CN1849384A - 配制用以移除蛋基和草基污渍和/或污垢的酶混合物以及包含相同酶混合物的组合物和产品的方法 - Google Patents

配制用以移除蛋基和草基污渍和/或污垢的酶混合物以及包含相同酶混合物的组合物和产品的方法 Download PDF

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Abstract

基于目标污渍和/或污垢中存在的酶水解组分配制酶混合物的方法。更具体地讲，配制一种酶混合物，该酶混合物包含对目标污渍和/或污垢中每种成分具体的酶，任选地其中每种酶被掺入的含量相应于所述目标污渍和/或污垢中的酶水解组分的含量。移除蛋基和草基污渍的酶混合物还任选地依照本文公开的方法配制。此外，包含本文公开的酶混合物的组合物和产品以及使用相同酶混合物的方法。

Description

配制用以移除蛋基和草基污渍和/或污垢的酶混合物以及 包含相同酶混合物的组合物和产品的方法
发明领域
本发明涉及配制酶混合物的方法。本发明所述的酶混合物尤其被配制为包括一种特定的酶，所述特定酶对目标污渍和/或污垢中的每种组分是酶可水解的，任选地其中每种酶被掺入的量相应于所述目标污渍和/或污垢中的酶水解组分的含量。本发明进一步涉及依照本方法配制的，用以移除蛋基和草基污渍和/或污垢的酶混合物，以及包含相同酶混合物的组合物和产品。
发明背景
酶技术持续发展，这一点已经被多种多样的产品所证明-每一种产品掺入一种或多种酶以达到所声称的目的。事实上，酶现在被广泛应用于一般的领域，如织物护理、家居护理(例如，盘碟护理、硬质表面护理)、美容护理等。作为本领域持续研究与开发的结果，具有新型核苷酸序列的酶的数目已经减少了。因此，许多本领域的技术人员现在已经致力于酶混合物或者两种或多种酶的组合的确定，以达到对目标污渍和/或污垢的协同(和新的)水解有益效果。然而，在这些混合物中所用的单个酶典型地为人们所熟知。
这个在酶混合物领域的更新的研究已经导致与此酶混合物相关的几种性质的确定。例如，在本领域中以前已经被公开了在用于相同目标污渍和/或污垢的情况下，使用两种或多种蛋白酶比使用一种相同含量的蛋白酶提供增强的性能有益效果。同时使用酶混合物能递送比使用相似含量掺入的单个酶相同或更大的有益效果，本领域的技术人员将这一点归因于酶混合后显示具有的一些协同有益效果。但是，本领域的技术人员仍然必须清楚地说明可归因于任何可察觉的协同有益效果的确切基础。
实际上，在确定需要被包括进个体酶混合物的候选酶的过程中，本领域的技术人员通常使用一种更没有选择性的发明技术。即，酶技术专家典型地通过首先确定一种目标污渍和/或污垢来进行酶混合物的配制，这种目标污渍和/或污垢期望经由酶水解移除。技术专家然后确定所有已知的酶，这些酶据信递送一些对考虑中的目标污渍和/或污垢的水解有益效果。当单独使用时据信对目标污渍和/或污垢递送水解有益效果的单个酶的组合然后被进行对目标污渍和/或污垢的测试，以测定是否所述单个酶当组合使用时显示具有协同有益效果。在配制并测试显著数目的酶组合之后，研究者常常能得到一些结论，该结论关于对每个所考虑的目标污渍和/或污垢最有效的酶组合。
但是，使用同时方法的酶混合物配制有几个缺点。首先，使用常规的方法确定合适的酶组合直接涉及并且受限于最初的对单个候选酶的选择，该备用酶据信递送对目标污渍和/或污垢的水解有益效果。因此，如果一种适合水解目标污渍和/或污垢的一种具体的(和可能丰富的)组分的单个酶没有被包括到最初选择步骤中去，那么所述酶将被不适当的排除在所需混合物之外，从而会对任何由此产生的混合物的性能有益效果产生不利的影响。使用同时方法配制酶混合物还常常是昂贵的和耗费时间的。事实上，必须为每种酶混合物(常常为每种酶)进行大量的测试以测定任何协同有益效果的存在。然后技术专家必须评估每个测试的结果，并尝试联系在使用给定的酶混合物处理目标污渍和/或污垢和单独使用包含所述混合物的酶之间的任何可观察到的差异。最后，在已经进行了相当多的研究和测试之后，技术专家常常不能确定任何酶组合，该酶组合对目标污渍和/或污垢应能提供比使用单个酶和/或已知的酶混合物处理相同污渍和/或污垢显著更好的水解有益效果。
因此，本领域对确定一种配制酶混合物的方法有基本的需要，该方法更接近基于目标污渍和/或污垢中实际酶水解成分的组合，而不是本领域常规使用的无系统的检验模式。这种方法将至少部分地减少在尝试确定协同有益效果过程中测试多种酶和组合的需要。此配制酶混合物的方法还将可能导致配制出更适于水解所考虑的目标污渍和/或污垢的酶混合物，该方法更接近基于目标污渍和/或污垢中酶水解成分的组合。理论上，可以预测一种包含针对目标污渍和/或污垢中的每种酶水解组分的特定酶，并任选地掺入相应于每种组分含量的酶混合物，将提供比任何其它酶组合更好的对目标污渍和/或污垢的性能有益效果。
此外，本领域对确定和配制用以移除尤其顽固的污渍或污垢的酶混合物有基本的需要。例如，蛋基的污渍和/或污垢一直同样带给酶技术专家和消费者显著的困惑。尽管许多据称适于移除蛋基污渍或污垢的混合物被公开和/或商品化，消费者仍然一直在努力从盘碟、织物、硬质表面等物品上根除这些污渍或污垢。配制和使用移除草基污渍或污垢的酶混合物也经历了相似的困难-尽管事实上许多这种混合物已经被确定和/或商品化了。
发明概述
本发明提出并解决了所有与目前用于酶混合物发明和配制的方法相关的困难。事实上，本发明涉及更接近基于目标污渍和/或污垢中的实际组合物的酶混合物配制方法，而不是广泛的测试酶混合物，所述酶混合物由据信单独使用时对目标污渍和/或污垢递送水解有益效果的酶组成。
因此，依照本发明的首要方面，基于目标污渍和/或污垢中酶水解的组合物配制酶混合物的方法被公开了。所述方法通常包括以下步骤：确定一种期望经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢，确定一种或多种适于水解目标污渍和/或污垢中的每种组分的酶；和掺入一种或多种适于水解目标污渍和/或污垢中相应组分的酶。在本发明的另一方面，酶以相应于目标污渍和/或污垢中具体酶水解组分的含量的量被掺入个体酶混合物中。在本发明的另一方面，产生的酶混合物被测试移除目标污渍和/或污垢，以测定酶混合物的适于水解所述污渍和/或污垢的含量。在本发明的另一方面，将依照本文公开的方法配制的酶混合物在移除目标污渍和/或污垢的性能与使用单个酶或以前公开的酶混合物移除同样的目标污渍和/或污垢进行比较，此时所考虑的混合物和目前配制的酶以相应的量都被递送到同样的污渍和/或污垢上。
依照本发明的另一个方面，酶混合物被公开并受权利要求书保护。在本发明的一个方面，所述混合物依照本文公开的酶混合物配制方法配制。在本发明的另一方面，一种用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物被公开并受权利要求书保护。所述混合物通常掺入一种特定的酶，所述特定酶作用于典型的蛋基污渍和/或污垢中的每种酶可水解组分。任选地，所述特定酶含量相应于所述蛋基污渍和/或污垢中存在的酶水解组分的含量。在本发明的另一方面，一种用以移除草基污渍和/或污垢的酶混合物被公开并受权利要求书保护。所述混合物也通常使用一种特定的酶，所述特定酶作用于所考虑的草基污渍和/或污垢中的每种酶可水解组分。任选地，所述特定酶含量相应于所述草基污渍和/或污垢中存在的酶水解组分的含量。
在本发明的另一方面，本文公开的酶混合物被掺入一种或多种组合物和/或产品中。在本发明的一个方面，一种用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物被掺入洗涤剂组合物中，该组合物适于从例如碗碟、硬质表面和/或织物中移除蛋基污渍。在本发明的另一方面，一种用以移除草基污渍和/或污垢的酶混合物被掺入一种洗涤剂组合物，该组合物适于从例如织物、硬质表面等物品中移除蛋基草基污渍和/或污垢。在本发明的另一方面，依照本文公开的方法配制的酶混合物被掺入到一种产品、消费品或换句话讲任选地提供一种或多种辅助的酶水解有益效果。
在本发明的另一方面，使用本文公开的酶混合物的方法、包含相同酶混合物的组合物和/或包含相同混合物的产品被公开并受权利要求书保护。所述方法通常包括以下步骤：递送和/或施用一种酶混合物到期望经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢，并任选地在递送后移除所述酶混合物。每种方法的确切步骤取决于几个因素，包括但不限于，包含期望经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢的底物的性质、个体酶混合物中使用的酶的性质、配制人员的需要和/或能力。
发明详述
术语“混合物”或短语“酶混合物”是指通过所述术语包含两种或多种酶描述的混合物。
短语“适于水解”是指被所述短语描述的酶和/或酶混合物，它们能够以至少约0.1％以下标准酶的速率水解目标污渍和/或污垢的一种或多种酶水解组分：蛋白酶Savinase、脂肪酶Lipolase、磷脂酶A1、A2、B、C、和/或D、果胶酶Pectinase、半纤维素酶Xyloglucanase和纤维素酶Carezyme。
术语“蛋白酶A”是指在US RE 34,606，图1A、1B和7，以及栏11，第11至37行中描述的酶序列，专利的相关部分被引入本文以供参考。蛋白酶A还描述于美国专利5,441,882，该专利被引入本文以供参考。
术语“蛋白酶B”是指在美国专利5,955,340和5,700,676，图1A、1B和5，以及栏1中描述的酶序列，专利的相关部分被引入本文以供参考。蛋白酶B还描述于美国专利5,310,675、RE 34,606和5,441,882中，这些专利都引入本文以供参考。
术语“蛋白酶C”是指在美国专利6,312,936和6,482,628，图1至3[SEQ ID 3]，以及栏25，第12行中描述的酶序列。蛋白酶C还描述于美国专利5,955,340、5,310,675、RE 34,606和5,700,676中，这些专利都引入本文以供参考。
第一方面：配制酶混合物的方法
因此，依照本发明的第一方面，一种配制酶混合物的方法被公开并受权利要求书保护。在本发明的一个方面，所述方法包括以下步骤：确定一种试图经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢；检验所述目标污渍和/或污垢以测定其中包含的每种酶水解组分的含量；筛选一种或多种酶以测定哪种酶表现出对目标污渍和/或污垢中的每种酶水解组分最高的活性；和向所述混合物掺入一种或多种对目标污渍和/或污垢中的每种酶水解组分表现最高活性的酶。任选地，含量相应于目标污渍和/或污垢中存在的酶水解组分的含量。
对试图经由酶水解移除的目标污渍的确定和检验是本文公开的配制方法的一个尤其重要的方面。当然所考虑的目标污渍和/或污垢必须包含合适百分比的酶水解组分以使其适于通过本文公开的方法和混合物移除。不受理论的约束，据信适用于本文公开的方法和混合物移除的目标污渍和/或污垢包含基于所述目标污渍和/或污垢的总百分比，至少约10％，优选地至少约15％，更优选地至少约20％的酶水解组分。目标污渍和/或污垢的组成分析将导致关于所述污渍和/或污垢中的每种基本酶水解组分的存在和性质的近似的测定。不受理论的约束，据信移除目标污渍和/或污垢中的每种基本的酶水解组分有利于移除全部的目标污渍和/或污垢。在水解主要组分的基础上，其它掺入个体混合物的酶能随后完成对全部目标污渍和/或污垢的移除。可供选择地，并且不希望受理论的约束，对目标污渍和/或污垢中主要组分的酶水解据信能最小化目标中其它非酶组分引起的阻抗，并因此更好的有利于表面活性剂和其它清洁助剂在移除全部所考虑的目标污渍和/或污垢中的使用。
在依照本发明的方法测定目标污渍和/或污垢中的每种酶水解组分的性质和/或百分比含量的基础上，一种或多种酶能随后被筛选出以用于所述目标中的每种主要的酶水解组分。本文公开方法的使用者能随后确定对目标污渍和/或污垢中每种主要酶水解组分显示具有最高水解水平的单个酶。在本发明的另一方面，两种或多种酶能被选择以用于目标污渍和/或污垢中的每种酶水解组分。在缩小对目标污渍和/或污垢中的每种主要酶水解组分显示具有最高水解水平的那些单个酶的选择的基础上，使用者能随后依照所述选择配制酶混合物。在本发明的另一方面，掺入依照本发明配制的酶混合物中的单个酶被用于个体酶混合物，其含量与在目标污渍和/或污垢中的每种主要的酶水解组分的含量相对应。
在依照本文公开的方法配制酶混合物的基础上，使用者能随后测试个体混合物用于需要经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢。在本发明的另一方面，这种测试的结果随后与使用其它单个酶和/或酶混合物进行比较，其掺入的量相应于配制混合物的量，以确认依照本文公开的方法配制的混合物与常规的酶和/或酶混合物相比，当用于相同的目标污渍和/或污垢时显示具有更好的酶水解有益效果。
用于移除蛋基污渍或污垢的酶混合物
在本发明的另一方面，包含两种或多种适于移除蛋基污渍和/或污垢的酶的酶混合物被公开。在本发明的一个方面，用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物依照本文公开的酶混合物配制方法配制。即，在本发明的一个方面，用以移除蛋基污渍的酶混合物通过检验期望经由酶水解移除的蛋基污渍和/或污垢被配制。这种检验导致确定所述目标污渍和/或污垢中的每种主要的酶水解组分。多种酶，单独和组合使用，随后能被测试用于所述目标污渍和/或污垢中的每种主要的酶水解组分。在测定哪种酶显示具有对所述蛋基污渍和/或污垢中的每种酶水解组分最高的水解水平的基础上，个体酶然后能被掺入混合物，任选地，所述酶含量相应于所述蛋基污渍和/或污垢中的给定的酶水解组分的含量。在本发明的一个方面，单个酶被掺入一种酶混合物-作用于所述目标污渍和/或污垢的具体的酶水解组分，它的量相应于所述目标污渍和/或污垢中的所述酶水解组分的含量。在本发明的另一方面，两种或多种作用于单个酶水解组分的酶被掺入个体酶混合物中。
了解天然的蛋通常由两种主要成分构成(即，蛋白和蛋黄)是重要的。已经测定蛋白和蛋黄均典型并主要由蛋白质构成。不希望受理论地约束，据信蛋白由以下蛋白质(以其近似的存在含量)构成：卵清蛋白(约占总蛋白蛋白质组成的54％)；伴清蛋白(约占总蛋白蛋白质组成的13％)；卵类粘蛋白(约占总蛋白蛋白质组成的11％)；溶解酵素(约占总蛋白蛋白质组成的3.5％)；球蛋白(约占总蛋白蛋白质组成的8％)；和卵粘蛋白(约占总蛋白蛋白质组成的1.5％)。应该注意并强调的是，上述组合物含量是近似的，并且不旨在限制本发明的范围。其它混杂的组分、蛋白质基的物质等等，据信构成了天然蛋白剩余9％的部分。
此外，需重点说明的是类脂组成了天然蛋黄的约30％。接下来，所述类脂由约66％的甘油三酯和约28％的磷脂构成。不受理论的约束，蛋黄通常也由蛋白质构成-即，卵黄蛋白原I、卵黄蛋白原II和卵黄蛋白原III。事实上，它被进一步假定是卵黄蛋白原II，这种蛋黄的主要蛋白质组分被加工成为卵黄磷蛋白I、卵黄磷蛋白II、卵黄高磷蛋白和YGP40。重申，需强调的是上述组合物的性质决不旨在限制本发明的范围。应该了解天然蛋白和蛋黄的确切含量取决于几个因素，包括但不限于：所考虑的蛋的来源、影响蛋的物理和/或化学状况和用于检查所讨论的蛋的组成成分的仪器。然而，上述近似值据信组成了典型的、天然蛋的基本酶水解组分。
本领域的技术人员将容易的认识到蛋基污渍的确切组成取决于常规蛋基食物中考虑加到蛋中的其它成分。典型地，例如牛奶，被用于制作炒蛋。因此，牛奶的多种酶水解组分必须被考虑进用以移除炒蛋基的污渍和/或污垢的酶混合物的配制。不受理论地约束，据信牛奶由以下蛋白质(以其近似的含量)构成：α-S1酪蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的30.6％)；α-S2酪蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的8％)、α酪蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的30.8％)；β-酪蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的10.1％)；a-乳白蛋白乳清蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的3.7％)；b-乳球蛋白乳清蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的9.8％)；血清白蛋白乳清蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的1.2％)；免疫球蛋白乳清蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的2.1％)；混杂乳清蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的2.4％)；和脂肪球膜蛋白(约占总牛奶蛋白质组成的1.2％)。重申，应该注意并强调上述牛奶蛋白质组合物的近似含量决不旨在限制本发明的范围。本领域的技术人员将容易的认识到牛奶中存在的酶水解组分的确切组成取决于几个因素，包括但不限于，牛奶的脂肪含量(例如，无脂肪、1％脂肪、2％脂肪、10％脂肪)；影响牛奶的物理和/或化学状况(例如，热)等因素。上述近似值仅旨在使本方法的使用者和本混合物的配制人员能掺入对蛋基污渍和/或污垢(在炒蛋的情况中蛋基污渍和/或污垢可以包括牛奶的酶水解组分)中的每种基本的酶水解组分合适含量的酶。
清楚的是蛋和牛奶(牛奶可以是炒蛋的一种成分)中的酶水解组分的大部分都由蛋白质组成。因此，用以移除本文公开的蛋基污渍和/或污垢的酶混合物通常使用一种或多种蛋白酶的组合-每种蛋白酶适于水解目标蛋基污渍和/或污垢中的一种或多种具体蛋白。因此，依照在本发明的一个方面，用以移除蛋基污渍或污垢的蛋白酶混合物被公开了。所述混合物包含基于所述酶混合物的总重量，按蛋白酶的纯活性蛋白重量计，(a)约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％，适于以标准酶至少0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解酪蛋白。在本发明的一个方面，Novozyme的市售Savinase被用作标准酶，与它相比任何据信水解酪蛋白的蛋白酶的蛋白分解活性被测量以决定是否所述蛋白酶适于被包括进本混合物。
在本发明的另一方面，本文公开的用以移除蛋基污渍或污垢的酶混合物进一步包含基于所述酶混合物的总重量，按蛋白酶的纯活性蛋白重量计，约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％，适于以标准酶至少约0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解卵黄高磷蛋白和/或卵黄磷蛋白。在本发明的一个方面，Novozyme的市售SAVINASE被用作标准酶，与它相比任何据信水解卵黄高磷蛋白和/或卵黄磷蛋白的蛋白酶的蛋白分解活性被测量以决定是否所述蛋白酶适于被包括进本混合物。
在本发明的另一方面，本文公开的用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物进一步包含基于所述酶混合物的总重量，按蛋白酶的纯活性蛋白重量计，约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％，适于以标准酶至少约0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解卵清蛋白。在本发明的一个方面，Novozyme的市售SAVINASE被用作标准酶，与它相比任何据信水解卵清蛋白的蛋白酶的蛋白分解活性被测量以决定是否所述蛋白酶适于被包括进本混合物。
适用于本发明的上下文的蛋白酶包括，但一定不限于，那些购自Novozymes(包括Savinase、Alcalase、Esperase、Ovozyme、Everlase、Neutrase、Durazyme、Pyrase、Flavourzyme)的蛋白酶；那些购自Genencor International(包括Propernase、Purafect蛋白酶A、蛋白酶B、蛋白酶C)的蛋白酶；那些购自Sigma(包括Elastase、蛋白酶V8、Pepsin、Papain、Bromelain、蛋白酶K)的蛋白酶；那些购自Biozyme Laboratories(包括Elastase)的蛋白酶；和任何其它可用的金属、酸性、中性和/或碱性蛋白酶。
在本发明的另一方面，脂肪酶也被掺入到用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物中。所述混合物包含基于所述酶混合物的总重量，按脂肪酶的纯活性蛋白重量计，(b)约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％，适于以标准酶至少约0.1％的水解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解甘油三酯和/或甘油二酯。在本发明的一个方面，Novozyme的市售Lipolase被用作标准酶，与它相比任何据信水解甘油三酯和/或甘油二酯的脂肪酶的活性被测量以决定是否所述脂肪酶适于被包括进本混合物。适用于本发明的上下文的脂肪酶(和/或酯酶)包括，但一定不限于，那些购自Novozymes(包括Lipase、Lipolase、Lipolase Ultra、Lipex、Palatase)和任何其它可用的中性和/或碱性脂肪酶。
在本发明的另一方面，磷脂酶也被掺入到用以移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物中。所述混合物包含基于所述酶混合物的总重量，按磷脂酶的纯活性蛋白重量计，约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％，适于以标准酶至少约0.1％的水解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解磷脂酰胆碱和/或溶血磷脂酰胆碱。
在本发明的一个方面，Novozyme的市售磷脂酶A1、A2、B、C和/或D被用作标准酶，与它相比任何据信水解磷脂酰胆碱和/或溶血磷脂酰胆碱的磷脂酶的活性被测量以决定是否所述磷脂酶适于被包括进本酶混合物。适用于本发明上下文的磷脂酶包括的那些购自Novozymes(包括磷脂酶)、购自Genencor International(磷脂酶)、购自Sigma(包括Phospholipase A、Phospholipase C)、和任何其它可用的中性和/或碱性磷脂酶。在本发明的另一方面，任何所述两种酶之间的比率为约1000∶1至约1∶1000，优选为约500∶1至约1∶500，更优选为约100∶1至约100∶1，最优选为约50∶1至约1∶50。
本领域的技术人员将容易的认识到，本文公开的酶混合物的确切组成取决于几个因素，包括但不限于：目标蛋基污渍和/或污垢的确切组成；影响目标蛋基污渍和/或污垢的物理和/或化学状况；介质，设想通过其递送本酶混合物到目标污渍和/或污垢；和配制人员的需要和/或能力。因此，本发明进一步寻求包括用以移除目标蛋基污渍或污垢的酶混合物，该混合物依照本文公开的方法任选地配制，它的确切的酶含量能根据给定蛋基污渍和/或污垢的组成而改变。
用以移除草基污渍或污垢的酶混合物
在本发明的另一方面，包含两种或多种用以移除草基目标污渍和/或污垢的酶的酶混合物被公开并受权利要求书保护。在本发明的一个方面，用以移除草基污渍和/或污垢的酶混合物通过使用本文公开的酶混合物配制方法配制。即，一方面酶混合物基于草基目标污渍和/或污垢中每种主要酶水解组分的性质和含量被配制。不受理论的约束，据信草基污渍和/或污垢通常由叶绿素、蛋白质、碳水化合物和类脂构成。
事实上，通过检验典型草基污渍和/或污垢显示叶绿素、β-胡萝卜素和其它色素在草细胞中以与叶绿素结合蛋白(例如，CP47、43、29、27、24)形成的复合体形式存在。大约四层不同的酶水解组分进一步包裹所述复合体。即，所述叶绿体被细胞壁覆盖，细胞壁包含纤维素、半纤维素、木聚糖、葡聚木糖、果胶和蛋白质。草基污渍或污垢的叶绿素被叶绿体膜进一步覆盖，叶绿体膜包含类脂(特征在于甾醇和它相应的酯)和蛋白质。草基污渍或污垢的叶绿素也被基质覆盖。基质是草细胞中CO2定位和蛋白质合成的场所。草细胞的基质通常由核糖体、ATP合成酶、金属离子、磷酸葡萄糖、淀粉和蛋白质构成。最后，类囊体膜，它包含糖脂、磷脂、甘油三酯、脂肪酸和蛋白质，包裹了叶绿素和其它色素。
基于草细胞中所有酶水解组分的总重量，据信天然的草细胞由约80％的碳水化合物、约10％的蛋白质和约3％的类脂构成。重申，本方法和/或混合物不旨在受上述草细胞组合物的近似值的限制。上述近似值旨在用作使用者依照本发明配制用以移除草基目标污渍和/或污垢的酶混合物的基础。
因此，在本发明的一个方面，用以移除草基污渍和/或污垢的蛋白酶混合物被公开。在本发明的一个方面，所述蛋白酶混合物包含：适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解D-核酮糖1，5-二磷酸羧基酶的蛋白酶；适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解一种或多种叶绿素结合蛋白的蛋白酶；和适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的蛋白分解活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解ATP合成酶的蛋白酶。在本发明的另一方面，Novozyme的市售Savinase被用作标准酶，与它相比任何据信水解草基污渍和/或污垢的组分的蛋白酶的蛋白分解活性被测量以决定是否所述蛋白酶适于被包括进本混合物。在本发明的另一方面，任何上述两种蛋白酶之间的比率为约1000∶1至约1∶1000，优选为约500∶1至约1∶500，更优选为约100∶1至约100∶1，更优选为约50∶1至约1∶50。在本发明的另一方面，用于上述混合物的叶绿素结合蛋白选自CP47、CP43、CP29、CP27、CP24以及它们的组合。
在本发明的另一方面，一种适于移除草基污渍和/或污垢的酶混合物被公开了。在本发明的一个方面，所述混合物包含：适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解甘油三酯和/或甘油二酯的脂肪酶；适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解聚-D-半乳糖醛酸甲酯的果胶酶；适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解半纤维素、葡聚木糖、木聚糖以及它们的组合的半纤维素酶；和适于以标准酶的每毫克活性蛋白至少约0.1％的活性，优选至少约1％，更优选至少约5％，最优选至少约10％的速率水解纤维素和/或羧甲基纤维素的纤维素酶。在本发明的一个方面，Novozyme的市售Lipolase被用作标准酶，与它相比任何据信水解草基污渍和/或污垢组分的脂肪酶的酶活性被测量以决定是否所述脂肪酶适于被包括进本混合物。在本发明的另一方面，Novozyme的市售Pectinase被用作标准酶，与它相比任何据信水解草基污渍和/或污垢组分的果胶酶的活性被测量以决定是否所述果胶酶适于被包括进本混合物。在本发明的另一方面，Novozyme的市售Xyloglucanse被用作标准酶，与它相比任何据信水解草基污渍和/或污垢的一种或多种组分的半纤维素酶的活性被测量以决定是否所述半纤维素酶适于被包括进本混合物。在本发明的另一方面，Novozyme的市售Carezyme被用作标准酶，与它相比任何据信水解草基污渍和/或污垢的一种或多种组分的纤维素酶的活性被测量以决定是否所述纤维素酶适于被包括进本文。在本发明的另一方面，本段所述的混合物进一步依照前段包含一种用以移除草基污渍和/或污垢的蛋白酶混合物。
在本发明的另一方面，一种用以移除草基目标污渍和/或污垢的酶混合物被公开了。一方面，这种混合物包含(a)基于所述酶混合物的总重量，按糖酶的纯活性蛋白重量计，含量为约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％的一种或多种用以水解碳水化合物的酶；(b)基于所述酶混合物的总重量，按蛋白酶的纯活性蛋白重量计，含量为约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％的一种或多种用以水解蛋白质的酶；和(c)基于所述酶混合物的总重量，按脂肪酶的纯活性蛋白重量计，含量为约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.1％，更优选约0.0002％至约0.03％，最优选约0.001％至约0.05％的一种或多种用以水解类脂的酶。
适用于本发明的上下文的糖酶包括那些购自Novozymes(包括Amylase、Termamyl、Duramyl、Natalase、Xyloglucanase、Pectate Lyase、Dextranase、Xylonase、β-Glucanase、Mannaway、Hemicelluloses、Cellulase)的酶；那些购自Genencor(包括Amylase、Hemicelluloses、Cellulase)的酶；和任何其它可用的糖酶。适用于本发明的上下文的蛋白酶包括那些购自Novozymes(包括Savinase、Alcalase、Esperase、Ovozyme、Everlase、Neutrase、Durazyme、Pyrase、Flavourzyme)的蛋白酶；那些购自Genencor International(包括Propernase、蛋白酶A、蛋白酶B、蛋白酶C、Purafect)的蛋白酶；那些购自Sigma(包括Elastase、蛋白酶V8、Pepsin、Papain、Bromelain、蛋白酶K)的蛋白酶；Biozyme Laboratories(包括Elastase)的蛋白酶；和任何其它可用的金属、酸性、中性和/或碱性蛋白酶。适用于本发明的上下文的脂肪酶(或酯酶)包括那些购自Novozymes(包括Lipase、Lipolase、Lipolase Ultra、Lipex、Palatase)的脂肪酶；和任何其它可用的中性和/或碱性脂肪酶。在本发明的另一方面，任何上述两种酶之间的比率为约1000∶1至约1∶1000，优选为约500∶1至约1∶500，更优选为约100∶1至约100∶1，最优选为约50∶1至约1∶50。
本领域的技术人员将容易的认识到，用以移除草基污渍或污垢的本酶混合物的组成取决于几个因素，包括但不限于：所考虑的目标草基污渍和/或污垢的确切组成；影响目标草基污渍和/或污垢的物理和/或化学状况；介质，设想通过其递送本酶混合物到目标草基污渍和/或污垢；和配制人员的需要和/或能力。因此，本发明进一步寻求包括用以移除目标草基污渍或污垢的酶混合物，该混合物依照本文公开的方法配制，它确切的酶含量能根据给定草基污渍和/或污垢的确切组成而改变。
酶混合物配制
本发明所属领域的技术人员将进一步认识到一旦确定适合掺入的酶的过程完成后，有几种配制本酶混合物的方法。事实上，在本发明的一个方面，本发明适于移除蛋基和/或草基污渍和/或污垢的酶混合物能使用辅酶颗粒和/或液体制剂的标准方法配制。关于酶混合物的辅酶颗粒和/或液体制剂的步骤的描述见于“Industrial Enzymes andTheir Application”，第372至374页，Helmut Uhlig，PhD，JOHN WILEY&SONS，INC.1998。Eygermans，P.J.，“Preparationof Enzymes in particulate from，”美国专利3,801,463；Weber-Meyer，M.，“Liquid cleaning composition containingstabilized Enzymes：Protease，”美国专利4,169,817；Win，M.H.，Desalvo，W.A.，和Kenney，E.J.，“Enzymatic detergents，”美国专利3,858,854，和De Rosier，T.A.，“Method andFormulation for Stabilization of Enzymes”，WO 9800530，这些文献的相关部分被引入本文以供参考。
在本发明的另一方面，本文公开的蛋基和/或草基酶混合物使用单酶颗粒和/或液体制剂的标准方法配制。关于酶混合物的单酶颗粒和/或液体制剂的步骤的描述见于“Industrial Enzymes and TheirApplication”，第372至374页，Helmut Uhlig，PhD，JOHN WILEY&SONS，INC.1998。Eygermans，P.J.，“Preparation of Enzymesin particulate from，”美国专利3,801,463；Weber-Meyer，M.，“Liquid cleaning composition containing stabilized Enzymes：Protease，”美国专利4,169,817；Win，M.H.，Desalvo，W.A.，和Kenney，E.J.，“Enzymatic detergents，”美国专利3,858,854，和De Rosier，T.A.，“Method and Formulation for Stabilizationof Enzymes”，WO 9800530，这些文献的相关部分被引入本文以供参考。
包含酶混合物的洗涤剂组合物和产品
在本发明的另一方面，包含本文公开的酶混合物的洗涤剂组合物被公开并受权利要求书保护。在本发明的一个方面，包含一种用以移除蛋基污渍或污垢的酶混合物的洗涤剂组合物被公开了。当本文公开的酶混合物依照本发明被掺入到洗涤剂组合物中时，其含量基于洗涤剂组合物的总重量，按酶的纯活性蛋白重量计，为0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％。
在本发明的另一方面，包含用以移除草基污渍或污垢的酶混合物的洗涤剂组合物被公开并受权利要求书保护。在本发明的一个方面，用以移除草基污渍或污垢的酶混合物被配制以经由本申请公开的配制方法掺入到个体洗涤剂组合物中。在任何情况下，本文公开的洗涤剂组合物包含用以移除草基污渍或污垢的酶混合物，其含量基于洗涤剂组合物的总重量，按酶的纯活性蛋白重量计，为约0.00001％至约5％，优选约0.0001％至约0.5％，更优选约0.0002％至约0.1％，最优选约0.001％至约0.05％。本领域的技术人员将容易的认识到，掺入到本洗涤剂组合物中用以移除草基污渍或污垢的酶混合物的确切含量取决于几个因素，包括但不限于：酶混合物意欲掺入的洗涤剂组合物的性质；意欲掺入洗涤剂组合物的酶混合物的确切组成；意欲经由酶水解移除的目标污渍或污垢；和配制人员的需要和/或能力。
在本发明的另一方面，本文公开的洗涤剂组合物包含一种或多种表面活性剂，其非限制性实施例包括非离子、阴离子、两性、双性、两性离子、阳离子、半极性非离子以及它们的混合物。上述表面活性剂的非限制性实施例公开于美国专利5,707,950和5,576,282中，将这些文献引入本文以供参考。阴离子、非离子、两性和两性离子型表面活性剂以及这些表面活性剂种类的典型列表提供于1972年5月23日授予Norris的美国专利3,664,961中，并引入本文以供参考。本文可用的表面活性剂的非限制性实施例包括常规的EO为约1至22的C8-C18烷基乙氧基化物和/或醇乙氧基化物(AE)，包括所谓的窄峰烷基乙氧基化物和C6-C12烷基酚烷氧基化物(尤其是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙氧基化物)，烷基二烷基氧化胺，烷酰基葡糖酰胺，C11-C18(直链)烷基苯磺酸盐(LAS)和伯烷基、仲烷基以及无规则烷基硫酸盐(AS和/或SAS)，C10-C18烷基烷氧基硫酸盐(AES)，C10-C18烷基多苷以及它们相应的硫酸化聚葡萄糖苷(APG)，C12-C18α-磺化脂肪酸酯，C12-C18烷基和烷基酚烷氧基化物(尤其是乙氧基化物和混合的乙氧基/丙氧基化物)，C12-C18甜菜碱和磺基甜菜碱(“磺基甜菜碱”)，C10-C18氧化胺，α-烯烃磺酸酯(AOS)，醇乙氧基硫酸盐，石蜡磺酸钠，胺丙基胺，烷基N-甲基葡糖胺，氨三乙酸(NTA)，天然脂肪酸的碱金属盐等。其它常规的有用表面活性剂列于标准教科书中。
在本发明的另一方面，本文所公开的包含酶混合物的洗涤剂组合物掺入一种或多种常规清洁助剂，以递送一种或多种性能和/或美观有益效果。虽然不是本发明目的所必需的，下文图示说明的若干常规的清洁辅助物质适用于本发明组合物中，并可适宜地掺入本发明优选的实施方案中，例如，以促进或提高清洁性能，处理待清洁的底物，或通常用香料、着色剂、染料等改进本发明组合物的美观性。这些附加组分的确切性质及其加入的量，将取决于组合物的物理形式以及其应用旨在使用它的清洁操作的性质。
适于掺入本发明的包含酶混合物的洗涤剂组合物的助剂包括，但一定不限于：如美国专利5,705,464、5,710,115、5,698,504、5,695,679、5,686,014和5,646,101中所述的漂白体系、酶稳定剂、助洗剂、分散剂、去污剂、螯合剂、抑泡剂、软化剂、染料转移抑制剂、不含磷酸盐的助洗剂、色斑剂、银器保护剂、防锈剂和/或抗腐蚀剂、染料、填充剂、杀菌剂、碱度来源、水溶助长剂、抗氧化剂、香料、增溶剂、载体、加工助剂、颜料和pH调节剂，这些专利都引入本文以供参考。
在本发明的另一方面，本文公开的组合物采用洗涤剂组合物的形式，尤其适用于织物和家庭护理。这种洗涤剂组合物能采用多种形状和形式，这取决于几个因素，包括但不限于：包含本文公开的酶混合物的洗涤剂组合物的确切性质；意欲包括进入洗涤剂组合物的个体酶混合物的确切组成；意欲经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢的性质。然而，这种洗涤剂形式的非限制性实施例包括：液体、粉末、附聚物、糊剂、片剂、条状物、凝胶和/或颗粒。
在本发明的另一方面，本文公开的掺入酶混合物的产品、消费品等等被公开并受权利要求书保护。事实上，依照本文公开的方法配制的酶混合物能被掺入到多种产品中以提供一种或多种性能和/或美观有益效果。所述产品可采用多种形状和形式，这取决于几个因素，包括但不限于：产品的性质和/或预定目的、意欲掺入产品的酶混合物、和意欲经由使用本产品移除的目标污渍和/或污垢。以下公开内容不旨在限制本发明的范围，仅旨在提供给本领域的技术人员一些关于本发明使用的指导。事实上，本文公开的产品能适用于多种目的，包括但不限于，个人护理、织物护理、家庭护理和皮肤护理。
个人护理产品
因此，依照本发明的第一个方面，公开了包含依照本发明配制的酶混合物的个人护理产品。适用的个人护理产品包含依照本发明配制的酶混合物，包括但不限于：洗手皂、洗手液、沐浴液、漱口水、牙膏、沐浴凝胶、洗发剂、爽身水、除臭剂、鼻喷剂以及它们的组合。在本发明的另一方面中，本文所公开的个人护理产品还可采用擦拭物产品形式，尤其适用于擦拭或干燥面部或手。在这种情况下，包含依照本发明配制的酶混合物的产品优选地置入或注入所述擦拭物产品。在本发明的另一个方面中，本文所公开的个人护理产品还可采用薄纸或手巾形式，同样适用于擦拭或干燥面部或手。在本发明的另一方面，个人护理产品采用妇女卫生巾和/或尿布的形式。在本发明的另一方面中，个人护理产品可采用急救杀菌剂形式，以用于受刺激、受伤或感染痤疮的皮肤和/或手术前或手术后的使用。
家庭护理产品
在本发明的另一方面，包含依照本发明配制的酶混合物的产品被掺入一种或多种家庭护理产品中。实际上，适用于本发明目的的家庭护理产品包括，但不限于：硬质表面清洁剂、脱臭剂、织物护理组合物、织物清洁组合物、手用盘碟洗涤剂、自动盘碟洗涤剂、地板护理组合物、厨房清洁剂或消毒剂、浴室清洁剂或消毒剂，以及它们的组合。在本发明的另一方面中，家庭护理产品可采用擦拭物或手巾形式，适用于家庭清洁和/或护理。在本发明的另一方面中，本文所公开的家庭护理产品还包括某些辅助成分。所述辅助剂包括，但一定不限于：助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、过渡金属漂白催化剂、氧转移剂和前体、去污剂、粘土污垢去除剂和/或抗再沉淀剂、聚合分散剂、增白剂、聚合染料转移抑制剂、螯合剂、消泡剂、烷氧基化聚羧酸酯、织物软化剂、香料、载体、水溶助长剂、加工助剂、染料或颜料、液体制剂的溶剂、固体填充剂、去污表面活性剂，以及它们的组合。
护肤产品
在本发明的另一优选的方面，包含依照本发明配制的酶混合物的产品被掺入皮肤护理产品中。在本发明的一个方面，皮肤护理产品掺入到皮肤病学可接受的载体中以利于包含依照本发明配制的酶混合物的产品安全转移至预期皮肤区域。在本发明的另一方面中，本发明的护肤产品包括某些辅助成分。所述辅助剂包括，但一定不限于：抗微生物和抗真菌活性物质、表面活性剂、脱屑活性物质、抗痤疮活性物质、抗皱纹活性物质、抗萎缩活性物质、抗氧化剂、自由基清除剂、螯合剂、类黄酮、抗炎剂、抗蜂窝炎剂、局部麻醉剂、晒黑活性物质、防晒活性物质、调理剂、增稠剂、防粘剂、气味控制剂、皮肤增感剂、止汗剂，以及它们的混合物。实际上，每种上述辅助成分的完整描述和实施例阐述于转让给The Procter and Gamble Company，Cincinnati，Ohio的美国专利6,294,186中，并且将该文献引入本文以供参考。
制品和套盒
此外，包含所述产品的制品旨在应用于个人护理、皮肤护理和家庭护理，所述产品包含依照本发明配制的酶混合物。本发明的制品包括一种或多种如上文所述的产品，该制品可被装入带有一套消费者使用说明的容器或分配器中。本发明的制品典型地包括(a)容器或分配器，(b)产品，和(c)一套使用说明，以将所述产品施用到适宜底物上，来递送一种或多种性能和/或美观的有益效果。适用于本发明制品的容器和/或分配器包括，但不限于：PET瓶和盆、流动包装袋、泡沫分配器、喷雾分配器，以及它们的组合。重申，本发明的制品还包括一套与容器连在一起的使用说明。“与...连在一起”是指可直接将该使用说明本身印刷在容器或分配器上，或者该使用说明可以不同的形式呈现，包括，但不限于：小册子、印刷广告、电子广告和/或语言通信，以致可使该制品的消费者知道这套使用说明。
这套使用说明典型地包括涉及如下内容的说明：施用包含依照本发明配制的酶混合物的产品于合适基质上，所述基质试图经由酶水解处理。这套使用说明还可包含对允许依照本发明配制的酶混合物保留在经处理的底物上的说明。然而，与本发明制品包括在一起的准确的使用说明将取决于需包括使用说明的个体酶混合物的确切成分，以及该产品所意欲施用的底物。在本发明的另一个方面中，包括于本发明制品中的使用说明与在本发明公开内容“使用方法”部分中所阐述的方法相一致。
使用本文公开的酶混合物、组合物和产品的方法
在本发明的另一方面，使用本文提出的酶混合物、组合物和产品的方法被公开并受权利要求书保护。一方面，公开了依照本文讨论的配制方法配制的酶混合物的使用方法。这种方法通常涉及递送酶混合物到意欲经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢的步骤。在本发明的另一方面，使用依照本公开方法配制的酶混合物移除蛋基污渍和/或污垢的方法被公开并受权利要求书保护。这种方法也通常包括递送适于移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物到意欲经由酶水解移除的目标蛋基污渍和/或污垢的步骤。在本发明的另一方面，使用依照本发明配制的酶混合物移除草基污渍和/或污垢的方法被公开并受权利要求书保护。这种方法也包括递送适于水解草基污渍和/或污垢的酶混合物到意欲经由酶水解移除的目标草基污渍和/或污垢的通常步骤。
在本发明的其它方面，使用本发明的包含酶混合物的组合物移除酶水解的污渍和/或污垢的方法被公开并受权利要求书保护。所述方法也通常包括递送包含酶混合物的洗涤剂组合物到意欲移除的酶水解污渍和/或污垢的步骤。在本发明的另一方面，使用本文提出的包含蛋基酶混合物的洗涤剂组合物移除蛋基污渍和/或污垢的方法被公开并受权利要求书保护。所述方法通常也包括递送包含蛋基酶混合物的洗涤剂组合物到意欲移除的蛋基污渍和/或污垢的步骤。在本发明的另一方面，使用本文讨论的包含草基酶混合物的洗涤剂组合物移除草基污渍和/或污垢的方法被公开并受权利要求书保护。所述方法通常也包括递送包含草基酶混合物的洗涤剂组合物到试图移除的草基污渍和/或污垢的步骤。
在本发明的其它方面，使用包含本文公开的酶混合物的产品、消费品等等的方法被公开并受权利要求书保护。所述方法通常也包括施用掺入依照本发明配制的酶混合物的产品到意欲经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢的步骤。当然，本发明的使用者将容易地认识到本方法涉及的确切步骤取决于几个因素，包括但不限于：包含依照本发明配制的酶混合物的产品的性质、所述产品中配制的酶混合物的组成和意欲使用本文公开的产品经由酶水解移除的目标污渍和/或污垢。
制备性实施例
实施例1：蛋白质组合物和对蛋基污渍和/或污垢的蛋白酶特异性
使用了多种分析工具以确定：不同的蛋白酶对存在于蛋基污渍和/或污垢中的多种蛋白质有不同的特异性。此数据清楚地支持了受权利要求书保护的用以移除蛋基污渍和/或污垢的蛋白酶混合物配制模型。此测试的结果如下包括：
使用Hitachi 911自动分光光度计测量活性：蛋白分解酶与二甲基酪氨酸反应以产生氨基酸，氨基酸随后与三硝基苯璜酸反应产生颜色复合物。在420nm读取的色度与样本中的蛋白酶活性是成比例的，活性依照mg/mL(mg活性物质在ml样本中)蛋白酶活性被表达，使用Savinase标准酶进行校正。作为一种可供选择的活性测量方法，蛋白质底物中水解的肽片段通过LC-MS与飞行时间检测器联用测定。肽片段的强度与酶样本中蛋白酶的活性是成比例的。对卵黄磷蛋白，片段与5ppm的蛋白酶一起在TRIS缓冲剂中进行培养，并且完整的蛋白质和它的被水解片段一起通过SDS-page分析检验。肽片段的强度与酶样本中蛋白酶的活性是成比例的。
  蛋白质组成(％)   最好的蛋白酶   分析方法
  牛奶   α酪蛋白(39)β酪蛋白(31)κ酪蛋白(10)乳清蛋白(19)(乳球蛋白/免疫球蛋白)   OvozymeEsperase   LC-MS，Hitachi 911LC-MS
  鸡蛋
  蛋白：蛋黄：   卵清蛋白(54)伴清蛋白(13)卵类粘蛋白(11)球蛋白(8)溶解酵素(4)卵粘蛋白(2)卵黄磷蛋白(50)卵黄高磷蛋白   EsperaseSavinase蛋白酶B   LC-MS，Hitachi 911，SDS-PageLC-MS，Hitachi 911，
也已证实了疏水蛋黄蛋白是对蛋白分解攻击最有抵抗力的底物。卵黄磷蛋白与多种蛋白酶一起培养6小时后，在SDS-page成像中能观察到大约一半最初的蛋白质条带保持完整。在同样的处理过程中，来自牛奶和蛋白的其它蛋白质在五至三十分钟内被所测试的蛋白酶完全消化。
实施例2：确定酶混合物(蛋白酶和/或蛋白酶+磷脂酶)，以自动洗碟操作和手动洗碟操作为标准，该酶混合物改善了蛋基污渍和/或污垢的移除
使用24孔板进行微洗涤测验。用锤和冲床冲压出不锈钢盘。称重干净的盘以测定最初重量。制备蛋污渍(见以下的制备方案)。使用注射器分配器，分配制备的50μL蛋到每个盘上。使其室温干燥30分钟，然后在烘箱中80℃下烘烤2小时。室温冷却。弄脏盘后，称重以获取弄脏后的重量。把弄脏后的盘插入NUNCLON24孔聚苯乙烯板。自动洗盘产品溶液通过彻底混合适当量的无酶产品(例如， 凝胶-8000ppm：粉末4500ppm)的ADW，或无酶产品(例如1200ppm)的手用盘碟洗涤剂进入1L 40℃的11gpg水而被制备。硬质溶液通过混合188.57g CaCl2·2H2O和86.92g MgCl2·6H2O到1L去离子水中来制备。添加2mL 55℃的预热ADW溶液到每个孔中。加入适当量的酶到每个孔中。针对穿六个孔的四层板或穿四个孔的六层板进行处理。用薄膜密封板。将板放入预热的孵育器/摇动器中并用夹具保护。在合适温度(对Euro为55℃)，19rad/s(180RPM)下洗涤30分钟。洗涤后通过仔细地浸泡在温水浴中洗涤，重复三次。从板上移除盘并在烘箱中80℃干燥1小时。一旦干燥后，称重盘以获取洗涤后的重量。产生近似的移除百分比的重量值被计算如下：
％移除＝(受污后重量-洗涤后重量)/(受污后重量-清洁重量)×100移除指数＝％移除/％通过基准蛋白酶(Savinase)移除
炒蛋制备
用于测试本酶混合物和/或包含相同酶混合物的洗涤剂复合物的蛋如下制备：(1)混合100mL 10％脂肪的牛奶和3个整蛋；(2)烹煮上述混合物，持续搅动，直到轻微的容易流动；(3)加入另外的40mL牛奶，并用手动混合器或搅拌器高速混合此混合物直到平滑，并无块状物；和(4)弄脏前使蛋混合物冷却至室温。
性能特征图显示为移除蛋基污渍和/或污垢，Savinase和蛋白酶B对自动洗盘应用(ADW基准)来说是表现良好的单蛋白质酶，而蛋白酶A对手用盘碟洗涤剂应用(LDL基准)来说是表现良好的单蛋白质酶。然而，使用蛋白酶混合物(例如蛋白酶B+Esperase和/或蛋白酶B+Ovozyme)对蛋基污渍和/或污垢显示具有比任何单个蛋白酶显著更好的性能有益效果。与在自动洗盘应用(ADW)中的蛋白酶B基准和在液体洗涤剂应用(LDL)中的蛋白酶A基准相比，蛋白酶混合物显示具有大于五倍的性能。这些蛋白酶混合物有益效果已经在ADW满刻度洗涤机测试中被证实。
使用不锈钢片2.54×7.62cm(1×3inch)制备蛋污渍。(1)量出140mL的全脂牛奶。(2)3个中等大小的蛋(蛋白和蛋黄)与100mL上述全脂牛奶混和，并在不粘平底锅中(无脂肪)烹煮。蛋被持续搅动直到煮熟但仍然轻微的容易流动。(3)加入剩余的40mL全脂牛奶。(4)将蛋放入碗中，然后用手动搅拌器在最高设置混合直到平滑，并无块状物。(5)将每个金属片蘸入炒蛋并轻敲一次，确保在每个金属片上有近似相同量的蛋。片的背面在薄纸上擦拭以清洁，并置于烘烤架上。(6)弄脏的片以流按号数顺序置于2个烘烤架上。(7)片被留下，室温干燥30分钟。(8)片在80℃(+/-1℃)下被煮2小时，1小时后上面和下面的架子交换并旋转180°(+/-1°)。(9)冷却的、被污的片1至96的次序称重。
洗涤：放置八个弄脏的片在洗涤机的顶部架子和底部架子中。基于Whirlpool 840杯进行预洗涤和主洗涤，预洗涤杯容量为40mL，主洗涤为60mL。典型地在一个测试中，四个产品使用四个GE 500机器运行。为了测试周期，载入弄脏的片并将测试产品置于预洗涤和主洗涤杯中。设置水温至49℃(120)并开启机器至常规洗涤循环。在最后漂洗循环结束时，取出片称重；不通过干燥循环。到第四个循环的末期每个产品已经在每台机器中运行一次。所有的四个循环将在一天中运行。下一天中同样的程序使用新的被污的底物被重复。这给每个产品总共8个循环，它们随后被平均以获得最后的结果。产生近似的移除百分比的重量值被计算如下：
％移除＝(受污后重量-洗涤后重量)/(受污后重量-清洁重量)×100
移除指数＝％移除/％通过基准蛋白酶(Savinase)移除
所述性能测试的结果如下包括：
炒蛋移除指数对ADW中的蛋白酶B
                                                               24孔测试                         满刻度测试
  酶   凝胶   粉末   凝胶   粉末
  蛋白酶B(2.5ppm)   100   100   100   100
  Ovozyme(2.5ppm)   105   75   110   120
  Esperase(2.5ppm)   106   99   111   108
  蛋白酶B+Ovozyme(1.25ppm+1.25ppm)   144   134   141   123
  蛋白酶B+Esperase(1.25ppm+1.25ppm)   158   109   112   169
  蛋白酶B+磷脂酶C   160   148   107**   111
**在外观分级评估中等于+2PSU有益效果。
通过24孔(微筛选)在手用盘碟洗涤剂移除炒蛋
  酶   凝胶   粉末
  蛋白酶A(0.9ppm)   100   100
  Ovozyme(0.3ppm)   33   107
  蛋白酶A(0.1ppm)+Ovozyme(0.25ppm)   39   140
  蛋白酶A(0.3ppm)+Ovozyme(0.1ppm)   44   141
  蛋白酶A(0.2ppm)+Ovozyme(0.2ppm)   44   121
甚至当总蛋白含量在混合物应用中较低时，所测得的移除与蛋白酶A相比也显著增加。
实施例3：确定用以比HDL洗涤剂中的蛋白酶A基准改善的草清洁的酶混合物(蛋白酶、脂肪酶、半纤维素酶-糖酶的一种)
已经观察到蛋白酶A和脂肪酶的组合相对蛋白酶A显示约0.5鉴定小组评分单位(PSU)的有益效果。此PSU分级体系被用于比较两种产品(配方)，比如A和B。这两种配方被测试其性能，例如，洗涤后的污渍残留。在这种试验中几种织物，分别用A和B洗涤进行比较。使用两种或多种判断标准进行分级，其中它们使用所谓的Schelle标准：
0：无偏爱
1：我认为此产品好一点(不确定)
2：我知道此产品好一点
3：此产品更好
4：此产品好很多
在液体梯度低温洗涤中的蛋白酶(蛋白酶A)剂量对应于草清洗-4PSU有益效果，通过高蛋白酶含量
 A(不存在)   B(1X蛋白酶A)   C(10X蛋白酶A)   D(10X蛋白酶A+10ppm脂肪酶   LSD 90
  草CW 120  0   1.71   3.32   3.82   1.18
微型洗涤机测试：12分钟洗涤，洗涤温度15℃(60°F)。洗涤中的产品浓度1532ppm，8gpg硬度(城市水)。CW草所污染的织物从Empirical Manufacturing Company，Ohio，USA获得。
蛋白酶和糖酶的组合还显示在草清洁中显著增加的有益效果，如下所示：
满刻度洗涤机(PSU)对液体梯度控制：
酶                                相对于    不存在酶
果胶裂解酶2ppm                              2.5PSU
蛋白酶A 0.59ppm                             2PSU
果胶裂解酶2ppm+蛋白酶A 0.59ppm              4PSU
果胶裂解酶/木葡聚糖酶2ppm+蛋白              4PSU
酶A 0.59ppm
满刻度洗涤机测试在6gpg硬度，US洗涤条件下被完成。
实施例4：用以移除蛋基污渍和/或污垢的包含酶混合物的洗涤剂组合物
下列完全配制的固体形式的自动洗盘洗涤剂依照本发明制备以移除蛋基污渍和/或污垢：
  1％活性物质   2％活性物质   3％活性物质
  柠檬酸钠   15   15   15
  碳酸钠   17.5   20   20
  分散剂聚合物   6.0   6.0   6.0
  羟基乙叉二膦酸(HEDP；酸)   1.0   0.5   0.71
  非离子表面活性剂(SLF18；Olin公司)   2.0   2.0   2.0
  过碳酸钠一水合物   1.5   1.5   1.5
  Ovozyme 24T(蛋白酶)   --   1.1   --
  蛋白酶B   --   --   1.1
  钴催化剂   0.2   0.07   0.4
  Esperase 80L(蛋白酶)   1.1   --   1.1
  Savinase 12T(蛋白酶)   1.1   1.1   --
  Termamyl 60T(淀粉酶)   1.5   1.0   1.0
  磷脂酶C   2.0   2.0   2.0
  BRITESEL H2O2(作为SiO2)   8.0   8.0   8.0
  间硅酸盐(无水的)   1.25   --   --
  石蜡烃   0.5   --   --
  苯并三唑   0.3   --   --
  硫酸盐、水、微量组分   余量至100％   余量至100％   余量至100％
实施例5：用以移除草基污渍和/或污垢的包含酶混合物的洗涤剂组合物
下列液体洗涤剂组合物依照本发明制备以移除草基污渍和/或污垢：
  ％按所述洗涤剂组合物的重量计   A   B   C   D   E
  线形烷基苯磺酸盐   18   -   -   -   -
  C12-C15乙氧基化烷基硫酸盐   -   2   8   11   5
  C8-C10丙基二甲基胺   2   2   2   2   1
  C12-C14烷基二甲基胺氧化物   -   -   -   -   2
  C12-C15烷基硫酸盐   17   12   7   8
  C12-C14正-甲基葡萄糖酰胺   -   5   4   4   3
  C12-C14乙氧基化脂肪醇   12   6   1   1   1
  C12-C18脂肪酸   11   11   4   4   3
  无水柠檬酸   5   1   3   3   2
  二亚乙基三胺五
  亚甲基膦酸   1   1   1   1   0.5
  单乙醇胺   11   8   5   5   2
  氢氧化钠   1   1   2.5   1   1.5
  丙二醇   12.7   14.5   13.1   10.0   8
  乙醇   1.8   1.8   4.7   5.4   1
  果胶裂解酶(3g/L)   0.05   -   -   0.05   -
  脂肪酶(5g/L)   0.1   0.1   0.1   0.1   0.1
  蛋白酶A(34g/L)   0.5   0.5   0.5   0.5   0.5
  木葡聚糖酶(2g/L)   -   0.09   -   -   0.09
  纤维素酶(3g/L)   -   -   0.05   -   -
  对苯二酸盐或酯基聚合物   0.5   0.5   -   0.3   0.3
  硼酸   2.4   2.4   2.8   2.8   2.4
  二甲苯磺酸钠   -   -   3   -   -
  DC 3225C   1   1   1   1   1
  2-丁基-辛醇   0.03   0.04   0.04   0.03   0.03
  支链硅氧烷   0.3   0.3   0.3   0.3   0.3
所有引用文献的相关部分均引入本文以供参考；本文任何文献的引用不可解释为是对其作为本发明的现有技术的认可。
尽管已用具体实施方案来说明和描述了本发明，但对于本领域的技术人员显而易见的是，在不背离本发明的精神和保护范围的情况下可作出许多其它的变化和修改。因此，有意识地在附加的权利要求书中包括本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种配制酶混合物的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)确定一种试图经由酶水解移除的污渍和/或污垢；
(b)检验所述污渍和/或污垢以测定所述污渍和/或污垢的每种酶水解组分存在的含量；
(c)筛选多种酶以测定哪种酶对所述污渍和/或污垢中的每种酶水解组分显示最高的活性；和
(d)掺入一种或多种对所述污渍和/或污垢中的每种酶水解组分显示最高活性的酶到所述混合物中；
(e)任选地，掺入的一种或多种对所述污渍和/或污垢中的每种酶水解组分显示最高活性的酶的量相应于所述污渍和/或污垢中的所述酶水解组分存在的含量。
2.一种移除包含蛋白质的污渍和/或污垢的蛋白酶混合物，所述混合物包含一种或多种适于移除所述污渍和/或污垢中存在的一种或多种蛋白质的酶；其中所述酶以相应于所述污渍和/或污垢中的目标蛋白质含量的量被掺入到所述混合物中。
3.一种移除包含碳水化合物的污渍和/或污垢的糖酶混合物，所述混合物包含一种或多种适于移除所述污渍和/或污垢中存在的一种或多种碳水化合物的酶；其中所述酶以相应于所述污渍和/或污垢中的目标碳水化合物含量的量被掺入到所述混合物中。
4.一种移除包含类脂的污渍和/或污垢的脂肪酶混合物，所述混合物包含一种或多种适于移除所述污渍和/或污垢中存在的一种或多种类脂的酶；其中所述酶以相应于所述污渍和/或污垢中的目标类脂含量的量被掺入到所述混合物中。
5.一种移除包含磷脂的污渍和/或污垢的磷脂酶混合物，所述混合物包含一种或多种适于移除所述污渍和/或污垢中存在的一种或多种磷脂的酶；其中所述酶以相应于所述污渍和/或污垢中的目标磷脂含量的量被掺入到所述混合物中。
6.一种移除蛋基污渍和/或污垢的蛋白酶混合物，所述混合物包含至少两种蛋白酶，所述蛋白酶选自：
(a)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解酪蛋白的蛋白酶；
(b)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解卵黄高磷蛋白和/或卵黄磷蛋白的蛋白酶；
(c)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解卵清蛋白的蛋白酶；
(d)以及它们的组合；
其中基于活性蛋白的重量，在任何两种所述蛋白酶之间的比率为1000∶1至1∶1000。
7.一种移除蛋基污渍和/或污垢的酶混合物，所述混合物包含：
(a)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解甘油三酯和/或甘油二酯的脂肪酶；
(b)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解磷脂酰胆碱或溶血磷脂酰胆碱的磷脂酶；和
(c)任选地，如权利要求8所述的蛋白酶混合物；
其中基于活性蛋白的重量，在任何两种所述酶之间的比率为1000∶1至1∶1000。
8.一种移除草基污渍和/或污垢的蛋白酶混合物，所述混合物包含：
(a)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解D-核酮糖1，5-二磷酸羧基酶的蛋白酶；
(b)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解一种或多种叶绿素结合蛋白的蛋白酶；和
(c)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的蛋白分解活性的速率水解ATP合成酶的蛋白酶；
其中基于活性蛋白的重量，在任何两种所述蛋白酶之间的比率为1000∶1至1∶1000；
其中所述叶绿素结合蛋白选自CP47、CP43、CP29、CP27、CP24以及它们的组合。
9.一种移除草基污渍和/或污垢的酶混合物，所述混合物包含：
(a)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解甘油三酯和/或甘油二酯的脂肪酶；
(b)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解聚-D-半乳糖醛酸甲酯的果胶酶；
(c)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解半纤维素、葡聚木糖、木聚糖的半纤维素酶以及它们的组合；
(d)适于以标准酶每毫克活性蛋白至少0.1％的活性的速率水解纤维素和/或羧甲基纤维素的纤维素酶；和
(e)任选地，如权利要求10所述的蛋白酶混合物；
其中基于活性物质的重量，在任何两种所述酶之间的比率为1000∶1至1∶1000。
10.一种洗涤剂组合物，所述洗涤剂组合物包含如权利要求2至9所述的至少一种蛋白酶混合物，其中基于所述洗涤剂组合物的总重量，且按所述蛋白酶混合物的纯活性蛋白重量计，所述蛋白酶混合物的存在含量为0.00001％至5％。
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