NL1014166C2 - Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans en werkwijze voor conserveren van genoemde stam. - Google Patents
Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans en werkwijze voor conserveren van genoemde stam. Download PDFInfo
- Publication number
- NL1014166C2 NL1014166C2 NL1014166A NL1014166A NL1014166C2 NL 1014166 C2 NL1014166 C2 NL 1014166C2 NL 1014166 A NL1014166 A NL 1014166A NL 1014166 A NL1014166 A NL 1014166A NL 1014166 C2 NL1014166 C2 NL 1014166C2
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- lactobacillus clearans
- sulfide
- culture medium
- lactobacillus
- acid
- Prior art date
Links
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims description 136
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims description 126
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims description 30
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 62
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 55
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 32
- GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N sodium sulfide (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[S-2] GRVFOGOEDUUMBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 229910052979 sodium sulfide Inorganic materials 0.000 claims description 30
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 22
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims description 22
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 21
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 21
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 21
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 20
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 claims description 20
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 claims description 20
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 20
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 18
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 14
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 claims description 13
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N N-phenylacetamide Chemical compound CC(=O)NC1=CC=CC=C1 FZERHIULMFGESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims description 12
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims description 12
- LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N diethyl sulfide Chemical compound CCSCC LJSQFQKUNVCTIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N dimethyl disulfide Chemical compound CSSC WQOXQRCZOLPYPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- -1 dimethyl mercaptan Chemical compound 0.000 claims description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 12
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 12
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 12
- 235000015190 carrot juice Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 11
- 150000003464 sulfur compounds Chemical class 0.000 claims description 11
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 10
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 10
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 9
- ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N skatole Chemical compound C1=CC=C2C(C)=CNC2=C1 ZFRKQXVRDFCRJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 9
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 claims description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 8
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 8
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims description 8
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 8
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 8
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 8
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000001055 magnesium Nutrition 0.000 claims description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 8
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims description 8
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 8
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000016804 zinc Nutrition 0.000 claims description 8
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000219793 Trifolium Species 0.000 claims description 7
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 claims description 7
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims description 7
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 claims description 7
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 7
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 7
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 claims description 6
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 6
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 6
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 6
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 claims description 6
- 229960001413 acetanilide Drugs 0.000 claims description 6
- UYJXRRSPUVSSMN-UHFFFAOYSA-P ammonium sulfide Chemical compound [NH4+].[NH4+].[S-2] UYJXRRSPUVSSMN-UHFFFAOYSA-P 0.000 claims description 6
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- MLUCVPSAIODCQM-NSCUHMNNSA-N crotonaldehyde Chemical compound C\C=C\C=O MLUCVPSAIODCQM-NSCUHMNNSA-N 0.000 claims description 6
- MLUCVPSAIODCQM-UHFFFAOYSA-N crotonaldehyde Natural products CC=CC=O MLUCVPSAIODCQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 6
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 6
- HTIRHQRTDBPHNZ-UHFFFAOYSA-N Dibutyl sulfide Chemical compound CCCCSCCCC HTIRHQRTDBPHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims description 5
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 5
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 claims description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 4
- 241001116389 Aloe Species 0.000 claims description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 3
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000009569 green tea Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 3
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 claims description 2
- 235000019674 grape juice Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 claims description 2
- 235000015193 tomato juice Nutrition 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 63
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 52
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 44
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 36
- 239000000463 material Substances 0.000 description 34
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 34
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 28
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 16
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 13
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 9
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 9
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 8
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 8
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 7
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 6
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 5
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 4
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 4
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 3
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 3
- 241001148134 Veillonella Species 0.000 description 3
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 125000004177 diethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 229940086542 triethylamine Drugs 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 2
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 2
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 2
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 2
- VRZJGENLTNRAIG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]iminonaphthalen-1-one Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=C1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1 VRZJGENLTNRAIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 240000000560 Citrus x paradisi Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- 229910004861 K2 HPO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 1
- ZGSDJMADBJCNPN-UHFFFAOYSA-N [S-][NH3+] Chemical compound [S-][NH3+] ZGSDJMADBJCNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940077731 carbohydrate nutrients Drugs 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003575 carbonaceous material Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001877 deodorizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000010840 domestic wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000010842 industrial wastewater Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229940046892 lead acetate Drugs 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000005418 vegetable material Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
Titel: KWEEKMEDIUMVOOR KWEKEN VAN Lactobacillus elearans EN
KERKHUZE_ VOOR CONSERVEREN VAN GENOEMDE STAM.
Beschrijving
ACHTERGROND VAN DE UITVINDING
1__Gebied van de uitvinding
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een kweekmedium 5 dat geschikt is voor kweken van Lactobacillus elearans. welke is geïsoleerd en geselecteerd door de uitvinders, en op een werkwijze voor conserveren van Lactobacillus elearans 2__BeschrUving van_aanverwante stand van de techniek 10 De cyclus van de natuur is er één van creatie en afbraak die geen biologisch materiaal bespaard blijft. Moerassen, die overlopen van slijm dat voortkomt uit de afbraak van eiwitten die in de natuur worden vrijgegeven, worden uiteindelijk ook gezuiverd, wat mogelijk maakt dat de aarde mooi blijft op haar eigen manier sinds het begin der tijden. De 15 mechanismen via welke dit plaatsvindt, zijn lang onbekend gebleven, maar ervan is bekend dat ze hoofdzakelijk het gedrag van microörganismen behelzen, wat leidde tot de huidige ontwikkeling van verscheidene zuiveringssystemen, met daarbij geactiveerde-slib-werkwijzen en de toepassing daarvan bij behandelingsinstallaties voor huishoudelijk 20 afvalwater en industrieel afvalwater. Gegeven de complexiteit betreffende de vraag welke soort eigenschappen de bacteriën karakteriseert die zijn betrokken bij dergelijke zuivering, is het geen wonder dat verdere gespecialiseerde analyse en bevestiging nodig zijn.
1014166 -2-
Een breed en diverse assortiment van materialen is het onderwerp van dergelijke zuivering en het zou uiteindelijk onmogelijk zijn deze alle te testen. Onze aandacht werd dienovereenkomstig geconcentreerd op geurende materialen (waarvan de meeste producten zijn van rotting en 5 schadelijk zijn), welke zonder meer en snel d.m.v. reuk determineerbaar zijn en breed geclassificeerd worden in geurende zwavelverbindingen, geurende stikstofverbindingen en geurende koolstofverbindingen. Na aanzienlijk onderzoek hebben onderzoekingen betreffende laag-moleculaire geurende verbindingen, dat wil zeggen, geurende zwavelverbindingen zoals 10 natriumsulfide en methylsulfide, geurende stikstofverbindingen, zoals ammoniak, indol en skatol, en geurende koolstofverbindingen, zoals azijnzuur en boterzuur, afdoende aangetoond dat de doelstellingen voldoende werden bereikt, wat mogelijk maakte dat dramatische voortgang kon worden geboekt bij onderzoek betreffende zuivering en deodorisering. 15 Dat wil zeggen, klaringsbacteriën vangen deze geurende materialen in als voedsel, niet als gif, en 'gebruiken ze als celbestanddelen voor zichzelf of als een energiebron, terwijl bacteriën die een bijzonder krachtige werking hebben, een deodoriserend vermogen hebben. Een groot aantal bacteriën die dergelijke karakteristieken hebben, worden overal in de 20 natuur aangetroffen en zijn de klok rond bezig met zuivering waarvoor ze het geschiktst zijn. Onze eigen lichamen zijn een microcosmos, waarbij het darmkanaal in het bijzonder een orgaan is dat rechtstreeks is gekoppeld met de buitenwereld als een deel van de natuurlijke omgeving zelf. Het is dienovereenkomstig niet verwonderlijk dat zich in de darmen 25 "experts" van zuivering bevinden.
Op basis van bovenstaande bevindingen onderzochten de uitvinders enterale klaringsbacteriën onder de niet-pathogene bacteriën die in de darmen kunnen leven. Dat wil zeggen, de uitvinders richtten zich uitsluitend op het genus Lactobacillus dat overal in de natuur voorkomt, 30 van binnenin het levende lichaam, zoals in het darmkanaal, de mond en de vagina, tot grassen, boombladeren, landbouwvruchten, gefermenteerde voedingsproducten, bodemmateriaal en rioolmateriaal. Als een gevolg bevestigden zij het bestaan van een eerder onbekende groep die tot het genus Lactobacillus behoort die in staat is een krachtig zuiverend 35 vermogen te vertonen, in de darmen. Tot deze bacteriën behoort een aanzienlijk breed bereik van species die momenteel worden 1014166 -3- geclassificeerd als behorend tot het genus Lactobacillus. zoals Iu. casei. Iu. salivarius. brevis en plantarum en worden gezamenlijk aangehaald als Lactobacillus clearans.
Lactobacillus clearans. welke nieuwe lactobacilli zijn die in 5 staat zijn natriumsulfide en ammoniak te verminderen (Japanse onderzochte octrooiaanvrage (Kokoku) 4-632), zijn toepasbare bacteriën die een krachtig zuiverend vermogen vertonen in de darmen via het vermogen ervan om natriumsulfide, ammoniurasulfide, methylmercaptan, ethylmercaptan, dimethylsulfide, diëthylsulfide, acetaldehyde, skatol, 10 indol, methylamine, ethylamine, diëthylamine, triëthylamine en dergelijke te verlagen. De uitvinders vonden dienovereenkomstig dat deze species van het genus Lactobacillus in staat zijn een krachtige zuiverende werking te vertonen in de darmen, ontdekten als een resultaat van bacteriologisch onderzoek dat deze species volledig nieuwe functies 15 hadden en hen werd een octrooi voor deze species verleend (1714431) . Het is duidelijk geworden dat^ Lactobacillus clearans niet alleen geurende schadleijké materialen in de darmen vermindert, maar een groep zijn die darmflora vormen, welke vitaminen en aminozuren synthetiseren en de groei van externe bacteriën beheersen, wat een geweldig effect heeft op 20 groepen zoale bacteriën die kunnen worden beschouwd als nuttige bacteriën die werking hebben die goed is voor het levende lichaam, zoals immunoactiveerwerking, karakteristiek groepen die behoren tot het genus Lactobacillus en het genus Bifidobacterium, en bacteriën die aan de andere kant kunnen worden beschouwd als schadelijk vanwege de 25 schadelijke en pathogene aard ervan, karakteristiek groepen die behoren tot Veillonella en Clostridium, zoals Welchii, een voorts de groei van pathogene bacteriën beheersen, de toxiciteit ervan verminderen en zo voorts. Tabel 1 toont de functionele verschillen tussen Lactobacillus clearans en conventioneel bekende species van het Lactobacillus-aenus.
30 1014166 -4- (Tabel 1)
Vergelijking van functies tussen Lactobacillus clearans en conventionele species van het Lactobacillus-genus
Parameter Lactobacillus-clearans Conventionele species __van Lactobacillus_
Vs. enteraal Verlaagt meeste Utiliseert geurende rottings-, geurende, geurende schadelijke koolstofverbindingen schadelijke verbindingen - zwavel- en breekt deze af, materialen - zwavel- verbindingen, stik- maar heeft geen effect verbindingen, stik- stofverbindingen en op geurende schade- stofverbindingen en koolstofverbindingen - lijke verbindingen als koolstofverbindingen door deze te utili- zwavelverbindingen en seren, af te breken en stikstofverbindingen __te denatureren
Fecale deodorisering ++ - tot ±
Werking op nuttige Veroorzaakt aanzien- Groei als individuen bacteriën die algemeen lijke groei doorgaan met innemen in darmen aanwezig zijn • Bifidobacterium 2 tot 10 keer 1 tot 3 keer • Lactobacillus 10 tot 100 keer__10 keer <_
Werking op schadelijke Sterk onderdrukt door Heeft onderdrukkende bacteriën die algemeen aanzienlijke groei van werking, maar dient in darmen aanwezig nuttige bacteriën niet te worden zijn verwacht.
• Veillonella 1/20 tot 1/100 1 tot 1/5 » Clostridium__1/20 tot 1/100__1 tot 1/5_
Anti-flatulente ++ - tot + werking__
Voedingsvereiste laag tot gematigd hoog geconcentreerde _ voeding_
Darmgroeivermogen + - tot +
Darm-stationaire - tot + - vermogen_____________________ _
Werking op pathogenen Worden niet-pathogeen Geen effect tijdens symbiose gemaakt (S-R- omzetting) • Salmonella Pathogeniteit geïnac- Uitgeroeid tijdens tiveerd na 47® co- strijd met pathogenen subculture in de loop van ver scheidene generaties van subculture met alle pathogenen • Shigella Pathogeniteit geïnac tiveerd na 108® co-subculture • fL. coli (0-157) Pathogeniteit geïnac tiveerd na 18® co-____ subculture 5
Bij beschouwing van waarom Lactobacillus clearans kon worden geproduceerd, kan het volgende worden gededuceerd. Dat wil zeggen, de H 9141 6 δ -5- gesmolten aarde die 4.600.000.000 jaar geleden werd geboren, koelde af, waarbij waterdamp werd gevormd dat de eerste zeeën vormde. Tot dat moment was er echter nog geen zuurstof en de zee bestond uit zuur heet water dat zwavel, ijzer en dergelijke bevatte dat door magma werd 5 geproduceerd. Organische materialen, zoals aminozuren en nucleïnezuren, werden beetje bij beetje gesynthetiseerd d.m.v. chemische reacties in de zee, welke aggregeerden en condenseerden in de vorm van oliedruppeltjes. Uiteindelijk ontstonden levensvormen van deze oliedruppeltjes en bleven groeien, waarbij deze organische materialen die in de zee accumuleerden 10 consumeerden, tot aan de rand van uitputting. Tussen deze levensvormen verschenen echter anaërobe bacteriën die anorganische materialen konden gebruiken, zoals het in de zee opgeloste zwavel, voor verkrijgen van energie, en organische materialen vanuit kooldioxide konden synthetiseren. Deze anaërobe bacteriën evolueerden lange tijd, waarbij 15 deze tot de eerste fotosynthetische bacteriën differentieerden die energie gebruikten om zuurstof vrij te maken, en de oude voorgangers van het Lactobacillus-oenus van tegenwoordig. Deze speelden een actieve rol bij de zuivering van geurende schadelijke materialen uit magma, als gevolg waarvan de meeste schadelijke materialen naar de oceaanbodem 20 werden geprecipiteerd, terwijl zuurstof ook toenam, wat mogelijk maakte dat een milieu dat vriendelijk voor leven was, geleidelijk verder ging te gedijen en de bouwstenen te vormen voor het navolgende explosieve fenomeen van leven. Op een moment tijdens dit proces gingen de meeste Lactobacilli ten onder in de strijd voor groei met andere bacteriën die 25 waren geacclimatiseerd en geadapteerd voor het ruwe milieu van de onmetelijke natuur, waarbij deze ontsnapten en verbleven in nutriëntenrijke gebieden vol met de aanwezigheid van koolhydraten, aminozuren, vitaminen en dergelijke, en naar gebieden met een milder, constanter milieu, waarna hun inherente zuiverende vermogen, dat wil zeggen, het 30 zuiverende vermogen tegen geurende en schadelijke zwavelverbindingen en het zuiverende vermogen tegen geurende en schadelijke stikstofverbindingen, geleidelijk verloren gingen. Het Lactobacillus-genus heeft echter het vermogen om geurende koolstofverbindingen te utiliseren tot de dag van vandaag behouden.
35 Hoewel verscheidene algemeen bekende werkwijzen, zoals vries drogen, ultrakoude conservering of vloeibare, natte, halfdroge en droge -6- werkwijzen of dergelijke kunnen worden toegepast als werkwijzen voor conserveren van Lactobacillus clearans. is het uiterst belangrijk om het verlies te voorkomen van het karakteristieke vermogen van Lactobacillus clearans om geurende en schadelijke materialen te verminderen, tijdens 5 opslag en het in belangrijkheid volgende punt is verzekeren van langer durende levensvatbaarheid terwijl dit vermogen wordt geconserveerd* Onderzoek door de uitvinders heeft duidelijk de noodzaak laten zien van bijzondere aandacht daarvoor. Dat wil zeggen, gezien de aanwezigheid van materialen die er de oorzaak van zijn dat de bacterietiter snel afneemt 10 tijdens bacteriesubculture, zal de titer net alleen geleidelijk afnemen, maar de overleving ervan wordt zelfs bedreigd, ongeacht welke werkwijze van conservering wordt toegepast.
Vriesdrogen is momenteel de overheersende werkwijze van conserveren van bacteriën en Lactobacillus is geen uitzondering. Hoewel 15 vriesdrogen is toegepast voor alle producten die gedurende lage tijden dienen te worden opgeslagen, zoals anti-flatulentia of yoghurtstammen, wordt de houdbaarheid van Lactobacillus in principe niet als erg goed beschouwd. Pogingen om gevriesdroogde cellen van Lactobacillus die hier en in het buitenland commercieel beschikbaar zijn, op te vangen en weer 20 tot leven te brengen waren namelijk niet in staat de opgegeven levensvatbare-celaantallen op te leveren, bij nagenoeg alle producten, ongeacht de vervaldatum, terwijl er een aantal producten was waarin geen levensvatbare cellen werden gevonden. Dit was het geval ondanks de expertise en de resultaten van onderzoek van de fabrikanten. 25 Onderzoekingen van de uitvinders betreffende Lactobacillus clearans onthulden dat niet alleen het levensvatbare-celaantal afnam in een vroeg stadium in de aanwezigheid van algemeen toegepaste conserveermiddelen, deze leidden zelfs tot een afname in titer.
Lactobacillus clearans kan worden beschouwd als de 30 afstammelingen, of zogenoemde atavistisch mutantstammen, die tot de dag van vandaag hebben overleefd met de voortgaande overerving van zuiveringswerking, welke hun voorouders kosten wat kost behielden, tegen geurende zwavelverbindingen, stikstofverbindingen en koolstofver-bindingen. Het is onmogelijk te voorspellen welk lot de tere 35 Lactobacillus clearans. welke nu in een toestand van flux tussen oude en moderne Lactobacillus is, onder menselijke zorg is beschoren.
1 o 1 4 6 6 -7-
Verschillende zaken zijn nodig voor de kweekmediums die worden toegepast om dergelijke bacteriën te kweken, en voor de conserveringsmiddelen die worden toegepast om deze houdbaar te maken. Bij tests op deze bacteriën na de titer namelijk af zowel tijdens subculture als bij opslag. Als 5 zodanig zijn de belangrijke punten welke condities van subculture mogelijk zouden maken dat de krachtige titer onaangetast blijft en welke condities van opslag mogelijk zouden maken dat de krachtige titer onaangetast blijft.
10 SAMENVATTING VAN DE UITVINIDNG
Als een resultaat van uitgebreid onderzoek om deze problemen te verhelpen hebben de uitvinders een kweekmedium ontwikkeld dat in staat is de titer van Lactobacillus clearans te onderhouden, bij verlagen van natriumsulfide en ammoniak, en een werkwijze van conservering. Dat wil 15 zeggen, de uitvinding is een kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de toevoeging omvat van ten minste één van of meer van natriumsulfide en waterige ammoniak, zodat tijdens de kweek van de Lactobacillus clearans ten minste één van of meer van natriumsulfide en ammoniak wordt verlaagd door Lactobacillus clearans na 24 uur kweek, en 20 is een kweekmedium dat bij voorkeur de toevoeging omvat van natriumsulfide in een concentratie van 500 p.p.m., waarbij de natriumsulfide met 10% of meer wordt verlaagd na 24 uur kweek tijdens de kweek van Lactobacillus clearans, en bij voorkeur de toevoeging omvat van waterige ammoniak in een concentratie van 500 p.p.m., waarbij de 25 ammoniak met 10% of meer wordt verlaagd na 24 uur kweek tijdens de kweek van Lactobacillus clearans. Het kweekmedium omvat bij voorkeur de toevoeging van ten minste één of meer van geurende zwavelverbindingen, geurende stikstofverbindingen en geurende koolstofverbindingen, waarbij de geurende zwavelverbinding bij voorkeur ten minste één van of meer is 30 van natriumsulfide, waterstofsulfide, ammoniumsulfide, methylmercaptan, ethylmercaptan, dimethylmercaptan, dimethylsulfide, dimethyldisulfide, diëthylsulfide, dibutylsulfide en derivaten daarvan, de geurende stikstofverbinding bij voorkeur één of meer is van ammoniak, skatol, indol, acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, triëthyl-35 amine en derivaten daarvan en de geurende koolstofverbinding bij voorkeur ten miste één of meer is van mierezuur, azijnzuur, propionzuur, 1014166 -8- boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butylalcohol, amylalcohol en derivaten daarvan. Het kweekmedium omvat bij voorkeur ook de toevoeging van ten minste één of meer van zwavel-bevattend aminozuur, glutaminezuur, lysine en asparaginezuur als 5 een aminozuur, bij voorkeur de toevoeging van ten minste één of meer van vitamine C, vitamine E, vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur en nicotinamide als een vitamine, bij voorkeur de toevoeging van ten minste één of meer van mangaan, zink, magnesium en molybdeem als een mineraal-bestanddeel en bij voorkeur de toevoeging van ten minste één of meer van 10 chlorella-CGF, sojamelk en galpoeder.
De tweede van de onderhavige uitvindingen is een werkwijze voor conserveren van Lactobacillus clearans. welke de aanwezigheid omvat van ten minste één of meer van zwavel-bevattend aminozuur, ovalbumine, galpoeder, trehalose, raffinose, dode gistcellen, chlorella, 15 rijstezemelen, zemelen, sojamelk en wortelsap, als een conserveermiddel rondom de Lactobacillus clearans tijdens de conservering van
Lactobacillus clearans en omvat bij voorkeur in toevoeging aan het voornoemde conserveermiddel de toevoeging van ten minste één of meer van glutaminezuur, lysine, asparaginezuur, vitamine C, vitamine E, 20 vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur, nicotinamide, mangaan, zink, magnesium, molybdeem, natriumsulfide, waterstofsulfide, ammonium-sulfide, methylmercaptan, ethylmercaptan, dimethylmercaptan, dimethyl-sulfide, dimethyldisulfide, diëthylsulfide, dibutylsulfide, ammoniak, skatol, indol, acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, 25 triëthylamine, mierezuur, azijnzuur, propionzuur, boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butylalcohol, amylalcohol en derivaten daarvan, rondom de Lactobacillus clearans. en omvat voorts bij voorkeur de aanwezigheid van ten minste één of meer van dier-afgeleide poedertaptemelk, ovalbumine, lactose, 30 leverextractpoeder en serum, alsmede ten minste één of meer van planten-afgeleide sojawei, trehalose, raffinose, zetmeel, chlorella, chlorella-CGF, rijstezemelen, zemelen, alfalfasap, klaversap, tarwekiemextract, sojamelk, tomatensap, wortelsap, druivensap, aloëpoeder, groene-theepoeder en dode gistcellen als een conserveermiddel en in toevoeging 35 aan de voornoemde conserveermiddelen, de toevoeging van ten minste één of meer van glutaminezuur, lysine, asparaginezuur, vitamine C, 1014166 -9- vitamine E, vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur, nicotinamide, mangaan, zink, magnesium, molybdeem, natriumsulfide, waterstofsulfide, ammoniumsulfide, methylmercaptan, ethylmercaptan, dimethylmercaptan, dimethylsulfide, dimethyldisulfide, diëthylsulfide, dibutylsulfide, 5 ammoniak, skatol, acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, triëthylamine, mierezuur, azijnzuur, propionzuur, boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butylal-cohol, amylalcohol en derivaten daarvan rondom de Lactobacillus clearans. Bovendien kan de werkwijze voor conserveren van Lactobacillus 10 clearans elk van vriesdroog-, ultrakoude-conserverings- of vloeibare, natte, halfdroge of droge werkwijzen omvatten.
KQRTEBESCHRIJVIKG., VAN„DE TEKENINGEN
FIG. 1 is een illustratie van kweek met het kweekmedium voor 15 Lactobacillus clearans en de titertest daarbij.
BESCHRIJVING VAN DE VOORKEURSUITVOERINGSVORMEN
De bij de onderhavige uitvinding aangehaalde Lactobacillus clearans vormen nieuwe stammen van het Lactobacillus-genus die de 20 volgende biochemische karakteristieken (1), (2), (3) en (4) hebben. Deze zijn namelijk stammen van Lactobacillus: (1) die zowel Na2S*9H20 als NH4OH kunnen verlagen als 0,5 g Na2S«9H20 en/of 0,5 ml NH4OH wordt of worden toegevoegd aan 5 g vleesextract, 5 g pepton, 1 g glucose, 1 g CaC03 en 1 L water {neutrale pH); (2) die geen groei-bevorderende 25 uitwerking vertonen zelfs als 0,5 g Na2S»9H20 en/of 0,5 ml NH4OH wordt of worden toegevoegd tijdens de logaritmische fase tijdens kweek van de bacteriën in medium dat 1 g casaminozuur en vitaminen (A: 900 IE; B3: 1 mg; B2: 1 mg; Bs: 1 mg; B12: 5 γ; nicotinamide: 16 mg; calcium pantothenaat: 8 mg; C: 64 mg; D2: 120 IE) omvat in Stephanson-Whetham-30 medium (afgekort als S-W; 1 g KH2P04, 0,7 g MgS04»7H20; 1 g NaCl; 4 g (NH4)2P04; 0,03 g FeS04*H20; 5 g glucose); (3) natuurlijke geïsoleerde stammen vertonen sterkere weerstand dan conventioneel bekende lactobacilli en zwakkere weerstand dan Lactobacillus clearans tegen Na2S*9H20 en (4) die gram-positief zijn, staafjes, niet-beweeglijk, 35 catalase-negatief, met geen reductie van nitraten, geen afbraak van 1014166 -10- gelatine, geen vorming van indol of waterstofsulfide en hoog vermogen om melkzuur te vormen uit glucose en lactose, alsmede versnelde groei met de toevoeging van azijnzuur (Japanse onderzochte octrooiaanvrage (Kokoku) 4-632) .
5 De verscheidene mediums die in Tabellen 2, 3, 4, 5 en 6 worden gegeven, zoals de verscheidene types medium die in lage-concentratie-nutriëntenmedium, moderate-concentratie-nutriëntenmedium en hoge-concentratie-nutriëntenmedium worden geclassificeerd, kunnen worden toegepast voor de subculture van Lactobacillus clearans.
10 (Tabel 2)
Subculturemediumsamenstelling (1) (samenstelling in 1 L)
Stephanson-Wetham-medium_ ΚΗ,ΡΟ,__1_2_
MqSO, «7H,0__0,7 q_
NaCl__12_ (ΝΗ,),ΗΡΟ,__4_2_
FeS0,«7H,0____0,03 q_
Glucose_ 5 g_ 15 (Tabel 3)
Subculturemediumsamenstelling (2) (samenstelling in 1 L) MRS-medium
Vleesextract 10 g
Gistextract__5 q_______
Pepton 10 g
MqSO,»7H,Q_ 0,2 q_
MnSO,*5H,0_ 0,5 g_
Natriumacetaat 5 q
Ammon iumc it raat_ 2 q _ ΚΗ,ΡΟ,_ 2 q_
Glucose 20 q 1 1014166 -11- (Tabel 4)
Subculturemediumsamenstelling (3) (samenstelling in 1 L) Laqe-concentratie-nutriëntenmedium
Medium__Samenstelling______ a-1 1 g casaminozuur toegevoegd aan _________ Stephanson-Wethman-medium a-2 1 g gistextract toegevoegd aan _________________________ Stephanson-Wetham-medium a-3 1 g casaminozuur 0,1 g vitamine11 toegevoegd aan Stephanson-Wetham-___medium 5 11 bevat vitamine A: 900 IE; vitamine Bi: 1 mg; vitamine B2: 1 mg, vitamine B12: 5 μg; nicotinamide: 16 mg; calciumpantothenaat: 8 mg; vitamine C: 16 mg; Vitamine D2: 120 IE in 1 g.
(Tabel 5) 10 Subculturemediumsamenstelling (4) (samenstelling in 1 L) moderate-concentratie-nutriëntenmedium
Medium__Samenstelling_ b-1 1 g casaminozuur 0,1 g vitamine1’ 5 g taptemelk toegevoegd aan Stephanson-Wetham- ___________________________________ medium_ b-2 5 g vleesextract 5 g pepton ^____ 5 g glucose b-3_.__1 g MRS-medium, 1/2 verdund_ ” bevat vitamine A: 900 IE; vitamine Bx: 1 mg; vitamine B2: 1 mg, vitamine Bx2: 5 ^g; nicotinamide: 16 mg; calciumpantothenaat: 8 mg; vitamine C: 16 mg; Vitamine D2: 120 IE in 1 g.
15 (Tabel 6)
Subculturemediumsamenstelling (5) (samenstelling in 1 L) Hoge-concentratie-nutriëntenmedium Medium Samenstelling c-1_MRS-medium c-2__100 g taptemelk_ c-3 30 g taptemelk _____________________________^_^___i toegevoegd aan MRS-medium 20
De werkwijze van testen van de titer van Lactobacillus clearans wordt hieronder beschreven; het volgende zijn voorbeelden van de functies die deze bacteriën hebben: (1) het vermogen geurende schade- 1 n 1 a 1 -12- lijke materialen te verminderen, zoals de zwavelverbinding natrium-sulfide en de stikstofverbinding ammoniak; (2) het vermogen de darmflora te verbeteren, dat wil zeggen, het vermogen nuttige bacteriën, zoals Bifidobacterium en Lactobacillus, te verhogen en duidelijk verlagen van 5 schadelijke bacteriën, zoals Veillonella en Clostridium, met daarbij Welchii; en (3) het vermogen de groei en toxiciteit van infectieuze pathogene darmbacteriën te onderdrukken. Hoewel deze drie vermogens afzonderlijk getest en uitvoerig geëvalueerd kunnen worden, hebben de resultaten van uitgebreid onderzoek laten zien dat de voornoemde 10 vermogens van Lactobacillus clearans onderling nauw zijn gerelateerd.
Als zodanig werd de test van de titer beperkt tot (1) het vermogen voor verlagen van geurende schadelijke materialen in de darm, wat eenvoudig getest wordt en snelle resultaten verschaft.
Het titertestmedium voor testen van het vermogen om geurende 15 schadelijke materialen in de darm te verlagen bestond uit 0,5 g natriumsulfide of 0,5 ml waterige ammoniak toegevoegd aan medium dat 5 g vleesextract, 5 g pepton, 5 g glucose, 3 g natriumbutyraat en 3 g calciumcarbonaat omvatte. Het medium werd met de testbacterie geïnoculeerd voor anaërobe kweek bij 37*C en de afname in de toegevoegde 20 natriumsulfide of ammoniak in de tijd werd bepaald. Op dergelijke tijden werd de natriumsulfide gemeten d.m.v. de loodacetaatwerkwijze of de joodtitratiewerkwijze in JIS K 0102-1985, terwijl de ammoniak werd gemeten d.m.v. Nestler's werkwijze of de indofenolblauwabsorptie-werkwijze in JIS K 0102-1985. De Lactobacillus clearans die wordt 25 getest, is uiterst divers; Tabel 7 geeft het percentage afname in natriumsulfide en ammoniak bepaald als de titer van de drie karakteristieke stammen, namelijk BHPH-L-1 (FERM P-17149, FERM BP-6971), BHPH-L-2 (FERM P-17148, FERM BP-6972) en BHPH-L-3 (FERM P-17150, FERM BP-6973), hoog was.
30 1014166 -13- (Tabel 7)
Percentage afname in natriumsulfide en ammoniak door Lactobacillus clearana met hoge titer_ FERM-Nr. Afname (%) natriumsulfide__Afname (%) ammoniak __24 uur__48 uur__72 uur__24 uur__48 uur__72 uur P-17148 20 40 50 15 25 40 BP-6972_______ P-17149 30 50 55 25 40 50 BP-6971_______ P"17150 40 65 70 30 45 65 BP-6973 __ ___ 5
Het basiskweekmedium heeft in het ideale geval uitstekende groei en minimale afname in titer. Dit is het belangrijkste punt in verband met de opbrengst van bacteriën van uit het praktische standpunt van massale kweek (opschaling). Na zoeken van een ideaal kweekmedium hebben 10 met succes de sleutel gevonden. Dat wil zeggen, zoals in Tabel 8 wordt aangegeven, dat het duidelijk werd dat als kweek werd gedaan met de toevoeging van natriumsulfide of ammoniak aan het basismedium, het essentieel was dat de twee toegevoegde materialen in enige mate werden verlaagd na 24 uur, waarbij subcultures in mediums zonder een dergelijke 15 afname resulteerden in een aanzienlijk verlies van titer, wat deze uiteindelijk ontoepasbaar maakte. Dat wil zeggen, Tabel 8 toont dat in gevallen waarbij 0,5 g natriumsulfide en 0,5 ml waterig ammoniak werden toegevoegd aan 1 liter medium, de geurende materialen die als inherente nutriëntbestanddelen dienden, zoals geurende zwavel-, stikstof- en 20 koolstofmaterialen, niet werden gebruikt als nutriëntenbronnen bij overmatig hoog geconcentreerde nutriëntenmediums en dat alleen gemakkelijk te gebruiken nutriëntenbronnen werden gebruikt, wat resulteerde in grotere hoeveelheden van een bacterie, maar met het geleidelijke verlies en de uiteindelijke inactivering van de 25 bacteriekarakteristieken. Hier verwijst waterig ammoniak naar waterig reagensammoniak, zoals een waterige oplossing die 25,0 tot 27,9 gew./v-% ammoniak bevat.
1014186 -14- (Tabel 8)
Percentage afname in natriumsulfide en ammoniak in kweekmediums waaraan deze werden toegevoegd voor Lactobacillus clearans.
5 _____
Aanvankelijke afname (%)
Type Medium Toegevoegd Test-bacterie, Geurende zwavel- Geurende stikstof- materiaal FERM-Nr. verbindingen verbindingen ~2A p8 p72 24 48 72 _____uur uur__uur__uur uur uur
Lage- a-1 Natriumsul- P-17148,BP-6972 10 15 25 10 20 30 concen- fide en P-17149,BP-6971 15 20 35 15 30 40 medium” _ïmmonllk P-17150,BP-6973 20_ 30__40__20_ 3S__45_ a-2 Natriumsul- P-17148,BP-6972 10 15 25 10 15 20 fide en P-17149,BP-6971 15 20 30 15 25 40 waterige p-17150,BP-6973 25 35 40 20 30 40 _ammonia*________ a-3 Natriumsul- P-17148,BP-6972 15 25 30 15 25 35 fide en P-17149,BP-6971 20 30 35 20 30 40 ammoniak P-17150, BP-6973 25 35 10 20 35 45
Mode- "b-ï Natriumsul- P-17148,BP-6972 ÏÖ 15 25 TÖ "l5 "2Ö rate“ fide en P-17149,BP-6971 15 20 30 15 20 30 tratie- _ammonllk P-17150,BP-6973 20_ 25__30__15_20_25_ medium b-2 Natriumsul- P-17148,BP-6972 0 3 10 10 0 10 fide en P-17149,BP-6971 05 10 0 5 10 _ammoniak P-m50,BP-6973 0_ 5__15__0_ 5_ 10_ b-3 Natriumsul- P-17148,BP-6972 5 10 15 5 7 10 fide en P-17149,BP-6971 5 10 15 5 8 10 waterige p-17150,BP-6973 57 10 5 7 10 __ammonia*__*_______
Hoge- c-1 Natriumsul- P-17148,BP-6972 02 7035 concen- fide en P-17149,BP-6971 003002 medium' _ïmmonjlk P-17150,BP-6973 2_ 3__5_ 2_ 5_ 7_ c-2 Natriumsul- P-17148,BP-6972 008005 fide en P-17149,BP-6971 0 0 10 0 0 5 waterige p-17150,BP-6973 007005 _ammoniak _'_________ _____ _____ c-3 Natriumsul- P-17148,BP-6972 005005 fide en P-17149,BP-6971 005005
Konilk I P-17150,BP-6973 |θ 0 | 10 |° |0 |s
De belangrijkste aminozuren die de bacteriecellen of enzymen uitmaken, werden onderzocht op het type effect ervan op Lactobacillus 10 clearans. Onthuld werd dat de toevoeging van bijzondere aminozuren, namelijk zwavel-bevattende aminozuren als cystine, methionine, cysteine en taurine, alsmede glutaminezuur, lysine en asparaginezuur, uiterst werkzaam waren als deze tijdens subculture werden toegevoegd, terwijl de toevoeging van proline, tyrosine en dergelijke een snelle afname in 15 titer voortbracht. Dat wil zeggen dat deze ruw konden worden geclassificeerd in drie groepen: bepaalde types aminozuren die de titer .1014166 -15- van Lactobacillus clearans hielpen behouden, andere types die minder effect hadden, en nog weer andere types die een aanzienlijke afname in titer voortbrachten. Dit loste met succes de tegenspraak op bij conventionele experimenten, in het bijzonder de tegenspraak dat als een 5 nutriënt werd verbeterd in een poging de groei van bacteriën te faciliëren, het nutriënt uitstekend voor de bacteriën zou zijn, terwijl toch de onderscheidende karakteristieken van verlagen van schadelijke materialen verloren zou gaan. Dienovereenkomstig hoeft nauwelijks te worden opgemerkt dat de voornoemde werkzame aminozuren gemengd zouden 10 kunnen worden met de voornoemde geurende zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen om te voorkomen dat de titer verder afneemt.
Wij zochten naar materialen die in staat waren tot dergelijke verbetering of potentiëring en voerden uitgebreid onderzoek uit. Als gevolg hebben wij ontdekt dat vitamine C, vitamine E, vitamine B12, 15 calciumpantothenaat, foliumzuur, nicotinamide en dergelijke werkzame vitaminen waren. Het is duidelijk geworden dat deze vitaminen verregaand zijn betrokken bij de productie van enzymen die geurende materialen verminderen, zoals geurende zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen.
Tevens werd ontdekt dat mangaan, zink, magnesium, molybdeem en 20 dergelijke werkzame mineralen zijn. Duidelijk is geworden dat deze materialen verregaand zijn betrokken bij de werkzaamheid van enzymen die geurende materialen verminderen, zoals geurende zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen.
Dit werd bevestigd door Lactobacillus clearans te kweken in 25 mediums die de voornoemde werkzame vitaminen en mineralen bevatten, en vervolgens de bacteriën te verwijderen en vervolgens eenvoudig een gedeelte van de resulterende kweekbouillon toe te voegen aan een vloeistof die een geurend materiaal, zoals een geurende zwavel-, stikstof- of koolstofverbinding, bevatte, wat resulteerde in de afname 30 van dergelijke geurende materialen.
Tevens werd ontdekt dat chlorella-CGF, sojamelk, galpoeder en dergelijke werkzame materialen zijn voor onderhouden van de titer van Lactobacillus clearans.
In toevoeging aan onderzoeken van kweekcomponenten heeft het ook 35 de voorkeur om bacteriën in subculture te kweken in de logaritmische fase in navolgende mediums tijdens subculture of kweek in een poging een 1014166 -16- af name in de titer te voorkomen. Het heeft tevens de voorkeur hittedenaturatie van de mediumbestanddelen tijdens de vervaardiging en sterilisatie van het medium te voorkomen.
Een werkwijze van conservering werd vervolgens onderzocht, wat 5 resulteerde in de conclusie dat het belangrijkste punt is eerst een gunstig conserveermiddel te bereiden. Conserveermiddelen die algemeen bij lactobacilli worden toegepast momenteel, zoals lactose, verscheidene types zetmeel en taptemelk (1) zijn gemakkelijk te hanteren, (2) zijn goedkoop, (3) kunnen rechtstreeks aan het levende lichaam worden 10 toegediend en leveren geen ongemak als deze worden genomen. Vanwege deze en andere redenen is er een sterke neiging deze toe te passen, hoofdzakelijk voor menselijk gemak, niettegenstaande dat deze zowel gunstig als ongeschikt zijn voor lactobacilli. Momenteel kunnen deze worden genomen in de vorm van enterocapsules, maar wij hebben besloten 15 deze omstandigheden vanuit het gezichtspunt van lactobacilli te bespreken, zonder prioriteit aan de kant van mensen te geven, als een wijze om aandacht te vestigen op de lactobacilli. Dienovereenkomstig werd een grote verscheidenheid materialen getest als conserveermiddelen, van algemeen toegepaste eiwit-gebaseerde materialen bij bacteriekweken, 20 tot samenstellingen van verscheidene dierlijke en plantaardige materialen en sacchariden, voor een grote verscheidenheid van bacteriestammen, met daarbij de drie karakteristieke stammen van Lactobacillus clearans, dat wil zeggen, BHPH-L-1 (FERM P-17149, FERM BP-6971), BHPH-L-2 (FERM P-17148, FERM BP-6972) en BHPH-L-3 (FERM P-17150, FERM 25 BP-6973). De hoeveelheden waarmee de conserveermiddelen worden toegevoegd, wisselt in hoge mate afhankelijk van het type conserveermiddel, met een wisselend bereik van geschiktheid en kan dienovereenkomstig niet worden vastgesteld als een zaak van absoluut beginsel, maar ligt in het algemeen in het bereik, in termen van de 30 gewichtsverhouding van vaste conserveermiddelstoffen, lopend van 1 tot 500 keer dat van gecentrifugeerde bacteriecellen.
De bij de onderhavige uitvinding aangehaalde zetmelen worden niet beperkt tot een bijzonder uitgangsmateriaal, maar tot voorbeelden behoren oplosbaar zetmeel, maïszetmeel, aardappelzetmeel en zoete-35 aardappelzetmeel.
1014166 -17-
De bij de onderhavige uitvinding aangehaalde dode gistcellen verwijzen naar gist in een niet-levensvatbare toestand. Een voorbeeld is bakkersgist dat kan worden gedood door 10 minuten behandeling met 100 *C heet water en daarna gedroogd. Na te zijn gedood kan bakkersgist echter 5 in een droge of een vochtige toestand zijn. Gistextractpoeder verwijst naar gistextract dat is gedroogd en tot een poeder is verwerkt. De droogwerkwijze wordt niet in het bijzonder beperkt.
Voorbeelden 10 Lactobacillus clearans werd in subculture gebracht in de verschillende in Tabellen 2, 3, 4, 5 en 6 gegeven mediums, mediums voor testen van de titer werden in elk stadium van de subculture geïnoculeerd en de titer werd getest vanaf de eerste tot en met de negende generatie. De werkwijze wordt geïllustreerd in FIG. 1, de resultaten van de 15 titertest worden gegeven in Tabel 9 en Tabel 10 brengt al de stammen bijeen. De titer wordt weergegeven d.m.v. concentrische cirkels om nagenoeg geen afname in titer aan te geven, d.m.v. een cirkel om een lichte afname, maar voldoende behoud van titer aan te geven, d.m.v. een driehoekje om een geleidelijk verlies in titer, wat ongeschikt was voor 20 de praktijk, aan te geven en d.m.v. een "x" om een aanzienlijk verlies van titer aan te geven. In de grond van de zaak werd een afname in titer opgemerkt bij alle mediums, toenemend in de volgorde van lage-concentratie-, naar moderate-concentratie- naar hoge-concentratie-nutri-entenmediums. De verschillend namen snel toe met verdere subcultures 25 101416b -18-
Tabel 9: Correlatie tussen aantal subcultures en titer van Lactobacillus clearans in verscheidene mediums
Type Medium Test-bacterie, Afname (%) Aantal subcultures en FERM-Nr. na 72 uur titer in 1* generatie ________S11 ~N*> 1· 3· 6* ~9*
Lage- a-1 Ρ-17148,BP-6972 50 40 φ φ O Ο-Δ concen- P-17149,BP-6971 50 45 φ φ O 0~Δ medium" _ P-17150, BP-6973 65_j>0_ φ_ φ-,ρ 0_ Δ_ a-2 P-17148, BP-6972 45 35 φ φ Ο Ο-Δ P-17149,BP-6971 45 40 φ φ_0 Ο Δ Ρ-17150,ΒΡ-6973 60 55 φ φ„0 Ο Δ Ρ-17148,ΒΡ-6972 45 35 "φ "φ Ö Ο^Δ Ρ-17149,ΒΡ-6971 45 40 φ φ_0 Ο Δ Ρ-17150,ΒΡ-6973 55 50 φ φ„0 Ο-Δ Δ
Mode- b-1 P-17148, BP-6972 40 30 "φ Ο Ο^Δ Δ rate~ P-17149,BP-6971 40 40 φ O Ο-Δ Δ tratie- P-17150,BP-6973 50 45 φ Ο Ο-Δ Δ medium b-2 P-17148, BP-6972 75 30 φ Ο-Δ Δ-Χ Δ-Χ Ρ-1714 9, ΒΡ-6971 30 35 φ Ο-Δ Δ Δ-Χ
Ρ-17150,ΒΡ-6973 40 45 φ Ο-Δ Δ X
b-3 Ρ-17148,ΒΡ-6972 40 35 φ "Ö Ο^Δ Δ Ρ-17149,ΒΡ-6971 40 45 φ Ο Ο-Δ Δ Ρ-17150,ΒΡ-6973 60 50 φ Ο Ο-Δ Δ
Hoge- c-1 Ρ-17148, ΒΡ-6972 35 TÖ ”0 "Ö Δ Δ^Χ concen- Ρ-17149, ΒΡ-6971 35 40 Ο Ο-Δ Δ Δ-Χ Ρ-17150,ΒΡ-6973 50 50 φ Ο Δ Δ-Χ
c-2 Ρ-17148,ΒΡ-6972 30 30 Ο Δ X X
Ρ-17149,ΒΡ-6971 25 20 Ο Δ X X
_ Ρ-17150,ΒΡ-6973 30 35 Δ_ Δ-Χ _Χ__X_
c-3 Ρ-17148,ΒΡ-6972 30 30 Ο Δ-Χ X X
Ρ-17149,ΒΡ-6971 35 30 Ο Δ X X
__1Ρ-17150, ΒΡ-6973 45 45 |0 |Δ |δ |χ 5 1) geurende zwavelverbindingen; 2) geurende stikstofverbindingen 1014166 -19- (Tabel 10)
Lactobacillus-clearans-kweek en algehele correlatie van subcultures en titer
Aantal subcultures en uitgebreidheid van titer___ __2!__§1__21_
Lage-concentratie-nutriënten- © ®~o 0~Δ 0-Δ medium _______ __________
Moderate-concent rat ie- ©~0 0~Δ O-X Δ~χ nutriëntenmedium ______ ______
Hoge-concentratie-nutriënten- ©~Δ 0~X Δ~Χ Δ~Χ medium _____ ______ _________ 5
Gezien de karakteristieken ervan werd Lactobacillus clearans in subculture gebracht met de toevoeging van de enterale rottings-, geurende materialen die geurende zwavel-, stikstof- en koolstof-10 verbindingen omvatten, toegevoegd aan lage-concentratie-, moderate-concentratie- en hoge-concentratie-nutriëntenmediums, werden de bacteriën overgeplant naar mediums voor testen van de titer en werd de titer getest, met de in Tabel 11 gegeven resultaten. Hier zijn F-bestanddelen degene waartoe 0,2 g methylsulfide, 0,3 g skatol en 1 g 15 boterzuur per liter medium behoren. Behalve F-componenten konden enterale rottings-, geurende materialen die geurende zwavel-, stikstof-en koolstofverbindingen omvatten, zoals natriumsulfide, mercaptan, indol, azijnzuur en propionzuur, worden gekozen voor de test zonder belangrijke verschillen in de resultaten 20 1014166 -20- (Tabel 11)
Correlatie tussen aantal subcultures en titer van Lactobacillus elearana in medium dat F-bestanddelen bevat.
Type Medium Toegevoegd Test-bacterie, Afname (%) Aantal subcultures en titer materiaal FERM-Nr. na 72 uur in 1* generatie ___________ S‘> Nz> 1« I 3» | 6* 9» ~~
Lage- a-1 F-compo- P-17148,BP-6972 50 40 © ® ©~o O
concen- nenten P-17149,BP-6971 55 50 φ φ φ_0 O
medium"__P-17150, BP-6973 70_ 65_ φ_ φ_ φ-ρ Φ-0 a-2 F-compo- P-17148, BP-6972 50 40 φ φ φ-ο Ο nenten Ρ-17149,ΒΡ-6971 50 75 φ φ φ_ρ Ο __Ρ-17150,ΒΡ-6973 65_ 60 φ φ φ_0 Ο a-3 F-compo- P-17148, BP-6972 50 1Ö φ "φ φ~ο θ' nenten Ρ-17149, ΒΡ-6971 50 50 φ φ φ_0 Ο-Δ ___Ρ-17150,ΒΡ-6973 65_ 60__φ_ φ φ-ρ 0~Δ
Mode- b-1 F-compo- P-17148, BP-6972 50 40 φ φ Ο Ο-Δ rate_ nenten Ρ-17149,BP-6971 50 45 φ φ Ο Ο-Δ t°atie-__Ρ-17150,ΒΡ-6973 60 60 φ φ ρ Ο-Δ medium b-2 F-compo- P-17148,BP-6972 50 40 φ Ο Ο-Δ Δ nenten Ρ-17149,ΒΡ-6971 55 50 φ φ Ο Ο-Δ Ρ-17150,ΒΡ-6973 65 60 φ φ Ο-Δ Ο b-3 F-compo- P-17148, BP-6972 50 40 φ φ Ο Ο nenten Ρ-17149,ΒΡ-6971 50 50 φ φ Ο Ο-Δ Ρ-17150,ΒΡ-6973 65 60 φ φ φ~ο Ο
Hoge- c-1 F-compo- P-17148,BP-6972 50 40 Ο Ο Ο-Δ Δ-Χ concen- nenten Ρ-17149, ΒΡ-6971 50 45 Ο Ο Δ Δ-Χ tratie___Ρ-17150,ΒΡ-6973 60 60__φ_ Ο__Ο-Δ Δ_
medium c-2 F-compo- P-17148, BP-6972 45 35 ®~o Ο Δ-Χ X
nenten P-17149,BP-6971 45 45 φ_0 Ο Δ-Χ X
__P-17150,BP-6973 55 55 0 Ο Δ-Χ X
c-3 F-compo- P-17148,BP-6972 45 35 φ Ο Δ X
nenten P-17149,BP-6971 45 45 φ Ο Δ X
P-17150,BP-6973 55 55 φ„0 Ο Δ X
5 1) geurende zwavelverbindingen; 2) geurende stikstofverbindingen
Tabel 11 laat zien dat de toevoeging van F-bestanddelen aan het basismedium als de subculture en de kweekmediums van belang was voor 10 voorkomen dat de Lactobacillus-clearans-titer afnam., waarbij dit in het bijzonder waar was als het basismedium een hoge-concentratie- nutriëntenmedium was. Het was ook duidelijk dat er relatief minder afname in titer was bij de derde generatie van subculture als de F-componenten werden toegevoegd. De titer nam daarna echter snel af.
15 In termen van conserveermiddelen toont Tabel 12 de veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans als eiwit-aminozuur-gebaseerde conserveermiddelen werden toegevoegd, toont Tabel 13 de veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans als 1014166 -21- sacchariden en dierlijk-eiwit-vitamine-mineralen-complex-conserveermid-delen werden toegevoegd en toont Tabel 14 de veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans als plantaardig-eiwit-vitamine-mineralen-complex-conserveermiddelen en andere conserveer-5 middelen werden toegevoegd. Hier verwijzen alfalfasap en klaversap naar vloeistoffen die worden gemaakt door 10-voudig water toe te voegen aan alfalfagras of klavergras voor maken van een sap, waarbij deze respectievelijk worden toegepast als alfalfasap of klaversap. De hoeveelheden waarmee de conserveermiddelen worden toegevoegd, worden 10 uitgedrukt in termen van de gewichtsverhouding van het conserveermiddel ten opzichte van het gewicht van de levensvatbare cellen. Bijvoorbeeld geeft een hoeveelheid van 10 aan dat conserveermiddel werd toegevoegd met een hoeveelheid van 10 keer die van de levensvatbare cellen. De levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans wordt uitgedrukt als een 15 percentage, waarbij 100% het levensvatbare celaantal onmiddellijk na vriesdrogen is. De levensvatbaarheid tijdens vriesdrogen wordt aangeduid als concentrische cirkels als de levensvatbaarheid meer dan 90% is, als twee concentrische cirkels tot één cirkel als het percentage van 80 tot 90% is, als één cirkel als het percentage 60 tot 80% is, als een 20 vierkant als het percentage 40 tot 60% is, als een driehoek als het percentage 20 tot 40% is en als een "x" als het percentage minder dan 20% is. Veranderingen in de titer van Lactobaci1lus clearans tijdens opslag worden aangegeven als ++ als de titer werd gehandhaafd op een hoog niveau, als + als de titer iets afnam, als ± als de titer duidelijk 25 afnam, als - als de titer aanzienlijk afnam en al3 - - als de titer snel afnam.
1014166 (Tabel 12)
Veranderingen in levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met toepassing van eiwit-aminozuur-gebaseerde conserveermiddelen -22-
Conserveermiddel Resul- Veranderingen in tijd tijdens opslag taten tijdens vries- drogen __________________________________
Type Toege- Levensvatbaarheid (%) Veran- voegde deringen hoeveel in titer heid _______ 3 6 12 ________,___maanden maanden maanden__
Pepton 10 Δ 30 10 2 —
Casaminozuur 10 □ 50 35 20 ±
Cystine 20 O 70 50 35 +
Cysteine 20 O 65 45 30 +
Methionine 20 O 65 45 30 +
Taurine__20_ O 70 50 35 +
Alanine 20 A 30 15 5 -
Glycine__20_ Δ__25__10 2 -
Natrium- 20 □ 60 40 20 ± glutamaat___________ _______
Amino- 20 □ 65 45 25 ± boterzuur ___________ _______ _________________
Leucine 20 Δ 25 10 3 -
Lysine 20 Δ 30 15 5 ί
Tryptofaan 20 Δ__25 10 4 -
Arginine 20 Δ 20 5 2 -
Asparagine 20 □_ 55 30 15 ±
Ovalbumine 20 Ο 70 50 30 +
Soiawei 20 Ο 60__45__25 ί
Eigeel__100_Ο__50__40__30_±_
Gelatine 10 X 10 3 0 — 5 * uitgedrukt als gewichtsverhouding van conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen 10 .1014166 -23- (Tabel 13)
Veranderingen in levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met toepassing van sacchariden en dierlijk-eiwit-vitaminen-mineralen-complex-conserveermiddelen 5 ___
Conserveermiddel Resul- Veranderingen in tijd tijdens opslag taten tijdens vries- _________________________ drogen ___
Type Toege- Levensvatbaarheid (%) Veran- voegde deringen hoeveel in titer heid _______ 3 6 12 ___________________ maanden maanden maanden
Sacchariden
Lactose__100_ Ώ__70__50__20_±_
Oplosbaar 100 □ 60 40 15 ± zetmeel______________
Aardappel- 100 Δ 30 20 10 zetmeel_______
Sucrose 20 Δ 30 15 5 -
Glucose 20_Δ__25__15 5 -
Trehalose 40 O 75 50 30 +
Eiwit- vitamine- mineralen- complexen ___________________________
Poeder- 150 O 70 50 35 ± taptemelk _______ ____________ ________
Leverextract 10 □ 60_ 40 20 ±
Gistextract 10__□__50__30__20_±_
Hartextract 10_ Δ__25__15 5 -
Paardeserum 250__□__60__40__25_±_
Gist (gedode 100 O 60 50 30 + bakkersgist- cellen) ^_L______L_____ ______ _____ * uitgedrukt als gewichtsverhouding van conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen.
10 1014)60 (Tabel 14)
Veranderingen in levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met toepassing van plantaardig-eiwit-vitaminen-mineralen-complexen en andere -24-
Conserveermiddel Resul- Veranderingen in tijd tijdens opslag taten tijdens vries- drogen
Type Toege- Levensvatbaarheid (%) Veran- voegde deringen hoeveel in titer heid ________________________ 3 6 12 ____maanden maanden maanden _
Eiwit- vitamine- mineraal- complexen (plant)________
Chlorella__50__0_ 65 45 35 +
Chlorella- 20 □ 60 40 30 ± CGF_______
Rijste- 20 O 60 50 35 + zemelen _________________ _______
Zemelen 20 _0__55 45 33 +
Alfalfasap 40 □ 50 35 25 ± (gras)_______
Poedermiso 20_ Δ__20__10 7 -
Azukipoeder 20_ Δ 25__10 _5___-
Sobanoedel- 20 X 20 5 1 — meel ________________ ________
Klaver sap__250__□__60__45__25_ ±_
Tarwekiem- 50 □ 65 5 25 ± extract _______ ______ _________
Sojamelk 100 O 70 55 35 +
Andere
Tomatensap__50_JD__50__35__20_±_
Wortelsap__50__□__55__40 25 +_
Sinaasappel- 50 X 15 2 0,05 — sap________
Grapefruit- 50 □ 50 30 20 ± sap________
Aloëpoeder__10 Δ 35 20 10 +
Groene-thee- 20 Δ 35 20 15 ± poeder _______________ _________
Fysiologische 1,7 X 5 0 0 zoutoplossing ___ 5 * uitgedrukt als gewichtsverhouding van conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen.
1014166 -25-
Uit Tabellen 12, 13 en 14 wordt duidelijk dat de toepassing van conserveermiddelen die hoge levensvatbaarheid verschaffen tijdens het vriesdrogen van Lactobacillus clearans. ook resulteerde in goede levensvatbaarheid tijdens opslag en dat tegelijkertijd geringere afnamen 5 in de titer werden verkregen. Dat wil zeggen dat het door alleen bepalen van de levensvatbaarheid tijdens vriesdrogen mogelijk was om dramatische voortgang te maken bij navolgend onderzoek betreffende het snelle onderzoek van condities, van de keuze van de conserveermiddelen tot de temperatuur voorafgaand aan invriezen en van vriesdrogen, de droogtijd 10 en dergelijke, zonder veel tijd in beslag te nemen. Als gevolg werd duidelijk dat algemeen toegepaste werkwijzen voor conventioneel bekende Lactobacillus geschikt waren voor condities als de temperatuur voorafgaand aan invriezen en de temperatuur van vriesdrogen en de droogtijd tijdens het bewerken van Lactobacillus clearans, maar de 15 werkzaamheid van het conserveermiddel de belangrijkste factor was voor behouden van de levensvatbaarheid en titer.
Conserveermiddelen zonder conserverende uitwerkingen als deze op zichzelf werden toegepast, werden uitgesloten en de overgebleven conserveermiddelen werden in verscheidene combinaties onderzocht. Een 20 aantal van de resultaten worden gegeven in Tabellen 15, 16 en 17. Hier worden de hoeveelheden waarmee de conserveermiddelen worden toegevoegd, uitgedrukt als de gewichtsverhouding van het conserveermiddel ten opzichte van het gewicht van levensvatbare cellen. Bijvoorbeeld duidt een hoeveelheid van 10 aan dat het conserveermiddel werd toegevoegd met 25 een hoeveelheid die 10 keer dat van de levensvatbare cellen was. De levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans tijdens vriesdrogen wordt aangeduid als twee concentrische cirkels als de levensvatbaarheid meer dan 90% is, als twee concentrische cirkels naar één cirkel als het percentage 80 tot 90% is, als één cirkel als het percentage 60 tot 80% 30 is, als een vierkantje als het percentage 40 tot 60% is, als een driehoekje als het percentage 20 tot 40% is en als een "x" als het percentage minder dan 20% is. Een vergelijking van Tabellen 13 en 14 onthult dat de conserveermiddelen betere levensvatbaarheid verschaften als deze in combinatie werden toegepast dan wanneer deze afzonderlijk 35 werden toegepast. De gecombineerde toepassing van dieren-afgeleide conserveermiddelen met planten-afgeleide types resulteerde natuurlijk in 1014166 -26- goede levensvatbaarheid tijdens vriesdrogen, maar ook in betere uitwerkingen tijdens navolgende opslag. De resultaten worden gegeven in Tabel 18, waarbij de veranderingen in de titer van Lactobacillus clearans tijdens opslag worden aangeduid als ++ als de titer werd 5 gehandhaafd op een hoog niveau, als + als de titer lichtelijk afnam, als ± als de titer duidelijk afnam, als - als de titer aanzienlijk afnam en als - - als de titer snel afnam.
(Tabel 15) 10 Veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met combinaties van twee types conserveermiddel
Type conserveermiddel Toegevoegde Resultaat tijdens __hoeveelheid*_ vriesdrogen
Ovalbumine 10 0-Φ
Trehalose__20 _____________________
Ovalbumine 10 O
Taptemelk 100
Ovalbumine 10 ©
Sojamelk__70
Ovalbumine 10 0~©
Wortelsap__35_______
Trehalose 20 0~Φ
Taptemelk 100 ____________________
Trehalose 20 Φ
Sojamelk__70_______
Trehalose 20 O
Wortelsap__35_________
Taptemelk 75 Φ
Sojamelk 50 ___________________
Taptemelk 100 0~Φ
Wortelsap__35_________
Sojamelk 70 O
Wortelsap 35 1 1014166 * uitgedrukt als gewichtsverhouding conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen.
(Tabel 16)
Veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met combinaties van drie types conserveermiddel -27-
Type conserveermiddel Toegevoegde Resultaat tijdens hoeveelheid* vriesdrogen
Ovalbumine 7 0
Trehalose 15
Taptemelk 80
Ovalbumine 7 0~®
Trehalose 15
Sojamelk 65 _
Ovalbumine 7 0~®
Trehalose 15
Wortelsap__30__
Ovalbumine 7 ©
Taptemelk 70
Sojamelk 45
Ovalbumine 7 0-Φ
Taptemelk 70
Wortelsap__30__
Trehalose 15 ©
Taptemelk 70
Sojamelk__45__
Trehalose 15 0~®
Taptemelk 70
Wortelsap 25
Taptemelk 15 ®
Sojamelk 45
Wortelsap_ 25___ 5 * uitgedrukt als gewichtsverhouding van conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen.
1014188 (Tabel 17)
Veranderingen in de levensvatbaarheid van Lactobacillus clearans met combinaties van vier tot vijf types conserveermiddel -28- 5 ____
Type conserveermiddel Toegevoegde Resultaat tijdens hoeveelheid* vriesdrogen
Ovalbumine 7 ©
Trehalose 15
Taptemelk 70
Soiamelk__45___
Ovalbumine 7 0~©
Trehalose 15
Taptemelk 70
Wortelsap 25
Ovalbumine 7 ®
Trehalose 15
Sojamelk 45
Wortelsap 25
Trehalose 15 ®
Taptemelk 70
Sojamelk 45
Wortelsap 25 ^
Ovalbumine 7 ®
Trehalose 15
Taptemelk 70
Sojamelk 45
Wortelsap_ 25__ * uitgedrukt als gewichtsverhouding van conserveermiddel ten opzichte van gewicht van levensvatbare cellen.
Λ 01 ^16 6 -29- (Tabel 18)
Veranderingen in de levensvatbaarheid en titer van Lactobacillus clearans met toepassing van conserveermiddelen die meer dan 90% levensvatbaarheid verschaffen tijdens vriesdrogen
Over tijd gemidddelde Veranderingen in levensvatbaarheid titer 3 6 12 ________________________ maanden maanden maanden ______________
Als conserveer- 95% 80% 70% ++ middelen worden toegepast die tijdens vriesdrogen 90% levensvatbaarheid verschaffen___________ 5
Het was duidelijk dat uitstekende conserveringseffecten werden verkregen met de gezamenlijke toepassing van materialen waaraan 10 lactobacilli hechten en waarop ze in symbiotisch verband leven in de natuur, zoals rijstezemelen, zemelen, gist, chlorella, grassen, zoals klaver en vruchten, zoals druiven, samen met de materialen die met een enkelvoudige cirkel of enkelvoudig vierkantje worden gewaardeerd in Tabellen 12, 13 en 14, zoals sojamelk.
15 Tevens werd bevestigd dat de conserveerbaarheid verder kon worden verbeterd als materialen die effectief de titer onderhouden, zoals geurende zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen, aminozuren, zoals zwavel-bevattende aminozuren en glutaminezuur, vitaminen, zoals vitamine C, en calciumpantothenaat, mineralen, zoals zink en magnesium, 20 en galpoeder werden toegevoegd, ofwel op zichzelf ofwel in combinatie, met hoog werkzame conserveermiddelen tijdens de subculture van Lactobacillus clearans.
Verscheidene vormen van conservering werden beschouwd in toevoeging aan vriesdrogen als werkwijzen voor conserveren van 25 Lactobacillus clearans. zoals natte conservering van vloeistoffen of celmassa, halfdroge conservering met ongeveer 15% vochtgehalte, droge conservering met een vochtgehalte van ongeveer 8% en ultrakoude conservering bij -40 tot -196*C, maar werden in de grond van de zaak goede resultaten verkregen als deze werden geconserveerd met 30 conserveermiddelen die de hierboven beschreven uitstekende effecten lieten zien tijdens toepassing bij vriesdrogen.
1014166 -30-
De onderhavige uitvinding wordt hieronder met verwijzing naar voorbeelden in detail beschreven, maar de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding wordt niet beperkt tot alleen deze voorbeelden.
5 (Voorbeeld 1) 10 L medium (pH 7,0) dat 5 g vleesextract (Wako Pure Chemical Industries LTD.), 5 g pepton (Wako Pure Chemical Industries LTD.), 3 g natriumbutyraat (Wako Pure Chemical Industries LTD.), 1 ml waterige ammoniak (Wako Pure Chemical Industries LTD.), 10 g glucose (Wako Pure 10 Chemical Industries LTD.), 0,5 g cystine (Wako Pure Chemical Industries LTD.) en 2 g gistextract (Nihon Seiyaku) per liter medium omvatte, werd geïnoculeerd met Lactobacillus clearans (FERM P-17150, BP-6973) voor 72 uur anaërobe kweek bij 37*C. De kweekbouillon werd gecentrifugeerd, wat 10 g van een celmassa gaf. De massa werd gewassen met 500 ml 15 fysiologische zoutoplossing (bereid uit natriumchloride van Wako Pure Chemical Industries LTD.) en twee keer gecentrifugeerd. De resulterende gezuiverde celmassa werd geïntroduceerd bij een oplossing die bestond uit 500 ml sojamelk (van Tsujimoto Shokuhin Kogyo), 50 g taptemelk (Snow Brand Milk Products Co.), 30 g trehalose (Hayashibara KK) en 0,5 g 20 cystine (Wako Pure Chemical Industries LTD) en goed geroerd. Het mengsel werd gevriesdroogd bij vacuüm d.m.v. een gewone werkwijze, wat 133 g bacteriecelpreparaat gaf. Het celaantal was 3,0 x 10’ cellen/g. Het celpreparaat werd opgeslagen bij kamertemperatuur met een silicagel-dessicans [droogmiddel] (Manabe Kaseihin) en een zuurstof-absorbens 25 (Mitsubishi Gas Chemical Co.), het levensvatbare-celaantal werd over 18 maanden onderzocht om de levensvatbaarheid te berekenen en de titer werd getest, met de in Tabel 19 gegeven resultaten. Tabel 19 laat zien dat een hoge Lactobacillus-clearans-titer werd gehandhaafd, nagenoeg zonder neergang.
30 1014166 -31- (Tabel 19)
Voorbeelden van veranderingen in levensvatbare-cellenaantal van Lactobacillus clearans. levensvatbaarheid en titer
Aantal levensvatbare cellen/g Verander ingen in titer
Onmidde- 3 maanden 6 maanden 12 maanden 18 maanden lijk na bereiding ___________ ____________ __________ ___________ 3,0x10* 2,8x10*__2,5x10* 2,0x10* 1,5x10* ++
Levensvat- 83 66 50 baarheid _________ _______ _________ _________ 5 (Voorbeeld 2) 10 L medium (pH 7,0) dat 30 g sojawei (Fuji Oil Co.), 1 g pepton 10 (Wako Pure Chemical Industries LTD), 1 g cystine (Wako Pure Chemical
Industries LTD), 3 g natriumacetaat (Wako Pure Chemical Industries LTD), 0,2 g natriumsulfide (Wako Pure Chemical Industries LTD), 0,01 g calciumpantothenaat (Wako Pure Chemical Industries LTD) en 2 g bakkersgist (Oriental Yeast) per liter medium omvatte, werd geïnoculeerd 15 met Lactobacillus clearans (FERM P-17149, BP-6971) voor 72 uur anaërobe kweek bij 37'C. De kweekbouillon werd gecentrifugeerd, wat 28 g gaf van een celmassa die bestond uit Lactobacillus clearans en dode gistcellen. De massa werd gewassen met 500 ml fysiologische zoutoplossing (bereid met natriumchloride afkomstig van Wako Pure Chemical industries LTD) en 20 twee keer gecentrifugeerd. De resulterende gezuiverde celmassa werd geïntroduceerd bij 500 ml water dat 10 g gedroogde chlorella (Yamai), 25 g trehalose (Hayashibara KK) en 5 g oplosbaar zetmeel (Wako Pure Chemical Industries LTD) bevatte, en goed geroerd. Het mengsel werd daarna bij vacuüm gevriesdroogd d.m.v. een gewone werkwijze, wat 43 g 25 bacteriecelpreparaat gaf. Het celaantal was 10.0 x 10* cellen/g. Het celpreparaat werd opgeslagen bij kamertemperatuur in glazen potten die werden afgeschermd van licht, samen met silicageldessicans (Manabe Kaseihin) en een zuurstofabsorbens (Mitsubishi Gas Chemical Co.), het levensvatbare-cellenaantal werd over 18 maanden onderzocht om de levens-30 vatbaarheid te berekenen en de titer werd getest, met de in Tabel 20 1014163 -32- gegeven resultaten. Tabel 20 laat zien dat een hoge Lactobacillus-clearans-titer werd behouden, met nagenoeg geen afname.
(Tabel 20 5 Voorbeelden van veranderingen in levensvatbare-cellenaantal van Lactobacillus clearana, levensvatbaarheid en titer
Aantal levensvatbare cellen/g Verander ingen in _____ titer
Onmidde- 3 maanden € maanden 12 maanden 18 maanden lijk na bereiding______ 10,0x10* 9,5x10’__8,5x10*__7,0x10* 5,0x10* ++
Levensvat- 85 70 50 baarheid ___________ 10 (Vergelijkingsvoorbeeld 1) 10 L medium (pH 7,0) dat 10 g vleesextract (Wako Pure Chemical Industries LTD), 10 g pepton (Wako Pure Chemical Industries LTD), 3 g gistextract (Nihon Seiyaku), 10 g glucose (Wako Pure Chemical Industries LTD), 2 g K2HPO«, 1 g MgS0«*7H20, 1 g NaCl en 1 g CaCl*2H20 per liter 15 medium omvatte, werd geinoculeerd met Lactobacillus clearans (FERM PM17150, BP-6973) voor 72 uur anaërobe kweek bij 37*C. De kweekbouillon werd gecentrifugeerd, wat 18 g van een celmassa gaf. De massa werd gewassen met 500 ml fysiologische zoutoplossing (bereid met natriumchloride afkomstig van Wako Pure Chemical Industries LTD) en twee 20 keer gecentrifugeerd. De resulterende gezuiverde celmassa werd geïntroduceerd bij 1000 ml 20%-oplossing oplosbaar zetmeel (Wako Pure Chemical Industries LTD) en goed geroerd. Het mengsel werd gevriesdroogd bij vacuüm d.m.v. een gewone werkwijze, wat 204 g bacteriecelpreparaat gaf. Het celaantal was 4,5 x 10* cellen/g. Het 25 celpreparaat werd opgeslagen bij kamertemperatuur met een silicagel- dessicans (Manabe Kaseihin) en een zuurstofadsorbens (Mitsubishi Gas
Chemical Co.), het levensvatbare-celaantal werd over 18 maande onderzocht om de levensvatbaarheid te berekenen en de titer werd getest, met de in Tabel 21 gegeven resultaten. Tabel 21 laat zien dat niet 30 alleen de levensvatbaarheid snel afnam, maar ook dat de titer 1014166 -33- aanzienlijk afnam als Lactobacillus clearans werd gekweekt in een gewoon medium en werd geconserveerd d.m.v. een gewone werkwijze.
(Tabel 21) 5 Voorbeeld van veranderingen in levensvatbare-celaantal, levensvatbaarheid en titer van Lactobacillus clearans in gewoon medium en met gewone conservering
Aantal levensvatbare cellen/g Verander ingen in _>i__ titer
Onmidde- 3 maanden 6 maanden 12 maanden 18 maanden lijk na bereiding ___________________ 4,5xl09 2,5xl09__1, 5xl09 4, 0x10* 0___
Levensvat- 55 33 9 0 baarheid______ 10 (Vergelijkingsvoorbeeld 2) 10 L medium (pH 7,0) dat 10 g vleesextract (Wako Pure Chemical 15 Industries LTD), 10 g pepton (Wako Pure Chemical Industries LTD), 3 g gistextract (Nihon Seiyaku), 10 g glucose (Wako Pure Chemical Industries LTD), 2 g K2HP04, 1 g MgS04*7H20, 1 g NaCl en 1 g CaCl2«2H20 per liter medium omvatte, werd gexnoculeerd met Lactobacillus clfiaraag (FERM P-17150, BP-6973) voor 72 uur anaërobe kweek bij 37’C. De kweekbouillon 20 werd gecentrifugeerd, wat 18 g van een celmassa gaf. De massa werd gewassen met 500 ml fysiologische zoutoplossing (bereid met natriumchloride afkomstig van Wako Pure Chemical Industries LTD) en twee gecentrifugeerd. De resulterende gezuiverde celmassa werd geïntroduceerd bij een oplossing die bestond uit 900 ml sojamelk (van Tsujimoto 25 Shokuhin Kogyo), 90 g taptemelk (Snow Brand Milk Products Co.), 54 g trehalose (Hayashibara KK) en 0,9 g cystine (neutrale) (Wako Pure
Chemical Industries LTD) en goed geroerd. Het mengsel werd gevriesdroogd bij vacuüm d.m.v. een gewone werkwijze, wat 239 g bacteriecelpreparaat gaf. Het celaantal was 5,0 x 10® cellen/g. Het celpreparaat werd 30 opgeslagen bij kamertemperatuur met een silicageldessicans (Manabe 1014156 -34-
Kaseihin) en een zuurstofabsorbens (Mitsubishi Gas Chemical Co.), het levensvatbarecelaantal werd over 18 maanden onderzocht om de levensvatbaarheid te berekenen en de titer werd getest, met de in Tabel 22 gegeven resultaten. Tabel 22 laat zien dat goede levens— 5 vatbaarheid werd verkregen, hoewel niet zo goed als bij Voorbeeld 1, als Lactobacillus clearans werd gekweekt d.m.v. een gewone werkwijze en werd geconserveerd d.m.v. een de werkwijze van de onderhavige uitvinding. De titer nam echter enigszins af tijdens kweek en had de neiging daarna verder te gaan met afnemen, al was dat geleidelijk.
10 (Tabel 22)
Voorbeelden van veranderingen in levensvatbare-celaantal, levensvatbaarheid en titer van Lactobacillus clearans in gewoon medium, maar met conservering d.m.v. de onderhavige uitvinding 15 __
Aantal levensvatbare cellen/g Verander ingen in titer
Onmidde- 3 maanden 6 maanden 12 maanden 18 maanden lijk na bereiding _________ ______ ______ _______ 5,0x10» 4,5xl09__3,8x10» 2,5x10» 2,0x10» ±
Levensvat- 90 76 50 40 baarheid__________ _ (Vergelijkingsvoorbeeld 3) 20 10 L medium (pH 7,0) dat 5 g vleesextract (Wako Pure Chemical industries LTD), 5 g pepton (Wako Pure Chemical Industries LTD), 3 g natriumbutyraat (Wako Pure Chemical Industries LTD), 1 g waterige ammoniak (Wako Pure Chemical Industries LTD), 10 g glucose (Wako Pure
Chemical Industries LTD), 0,5 g cystine (Wako Pure Chemical Industries 25 LTD) en 2 g gistextract (Nihon Seiyaku) per liter medium omvatte, werd geïnoculeerd met Lactobacillus clearans (FERM P-17150, BP-6973) voor 72 uur anaërobe kweek bij 37*C. De kweekbouillon werd gecentrifugeerd, wat 10 g van een celmassa gaf. De massa werd vervolgens gewassen met 500 ml fysiologische zoutoplossing (bereid met natriumchloride afkomstig van 30 Wako Pure Chemical Industries LTD) en twee keer gewassen. De i A * 4 4 h V, (J U L ' i 1 ^ -35- resulterende gezuiverde celmassa werd geïntroduceerd bij 550 ml een 20%-oplossing van oplosbaar zetmeel (Wako Pure Chemical Industries LTD) en goed geroerd. Het mengsel werd gevriesdroogd bij vacuüm d.m.v. een gewone werkwijze, wat 112 g bacteriecelpreparaat gaf. Het celaantal was 5 2,5 x 10* cellen/g. Het celpreparaat werd bij kamertemperatuur opgeslagen met een silicageldessicans (Manabe Kaseihin) en een zuurstofabsorbens (Mitsubishi Gas Chemical Co.), het levensvatbare-cellenaantal werd over 18 maanden onderzocht om de levensvatbaarheid te berekenen en de titer werd getest, met de in Tabel 23 gegeven 10 resultaten. Tabel 23 laat zien dat de levensvatbaarheid neigde hetzelfde te zijn als die bij Vergelijkingsvoorbeeld 1 als Lactobacillus clearans werd gekweekt in het medium van de onderhavige uitvinding en werd geconserveerd d.m.v. een gewone werkwijze. De titer daalde niet zo snel als die dat deed bij Vergeli jkingsvoorbeeld 1, maar had de neiging 15 geleidelijk af te nemen.
(Tabel 23)
Voorbeeld van veranderingen bij levensvatbare-cellenaantal, levensvatbaarheid en titer van Lactobacillus clearans in medium van de 20 onderhavige uitvinding, maar d.m.v. gewone conservering
Aantal levensvatbare cellen/g Verander ingen in ____________________ titer
Onmidde- 3 maanden 6 maanden 12 maanden 18 maanden lijk na bereiding___________ 2,5x1ο9 2, 5xl09__Ι,ΟχΙΟ9__3, 8xlOa 1,0x10*
Levensvat- 60 40 15 0,4 baarheid _^_________ _________
Lactobacillus clearans bestaat uit nieuwe stammen van 25 lactobacilli die geurende zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen utiliseren en zijn opgemerkt als effectieve stammen die een krachtig zuiverend vermogen laten zien in de darmen vanwege de bovenstaande functies. Er zijn echter geen bekende werkwijzen als deze voor verkrijgen van lactobacilli met een hoge titer die dergelijke functies 30 vertonen, of werkwijzen voor laten aanhouden van de hoge titer die wordt verkregen, gedurende lange tijdsduren.
1014166 -36-
De toepassing van het kweekmedium bij de onderhavige uitvinding maakt mogelijk dat Lactobacillus clearans met een hoge titer wordt gekweekt op een stabiele wijze zodat geurende schadelijke zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen zonder meer kunnen worden afgebroken 5 en geëlimineerd. Dienovereenkomstig worden niet alleen enterale geurende schadelijke materialen verlaagd, maar kunnen bacteriën die als zijnde nuttig voor de darmflora worden beschouwd, dramatisch worden verhoogd, terwijl de groei van schadelijke bacteriën sterk kan worden onderdrukt.
De toepassing van de werkwijze van conserveren bij de 10 onderhavige uitvinding maakt mogelijk dat Lactobacillus clearans met een hoge titer gedurende lage tijdsduren kan worden geconserveerd zodat geurende schadelijke zwavel-, stikstof- en koolstofverbindingen zonder meer kunnen worden afgebroken en geëlimineerd als dat nodig is.
1014166
Claims (16)
1. Kweekmediura voor kweken van Lactobacillus clearans, welk de toevoeging omvat van ten minste één van of beide van 5 natriumsulfide en waterige ammoniak, zodat tijdens de kweek van de Lactobacillus clearans ten minste één van of beide van natriumsulfide en ammoniak wordt vermindert door Lactobacillus clearans ten tijde van het 24* uur van kweek.
2. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de 10 toevoeging omvat van ten minste één van of meer van geurende zwavelverbindingen, geurende stikstofverbindingen en geurende koolstofverbindingen, aan het kweekmedium, op de in Conclusie 1 naar voren gebrachte wijze.
3. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. waarbij de 15 geurende zwavelverbinding zoals die in Conclusie 2 naar voren wordt gebracht, ten minste één of meer is van natriumsulfide, waterstofsulfide, ammoniumsulfide, methylmercaptan, ethylmercap-tan, dimethylmercaptan, dimethylsulfide, dimethyldisulfide, diëthylsulfide, dibutylsulfide en derivaten daarvan. 20
4 . Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. waarbij de geurende stikstofverbinding zoals die in Conclusie 2 naar voren wordt gebracht, ten minste één of meer is van ammoniak, skatol, indol, acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, triëthylamine of derivaten daarvan. 25
5 . Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. waarbij de geurende koolstofverbinding zoals die in Conclusie 2 naar voren wordt gebracht, ten minste één of meer is van mierezuur, azijnzuur, propionzuur, boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butylalcohol, amylalcohol 30 en derivaten daarvan.
6. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de toevoeging omvat van ten minste één van of meer van zwavel- 1014166 -38- bevattend aminozuur, glutaminezuur, lysine en asparaginezuur, als een aminozuur, aan een kweekmedium, zoals naar voren wordt gebracht in één van Conclusies 1 tot en met 5.
7. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de 5 toevoeging omvat van ten minste één van of meer van vitamine C, vitamine E, vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur en nicotinamide, als een vitamine, aan een kweekmedium, zoals naar voren wordt gebracht in één van Conclusies 1 tot en met 6.
8. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de 10 toevoeging omvat van ten minste één van of meer van mangaan, zink, magnesium en molybdeem, als een mineraalbestanddeel, aan een kweekmedium, zoals naar voren gebracht in één van conclusies 1 tot en met 7.
9. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welk de 15 toevoeging omvat van ten minste één van of meer van chlorella-CGF, sojamelk en galpoeder aan een kweekmedium zoals in één van conclusies 1 tot en met 8 naar voren wordt gebracht.
10. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans, welk de toevoeging omvat van natriumsulfide met een concentratie van 20 500 p.p.m. aan een kweekmedium zoals in één van conclusies 1 tot en met 9 naar voren wordt gebracht, waarbij de natriumsulfide met 10% of meer wordt verlaagd ten tijde van het 24® uur van kweek tijdens de kweek van Lactobacillus clearans.
11. Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans. welke de 25 toevoeging omvat van waterige ammoniak met een concentratie van 500 p.p.m. aan een kweekmedium zoals naar voren wordt gebracht in één van conclusies 1 tot en met 9, waarbij de ammoniak met 10% of meer wordt verlaagd ten tijde van het 24® uur van kweek tijdens de kweek van Lactobacillus clearans. 30
12 . Werkwijze voor conserveren van Lactobacillus clearans. welke de aanwezigheid omvat van ten minste één van of meer van zwavel-bevattend aminozuur, ovalbumine, galpoeder, trehalose, raffinose, dode gistcellen, chlorella, rijstezemelen, zemelen, sojamelk en 1014166 -39- wortelsap, als een conserveermiddel rondom de Lactobacillus clearans tijdens de conservering van Lactobacillus clearans.
13. Werkwijze voor conserveren van Lactobacillus clearans. welke in toevoeging aan een conserveermiddel zoals in Conclusie 12 naar 5 voren wordt gebracht, de toevoeging omvat van ten minste één van of meer van glutaminezuur, lysine, asparaginezuur, vitamine C, vitamine E, vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur, nicotinamide, mangaan, zink, magnesium, molybdeem, natriumsulfide, waterstofsulfide, ammoniumsulfide, methylmercaptan, ethyl- 10 mercaptan, dimethylmercaptan, dimethylsulfide, dimethyldisulfide, diëthylsulfide, dibutylsulfide, ammoniak, skatol, indol, acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, triëthylamine, mierezuur, azijnzuur, propionzuur, boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butyl-15 alcohol, amylalcohol en derivaten daarvan, rondom de Lactobacillus clearans-
14. Werkwijze voor conserveren van Lactobacillus clearans. welke de aanwezigheid omvat van ten minste één van of meer van van dieren afgeleide poedertaptemelk, ovalbumine, lactose, leverextractpoeder 20 en serum, alsmede ten minste één van of meer van van planten afgeleide sojawei, trehalose, raffinose, zetmeel, chlorella, chlorella-CGF, rijstezemelen, zemelen, alfalfasap, klaversap, tarwekiemextract, sojamelk, tomatensap, wortelsap, druivensap, aloëpoeder, groene-thee-poeder, gistextractpoeder en dode 25 gistcellen, als een conserveringsmiddel rondom de Lactobacillus clearans tijdens de conservering van Lactobacillus clearans.
15. Werkwijze voor conserveren van Lactobacillus clearans. welke in toevoeging aan een conserveringsmiddel zoals in Conclusie 14 naar voren wordt gebracht, de toevoeging omvat van ten minste één van 30 of meer van glutaminezuur, lysine, asparaginezuur, vitamine C, vitamine E, vitamine B12, calciumpantothenaat, foliumzuur, nicotinamide, mangaan, zink, magnesium, molybdeem,, natriumsulfide, waterstofsulfide, ammoniumsulfide, methylmercaptan, ethyl- mercaptan, dimethylmercaptan, dimethylsulfide, dimethyldisulfide, 35 diëthylsulfide, dibutylsulfide, ammoniak, skatol, indol, 1 Λ Γ (C- i ! : '! v -J -40- acetanilide, methylamine, dimethylamine, diëthylamine, triëthylamine, mierezuur, azijnzuur, propionzuur, boterzuur, formaldehyde, acetaldehyde, propionaldehyde, crotonaldehyde, fenol, butylalcohol,, amylalcohol en derivaten daarvan, rondom de 5 Lactobacillus clearans.
16. Conserveringswerkwijze voor conserveren van Lactohacillua clearans, zoals in één van Conclusies 12 tot en met 15 naar voren wordt gebracht, waarbij de conserveringswerkwijze één van vriesdrogen, ultrakoude conservering of vloeibare, natte, 10 halfdroge of droge werkwijzen omvat. 1014166
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11015177A JP2000217566A (ja) | 1999-01-25 | 1999-01-25 | ラクトバチラスクリアランスを培養するための培養基および該菌種の保存方法 |
| JP1517799 | 1999-01-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL1014166A1 NL1014166A1 (nl) | 2000-07-27 |
| NL1014166C2 true NL1014166C2 (nl) | 2003-10-23 |
Family
ID=11881545
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL1014166A NL1014166C2 (nl) | 1999-01-25 | 2000-01-25 | Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans en werkwijze voor conserveren van genoemde stam. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20020045242A1 (nl) |
| JP (1) | JP2000217566A (nl) |
| KR (1) | KR20000053595A (nl) |
| CN (1) | CN1265423A (nl) |
| AU (1) | AU739025B2 (nl) |
| BR (1) | BR0000132A (nl) |
| CA (1) | CA2295354A1 (nl) |
| DE (1) | DE10003096A1 (nl) |
| ES (1) | ES2165298A1 (nl) |
| FR (1) | FR2789087A1 (nl) |
| GB (1) | GB2347434A (nl) |
| ID (1) | ID27620A (nl) |
| IT (1) | IT1316985B1 (nl) |
| MX (1) | MXPA00000842A (nl) |
| NL (1) | NL1014166C2 (nl) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4193269B2 (ja) * | 1999-03-04 | 2008-12-10 | ビーエイチピーエイチ カンパニーリミテッド | 新規な生体浄化活性型乳酸菌製剤 |
| DE602004023098D1 (de) * | 2003-07-30 | 2009-10-22 | Bhph Company Ltd | Neues lactobacillus, den lebenden körper aktivierende lactobacilluspräparation sowie präventivmittel oder therapeutikum gegen eine infektion des lebenden körpers |
| SI1506781T1 (nl) * | 2003-11-03 | 2005-08-31 | Volkmann Peter Hansen | |
| ES2259929B1 (es) * | 2005-04-11 | 2007-11-01 | Inabonos, S.A. | Nuevas formulaciones con la capacidad de incrementar la eficiencia de las plantas para asimilar diferentes nutrientes minerales y en especial el hierro en condiciones normales y en condiciones de deficiencia de hierro potencialmente asimilable. |
| DE102006062250A1 (de) * | 2006-12-22 | 2008-06-26 | Roland Saur-Brosch | Verwendung einer Zusammensetzung aus Mineralstoffen und/oder Vitaminen und gegebenenfalls acetogenen und/oder butyrogenen Bakterien zur oralen oder rektalen Verabreichung für die Behandlung und Vorbeugung von abdominalen Beschwerden |
| JP2012192339A (ja) * | 2011-03-16 | 2012-10-11 | Denso Corp | 有機物含有排水の処理方法および処理装置 |
| CN102757923B (zh) * | 2012-07-30 | 2014-04-02 | 陕西省科学院酶工程研究所 | 一种制备高活菌数两歧双歧杆菌菌粉的方法 |
| CN109541205B (zh) * | 2018-12-07 | 2022-01-28 | 河南省商业科学研究所有限责任公司 | 一种益生菌中乳酸菌的检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5218879A (en) * | 1975-06-24 | 1977-02-12 | Seikenkai | Method for culturing a stool deodorant germ belonging to lactobacillus genus |
| GB1584694A (en) * | 1976-05-21 | 1981-02-18 | Seiken Kai Foundational Juridi | Lactobacillus deodorant |
| US4579734A (en) * | 1982-07-12 | 1986-04-01 | Seikenkai Foundational Juridical Person | Novel lactobacillus and uses therefor |
| EP0208818A1 (en) * | 1984-01-17 | 1987-01-21 | Seikenkai Foundational Juridical Person | Biodeodorizer and the process for the preparation thereof |
| US4888292A (en) * | 1976-05-21 | 1989-12-19 | Seikenkai | Deodorant and method for preparing and storing same |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5310129B2 (nl) * | 1972-05-29 | 1978-04-11 | ||
| GB1500326A (en) * | 1975-08-15 | 1978-02-08 | Ferma Gro Corp | Nutrient composition for plants and animals |
| SU1541250A1 (ru) * | 1987-02-27 | 1990-02-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии | Питательна среда дл культивировани рубцовой микробной ассоциации ВНИИСХМ N 1-32 |
-
1999
- 1999-01-25 JP JP11015177A patent/JP2000217566A/ja active Pending
-
2000
- 2000-01-11 AU AU10043/00A patent/AU739025B2/en not_active Expired
- 2000-01-12 CA CA002295354A patent/CA2295354A1/en not_active Abandoned
- 2000-01-21 BR BR0000132-5A patent/BR0000132A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-01-24 GB GB0001567A patent/GB2347434A/en not_active Withdrawn
- 2000-01-24 US US09/490,050 patent/US20020045242A1/en not_active Abandoned
- 2000-01-24 KR KR1020000003281A patent/KR20000053595A/ko not_active Withdrawn
- 2000-01-24 ES ES200000136A patent/ES2165298A1/es active Pending
- 2000-01-25 NL NL1014166A patent/NL1014166C2/nl not_active IP Right Cessation
- 2000-01-25 MX MXPA00000842A patent/MXPA00000842A/es unknown
- 2000-01-25 IT IT2000RM000040A patent/IT1316985B1/it active
- 2000-01-25 CN CN00100322A patent/CN1265423A/zh active Pending
- 2000-01-25 FR FR0000953A patent/FR2789087A1/fr active Pending
- 2000-01-25 DE DE10003096A patent/DE10003096A1/de not_active Ceased
- 2000-01-25 ID IDP20000054D patent/ID27620A/id unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5218879A (en) * | 1975-06-24 | 1977-02-12 | Seikenkai | Method for culturing a stool deodorant germ belonging to lactobacillus genus |
| GB1584694A (en) * | 1976-05-21 | 1981-02-18 | Seiken Kai Foundational Juridi | Lactobacillus deodorant |
| US4888292A (en) * | 1976-05-21 | 1989-12-19 | Seikenkai | Deodorant and method for preparing and storing same |
| US4579734A (en) * | 1982-07-12 | 1986-04-01 | Seikenkai Foundational Juridical Person | Novel lactobacillus and uses therefor |
| EP0208818A1 (en) * | 1984-01-17 | 1987-01-21 | Seikenkai Foundational Juridical Person | Biodeodorizer and the process for the preparation thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHEMICAL ABSTRACTS, vol. 86, no. 25, 1977, Columbus, Ohio, US; abstract no. 187707b, HATA KOSEI ET AL: "cultivation of excrement deodorizing Lactobacillus" page 435; column r; XP008019945 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2165298A1 (es) | 2002-03-01 |
| ITRM20000040A1 (it) | 2001-07-25 |
| KR20000053595A (ko) | 2000-08-25 |
| GB0001567D0 (en) | 2000-03-15 |
| US20020045242A1 (en) | 2002-04-18 |
| AU1004300A (en) | 2000-10-12 |
| IT1316985B1 (it) | 2003-05-26 |
| AU739025B2 (en) | 2001-10-04 |
| BR0000132A (pt) | 2001-10-30 |
| DE10003096A1 (de) | 2000-08-10 |
| ITRM20000040A0 (it) | 2000-01-25 |
| GB2347434A (en) | 2000-09-06 |
| ID27620A (id) | 2001-04-19 |
| CA2295354A1 (en) | 2000-07-25 |
| MXPA00000842A (es) | 2003-07-28 |
| NL1014166A1 (nl) | 2000-07-27 |
| CN1265423A (zh) | 2000-09-06 |
| FR2789087A1 (fr) | 2000-08-04 |
| JP2000217566A (ja) | 2000-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Parlindungan et al. | Factors that influence growth and bacteriocin production in Lactiplantibacillus plantarum B21 | |
| KR910003307B1 (ko) | 락토바실루스-함유 식품 및 음료수의 제조방법 | |
| CN110373367B (zh) | 一种具有农药降解活性的植物乳杆菌、其制备方法及应用 | |
| CN101273757B (zh) | 罗伊氏乳酸杆菌冻干制剂及其制备方法 | |
| CN101412983A (zh) | 一种凝结芽孢杆菌及高密度培养的芽孢制剂的制备及其应用 | |
| GB1584694A (en) | Lactobacillus deodorant | |
| JP2010534470A (ja) | 亜鉛強化バイオマス、その調製方法、および、それを含むプロバイオティック品、化粧品、ダイエタリー品および栄養補給品 | |
| CN108048363A (zh) | 一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法 | |
| NL1014166C2 (nl) | Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans en werkwijze voor conserveren van genoemde stam. | |
| BR112021011024A2 (pt) | Método para melhorar o crescimento e a taxa de sobrevivência de microrganismos | |
| CN103525718A (zh) | 一种蜡状芽孢杆菌及其益生菌粉及该菌粉的制备和用途 | |
| JP2023073258A (ja) | 乳酸菌の凍結保護のためのシステインまたはその塩の用途（ｕｓｅ ｏｆ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｏｒ ｓａｌｔ ｔｈｅｒｅｏｆ ｆｏｒ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ） | |
| CN106635886A (zh) | 一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌降低鸡蛋胆固醇的方法 | |
| CN107988117A (zh) | 一种复合益生菌腐熟剂及其制备方法与应用 | |
| CN115851494A (zh) | 一株植物乳杆菌NHE-LpE5及应用 | |
| JP2005192950A (ja) | 微生物乾燥菌体を有効成分とする脱臭剤及び脱臭方法 | |
| JPS587297B2 (ja) | 脱臭剤とその製造方法及び保存法 | |
| CN101773207B (zh) | 混合益生菌干燥物及其制备方法 | |
| CN109588622A (zh) | 一株植物乳杆菌及其在降低湿腌马鲛鱼生物胺含量中的应用 | |
| CN108546663A (zh) | 一种猪源卷曲乳杆菌及其应用 | |
| CN111647538A (zh) | 一种酪酸梭菌冻干粉、制备方法及其应用 | |
| KR20160099830A (ko) | 축산악취의 감소 및 면역활성 효과를 가지는 로도박터 스페로이데스 cb 8521 및 이를 이용한 미생물제 | |
| CN107319103A (zh) | 促进畜禽生长和肠道发育的饲料添加剂及其制备方法和应用 | |
| CN114128787B (zh) | 一种粉绿狐尾藻功能饲料及其制备方法 | |
| JPH06113753A (ja) | 有機化セレン含有菌体を含有する魚類用餌料 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AD1A | A request for search or an international type search has been filed | ||
| RD2N | Patents in respect of which a decision has been taken or a report has been made (novelty report) |
Effective date: 20030822 |
|
| PD2B | A search report has been drawn up | ||
| VD1 | Lapsed due to non-payment of the annual fee |
Effective date: 20040801 |