MXPA06002792A - Metodos para formular cocteles de enzimas, cocteles de enzimas para eliminar manchas y/o suciedad de huevo y pasto, composiciones y productos que comprenden los mismos. - Google Patents

Abstract

Metodos para formular cocteles de enzimas basados en la presencia de componentes hidrolizables por las enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo. Mas especificamente, la formulacion de un coctel de enzimas que comprende una enzima especifica para cada componente en una mancha y/o suciedad objetivo, en donde opcionalmente cada enzima se incorpora a un nivel que corresponde al nivel de un componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad objetivo. Ademas, cocteles de enzimas para eliminar manchas de huevo y pasto, opcionalmente formulados de conformidad con los metodos descritos en la presente. Ademas, las composiciones y productos que comprenden los cocteles de enzimas descritos en la presente y los metodos para utilizar los mismos.

Description

METODOS PARA FORMULAR COCTELES DE ENZIMAS, COCTELES DE ENZIMAS PARA ELIMINAR MANCHAS Y/O SUCIEDAD DE HUEVO Y PASTO, COMPOSICIONES Y PRODUCTOS QUE COMPRENDEN LOS MISMOS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a métodos para formular cócteles de enzimas. En particular, los cócteles de enzimas de la presente invención se formulan para incluir una enzima específica para cada componente hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, en donde opcionalmente cada enzima se incorpora en una cantidad correspondiente al nivel de un componente hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad objetivo. La presente invención se refiere además a cócteles de enzimas, formulados de conformidad con estos métodos, para eliminar manchas y/o suciedad de huevo y de hierba, así como las composiciones y productos que comprenden los mismos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La industria de enzimas continúa evolucionando, como lo evidencia la introducción de muchos productos diversificados, cada uno de los cuales incorpora una o más enzimas para lograr un objetivo propuesto. En efecto, las enzimas actualmente se emplean ampliamente en las áreas generales de cuidado de la tela, cuidado del hogar (p.ej. cuidado de vajilla, cuidado de las superficies duras), cuidado de la belleza y lo similar. Como resultado de la Investigación y el desarrollo continuos en el área, ha disminuido el número de enzimas asociadas con nuevas secuencias de nucleótidos. Como consecuencia, muchos de aquellos con experiencia en la industria ahora han centrado sus esfuerzos en la identificación de cócteles de enzimas, o combinaciones de dos o más enzimas, para lograr beneficios sinérgicos y nuevos beneficios de hidrólisis para una mancha y/o suciedad objetivo. Sin embargo, las enzimas individuales utilizadas en estos cócteles son normalmente conocidos. La renovada investigación en el campo de cócteles de enzimas ha resultado en la identificación de varias propiedades relacionadas con las mismas. Por ejemplo, se ha descrito anteriormente en el campo técnico que la utilización de dos o más proteasas proporciona mejores beneficios de rendimiento con relación a la utilización de una sola proteasa incorporada al mismo nivel contra la misma mancha y/o suciedad objetivo. Aquellos con experiencia en la industria han atribuido, en general, la capacidad de los cócteles de enzimas contemporáneos de suministrar iguales o mayores beneficios de rendimiento con relación a las enzimas individuales incorporadas a niveles similares, a cierta sinergia exhibida por medio de su combinación. Sin embargo, aquellos con experiencia en la industria aún tienen que enunciar la base precisa a la cual es atribuible cualquier sinergia percibida.

En realidad, para identificar las enzimas candidatas para incluir en un cóctel de enzimas, los experimentados en la industria han empleado, en general, una técnica bastante no selectiva de descubrimiento. A saber, los técnicos de enzimas normalmente se ocupan de formular cócteles de enzimas identificando primero una mancha y/o suciedad objetivo para la cual se desea su remoción por medio de hidrólisis por enzimas. Luego, los técnicos identificarán todas las enzimas conocidas que se cree imparten algunos beneficios de hidrólisis contra la mancha y/o suciedad objetivo en consideración. Las combinaciones de enzimas individuales que se cree que imparten beneficios de hidrólisis contra la mancha y/o suciedad objetivo cuando se emplean individualmente, luego se prueban contra la mancha y/o suciedad objetivo para determinar si dichas enzimas individuales exhiben beneficios sinérgicos cuando se utilizan en combinación. Después de haber formulado y probado números significativos de combinaciones de enzimas, los investigadores frecuentemente pueden sacar conclusiones en cuanto a la combinación más eficaz de enzimas para cada mancha y/o suciedad objetivo en consideración. Sin embargo, existen varias desventajas en el uso de los métodos contemporáneos para la formulación de cócteles de enzimas. Primero, la identificación de una combinación adecuada de enzimas utilizando el método convencional está directamente relacionada con, y limitada por, la selección inicial de enzimas individuales candidatos que se cree imparten los beneficios de hidrólisis contra la mancha y/o suciedad objetivo. De esta manera, si una sola enzima adaptada para hidrolizar un componente específico (y posiblemente abundante) de la mancha y/o suciedad objetivo no se incluye en el paso inicial de selección, entonces dicha enzima será indebidamente excluida del cóctel deseado, afectando adversamente de ese modo los beneficios de rendimiento de cualquier cóctel resultante. Además, el uso del método contemporáneo para formular cócteles de enzimas con frecuencia es costoso y requiere mucho tiempo. En efecto, deben realizarse pruebas significativas para cada cóctel de enzimas (con frecuencia para cada enzima) para determinar la existencia de cualesquier beneficios sinérgicos. Luego los técnicos deben revisar los resultados de cada prueba e intentar correlacionarlos a cualesquiera diferencias observables entre el uso de un cóctel de enzimas determinado contra una mancha y/o suciedad objetivo y el uso de enzimas que comprenden dicho cóctel, individualmente. Finalmente, después de haber realizado considerables investigaciones y pruebas, los técnicos con frecuencia son incapaces de identificar cualquier combinación de enzimas que proporcione significativamente mejores beneficios de hidrólisis para una mancha y/o suciedad objetivo que el uso de enzimas individuales y/o cócteles de enzimas conocidos contra la misma mancha y/o suciedad. Por lo tanto, persiste la necesidad en la industria de identificar un método para la formulación de cócteles de enzimas que se base más estrechamente en la composición real de los componentes hidrolizables por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, en vez del modo no sistemático de examen convencionalmente utilizado en la industria. Este método al menos aliviaría parcialmente la necesidad de probar múltiples enzimas y combinaciones en esfuerzos de identificar la sinergia. Además, un método para formular un cóctel de enzimas basado más estrechamente en la composición de los componentes hidrolizables por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, probablemente resultaría en la formulación de un cóctel de enzimas mejor adaptado para hidrolizar la mancha y/o suciedad objetivo en consideración. Conceptualmente, se podría predecir que un cóctel de enzimas que comprende una enzima en particular para cada componente hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, opcionalmente incorporada a un nivel correspondiente a cada componente, proporcionaría mejores beneficios de rendimiento contra la mancha y/o suciedad objetivo que cualquier otra combinación. Además, persiste una gran necesidad en la industria de identificar y utilizar cócteles de enzimas para eliminar manchas o suciedad especialmente difíciles. Por ejemplo, las manchas y/o suciedad de huevo continúan planteando un dilema importante tanto para los técnicos en enzimas como los consumidores. A pesar de la exposición y/o comercialización de numerosos cócteles propuestos para eliminar manchas o suciedad de huevo, los consumidores continúan esforzándose en erradicar estas manchas o suciedad de vajilla, tela, superficies duras, y lo similar. Se han experimentado dificultades similares en la formulación y uso de cócteles de enzimas para eliminar manchas o suciedad de hierba, a pesar del hecho de que muchos cócteles han sido identificados y/o comercializados.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención trata y resuelve todas las dificultades asociadas con los métodos contemporáneos a los nuevos descubrimientos y formulaciones de cócteles de enzimas. En efecto, la presente invención se refiere a métodos para formular cócteles de enzimas basados más estrechamente en la composición real de una mancha y/o suciedad objetivo, en vez de las extensas pruebas de cócteles de enzimas compuestos de enzimas que se cree imparten beneficios de hidrólisis contra una mancha y/o suciedad objetivo cuando se emplean individualmente. De esta manera, de conformidad con un primer aspecto de la presente invención, se describe un método para formular cócteles de enzimas basado en la composición hidrolizable por enzimas de una mancha y/o suciedad objetivo. Dicho método comprende, por lo general, los pasos de: identificar una mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrolización de enzimas, identificar una o más enzimas adaptadas para hidrolizar cada componente de una mancha y/o suciedad objetivo; e incorporar una o más enzimas adaptadas para hidrolizar un componente correspondiente de una mancha y/o suciedad objetivo. En otro aspecto de la presente invención, se incorporan enzimas en un cóctel de enzimas en una cantidad correspondiente al nivel de un componente hidrolizable por una enzima específica en una mancha y/o suciedad objetivo. En otro aspecto de la presente Invención, el cóctel de enzimas resultante se prueba contra la mancha y/o suciedad objetivo para determinar el nivel en que el cóctel de enzimas está adaptado para hidrolizar dicha mancha y/o suciedad. En aún otro aspecto de la presente invención, el rendimiento del cóctel de enzimas formulado de conformidad con los métodos descritos en la presente, se compara contra el uso de enzimas individuales o cócteles de enzimas anteriormente descritos contra la misma mancha y/o suciedad objetivo, cuando tanto el cóctel en consideración como la formulación enzimática contemporánea se imparten a la misma mancha y/o suciedad en las cantidades correspondientes. De conformidad con otro aspecto de la presente invención, se describen y reivindican cócteles de enzimas. En un aspecto de la presente invención, dichos cócteles se formulan de conformidad con el método para la formulación de cócteles de enzimas descritos en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un cóctel de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo. Dicho cóctel por lo general incorpora una enzima específica para cada componente hidrolizable por enzimas en una típica mancha y/o suciedad de huevo, opcionalmente en una cantidad correspondiente al nivel en que dicho componente hidrolizable por enzimas está presente en dicha mancha y/o suciedad de huevo. En otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un cóctel de enzimas para eliminar manchas y/o suciedad de pasto. Dicho cóctel también por lo general emplea una enzima específica para cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad de pasto en consideración, opcionalmente en una cantidad correspondiente al nivel en que dicho componente hidrolizable por enzimas está presente en dicha mancha y/o suciedad de pasto. En aún otro aspecto de la presente invención, los cócteles de enzimas descritos en la presente se incorporan en una o más composiciones y/o productos. En un aspecto de la presente invención, un cóctel de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo se incorpora en una composición detergente, adaptada para eliminar manchas de huevo de, por ejemplo, vajilla, superficies duras y/o telas. En otro aspecto de la presente invención, un cóctel de enzimas para eliminar manchas y/o suciedad de pasto se incorpora en una composición detergente, adaptada para eliminar manchas y/o suciedad de pasto de, por ejemplo, tela, superficies duras, y lo similar. En aún otro aspecto de la presente invención, cócteles de enzimas formulados de conformidad con los métodos descritos en la presente se incorporan en un producto de consumo o otro, opcionalmente para proporcionar uno o más beneficios auxiliares de hidrólisis de enzimas. En aún otro aspecto de la presente invención, se describen y reivindican métodos para utilizar los cócteles de enzimas descritos en la presente, composiciones que comprenden los mismos y/o productos que comprenden los mismos. Dichos métodos por lo general comprenden los pasos de suministrar y/o aplicar un cóctel de enzimas sobre una mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas, y opcionalmente eliminar dicho cóctel de enzimas después de su suministro. Los pasos precisos de cada método dependerán de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a, la naturaleza del sustrato que comprende la mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrolización de enzimas, la naturaleza de la o las enzimas utilizadas en el cóctel de enzimas y las necesidades y/o habilidades del formulador.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION El término "cóctel" o la frase "cóctel de enzimas", se refiere a que las mezcla descritas por dichos términos comprenden dos o más enzimas. La frase "adaptada para hidrolizar", se refiere a que las enzimas y/o cócteles de enzimas descritas por dicha frase son capaces de hidrolizar uno o más componentes de enzimas hidrolizables de una mancha y/o suciedad objetivo a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de las siguientes enzimas estándar: Savinase® para proteasa, Lipoiase® para lipasa, fosfolipasa A1®, A2®, B®, C®, y/o D® para fosfolipasa, Pectinase® para pectinasa, Xyloglucanase® para hemicelulasa, y Carezyme® para celulasa. El término "proteasa A" se refiere a la secuencia enzimática descrita en el documento de los EE.UU. republicado núm. 34,606 en las Figuras 1A, 1B, y 7, así como en la columna 1 , líneas 11-37, porciones pertinentes de las cuales se incorporan aquí como referencia. La proteasa A se describe además en la patente de los EE.UU. núm. 5,441 ,882, incorporada en la presente como referencia. El término "proteasa B" se refiere a la secuencia enzimática descrita en las patentes de los EE.UU. núms. 5,955,340 y 5,700,676, en las Figuras A, 1B y 5, así como el Cuadro 1 , cuyas porciones pertinentes se incorporan aquí como referencia. La proteasa B se describe además en las patentes de los EE.UU. núms. 5,310,675, republicadas núms. 34,606 y 5,44 ,882, todas incorporadas en la presente como referencia.

El término "proteasa C" se refiere a la secuencia enzimática descrita en las patentes de los EE.UU. núms. 6,312,936 y 6,482,628, en las Figuras 1-3 [SEQ ID 3], así como en la columna 25, línea 12. La proteasa C se describe además en las patentes de los EE.UU. núms. 5,955,340, 5,310,675, republicaciones núms. 34,606 y 5,700,676, todas incorporadas en la presente como referencia. Primer aspecto: método para formular el cóctel de enzimas De esta manera, de conformidad con un primer aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un método para formular un cóctel de enzimas. En un aspecto de la presente invención, dicho método comprende los pasos de: Identificar una mancha y/o suciedad objetivo que se busca eliminar por medio de hidrolización por enzimas; examinar la mancha y/o suciedad objetivo para determinar el nivel en que cada componente hidrolizable por enzimas en la misma está presente; examinar una o más enzimas para determinar cuáles enzimas individuales muestran mayor actividad contra cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad objetivo; e incorporar una o más enzimas que muestran mayor actividad para cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad objetivo en dicho cóctel, opcionalmente, en una cantidad correspondiente al nivel de presencia de un componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad objetivo. La identificación y examen de una mancha objetivo para la que se busca su eliminación por medio de hidrólisis por enzimas, presenta un aspecto particularmente importante de los métodos de formulación descritos en la presente. Por supuesto, la mancha y/o suciedad objetivo en consideración debe incluir un porcentaje adecuado de componentes hidrolizables por enzimas para ser adaptados para su eliminación utilizando los métodos y cócteles descritos en la presente. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que una mancha y/o suciedad objetivo adecuada para su eliminación utilizando los métodos y cócteles descritos en la presente comprende por lo menos aproximadamente 10 %, de preferencia por lo menos aproximadamente 15 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 20 %, de componentes hidrolizables por enzimas, en base al porcentaje total de dicha mancha y/o suciedad objetivo. El análisis de la composición de una mancha y/o suciedad objetivo debe resultar en una determinación aproximada en cuanto a la presencia y carácter de cada componente fundamental hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que la eliminación de cada componente fundamental hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad facilita la eliminación de la totalidad de la mancha y/o suciedad objetivo. Al hidrolizar los principales componentes, entonces otras enzimas incorporadas en el cóctel pueden completar la eliminación de la totalidad de la mancha y/o suciedad objetivo. Como alternativa, y sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que la hidrólisis por enzimas de los componentes primarios en una mancha y/o suciedad objetivo minimizan las desventajas creadas por otros componentes no enzimáticos del objetivo, y por ello facilitan mejor el uso de surfactantes y otros auxiliares de limpieza para eliminar la totalidad de la mancha y/o suciedad objetivo en consideración. Al determinarse el carácter y/o porcentaje de contenido de cada componente hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, de conformidad con este método, entonces una o más enzimas pueden analizarse contra cada componente primario hidrolizable por enzimas en dicho objetivo. Luego, los experimentados en los métodos descritos en la presente pueden identificar las enzimas individuales que exhiben los niveles más altos de hidrólisis contra cada componente primario hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad objetivo. En otro aspecto de la presente invención, dos o más enzimas pueden seleccionarse para su uso contra cada componente hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo. Al reducir la selección de enzimas individuales a las que exhiben los niveles más altos de hidrólisis contra cada componente primario hidrolizable por las enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo, luego un técnico puede formular un cóctel de enzimas de conformidad con dicha selección. En aún otro aspecto de la presente invención, las enzimas individuales incorporadas en los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención, se utilizan en un cóctel de enzimas a un nivel correspondiente al que cada componente primario hidrolizable por las enzimas está presente. Al formular un cóctel de enzimas de conformidad con los métodos descritos en la presente, el técnico luego podrá el cóctel contra la mancha y/o suciedad objetivo para la que se desea la eliminación por medio de hidrólisis por enzimas. En otro aspecto de la presente invención, los resultados de estas pruebas, luego pueden compararse contra el uso de otras enzimas individuales y/o cócteles de enzimas, incorporadas en cantidades correspondientes a las del cóctel formulado, para confirmar que los cócteles formulados de conformidad con los métodos descritos en la presente exhiben mejores beneficios de hidrólisis por enzimas en comparación con las enzimas convencionales y/o cócteles de enzimas contra la misma mancha y/o suciedad objetivo. Cóctel de enzimas para eliminar manchas o suciedad de huevo En otro aspecto de la presente invención, se describen cócteles de enzimas que comprenden dos o más enzimas adaptadas para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo. En un aspecto de la presente invención, cócteles de enzimas para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo se formulan de conformidad con los métodos de formulación de cócteles de enzimas descritos en la presente. A saber, en un aspecto de la presente invención, se formula un cóctel de enzimas para eliminar una mancha de huevo, examinando la mancha y/o suciedad de huevo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas. Este examen resulta en la identificación de cada componente primario hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad objetivo. Luego, múltiples enzimas, utilizadas individualmente y en combinación, pueden probarse contra cada componente primario hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad objetivo. Al determinar cuáles enzimas exhiben los niveles más altos de hidrólisis contra cada componente hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad de huevo, la enzimas luego pueden incorporarse en un cóctel, opcionalmente en una cantidad correspondiente al nivel de un componente hidroiizable por enzimas determinado en dicha mancha y/o suciedad de huevo. En un aspecto de la presente invención, una sola enzima se incorpora en un cóctel de enzimas, dirigido a un componente hidroiizable por una enzima específica en dicha mancha y/o suciedad objetivo, en una cantidad correspondiente al nivel en que dicho componente hidroiizable por enzimas está presente en dicha mancha y/o suciedad objetivo. En aún otro aspecto de la presente invención, dos o más enzimas dirigidas a un solo componente hidroiizable por enzimas se incorporan en el cóctel de enzimas. Es importante comprender que los huevos naturales están compuestos, en general, por dos componentes principales, a saber, una clara de huevo y una yema de huevo. Se ha determinado que tanto las claras de huevo como las yemas de huevo normalmente y predominantemente están compuestas de proteínas. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que las claras de huevo están compuestas de las siguientes proteínas (a niveles aproximados de su presencia en la misma): ovalbúmina (aproximadamente 54 % del total de la composición de proteína de clara de huevo); conalbúmina (aproximadamente 13 % del total de la composición de proteína de clara de huevo); ovomucoide (aproximadamente 11 % del total de la composición de proteína de clara de huevo); lisozima (aproximadamente 3.5 % del total de la composición de proteína de clara de huevo); globulina (aproximadamente 8 % del total de la composición de proteína de clara de huevo); y ovomucina (aproximadamente 1.5 % del total de la composición de proteína de clara de huevo). Se debe observar y destacar que los niveles antes mencionados de la composición son aproximados y no se pretenden limitar el alcance de la presente invención. Otros componentes misceláneos, a base de proteína y de cualquier otra forma, se cree que representan el 9 % restante de las claras de huevo naturales. Además, es importante observar que los lípidos están compuestos de aproximadamente 30 % de clara de huevo natural. A su vez, dichos lípidos están compuestos de aproximadamente 66 % de triglicéridos y aproximadamente 28 % de fosfolípidos. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, las claras de huevo también, en general, están compuestas de proteínas, a saber vitelogenina I, vitelogenina II y vitelogenina III. En efecto, se postula además que la vitelogenina II, el componente principal de proteína de las claras de huevo, se procesa en lipovitelina I, lipovitelina II, fosvitina y YGP40. Reiterando, se debe destacar que las características de la composición antes mencionadas no pretenden de manera alguna limitar el alcance de la presente invención. Se debe comprender que el contenido exacto de tanto las claras de huevo naturales como las yemas de huevo naturales depende de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la fuente del huevo en consideración, las condiciones físicas y/o químicas a las que el huevo ha sido sometido y los instrumentos utilizados para examinar la composición del huevo en cuestión. Sin embargo, se cree que las aproximaciones mencionadas anteriormente constituyen los componentes fundamentales hidrolizables por enzimas de un típico huevo natural.

Aquellos con experiencia en la industria apreciarán fácilmente que la composición precisa de una mancha de huevo depende de la consideración de otros ingredientes que se añaden a los huevos en los alimentos convencionales a base de huevo. Por ejemplo, la leche se utiliza, normalmente, para elaborar huevos revueltos. De esta manera, la composición de los diversos componentes hidrolizables por enzimas de la leche se debe considerar en la formulación de un cóctel de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo revuelto. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que la leche está compuesta de las siguientes proteínas (en niveles aproximados de la misma): cc-S1 caseína (aproximadamente 30.6 % del total de la composición de la proteína de leche); cc-S2 caseína (aproximadamente 8 % del total de la composición de la proteína de leche), ß caseína (aproximadamente 30.8 % del total de la composición de la proteína de leche); k-caseína (aproximadamente 10.1 % del total de la composición de la proteína de leche); proteína de suero y a-lactalbúmina (aproximadamente 3.7 % del total de la composición de la proteína de leche); proteína de suero y b-lactalbúmina (aproximadamente 9.8 % del total de la composición de la proteína de leche); proteína de albúmina sérica del suero sanguíneo (aproximadamente 1.2 % del total de la composición de la proteína de leche); proteína sérica inmunoglobulina (aproximadamente 2.1 % del total de la composición de la proteína de leche); proteínas misceláneas de suero (aproximadamente 2.4 % del total de la composición de la proteína de leche); y proteínas de la membrana del glóbulo graso (aproximadamente 1.2 % del total de la composición de la proteína de leche). Reiterando, se debe observar y destacar que los niveles aproximados antes mencionados de la composición de proteína de leche de ninguna manera pretenden limitar el alcance de la presente invención. Los experimentados en la industria comprenderán fácilmente que la composición precisa de los componentes hidrolizables por enzimas presentes en la leche depende de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a, el contenido de grasa de la leche (p.ej., sin grasa, 1 % de grasa, 2 % de grasa, 10 % de grasa); las condiciones físicas y/o químicas a las que se somete la leche (es decir, calor) y lo similar. Las aproximaciones antes mencionadas sólo tienen la intención de permitir al técnico de estos métodos y el formulador de estos cócteles incorporar el nivel apropiado de enzima para cada componente fundamental hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad de huevo (que puede incluir los componentes hidrolizables por enzimas de leche en el caso de los huevos revueltos). Es evidente que la abundancia de componentes hidrolizables por enzimas tanto en los huevos como la leche (que puede ser un ingrediente en los huevos revueltos) consiste de proteína. Por consiguiente, los cócteles de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo descritos en la presente, en general, están dirigidos al uso de una combinación de una o más proteasas, cada una de las cuales se adapta y dirige para hidrolizar una o más proteínas específicas en la mancha y/o suciedad objetivo de huevo. De esta manera, de conformidad con un aspecto de la presente invención, se describe un cóctel de proteasa para eliminar una mancha o sucio de huevo. Dicho cóctel comprende (a) de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, aproximadamente, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, aproximadamente, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una proteasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas, adaptada para hidrolizar caseína a una tasa de por lo menos a 0.1 % de actividad proteolítica de una enzima de referencia, de preferencia a un nivel de por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la enzima Savinase®' comercialmente disponible de Novozymes, se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad proteolítica de cualquier proteasa que se cree hidroliza la caseína se mide para determinar si dicha proteasa es adecuada para incluir en estos cócteles. En otro aspecto de la presente invención, los cócteles de enzimas descritos en la presente para eliminar las manchas o suciedad de huevo comprenden además de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una proteasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas, adaptada para hidrolizar la fosvitina y/o lipovitelina a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad proteolítica de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la enzima SAVINASE® comercialmente disponible de Novozymes se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad proteolítica de cualquier proteasa que se cree hidroliza la fosvitina y/o lipovitelina se mide para determinar si dicha proteasa es adecuada para incluir en estos cócteles. En aún otro aspecto de la presente invención, los cócteles de enzimas descritos en la presente para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo comprenden además de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una proteasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas, adaptada para hidrolizar ovalbúmina a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de la actividad proteolítica de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la enzima Savinase® comercialmente disponible de Novozymes se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad proteolítica de cualquier proteasa que se cree hidroliza la ovalbúmina se mide para determinar si dicha proteasa es adecuada para incluir en estos cócteles. Proteasas adecuadas para su uso en el contexto de la presente invención incluye, pero ciertamente sin limitarse a, las disponibles de Novozymes (incluyendo Savinase®, Alcalase®, Esperase®, Ovozyme®, Everlase®, Neutrase®, Durazyme®, Pyrase®, Flavourzyme®); las disponibles de Genencor International (incluyendo Propernase®, Purafect® proteasa A, proteasa B, proteasa C); las disponibles de Sigma (incluyendo Elastase®, proteasa V8®, Pepsin®, Papain®, Bromelain®, Proteinase K®); las disponibles de Biozyme Laboratories (incluyendo Elastase®); y cualquier otra proteasa metaloproteasa, proteasa ácida, neutra y/o alcalina. En aún otro aspecto de la presente invención, una lipasa se incorpora además en un cóctel de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo. Dicho cóctel comprende (b) de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una lipasa, basado en el peso total del cóctel de enzimas, adaptada para hidrolizar triglicéridos y/o diglicéridos a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de la actividad de hidrólisis de una enzima de referencia, de preferencia a una tasa de por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la enzima Lipolase® comercialmente disponible e Novozymes se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad de cualquier lipasa que se cree hidroliza la triglicéridos y/o diglicéridos se mide para determinar si dicha lipasa es adecuada para incluir en estos cócteles. Lipasas (y/o esterasas) adecuadas para su uso en el contexto de la presente invención incluyen, pero ciertamente sin limitarse a, las disponibles de Novozymes (incluyendo Upase®, Lipolase®, Lipolase Ultra®, Lipex®, Palatase®) y cualquier otras lipasas disponibles neutras y/o alcalinas. En aún otro aspecto de la presente invención, la fosfolipasa se incorpora además en un cóctel de enzimas para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo. Dicho cóctel comprende de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una fosfolipasa, basado en el peso total de cóctel de enzimas, adaptada para hidrolizar fosfatidilcollna y/o lisofosfatidilcolina a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de la actividad de hidrólisis de una enzima de referencia (de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la fosfolipasa A1®, A2®, B®, C® y/o D® comercialmente disponible de Novozymes, se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad de una fosfolipasa que se cree hidroliza la fosfatidilcolina y/o lisofosfatidilcolina se mide para determinar si dicha fosfolipasa es adecuada para incluir estos cócteles de enzimas. Fosfolipasas adecuadas para usarse en el contexto de la presente invención incluyen las disponibles de Novozymes (incluyendo las fosfolipasa); las disponibles de Genencor International (fosfolipasa); las disponibles de Sigma (incluyendo la fosfolipasa A®, fosfolipasa C®); y cualquier otra fosfolipasas neutras y/o alcalinas. En aún otro aspecto de la presente invención, una relación entre cualesquiera dos de dichas enzimas es de aproximadamente 1000:1 a aproximadamente 1 :1000, de preferencia de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 1 :500, con mayor preferencia de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 100:1, con la máxima preferencia de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1 :50. Aquellos con experiencia en la industria comprenderán fácilmente que la composición precisa de los cócteles de enzimas descritos en la presente dependerá de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la composición precisa de una mancha y/o suciedad objetivo de huevo; las condiciones físicas y/o químicas a las que una mancha y/o suciedad objetivo de huevo ha sido sometido; el medio a través del cual se contempla el suministro de estos cócteles de enzimas a una mancha y/o suciedad objetivo; y las necesidades y/o habilidades del formulador. Por consiguiente, la presente invención busca además incluir cócteles de enzimas para eliminar manchas o suciedad objetivos de huevo, opcionalmente formulados de conformidad con los métodos descritos en la presente, el contenido exacto de enzima que puede alterarse depende de la composición de una mancha y/o suciedad de huevo determinada. Cóctel de enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto En aún otro aspecto de la presente invención, se decriben y reivindican cócteles de enzimas que comprenden dos o más enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto. En un aspecto de la presente invención, el cóctel de enzimas para eliminar manchas y/o suciedad de pasto se formula por medio del uso del método de formulación descrito en la presente. A saber, en un aspecto, el cóctel de enzimas se formula sobre la base y la naturaleza y el contenido de cada componente primario hidrolizable por enzimas en una mancha y/o suciedad objetivo de pasto. Sin limitaciones teóricas de ninguna especie, se cree que las manchas y o suciedad de pasto en general están compuestos de clorofila, proteína, carbohidratos y lípidos. En efecto, a través del examen de las manchas y/o suciedad de pasto típicas se revela que la clorofila, ß-caroteno y otros pigmentos están presentes como un complejo con proteínas fijadoras de clorofila (p.ej., CP47, 43, 29, 27, 24)) dentro de la célula de pasto. Aproximadamente cuatro capas de diversos componentes hidrolizables por enzimas envuelven además dicho complejo. A saber, la clorofila está cubierta por una pared celular compuesta de celulosa, hemicelulosa, xilanos, xiloglucanos, pectinas, ligninas y proteínas. La clorofila de las manchas o suciedad de pasto está cubierta además por una membrana de cloroplasto compuesta de lípidos (caracterizada por esteróles y sus ésteres correspondientes) y proteínas. La clorofila de las manchas o suciedad de pasto también está cubierta por estroma. El estroma es el sitio de fijación de C02 y la síntesis de la proteína en la célula de pasto. El estroma de las células de hierba, en general, están compuestas de ribosomas, sintasa ATP, iones metálicos, fosfoglucosa, almidón y proteína. Finalmente, una membrana tilacoidal, que está compuesta por glicolípidos, fosfolípidos, triglicéridos, ácidos grasos y proteínas, envuelve la clorofila y otros pigmentos. Basado en el total de todos los componentes hidrolizables por enzimas en una célula de hierba, se cree que la célula de hierba natural está compuesta de aproximadamente 80 % de carbohidratos, aproximadamente 10 % de proteínas y aproximadamente 3 % de lípidos. Reiterando, no se pretende que estos métodos y/o cócteles sean limitados por las aproximaciones antes mencionadas de la composición de células de pasto. Más bien, las aproximaciones antes mencionadas pretenden servir como la base sobre la cual los técnicos pueden ocuparse en la formulación de un cóctel de enzimas para eliminar una mancha y/o suciedad objetivo de pasto, de conformidad con la presente invención. De esta manera, en un aspecto de la presente invención, se describe una cóctel de proteasa para eliminar manchas y/o suciedad de pasto. En un aspecto de la presente invención dicho cóctel de proteasa comprende: una proteasa adaptada para hidrolizar D-ribulosa 1 ,5-difosfato carboxilato a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %; una proteasa adaptada para hidrolizar una o más proteínas fijadoras de la clorofila a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %; y una proteasa adaptada para hidrolizar la sintasa ATP a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En otro aspecto de la presente invención, Savinase® comercialmente disponible de Novozymes se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad proteolítica de una proteasa que se cree hidroliza un componente de una mancha y/o suciedad de pasto se mide para determinar si dicha proteasa -es adecuada para incluir en estos cócteles. En aún otro aspecto de la presente invención, la relación entre cualesquiera dos de las proteasas antes mencionadas es de aproximadamente 1000:1 a 1:1000, de preferencia de aproximadamente 500:1 a 1 :500, con mayor preferencia de aproximadamente 100:1 a 100:1 , con la máxima preferencia de aproximadamente 50:1 a 1 :50. En aún otro aspecto de la presente invención, las proteínas fijadoras de la clorofila para los fines del cóctel descrito anteriormente se seleccionan del grupo que comprende CP47, CP43, CP29, CP27, CP24 y combinaciones de éstos. En otro aspecto de la presente invención, se describe un cóctel de enzimas adaptado para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto. En un aspecto de la presente invención dicho cóctel comprende: una llpasa adaptada para hidrolizar triglicérido y/o diglicérido a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %; una pectinasa adaptada para hidrolizar éster metílico de ácido poli-D-galacturónico a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %; una hemicelulasa adaptada para hidrolizar hemicelulosa, xiloglucanos, xilanos y combinaciones de éstos a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 %, con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %; y una celulasa adaptada para hidrolizar celulosa y/o carboximetilcelulosa a una tasa de por lo menos aproximadamente 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia, de preferencia por lo menos aproximadamente 1 % con mayor preferencia por lo menos aproximadamente 5 %, con la máxima preferencia por lo menos aproximadamente 10 %. En un aspecto de la presente invención, la Lipolase® comercialmente disponible de Novozymes se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad enzimática de una lipasa que se cree hidroliza un componente de una mancha y/o suciedad de pasto se mide para determinar si dicha lipasa es adecuada para incluir en estos cócteles. En otro aspecto de la presente invención, la Pectinase® comercialmente disponible de Novozymes, se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad de una pectinasa que se cree hidroliza un componente de una mancha y/o suciedad de pasto se mide para determinar si dicha pectinasa es adecuada para incluir en estos cócteles. En otro aspecto de la presente invención, Xyloglucanse® comercialmente disponible de Novozymes, se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad de una hemicelulasa que se cree hidroliza uno o más componentes de una mancha y/o suciedad de pasto se mide para determinar si dicha hemicelulasa es adecuada para incluir en estos cócteles. En aún otro aspecto de la presente invención, Carezyme® comercialmente disponible de Novozymes, se utiliza como una enzima de referencia, contra la cual la actividad de una celulasa que se cree hidroliza uno o más componentes de una mancha y/o suciedad de pasto se mide para determinar si dicha celulasa es adecuada para incluir en la misma. En aún otro aspecto de la presente invención, el cóctel descrito en este párrafo comprende además un cóctel de proteasa de conformidad con el párrafo anterior, para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto. En aún otro aspecto de la presente invención, se describe un cóctel de enzimas para eliminar una mancha y/o suciedad objetivo de pasto. En un aspecto, este cóctel comprende (a) una o más enzimas para la hidrólisis de carbohidrato a un nivel de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una carbohidrasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas; (b) una o más enzimas para la hidrólisis de proteína a un nivel de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una proteasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas; y (c) una o más enzimas para la hidrólisis de un lípido a un nivel de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.1 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.03 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una lipasa, basado en el peso total de dicho cóctel de enzimas.

Las carbohidrasas adecuadas para su uso en el contexto de la presente invención incluyen las disponibles de Novozymes (incluyendo Amylase®, Termamyl®, Duramyl®, Natalase®, Xyloglucanase®, Pectato liasa®, Dextranase®, Xylonase®, ß-Glucanase®, Mannaway®, Hemicelluloses®, Celulase®); las disponibles de Genencor (incluyendo Amylase®, Hemicelluloses®, Celulase®); y cualquier otras carbohidrasas adecuadas. Las proteasas adecuadas para usarse en el contexto de la presente invención incluyen las disponibles de Novozymes (incluyendo Savinase®, Alcalase®, Esperase®, Ovozyme®, Everlase®, Neutrase®, Durazyme®, Pyrase®, Flavourzyme®); las disponibles de Genencor International (incluyendo Propemase®, proteasa A, proteasa B, proteasa C, Purafect®); las disponibles de Sigma (incluyendo Elastase®, Protease V8®, Pepsin®, Papain®, Bromelain®, Proteinase K®); Biozyme Laboratories (incluyendo Elastase®); y cualquier otras metaloproteasas, proteasas neutras y/o alcalinas disponibles. Las lipasas (o esterasas) adecuadas para su uso en el contexto de la presente invención incluyen las disponibles de Novozymes (incluyendo lipasa®, Lipolase®, Lipolase Ultra®, Lipex®, Palatase®); y cualquier otras lipasas neutras y/o alcalinas disponibles. En aún otro aspecto de la presente invención, una relación entre cualquier dos de las enzimas antes mencionadas es de aproximadamente 1000:1 a aproximadamente 1 :1000, de preferencia de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 1:500, con mayor preferencia de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 100:1, con la máxima preferencia de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1 :50 m.

Aquellos con experiencia en la industria comprenderán fácilmente que la composición de estos cócteles de enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto dependerá de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la composición precisa de la mancha y/o suciedad objetivo de pasto en consideración, las condiciones físicas y/o químicas a las que una mancha y/o suciedad objetivo de pasto ha sido sometido; el medio a través del cual el suministro de estos cócteles de enzimas a una mancha y/o suciedad objetivo de pasto se contempla; y las necesidades y/o habilidades del formulador. Por consiguiente, la presente invención busca además incluir cócteles de enzimas para eliminar manchas o suciedad objetivo de pasto, formulados de conformidad con los métodos descritos en la presente, el contenido exacto de enzima que puede alterarse depende de la composición precisa de una mancha y/o suciedad de pasto determinada. Formulación de cócteles de enzimas Aquellos con experiencia en la industria a los que concierne la presente invención, comprenderán además que existen varios métodos para formular estos cócteles de enzimas, una vez que se completa el proceso de identificar enzimas adecuada para incorporar en el mismo. En efecto, en un aspecto de la presente invención, los cócteles de enzimas de la presente invención, adaptados para eliminar manchas y/o suciedad de huevo y/o de pasto, pueden formularse utilizando el método estándar de formulación en gránulos y/o en forma líquida de coenzimas. Una descripción de los pasos asociados con la formulación en gránulos y/o en forma líquida de coenzimas de cócteles de enzimas se encuentra en las páginas 372-374 de "Industrial Enzymes and Their Application" (Enzimas industriales y sus aplicaciones), por Helmut Uhlig, PhD, JOHN WILEY & SONS, INC. 1998. Eygermans, P. J., "Preparation of enzymes in particulate from" (Preparación de enzimas en forma particulada), patente de los EE.UU. 3,801 ,463; Weber-Meyer, M., "Liquid cleaning composition containing stabilized enzymes: protease" (Composición líquida de limpieza que contiene enzimas estabilizadas: protesas), patente de los EE.UU. núm. 4,169,817; Win, M.H., Desalvo, W. A., y Kenney, E. J., "Enzymatic detergente" (Detergentes enzimáticos), patente de los EE.UU. núm. 3,858,854, y De Rosier, T. A., "Method and Formulation for Stabilization of Enzymes" Método y formulación para la estabilización de enzimas), y la solicitud de patente WO 9800530, cuyas porciones pertinentes se incorporan en la presente como referencia. En otro aspecto de la presente invención, los cócteles de enzimas a base de huevo y/o de pasto descritos en la presente se formulan utilizando un método estándar de la formulación en forma de gránulos y/o un líquido de una sola enzima. Una descripción de los pasos asociados con la formulación en forma de gránulos y/o un líquido de una sola enzima de cócteles de enzimas se encuentra en las páginas 372-374, "Industrial Enzymes AND THEIR APPLICATION" (Enzimas industriales y sus aplicaciones), por Helmut Uhlig, Ph.D, JOHN WILEY & SONS, INC. 1998. Eygermans, P. J., "Preparation of enzymes in particulate from" (Preparación de enzimas en forma particulada), patente de los EE.UU. núm. 3,801 ,463; Weber-Meyer, M., "Liquid cleaning composition containing stabilized enzymes: proteasa" Composición líquida de limpieza que contiene enzimas estabilizadas: proteasa), patente de los EE.UU. núm. 4,169,817; Win, M.H., Desalvo, W. A., y Kenney, E. J., "Enzymatic detergents" (Detergentes enzimáticos), U. S. patente núm. 3,858,854., y De Rosier, T. A., "Method and Formulation for Stabilization of Enzymes" (Método y formulación para la estabilización de enzimas), solicitud de patente WO 9800530, cuyas porciones pertinentes se incorporan en la presente como referencia. Composiciones detergentes y productos que comprenden cócteles de enzimas En aún otro aspecto de la presente invención, se describen y reivindican las composiciones detergentes que comprenden los cócteles de enzimas descritos en la presente. En un aspecto de la presente invención, una composición detergente que comprende un cóctel de enzimas para eliminar las manchas o suciedad de huevo. Cuando se incorporan en las composiciones detergentes de conformidad con la presente invención, los cócteles de enzimas descritos en la presente se encuentran a un nivel de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una enzima, basado en el peso total de la composición detergente.

En aún otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica una composición detergente que comprende un cóctel de enzimas para eliminar una mancha o sucio de pasto. En un aspecto de la presente invención, el cóctel de enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto se formula para incorporar en estas composiciones detergentes por medio del uso del método de formulación descrito en la presente solicitud. En cualquier caso, las composiciones detergentes descritas en la presente comprenden un í cóctel de enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto, a un nivel de aproximadamente 0.00001 % a aproximadamente 5 %, de preferencia de aproximadamente 0.0001 % a aproximadamente 0.5 %, con mayor preferencia de aproximadamente 0.0002 % a aproximadamente 0.1 %, con la máxima preferencia de aproximadamente 0.001 % a aproximadamente 0.05 %, en peso de la proteína activa pura de una enzima, basado en el peso total de la composición detergente. Aquellos con experiencia en la industria comprenderán fácilmente que el nivel exacto del cóctel de enzimas para eliminar manchas o suciedad de pasto incorporado en estas composiciones detergentes depende de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la naturaleza de la composición detergente en la que se pretende incorporar el cóctel de enzimas, la composición precisa del cóctel de enzimas para la que se desea incorporar en una composición detergente, la mancha o sucio objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas, y las necesidades y/o habilidades del formulador.

En otro aspecto de la presente invención, las composiciones detergentes descritas en la presente comprenden uno o más surfactantes, ejemplos no limitantes de los cuales incluyen surfactantes no iónicos, aniónicos, anfotéricos, anfofílicos, zwitteriónicos, catiónicos, no iónicos semipolares, y mezclas de éstos. Los ejemplos no exhaustivos de estos surfactantes se describen en las patentes de los EE.UU. núms. 5,707,950 y 5,576,282, incorporadas en la presente como referencia. Una lista típica de las especies y tipos de surfactantes aniónicos, no iónicos, anfotéricos y zwitteriónicos se proporciona en la patente de los EE.UU. núm. 3,664,961 otorgada de Norris el 23 de mayo de 1972, e incorporada en la presente como referencia. Los ejemplos no exhaustivos de surfactantes útiles en la presente incluyen los etoxilatos de alquilo y/o etoxilatos de alcohol (AE) C8-C18 convencionales, con EO de . aproximadamente 1-22, incluyendo los denominados etoxilatos de rango estrecho y los alcoxilatos de alquilfenol (en particular los etoxilatos y los etoxi/propoxi mezclados), y el óxido de alquil dialquil amina C6-C-|2, alcanoil glucosamida, alquilbencenosulfonatos lineales (LAS) y alquilsulfatos primarios, secundarios y aleatorios (AS y/o SAS) C Ci8, los alquil alcoxi sulfatas (AES) C10-C18, los alquil poliglicósidos y sus poliglicósidos sulfatados (APG) correspondientes Ci0-C18, los ésteres de ácidos grasos alfa-sulfonados Ci2-Ci8, alquil y alquilfenol alcoxilatos (en particular los etoxilatos y los etoxi/propoxi mezclados) Ci2-Ci8, las betaínas y las sulfobetaínas (sultaínas) Ci2-Ci8, los óxidos de amina Cio-C-i8, sultanatos de alfa-olefina (AOS), alcohol etoxi sulfatas, sultanatos sódicos de parafina, amido propil aminas, alquil N-metil glucamidas, ácido nitrilotdriacético (NTA), sales de metal alcalino de ácidos grasos naturales y lo similar. Otros surfactantes útiles convencionales se enumeran en los textos estándar. En aún otra aspecto de la presente invención, las composiciones detergentes que comprenden el cóctel de enzimas descrito en la presente, incorporan uno o más aditivos limpiadores convencionales para impartir uno o más beneficios de rendimiento y/o estéticos. Aunque no es esencial para los propósitos de la presente invención, algunos materiales limpiadores auxiliares convencionales ilustrados aquí son adecuados para utilizarse en las presentes composiciones y puede desearse incorporarlos en las modalidades preferidas de la presente invención, por ejemplo para ayudar o mejorar el desempeño de la limpieza, para el tratamiento del sustrato que va a limpiarse, o para modificar la estética de la presente composición, como es el caso de perfumes, colorantes, tintes o lo similar. La naturaleza precisa de estos componentes adicionales y las proporciones en las que se incorporan dependerán de la forma física de la composición y de la naturaleza de la operación de limpieza del uso al que se destinarán. Aditivos adecuados para incorporar en las composiciones detergentes que comprenden el cóctel de enzimas de la presente invención incluyen, pero ciertamente sin limitarse a: sistemas blanqueadores, estabilizantes de enzimas, aditivos, dispersantes, agentes de liberación de sucio, agentes quelantes, supresores de espuma, agentes suavizantes, agentes para inhibir la transferencia del colorante, aditivos que no contienen fosfato, motas de color, sustancias para el cuidado de vajilla de plata, agentes anti-empañamiento y/o anticorrasión, colorantes, cargas, germicidas, fuentes de alcalinidad, hidrótropos, antioxidantes, perfumes, agentes de solubilización, portadores, auxiliares del proceso, pigmentos, y agentes de control de pH, como se describen en las patentes de los EE.UU. núms. 5,705,464, 5,710,115, 5,698,504, 5,695,679, 5,686,014 y 5,646, 01, todas incorporadas en la presente como referencia. En otro aspecto de la presente invención, las composiciones descritas en la presente tomarán la forma de una composición detergente, en particular adecuada para los contextos de cuidado de la tela y el hogar. Esta composición detergente puede tomar una variedad de formas y figuras dependiendo de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la naturaleza precisa de la composición detergente que comprende los cócteles de enzimas descritos en la presente; la composición precisa de este cóctel de enzimas para el que se desea su inclusión en una composición detergente; y la naturaleza de la mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas. Sin embargo, ejemplos no exhaustivos de estas formas de detergente incluyen: líquidos, polvos, aglomerados, pastas, tabletas, barras, geles y/o gránulos. En aún otro aspecto de la presente invención, se describen y reivindican productos de consumo y cualquier otros, que incorporan los cócteles de enzimas descritos en la presente. En efecto, los cócteles de enzimas formulados de conformidad con los métodos descritos en la presente pueden incorporarse en numerosos productos para proporcionar uno o más beneficios de rendimiento y/o estéticos. Estos productos pueden tomar una multitud de formas y figuras, dependiendo de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la naturaleza y/o el propósito previsto del producto, el cóctel de enzimas para el que se desea su incorporación, y la mancha y/o suciedad objetivo para el que se desea su remoción por medio de estos productos. La siguiente exposición no pretende limitar el alcance de la presente invención, por el contrario simplemente pretende proporcionar a una persona con experiencia en la industria con cierta orientación en cuanto a los usos disponibles de la presente invención. En efecto, los productos descritos en la presente pueden adaptarse a una variedad de propósitos incluyendo, pero sin limitarse a, cuidado personal, cuidado de la tela, cuidado del hogar y cuidado de la piel. Productos para el cuidado personal De esta manera, de conformidad con un primer aspecto de la presente invención, se describen productos para el cuidado personal que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención. Los productos adecuados para el cuidado personal que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención incluyen, pero sin limitarse a: jabones para las manos, higienizadores para las manos, jabones líquidos para el cuerpo, enjuagues bucales, pastas de dientes, geles para la ducha, champús, lociones para el cuerpo, desodorantes, inhaladores nasales y combinaciones de éstos. En aún otro aspecto de la presente invención, los productos para el cuidado personal descritos en la presente toman la forma de un producto de toallita limpiadora, en particular adecuado para limpiar o secar la cara o las manos. En este caso, los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención, de preferencia están implantados o impregnados en dicho producto de toallita limpiadora. En aún otro aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado personal descrito en la presente toma la forma de un pañuelo o toallita de papel, también adecuado para limpiar o secar la cara o las manos. En otro aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado personal toma la forma de una toalla sanitaria para la higiene femenina y/o un pañal. En otro aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado personal toma la forma de un antiséptico para primeros auxilios para la piel irritada, lesionada, o afectada por el acné, y/o para uso pre o postquirúrgico. Productos para el cuidado del hogar En otro aspecto de la presente invención, los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención se incorporan en uno o más productos para el cuidado del hogar. En efecto, productos adecuados para el cuidado del hogar para los fines de la presente invención incluyen, pero sin limitarse a: limpiadores de superficies duras, desodorizantes, composiciones para el cuidado de telas, composiciones limpiadoras de telas, detergentes para el lavado a mano de vajilla, detergentes para el lavado automático de vajilla, composiciones para el cuidado de pisos, limpiadores y desinfectantes para la cocina, limpiadores y desinfectantes para baños y combinaciones de éstos. En otro aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado del hogar toma la forma de una toallita o paño, adecuado para la limpieza y/o cuidado del hogar. En aún otro aspecto de la presente invención, los productos para el cuidado del hogar descritos en la presente comprenden ciertos ingredientes aditivos. Estos aditivos incluyen, pero ciertamente sin limitarse a: aditivos, agentes blanqueadores, activadores de blanqueador, catalizadores de blanqueador de metales de transición, agentes de transferencia de oxígeno y precursores, agentes de liberación de sucio, agentes de remoción y/o antiredepósito de sucio arcilloso, agentes dispersantes poliméricos, abrillantadores, agente polimérico inhibidor de la transferencia del colorante, agentes quelantes, agentes antiespuma, policarboxilatos alcoxilados, suavizantes de telas, perfumes, portadores, hidrótropos, auxiliares del proceso, colorantes o pigmentos, solventes para formulaciones líquidas, cargas sólidas, surfactantes detergentes y combinaciones de éstos. Productos para el cuidado de la piel En otro aspecto preferido de la presente invención, los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención se incorporan en un producto para el cuidado de la piel. En un aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado de la piel incorpora un portador dermatológicamente aceptable para facilitar la transferencia segura de los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención al área deseada de la piel. En otro aspecto de la presente invención, el producto para el cuidado de la piel de la presente invención comprende ciertos ingredientes aditivos. Estos aditivos incluyen, pero ciertamente sin limitarse a: activos antimicrobianos y antifúngicos, surfactantes, activos de descamación, activos antiacné, activos antiarruga, activos antiatrofia, antioxidantes, depuradores de radicales, agentes quelantes, flavonoides, agentes antiinflamatorios, agentes antiadiposis, anestésicos tópicos, activos bronceadores, activos de protección solar, agentes acondicionadores, agentes espesantes, agentes de despegado, agentes de control de olor, agentes percibidos por la piel, antltranspirantes y mezclas de éstos. En efecto, una descripción completa y ejemplos de cada uno de los ingredientes aditivos antes mencionados se describen en la patente de los EE.UU. núm. 6,294,186, cedida a The Procter and Gamble Company, Cincinnati, Ohio e incorporada en la presente como referencia. Artículos elaborados v estuches Además, los artículos elaborados que comprenden los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención están destinados para aplicaciones de cuidado personal, cuidado de la piel y cuidado del hogar. El artículo elaborado de la presente invención comprende una o más productos tal como se describieron anteriormente que pueden envasarse en un envase o despachador con un conjunto de instrucciones para el consumidor. El artículo elaborado de la presente invención normalmente comprende (a) un envase o despachador, (b) un producto y (c) un conjunto de instrucciones para aplicar dicho producto a un sustrato apropiado para impartir uno o más beneficios de funcionamiento y/o estéticos. Los envases y/o despachadores adecuados para el artículo elaborado de la presente invención incluyen, pero sin limitarse a: botellas y tinas de PET, bolsas de envoltorio, despachadores espumantes, despachadores aerosol y combinaciones de éstos. Reiterando, el artículo elaborado de la presente invención comprende además un conjunto de instrucciones en asociación con el envase. La frase "en asociación con", significa que las instrucciones o se imprimen directamente sobre el propio envase o despachador o se presentan de manera diferente, incluyendo, pero sin limitarse a: un folleto, una propaganda impresa, una propaganda electrónica y/o una comunicación verbal, para comunicar el conjunto de instrucciones a un consumidor del artículo elaborado. El conjunto de instrucciones normalmente comprende las instrucciones que se refieren al uso del producto para aplicar los productos que comprenden los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención sobre un sustrato adecuado para el que se busca un tratamiento por medio de la hidrólisis por enzimas. El conjunto de instrucciones puede incluir además la instrucción para permitir que los cócteles de enzimas formulados de conformidad con la presente invención permanezcan sobre el sustrato tratado. Sin embargo, las instrucciones precisas incluidas con el artículo elaborado de la presente invención dependerán de los ingredientes precisos de este cóctel de enzimas, el producto para el que se desea incluir las instrucciones y el sustrato sobre el que se pretende aplicar el producto. En otro aspecto de la presente invención, las instrucciones incluidas en estos artículos elaborados coinciden con los métodos descritos en la sección "Métodos de uso" de la presente exposición. Métodos para utilizar los cócteles de enzimas, las composiciones y los productos descritos en la presente. En otro aspecto de la presente invención, se describen y reivindican métodos para utilizar los cócteles de enzimas, las composiciones y los productos descritos en la presente. En un aspecto, se describen métodos para utilizar un cóctel de enzimas formulado de conformidad con el método de formulación tratado en la presente. Este método por lo general implica el paso de suministrar el cóctel de enzimas a una mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas. En otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un método para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo utilizando un cóctel de enzimas formulado de conformidad con la presente exposición. Además, este método por lo general comprende el paso de suministrar un cóctel de enzimas adaptado para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo a una mancha y/o suciedad objetivo de huevo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas. En aún otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un método para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto utilizando un cóctel de enzimas formulado de conformidad con la presente invención. Este método comprende también el paso general de suministrar un cóctel de enzimas adaptado para hidrolizar una mancha y/o suciedad de pasto a una mancha y/o suciedad objetivo de pasto que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas.

En aún otros aspectos, se describen y reivindican métodos para utilizar composiciones que comprenden el cóctel de enzimas de la presente invención para eliminar manchas y/o suciedad hidrolizables por enzimas. Dichos métodos también por lo general comprenden el paso de suministrar un composición detergente que contiene el cóctel de enzimas a una mancha y/o suciedad hidrolizable por enzimas para la que se desea su eliminación. En otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un método para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo utilizando las composiciones detergentes que comprenden el cóctel de enzimas a base de huevo descrito en la presente. Dicho método también comprende por lo general el paso de suministrar una composición detergente que comprende el cóctel de enzimas a base de huevo a una mancha y/o suciedad de huevo para la que se desea su eliminación. En aún otro aspecto de la presente invención, se describe y reivindica un método para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto utilizando composiciones detergentes que comprenden el cóctel de enzimas a base de hierba tratado en la presente. Dicho método también comprende por lo general el paso de suministrar una composición detergente que comprende el cóctel de enzimas a base de hierba a una mancha y/o suciedad de pasto para la que se desea su eliminación. En aún otros aspectos de la presente invención, se describen y reivindican métodos para utilizar los productos, de consumo y de cualquier otra forma, que comprenden los cócteles de enzimas descritos en la presente. Dichos métodos también comprenden por lo general el paso de aplicar el producto que incorpora un cóctel de enzimas formulados de conformidad con la presente invención a una mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas. Por supuesto, un técnico de la presente invención comprenderá fácilmente que los pasos precisos involucrados en los presentes métodos depende de varios factores incluyendo, pero sin limitarse a: la naturaleza del producto que comprende el cóctel de enzimas formulado de conformidad con la presente Invención, la composición del cóctel de enzimas formulado en dicho producto y la mancha y/o suciedad objetivo que se desea eliminar por medio de hidrólisis por enzimas utilizando los productos descritos en la presente.

Ejemplos de preparación Ejemplo 1 : composición de la proteína y la especificidad de la proteasa para las manchas v/o suciedad de huevo Se utilizaron herramientas multianalíticas para establecer que diferentes proteasas se asocian con diferentes especificidades contra las diversas proteínas encontradas en las manchas y/o suciedad de huevo. Estos datos apoyan claramente el modelo reivindicado de la formulación de un cóctel de proteasa para la eliminación de manchas y/o suciedad de huevo. Los resultados de esta prueba se incluyen a continuación: La actividad se mide utilizando un espectrofotómetro automático Hitachi 911 : las enzimas proteolíticas reaccionan con la dimetilcaseína para producir aminoácidos que a su vez reaccionan con el ácido trinltrobencenosulfonico para proporcionar un complejo coloreado. La intensidad del color, leída a 420 nm, es proporcional a la actividad de la proteasa en la muestra que se expresa en términos de mg/mL (mg activo en el mL de la muestra) de la actividad de la proteasa calibrado con la referencia de Savinase®. Como método alternativo para medir la actividad, fragmentos de péptido hidrolizado del sustrato de ia proteína se determinaron por medio del LC-MS con el detector de tiempo de vuelo. La intensidad del fragmento de péptido es proporcional a la actividad de la proteasa en la muestra de enzima. Para las proteínas de lipovitelina, el sustrato el sustrato fue incubado con 5 ppm de la proteasa en tampón TRIS®, y la proteína intacta y sus fragmentos hldrolizados fueron monitoreados por medio de ensayo SDS-PAGE. La intensidad del fragmento de péptido es proporcional a la actividad de la proteasa en la muestra de enzima.

Composición de las La mejor proteasa Método analítico proteínas ( %) Leche a Caseína (39) Ovozyme LC-MS, Hitachi 911 ß Caseína (31) Esperase LC-MS K Caseína (10) Proteínas de suero (19) (Lactoglobulina/ Inmunoglobulina) Huevo Clara: Ovalbúmina (54) Esperase LC-MS, Hitachi 911 , Conalbúmina (13) Ovomucoide (11) Globulinas (8) Lisozima (4) Ovomucina_(2) Yema: Lipovitelina (50) Savinase SDS-PAGE Fosvitina Proteasa B LC-MS, Hitachi 911 También se confirmó que las proteínas de yema hidrófobas son los sustratos más resistentes al ataque proteolítico. Después de 6 horas de incubación de la lipovitelina con diversas proteasas, se observó que aproximadamente la mitad de las bandas iniciales de proteínas permanecieron intactas en las imágenes por SDS-PAGE. Durante el mismo tratamiento, otras proteínas de la leche y la clara de huevo fueron totalmente digeridas antes de treinta minutos por las proteasas probadas.

Ejemplo 2: identificación del cóctel de enzimas (proteasa y/o proteasa + fosfolipasa) para mejor eliminación de una mancha v/o suciedad de huevo contra una referencia en ejecuciones detergentes para el lavado automático de vajilla y el lavado a mano de vajilla Se realizó una prueba de micro lavado en placas de 24 pozos. Se troquelaron discos de acero inoxidable utilizando un martillo y punzón. Se pesaron discos limpios para determinar los pesos iniciales. Se prepararon manchas de huevo (véase protocolo de preparación más abajo). Utilizando un despachador de jeringa, se despacharon 50 µ?_ de huevo preparado sobre cada disco. Se secaron a temperatura ambiente durante 30 minutos, y luego se hornearon en un horno a 80 °C durante 2 horas. Se enfriaron a temperatura ambiente. Los discos se pesaron después de ensuciar, para obtener los pesos de los discos sucios. Los discos sucios se insertaron en una placa de 24 pozos de poliestireno NUNCLON® 24. Una solución de producto para el lavado automático de vajilla se preparó mezclando completamente la cantidad apropiada de ADW sin el producto enzimático (p.ej., gej: 8000 ppm: polvo 4500 ppm), o detergente para el lavado a mano de vajilla sin el producto enzimático (p.ej., 1200 ppm) en 1 L de agua de 11 gpg a 40 °C. Una solución de dureza se preparó mezclando 188.57 g de 030?2· 2?20 y 86.92 g de MgCI? 6H2O en 1 L de agua desionizada. Se añadió 2 mL de solución de ADW precalentada a 55 °C a cada celda. Se añadió la cantidad apropiada de enzima a cada celda. Los tratamientos se pueden ejecutar seis a lo largo con cuatro repeticiones, o cuatro a lo largo con seis repeticiones. Se sella la placa con la película. La placa se coloca en una incubadora/agitador precalentada y se asegura con las mordazas de frasco. Se lava durante 30 minutos a una temperatura apropiada (55 °C para Euro), 19 rad/s (180 RPM). Después de lavar, se enjuaga sumergiendo cuidadosamente en un baño de agua tibia tres veces separadas. Se retiran los discos de la placa y se secan en un homo durante 1 hora a 80 °C. Una vez secos, los discos se pesan para obtener los pesos lavados. La evaluación gravimétrica resultante en porcentaje de eliminación se calcula de la siguiente manera: % de eliminación = (peso sucio-peso lavado)/(peso sucio-peso limpio) x 100 índice de eliminación = % de eliminación / % de eliminación por la proteasa de referencia (Savinase ®) Preparación de huevos revueltos Los huevos para usarse en las pruebas de estos cócteles de enzimas y/o las composiciones detergentes que comprenden los mismos, se preparan de la siguiente manera: (1) se mezclan 100 mL de leche de 10 % de grasa con 3 huevos enteros; (2) se cocina la mezcla antes mencionada, se agita continuamente hasta tornarse ligeramente líquido; (3) se añaden otros 40 mL de leche, y la mezcla se mezcla con una mezcladora manual a alta temperatura hasta lograr una mezcla suave, sin señales de grumos; y (4) la mezcla de huevos se enfría a temperatura ambiente antes de ensuciar. El perfil de rendimiento indica que la enzima Savinase y la proteasa B son proteasas individuales de buen rendimiento para aplicaciones de lavado automático de vajilla (la referencia ADW, por sus siglas en inglés) y la proteasa A es una sola proteasa de buen rendimiento para aplicaciones de detergentes para el lavado a mano de vajilla (la referencia LDL, por sus siglas en inglés), para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo. Sin embargo, el uso de un cóctel de proteasa (p.ej. proteasa B + Esperase y/o proteasa B + Ovozyme) exhiben beneficios de rendimiento significativamente mejores que una sola proteasa contra las manchas y/o suciedad de huevo. Los cócteles de proteasa exhiben más de cinco veces el rendimiento contra una proteasa B de referencia en aplicaciones de lavado automático de vajilla (ADW, por sus siglas en inglés) y la referencia proteasa A en aplicaciones de detergentes líquidos (LDL, por sus siglas en inglés). Estos beneficios del cóctel de proteasa han sido confirmados en una prueba a escala completa de lavado automático de vajilla. Preparación de las manchas de huevo utilizando portaobjetos de acero inoxidable 2.54 x 7.62 cm (1 x 3 pulgadas). (1 ) Se miden 140 ml_ de leche entera. (2) 3 huevos de tamaño mediano (clara y yema) se mezclan con 100 mL de la leche entera antes mencionada, y se cocinan en una sartén no adherente (sin grasa). Los huevos se agitan continuamente hasta que estén cocidos pero aún ligeramente líquidos. (3) Se añade el resto de los 40 mL de leche entera. (4) Se colocan los huevos en un cuenco y luego se mezcla hasta lograr una mezcla suave, sin señales de grumos, utilizando un mezclador a mano en la posición más alta. (5) Cada portaobjeto se sumerge dentro de los huevos revueltos y se le da un golpecito una sola vez, asegurando que haya aproximadamente la misma cantidad de huevo sobre cada portaobjeto. Los respaldos de los portaobjetos se limpian sobre un paño para limpiar y colocar sobre una parrilla del homo. (6) Los portaobjetos sucios se colocan sobre dos parrillas del horno en orden numérico. (7) Los portaobjetos se secan durante 30 minutos a temperatura ambiente. (8) Los portaobjetos se cocinan durante 2 horas a 80 °C (+/- 1 °C), con los estantes superiores e inferiores cambiados y rotados en 180° (+/- 1 °C) después de 1 hora. (9) Los portaobjetos sucios enfriados se pesan en orden 1-96. Lavado: se colocan ocho portaobjetos manchados tanto en la parrilla superior como en la parrilla inferior de la lavadora. El prelavado y el lavado principal se basa en la capacidad de tazas de la lavadora Whirlpool 840 de 40 ml_ para el prelavado y 60 mL para el lavado principal. Normalmente en una prueba se prueban cuatro productos utilizando cuatro lavadoras GE 500. Para el ciclo de prueba, los portaobjetos sucios se cargan y el producto de prueba se coloca en las tazas de prelavado y lavado principal. Las temperaturas del agua se regulan en 49 °C (120 °F) y las lavadoras se encienden al ciclo normal de lavado. Los portaobjetos se retiran para pesar al final del ciclo de enjuague; no pasan por el ciclo de secado. Al final de la cuarta repetición, cada producto ha sido probado una vez en cada máquina. Las cuatro repeticiones se ejecutan en un solo día. Este mismo procedimiento se repite al siguiente día, utilizando nuevos sustratos sucios. Esto proporciona un total de 8 repeticiones por producto, cuyo promedio luego se para los resultados finales. La evaluación gravimétrica resultante en porcentaje aproximado de eliminación se calcula de la siguiente manera: % de eliminación = (peso sucio-peso lavado)/(peso sucio-peso limpio) x 100 índice de eliminación = % de eliminación / % de eliminación por la proteasa de referencia (Savinase®) Los resultados de dichas pruebas de rendimiento se incluyen de la siguiente manera: índice de eliminación de los huevos revueltos contra proteasa B en ADW 24 Prueba de pozos Prueba a escala completa Enzimas Gel Polvo Gel Polvo Proteasa B (2.5 ppm) 100 100 100 100 Ovozyme (2.5 ppm) 105 75 110 120 Esperase (2.5 ppm) 106 99 111 108 Proteasa B +Ovozyme(1.25 ppm+1.25 ppm) 144 134 141 123 Proteasa B +Esperase(1.25 ppm+1.25 ppm) 158 109 112 169 Proteasa B +Fosfolipasa C 160 148 107** 111 equivalente a un beneficio de +2 PSU en la evaluación de la clasificación visual.

Eliminación de huevos revueltos en detergente de lavado a mano de vajilla por micro clasificación de 24 pozos Un aumento significativo en la eliminación contra la proteasa A se determinó aun a un nivel total más bajo de proteína en la aplicación del cóctel.

Ejemplo 3: identificación de cóctel de enzimas (proteasa, lipasa, hemicelulasa una de las carbohid rasas) para mejor limpieza de hierba contra la referencia de proteasa A en detergente HDL Se observó que la combinación de la proteasa A y la lipasa muestran aproximadamente 0.5 unidades de calificación de panel (PSU, por sus siglas en inglés) de beneficio contra la proteasa A. Los sistemas de clasificación por PSU se usan para comparar dos productos (fórmulas), por ejemplo A y B. Las dos fórmulas se prueban por rendimiento, p.ej. manchas residuales posteriores al lavado. En este experimento, se compararon varias telas lavadas con tanto A como B. Dos o más jueces realizaron las clasificaciones donde utilizaron la denominada escala Schelle: 0: Sin preferencia 1 : Pienso que este producto es un poco mejor (dudoso) 2: Sé que este producto es un poco mejor 3: Este producto es mejor 4: Este producto es mucho mejor La respuesta de una dosis de proteasa (proteasa A) en la limpieza de hierba en lavado a baja temperatura con el uso de detergente líquido: 4 PSU de beneficio por alto nivel de proteasa Prueba de minilavadora: 12 minuto de lavado, 15 °C (60 °F) temperatura de lavado. Concentración del producto 1532 ppm en el lavado, 8 gpg de dureza (agua potable). Las telas manchadas con hierba CW se obtuvieron de Empirical Manufacturing Company, Ohio, USA. Además, la combinación de proteasa y carbohidrasa muestra beneficios significativamente mejorados en la limpieza de hierba como se muestra a continuación: Prueba a escala completa en lavadora (PSU) contra control de detergente líquido Tide: Enzimas contra nulo-Enzima Pectato liasa 2 ppm 2.5 PSU Proteasa A 0.59 ppm 2 PSU Pectato liasa 2 ppm + proteasa A 0.59 ppm 4 PSU Pectato liasa/xiloglucanasa 2 ppm + proteasa A 0.59 ppm 4 PSU Las pruebas a escala completa en lavadora se realizaron a 6 gpg de dureza, bajo condiciones de lavado de los EE.UU.

Ejemplo 4: composiciones detergentes que comprenden cócteles de enzimas para eliminar manchas v/o suciedad de huevo Los siguientes detergentes totalmente en forma sólida formuladas para el lavado automático de vajilla se prepararon para eliminar las manchas y/o suciedad de huevo de conformidad con la presente invención: 1 2 3 % Activo % Activo % Activo Citrato de sodio 15 15 15 Carbonato de sodio 17.5 20 20 Polímero dispersante 6.0 6.0 6.0 Hidroetildifosfonato (HEDP; ácido) 1.0 0.5 0.71 Surfactante no iónico (SLF18; Olin Corp.) 2.0 2.0 2.0 Percarbonato de sodio monohidrato 1.5 1.5 1.5 Ovozyme 24T (proteasa) - 1.1 - Proteasa B - - 1.1 Catalizador de cobalto 0.2 0.07 0.4 Esperase 80L (proteasa) 1.1 - 1.1 Savinase 12T (proteasa) 1.1 1.1 - Termamyl 60T (amilasa) 1.5 1.0 1.0 Fosfolipasa C 2.0 2.0 2.0 BRITESEL H202(como Si02) 8.0 8.0 8.0 Metasilicato (anhidro) 1.25 - - Parafina 0.5 -- - Benzotriazol 0.3 - - Sulfato, agua, menores csp 100 % csp 100 % csp 100 % Ejemplo 5: composición detergente que comprende cócteles de enzimas para la eliminación de manchas v/o suciedad de pasto Las siguientes composiciones detergentes líquidas se preparan de conformidad con la presente invención para eliminar manchas y/o suciedad de pasto % en peso de las composiciones detergentes A B c D E Alquilbencenosulfonato lineal 18 - - - - Alquilsulfato C12-C15 etoxilado - 2 8 11 5 Propil dimetil amina Ce-Cío 2 2 2 2 1 Óxido de alquil dimetil amina C12-C14 - - - - 2 Alquilsulfato C12-C15 17 12 7 8 N-metilglucamida C12-C14 - 5 4 4 3 Alcohol graso C12-C14 <x3000>etoxilado 12 6 1 1 1 C12-C18 Ácido graso 11 11 4 4 3 Ácido cítrico anhidro 5 1 3 3 2 Dietilentriamina penta Ácido metilenfosfónico 1 1 1 1 0.5 Monoetanolamina 11 8 5 5 2 Hidróxido de sodio 1 1 2.5 1 1.5 Propanodiol 12.7 14.5 13.1 10.0 8 Etanol 1.8 1.8 4.7 5.4 1 Pectato liasa (3 g/L) 0.05 - - 0.05 - Lipasa (5 g/L) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 Proteasa A (34 g/L) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Xyloglucanasa (2 g/L) - 0.09 - - 0.09 Carezyme (3 g/L) - - 0.05 - - Polímero a base de tereftalato 0.5 0.5 - 0.3 0.3 Ácido bórico ' 2.4 2.4 2.8 2.8 2.4 Xiienosulfonato sódico - - 3 - - DC 3225C 1 1 1 1 1 2-butil-octanol 0.03 0.04 0.04 0.03 0.03 Silicona ramificada 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 Todos los documentos citados se incorporan, en su parte pertinente, en la presente como referencia; la cita de cualquier documento en la presente no debe interpretarse como una admisión de que es industria anterior con respecto a la presente invención. Si bien se han ilustrado y descrito realizaciones particulares de la presente invención, será evidente para los experimentados en la industria que se pueden hacer varios cambios y modificaciones sin desviarse del espíritu y alcance de la invención. Se ha pretendido, por consiguiente, cubrir en las reivindicaciones anexas todos los cambios y modificaciones que están dentro del alcance de la invención.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1. Un método para formular un cóctel de enzimas; el método comprende los pasos de: (a) identificar una mancha y/o suciedad que se busca eliminar por medio de hidrólisis por enzimas; (b) examinar la mancha y/o suciedad para determinar un nivel de presencia de cada componente hidrolizable por enzimas de dicha mancha y/o suciedad; (c) clasificar múltiples enzimas para determinar qué enzima muestra una mayor actividad contra cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad; y (d) incorporar una o más enzimas que muestran mayor actividad contra cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad en el cóctel; (e) opcionalmente, incorporar una o más enzimas que muestran mayor actividad contra cada componente hidrolizable por enzimas en la mancha y/o suciedad en una cantidad correspondiente al nivel de presencia de dicho componente hidrolizable por enzimas en dicha mancha y/o suciedad.

2. Un cóctel de proteasa para eliminar una mancha y/o suciedad que comprende proteína; el cóctel comprende una o más enzimas adaptadas para eliminar una o más proteínas presentes en la mancha y/o suciedad; las enzimas se incorporan en el cóctel en una cantidad correspondiente al contenido de una proteína objetivo en la mancha y/o suciedad.

3. Un cóctel de carbohidrasa para eliminar una mancha y/o suciedad que comprende carbohidrato; el cóctel comprende una o más enzimas adaptadas para eliminar uno o más carbohidratos presentes en la mancha y/o suciedad; en donde las enzimas se incorporan en el cóctel en una cantidad correspondiente al contenido de un carbohidrato objetivo en la mancha y/o suciedad.

4. Un cóctel de Iipasa para eliminar una mancha y/o suciedad que comprende Iipasa; el cóctel comprende una o más enzimas adaptadas para eliminar uno o más lípidos presentes en la mancha y/o suciedad; en donde las enzimas se incorporan en el cóctel en una cantidad correspondiente al contenido de un lípido objetivo en ía mancha y/o suciedad.

5. Un cóctel de fosfolipasa para eliminar una mancha y/o suciedad que comprende fosfolípido; el cóctel comprende una o más enzimas adaptada para eliminar uno o más fosfolípidos presentes en la mancha y/o suciedad; en donde las enzimas se incorporan en el cóctel en una cantidad correspondiente al contenido de un fosfolípido objetivo en la mancha y/o suciedad.

6. Un cóctel de proteasa para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo; el cóctel comprende por lo menos dos proteasas seleccionadas del grupo que comprende: (a) una proteasa adaptada para hidrolizar caseína a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (b) una proteasa adaptada para hidrolizar la fosvitina y/o lipovitelina a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (c) una proteasa adaptada para hidrolizar ovalbúmina a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; y (d) combinaciones de éstos; en donde una relación entre cualesquiera dos de las proteasas es de 1000:1 a 1 :1000, basado en el peso de la proteína activa.

7. Un cóctel de enzimas para eliminar una mancha y/o suciedad de huevo; el cóctel comprende: (a) una lipasa adaptada para hidrolizar triglicérido y/o diglicérido a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (b) una fosfolipasa adaptada para hidrolizar fosfatidilcolina o lisofosfatidilcolina a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; y (c) opcionalmente, el cóctel de proteasa de conformidad con la reivindicación 6; en donde una relación entre cualesquiera dos de las enzimas es de 1000:1 a 1 :1000, basado en el peso de la proteína activa.

8. Un cóctel de proteasa para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto; el cóctel comprende: (a) una proteasa adaptada para hidrolizar D-ribulosa 1,5-difosfato carboxilato a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (b) una proteasa adaptada para hidrolizar una o más proteínas fijadoras de la clorofila a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; y (c) una proteasa adaptada para hidrolizar la sintasa ATP a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad proteolítica por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; en donde una relación entre cualquiera dos de las proteasas es de 1000:1 a 1 :1000, basado en el peso de la proteína activa; en donde las proteínas fijadoras de la clorofila se seleccionan del grupo que comprende CP47, CP43, CP29, CP27, CP24 y combinaciones de éstos.

9. Un cóctel de enzimas para eliminar una mancha y/o suciedad de pasto; el cóctel comprende: (a) una lipasa adaptada para hidrolizar triglicérido y/o diglicérido a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (b) una pectinasa adaptada para hidrolizar el éster metílico del ácido poli-D-galacturónico a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (c) una hemicelulasa adaptada para hidrolizar hemicelulosa, xiloglucanos, xilanos y combinaciones de éstos a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; (d) una celulasa adaptada para hidrolizar celulosa y/o carboximetilcelulosa a una tasa de por lo menos 0.1 % de actividad por mg de proteína activa, de una enzima de referencia; y (e) opcionalmente, el cóctel de proteasa de la reivindicación 8; en donde una relación entre cualesquiera dos de las enzimas es de 1000:1 a 1 :1000, basado en el peso del activo.

10. Una composición detergente que comprende por lo menos uno de los cócteles de proteasa de conformidad con las reivindicaciones 2 y 6 a 9, en donde los cócteles de proteasa se encuentran a un nivel de 0.00001 % a 5 % en peso de la proteína activa pura del cóctel de proteasa, basado en el peso total de la composición detergente.