gevonden: 38,9 4,4 19,7 14,6.

Trap B ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2*(hydroxyimino)acetaat, syn-isomeer

Men brengt 43,2 g ethyl 2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino)-acetaat, syn-isomeer, bereid in trap A, in 120 cm3 droge dimethyl-formamide.

25 Men koelt tot -35°C, voegt 32 cm3 triëthylamine toe en vervolgens in gedeelten in 30 min. 60 g tritylchloride. Men laat de temperatuur stijgen, neemt een totale oplossing en vervolgens een stijging van de temperatuur tot 30°C waar. Na 1 uur giet men uit in 1,2 liter ijswater met 40 cm3 zoutzuur van 22°Be.

Men roert in een ijsbad, zuigt af, wast met 1N zoutzuur en wrijft fijn met ether. Men verkrijgt 69,3 g van een waterstofchloridezout.

30 Men verkrijgt de gewenste vrije base door het waterstofchloridezout op te lossen in 5 vol .delen methanol, waar van 120% triëthylamine is toegevoegd en het produkt vervolgens voorzichtig neer te slaan met behulp van 5 vol. delen water.

Elementair-analyse voor C^HajOgNgS.IM H20:

Berekend: C% 67,6 H% 5,1 N% 9,1 S% 6.9 35 Gevonden: 67,5 5,1 8,8 6,8.

Trap C 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino)-azijnzuur, syn-isomeer

Men brengt 11,5 g van het in trap B verkregen produkt in 30 cm3 dioxan en 25 cm3 2N natriumhydroxyde. Men roert 1 uur in een waterbad bij 50°C. Men koelt 10 min., zuigt af, wast met 50%'s waterige dioxan, met 40 een mengsel van dioxan en ether (1:1) en met ether. Na drogen verkrijgt men 11,05 g van een natriumzout. Men verkrijgt het gewenste overeenkomstige zuur door het natriumzout op te nemen in waterige methanol in aanwezigheid van zoutzuur.

Trap D 2-(-2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycarbonyl-methyloxyimino)azijnzuur, syn-isomeer 45 Men brengt 10,5 cm3 van een molaire oplossing van kaliumtert.butanolaat in tetrahydrofuran onder argon en voegt in 10 min. bij 20°C een suspensie van 2,15 g 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino)azijnzuur, syn-isomeer, in 35 cm3 droge tetrahydrofuran en 2,5 cm3 van een 4M oplossing van water in tetrahydrofuran toe. De temperatuur stijgt tot 27°C. Men roert 1 uur en voegt druppelsgewijs 15 cm3 van een oplossing toe, die verkregen is door aan 1,1 cm3 ethylbroomacetaat een voldoende hoeveelheid tetrahydrofuran toe te 50 voegen om het totale volume op 10 cm3 te brengen.

Men roert 1 uur en voegt opnieuw 1 cm3 van een molaire oplossing van kaliumtert.butanolaat in tetrahydrofuran toe, roert nog een uur, zuigt de lichte onoplosbare stof af, wast met tetrahydrofuran, dampt het oplosmiddel af, neemt op in 50 cm3 ethylacetaat, 15 cm3 IN zoutzuur en 15 cm3 water, roert, decanteert, wast met water, extraheert opnieuw met ethylacetaat, droogt, dampt in tot droog en voegt 20 cm3 ethyl-55 acetaat toe, waarbij het produkt uitkristalliseert. Men koelt, zuigt de kristallen af, wast met een minimale hoeveelheid ethylacetaat en wrijft fijn met ether, droogt en verkrijgt 1,3 g zuiver produkt.

Men concentreert het filtraat, neemt op in ethylacetaat, maakt fijn, koelt, zuigt de kristallen af, wast met 7 192041 ethylacetaat, wrijft fijn met ether en verkrijgt een tweede hoeveelheid van 185 mg zuiver produkt, dat wil zeggen in totaal 1,485 g produkt.

Men verkrijgt een analytisch monster door 3,14 g op deze wijze veikregen produkt in 30 cm3 ethylacetaat nabij het kookpunt te verhitten. Er vindt een gedeeltelijke oplossing plaats. Men koelt in ijswater, zuigt de 5 kristallen af, wast, wrijft fijn met ether en droogt en verkrijgt 2,77 g gezuiverd produkt Elementair-analyse voor C2eH250gN3S:

Berekend: C% 65,23 H% 4,89 N% 8,15 S% 6,22

Gevonden 65,1 4,9 8,0 6,1.

10 NMR (CDCI3, 90 MH): 6,76 ppm (proton van de thiazoolring), 7,28 ppm (tritylgroep).

Trap E 7-[2-(2-trtylaminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycarbonyl-methyloxyimino)aceetamino]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men mengt onder argon 1,55 g volgens trap D verkregen produkt en 22 cm3 methyleenchloride, koelt in ijs 15 en voegt een oplossing van 345 mg dicyciohexylcarbodiimide in 1,5 cm3 methyleenchloride toe. Men roert 1 uur onder koelen in ijswater, zuigt het gevormde dicyclohexylureum af, wast het met methyleenchloride en droogt, waarbij men 270 mg verkrijgt.

Men koelt het filtraat in een methanol-ijsbad en voegt in een keer een oplossing van 410 mg 7-aminocefalosporanzuur in 7,5 cm3 droge methyleenchloride en 0,42 cm3 triëthylamine toe. Men laat het 20 geheel gedurende 3 uur over een spontane verwarming, voegt 7,5 cm3 water en 3,75 cm3 1N zoutzuur toe, roert, zuigt de onopgeloste stof af, decanteert het filtraat, extraheert met methyleenchloride, wast met water, droogt en concentreert het fikraat. Men neemt het residu op in 7,5 cm3 ethylacetaat, roert 1 uur in ijswater, zuigt de kristallen af, wast en verkrijgt 600 mg van het gewenste produkt.

Men dampt de oplosmiddelen uit het fikraat af en verkrijgt 1,34 g residu. Men lost dit residu op in 6 cm3 25 ethylacetaat, voegt 0,15 cm3 zuiver diethylamine toe, verdunt geleidelijk onder roeren met 35 cm3 ether en verkrijgt een onoplosbare gom, die overgaat in kristallen. Men zuigt af, wast met een oplossing van 15% ethylacetaat in ether, wrijft fijn met ether en droogt. Men verkrijgt 983 mg gezuiverd diëthylamine-zout. Men lost dit zout op in 10 cm3 methyleenchloride, voegt 1,3 cm3 1N zoutzuur toe, roert, decanteert, wast met water, extraheert de waterige fase met methyleenchloride, droogt, dampt de oplosmiddelen af, neemt op in 30 ether, zuigt de onoplosbare stof af en verkrijgt nog 818 mg van het gewenste produkt.

Trap F 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycarbonyl-methoxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men suspendeert 0,818 g van het in trap E verkregen produkt in 4 cm3 50%'s waterig mierezuur. Men 35 verwarmt de suspensie in een waterbad 20 min. op 60°C, waarbij trifenylcarbinol uitkristalliseert. Men koelt, verdunt met 4 cm3 water, roert 15 min., zuigt trifenylcarbinol af, wast met water, droogt en verkrijgt 350 mg. Men concentreert het filtraat onder verminderde druk tot droog, neemt het residu op in ethanol en dampt het oplosmiddel vervolgens af, neemt ten slotte op in water, koelt 15 min., zuigt de onopgeloste stoffen af, wast met water, droogt en verkrijgt 229 mg van het gewenste produkt.

40 Elementair-analyse voor C19H2109NsS2:

Berekend: C% 43,26 H% 4,01

Gevonden: 43,3 4,3.

NMR (DMSO, 60 MHz): 45 =N-0-CH2-C02-CH2 -CH3: (a) triplet met centrum bij 1,2 ppm, J = 7Hz, (c) (b) (a) (b) quadruplet met centrum bij 4,15 ppm, J = 7 Hz, (c) singulet bij 4,66 ppm. proton van de thiazoolring: singulet bij 6,8 ppm.

50 Voorbeeld II: 7-[2-(2-aminothiazool-4*yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamidoi-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Trap A 2-(tert-butoxycarbonylmethyloxyimino)-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur, syn-isomeer 55 a) Men mengt onder argon 8,59 g 2-hydroxyimino-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur in 10 cm3 dioxan, dat 4 mol water per liter bevat, en 80 cm3 dioxan en roert 15 min.

b) Men bereidt afzonderlijk een oplossing van 5,134 g kalium-tert.butanolaat in 40 cm3 dioxan, roert 10 min.

192041 8 bij kamertemperatuur onder argon, en verkrijgt een homogene suspensie. Men voegt vervolgens bij 23-25°C in 15 min. de in trap (a) bereide suspensie toe onder licht koelen en spoelen met 25 cm3 dioxan.

Men roert 1 uur bij 23-25°C. Men voegt vervolgens in 15 min. bij 28-29°C een oplossing van 4,919 g tert.butyl broomacetaat in 15 cm3 dioxan toe. Men roert 1 uur bij 26-28°C, voegt vervolgens met een 5 tussenpoos van 10 min. eerst 0,471 g kalium-tert.butanolaat en vervolgens een oplossing van 0,772 g tert.butylbroomacetaat in 2 cm3 dioxan toe. Men roert 45 min. bij 25°C onder argon', brengt de pH op 6 door toevoeging van 0,5 cm3 azijnzuur, dampt in tot droog en verkrijgt 19,4 g van een hars.

Men neemt de hars op in 100 cm3 methyleenchloride en 100 cm3 water, en zuurt aan tot een pH van 2-3 door toevoeging van 25 cm3 1N zoutzuur. Men decanteert, wast met gedestilleerd water, filtreert, extraheert 10 met methyleenchloride, droogt, wast met methyleenchloride en dampt onder verminderde druk in tot droog. Men verkrijgt 12,3 g produkt. Men neemt op in 31 cm3 ethylacetaat, brengt de kristallisatie op gang en roert 1 uur bij kamertemperatuur en vervolgens 2 uur bij 0-5°C. Men zuigt af en wast bij deze temperatuur met ethylacetaat. Men droogt onder verminderde druk en verkrijgt 5,04 g van het gewenste produkt.

Men zuivert het produkt op de volgende wijze: 15 Men lost 3,273 g op in 60 cm3 met water verzadigde, onder terugvloeikoeling kokende methylethylketon. Men voegt 0,33 g actieve kool in de warmte toe, zuigt af en wast met tweemaal 3 cm3 met water verzadigde kokende methylethylketon. Men concentreert het Altraat onder verminderde druk, waarbij men 36 cm3 oplosmiddel wint. Het produkt kristalliseert uit. Men koelt 1 uur bij 0-5°C onder roeren, zuigt af en wast met water verzadigde methylethylketon. Men droogt onder verminderde druk en verkrijgt 2,68 g zuiver produkt 20 met een smeltpunt van 190°C.

Elementair-analyse voor C30H29O5N3S:

Berekend: C% 66,28 H% 5,38 N% 7,73 S% 5,9

Gevonden: 66,5 5,7 7,7 5,6.

25 NMR (CDI3, 60 MHz); 1,46 ppm (protonen van tert.butyl), 6,8 ppm (proton van de thiazoolring).

Trap B tert.butylester van 7*[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2*(tert.butoxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]- 3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men mengt 2,174 g van het in trap A bereide 2-(tert.-butoxycarbonylmethyloxyimino)-2-(2-tritylaminothiazool-30 4-yl)azijnzuur, syn-isomeer, 1,313 g tert.butylester van 7-aminocefalosporanzuur en 35 cm3 methyleenchloride. Men roert 5 min. bij 20°C en voegt in 5 min. bij 20-22°C 8,8 cm3 van een oplossing van dicyclohexyl-carbodiïmide in methyleenchloride met een concentratie van 2,06 g per cm3 toe. Men roert 2 uur onder argon. Het dicyclohexylureum slaat neer. Men voegt 4 druppels azijnzuur toe en roert 5 min. Men zuigt het dicyclohexylureum af, wast met methyleenchloride en verkrijgt 523 mg. Men dampt de oplossing onder 35 verminderde druk in, neemt op in ether, zuigt opnieuw het dicyclohexylureum af, waarbij men 204 mg verkrijgt, voegt aan het Altraat 30 cm3 ether toe, wast met een verdunde zoutzuuroplossing en vervolgens met water. Men wast de organische oplossing vervolgens met een waterige oplossing van natriumwaterstof-carbonaat. In de vorm van een onoplosbare stof wint men 0,438 g van het natriumzout van 2-(tert.butoxycarbonylmethyloxyimino)-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur. Men wast met water tot 40 neutraal, extraheert het waswater met ether, droogt de organische fase, behandelt met aktieve kool, zuigt af, wast met ether en dampt onder verminderde druk in tot droog, waarbij men 3,16 g produkt verkrijgt.

Men onderwerpt dit produkt aan chromatografie op silidumdioxyde onder toepassing van een 1:1 mengsel van ether en benzeen als eluAemiddel en verkrijgt een eerste fracAe, die overwegend bestaat uit een produkt met een Rf-waarde van 0,5 (1,15 g) en een tweede homogene fractie, die volledig bestaat uit 45 hetzelfde produkt met een Rf-waarde van 0,5 (0,937 g van het gewenste produkt).

Trap C 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonyl-methyloxyimino)aoeetamido]-3-acetoxymethyl-3-oefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men mengt onder argon bij 20-22°C 11,5 cm3 trifluorazijnzuur en 1,15 g tert.butylester van 7-(2-(2-50 tritylaminothiazool-4-yl)-2-(tert.butoxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur.

Men roert 10 min bij 20-22°C. Men dampt onder verminderde diuk in tot een volume van 3 cm3. Men neemt op in 35 cm3 isopropylether onder koelen met behulp van een ijsbad, waarbij een produkt neerslaat. Men roert 10 min. bij kamertemperatuur, zuigt af en wast met isopropylether. Men droogt het afgescheiden 55 trifluoracetaat onder verminderde druk en verkrijgt 0,557 g produkt.

Men brengt 0,526 g van het verkregen trifluoracetaat in 2,5 cm3 ethanol, roert bij kamertemperatuur tot oplossing heeft plaatsgevonden (pH = 1-2) en voegt vervolgens 0,47 cm3 van een 2M oplossing van 9 192041 pyridine in ethanol toe.

Men neemt een neerslagvorming waar, en roert 5 min. bij 20-25°C onder argon. Men zuigt af bij kamertemperatuur. Men wast met een mengsel van ether en ethanol en vervolgens met ether. Men droogt en verkrijgt 0,261 g geel produkt.

5 Men concentreert de moederlogen en neemt op in ether. Men verkrijgt een tweede hoeveelheid van 0,084 g produkt. Men verzamelt de twee fracties en wrijft ze fijn met etherethanolmengsels en vervolgens met ether. Men droogt en verkrijgt 0,316 g van het gewenste produkt. NMR (DMSO, 60 MHz): 4,16 ppm (-0-CH2-C02H) en 6,84 ppm (proton van de thiazoolring).

10 Voorbeeld III:

Dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycart>onylmethyloxyimino)-aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men lost onder roeren 0,224 g van het in voorbeeld II, trap C, bereide zuur op in 1 cm3 van een molaire oplossing van natriumacetaat in methanol en 2 cm3 methanol. Men zuigt af en wast met methanol. Men 15 dampt onder verminderde druk in tot een volume van ongeveer 1 cm3 en voegt 5 cm3 ethanol toe. Het gewenste natriumzout slaat neer. Men roert 10 min. bij kamertemperatuur, zuigt af en wast met ethanol en met ether. Men droogt en veikrijgt 200 mg produkt.

Elementair-analyse voor C17H15OeNsS2Na:

Na: % berekend: 8,46 20 gevonden: 8,54.

R = 0,3 (aceton met 10% water).

Voorbeeld IV: 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(cyaanmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur 25 trifluoracetaat, syn-isomeer

Trap A cyaanmethyl 2-[cyaanmethyloxyimino]-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)acetaat, syn-isomeer Men mengt onder een inerte atmosfeer 12,9 g 2-[hydroxyimino]-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur, syn-isomeer, 9,12 g kaliumcarbonaat, 60 cm3 droge dimethylformamide en 7,6 cm3 chlooracetonitril. Men 30 roert. Na stolling laat men 65 uur in gesloten atmosfeer staan. Men giet uit in een mengsel van 750 cm3 water, 130 cm3 1N zoutzuur, 150 cm3 ethylacetaat, roert, zuigt de onopgeloste stoffen af, wast met ethylacetaat en met water en decanteert. Men wast men 100 cm3 water, extraheert met driemaal 100 cm3 ethylacetaat, droogt de organische fase, zuigt af, wast, concentreert tot droog en verkrijgt een residu, dat men onderwerpt aan chromatografie op een siliciumdioxydekolom onder toepassing van ether als elutiemid-35 del. Men dampt de ether af en verkrijgt 8,69 g van het gewenste produkt in de vorm van een olie.

NMR (CDCI3, 60 MH): proton van thiazool: 6,8 ppm, protonen van trityl: 7,37 ppm.

40 Trap B 2-[cyaanmethyloxyimino]-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur, syn-isomeer

Men brengt 8,69 g van het in trap A verkregen produkt in 52 cm3 dioxan. Men koelt in een ijsbad en voegt in 20 min. druppelsgewijs 17,1 cm3 1N natriumhydroxyde toe. Men laat de temperatuur spontaan stijgen en voegt 10,5 cm3 2N zoutzuur toe, dampt de dioxan en vrijwel de totale hoeveelheid water af. Men voegt 20 cm3 water en 30 cm3 ether toe, roert 15 min., zuigt de kristallen af, wast met water en met ether, droogt en 45 verkrijgt 4,32 g van het gewenste produkt. Het smeltpunt bedraagt ongeveer 180°C onder ontleding. NMR (CDCI3, 60 MHz): 4.7 ppm: OCHaCN, 6.7 ppm: proton van thiazool, 7,34 ppm: protonen van trityl.

50

Trap C tert.butylester van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(cyaanmethyloxyimino) aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men mengt onder inerte atmosfeer 1,875 g 2-[cyaanmethyloxyimino]-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur, syn-isomeer, bereid in trap B en 1,312 g tert.butylester van 7-aminocefalosporanzuur in 12 cm3 droge 55 methyleenchloride.

Men roert en voegt een oplossing van 960 mg dicyclohexylcarbodiimide in 12 cm3 droge methyleenchloride toe. Men roert, laat 1 uur en 45 min. bij kamertemperatuur staan, zuigt het gevormde dicyclohexylureum 192041 10 af, en verkrijgt 475 mg.

Men concentreert het filtraat tot droog en verkrijgt een residu dat men onderwerpt aan chromatografie op siliciumdioxyde onder toepassing van methyleenchloride en vervolgens van ether als efutiemiddel.

Men wint de rijke fracties, dampt de ether af en neemt opnieuw op in ether. Men brengt de kristallisatie 5 op gang en het produkt kristalliseert langzaam uit in een ijskast. Men zuigt af, wast met ether bij 0°C onder fijnwrijven en droogt. Men verkrijgt 776 mg van het gewenste produkt met een smeltpunt van 180°C onder ontleding.

NMR (60 MHz, CDCI3): 4,9 ppm: O-CH-CN, 10 6,8 ppm: proton van de thiazoolring, 7,31 ppm: protonen van de tritylgroep.

Trap D 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(cyaanmethyloxyimino)-aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer 15 Men brengt 779 mg van het in trap C verkregen produkt in 4 cm3 trifluorazijnzuur. Men roert tot een oplossing verkregen is, laat 17 min. staan en giet uit in 40 cm3 isopropylether. Men roert, zuigt af, droogt en verkrijgt 523 mg van het gewenste produkt.

Voorbeeld V: 20 Natriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(cyaanmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem- 4-carbonzuur, syn-isomeer

Men lost de in voorbeeld'IV, trap D, verkregen 523 mg trifluoracetaat op in 2 cm31N natriumacetaat-oplossing in methanol.

Men verdunt met 6,6 cm3 ethanol, roert 10 min., zuigt de onoplosbare stof af, wast met ethanol, droogt 25 en verkrijgt 226 mg van het gewenste natriumzout met een smeltpunt van ongeveer 200°C onder ontleding. NMR (CDCIg, 60 MHz):

4,98 ppm: 0-CH2*CN

6,86 ppm: proton van de thiazoolring.

30 Elementair-analyse voor C17H1507N6S2Na:

Berekend: C% 40,64 H% 3,01 Na% 4,57

Gevonden: 40,2 3,3 4,5.

Voorbeeld VI: 35 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(aminocart>onylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-cart>on zuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Trap A ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-[ethoxycarbonylmethyloxyimino]acetaat, syn-isomeer Men brengt onder argon 9,88 g van het waterstofchloridezout van ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-40 [hydroxyiminojacetaat in 25 cm3 droge dimethylformamide en voegt 8,28 g zuiver kaliumcarbonaat toe. Men roert 15 min. en koelt vervolgens 10 min. in een methanol-ijsbad, waarna men druppelsgewijs in 5 min. 11,2 cm3 ethyl broomacetaat toevoegt en de temperatuur spontaan laat stijgen onder roeren en onder inerte atmosfeer. Men giet vervolgens uit in een mengsel van 400 cm3 water en 80 cm3 ethylacetaat, roert, decanteert, wast met tweemaal 80 cm3 water, extraheert met 80 cm3 en 50 cm3 ethylacetaat. Men droogt 45 de organische fase, zuigt af, wast en concentreert tot droog.

Men neemt op in ether, roert en laat het produkt uitkristalliseren. Men zuigt af, wast met ether, droogt en verkrijgt 7,54 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 154°C.

NMR (CDCIg, 60 MHz): 4,75 ppm: 0-CH2-CO, 50 6,55 ppm: proton van de thiazoolring.

Elementair-analyse voor C^H^OgNsS:

Berekend: C% 66,28 H% 5,38 N% 7,73 S% 5,90

Gevonden: 66,1 5,4 7,5 5,9.

Trap B ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-[carboxymethyloxyimino]acetaat, syn-isomeer

Men mengt onder inerte atmosfeer en in een ijswaterbad 4,077 g van het in trap A verkregen produkt jn 55 11 192041 11,3 cm3 dioxan. Na afkoelen voegt men in 20 min 8,25 cm3 van een 1N natriumhydroxyde-oplossing toe. Men laat het reactiemengsei 1 uur in de koude staan, dampt de dioxan bij 25°C af, en voegt vervolgens 9,75 cm3 van en 1N zoutzuuroplossing toe. Men voegt 40 cm3 ethylacetaat toe, roert, wast en extraheert met ethylacetaat. Men droogt de organische fase boven magnesiumsutfaat, zuigt af, dampt de oplosmidde-5 len af, neemt op in ether, brengt de kristallisatie op gang, roert een half uur de gevormde kristallen, zuigt af, wast met ether, droogt en verkrijgt 3,462 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 200°C.

Het zuivere produkt voor analyse wordt als volgt verkregen:

Men lost 400 mg van het verkregen produkt op in 1 cm3 dioxan, verdunt met 10 cm3 isopropylether, roert, laat uitkristalliseren in een ijswaterbad, zuigt af, wast met een oplossing van isopropylether met 10% 10 dioxan, wrijft fijn met isopropylether en verkrijgt 320 mg gezuiverd produkt.

NRM (60 MHz, CDCIg): 4.71 ppm: 0-CH2-CO, 6.46 ppm: proton van de thiazoolring.

15 Trap C ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-y!)-2-[aminocarbonylmethyloxyimino]acetaat, syn-isomeer

Men brengt onder inerte atmosfeer en in een bad van methanol en vast koolzuur een mengsel van 3,609 g van het in trap B verkregen produkt in 28 cm3 droge tetrahydrofuran, 21 cm3 droge methyleenchloride en 0,77 cm3 zuiver N-methylmorfoline.

Men neemt een oplossing waar, koelt het mengsel in een bad tot -20°C en voegt druppelsgewijs 0,91 20 cm3 isobutylchloorformiaat toe.

Men roert 3 min bij deze temperatuur, koelt vervolgens tot -35°C en voegt een overmaat ammoniakgas toe. Men roert 15 miri bij -30eC en vervolgens 1 uur bij kamertemperatuur.

Men dampt in tot droog, neemt op in ethanol, roert 20 min, zuigt de gevormde kristallen af, wast met ethanol en droogt.

25 Men verkrijgt 3,33 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 180°C.

NMR (CDCIg, 60 MHz): 4.71 ppm: 0-CH2-CO, 6.46 ppm: proton van de thiazoolring.

30 Trap D 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-[aminocarbonylmethyloxymino]azijnzuur, syn-isomeer

Men brengt 3,5 g van het in trap C bereide produkt in 24 cm3 dioxan en 6,8 cm3 2N natriumhydroxyde. Men roert bij kamertemperatuur en neemt de oplossing van het uitgangsmateriaal en vervolgens, na een contacttijd van 45 min, de kristallisatie van het natriumzout van 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(aminocarbonylmethyloxyimino)azijnzuur, syn-isomeer waar. Men roert 3 uur en 15 min in een afgesloten 35 atmosfeer. Men zuigt het natriumzout af, wast met een mengsel van dioxan en water (70-30) en vervolgens met ether, droogt en verkrijgt 1,81 g natriumzout. Men lost dit zout op in 5,3 cm3 dimethylsulfoxyde, voegt 5 cm3 van een 1N zoutzuuroplossing toe, en neemt een neerslagvorming gevolgd door een kristallisatie waar. Men verdunt met 70 cm3 water, roert 20 min, zuigt af, wast met water, droogt en verkrijgt 1,3 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 200°C.

40 NMR (CDCIa, 60 MHz): 4,58 ppm: -0-CH2-CO, 6,66 ppm: proton van de thiazoolring.

Trap E tert.butylester van 3-acetoxymethyl-7-[2-(aminocarbonylmethyloxyimino)-2-(2-tritylaminothiazool-4-45 yl)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men brengt onder inerte atmosfeer 488 mg van het in trap D verkregen produkt en 328 mg tert.butylester van 7-aminocefalosporanzuur in 3 cm3 droge methyleenchloride. Men voegt dan bij kamertemperatuur een oplossing van 240 cm3 dicyclohexylcarbodiimide in 3 cm3 droge methyleenchloride toe. Na oplossen neemt men de vorming van kristallen waar, roert 2 uur, zuigt het gevormde dicyclohexylureum af, wast het met 50 methyleenchloride, droogt en verkrijgt 130 mg. Men dampt de moederloog in tot droog en voert een chromatografie op een siliciumdioxydekolom uit onder toepassing van een mengsel van ethylacetaat, ethanol en water (70-20-10) als elutiémiddel en wint de fracties met het gewenste produkt. Men dampt de oplosmiddelen af, neemt op in 1 cm3 ethanol en verdunt vervolgens met 8 cm3 isopropylether, waarbij het produkt neerslaat. Men zuigt af, wast met een oplossing van isopropylether en ethanol (89-11), wrijft fijn 55 met isopropylether, droogt en verkrijgt 324 mg van het gewenste produkt.

NMR (CDCI3, 60 MHz): 6,68 ppm: proton van thiazool.

192041 12

Trap F 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(aminocarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Men lost 357 mg van het in trap E verkregen produkt op in 1,1 cm3 trifluorazijnzuur. Men laat 25 min rusten in gesloten atmosfeer en slaat neer door toevoeging van 11 cm3 isopropylether, zuigt af, wast met 5 isopropylether, droogt en verkrijgt 275 mg van het gewenste trifluoracetaat.

Voorbeeld Vil:

Natriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(aminocarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl- 3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

10 Men lost 275 mg van het in voorbeeld VI, trap F, verkregen trifluoracetaat op in 1,2 cm3 van een 1N

natriumacetaatoplossing in methanol. Men verdunt met 4 cm3 ethanol. Het produkt slaat neer. Men zuigt af, wast met ethanol, droogt en verkrijgt tenslotte 153 mg van het gewenste natriumzout met een smeltpunt van ongeveer 200°C onder ontleding.

NMR (DMSO, 90 MHz): 15 4,4 ppm: = N-0-CH2-C0, 6,8 ppm: proton van de thiazoolring.

Voorbeeld VIII: 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1-carboxy-1-methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4 20 -carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Trap A ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-[(1 -tert.butoxycarbonyl-1 -methylethyl)oxyimino]acetaat, syn-isomeer

Men brengt 9,88 g van het waterstofchloridezout van ethyl 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-25 [hydroxyiminojacetaat en 8,28 g kali urn carbonaat in 25 cm3 droge dimethylformamide. Men koelt 10 min in een bad tot -10°C en voegt in 3 min 19 cm3 ruw tert.butyl 2-broom-2-methylpropionaat toe. Men laat de temperatuur stijgen en roert 16 uur. Men neemt een stolling waar. Men giet uit in een mengsel van 400 cm3 gedestilleerd water en 200 cm3 ethylacetaat. Men roert, decanteert en wast met water, extraheert met tweemaal 100 cm3 ethylacetaat, droogt, zuigt af, concentreert, verkrijgt een olie, waaraan men 240 cm3 30 petroleumether toevoegt, koelt, brengt de kristallisatie op gang, zuigt af na afloop van een half uur en verkrijgt 10,9 g van het gewenste produkt met een smeltpunt van 134°C.

NMR (60 MHz, CDCI3): 6,71 ppm: proton van thiazool, 7,28 ppm: protonen van trityl.

35 Elementair-analyse voor C34H37O5N3S:

Berekend: C% 68,09 H% 6,22 N% 7,01 S% 5,35

Gevonden: 68,3 6,3 6,9 5,3.

Trap B 2-(2-tritylamino-thiazool-4-yl)-2-[(1 -tert.butoxycarbonyl-1 -methylethyl)oxyimino]azijnzuur, syn-isomeer 40 Men mengt 1,2 g van het in trap A verkregen produkt in 2 cm3 van en 1N kaliumhydroxyde-oplossing in methanol en 4 cm3 methanol. Men kookt 2 uur onder terugvloeikoeling, koelt en neemt de kristallisatie van de uitgangsverbinding waar, waarvan men 390 mg terugwint. Men heeft derhalve 810 mg uitgangs-verbinding verzeept. Men concentreert het filtraat tot droog, voegt 1 cm3 dimethylformamide en 2 cm3 van een 1N zoutzuuroplossing toe. Men roert, voegt 10 cm3 water en methyleenchloride toe, roert, decanteert, 45 wast met water, extraheert opnieuw met methyleenchloride, droogt de organische fase, zuigt af en concentreert het filtraat tot een olie wordt verkregen. Men voegt 4 cm3 chloroform toe en verdunt met 30 cm3 ether. Men brengt de kristallisatie op gang, zuigt de kristallen na een half uur roeren af, wast met ether, droogt en verkrijgt 472 mg van het gewenste produkt met een smeltpunt van 190°C.

NMR (DMSO, 60 MH): 50 6,76 ppm: proton van thiazool, 7,33 ppm: protonen van trityl.

Trap C tert.butylester van 7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1 -tert.butoxycarbonyl-1 -methylethyl) oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 55 Men mengt 1,715 g van het in trap B bereide produkt en 984 mg tert.butylester van 7-aminocefatosporan-zuur in 2è cm3 methyleenchloride. Men verhit ter oplossing, koelt tot kamertemperatuur en voegt 678 mg dicyclohexylcarbodiimide in 6,6 cm3 droge methyleenchloride toe. Men roert 2 uur bij kamertemperatuur.

13 192041

Men neemt de kristallisatie van het dicyclohexylureum waar, zuigt af en verkrijgt 268 mg. Men concentreert het filtraat tot droog, neemt op in ether, voegt een beetje azijnzuur toe (tot pH4). Men roert 20 min, zuigt de onopgeloste stof af, wast met ether en verkrijgt 79 mg dicyclohexylureum (in totaal 347 mg).

Men concentreert de etherfase tot droog, en onderwerpt het residu aan chromatografie op een siliciumdi-5 oxydekolom onder toepassing van ether als elutiemiddel. Men verkrijgt eerst een mengsel en vervolgens 463 mg van het zuivere gewenste produkt. Rf = 0,7 (elutiemiddel-ether).

Trap D 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1 -carboxy-1 -methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer 10 Men brengt 432 g van het in trap C verkregen produkt in 4,3 cm3 zuiver trifluorazijnzuur en laat 15 min staan nadat oplossing heeft plaatsgevonden. Men verdunt onder roeren met 43 m3 isopropylether, zuigt de onopgeloste stof af, dampt het oplosmiddel af, verdunt opnieuw met 50 cm3 isopropylether, zuigt de gevormde onoplosbare stof af, wast met isopropylether en verkrijgt tenslotte 173 mg van het gewenste trifluoracetaat. Rf = 0,5 (elutiemiddel: aceton met 10% water).

15

Voorbeeld IX:

Dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1 -carboxy-1 -methylethyl)oxyimino>-aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men mengt de in voorbeeld VIII, trap D, verkregen 173 mg trifluoracetaat en 0,95 cm3 van een 1M 20 natriumacetaatoplossing in methanol. Na licht verwarmen filtreert men de sporen onopgeloste stof af, wast, concentreert tot een klein volume en verdunt met 2,5 cm3 ethanol. Men neemt de neerslag van het gewenste produkt waar, roert, zuigt af, wast met ethanol en vervolgens met ether, droogt en verkrijgt 77 mg van het gewenste produkt.

NMR (DMSO, 60 MHz): 6,75 ppm: proton van thiazool.

25 Elementair-analyse voor C19H1909N5S2Na2:

Berekend: C% 39,93 H% 3,35

Gevonden: 39,5 3,6.

Voorbeeld X: 30 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-car-bonzuur trifluoracetaat. syn-isomeer

Trap A 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1-methyl-1-methoxyethyl)oxyimino>azijnzuur, syn-isomeer Men roert 20 min. bij kamertemperatuur 12,9 g 2-(hydroxyimino)-2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)azijnzuur, 35 syn-isomeer, in 120 cm3 methyleenchloride en 12 cm3 2-methoxypropeen. Men dampt in tot droog en roert opnieuw 30 min in 60 cm3 methyleenchloride en 12 cm3 2-methoxypropeen. Men dampt in tot droog onder verminderde druk.

Men verkrijgt het gewenste produkt dat men als zodanig toepast in de hierna volgende trap B.

40 Trap B diëthylaminezout van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1-methyl-1-methoxyethyl)oxyimino>aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men lost het volgens de in trap A beschreven methode uitgaande van 47,25 g 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)- 2-(hydroxyimino)azijnzuur verkregen 2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1 -methyl-1-methoxyethyl)oxyimi-no>azijnzuur, syn-isomeer, op in 230 cm3 methyleenchloride. Men voegt 12,5 g dicyclohexylcarbodiïmide 45 toe en roert 1 uur bij kamertemperatuur. Men zuigt het gevormde dicyclohexylureum af, dat men met een beetje methyleenchloride wast, en men verkrijgt 9,82 g. Men voegt aan het filtraat een oplossing van 13,6 g 7-aminocefalosporanzuur in 70 cm3 methyleenchloride en 14 cm3 triethylamine toe. Men roert 2 uur bij kamertemperatuur. Men wast in een kolf met 350 cm3 1N zoutzuur, decanteert, wast met water, droogt en concentreert tot droog. Men lost het residu op in 100 cm3 ethylacetaat en brengt de kristallisatie op gang.

50 Men laat 3 min uitkristalliseren, zuigt af en verkrijgt 5,5 g van de uitgangsverbinding. Men dampt het filtraat in tot droog en roert het residu 30 min met 200 cm3 isopropylether. Na afzuigen en drogen verkrijgt men 37,35 g ruw condensaat. Ter zuivering gaat men als volgt te werk: men lost het produkt op in 148 cm3 ethylacetaat. Men voegt 5,5 cm3 diëthylamine toe en slaat onder krachtig roeren neer met 650 cm3 ether. Men zuigt af, wast met ether, droogt en verkrijgt 26,35 g van het gewenste produkt. Men concentreert het 55 filtraat vervolgens tot droog, neemt op in 50 cm3 ether en verkrijgt nög een tweede hoeveelheid van 2,8 g produkt, dat identiek is aan het eerste produkt. Het diëthylaminezout wordt vervolgens toegepast in trap C.

192041 14 NMR (CDC3, 60 MHz): 1,54 ppm: methylgroepen van 1 -methyl-1 -methoxyethyloxy, 3,27 ppm: methoxygroep van 1-methyl-1-methoxyethyloxy.

5 Trap C difenylmethylester van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1 -methyl-1 -methoxyethyloxyimino>aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men brengt 4,15 g van het in trap B verkregen diethylaminezout in 40 cm3 methyleenchloride en 55 cm3 0,1 N zoutzuur.

Men roert 10 min bij kamertemperatuur, decanteert en wast de organische fase met tweemaal 25 cm3 10 water. Men droogt deze fase, zuigt af, en wast met methyleenchloride.

Men voegt in 10 min onder roeren 15 cm3 van een 8%'s difenyldiazomethaanoplossing in benzeen toe. Men roert 15 min bij kamertemperatuur en dampt vervolgens de oplosmiddelen onder verminderde druk bij 30°C af. Men neemt op in isopropylether, wrijft fijn en dampt het oplosmiddel onder verminderde druk af. Na een nieuwe opname in isopropylether, zuigt men af en wast. Na drogen verkrijgt men 4,41 g van het 15 gewenste produkt.

NMR (CDCI3, 60 MHz): (zie formule 7) a= 1,53 ppm, b = 2,01 ppm, c = 3,26 ppm, 20 d = 6,78 ppm, e = 7,33 ppm.

Trap D difenylmethylester van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino) aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 25 Men brengt 2,775 g van het in trap C verkregen produkt in 14 cm3 aceton en 4,5 cm3 1N zoutzuur. Men roert 2 uur bij kamertemperatuur en dampt de aceton onder verminderde druk af.

Men voegt 20 cm3 ethylacetaat toe, roert en decanteert. Men wast de organische fase met viermaal 10 cm3 water, waaraan een kleine hoeveelheid zout is toegevoegd. Men extraheert het waswater met 5 cm3 ethylacetaat. Men verzamelt de organische fracties en droogt. Men zuigt af, wast met ethylacetaat en dampt 30 het oplosmiddel onder verminderde druk af. Men neemt het residu op in ether en laat uitkristalliseren. Men wrijft fijn, zuigt af en wast met ether. Na drogen verkrijgt men 1,88 g van het gewenste produkt.

NMR (CDCI3, 60 MHz): 6,88 ppm: proton van de thiazoolring, 7,33 ppm: protonen van de fenylgroepen.

35 Rf = 0,5 (elutiemiddel = ether met 20% aceton).

Trap E 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(tert.butoxycarbonylmethyloxvimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men brengt 0,85 g van het in trap D verkregen produkt in 4 cm3 dimethylformamide en 0,8 cm3 tert.butyl 40 broomacetaat. Na 5 min roeren in een ijsbad voegt men 1,7 g zilveroxyde toe.

Men roert 1 uur na het bad verwijderd te hebben. Men zuigt af en wast met ethylacetaat. Men voegt aan het filtraat 80 cm3 water toe, decanteert en extraheert de waterige fase met tweemaal 20 cm3 ethylacetaat. Men wast de organische fasen met tweemaal 50 cm3 zout water. Men droogt de organische fasen in aanwezigheid van 80 mg actieve kool. Men zuigt af en wast met ethylacetaat. Men dampt het oplosmiddel 45 onder verminderde druk af en neemt het residu op in isopropylether. Men maakt fijn, zuigt af en wast met isopropylether. Na drogen verkrijgt men 0,724 g van het gewenste produkt. Rf = 0,34 (methyleenchloride met 5% ether).

Trap F 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxy-methyl-3-50 cefem-4-carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Men koelt 5 cm3 trifluorazijnzuur met behulp van een methanol-ijsbad. Men voegt 0,482 g van het in trap E verkregen produkt toe en roert 15 min na het bad verwijderd te hebben. Na 5 min neemt men waar, dat oplossing plaatsvindt. Men dampt onder verminderde druk af en voegt 20 cm3 isopropylether toe. Men roert 5 min en wast met isopropylether. Na drogen verkrijgt men 0,277 g van het gewenste trifluoracetaat.

15 192041

Voorbeeld XI:

Dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer

Men lost het in voorbeeld X, trap F, verkregen zout op In 0,5 cm3 methanol en voegt langzaam 1,5 cm3 van 5 een molaire oplossing van natriumacetaat in methanol toe. Men maakt fijn en voegt langzaam 5 cm3 ethanol toe. Men zuigt af, wast tweemaal met ethanol en vervolgens met ether. Na drogen verkrijgt men 0,178 g van het gewenste dinatriumzout. Het produkt is identiek aan het in voorbeeld III verkregen produkt.

Voorbeeld XII: 10 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamidoJ-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-car-bonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Trap A diëthylaminezout van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino)aceetamido]- 3- cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 15 Men lost 7,6 g diëthylaminezout van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-<(1-methyl-1- methoxyethyl)oxyimino>aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer, bereid in trap B van voorbeeld X, op in 30 cm3 aceton en 10 cm3 2N zoutzuur. Men roert 40 min bij kamertemperatuur, voegt 20 cm3 water toe en dampt de aceton bij 30°C onder verminderde druk af. Men voegt 25 cm3 ethylacetaat toe, decanteert, extraheert opnieuw, wast met water, droogt en zuigt af. Men voegt aan het filtraat 1 cm3 diëthylamine toe, 20 wrijft fijn, koelt en zuigt het gevormde diëthylaminezout af, wast met ether en verkrijgt 6 g zuiver produkt. Elementair-analyse voor C-jaH^C^NgS^

Berekend: -C% 60,30 H% 5,33 N% 11,10 S% 8,47

Gevonden: 60,5 5,7 10,9 8,2.

NMR (CDCI3, 60 MHz): 25 6,63 ppm: proton van thiazool, 7,33 ppm: protonen van trityl.

Trap B diëthylaminezout van 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yI)-2-(tert.butoxycarbonyl-methyloxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 30 Men bereidt 10,25 g 3-acetoxymethyl-7-[2-(2-tritylaminothiazool-4-yl)-2-(hydroxyimino)aceetamido]-3-cefem- 4- carbonzuur uitgaande van volgens trap A bereid overeenkomstig diëthylaminezout door het zout te behandelen met een zoutzuuroplossing na oplossen in methyleenchloride en het droge residu op te nemen in isopropylether.

Men lost de aldus bereide 10,25 g zuur op in 225 cm3 methyleenchloride. Men voegt 150 cm3 triëthyla-35 mine toe en verkrijgt een emulsie. Vervolgens voegt men 13,2 cm3 tert.butyl broomacetaat toe. Men roert 3,5 uur bij 20-25°C, zuurt aan bij 15-20°C met 90 cm3 zoutzuur, roert en decanteert, wast met gedestilleerd water en extraheert het waswater met chloroform. Men droogt, zuigt af, wast met methyleenchloride, dampt in tot droog en verkrijgt 14,85 g van een bruin hars. Men neemt dit hars op in 30 cm3 ethylacetaat en voegt bij 20°C langzaam 1,65 cm3 diëthylamine toe. Men brengt de oplossing in 10 min onder roeren over in een 40 kolf, die 60 cm3 isopropylether bevat. Men roert 30 min bij 20-25°C, zuigt af en wast met tweemaal 5 cm3 van een mengsel van ethylacetaat en isopropylether (1:2) en vervolgens met isopropylether. Men droogt onder verminderde druk en verkrijgt 11,14 g van het gewenste produkt. Men neemt dit produkt op in 30 cm3 ethylacetaat. Aan deze oplossing voegt men 30 cm3 ethylacetaat met 10% isopropylether toe. Er vormt zich een neerslag. Men roert 5 min en zuigt af. Men concentreert tot droog tot een bruin residu is verkregen.

45 Men neemt op in 50 cm3 isopropylether, roert 1 uur bij kamertemperatuur, zuigt af en wast met isopropylether. Men verkrijgt 10,75 g van het gewenste produkt.

Elementair-analyse voor C44HSoOeN6S2:

Berekend: C% 60,67 H% 5,78 N% 9,65 S% 7,36

Gevonden: 61,1 5,8 9,6 7,1.

50 NMR (CDCI3, 90 MHz): 1,43 ppm: tertbutyl, 6,8 ppm: proton van de thiazoolring.

Trap C 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydioxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-55 4-carbonzuur trifluoracetaat, syn-isomeer

Aan 36 cm3 trifluorazijnzuur, voegt men in 1 min bij 20-25°C onder inerte atmosfeer 9 g van het in trap B verkregen diëthylaminezout toe. Men roert 15 min onder inerte atmosfeer. Men koelt met behulp van een 192041 16 ijswaterbad en voegt snel 360 cm3 isopropylether toe. Men roert 15 min, zuigt af en wast met isopropylether en veivolgens met ethylether. Men droogt en verkrijgt 5,08 g ruw produkt. Men onderwerpt verschillende hoeveelheden van in totaal 8,28 g ruw produkt aan een zuivering. Men maakt gedurende 15 min. fijn in 33 cm3 aceton met 1% water. Men verdunt met 330 cm3 ethylether, roert in 15 min, zuigt af en wast met 5 ethylether.

Men droogt en verkrijgt 7,03 g van het gewenste produkt dat identiek is aan het in voorbeeld X, trap F, verkregen produkt.

Voorbeeld XIII: 10 Men bereidt een injecteeibaar preparaat met de volgende samenstelling: 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycarbonylmethylozyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-car- bonzuur, syn-isomeer 500 mg waterig steriel excipiens, voldoende voor 5 cm3.

15 Voorbeeld XIV:

Men bereidt een injecteeibaar preparaat met de volgende samenstelling: dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3- acetoxymethyl-3-cefem*4-carbonzuur, syn-isomeer 500 mg waterig steriel excipiens, voldoende voor 5 cm3.

20

Voorbeeld XV:

Men bereidt capsules met de volgende samenstelling: dinatriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 250 mg 25 excipiens voldoende voor een capsule van 400 mg.

Voorbeeld XVI:

Men bereidt een injecteerbaar preparaat met de volgende samenstelling: natriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(cyaan-methyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-30 4-carbonzuur, syn-isomeer 500 mg waterig excipiens, voldoende voor 5 cm3.

Voonbee/d XVII:

Men bereidt een injecteerbaar preparaat met de volgende samenstelling: 35 natriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(aminocarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl- 3- cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer 500 mg waterig excipiens, voldoende voor 5 cm3.

Voorbeeld XVIII: 40 Men bereidt capsules met de volgende samenstelling: natriumzout van 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(cyaan-methyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem- 4- carbonzuur, syn-isomeer 250 mg excipiens, voldoende voor een capsule van 400 mg.

Farmacologisch onderzoek van de produkten volgens de uitvinding 45 Activiteit in vitro:

Methode van de verdunningen in vloeibaar milieu.

Men bereidt een reeks buisjes, waarin men telkens een zelfde hoeveelheid steriel voedingsmedium opneemt. Men verdeelt over de buisjes toenemende hoeveelheden van het te onderzoeken produkt, waarna elk buisje wordt geënt met een bacterie-stam.

50 Na incubatie van 24 of 48 uur in een stoof bij 37°C wordt de remming van de groei bepaald door doorlichten, waardoor de minimale remmende concentraties (C.M.I.) uitgedrukt in pg/cm3 kunnen worden vastgesteld.

De verkregen resultaten zijn vermeld in de hiernavolgende tabellen A-D.

17 192041

TABEL A

C.M.I., in pg/ml

5 Produkt van voorbeeld I Produkt van voorbeeld III

BACTERIESTAMMEN 24 uur 48 uur 24 uur 48 uur

Staphylococcus aureus ATTC

10 6538, penicilline-gevoelig 3 5 10 10

Staphylococcus aureus UC 1128, penicilline-resistent 3 3 20 20

Staphylococcus aureus exp. no.

54146 3 5 20 20 15 Streptococcus pyogenes A 561 0,05 0,1 0,5 0,5

Streptococcus faecalis 5432 5 >40 20 >40

Streptococcus faecalis 99 F 74 >40 >40 >40 40

Bacillus subtilis ATCC 6633 0,5 5

Escherichia Coli ATCC 9637, 20 gevoelig voor Tetracycline 2 2 0,2 0,2

Escherichia Coli ATCC 11303, resistent tegen Tetracycline 0,5 1 0,05 0,05

Escherichia Coli Exp. TO,fiBfi 1 1 0,1 0,1

Escherichia Coli R 55123 D, 25 resistent tegen Gentamicine en

Tobramycine 1 1 0,1 0,1

Klebsiella pneumoniae Exp.

52145 0,1 0,2 0,1 0,1

Klebsiella pneumoniae 2536, 30 resistent tegen Gentamicine 2 2 0,1 0,1

Proteus vulgaris A 232 (indool +) 1 1 0,1 0,1

Proteus mirabilis A 235 (indool -) 0,2 0,2 <0,02 <0,02

Salmonella typhimurium 420 1 2 0,2 0,5

Enterobacter cloacae 681 10 10 5 20 35 Providencia Du 48 5 5 1 2

Serratia 2532, resistent tegen

Gentamicine 5 5 1 2

TABEL B

40 _

Produkt van voorbeeld V

BACTERIESTAMMEN C.M.I. in pg/ml 45 24 uur 48 uur

Staphylococcus aureus ATTC

6538, penicilline-gevoelig 2 2

Staphylococcus aureus UC 1128, 50 penicilline-resistent 2 3

Staphylococcus aureus exp. no.

54146 2 3

Streptococcus pyogenes A 561 0,05 0,05

Streptococcus faecalis 5432 3 20 55 Streptococcus faecalis 99 F 74 10 >40 192041 18 TABEL B (vervolg)

Produkt van voorbeeld V

5 Bacillus subtilis ATCC 6633 0,5 1

Escherichia Coli ATCC 9637,

Telracycline-gevoelig 0,5 0,5

Escherichia Coli ATCC 11303,

Tetracycline-resistent 0,05 0,05 10 Escherichia Coli Exp. TO^Bfi 0,2 0,2

Escherichia Coli R 55123 D, resistent tegen Gentamicine en

Tobramycine 0,2 0,2

Klebsiella pneumoniae Exp.

15 52145 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae 2536,

Gentamicine-resistent 1 1

Proteus mirabilis A 235 (indool-) 0,05 0,05

Salmonella typhimurium 420 0,5 0,5 20 Enterobacter cloacae 681 3 5

Providencia Du 48 5 5

Serratia 2532, Gentamicine- resistent 2 2

25 TABEL C

Produkt van voorbeeld VII

BACTERIESTAMMEN C.M.I. in pg/ml 30 _ 24 uur 48 uur

Staphylococcus aureus ATTC

6538, penicilline-gevoelig 2 3 35 Staphylococcus aureus UC 1128, penicilline-resistent 5 5

Staphylococcus aureus exp. no.

54146 3 5

Streptococcus pyogenes A 561 0,1 0,1 40 Streptococcus faecalis 5432 5 20

Streptococcus faecalis 99 F 74 20 >40

Bacillus subtilis ATCC 6633 0,5 1

Escherichia Coli ATCC 9637,

Tetracycline-gevoelig 0,2 0,5 45 Escherichia Coli ATCC 11303,

Tetracycline-resistent 0,05 0,05

Escherichia Coli Exp. ΤΟ^Β„ 0,1 0,1

Escherichia Coli R 55123 D, resistent tegen Gentamicine en 50 Tobramycine 0,1 0,1

Klebsiella pneumoniae Exp.

52145 0,05 0,05

Klebsiella pneumoniae 2536,

Gentamicine-resistent 0,5 0,5 55 Proteus mirabilis A 235 (indool -) 0,1 0,1

Claims (4)

19 192041 TABEL C (vervolg) Produkt van voorbeeld VII 5 Proteus vulgaris A 232 (indool +)5 40 Salmonella typhimurium 420 0,2 0,2 Enterobacter cloacae 681 2 10 Providencia Du 48 5 5 Serratia 2532, Gentamicine- 10 resistent 2 2 TABEL D Produkt van voorbeeld IX 15 _ BACTERIESTAMMEN C.M.I. in pg/ml 24 uur 48 uur 23 Staphylococcus aureus ATTC 6538, penicilline-gevoelig 20 20 Staphylococcus aureüs UC 1128, penicilline-resistent 20 40 Staphylococcus aureus exp. no. 25 54146 20 >40 Streptococcus pyogenes A 561 1 1 Streptococcus faecalis 5432 >40 >40 Streptococcus faecalis 99 F 74 >40 >40 Bacillus subtilis ATCC 6633 10 >40 30 Escherichia Coli ATCC 9637, Tetracycline-gevoelig 0,5 0,5 Escherichia Coli ATCC 11303, Tetracycline-resistent 0,2 0,2 Escherichia Coli Exp. T026B6 0,5 0,5 35 Escherichia Coli R 55123 D, resistent tegen Gentamicine en Tobramycine 0,5 0,5 Klebsiella pneumoniae Exp. 52145 1 1 Klebsiella pneumoniae 2536, Gentamicine-resistent 1 1 Proteus mirabilis A 235 (indool -) 0,05 0,05 Proteus vulgaris A 232 (indool +) 0,1 3 Salmonella typhimurium 420 1 1 45 Enterobacter cloacae 681 40 >40 Providencia Du 48 2 3 Serratia 2532, Gentamicine- resistent 1 1 50

1. Geneesmiddel met antibacterials werking dat als werkzaam bestanddeel een 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-55 2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaat bevat, met het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel bestaat uit ten minste een verbinding met de algemene formule 1, waarin Rt een groep is met de formule -C02 RV waarin R', een alkylgroep met 1-3 koolstofatomen, een waterstofatoom 192041 20 of een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organisch stikstofbase voorstelt, of R, een cyaangroep of een groep met de formule CONH2 voorstelt, A een waterstofatoom of een equivalent van een alkalimetaal, een aardalkalimetaal, magnesium, ammoniak of een organische stikstofbase voorstelt, R' en R" al dan niet gelijk zijn en elk een waterstofatoom of een 5 alkylgroep met 1-3 koolstofatomen voorstellen, en de groep met de formule -OCR'R"R1 zich in de syn-positie bevindt, waarbij, wanneer R' een groep met de formule C02R'1 voorstelt, A hetzelfde voorstelt als R'„ tenzij R'., een alkylgroep voorstelt.

2. Geneesmiddel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat het werkzame bestanddeel bestaat uit ten minste één van de volgende verbindingen met de formule 1: 10 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycart>onylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4· carbonzuur, syn-isomeer; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1-carboxy-1-methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-15 4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan.

3. 7-[2-(2-Aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten, geschikt voor toepassing als werkzaam bestanddeel in het geneesmiddel volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat deze 3-cefem-4-carbonzuurderivaten verbindingen zijn met de algemene formule 1, waarin R1, A, R' en R" de in conclusie 1 genoemde betekenissen bezitten en de groep met de formule -OCR'R"R Λ zich in de 20 syn-positie bevindt.

4. 7-[2-(2-Aminothiazool-4-yl)-2-(veretherd oxyimino)aceetamido]-3-cefem-4-carbonzuurderivaten volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat deze 3-cefem-4-carbonzuurderivaten één of meer van de volgende verbindingen met de formule 1 zijn: 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(ethoxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-25 carbonzuur, syn-isomeer; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-(hydroxycarbonylmethyloxyimino)aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem-4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan; 7-[2-(2-aminothiazool-4-yl)-2-<(1-carboxy-1-methylethyl)oxyimino>aceetamido]-3-acetoxymethyl-3-cefem- 4-carbonzuur, syn-isomeer, of het dinatriumzout daarvan. Hierbij 4 bladen tekening