MXPA04000769A

MXPA04000769A - Metodos, composiciones y equipos relacionados a quitinasas y moleculas similares a la quitinasa y enfermedad inflamatoria.

Info

Publication number: MXPA04000769A
Application number: MXPA04000769A
Authority: MX
Inventors: Zhu Zhou
Original assignee: Zhu Zhou
Priority date: 2001-07-24
Filing date: 2002-07-23
Publication date: 2005-09-21
Also published as: IL160000A; US20090162347A1; US20090148539A1; CA2454342A1; IL160000A0; HUP0400659A2; US20030049261A1; HUP0400659A3; NO20040330L; US20130136751A1; WO2003009808A2; US20090149410A1; US8679503B2; US7214373B2; AU2002319680B2; KR20040053100A; JP2006508014A; WO2003009808A3; EP1418813A2; US20060063728A1

Abstract

La presente invencion incluye las composiciones y metodos para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria (por ejemplo asma, COPD, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atopica, alergia, rinitis alergica, esclerodermia y similares), con relacion a la inhibicion de una molecula similar a la quitinasa. La invencion incluye ademas los metodos para identificar los nuevos compuestos para el tratamiento de la enfermedad inflamatoria, incluyendo pero no limitados a, asma, COPD y similares. Esto es debido a que la presente invencion demuestra, por primera vez, que la expresion de IL-13, y de una molecula similar a la quitinasa, media y/o esta asociada con la enfermedad inflamatoria, y que la inhibicion de la molecula similar a la quitinasa trata e incluso previene la enfermedad. De este modo, la invencion se refiere al nuevo descubrimiento de que la inhibicion de una molecula similar a la quitinasa trata y previene una enfermedad inflamatoria.

Description

MÉTODOS, COMPOSICIONES Y EQUIPOS RELACIONADOS A QUITINASAS Y MOLÉCULAS SIMILARES A LA QUITINASA Y ENFERMEDAD INFLAMATORIA ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La frecuencia del asma se ha incrementado firmemente en las últimas dos décadas, con un estimado de 17 millones de casos tan solo en los Estados Unidos. Anteriormente se creía que era principalmente una disfunción en los mecanismos contráctiles de los músculos lisos de las vías respiratorias, estudios recientes han indicado el papel del sistema inmune y la inflamación en el asma y otras enfermedades pulmonares. El asma ahora está caracterizada como una enfermedad inflamatoria compleja atribuida a la estimulación inapropiada del sistema inmune. En algunos casos, la inflamación es disparada por antígenos llevados por el aire. En otros, los disparadores exógenos no pueden ser definidos (asma intrínseca) . Las células inmunes y los mediadores implicados en la inflamación asmática incluyen IgE, mastocitos, eosinófilos, células T, interleucina 4 (IL-4) , IL-5, IL-9, IL-13 y otras citocinas (Bradding et al., 1994, Am. J. Respir. Cell Mol. Biol . 10:471-480; Bradding et al., 1997, Airway Wall Remodeling in Asthma, CRC Press, Boca Ratón, FL; Nicolaides et al., 1997, Proc . Nati. Acad. Sci . USA 94:13175-13180; Wills-Karp, 1998, Science 282:2258-2260; Hamid et al., 1991, J. Clin. Invest. 87:1541-1546; Kotsimbos et al., 1996, REF: 153647 Proc. Assoc. Am. Physicians 108:358-373). De estas células y mediadores inmunes, el papel de las células T cooperadoras tipo 2 (Th2) y citocinas está probando ser cada más importante, ya que se cree que éstos son responsables de la iniciación y el mantenimiento de la inflamación de las vías respiratorias, asi como vitales para la regulación de las células B, la función de los eosinófilos, las respuestas mucosas, y la estimulación de la remodelación de las vías respiratorias (Elias et al., 1999, J. Clin. Invest . 104:1001-1006; ay et al., 1999, J. Clin. Invest. 104:985-993). Se piensa que la inflamación mediada por el sistema inmune conduce a la remodelación de las vías respiratorias, o a modificaciones estructurales, en las vías respiratorias asmáticas. El resultado final de la remodelación se cree que contribuye tanto a los síntomas como a la desregulación fisiológica del asma. La remodelación frecuentemente está caracterizada por engrosamiento de las vías respiratorias, metaplasia del moco, hipertrofia epitelial y fibrosis de las vías respiratorias. Se considera ampliamente que la fibrosis extensiva incrementa la severidad de la enfermedad, hiperrespuestas de las vías respiratorias (AHR) y contribuye a la generación de la obstrucción de las vías respiratorias, reversible incompletamente (Elias et al., 1999, J. Clin. Invest. 104:1001-1006). Por lo tanto, el diseño exitoso de terapia para el tratamiento del asma requiere una comprensión tanto de los mecanismos de inflamación como de los procesos de curación de lesiones y heridas en el sistema respiratorio.

Dos citocinas prominentes, IL-4 e IL-13, se cree que juegan un papel importante en la inflamación y remodelación de las vías respiratorias del asma y otras enfermedades pulmonares. IL-4 e IL-13 son similares en que ambas son producidas por el mismo subgrupo de células T cooperadoras Th2 , tienen traslape de perfiles efectores, y comparten un componente receptor y vías de señali2ación . Sin embargo, se ha demostrado de manera concluyente el papel crítico de IL-13 sobre IL-4 en AHR, reclutamiento de eosinófilos, sobreproducción de moco, y otros síntomas del asma ( ills-Karp, 1998, Science 282:2258-2260, Grunig et al. 1998, Science 282:2261-2263). La sobreexpresión de IL-13 en los pulmones murinos da como resultado la inflamación rica en eosinófilos, linfocitos y macrófagos, metaplasia de moco, fibrosis de las vías respiratorias, y AHR después del reto con metacolina (Zheng et al., 1999 J. Clin. Invest . 103:779-788) . Además, los polimorfismos tanto en el promotor IL-13 como en la región de codificación han estado asociados con el fenotipo asmático (Heinzmann et al., 2000, Hum. Mol. Genet . 9:549-559). Estos resultados sugieren que la producción anormal de IL-13 es un componente crítico de la inflamación asmática y la remodelación de las vías respiratorias. El papel de IL-13 en las enfermedades inflamatorias pulmonares no está limitado al asma. La enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD, clínicamente definida como bronquitis crónica, enfisema, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica) ha sido considerada desde hace tiempo como una enfermedad distinta del asma. Sin embargo, han sido notadas las similitudes entre las dos enfermedades y han dado como resultado la formulación de la "hipótesis de Dutch" , que fue primeramente propuesta en 1961. La revisión más reciente de la hipótesis de Dutch propone que el asma y la COPD, en algunos individuos, no son procesos distintos, y que el mecanismo patógeno común fundamenta estos trastornos . La hipótesis establece además que una predisposición genética a desarrollar atopía, asma, AHR y/o niveles incrementados de IgE predisponen a los fumadores de cigarrillos a desarrollar COPD (Vestbo and Prescott, 1997, Lancet 350:1431-1434). Además, la sobreexpresión de IL-13 en el pulmón murino provoca enfisema y metaplasia mucosa similar a COPD, IL-13 está sobreexpresado en la biopsia y la autopsia de tejido pulmonar de pacientes con COPD, y se ha descrito que polimorfismos de IL-13 correlacionan con la presencia de COPD. Cuando estos resultados son observados a la luz de la hipótesis de Dutch, no únicamente están el asma y la COPD más estrechamente relacionados de lo que se pensaba previamente, sino que el papel central de la desregulación de IL-13 en estos trastornos inflamatorios pulmonares se vuelve más importante . El progreso en el esclarecimiento de los mecanismos subyacentes y las causas del asma, la COPD y trastornos inflamatorios pulmonares relacionados es la consideración sorprendente del hecho de lo que fue tomado en cuenta una vez como un mal funcionamiento de la contracción del músculo bronquial, ahora puede estar ligado a las citocinas específicas y a tipos celulares. A pesar de este progreso, el asma permanece, junto con la tuberculosis y el SIDA, como la única enfermedad crónica con un incremento en el índice de mortalidad. Además, por el 2020, se espera que la COPD sea la cuarta causa que conduzca a la muerte en el mundo. Para contrarrestar la morbididad y la mortalidad incrementadas debidas al asma, el arsenal de medicamentos para el tratamiento del asma está siempre incrementándose. Los medicamentos para el asma se encuentran en dos categorías generales, controladores y aliviadores. Los controladores son para la prevención de ataques de asma antes de que surjan los síntomas, y los aliviadores se toman durante el pleno ataque de asma. Los controladores incluyen corticosteroides , ampliamente considerados los fármacos antiinflamatorios más potentes y efectivos disponibles, cromolin sódico y nedocromil, anti-inflamatorios más suaves frecuentemente utilizados en los niños, y los agonistas beta-2 de acción prolongada, que son broncodilatadores . Los aliviadores incluyen agonistas beta-2 de corta acción y anticolinérgicos , que son utilizados frecuentemente como suplementos o alternativas a los agonistas beta-2. Mientras que los corticosteroides y otras terapias se dirigen a los síntomas del asma mediados por inflamación, f ecuentemente tienen propiedades inmunosupresoras de amplio intervalo, así como otros efectos colaterales dañinos. Conforme los mecanismos fisiológicos y biológicos del asma se aclaran, el desarrollo de fármacos específicos y efectivos debe seguirse muy de cerca, y los síntomas, morbididad, y mortalidad del asma deben caer, en vez de su elevación actual. Sin embargo, a pesar del entendimiento incrementado del mecanismo subyacente de la enfermedad y a pesar de la incidencia incrementada del asma, y la morbididad y la muerte a partir de ésta, actualmente existe un número limitado de tratamientos seguros y efectivos para el asma, COPD y otras enfermedades inflamatorias. Además, no existen sustancias farmacológicas que alteren la progresión de la COPD. De este modo, existe una gran percepción y necesidad aguda para tratamientos específicos, efectivos para el asma, COPD y otras enfermedades inflamatorias. La presente invención cubre esta necesidad. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa al mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en el mamífero. En un aspecto, el mamífero es un humano. En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un YM-1, un YM-2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína oviductal 1, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago, y una proteína 39 de condrocito. En otro aspecto, el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido. En otro aspecto, el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc, y mercurio. En un aspecto adicional, el anticuerpo se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa seleccionada del grupo que consiste de un YM-1, un YM-2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína oviductal 1, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago, y una proteína 39 de condrocito. En otro aspecto, la molécula de ácido nucleico antisentido es un ácido nucleico aislado, complementario a un ácido nucleico aislado que codifica para la molécula similar a la quitinasa, o un fragmento del mismo. En otro aspecto, la ribozima es un ácido nucleico enzimático aislado, el cual específicamente escinde el ARNm trascrito a partir de un ácido nucleico que codifica para la molécula similar a la quitinasa. En un aspecto adicional, la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia, y enfisema. La invención incluye un método de prevención de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la guitinasa. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa al mamífero, con lo cual se previene la enfermedad inflamatoria en el mamífero. En un aspecto, el mamífero en un humano. En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un ??-1, un YM-2, una quitinasa acida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína oviductal 1, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago, y una proteína 39 de condrocito. En otro aspecto, el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido. En un aspecto adicional, la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia, y enfisema.

En otro aspecto, la molécula similar a la guitinasa es un proteína YM y además en donde el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil -N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc, y mercurio. En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa es AMCasa . La invención incluye un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de quitinasa. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de quitinasa al mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en el mamífero. En un aspecto, el mamífero es un humano. En otro aspecto, la quitinasa es quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) y el inhibidor de quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido. En otro aspecto, el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc, y mercurio. En un aspecto, el anticuerpo se enlaza específ camente con AMCasa. En otro aspecto, la molécula de ácido nucleico antisentido es un ácido nucleico aislado, complementario a un ácido nucleico aislado que codifica para una AMCasa, o un fragmento de la misma. En otro aspecto adicional, la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosas pulmonar idiopática, esclerodermia, y enfisema . La invención incluye un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de interleucina 13. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa al mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en un mamífero. En un aspecto, el mamífero es un humano. En otro aspecto, el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido. La invención también incluye un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con una respuesta inflamatoria de Th2. El método comprende administrar una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa al mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en un mamífero. La invención incluye un método de identificación de un compuesto útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero. El método comprende administrar un compuesto a un mamífero afligido con una enfermedad inflamatoria y comparar el nivel de una molécula similar a la quitinasa en el mamífero con el nivel de la molécula similar " a la quitinasa en el mamífero antes de la administración del compuesto, en donde un nivel inferior de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero después de la administración del compuesto que se compara con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero antes de la administración del compuesto, es una indicación de que el compuesto es útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, con lo cual se identifica un compuesto útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. En un aspecto, la invención incluye un compuesto identificado utilizando este método. En un aspecto, el nivel de una molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste del nivel de la expresión del ácido nucleico de la molécula similar a la quitinasa y el nivel de la actividad enzimática de la molécula similar a la quitinasa. En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de una YM-1, una ??-2, una quitinasa cida de mamífero (A Casa) , una gl coproteína oviductal 1, una glucoproteína de cartílago 1, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago, y una proteína 39 de condrocito. En otro aspecto, el mamífero es un ratón. En un aspecto adicional, el ratón se selecciona del grupo que consiste de un ratón transgénico que expresa constitutivamente interleucina 13 y un ratón transgénico que expresa induciblemente interleucina 13. En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa es AMCasa. En otro aspecto, la invención incluye un compuesto identificado utilizando este método. La invención incluye un método de identificación de un compuesto útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. El método comprende poner en contacto una célula con un compuesto y comparar el nivel de una molécula similar a la guitinasa en la célula con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en otra célula idéntica no contactada con el compuesto, en donde un nivel inferior de la molécula similar a la quitinasa en la célula contactada con el compuesto que se compara con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en la célula no contactada con el compuesto, es una indicación de que el compuesto es útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, con lo cual se identifica un compuesto útil para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. La invención incluye un equipo para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa. El equipo comprende una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, y comprende además un aplicador y un material instructivo para el uso del mismo» En un aspecto, el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, una molécula antisentido, y un ácido nucleico. En otro aspecto, el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc, y mercurio . En otro aspecto, la molécula similar a la quitinasa es AMCasa. La invención incluye un equipo para la prevención de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa. El equipo comprende una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, y comprende además un aplicador y un material instructivo para el uso del mismo. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Para fines de ilustración de la invención, en las figuras se describen ciertas modalidades de la invención. Sin embargo, la invención no está limitada a los arreglos precisos y a los medios para llevar a cabo las modalidades descritas en las figuras. La Figura 1 describe los niveles de ARNra de IL-13 de la autopsia de tejidos pulmonares de fumadores que murieron de COPD (S/C) y no fumadores sin COPD (N) ( como se determina por RT-PCR. La flecha indica los transcritos de IL-13. Las Figuras 2A a la Figura 2D son imágenes que describen hematoxilina y eosina (H&E) de tejidos pulmonares teñidos provenientes de ratones normales control y CC10-IL13 (que expresan constitutivamente IL-13) . Las Figuras 2A (transgen (-) , 100X) y la Figura 2B (transgen (+) , 100X) ilustran tejido histológico proveniente de los ratones control y CC10-I1-13 respectivamente. La Figura 2B demuestra inflamación rica en eosinófilos, linfocitos, y macrófagos en el parénquima de los ratones que sobreexpresan IL-13. La Figura 2C (transgen (-), 250X) y la Figura 2D (transgen (+) , 250X) comparan las células epiteliales de las vías respiratorias de ratones normales control y de ratones transgénicos CC10-IL-13 respectivamente. La Figura 2D ilustra la hipertrofia epitelial en las vías respiratorias de ratones que sobreexpresan IL-13. Las Figuras 3A y 3B son imágenes que describen el ácido peryódico de Schiff con tinción de diastasa (D-PAS) de las vías respiratorias provenientes de ratones control y CC10-IL-13. La Figura 3A describe las vías respiratorias provenientes de ratones transgen (-) , y la Figura 3B describe metaplasia de moco e hiperplasia de células en forma de taza en ratones transgen (+) . La amplificación es 100X. Las Figuras 4A y 4B describe tinción con tricromo de vias respiratorias en ratones CC10-IL-13. La Figura 4A muestra la deposición de colágeno en ratones transgen (-) . La Figura 4B describe deposición aumentada de colágeno en ratones transgen (+) . La Figura 5 es una representación esquemática de las construcciones inducibles por doxiciclina (dox) utilizadas para generar los ratones transgénicos CC10-rtTA-IL-13 inducibles . Las Figuras 6A a 6E describen el análisis morfométrico e histológico de pulmones proveniente de ratones inducibles con CC10-rtTA-IL-13. Los pulmones fueron extirpados, fijados a presión, y procesados para microscopía, para mostrar el agrandamiento alveolar por la inducción del transgen después de la administración de dox. La Figura 6A describe los ratones transgénicos (+) inducibles antes de la administración de dox. La Figura 6B describe los ratones transgénicos (+) inducibles un día después de la administración de dox. La Figura 6C describe los alvéolos de ratones transgénicos (+) inducibles, una semana después de la administración de dox, y la Figura 6D muestra el agrandamiento alveolar considerable en ratones transgénicos (+) inducibles, 1 mes después de la administración de dox. La Figura 6E es una gráfica que describe el análisis morfométrico de ratones transgénicos (+) inducibles. Ratones transgénicos (-) y (+) de cuatro semanas de edad se agruparon aleatoriamente a normales o agua con dox y se mantuvieron con estos tratamientos por un mes. Los pulmones se extirparon, se fijaron a presión, y se tomaron mediciones de longitud de cuerda. Las longitudes de cuerda fueron significativamente más grandes en ratones transgénicos (+) a los que se les administró dox que en los ratones transgénicos (-) administrados con dox o los ratones transgénicos (+) a los que se les dio agua normal. La Figura 7 describe la deposición de cristales en ratones transgénicos que expresan constitutivamente IL-13. Los cristales eran de múltiples facetas y frecuentemente en forma de agujas. La Figura 8 describe un gel de SDS-PAGE teñido con azul de Coomassie que comprende cristales parcialmente purificados provenientes de fluido de lavado bronquioalveolar (BAL) de ratones transgénicos CC10-IL-13. Las bandas de proteína simple tuvieron un peso molecular de aproximadamente 45 kDa. La Figura 9 describe los niveles de ARNm de YM en los pulmones de los ratones transgénicos (+) y (-) CC10-IL-13 de dos meses de edad, como se determinó por la reacción en cadena de polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR) .

Las Figuras 10A y 10B describen los niveles de ARNm de YM en ratones transgénicos (-) y (+) CC10-rtTA-IL-13 que fueron repartidos aleatoriamente a normales o agua con dox comenzando en un mes de edad. En la Figura 10A, los pulmones se extirparon, después de un mes de aleatorización, se aisló el ARM total de pulmón, y se determinó la expresión génica de YM utilizando RT-PCR. La Figura 10B describe ARNm de YM después de la administración de dox o de agua normal para los intervalos indicados de tiempo (w = semana, m = mes) . Los niveles de ARNm se normalizaron utilizando ß-actina como un control. Las Figuras 11A a 11H describen la hibridación in situ de tejido pulmonar proveniente de ratones CC10-IL-13 y control para detectar la expresión de YM en los tejidos. La Figura 11A y la Figura 11B describen tejido pulmonar proveniente de ratones transgénicos (+) sondeados con sondas antisentido y en sentido, respectivamente. La Figura 11C y la Figura 11D describen tejido pulmonar proveniente de ratones transgénicos (-) con sondas antisentido y en sentido, respectivamente. La Figura 11E y la Figura 11F describen tejido pulmonar proveniente de ratones transgénicos (+) de cuatro semanas de edad sondeados utilizando sondas antisentido y en sentido, respectivamente. La Figura 11G y la Figura 11H muestran tejido pulmonar proveniente de ratones transgénicos (+) de 10 semanas de edad sondeados con sondas antisentido y en sentido, respectivamente. La Figura 12 es una gráfica que muestra la actividad de quitinasa en fluidos de BAL obtenidos de animales transgénicos (-) y transgénicos (+) CC10-IL-13 de 2 meses de edad. (p<0.05 versus transgen (-)) . Las Figuras 13A y 13B muestran la expresión de quitinasa ácida en mamífero (AMCasa) y la actividad de quitinasa en ratones CC10-rtTA-IL-13 , respectivamente. La Figura 13A muestra los niveles de ARNm que codifica para AMCasas en pulmones provenientes de pulmones de ratón transgénico (-) y (+) que fueron colocados en dox o en agua normal en un mes de edad y se mantuvieron en este régimen por los intervalos anotados. La expresión de AMCasa y ß-actina se evaluaron por RT-PCR. La Figura 13B es una gráfica que muestra la actividad de quitinasa en animales transgénicos (+) y (-) inducibles repatrtidos aleatoriamente a normales o agua con dox en un mes de edad. La actividad de quitinasa de fluido BAL de evaluó en los intervalos anotados después de la administración de dox o de agua normal . Las Figuras 14A a 14D muestran la localización de la expresión de AMCasa en ratones CC10-IL-13 utilizando hibridación in situ. La Figura 14A y la Figura 14B muestran tejido pulmonar de ratón transgénico (+) utilizando sondas antisentido y en sentido, respectivamente. La Figura 14C y la Figura 14D muestran tejido pulmonar de ratón transgénico (-) utilizando sondas antisentido y en sentido, respectivamente. Las Figuras 15A a 15C describen la expresión de ARNm de YM y AMCasa y la actividad de quitinasa en ratones tipo silvestre, retados y sensibilizados con ovalbúmina (OVA) , como se determinó utilizando RT-PCR y ensayos de la actividad de quitinasa, respectivamente. La Figura 15A muestra la expresión de ARNm de YM en los intervalos anotados después del reto con aerosol de OVA (d = días, h = horas) . La Figura 15B muestra la expresión de ARNm de AMCasa en los intervalos anotados después del reto con aerosol de OVA. La Figura 15C muestra la actividad de quitinasa significativamente mayor (*p<0.01) detectada en fluidos de lavado bronquioalveolar (BAL) provenientes de ratones tipo silvestre, veinticuatro horas y posteriormente después del reto con aerosol de OVA. Las Figuras 16A a 16G muestran los efectos de alosamidina (allos) sobre animales tipo silvestre sensibilizados con OVA y subsecuentemente retados. La Figura 16A es una gráfica que describe el efecto de la administración diaria de alosamidina (1 mg/kg) sobre la recuperación total de células de BAL. Los asteriscos indican la reducción significativa (p<0.01) en la recuperación total de células BAL después de la administración de alosamidina. La Figura 16B es una gráfica que describe el efecto de la administración diaria de alosamidina (1 mg/kg) sobre el porcentaje de eosinofilos recuperados en fluido de BAL. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en el porcentaje de eosinofilos recuperados después de la administración de alosamidina. La Figura 16C es una gráfica que describe el efecto de la administración diaria de alosamidina (1 mg/kg) sobre el número total de eosinofilos recuperados en fluido de BAL. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en la recuperación total de eosinofilos después de la administración de alosamidina. La Figura 16D es una gráfica que describe el efecto de la administración diaria de alosamidina (1 mg/kg) sobre el número de linfocitos recuperados en fluido de BAL. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en la recuperación total de linfocitos después de la administración de alosamidina. La Figura 16E es una gráfica que describe el efecto dependiente de la dosis de la alosamidina en la recuperación total de células de BAL. Las dosis diarias de alosamidina se dieron iniciando en el Día uno, y los animales se evaluaron para la recuperación total de células BAL en los Días dos y siete después del reto con aerosol de OVA. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en la recuperación total de células de BAL después de la administración de alosamidina. La Figura 16F es una gráfica que describe el efecto dependiente de la dosis de alosamidina sobre la recuperación porcentual de eosinófilos en BAL. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en el porcentaje de eosinófilos en la recuperación de células BAL después de la administración de alosamidina. La Figura 16G es una gráfica que describe el efecto dependiente de la dosis de alosamidina sobre la recuperación total de eosinófilos en BAL. Los asteriscos indican reducción significativa (p<0.01) en la recuperación total de células BAL de eosinófilos después de la administración de alosamidina. La Figura 17 describe el efecto de la administración de alosamidina (repartidos aleatoriamente a 1 mg/kg de alosamidina o control con vehículo, dosis diarias intraperitonealmente (i.p.) por 14 días) sobre ratones CC10-IL-13 transgénicos (+) y (-) de cinco semanas de edad. Esta Figura es una gráfica que describe el efecto de la administración de alosamidina sobre el tamaño pulmonar. Los pulmones se extirparon, se fijaron a presión, y se evaluaron utilizando la metodología de desplazamiento de volumen como se describe de cualquier manera en la presente . Las Figuras 18A y 18B describen los efectos de anticuerpos anti-AMCasa sobre cuentas de células de BAL inducidas por ovalbúmina. La Figura 18A es una gráfica que describe el efecto de anticuerpos anti-AMCasa sobre cuentas de células de BAL inducidas por ovalbúmina. Las comparaciones entre los ratones no retados (unchall) y los ratones que fueron sensibilizados a ovalbúmina y retados en tres días sucesivos con ovalbúmina, se efectuaron en un punto de tiempo del día siete. Los ratones se trataron con 0.5 mi de anticuerpos anti-AMCasa o suero control (suero) intraperitonealmente cada tercer día, iniciando el día anterior a la primera exposición con aerosol . La Figura 18B es una gráfica que describe el efecto de los anticuerpos anti-AMCasa sobre el porcentaje de eosinófilos en fluidos de BAL provenientes de nuestros ratones sensibilizados y retados. Las comparaciones entre los ratones no retados (unchall) y los ratones que fueron sensibilizados a ovalbúmina y retados en los tres días sucesivos con ovalbúmina, se efectuaron en un punto de tiempo del día siete. Los ratones se trataron con 0.5 mi de anticuerpos anti-AMCasa o suero control (suero) intraperitonealmente cada tercer día iniciando el día anterior a la primera exposición con aerosol .

Las Figuras 19A a 19F. La Figura 19A a la 19D son imágenes que describen el ARNm de AMCasa utilizando hibridación in situ en muestras de pulmón de autopsia provenientes de un paciente con asma, utilizando una sonda antisentido de AMCasa (Figura 19A) el ARNm de AMCasa no se detectó en te ido pulmonar control normal, histológicamente obtenido en la autopsia de pacientes sin enfermedad pulmonar, utilizando la sonda antisentido (Figura 19B) . La hibridación in situ utilizando una sonda en sentido no detectó AMCasa en tejido de asma fatal (Figura 19C) ni en tejido control (Figura 19D) . Se detectaron las células epiteliales (flecha gruesa) y tinción de macrófagos (flecha delgada) en asma fatal (Figura 19A) . Las Figuras 19E y 19F son imágenes que describen el ARNm de AMCasa utilizando hibridación in situ en macrófagos alveolares presentes en muestras de pulmón de autopsia provenientes de pacientes con asma, utilizando una sonda antisentido de AMCasa (Figura 19E) . No se detectó ARNm de AMCasa utilizando una sonda en sentido (Figura 19F) . Además, no se detectó ARNm de AMCasa en tejido pulmonar control obtenido de pacientes sin enfermedad pulmonar, utilizando las sondas antisentido o en sentido. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención incluye un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con, o mediada por, la expresión de una molécula similar a la quitinasa. El método comprende administrar un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa al mamífero. Como los datos descritos en cualquier parte en la presente lo demuestran, el nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa, está asociado con, y/o media una enfermedad inflamatoria incluyendo, pero no limitada a, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia, enfisema, y similares. Los datos descritos en la presente demuestran que la expresión incrementada, presencia y/o actividad de una molécula similar a la quitinasa está asociada con y/o media diversas etiologías asociadas con enfermedad inflamatoria incluyendo, pero no limitadas a, inflamación de tejido, volumen incrementado de pulmón, eosinófilos incrementados en fluido de lavado bronquioalveolar (BAL) , linfocitos incrementados en fluido de BAL y tejidos, células totales incrementadas en fluido de BAL, tamaño incrementado de alvéolos, resistencia incrementada de las vías respiratorias, metaplasia incrementada de moco, expresión incrementada de mucina, fibrosis incrementada parenquimal , remodelación incrementada de las vías respiratorias, fibrosis incrementada subepitelial , deposición incrementada de colágeno en tejido de las vías respiratorias, hipertrofia epitelial en el tejido pulmonar, organización focal de material cristalino en focos fibróticos similares a cuerpos de Masson y similares. Los datos descritos en la presente demuestran, sorprendentemente, que aunque algunas moléculas similares a quitinasa, por ejemplo YM, no tienen actividad de quitinasa clásica detectable, la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, tal como, pero no limitada a, alosamidina, proporcionan un beneficio terapéutico y tratan la enfermedad. Además, los datos descritos en la presente demuestran, por primera ocasión, que la administración de un inhibidor de una molécula similar a la quitinasa, por ejemplo, un anticuerpo a AMCasa, proporciona un efecto terapéutico y trata la enfermedad. Por supuesto, los datos demuestran que la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa antes del inicio del estado de enfermedad sirve para prevenir la enfermedad. En consecuencia, la presente invención proporciona un nuevo método para la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa en un mamífero afectado con una enfermedad inflamatoria, trata y/o previene la enfermedad cuando la enfermedad es mediada por, o está asociada con, una molécula similar a la quitinasa, aunque la molécula similar a la quitinasa puede o no puede tener actividad detectable de quitinasa . Definiciones : Como se utilizan en la presente, cada uno de los siguientes términos tiene el significado asociado con él en esta sección. Los artículos "un" y "uno (a)" se utilizan en la presente para referirse a uno o más de uno (por ejemplo al menos uno) del objeto gramatical del artículo. A manera de ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento . Por el término "aplicador" como se utiliza el término en la presente, significa cualquier dispositivo que incluye, pero no está limitado a, una jeringa hipodérmica, una pipeta, una infusión intravenosa, crema tópica y similar, para la administración del compuesto químico inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, un anticuerpo, ácido nucleico, proteína, y/o composición de la invención a un mamífero. "Quitinasa", como se utiliza en la presente, se refiere a una familia de polipéptidos que comprende quitinasas de mamífero y microbianas . Una quitinasa de la presente invención demuestra actividad de quitinasa detectable, en la que ésta escinde específicamente quitina en una manera de endoquitinasa . "Molécula similar a la quitinasa" , como se utiliza el término en la presente, abarca una familia de polipéptidos que comprenden proteínas que se definen por un cierto grado de homología a las quitinasas conocidas, pero no pueden demostrar actividad detectable de quitinasa. Las moléculas similares a quitinasa, incluyen, pero no están limitadas a quitinasa ácida de mamífero (también denominada como una citocina quimiotáctica de eosinófilos y ejemplificada por GenBank No. de Acceso AF290003 y No. AF29004) , ? 1 (también conocido como precursor de ECF-L, similar a quitinasa 3, como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso M94584) , Y 2 como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso AF461142, glucoproteína 1 oviductal como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso XM_131100, glucoproteína 1 de cartílago (también denominada como BRP-39, 1 similar a quitinasa 3, GP-39, YKL-40 y ejemplificada por GenBank No. de Acceso X93035) , quitotriosidasa como se ejemplifica por No. de Acceso GenBank NM_003465, glucoproteína 1 oviductal (también denominada como mucina 9, oviductina y como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso NM_002557) , glucoproteína 39 de cartílago (también conocida como 1 similar a quitinasa 3, GP-39, YKL-40 como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso NM_001276) , y proteína 39 de condrocitos (también conocida como 2 similar a quitinasa 3, YKL-39, como se ejemplifica por GenBank No. de Acceso N _004000) . De este modo, el experto en la técnica podría apreciar, una vez armado con las enseñanzas proporcionadas en la presente, que la presente invención abarca las moléculas similares a quitinasa que poseen actividad detectable de quitinasa así como aquellas similares a las moléculas anteriormente mencionadas en que las moléculas similares a quitinasa, potenciales, comparten homología de secuencia sustancial a la familia de las proteínas. La invención no está limitada a estas moléculas similares a quitinasa particulares; más bien, la invención incluye otras moléculas similares a quitinasa que comparten homología sustancial con ellas y/o que poseen actividad detectable de quitinasa, y abarca tales moléculas conocidas en la técnica así como aquellas descubiertas en el futuro. "Que codifica" se refiere a la propiedad inherente de las secuencias específicas de nucleótidos en un polinucleótido, tal como un gen, un ADNc, o un ARNm, para servir como plantillas para las síntesis de otros polímeros y macromoléculas en procesos biológicos que tienen ya sea una secuencia definida de nucleótidos (por ejemplo, ARNr, ARNt y ARNm) o una secuencia definida de aminoácidos y las propiedades biológicas resultantes de éstas. De este modo, un gen codifica para una proteína si la transcripción y la traducción del ARNm que corresponden a ese gen, producen la proteína en una célula u otro sistema biológico. Tanto la hebra de codificación, la secuencia nucleotídica de la cual es idéntica a la secuencia de ARNm y que se proporciona usualmente en listados de secuencia, así como la hebra de no codificación, utilizada como la plantilla para la transcripción de un gen o ADNc, se pueden denominar como que codifica para la proteína u otro producto de ese gen o ADNc. Como se utiliza en la presente, el término "fragmento" como se aplica a un ácido nucleico, puede ordinariamente ser de al menos aproximadamente 20 nucleótidos de longitud, típicamente, al- menos aproximadamente 50 nucleótidos, más típicamente, desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 200 nucleótidos, preferentemente, al menos aproximadamente 200 hasta aproximadamente 300 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 300 nucleótidos hasta aproximadamente 400 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 400 hasta aproximadamente 500, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 500 nucleótidos hasta aproximadamente 600 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 600 hasta aproximadamente 700, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 700 nucleótidos hasta aproximadamente 800 nucleótidos, todavía más preferentemente, al menos aproximadamente 800 hasta aproximadamente 900, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 900 nucleótidos hasta aproximadamente 1000 nucleótidos, todavía más preferentemente, al menos aproximadamente 1000 hasta aproximadamente 1100, todavía más preferentemente, al menos aproximadamente 1100 nucleótidos hasta aproximadamente 1200 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 1200 hasta aproximadamente 1300, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 1300 nucleótidos hasta aproximadamente 1400 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 1400 hasta aproximadamente 1500, al menos aproximadamente 1500 hasta aproximadamente 1550, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 1550 nucleótidos hasta aproximadamente 1600 nucleótidos, aún más preferentemente, al menos aproximadamente 1600 hasta aproximadamente 1620 y más preferentemente, el fragmento de ácido nucleico será mayor de aproximadamente 1625 nucleótidos de longitud. "Homólogo (a) " como se utiliza en la presente, se refiere a la similitud de secuencia subunitaria entre dos moléculas poliméricas, por ejemplo entre dos moléculas de ácido nucleico, por ejemplo dos moléculas de ADN o dos moléculas de ARN, o entre dos moléculas polipeptídicas . Cuando una posición subunitaria en ambas de las dos moléculas está ocupada por la misma subunidad monomérica, por ejemplo, si una posición en cada una de las dos moléculas de ADN está ocupada por adenina, entonces éstas son homologas en esa posición. La homología entre dos secuencias es una función directa del número de acoplamiento o posiciones homologas, por ejemplo, si la mitad (por ejemplo, cinco posiciones en diez subunidades poliméricas de longitud) de las posiciones en dos secuencias del compuesto son homologas, entonces las dos secuencias son 50% homologas, si 90% de las posiciones, por ejemplo, 9 de 10 concuerdan o son homologas, las dos secuencias comparten 90% de homología. A manera de ejemplo, las secuencias de ADN 3'-ATTGCC-5' y 3'-TATGGC-5' comparten 75% de homología. Por "inhibidor de la molécula similar a la quitinasa" se entiende un compuesto que inhibe detectablemente el nivel de una molécula similar a la quitinasa en una célula o tejido cuando se compara al nivel de la molécula similar a la quitinasa en otra célula o tejido idéntico en ausencia del compuesto. El nivel de la molécula similar a la quitinasa incluye, pero no está limitado a, el nivel de expresión de un ácido nucleico que codifica la molécula, el nivel detectable de la molécula similar a la quitinasa, y/o el nivel de actividad de quitinasa. Los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa incluyen, pero no están limitados a, un compuesto químico (por ejemplo, alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina) , cobre, zinc, mercurio, un anticuerpo, una ribozima, una molécula antisentido, y un ácido nucleico. Un "inhibidor de AMCasa" , como se utiliza el término en la presente, incluye un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, como se definió previamente, que inhibe la AMCasa. Tal inhibidor incluye, pero no está limitado a, un compuesto químico, así como una ribozima, molécula antisentido, un anticuerpo, y similares, que inhiben el nivel de expresión de AMCasa y/o la actividad en una célula o tejido, comparado con el nivel de expresión de AMCasa y/o la actividad en la célula o tejido en ausencia del inhibidor, o en otro tejido o célula idéntico, en ausencia del inhibidor. El inhibidor incluye, pero no está limitado a, un compuesto químico, una ribozima, una molécula de ácido nucleico antisentido, un anticuerpo, y similares. Como se utiliza en la presente, el término "gen" y "gen recombinante" se refieren a moléculas de ácido nucleico que comprenden una estructura de lectura abierta que codifica para un polipéptido de la invención. Tales variaciones naturales alélicas pueden dar típicamente como resultado una variación de 1-5% en la secuencia nucleotídica de un gen dado. Los alelos alternativos pueden ser identificados por secuenciamiento del gen de interés en un número de individuos diferentes. Esto se puede llevar a cabo fácilmente utilizando sondas de hibridación para identificar el mismo sitio genético en una variedad de individuos . Cualquiera y todas las variaciones de nucleótidos tales y polimorfismos de aminoácido resultantes o variaciones que sean el resultado de variación alélica natural y que no alteren la actividad funcional, se pretende que estén dentro del alcance de la invención. Como se utiliza en la presente, un "material instructivo" incluye una publicación, un registro, un diagrama, o cualquier otro medio de expresión, que pueda ser utilizado para comunicar la utilidad del ácido nucleico, péptido, y/o composición de la invención en el equipo para efectuar el alivio de las diversas enfermedades o trastornos indicados en la presente. Opcionalmente , o alternativamente, el material instructivo puede describir uno o más métodos de alivio de las enfermedades o trastornos en una célula o un tejido de un mamífero. El material instructivo del equipo de la invención puede, por ejemplo, estar fijado a un recipiente, que contiene el ácido nucleico, péptido, compuesto químico y/o composición de la invención o ser empaquetado junto con un recipiente, que contiene el ácido nucleico, péptido, composición química, y/o composición. Alternativamente, el material instructivo puede ser empaquetado separadamente del recipiente con la intención de que el material instructivo y el compuesto sean utilizados cooperativamente por el recipiente. Una "enfermedad inflamatoria" se utiliza en la presente para referirse a un estado en el cual existe una respuesta al daño del tejido, lesión celular, un antígeno, y/o una enfermedad infecciosa. En algunos casos, no será posible establecer la causa. Los síntomas de la inflamación pueden incluir, pero no están limitados a infiltración celular e hinchazón tisular. Los estados de enfermedad contemplados bajo la definición de enfermedad inflamatoria incluyen asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia, y enfisema. Un "ácido nucleico aislado" se refiere a un segmento o fragmento de ácido nucleico que ha sido separado de las secuencias que flanquean en un estado de origen natural, por ejemplo, un fragmento de ADN que ha sido retirado de las secuencias que están normalmente adyacentes al fragmento, por ejemplo, las secuencias adyacentes al fragmento en un genoma en el cual se encuentra naturalmente. El término también aplica a los ácidos nucleicos, que han sido sustancialmente purificados de otros componentes, los cuales acompañan naturalmente al ácido nucleico, por ejemplo, ARN o ADN o proteínas, que lo acompañan naturalmente en la célula. Por lo tanto el término incluye, por ejemplo, un ADN recombinante que se incorpora en un vector, en un plásmido o virus de replicación autónomo, o en el ADN genómico de un procariote o eucariote, o que existe como una molécula separada (por ejemplo, como un ADNc o genómico o fragmento de ADNc producido por PCR o digestión con enzima de restricción) independiente de otras secuencias. Éste también incluye un ADN recombinante, que es parte de un gen híbrido que codifica para la secuencia polipeptídica adicional. Por la descripción de dos polinucleótidos como "operablemente enlazados" se entiende que una porción de ácido nucleico de hebra simple o de hebra doble comprende los dos polinucleótidos, acomodados dentro de la porción de ácido nucleico de tal manera que al menos uno de los dos polinucleótidos es capaz de ejercer un efecto fisiológico por medio del cual éste se caracteriza, sobre el otro. A manera de ejemplo, un promotor operablemente enlazado a la región de codificación de un gen es capaz de promover la transcripción de la región de codificación. Preferentemente, cuando el ácido nucleico que codifica para la proteína deseada comprende además una secuencia promotora/reguladora, la secuencia promotora/reguladora está colocada en el extremo 5' de la secuencia de codificación de la proteína deseada, de tal manera que ésta impulsa la expresión de la proteína deseada en una célula. Conjuntamente, el ácido nucleico que codifica para la proteína deseada y su secuencia promotora/reguladora comprenden un "transgen" . La expresión "constitutivo" es un estado en el cual un producto génico es producido en una célula viva bajo la mayor parte o todas las condiciones fisiológicas de la célula. La expresión "inducible" es un estado en el cual un producto génico es producido en una célula viva en respuesta a la presencia de una señal en la célula. Un "polipéptido recombinante" es uno, que es producido después de la expresión de un polinucleótido recombinante. "Polipéptido" se refiere a un polímero compuesto de residuos de aminoácido, variantes estructurales de origen natural relacionadas, y análogos de origen no natural sintéticos de los mismos enlazados por medio de enlaces peptídicos, variantes estructurales de origen natural relacionadas, y análogos de origen no natural, sintéticos de los mismos. Los polipéptidos sintéticos pueden ser sintetizados, por ejemplo, utilizando un sintetizador polipeptídico automatizado. El término "proteína" se refiere típicamente a polipéptidos grandes. El término "péptido" se refiere típicamente a polipéptidos cortos. Como se utiliza en la presente, el. término "mamífero transgénico" significa un mamífero, las células germinales del cual comprenden un ácido nucleico exógeno. Como se utiliza en la presente, "tratar" significa reducir la frecuencia con la cual los síntomas de la enfermedad inflamatoria son experimentados por un paciente, o alterar la historia natural y/o la progresión de la enfermedad en un paciente . Como se utiliza en la presente, el término "oligonucleótido antisentido" significa un polímero de ácido nucleico, al menos una porción del cual es complementaria a un ácido nucleico que está presente en una célula normal o en una célula afectada. Más preferentemente, los oligonucleótidos antisentido comprenden entre aproximadamente quince y aproximadamente cincuenta nucleótidos. Los oligonucleótidos antisentido de la invención incluyen, pero no están limitados a, oligonucleótidos de fosforotioato y otras modificaciones de oligonucleótidos'. El término "anticuerpo", como se utiliza en la presente, se refiere a una molécula de inmunoglobulina que es capaz de enlazarse específicamente a un epitopo específico sobre un antígeno. Los anticuerpos pueden ser inmunoglobulinas intactas derivadas de fuentes naturales o de fuentes recombinantes, y pueden ser porciones inmunorreactivas de inmunoglobulinas intactas. Los anticuerpos son típicamente tetrámeros de moléculas de inmunoglobulina . Los anticuerpos en la presente invención pueden existir en una variedad de formas incluyendo, por ejemplo, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales , Fv, Fab y F(ab)2, asi como anticuerpos de cadena simple y anticuerpos humanizados (Harlow et al., 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlo et al., 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Nati. Acad. Sci . USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426) . Por el término "anticuerpo sintético" como se utiliza en la presente, se entiende un anticuerpo que se genera utilizando tecnología de ADN recombinante , tal como, por ejemplo, un anticuerpo expresado por un bacteriófago como se describe en la presente. Debe considerarse que el término también significa un anticuerpo que ha sido generado por la síntesis de una molécula de ADN que codifica para el anticuerpo y cuya molécula de ADN expresa una proteína de anticuerpo, o una secuencia de aminoácidos especificando el anticuerpo, en donde al ADN o la secuencia de aminoácidos ha sido obtenida utilizando tecnología de ADN sintético o de secuencia de aminoácidos, que está disponible y es bien conocida en la técnica.

Una "porción" de un polinucleotido significa al menos aproximadamente quince hasta aproximadamente cincuenta residuos de nucleótidos secuenciales del polinucleotido. Se entiende que una porción del polinucleotido puede incluir cada residuo de nucleótido del polinucleotido. Por el término "que se enlaza específicamente" , como se utiliza en la presente, se entiende un anticuerpo que reconoce y se enlaza a una molécula similar a la quitinasa, pero que no reconoce sustancialmente o no se enlaza a otras moléculas en una muestra. Un tratamiento "profiláctico" es un tratamiento administrado a un sujeto que no muestra signos de una enfermedad, o muestra solamente signos tempranos de la enfermedad, para el objetivo de disminuir el riesgo de desarrollar la patología asociada con la enfermedad. "Prevención" de una enfermedad, como el término se utiliza en la presente, significa que el inicio de la enfermedad se retrasa, y/o que los síntomas de la enfermedad disminuirán en intensidad y/o en frecuencia, cuando se administre una molécula similar a la quitinasa, en comparación con el inicio y/o los síntomas en ausencia del inhibidor . Un tratamiento "terapéutico" es un tratamiento administrado a un sujeto que muestra signos de patología, para fines de disminuir o eliminar esos signos.

I . Métodos A. Métodos de tratamiento de una enfermedad inflamatoria La presente invención incluye un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa. Contemplados en la presente invención están los métodos de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, preferentemente un humano, utilizando un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa. Esto se debe, como sería apreciado por alguien experto en la técnica, cuando se proporciona con la descripción en la presente, la inhibición de la expresión y/o la actividad de una molécula similar a la quitinasa sirve como un tratamiento para enfermedades inflamatorias, incluyendo enfermedades mediadas por IL-13. Es decir, los datos descritos en la presente demuestran que la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, en un modelo de enfermedad inflamatoria asociada con, o mediada por, la expresión de IL-13, trata la enfermedad después de que ésta se ha establecido. Además, la presente invención se refiere al descubrimiento de que las moléculas similares a quitinasa y el AR m de la molécula similar a la quitinasa están presentes en niveles incrementados en el tejido enfermo inflamatorio, en comparación con el nivel de una molécula similar a la quitinasa, en el tejido normal. De este modo, la presente invención se refiere al tratamiento de tales enfermedades utilizando los inhibidores de una molécula similar a la quitinasa, incluyendo, pero no limitado a, un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa (por ejemplo, alosamidina) . Sorprendentemente, un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa puede ser administrado para tratar la enfermedad, aún cuando no exista actividad de quitinasa detectable. De este modo, la persona experta en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la presente invención no está limitada al tratamiento de una enfermedad donde está presente actividad detectable de quitinasa, más bien, la presente invención abarca el tratamiento de una enfermedad asociada con o mediada por la expresión de una molécula similar a quitinasa, aún cuando no exista actividad detectable de quitinasa. Podría ser comprendido por una persona de experiencia en la técnica, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa, abarca la inhibición de la expresión de una molécula similar a la quitinasa, tal como aquella mediada por, entre otras cosas, una ribozima y/o molécula antisentido que inhibe la expresión de un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa. Adicionalmente, el experto en la técnica podría apreciar, una vez armado con las enseñanzas de la presente invención, que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa incluye la inhibición de la actividad de una molécula similar a la quitinasa, en una célula. Tal inhibición de la actividad de una molécula similar a la quitinasa puede ser efectuada utilizando inhibidores de la actividad enzimática de quitinasa, incluyendo, entre otras, alosamidina, 1 , 10-fenantrolina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, el dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc, mercurio y similares. Además, los inhibidores de la actividad de la molécula similar a la quitinasa incluyen un anticuerpo que se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa, con lo cual se previene que la enzima funcione. De este modo, el inhibidor de una molécula similar a la quitinasa incluye, pero no está limitado a, la transcripción de la inhibición, la traducción, o ambas, de un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa; y también incluye la inhibición de cualquier actividad del peptido también, incluyendo, pero no limitado a, la habilidad para escindir la quitina. La presente invención incluye un método de tratamiento o prevención de una enfermedad inflamatoria en un mamífero. El método comprende el administrar un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa a un mamífero en necesidad de tal tratamiento. Esto es debido a que, como podría ser apreciado por una persona de experiencia en la técnica armada con las enseñanzas de la presente invención, la inhibición de una molécula similar a la quitinasa es útil para tratar o prevenir una enfermedad inflamatoria. La inhibición de una molécula similar a la quitinasa previene, a su vez, la patología asociada con una enfermedad inflamatoria, tan ampliamente como es demostrado por los datos descritos en la presente . Más específicamente, la invención se refiere a la inhibición de una molécula similar a la quitinasa utilizando diversos inhibidores. Es decir, una persona de experiencia en la técnica podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, que los compuestos que inhiben la expresión, la actividad y/o la función de una molécula similar a la quitinasa abarcan, pero no están limitados a, un anticuerpo, un ácido nucleico antisentido, una ribozima, una molécula pequeña, un peptidomimético y un compuesto químico, ya sea conocido o para ser desarrollado, que inhibe una molécula similar a la quitinasa, y con esto una enfermedad inflamatoria. La invención abarca la inhibición de una molécula similar a la quitinasa donde la molécula demuestra o no actividad de quitinasa detectable in vitro o in vivo. Es decir, sin desear estar comprometido por alguna teoría particular, si la molécula similar a la quitinasa demuestra actividad de quitinasa detectable, ya sea en una célula o tejido o en una sistema libre de células, esto no es relevante. Más específicamente, como es demostrado por los datos descritos en la presente, una molécula similar a la quitinasa, tal como Ym, que no demuestra actividad de quitinasa detectable in vitro o in vivo, es expresada a un nivel incrementado en células y tejidos enfermos, en comparación a una célula o tejido que nc demuestra patología de la enfermedad inflamatoria, y la inhibición de Ym utilizando, entre otros, alosamidina, trata y/o previene la enfermedad. Adicionalmente , los datos descritos en la presente demuestran además que el nivel incrementado de una quitinasa, AMCasa, en una célula o tejido, está asociado con, o es mediador de una enfermedad inflamatoria. Además, la inhibición de la AMCasa trata la enfermedad. Tal efecto terapéutico puede estar relacionado a la inhibición de la actividad de quitinasa no "detectable, o puede suceder que el efecto terapéutico no se relacione a ninguna quitinasa o actividad similar a quitinasa de la molécula similar a la quitinasa, y el experto en la técnica, con base en la descripción proporcionada en la presente, podría apreciar que el efecto terapéutico puede estar, pero no necesita estar, correlacionado con ninguna actividad de quitinasa por la molécula . Una persona de experiencia en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que un inhibidor de la invención incluye las moléculas y los compuestos que previenen o que inhiben la expresión, la actividad o la función de una molécula similar a la quitinasa, en un mamífero. Es decir, la invención contempla que un antisentido y/o molécula antisentido que inhibe, disminuye, y/o suprime la expresión de una molécula similar a la quitinasa, tal que la molécula similar a la quitinasa no es detectable en la célula o el tejido, es un inhibidor de la invención. Por ejemplo, un compuesto que degrada una molécula similar a la quitinasa puede disminuir su función, y puede ser un inhibidor como se contempla en la presente invención. La inhibición de una molécula similar a la quitinasa puede ser evaluada utilizando una amplia variedad de métodos, incluyendo aquellos descritos en la presente, asi como métodos bien conocidos en la técnica o para ser desarrollados en el futuro. Es decir, la persona experta podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la inhibición de la expresión de la molécula similar a la quitinasa puede ser fácilmente evaluada utilizando métodos que evalúan el nivel de un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa (por ejemplo AR m) , y/o el nivel de una molécula similar a la quitinasa presente en una célula o fluido. Además, el experto en la técnica podría comprender que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa puede ser evaluada mediante la determinación de la inhibición de la actividad enzimática de quitinasa en una célula o fluido corporal, como se ejemplifica en otro sitio en la presente, y/o utilizando métodos bien conocidos en la técnica o que van a ser desarrollados en el futuro. Una persona de experiencia en la técnica, con base en la descripción proporcionada en la presente, podría comprender que la invención abarca el tratamiento de una variedad de enfermedades inflamatorias, incluyen, pero no limitadas a, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia y enfisema, y similares. Como se describe en la presente, estas enfermedades involucran y/o son mediadas por, las moléculas similares a la quitinasa incrementadas, en tejidos donde las moléculas similares a la quitinasa incrementadas incluyen, y no están limitadas a, la expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa, actividad incrementada de la molécula similar a la quitinasa, o ambas.

Además, la persona de experiencia en la técnica podría apreciar adicionalmente, con base en las enseñanzas proporcionadas en la presente, que las enfermedades abarcan cualquier enfermedad que comprenda la molécula similar a la quitinasa, incrementada, en un te ido incluyendo, entre otras, una enfermedad mediada por la producción incrementada de IL-13 y/o la producción incrementada de IL-4. Esto es debido a que, como se describe más completamente más adelante en la presente, los datos descritos en la presente demuestran que IL-13 incrementada y/o IL-4 incrementada son mediadores de un incremento en las moléculas similar a la quitinasa, a su vez, son mediadores y/o están asociados con una variedad de cambios asociados con la enfermedad inflamatoria que incluye, pero no está limitada a, inflamación tisular, volumen pulmonar incrementado, eosinófilos incrementados en el fluido de lavado bronquioalveolar (BAL) , linfocitos incrementados en el fluido BAL, células totales incrementadas en el fluido BAL, tamaño incrementado del alveolo, deposición incrementada de los cristales que comprenden las moléculas similares a la quitinasa en el tejido pulmonar, resistencia incrementada de las vías respiratorias, metaplasia incrementada del moco, expresión incrementada de la mucina, fibrosas parenquimal incrementada, remodelación incrementada de las vías respiratorias, fibrosis subepitelial incrementada, deposición incrementada del colágeno en el te ido de las vías respiratorias, hipertrofia epitelial en el tejido pulmonar, organización focal del material cristalino dentro de los focos fibróticos similares a cuerpo de Masson, y similares. Por lo tanto, los datos descritos en la presente demuestran que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa en un mamífero afectado con una enfermedad inflamatoria, en donde la enfermedad es mediada o está asociada con la expresión incrementada de IL-13 y/o IL-4, tratará la enfermedad mediante la mediación de una disminución en el nivel de una molécula similar a la quitinasa la cual, a su vez, trata la enfermedad. Por ejemplo, tales datos incluyen, pero no están limitados a, la inhibición de la patología de diversos tejidos por la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa (por ejemplo, alosamidina) a un mamífero, donde la expresión incrementada de IL-13 es mediadora de la actividad incrementada de la molécula similar a la quitinasa, y de la expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa.

La presente invención comprende además un método para tratar una enfermedad inflamatoria mediada y/o asociada con una respuesta inflamatoria Th2 en un mamífero. El experto en la técnica, cuando está dotado con la presente descripción y las enseñanzas proporcionadas en la presente; podría comprender que una enfermedad inflamatoria mediada por y/o asociada con una respuesta inflamatoria Th2 , abarca una variedad de enfermedades inflamatorias, incluyendo, pero no limitadas a, asma, .enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia y enfisema, y similares. Como se describe en la presente, estas enfermedades están mediadas por una respuesta inflamatoria Th2 en un mamífero, y dan como resultado, entre otras cosas, la producción y/o expresión incrementada de IL-13, actividad y/o expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa, y similares. Las moléculas similares a la quitinasa, incrementadas, incluyen, pero no están limitadas a, expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa, actividad incrementada de la molécula similar a la quitinasa, o ambas. Además, el experto en la técnica podría apreciar, con base en las enseñanzas proporcionadas en la presente, que la enfermedad abarca cualquier enfermedad que comprenda la molécula similar a la quitinasa, incrementada, en un tejido incluyendo, entre otras, una enfermedad mediada por la respuesta inflamatoria de Th.2 incrementada. Esto es debido a que, como se describe más completamente en otro sitio en la presente, los datos descritos en la presente demuestran que las respuestas inflamatorias de Th2 incrementadas dan como resultado, entre otras, actividad y/o expresión incrementada de IL-13 y/o actividad y/o expresión incrementada de IL-4, un incremento en las moléculas similar a la quitinasa lo cual, a su vez, media y/o está asociado con una variedad de cambios asociados con enfermedad inflamatoria incluyendo, pero no limitada a, células totales incrementadas en el fluido BAL, tamaño incrementado del alveolo, deposición incrementada de los cristales que comprenden molécula similar a la quitinasa en el tejido pulmonar, resistencia incrementada de las vías respiratorias, metaplasia incrementada del moco, expresión incrementada de mucina, fibrosis parenquimal incrementada, remodelación incrementada de las vías respiratorias, fibrosis subepitelial incrementada, eosinófilos incrementados en el fluido de lavado bronquioalveolar (BAL) , linfocitos incrementados en el fluido BAL, y similares . Por lo tanto, los datos descritos en la presente demuestran que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa en un mamífero afectado con una enfermedad inflamatoria, en donde la enfermedad es mediada por y/o asociada con una respuesta inflamatoria de Th2 incrementada, tratará la enfermedad mediante la mediación de una disminución en el nivel de una molécula similar a la quitinasa la cual, a su vez, trata la enfermedad. Por ejemplo, tales datos incluyen, pero no están limitados a, la inhibición de diversas patologías tisulares por la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa (por ejemplo alosamidina) a un mamífero, donde una respuesta inflamatoria Th2 es mediadora de la actividad incrementada de la molécula similar a la quitinasa, y expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa. El experto en la técnica apreciará además que una molécula similar a la quitinasa es una molécula que muestra un grado sustancial de homología a. las quitinasas conocidas, tal que esta ha sido o puede ser clasificada como una molécula de la familia de las quitinasas con base en, entre otras, su secuencia de aminoácidos. Además, el experto en la técnica podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, que mientras que una molécula similar a la quitinasa puede mostrar homología a una quitinasa conocida, una molécula quitinasa no necesita demostrar actividad de quitinasa detectable, ya que ésta no puede escindir de manera detectable la quitina en un ensayo conocido en la técnica. Tales moléculas similar a la quitinasa incluyen, pero no están limitadas a, la quitinasa ácida de mamífero (citocina quimiotáctica de eosinófilos) , YM1 (3 similar a la cinasa 3, precursor de ECF-L) , YM2 , glucoprotelna oviductal 1, glucoproteína 1 de cartílago (BRP-39, 1 similar a la quitinasa 3, GP-39, YKL-40) , quitotriosidasa, glucoproteína oviductal 1 (mucina 9, oviductal) , glucoproteína 39 de cartílago (1 similar a la quitinasa 3, GP-39, YKL-40), y la proteína 39 de condorcitos (2 similar a la quitinasa 3, YKL-39) . Un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa puede incluir, pero no debe ser considerado como limitado a un compuesto químico, una proteína, un peptidomimético, un anticuerpo, una ribozima y una molécula de ácido nucleico antisentido . Una persona de experiencia en la técnica podría apreciar fácilmente, con base en la descripción proporcionada en la presente, que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa abarca un compuesto químico que inhibe la actividad de una molécula similar a la quitinasa. Los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa son bien conocidos en la técnica, y algunos de los elementos clave críticos de una clase de inhibidores de la molécula similar a la quitinasa, han sido definidos (Spindler y Spindler-Barth, 1999, Chitin and Chitinases, Birkhauser Verlag, Basilea, Suiza). Adicionalmente , un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa abarca un compuesto químic mente modificado, y derivados, como es bien conocido para una persona de experiencia en la técnica.

El experto en la técnica podría apreciar que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa abarca un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, ya conocido tal como, pero no limitado a, alosamidina (Allosamidine , Carbohydrate Chemistry Industrial Research Limited, Lower Hutt, Nueva Zelanda, y Eli Lily and Co . , Greenfield, IN) y sus derivados (ver, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 5,413,991), glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina (Nishimoto et al., 1991, J. Antibiotics 44: 716-722) desmetilalosamidina (Patente de los Estados Unidos No. 5,070,191), y didesmetilalosamidina (Zhou et al., 1993, J. Antibiotics 46: 1582-1588). Los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa, adicionalmente contemplados, incluyen estiloguanidina y sus derivados (Kato et al., 1995, Tetrahedron. Lett . 36: 2133-2136), el dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) (Izumida et al., 1996, J. Antibiotics 49: 76-80) , cationes divalentes (por ejemplo, Cu2+, Zn2÷ y Hg2+) (Izumida et al., 1995, J. Mar. Biotechnol . 2: 163-166; Funke y Spindler, 1989, Comp . Biochem Physiol . 94B: 691-695), y riboflavina y derivados de flavina (Publicación Internacional No. WO 02/23991) . Además, una persona de experiencia en la técnica podría, cuando esté equipado con esta descripción y los métodos ejemplificados en la misma, apreciar que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa incluye tales inhibidores como los que se descubran en el futuro, como puede ser identificado por los criterios bien conocidos en la técnica de la farmacología, tales como los resultados fisiológicos de la inhibición de una molécula similar a la quitinasa, como se describe con detalle en la presente y/o como es conocido en la técnica. Por lo tanto, la presente invención no está limitada de ninguna manera a algún inhibidor particular de la molécula similar a la quitinasa, como es ejemplificado o descrito en la presente; más bien, la invención abarca aquellos inhibidores que podrían ser comprendidos por el experto rutinario, por ser útiles, como es conocido en la técnica, y como sean descubiertos en el futuro . Los métodos adicionales de identificación y producción de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, ¦ son bien conocidos para aquellos de experiencia ordinaria en la técnica, incluyendo, pero no limitados a, la obtención de un inhibidor proveniente de una fuente de origen natural (por ejemplo, Streptomyces sp. , Pseudomonas sp., Stylotella aurantium) . Alternativamente, un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa puede ser sintetizado químicamente. Además, el experto en la técnica podría apreciar, con base en las enseñanzas proporcionadas en la presente, que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa puede ser obtenido a partir de un organismo recombinante . Las composiciones y métodos para sintetizar químicamente los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa, y para obtenerlos a partir de fuentes naturales son bien conocidos en la técnica y se describen, entre otros, en Yamada et al., Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,413,991 y 5,070,191. La persona de experiencia en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa abarca un anticuerpo que se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa, por ejemplo, AMCasa, con lo cual se inhibe la acción de estas proteínas. Por ejemplo, los anticuerpos que se enlazan específicamente a YM son bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica (Webb et al., 2001, J. Biol. Chem. 276: 41969-41976) . Similarmente , los anticuerpos para las moléculas similar a la quitinasa pueden ser producidos utilizando métodos estándares descritos en la presente, o bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica (Harlow et al., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nueva York) . De este modo, la presente invención no está limitada de ninguna manera a algún anticuerpo particular, más bien, la invención incluye cualquier anticuerpo que se enlace específicamente con una molécula similar a la quitinasa, ya sea conocida en la técnica y/o identificada en el futuro.

Una persona de experiencia en la técnica apreciará que un anticuerpo puede ser administrado como una proteína, una construcción de ácido nucleico que codifica para una proteína, o ambos. Numerosos vectores y otras composiciones y métodos son bien conocidos para administrar una proteína o una construcción de ácido nucleico que codifica para una proteína, a las células o tejidos. Por lo tanto, la invención incluye un método de administrar un anticuerpo o ácido nucleico que codifica para un anticuerpo (por ejemplo anticuerpo sintético) que es específico para una molécula similar a la quitinasa (Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: ? Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York; Ausubel et al., 1997, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Nueva York) . El experto en la técnica podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la invención abarca la administración de un anticuerpo que se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa, de interés, o un ácido nucleico que codifica para el anticuerpo, en donde la molécula de anticuerpo comprende además una secuencia de retención intracelular tal que el anticuerpo se enlaza con la molécula similar a la quitinasa, y previene su expresión en la superficie celular y/o su exportación desde una célula. Tales anticuerpos, frecuentemente denominados como "intracuerpos" , son bien conocidos en la técnica y son descritos en, por ejemplo, Marasco et al. (Patente de los Estados Unidos No. 6,004,490) y Beerli et al. (1996, Breast Cáncer Research and Treatment 38: 11-17) . De este modo, la invención abarca los métodos que comprenden la inhibición de la expresión de una molécula similar a la quitinasa sobre una célula, y/o su secreción desde una célula, donde la persona de experiencia podría comprender que tal inhibición proporcionaría un beneficio, con base en la descripción proporcionada en la presente. La presente invención no está limitada a los compuestos químicos y a los anticuerpos contra una molécula similar a la quitinasa. Una persona de experiencia en la técnica podría apreciar que la inhibición de la expresión de un polipéptido es de igual modo un método efectivo de inhibición de la actividad y función del polipéptido. De este modo, se proporciona un método para la inhibición de una molécula similar a la quitinasa, mediante la inhibición de la expresión de un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa. Los métodos para inhibir la expresión de un gen son bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica, e incluyen el uso de ribozimas u oligonucleótidos antisentido. Los oligonucleótidos antisentido son moléculas de ADN o ARN que son complementarias para alguna porción de una molécula de ARNm. Donde están presentes en una célula los oligonucleótidos antisentido se ibridan a una molécula existente de ARNm e inhiben la traducción en un producto génico. La inhibición de la expresión de un gen utilizando un oligonucleótido antisentido es bien conocida en la técnica (Marcus-Sekura, 1988, Anal. Biochem. 172: 289), como lo son los métodos de expresión de un oligonucleótido antisentido en una célula (Inoue, Patente de los Estados Unidos No. 5, 190, 931) . Contemplados en la presente invención están los oligonucleótidos antisentido que son sintetizados y proporcionados a la célula por medio de métodos bien conocidos por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica. Como un ejemplo, un oligonucleótido antisentido puede ser sintetizado entre aproximadamente 10 y aproximadamente 100, más preferentemente entre aproximadamente 15 y aproximadamente 50 nucleótidos de longitud. La síntesis de las moléculas de ácido nucleico es bien conocida en la técnica, como lo es la síntesis de los oligonucleótidos antisentido modificados para mejorar la actividad biológica, en comparación a los oligonucleótidos antisentido no modificados (Tullís, 1991, Patente de los Estados Unidos No. 5,023,243). Similarmente, la expresión de un gen puede ser inhibida por la hibridación de una molécula antisentido a un promotor u otro elemento regulador de un gen, con lo cual se afecta la transcripción del gen. Los métodos para la identificación de un promotor u otro elemento regulador que interactúa con un gen de interés, son bien conocidos en la técnica, e incluyen métodos tales como el sistema de dos híbridos de levadura (Bartel y Fields, eds . , en: The Yeast Two Hybrid System, Oxford University Press, Cary, NC) . Alternativamente, la inhibición de un gen que expresa una molécula similar a la quitinasa puede ser lograda a través de una ribozima. El uso de las ribozimas para inhibir la expresión del gen es bien conocido para aquellos de experiencia en la técnica (ver, por ejemplo, Cech et al., 1992, J. Biol. Chem. 267: 17479; Hampel et al., 1989, Biochemistry 28: 4929; Altman et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,168,053). Las ribozimas son moléculas catalíticas de ARN con la habilidad para escindir otras moléculas de ARN de hebra simple. Se sabe que las ribozimas son específicas de secuencia, y pueden por lo tanto ser modificadas para reconocer una secuencia nucleotídica específica (Cech, 1988, J. Amer . Med. Assn. 260: 3030), permitiendo la escisión selectiva de las moléculas de ARNm específicas. Dada la secuencia nucleotídica de la molécula similar a la quitinasa, una persona de experiencia en la técnica podría sintetizar un oligonucleótido antisentido, o la ribozima sin experimentación indebida, provisto con la descripción y las referencias incorporadas en la presente.

Una persona de experiencia en la técnica apreciará que los inhibidores de la expresión del gen de la molécula similar a la quitinasa, pueden ser administrados de manera simple o en cualquier combinación de los mismos. Además, los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa pueden ser administrados de manera simple o en cualquier combinación de los mismos en un sentido temporal, ya que éstos pueden ser administrados simultáneamente, antes, y/o después uno del otro. Una persona de experiencia en la técnica apreciará, con base en la descripción proporcionada en la presente, que los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa para inhibir la expresión del gen, pueden ser utilizados para tratar el asma, COPD, y otras enfermedades inflamatorias, y que un inhibidor puede ser utilizado solo o en cualquier combinación con otro inhibidor para efectuar un resultado terapéutico . B_. Método para prevenir una enfermedad inflamatoria Será apreciado por una persona de experiencia en la técnica, cuando está dotado con la presente descripción, incluyendo los métodos detallados en la misma, que la invención no está limitada al tratamiento de una enfermedad inflamatoria una vez que se establece la enfermedad. Particularmente, los síntomas de la enfermedad no se han manifestado al punto de detrimento para el mamífero; más bien, la enfermedad no necesita ser detectada en un mamífero antes de que se administre el tratamiento. Es decir, la patología significativa a partir de una enfermedad inflamatoria no tiene que ocurrir antes de que la presente invención fuera a proporcionar beneficio. Por lo tanto, la presente invención, como se describe más completamente en la presente, incluye un método para prevenir una enfermedad inflamatoria en un mamífero, ya que un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, como se discute previamente en la presente, puede ser administrada a un mamífero antes del inicio de una enfermedad inflamatoria, con lo cual se previene la enfermedad, como es demostrado por los datos descritos en la presente. Una persona de experiencia en la técnica, cuando está dotada con la descripción de la presente, podría apreciar que la prevención de la enfermedad inflamatoria abarca la administración a un mamífero de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, como una medida preventiva contra la enfermedad inflamatoria. Como se detalla en la presente, los síntomas y etiologías de la enfermedad inflamatoria asociada con la molécula similar a la quitinasa, incluyen la inflamación de tejidos, volumen pulmonar incrementado, eosinófilos incrementados en el fluido de lavado bronquioalveolar (BAL) , linfocitos incrementados en el fluido de BAL, células totales incrementadas en el fluido de BAL, tamaño incrementado de los alvéolos, deposición incrementada de los cristales comprendidos de moléculas similar a la quitinasa en el tejido pulmonar, resistencia incrementada de las vias respiratorias, metaplasia incrementada del moco, expresión incrementada de la mucina, fibrosis parenquimal incrementada, remodelación incrementada de las vías respiratorias, fibrosis subepitelial incrementada, deposición incrementada del colágeno en el tejido de las vías respiratorias, hipertrofia epitelial en el tejido pulmonar, organización focal del material cristalino en los focos fibróticos similares a cuerpo de Masson, y similares. Dadas estas etiologías y los métodos descritos en la presente, el experto en la técnica puede reconocer y prevenir una enfermedad inflamatoria en un mamífero, utilizando un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, antes de que pueda ser detectada la patología de la enfermedad. Esto es debido a que los datos descritos en la presente demuestran que la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, incluyendo, pero no limitado a alosamidina, previniendo el inicio de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, ya sea que la enfermedad haya sido inducida por un alérgeno (por ejemplo sensibilización con ovoalbúmina) o si el mamífero está genéticamente predispuesto a la enfermedad (por ejemplo, ratones transgénicos que sobreproducen IL-13 de manera constitutiva o inducible) . En consecuencia, el experto en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la presente invención incluye un método para prevenir la enfermedad, que comprende la inhibición de una molécula similar a la quitinasa, utilizando un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa. Además, como se discute más completamente más adelante en la presente, los métodos para inhibir una molécula similar a la quitinasa-, abarcan una amplia gama de técnicas para inhibir no solamente la actividad de la molécula similar a la quitinasa, sino también para inhibir la expresión de un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa. Adicionalmente, como se describe en la presente, una persona de experiencia en la técnica podría comprender, una ve2 dotado con la enseñanza proporcionada en la presente, que la presente invención abarca un método para prevenir una amplia variedad de enfermedades, donde la expresión y/o actividad de una molécula similar a la quitinasa, es mediadora de la enfermedad. Los métodos para evaluar si una enfermedad se refiere a la sobreexpresion o a la actividad incrementada de una molécula similar a la quitinasa, se describe en otro sitio en la presente, y/o son bien conocidos en la técnica. Además, la invención abarca el tratamiento o la prevención de tales enfermedades descubiertas en el futuro. La invención abarca además los métodos para tratar una enfermedad inflamatoria mediada por IL-13. Esto es debido a que, como lo demuestran los datos descritos en la presente, la sobre-expresión de IL-13 en los pulmones, entre otros tejidos, ya sea inducible o constitutiva, media o está asociada con la expresión incrementada de la molécula similar a la quitinasa en los tejidos respiratorios, conduciendo a, entre otras cosas, las patologías descritas en la presente. Con esto, la presente invención incluye los métodos de tratamiento de una enfermedad inflamatoria mediada por IL-13, utilizando los métodos de la presente invención. La invención abarca la administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, para practicar los métodos de la invención; el experto en la técnica podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, cómo formular y administrar el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, apropiado, a un mamífero. Por supuesto, la administración exitosa de los inhibidores de la molécula similar a la quitinasa, ha sido extensamente reducida a la práctica como se ejemplifica en la presente. No obstante, la presente invención no está limitada a algún método particular de administración o régimen de tratamiento. Esto es especialmente cierto donde podría ser apreciado por una persona de experiencia en la técnica equipado con la descripción proporcionada en la misma, incluyendo la reducción extensa a la práctica utilizando un modelo reconocido en la técnica de la enfermedad inflamatoria, que los métodos de administración de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa pueden ser fácilmente determinados por una persona de experiencia ordinaria en las técnicas farmacéuticas . Más específicamente, los datos descritos en la presente demuestran que la expresión incrementada de IL-13 es mediadora o está correlacionada con el nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa (por ejemplo, Ym, AMCasa, y similares) y que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa utilizando, entre otras cosas, un anticuerpo que se enlaza específicamente con la molécula similar a la quitinasa, previene, mejora y/o trata la enfermedad inflamatoria. Es decir, por ejemplo, el ARNm de la AMCasa es expresado a un mayor nivel en las células de la enfermedad inflamatoria y/o los tejidos y la administración del anticuerpo que se enlaza específicamente con la AMCasa, trata la enfermedad en un modelo animal reconocido en la técnica, de la enfermedad inflamatoria. Además, los datos descritos en la presente demuestran resultados similares con relación a la expresión de Ym y la inhibición de Ym utilizando un compuesto químico, por ejemplo, la alosamidina, que es un inhibidor conocido de la molécula similar a la quitinasa. El experto en la técnica apreciará que la presente invención no está limitada a estas moléculas similar a la quitinasa o a estos inhibidores de la molécula similar a la quitinasa, y los datos descritos en la presente demuestran ampliamente que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa pueden tratar y/o prevenir de manera efectiva una enfermedad inflamatoria. Como se utiliza en la presente, el término "portador farmacéuticamente aceptable" significa una composición química con la cual puede ser combinado un inhibidor apropiado de la molécula similar a la quitinasa y el cual, después de la combinación, puede ser utilizado para administrar el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, apropiado, a un mamífero. Las composiciones farmacéuticas útiles para practicar la invención pueden ser administradas para distribuir una dosis de entre aproximadamente 0.1 ng/kg/día y 100 mg/kg/día.

Las composiciones farmacéuticas que son útiles en los métodos de la invención pueden ser administradas sistémicamente en formulaciones sólidas orales, formulaciones oftálmicas, supositorios, aerosoles, formulaciones tópicas u otras formulaciones similares. Además del inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, apropiado, tales composiciones farmacéuticas pueden contener portadores farmacéuticamente aceptables y otros ingredientes conocidos para mejorar y facilitar la administración del fármaco. Otras posibles formulaciones, tales como las nanopartículas , liposomas, eritrocitos resellados y sistemas inmunologicamente basados, pueden también ser utilizados para administrar un inhibidor apropiado de la molécula similar a la quitinasa, de acuerdo a los métodos de la invención. Los compuestos que son identificados utilizando cualquier método descrito en la presente como compuestos útiles potenciales para el tratamiento y/o prevención de una enfermedad de interés, pueden ser formulados y administrados a un mamífero para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente, como se describen ahora. La invención abarca la preparación y el uso de las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto útil para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente, como un ingrediente activo. Tal composición farmacéutica puede consistir del ingrediente activo solo, en una forma adecuada para la administración a un sujeto, o la composición farmacéutica puede comprender el ingrediente activo y uno o más cortadores farmacéuticamente aceptables, uno o más ingredientes adicionales, o alguna combinación de éstos . El ingrediente activo puede estar presente en la composición farmacéutica en la forma de un éster o sal fisiológicamente aceptable, tal como en combinación con un catión o anión fisiológicamente aceptable, como es bien conocido en la técnica. Como se utiliza en la presente, el término "portador farmacéuticamente aceptable" significa una composición química con la cual puede ser combinado el ingrediente activo y la cual, después de la combinación, puede ser utilizada para administrar el ingrediente activo a un sujeto. Como se utiliza en la presente, el término éster o sal "fisiológicamente aceptable" significa una forma de éster o sal del ingrediente activo que es compatible con cualesquier otros ingredientes de la composición farmacéutica, que no es dañina para el sujeto al cual va a ser administrada la composición. Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente pueden ser preparadas mediante cualquier método conocido o desarrollado posteriormente en la técnica de la farmacología. En general, tales métodos preparatorios incluyen el paso de poner el ingrediente activo en asociación con un portador y uno o más de otros ingredientes accesorios, y luego, si es necesario o deseable, conformar o envasar el producto en una unidad de dosis simple o de dosis múltiples. Aunque las descripciones de las composiciones farmacéuticas proporcionadas aquí están principalmente dirigidas a las composiciones farmacéuticas que son adecuadas para la administración ética a humanos, podrá ser comprendida por la persona de experiencia en la técnica, que tales composiciones son en general adecuadas para la administración a animales de todos los tipos. La modificación de las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a humanos, con el fin de hacer a las composiciones adecuadas para la administración a diversos animales, es bien comprendida, y el farmacólogo veterinario de experiencia ordinaria puede diseñar y realizar tal modificación meramente con experimentación ordinaria, si la hay. Los sujetos para los cuales es contemplada la administración de las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen, pero no están limitados a, humanos y otros primates, mamíferos incluyendo mamíferos comercialmente relevantes tales como ganado, cerdos, caballos, ovejas, gatos y perros, y aves incluyendo aves comercialmente relevantes, tales como pollos, patos , gansos y pavos . Las composiciones farmacéuticas que son útiles en los métodos de la invención pueden ser preparadas, envasadas o vendidas en formulaciones adecuadas para la administración oral, rectal, vaginal, parenteral, tópica, pulmonar, intranasal, bucal, intravenosa, oftálmica, intratecal o cualquier otra ruta de administración. Otras formulaciones contempladas incluyen nanopartículas proyectadas, preparaciones liposomales, eritrocitos resellados que contienen el ingrediente activo, y formulaciones inmunológicamente basadas. Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida a granel, como una dosis unitaria simple, o como una pluralidad de dosis unitarias simples. Como se utiliza en la presente, una "dosis unitaria" es una cantidad discreta de la composición farmacéutica que comprende una cantidad predeterminada del ingrediente activo. La cantidad del ingrediente activo es en general igual a la dosis del ingrediente activo que podría ser administrada a un sujeto, o una fracción conveniente de tal dosis tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de tal dosis . Las cantidades relativas del ingrediente activo, el portador farmacéuticamente aceptable y cualesquiera ingredientes adicionales en una composición farmacéutica de la invención, variarán de la identidad, el tamaño y la condición del sujeto tratado y además dependiendo de la ruta mediante la cual vaya a ser administrada la composición. A manera de ejemplo, la composición puede comprender entre 0.1% y 100% (p/p) del ingrediente activo. Además del ingrediente activo, una composición farmacéutica de la invención puede comprender además uno más agentes farmacéuticamente activos, adicionales. Los agentes adicionales particularmente contemplados incluyen anti-émeticos y depuradores tales como depuradores de cianuro y de cianato. Las formulaciones de liberación controlada o sostenida de una composición farmacéutica de la invención pueden ser elaboradas utilizando tecnología convencional. Una formulación de una composición farmacéutica de la invención, adecuada para la administración oral puede ser preparada, envasada o vendida en la forma de una unidad de dosis sólida, discreta incluyendo, pero no limitada a, una tableta, una cápsula de gelatina dura o suave, un saco, un trocisco o una pastilla, conteniendo cada una de ellas una cantidad predeterminada del ingrediente activo. Otras formulaciones adecuadas para la administración oral incluyen, pero no están limitadas a, una formulación en polvo o granular, una suspensión aceitosa o acuosa, una solución aceitosa o acuosa, o una emulsión. Como se utiliza en la presente, un líquido "aceitoso" es uno que comprende una molécula líquida que contiene carbono, y el cual muestra un carácter menos polar que el agua . Una tableta que comprende el ingrediente activo puede, por ejemplo, ser elaborada mediante la compresión o moldeo del ingrediente activo, opcionalmente con uno o más ingredientes adicionales. Las tabletas comprimidas pueden ser preparadas mediante la compresión, en un dispositivo adecuado, del ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como un polvo o preparación granular, opcionalmente mezclada con uno o más de un aglutinante, un lubricante, un excipiente, un agente activo de superficie, y un agente dispersante. Las tabletas moldeadas pueden ser elaboradas mediante el moldeo, en un dispositivo adecuado, una mezcla del ingrediente activo, un portador farmacéuticamente aceptable, y al menos suficiente líquido para humedecer la mezcla. Los excipientes farmacéuticamente aceptables utilizados en la fabricación de tabletas incluyen, pero no están limitados a, diluyentes inertes, agentes de granulación y de desintegración, agentes aglutinantes y agentes lubricantes. Los agentes dispersantes conocidos incluyen, pero no están limitados a almidón de papa y glicolato de almidón de sodio. Los agentes activos de superficie conocidos incluyen, pero no están limitados a, laurilsulfato de sodio. Los ingredientes activos incluyen, pero no están limitados a, carbonato de sodio, carbonato de calcio, lactosa, celulosa microcristalina, fosfato de calcio, fosfato ácido de calcio, y fosfato de sodio. Los agentes de granulación y de desintegración conocidos incluyen, pero no están limitados a, almidón de maíz y ácido algínico. Los agentes aglutinantes conocidos incluyen, pero no están limitados a, gelatina, acacia, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona e hidroxipropilmetilcelulosa . Los agentes lubricantes conocidos incluyen, pero no están limitados a, estearato de magnesio, ácido esteárico, sílice y talco. Las tabletas pueden ser no recubiertas o éstas pueden ser recubiertas utilizando métodos conocidos para lograr la desintegración retardada en el tracto gastrointestinal de un sujeto, con lo cual se proporciona la liberación y la absorción sostenida del ingrediente activo. A manera de ejemplo, un material tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo puede ser utilizado para recubrir tabletas. Además, a manera de ejemplo, las tabletas pueden ser recubiertas utilizando los métodos descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,256,108; 4,160,452; y 4,265,874 para formar tabletas de liberación osmóticamente controlada. Las tabletas pueden además comprender un agente endulzante, un agente saborizante, un agente colorante, un conservador, o alguna combinación de éstos, con el fin de proporcionar una preparación farmacéuticamente elegante y grata al paladar. Las cápsulas duras que comprenden el ingrediente activo pueden ser elaboradas utilizando una composición fisiológicamente degradable tal como gelatina. Tales cápsulas duras comprenden el ingrediente activo, y pueden comprender además ingredientes adicionales que incluyen, por ejemplo, un diluyente sólido inerte tal como carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín. Las cápsulas de gelatina suave que comprenden el ingrediente activo pueden ser elaboradas utilizando una composición fisiológicamente degradable, tal como gelatina.

Tales cápsulas suaves comprenden el ingrediente activo, que puede ser mezclado con agua o un medio aceitoso, tal como aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. Las formulaciones líquidas de una composición farmacéutica de la invención, que son adecuadas para la administración oral, pueden ser preparadas, envasadas y vendidas ya sea en forma de líquido o en la forma de un producto anhidro destinado para la reconstitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Las suspensiones líquidas pueden ser preparadas utilizando métodos convencionales para lograr la suspensión del ingrediente activo en un vehículo acuoso o aceitoso. Los vehículos acuosos incluyen, por ejemplo, agua y solución salina isotónica. Los vehículos aceitosos incluyen, por ejemplo, aceite de almendras, ésteres aceitosos, alcohol etílico, aceites vegetales tales como aceite de cacahuate, de oliva de ajonjolí o de coco, aceites vegetales fraccionados, y aceites minerales tales como parafina líquida. Las suspensiones líquidas pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, agentes suspensores, agentes dispersantes o humectantes, agentes emulsificantes, demulcentes, conservadores, amortiguadores, sales, saborizantes , agentes colorantes y agentes endulzantes. Las suspensiones aceitosas pueden comprender además un agente espesante . Los agentes espesantes conocidos incluyen, pero no están limitados a, jarabe de sorbitol, grasas comestibles hidrogenadas, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, goma de acacia y derivados de celulosa tales como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, e hidroxipropilmetilcelulosa . Los agentes dispersantes o humectantes conocidos incluyen, pero no están limitados a, fosfatidas de origen natural tales como lecitina, productos de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, con un alcohol alifático de cadena larga, con un éster parcial derivado de un ácido graso y un hexitol, o con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, estearato de polioxietileno, heptadecaetilenoxicetanol , monooleato de polioxietilensorbitol , y monooleato de polioxietilensorbitan, respectivamente) . Los agentes emulsificantes conocidos incluyen, pero no están limitados a, lecitina y acacia. Los conservadores conocidos incluyen, pero no están limitados a, metil-, etil-, o n-propi1 -parahidroxibenzoatos , ácido ascórbico y ácido sórbico. Los agentes endulzantes conocidos incluyen, por ejemplo, glicerol, propilenglicol , sorbitol, sucrosa y sacarina. Los agentes espesantes conocidos para las suspensiones aceitosas incluyen, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura y alcohol cetílico. Las soluciones líquidas del ingrediente activo en solventes acuosos o aceitosos pueden ser preparadas sustancialmente de la misma manera que las suspensiones líquidas, siendo la diferencia principal que el ingrediente activo se disuelve, en vez de suspenderse en el solvente. Las soluciones líquidas de la composición farmacéutica de la invención pueden comprender cada uno de los componentes descritos con respecto a las suspensiones líquidas, entendiéndose que los agentes suspensores no necesariamente ayudarán a la disolución del ingrediente activo en el solvente. Los solventes acuosos incluyen, por ejemplo, agua y solución salina isotónica. Los solventes aceitosos incluyen, por ejemplo, aceite de almendras, esteres aceitosos, alcohol etílico, aceites vegetales tales como aceite de cacahuate, de oliva, de ajonjolí o de coco, aceites vegetales fraccionados, y aceites minerales tales como parafina líquida. Las formulaciones en polvo y granulares de una preparación farmacéutica de la invención, pueden ser preparadas utilizando métodos conocidos. Tales formulaciones pueden ser administradas directamente a un sujeto, utilizadas, por ejemplo, para formar tabletas, para rellenar cápsulas, o para preparar una suspensión o solución acuosa o aceitosa, mediante la adición de un vehículo acuoso o aceitoso a ésta. Cada una de estas formulaciones puede comprender adicionalmente uno o más de un agente dispersante o humectante, un agente suspensor, y un conservador. Se pueden incluir también en esas formulaciones excipientes adicionales, tales como rellenadores y agentes endulzantes, saborizantes o colorantes . Una composición farmacéutica de la invención puede también ser preparada, envasada o vendida en la forma de una emulsión aceite en agua o una emulsión agua en aceite. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal tal como aceite de oliva o de cacahuate, un aceite mineral tal como parafina líquida o una combinación de éstos. Tales composiciones pueden comprender además uno o más agentes emulsificantes tales como las gomas de origen natural tales como la goma de acacia o goma de tragacanto, fosfatidas de origen natural ales como fosfatida de soya o de lecitina, esteres o ésteres parciales derivados de combinaciones de ácidos grasos y anhídridos de hexitol tales como monooleato de sorbitan, productos de condensación de tales ésteres parciales con óxido de etileno tal como el monooleato de polioxietilensorbitan. Estas emulsiones pueden también contener ingredientes adicionales que incluyen, por ejemplo, agentes endulzantes y saborizantes. Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida en una formulación adecuada para la administración rectal. Tal composición puede estar en la forma de, por ejemplo, un supositorio, una preparación de enema de retención, y una solución para la irrigación rectal o colónica. Las formulaciones para supositorio pueden ser elaboradas mediante la combinación del ingrediente activo con un excipiente farmacéuticamente aceptable, no irritante, el cual es sólido a temperatura ambiente ordinaria (por ejemplo, aproximadamente 20 °C) y que es líquido a la temperatura rectal del sujeto (por ejemplo, aproximadamente 37 °C en un humano saludable) . Los excipientes farmacéuticamente aceptables, adecuados incluyen, pero no están limitados a, manteca de cacao, polietilenglicoles y diversos glicéridos. Las formulaciones para supositorio pueden comprender además diversos ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, antioxidantes y conservadores. Las preparaciones o soluciones de enema de retención para la irrigación rectal o colónica pueden ser elaborados mediante la combinación del ingrediente activo con un portador líquido farmacéuticamente aceptable. Como es bien conocido en la técnica, las preparaciones de enema pueden ser administradas utilizando, y pueden ser envasadas dentro de, un dispositivo de administración adaptado a la anatomía rectal del sujeto. Las preparaciones de enema pueden comprender además diversos ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, antioxidantes y conservadores .

Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida en una formulación adecuada para la administración vaginal . Tal composición puede estar en una forma de, por ejemplo, un supositorio, un material impregnado o recubierto, vaginalmente insertable, tal como un tampón, una preparación de ducha, o gel o crema o una solución para la irrigación vaginal. Los métodos para la impregnación o recubrimiento de un material con una composición química, son conocidos en la técnica, e incluyen, pero no están limitados a, los métodos de deposición o enlace de una composición química sobre una superficie, los métodos de incorporación de una composición química en la estructura de un material durante la síntesis del material (por ejemplo, tal como con un material fisiológicamente degradable) , y los métodos de absorción de una solución o suspensión acuosa o aceitosa en un material absorbente, con o sin secado subsiguiente. Las preparaciones o soluciones de ducha para la irrigación vaginal pueden ser elaboradas mediante la combinación del ingrediente activo con un portador líquido farmacéuticamente aceptable. Como es bien conocido en la técnica, las preparaciones de ducha pueden ser administradas utilizando, y pueden ser envasadas dentro de, un dispositivo de distribución adaptado a la anatomía vaginal del sujeto. Las preparaciones de ducha pueden comprender además diversos ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, antioxidantes, antibióticos, agentes antifúngicos y conservadores. Como se utiliza en la presente "administración parenteral" de una composición farmacéutica, incluye cualquier ruta de administración caracterizada por el rompimiento físico de un tejido de un sujeto, y la administración de la composición farmacéutica a través de la ruptura en el tejido. La administración parenteral incluye de este modo, pero no está limitada a, la administración de una composición farmacéutica mediante inyección de la composición, por aplicación de la composición a través de una incisión quirúrgica, por aplicación de la composición a través de una herida no quirúrgica que penetra el tejido, y similares. En particular, la administración parenteral es contemplada para incluir, pero no está limitada a, la inyección subcutánea, intraperitoneal , intravenosa, intramuscular, intracisternal , y las técnicas de infusión de diálisis renal . Las formulaciones de una composición farmacéutica adecuada para la administración parenteral comprende el ingrediente activo combinado con un portador farmacéuticamente aceptable, tal como agua estéril o solución salina isotónica estéril. Tales formulaciones pueden ser preparadas, envasadas o vendidas en una forma adecuada para la administración en bolo o para la administración continua. Las formulaciones inyectables pueden ser preparadas, envasadas o vendidas en una forma de dosis unitaria, tal como en ampolletas o en recipientes de dosis múltiples que contienen un conservador. Las formulaciones para la administración parenteral incluyen, pero no están limitadas a, suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, pastas, y formulaciones implantables de liberación sostenida o biodegradables . Tales formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, agentes suspensores, estabilizadores o dispersantes. En una modalidad de una formulación para la administración parenteral, el ingrediente activo es proporcionado en forma anhidra (por ejemplo polvo o granular) para la reconstitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos) antes de la administración parenteral de la composición reconstituida. Las composiciones farmacéuticas pueden ser preparadas, envasadas o vendidas en la forma de una suspensión o solución acuosa o aceitosa, inyectable, estéril. Esta suspensión o solución puede ser formulada de acuerdo a la técnica conocida, y puede comprender, además del ingrediente activo, ingredientes adicionales tales como los agentes dispersantes, agentes humectantes, o agentes suspensores descritos en la presente. Tales formulaciones inyectables estériles pueden ser preparadas utilizando un diluyente o solvente parenteralmente aceptable, no tóxico, tal como agua o 1,3-butanodiol, por ejemplo. Otros diluyentes y solventes aceptables incluyen, pero no están limitados a, solución de Ringer, solución isotónica de cloruro de sodio, y aceites fijos tales como mono- o di-glicéridos sintéticos. Otras formulaciones parenteralmente administrables que son útiles incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina, en una preparación liposomal, o como un componente de un sistema de polímero biodegradable . Las composiciones para la liberación sostenida o la implantación pueden comprender materiales poliméricos o hidrofóbicos farmacéuticamente aceptables, tales como una emulsión, una resina de intercambio iónico, un polímero escasamente soluble, o una sal escasamente soluble. Las formulaciones adecuadas para la administración tópica incluyen, pero no están limitadas a, preparaciones líquidas o semilíquidas tales como linimentos, lociones, emulsiones aceite en agua o agua en aceite tales como cremas, ungüentos o pastas, y soluciones o suspensiones. Las formulaciones tópicamente administrables pueden, por ejemplo, comprender de aproximadamente 1% a aproximadamente 10% (p/p) del ingrediente activo, aunque la concentración del ingrediente activo puede ser tan alta como el límite de solubilidad del ingrediente activo en el solvente. Las formulaciones para la administración tópica pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente. Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida en una formulación adecuada para la administración pulmonar vía la cavidad bucal. Tal formulación puede comprender partículas secas que comprenden el ingrediente activo, y las cuales tienen un diámetro en el intervalo de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 7 nanómetros, y preferentemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 6 nanómetros. Tales composiciones están convenientemente en la forma de polvos secos para la administración utilizando un dispositivo que comprende un depósito de polvo seco al cual puede ser dirigida una corriente de propelente para surtir el polvo o utilizar un recipiente surtidor de solvente/polvo de autopropulsión, tal como un dispositivo que comprende el ingrediente activo disuelto o suspendido en un propelente de bajo punto de ebullición, en un recipiente sellado. Preferentemente, tales polvos comprenden partículas en donde al menos 98% de las partículas en peso tienen un diámetro mayor de 0 . 5 nanómetros, y al menos 95% de las partículas en número tienen un diámetro menor de 7 nanómetros. Más preferentemente, al menos 95% de las partículas en peso tienen un diámetro mayor de 1 nanómetro, y al menos 90% de las partículas en número tienen un diámetro menor de 6 nanómetros. Las composiciones de polvo seco incluyen preferentemente un diluyente de polvo fino sólido, tal como azúcar y son convenientemente proporcionadas en una forma de dosis unitaria. Los propelentes de bajo punto de ebullición incluyen en general propelentes líquidos que tienen un punto de ebullición por debajo de 18°C (65°F) a presión atmosférica. En general, el propelente puede constituir 50 a 99.9% (p/p) de la composición, y el ingrediente activo puede constituir de 0.1 a 20% (p/p) de la composición. El propelente puede comprender además ingredientes adicionales tales como un surfactante líquido no iónico o sólido aniónico, o un diluyente sólido (que tiene preferentemente un tamaño de partícula del mismo orden que las partículas que comprenden el ingrediente activo) . Las composiciones f rmacéuticas de la invención, formuladas para administración pulmonar, pueden también proporcionar el ingrediente activo en la forma de gotitas de una solución o suspensión. Tales formulaciones pueden ser preparadas, envasadas o vendidas como soluciones o suspensiones alcohólicas diluidas o acuosas, opcionalmente estériles, que contienen en ingrediente activo, y pueden ser convenientemente administradas utilizando cualquier dispositivo de nebulización o atomización. Tales formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero no están limitados a, un agente saborizante tal como sacarina sódica, un aceite volátil, un agente amortiguador, un agente activo de superficie, o un conservador tal como metilhidroxibenzoato . Las gotitas proporcionadas por esta ruta de administración tienen preferentemente un diámetro promedio en el intervalo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 200 nanómetros . Las formulaciones descritas en la presente como útiles para la administración pulmonar, son también útiles para la administración intranasal de una composición farmacéutica de la invención. Otra formulación más, adecuada para la administración intranasal es un polvo grueso que comprende el ingrediente activo y que tiene un tamaño de partícula promedio de aproximadamente 0.2 a 500 micrómetros. Tal formulación es administrada de una manera en la cual una bocanada es tomada por ejemplo mediante inhalación rápida a través del pasaje nasal desde un recipiente del polvo, mantenido cerca de las narinas . Las formulaciones adecuadas para la administración nasal pueden, por ejemplo, comprender de aproximadamente tan poco como 0.1% (p/p) y tanto como 100% (p/p) del ingrediente activo, y pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente. Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida en una formulación adecuada para la administración bucal. Tales formulaciones pueden, por ejemplo, estar en la forma de tabletas o pastillas elaboradas utilizando métodos convencionales, y pueden, por ejemplo, contener 0.1 a 20% (p/p) del ingrediente activo, comprendiendo el resto una composición oralmente disolvible o degradable y, opcionalmente , uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente. Alternativamente, las formulaciones adecuadas para la administración bucal pueden comprender un polvo o una solución o suspensión aerosolizada o atomizada que comprende el ingrediente activo. Tales formulaciones en polvo, aerosolizadas o atomizadas, cuando son surtidas, tienen preferentemente un tamaño de partícula o de gotita, promedio, en el intervalo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 200 nanómetros, y pueden comprender además uno o más de los ingredientes adicionales descritos en la presente . Una composición farmacéutica de la invención puede ser preparada, envasada o vendida en una formulación adecuada para la administración oftálmica. Tales formulaciones pueden, por ejemplo, estar en la forma de gotas oftálmicas que incluyen, por ejemplo, una solución al 0.1-1.0% (p/p) de la suspensión del ingrediente activo en un portador líquido acuoso o aceitoso. Tales gotas pueden comprender además agentes amortiguadores, sales o uno o más de los otros ingredientes adicionales descritos en la presente. Otras formulaciones oftálmicamente administrables que son útiles, incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina o en una preparación liposomal. Como se utiliza en la presente "ingredientes adicionales" incluyen, pero no están limitados a, uno o más de los siguientes: excipientes; agentes activos de superficie; agentes dispersantes; diluyentes inertes; agentes de granulación y de desintegración; agentes aglutinantes; agentes lubricantes; agentes endulzantes; agentes saborizantes ; agentes colorantes; conservadores; composiciones fisiológicamente degradables tales como gelatina; vehículos y solventes acuosos; vehículo y solventes aceitosos; agentes suspensores; agentes dispersantes o humectantes; agentes emulsificantes , demulcentes; amortiguadores; sales; agentes espesantes; rellenadores ; agentes emulsificantes; antioxidantes; antibióticos; agentes antimicóticos ; agentes estabilizadores; y materiales poliméricos o hidrofóbicos farmacéuticamente aceptables. Otros "ingredientes adicionales" que pueden ser incluidos en las composiciones farmacéuticas de la invención, son conocidos en la técnica y descritos, por ejemplo en Genaro, ed. , 1985, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. , Easton PA, que se incorpora en la presente por referencia.

Típicamente, las dosis del compuesto de la invención que pueden ser administradas a un animal, preferentemente un humano, están en una cantidad en el intervalo desde aproximadamente 0.01 mg hasta aproximadamente 100 g por kilogramo de peso corporal del animal. Mientras que la dosis precisa administrada variará dependiendo de cualquier número de factores, incluyendo pero no limitados a, el tipo de animal y el tipo de enfermedad que se trate, la edad del animal y la ruta de administración. Preferentemente, la dosis del compuesto variará de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal del animal. Más preferentemente, la dosis variará de aproximadamente 1 µg hasta aproximadamente 1 g por kilogramo de peso corporal del animal . El compuesto puede ser administrado a un animal tan frecuentemente como varias veces al día, o éste puede ser administrado menos frecuentemente, tanto como una vez al día, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez al mes o incluso menos frecuentemente, tal como una vez cada varios meses o incluso una vez al año o menos. La frecuencia de la dosis será fácilmente aparente para la persona de experiencia en la técnica, y dependerá de cualquier número de factores tales como, pero no limitados a, el tipo y severidad de la enfermedad que se trate, el tipo y la edad del animal .

E. Métodos de identificación de un compuesto útil La invención abarca un método para identificar un compuesto o intervención que trate una enfermedad inflamatoria. Una persona de experiencia en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la evaluación de la expresión y/o actividad de una molécula similar a la quitinasa puede ser realizada mediante la evaluación, entre otras cosas, de los niveles de una molécula similar a la quitinasa o el ARNm que la codifica en una célula o tejido, y similares, y luego el nivel puede ser comparado al nivel en una célula o tejido de otro modo idéntica a ia cual no se administra el compuesto. Alternativamente, el nivel de molécula similar a la quitinasa o el ARNm que la codifican en una célula o tejido puesta en contacto con un compuesto, puede ser comparado con el nivel de la molécula similar a la quitinasa o su ARNm en la célula o tejido, antes de la administración del compuesto. Una persona de experiencia en la técnica podría comprender que tal compuesto puede ser un agente terapéutico potencialmente útil para tratar y/o prevenir una enfermedad inflamatoria, y para tratar y prevenir una enfermedad inflamatoria mediada por IL-13 y/o para tratar una enfermedad asociada con y/o mediada por una respuesta inflamatoria de Th2. Los expertos en la técnica podrían apreciar además que los métodos para identificar un compuesto útil para inhibir una molécula similar a la quitinasa incluyen los métodos en donde un compuesto es administrado a una célula, tejido o animal. Es decir, el experto en la técnica, cuando está armado con la presente descripción, podría reconocer que las enseñanzas de la presente pueden ser utilizadas para identificar un compuesto útil para inhibir una molécula similar a la quitinasa en una célula o tejido que expresa una molécula similar a la quitinasa. Tales células y tejidos son bien conocidos en la técnica, y pueden incluir células y tejidos derivados de un animal transgénico no humano que tiene expresión alterada de IL-13, IL-4 y/o una molécula similar a la quitinasa, o un animal transgénico que comprende una enfermedad inflamatoria, y/o una célula o tejido derivados de éste . Adicionalmente , una célula o tejido que comprende la expresión de una molécula similar a la quitinasa puede ser puesta en contacto con un compuesto y se puede evaluar el nivel de la molécula similar a. la quitinasa, y se compara al nivel de la molécula similar a la quitinasa en la célula y/o tejido antes de la administración del compuesto. Además, el nivel de la molécula similar a la quitinasa puede ser comparado al nivel de la molécula similar a la quitinasa en una célula o tejido de otro modo idénticos no puestos en contacto con el compuesto. Una persona de experiencia en la técnica podría apreciar, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la célula o tejido puede expresar la molécula similar a la quitinasa, endógena, pero la invención abarca además una célula o tejido que ha sido modificado para expresar una molécula similar a la quitinasa de otro modo no expresada en el tejido, por ejemplo un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa de interés puede ser introducida y expresada en la célula o tejido donde ésta no es típicamente expresada, o es expresada a un nivel diferente que después de que es introducido el ácido nucleico dentro de la célula o el tejido. De este modo, la invención incluye una amplia gama de ensayos, que comprende una célula, tejido o un animal, en donde el nivel de una molécula similar a la quitinasa puede ser evaluado en presencia o ausencia de un compuesto. En consecuencia, el experto en la técnica podría ser capaz de identificar un compuesto utilizando los métodos descritos en la presente y el cultivo de células y las técnicas de propagación celular bien conocidas en la técnica para evaluar la habilidad de un compuesto para afectar el nivel de una molécula similar a la quitinasa. Por lo tanto, la presente invención abarca además un método para identificar un compuesto útil para inhibir una molécula similar a la quitinasa en una célula o tejido, así como en un animal . Una persona de experiencia en la técnica podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, que la invención incluye un método para identificar un compuesto para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero. Como podría ser comprendido por una persona de experiencia en la técnica, dotada con las enseñanzas proporcionadas en la presente, el método abarca la identificación de un compuesto que trata una enfermedad inflamatoria en una célula o tejido. El método comprende la identificación de una sustancia o compuesto que inhibe la expresión y/o actividad de una molécula similar a la quitinasa en un mamífero (incluyendo en una célula o tejido del mismo) , preferentemente en el tracto respiratorio. Esto es debido a que, como se discutió en otro sitio en la presente, los datos demuestran que la inhibición de la expresión o la actividad de una molécula similar a la quitinasa proporciona un beneficio terapéutico con lo cual se trata o se previene una enfermedad inflamatoria mediada por o asociada con la expresión o actividad incrementada de una molécula similar a la quitinasa. Esto es debido a que la presente invención describe, por primera vez, que el nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa está asociada con, o media, tal enfermedad, y que la inhibición de la molécula similar a la quitinasa (por ejemplo, YM, AMCasa, y similares) , utilizando un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa (por ejemplo, alosamidina, un anticuerpo específico para la molécula similar a la quitinasa, tal como, pero no limitada a, un anticuerpo que se enlaza específicamente con AMCasa) previene y/o trata la enfermedad.

De este modo, la persona experta, una vez armada con las enseñanzas de la invención, podría apreciar que un compuesto que inhibe la molécula similar a la quitinasa es un tratamiento terapéutico o profiláctico, potencial poderoso de la enfermedad inflamatoria, tal que la identificación de tal compuesto identifica un agente terapéutico potencial para tal enfermedad. El método comprende administrarle a un mamífero afectado con una enfermedad inflamatoria, un compuesto, y comparando el nivel de una molécula similar a la quitinasa en el mamífero antes y después de la administración del compuesto. La persona experta podría comprender, con base en la descripción proporcionada en la presente, que un menor nivel de molécula similar a la quitinasa o el ARNm que lo codifica en el mamífero después de la administración del compuesto, en comparación con el nivel de una molécula similar a la quitinasa o su ARNm antes de la administración del compuesto, indica que el compuesto es útil para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero. Esto es debido a que, como se estableció previamente en la presente, se ha descubierto que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa en un animal trata o previene una enfermedad asociada con la expresión y/o actividad incrementada de la molécula similar a la quitinasa, por ejemplo una enfermedad inflamatoria con remodelación tisular mejorada y fibrosis. El experto en la técnica podría también apreciar, en vista de la descripción proporcionada en la presente, que los ensayos para determinar el nivel de una molécula similar a la quitinasa, en un mamífero, incluyendo una célula o tejido del mismo, incluyen aquellos bien conocidos en la técnica, o aquellos que serán desarrollados en el futuro, todos los cuales pueden ser utilizados para evaluar el nivel de una molécula similar a la quitinasa en un mamífero (o célula o tejido del mismo) antes y después de la administración del compuesto. El experto en la técnica podría apreciar además que los niveles de una molécula similar a la quitinasa, como se describe en otro sitio en la presente, incluyen los niveles de la actividad de la molécula similar a la quitinasa y los niveles de expresión de la molécula similar a la quitinasa. Además, la invención abarca un compuesto identificado utilizando este método. La invención incluye además los métodos adicionales para la identificación de un compuesto útil para inhibir una molécula similar a la quitinasa y con esto una enfermedad inflamatoria en un mamífero. Más específicamente, el método comprende la evaluación del nivel de expresión, producción o actividad de una molécula similar a la quitinasa en un mamífero (o una célula o tejido del mismo) al cual se administra un compuesto, en comparación a un mamífero idéntico (o célula o tejido del mismo) al cual no se administra el compuesto. Adicionalmente , el método comprende comparar el nivel de una molécula similar a la quitinasa en el mismo mamífero, o célula o tejido del mismo, antes y después de la administración de un compuesto de interés. Un menor nivel de una expresión, producción o actividad de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero administrado con el compuesto, cuando se compara a un mamífero idéntico no administrado con el compuesto, o al mismo mamífero antes de la administración del compuesto, es una indicación de que el compuesto es útil para inhibir una molécula similar a la quitinasa que es por lo tanto un agente terapéutico potencialmente útil para tratar y/o prevenir la enfermedad inflamatoria en un mamífero. Esto es debido a que la presente invención describe, por primera vez, que una molécula similar a la quitinasa juega un papel claro en la patología de las enfermedades inflamatorias, y que la inhibición de una molécula similar a la quitinasa trata y/o previene la enfermedad en un modelo animal reconocido en la técnica, de la enfermedad inflamatoria. Claramente, como es demostrado en otro sitio en la presente, un compuesto que inhibe las moléculas similares a la quitinasa es un compuesto terapéutico potencialmente importante, útil para el tratamiento y prevención de la enfermedad inflamatoria, como es demostrado por los datos descritos en la presente. Como se detalla en otro sitio aguí, la patología de muchas enfermedades inflamatorias es mediada por la expresión de IL-13 en una célula o tejido afectado. Además, como podría ser apreciado por la persona de experiencia en la técnica, equipada con la presente descripción, la patología de las enfermedades inflamatorias mediadas por IL-13 es debida, en parte, a la expresión de las moléculas similar a la quitinasa en una célula, órgano o sistema afectado. Los métodos detallados anteriormente incluyen los mamíferos en los cuales pueden ser fácilmente evaluados los niveles de una molécula similar a la quitinasa utilizando los métodos descritos en la presente. Con esto, la presente invención incluye los mamíferos útiles para identificar un compuesto que puede ser utilizado para el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias. Más particularmente, la invención incluye los animales transgénicos que expresan ya sea constitutivamente o de manera inducible IL-13 en el tracto respiratorio. Con base en la descripción proporcionada en la presente, tales mamíferos transgénicos, cuando son administrados con un compuesto, pueden ser fácilmente evaluados para los niveles de una molécula similar a la quitinasa ya sea que el ensayo sea para la expresión de la molécula similar a la quitinasa o la actividad de la molécula similar a la quitinasa. Y tales métodos para identificar un compuesto útil para tratar y/o prevenir una enfermedad inflamatoria con relación al uso de mamíferos no humanos transgénicos , para evaluar si el compuesto inhibe una molécula similar a la quitinasa, son abarcados en la presente invención. II . Equipos La invención abarca diversos equipos relacionados a la inhibición de las moléculas similar a la quitinasa en un mamífero, que son útiles, debido a que, como se describe en otro sitio en la presente, la inhibición de las moléculas similar a la quitinasa proporciona un método de tratamiento o prevención de la enfermedad inflamatoria en un mamífero. De este modo, en un aspecto, la invención incluye un equipo para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero. El equipo comprende una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa. El equipo comprende además un aplicador y un material de instrucciones para el uso del mismo para ser utilizado de acuerdo con las enseñanzas proporcionadas en la presente. La invención incluye diversos equipos que comprenden un compuesto, tal como un anticuerpo que se enlaza específicamente a una molécula similar a la quitinasa, así como un ácido nucleico que codifica para tal anticuerpo, un ácido nucleico complementario para un ácido nucleico que codifica para la molécula similar a la quitinasa pero en una orientación antisentido con respecto a la transcripción, una ribozima capaz de escindir un ARN de la molécula similar a la quitinasa, de una sola hebra, un aplicador, y un material de instrucciones que describen el uso del compuesto para realizar los métodos de la invención. Aunque se describen más adelante los equipos ejemplares, los contenidos de otros equipos útiles serán aparentes para una persona de experiencia en la técnica, a la luz de la presente descripción. Cada uno de estos equipos es incluido dentro de la invención. En un aspecto, la invención incluye los equipos para tratar o prevenir una enfermedad inflamatoria y una enfermedad inflamatoria mediada por IL-13. El equipo es utilizado de conformidad a los métodos descritos en la invención. En resumen, el equipo puede ser utilizado para poner en contacto un mamífero con un compuesto químico que inhibe las moléculas similar a la quitinasa, o un ácido nucleico complementario a un ácido nucleico que codifica para una molécula similar a la quitinasa, donde el ácido nucleico está en una orientación antísentido con respecto a la transcripción, para reducir la expresión de una molécula similar a la quitinasa, o con un anticuerpo que se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa o un ácido nucleico que codifica para el anticuerpo, en donde la expresión, cantidad o actividad disminuidas de una molécula similar a la quitinasa es mediadora de un efecto benéfico en el mamífero. Además, el equipo comprende un aplicador y un material de instrucciones para el uso del equipo. Estas instrucciones ponen de manifiesto simplemente los ejemplos proporcionados en la presente. El equipo incluye un portador farmacéuticamente aceptable. La composición es proporcionada en una cantidad apropiada como se describe en otro sitio en la presente. Además, la ruta de administración y la frecuencia de administración son como se describieron previamente en otro sitio en la presente. EJEMPLOS EXPERIMENTALES La invención es ahora descrita con referencia a los siguientes ejemplos. Estos ejemplos son proporcionados para fines de ilustración únicamente, y la invención no debe ser considerada como limitada a estos ejemplos, sino más bien debe ser considerada para abarcar cualesquiera y todas las variaciones que se vuelvan evidentes como resultado de la enseñanza proporcionada en la presente. Los materiales y métodos utilizados en los experimentos presentados en este Ejemplo son ahora descritos. Materiales y Métodos Generación de Ratones Transgénicos : Los ratones transgénicos que expresan constitutivamente la IL-13 específica de tejido pulmonar, fueron generados utilizando la construcción CC10-IL-13. La construcción que comprende el promotor de la proteína de 10 JcDa de células Clara (CC10) , ADNc de IL-13 murina, transactivador inverso de tetraciclina (rtTA) , y las secuencias intrónica y de poliadenilación de la hormona humana del crecimiento (hGH) se preparó como se describe en Zhu et al. (1999, J. Clin. Invest . 103: 779-788). La inyección pronuclear estándar fue realizada como se describe en Hogan et al. (1986, Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nueva York) . Los ratones resultantes fueron seleccionados y los animales fundadores fueron identificados utilizando transferencia de Southern y PC . Los ratones fundadores fueron cruzados sobre un antecedente C57BL/6 como se describe en Zhu et al. (1999, J. Clin. Invest. 103: 779-788). La generación del sistema de ratón transgénico externamente regulable, comprendió dos construcciones (Figura 5) . La primera construcción (CC10-rtTA-hGH) , como se describe en Zheng et al. (2000, J. Clin. Invest. 106: 1081-1093), comprendió el promotor CC10, el transactivador rtTA, y las secuencias intrónica de hGH, de localización nuclear y de poliadenilación. La proteína de fusión rtTA comprendió una proteína que se enlaza al operador tet mutado (tet-OBP) y el transactivador del herpesvirus VP-16 (Gossen et al., 1995, Science 268: 1766-1769). La segunda construcción (tet-O-CMV-IL-13) , comprendió un operador polimérico de tetraciclina (tet-O) , el promotor del citomegalovirus mínimo (CMV) , el ADNc de IL-13, y las señales intrónica, de poliadenilación y de localización nuclear de la hGH, se preparó como se describe en Ray et al . y Zheng et al. (1997, J. Clin. Invest . 100: 2501-2511 y 2000, J. Clin. Invest. 106: 1081-1093). Los ratones transgénicos fueron preparados mediante la microinyección simultánea de las construcciones dentro de los oocitos, como se describe en Hogan et al. (1986, Manipulating t e Mouse Embryo -. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nueva York) . Los ratones fueron seleccionados mediante PCR y la transferencia de Southern a partir del ADN de biopsia de la cola como se describe en Zhu et al. y Zheng et al. (1999, J. Clin. Invest., 103: 779-788). Cuatro ratones fundadores fueron luego cruzados con ratones C57BL/6 para crear ratones transgénicos con expresión inducible de IL-13 en los pulmones . Generación y administración de anticuerpos anti-AMCasa Los anticuerpos policlonales para la AMCasa fueron generados mediante la administración de conejos con un péptido derivado de la AMCasa (ADKADGLYPVADDRNAFWQ; SEQ ID NO: 13) utilizando métodos bien conocidos en la técnica y descritos en Harlow et al. (1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Nueva York) . Ratones de tipo silvestre fueron sensibilizados a OVA y retados con OVA en tres días sucesivos como se describe en otro sitio en la presente. Los ratones sensibilizados fueron administrados con 0.5 mi de anticuerpos anti-AMCasa o suero control intraperitonealmente cada tercer día, comenzando el día antes de la primera exposición al aerosol . Análisis Histológico: Los ratones fueron sacrificados mediante dislocación cervical y se realizó una esternotomía media. La parte derecha del corazón se prefundió con solución salina amortiguada con fosfato, libre de calcio y magnesio (PBS) . El corazón y los pulmones fueron retirados en bloque, y los pulmones fueron fijados a una presión de 25 cm con formalina al 10% amortiguada, neutra. Estos fueron luego fijados toda la noche en formalina al 10%, incrustados en parafina, seccionados a 5 µp?, y teñidos. Se utilizaron para el análisis histológico las tinciones de hematoxilina y eosina (H & E) , tricromo de Mallory, ácido peryódico-Schiff con diastasa (D-PAS) , azul alciano a pH 2.5, PAS/azul alciano, rojo Congo modificado y tinción de Papanicolau. Ensayos de hidroxiprolina El colágeno pulmonar total fue determinado mediante el análisis del contenido de hidroxiprolina. En resumen, los tumores fueron cosechados en los tiempos especificados y homogenizados en 2 mi de PBS , pH 7.4, con un Cortador de Tejido (PRO-Scientific , Monroe, CT) . Medio mililitro de cada muestra (ambos pulmones) fue luego digerido en 1 mi de HCl 6 N por 8 horas a 120 °C. Se agregaron a cinco microlitros de la muestra, amortiguador de citrato/acetato (5% de ácido cítrico, 7.24% de acetato de sodio, 3.4% de hidróxido de sodio y 1.2% de ácido acético glacial, pH 6.0) y 100 µ? de solución de cloramina T (282 mg de cloramina T, 2 mi de n-propanol, 2 mi de agua, y 16 mi de amortiguador de citrato/acetato) , y las muestras se dejaron a temperatura ambiente por 20 minutos. Enseguida, se agregaron a cada muestra 100 µ? de solución de Ehrlich (2.5 g de 4- (dimetilamino) benzaldehído ' (Aldrich, Milwaukee, WI) , 9.3 mi de n-propanol, y 3.9 mi de ácido perclórico al 70% (Eastman Kodak, Rochester, NY) , y las muestras se incubaron por 15 minutos a 65 °C. Las muestran se enfriaron por 10 minutos y se leyeron a 550 nm sobre un espectrofotómetro Beckman DU 640 (Fullerton, California) . Las concentraciones de hidroxiprolina (Sigma, Saint Louis, MO) de 0 a 10 µg/mlí fueron utilizadas para construir una curva estándar. (Keane et al. J. Immunol. 1999, 163: 5686-82). Lavado Bronquioalveolar (BAL) y Cuantificación de los Niveles de IL-13 : Los ratones fueron sacrificados mediante dislocación cervical y se realizó una esternotomía media. La traquea fue aislada mediante disección roma y se insertó una tubería de calibre pequeño y se aseguró en sus vías respiratorias. Tres volúmenes sucesivos de 0.75 mi de PBS con 0.1% de albúmina sérica bovina (BSA) se instilaron y se aspiraron suavemente y se combinaron. Cada muestra de BAL fue centrifugada y los sobrenadantes se almacenaron a -70 °C. Los números de células fueron evaluados con el hemocitómetro y se efectuaron cuentas diferenciales celulares sobre preparaciones de citocentrifugación . Los niveles de IL-13 fueron determinados mediante ELISA utilizando un equipo comercial de acuerdo a las instrucciones del fabricante (R&D Systems, Minneapolis, M ) . Ensayos de Evaluación Fisiológica de las Vías Respiratorias : Compañeros de carnada de la misma edad y género fueron evaluados mediante las técnicas de evaluación fisiológica invasora y no invasora. Las técnicas no invasoras fueron utilizadas para determinar la resistencia de las vías respiratorias de línea base, y el nivel de la hiper-respuesta de las vías respiratorias (AHR) en ratones concientes, no restringidos. Es decir, los animales fueron evaluados utilizando la pletismografía barométrica utilizando la pletismografla de cuerpo entero (Buxco Electronics Inc., Troy, Y) como se describe en Hamelmann et al. (1997, Am. J. Resp. Crit . Care Med. 156: 766-775) y Kline et al. (1998, J. Immunol . 160: 2555-2559) . En resumen, los ratones fueron colocados en pletismografos de cuerpo entero interconectados con computadoras utilizando diferentes transductores de presión.

Se realizaron mediciones del volumen máximo, el ritmo respiratorio y la pausa aumentada (Penh) · La resistencia de las vías respiratorias es expresada como Penh= [ (Te/0.3Tr) -1] X [2 Pef/3 Pif] , donde Penh=pausa aumentada, Te=tiempo expiratorio en segundos, Tr=tiempo de relajación en segundos, Pef=flujo expiratorio máximo (mi) , y Pif=flujo inspiratorio máximo (ml/segundo) . Se administraron dosis cada vez mayores de metacolina (Sigma Chemical Company, Saint Louis, MO) utilizando un nebulizador por 120 segundos, y se determinó la Pen en los siguientes cinco minutos . Se realizaron evaluaciones fisiológicas invasoras en ratones de la misma edad y sexo anestesiados (pentobarbital , 90 mg/kg) y tragueotomizados (angiocateter de calibre 18) . Los cambios en el volumen pulmonar en los ratones fueron medidos pletismográficamente mediante la determinación de la presión en una cámara de Plexiglass utilizando un transductor de presión de microinterruptor en linea. El flujo fue medido por la diferencia entre la señal del volumen y la presión transpulmonar , como se determina por un segundo transductor de presión de microinterruptor, colocado en linea con el pletismogr fo y el ventilador animal. La resistencia (con la resistencia debida al catéter de traqueostomía eliminado) fue medida utilizando el método de Amdur y Mead (1958, Am. J. Physiol. 192: 364-368). Las mediciones de línea base de la resistencia pulmonar fueron obtenidas mediante la ventilación del ratón a un volumen de 0.4 mi y a una velocidad de 150 respiraciones por minuto. Se administraron concentraciones cada vez mayores de metacolina en PBS mediante nebulización (20 respiraciones de un mi) utilizando un nebulizador Devilbiss Aerosonic (Modelo 5000, Devilbiss Health Care, Somerset , PA) que produce partículas de aproximadamente 1-3 µ?t? de diámetro. La resistencia pulmonar fue calculada precisamente 1 minuto después. Incrementos graduales en la dosis de metacolina fueron luego administrados hasta que la resistencia pulmonar, en comparación con el nivel de línea base se había al menos duplicado. Todos los animales recibieron incrementos triples en serie en metacolina desde 1 a 100 mg/ml. Los datos son expresados como el PC100 (reto provocador 100) , que es la dosis a la cual la resistencia pulmonar fue de 100% por arriba del nivel de la línea base, como se calculó mediante el análisis de regresión lineal . Evaluación del Volumen Pulmonar: La evaluación del volumen pulmonar fue realizada exactamente como se describe en Zheng et al. (2000, J. Clin. Invest . 106: 1081-1093). Administración de Doxiciclina: Todos los ratones transgénicos inducibles fueron mantenidos en agua normal hasta que se deseó la activación del transgen. Se administró doxiciclina (dox) en el agua para beber (0.5 mg/ml) . Las botellas de agua que contenían dox fueron envueltas en papel aluminio para prevenir la descomposición de dox inducida por la luz. Análisis de ARNm: Los niveles de ARNm fueron evaluados utilizando la transferencia de Northern y la reacción en cadena de polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR) . El AR celular total fue extraído del tejido del ratón utilizando TRIZ0LMR (Invitrogen, Carlsbad, CA) siguiendo las instrucciones del fabricante. Los cebadores específicos para Y (cebador delantero YM-1: TGGAATTGGTGCCCCTACAA; SEQ ID NO: 1, cebador inverso YM-1: AACTTGCACTGTGTATATTG; SEQ ID NO: 2, cebador delantero YM-2: AACCTCAGACATTCATT SEQ ID NO: 3, cebador inverso YM-2: TGGTCCTTCCAGTAGGTAATA; SEQ ID NO: 4, cebador delantero YM-3 : TATAAATCTCCATTTGACAC ; SEQ ID NO : 4, cebador inverso YM-3: CCTAATTTATTGTCCTTGAC; SEQ ID NO : 6) y AMCasa (cebador delantero de AMCasa : ATCTGCAGTGGACACACCTTCATCCTGA; SEQ ID NO : 7, cebador inverso de AMCasa: ATGAATTCAACAAGCCCTGCTTGACAAT; SEQ ID NO : 8) fueron utilizados en la RT-PCR para amplificar y detectar estos transcritos. La transcripción inversa y la PCR se realizaron utilizando el equipo de RT-PCR Access de Promega (Madison, WI) siguiendo las instrucciones del fabricante. Hibridación in situ de pulmones murinos : La hibridación in situ fue utilizada para localizar la expresión de YM y AMCasa en animales transgénicos . Los tejidos pulmonares fueron fijados en formaldehído y procesados en parafina. Se cortaron secciones de cinco micrómetros, se desparafinizaron, y se trataron con proteinasa K (20 9/t1, 37°C, 20 minutos) . Los tejidos fueron luego tratados con trietilnolamina 0.1 /0.25% de anhídrido acético (pH 8) por 10 minutos a temperatura ambiente y se enjuagaron en PBS. Las sondas en sentido y antisentido para YM (sonda antisentido YM: TCCTCGAGACCCAGGGTACTGC; SEQ ID NO : 9, sonda en sentido ?? : TATCTAGAGGATCTTCCTACCAGC ; SEQ ID NO : 10) y AMCasa (sonda antisentido de AMCasa: TCGCTCGAGAACAAGCCCTGCTTGACAAT; SEQ ID NO: 11, sonda en sentido de AMCasa: GCTCTAGATGGACACACCTTCATCCTGA; SEQ ID NO: 12 se generaron mediante la clonación de un fragmento de ADNc de la AMCasa de ratón o el ADNc de YM dentro del vector pBS II KS con las secuencias cebadoras T3 y T7 , flanqueando los sitios de clonación múltiples (Stratagene, La Jolla, CA) . Los cebadores oligonucleotídicos con los sitios de enzima de restricción Xbal y Xhol incorporados, fueron utilizados para amplificar los fragmentos de ADN a partir del ARN pulmonar total de un ratón transgénico (+) para IL-13. Los productos de RT-PCR (reacción en cadena de polxmerasa de transcriptasa inversa) fueron digeridos con Xbal y Xhol y clonados dentro del vector pBS II KS . Se generaron sondas de ARN en sentido y antisentido, se marcaron con un equipo de marcación de ARN de digoxigenina (Roche, Indianápolis , IN) , se desnaturalizaron a 65 °C, y se agregaron al amortiguador de hibridación comercialmente disponible (Abion, Austin TX) a 6 Y Ia mezcla de hibridación fue incubada con el tejido toda la noche a 52 °C. Los tejidos fueron luego cosechados dos veces con 4 x SSC por 5 minutos a temperatura ambiente, dos veces con 2 x SSC por 10 minutos a 37 °C, y se incubaron con ARNasa A (10 µ9/t?1) por 45 minutos a 37°C. Esto fue seguido por dos enjuagues de 10 minutos en 2 x SSC a temperatura ambiente, y tres lavados de 20 minutos en 0.2 x SSC a 50 °C. Las sondas fueron detectadas por incubación toda la noche con anticuerpos de oveja (Abs) para la digoxigenina marcadas con fosfatasa alcalina (Roche) , seguido por cloruro de 4-nitroazul-tetrazolio/5-bromo-4-cloro-3-indolfosfato, como se describe por el fabricante. Purificación y análisis de los cristales: Los cristales fueron purificados utilizando un procedimiento de lavado en gradiente de Ficoll como se describe por Guo et al . (2000, J. Biol . Chem. 275:8032-8037). En resumen, el fluido de BAL proveniente de los ratones transgenicos para IL-13 fue cargado, en una proporción de 1:5, sobre la parte superior de Histopaque-1119 con una densidad de 1.119 gramo/ml (Sigma, St . Louis, MO) y se centrífugo a 250 x g por 10 minutos a 4°C. El sobrenadante se retiró y el botón se resuspendió en PBS y se centrífugo dos veces más como se describe anteriormente. El botón resultante fue disuelto en el amortiguador de muestra de SDS-PAGE y se sometió a ebullición por 10 minutos antes de la electroforesis . La electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida fue realizada bajo condiciones reductoras utilizando geles en gradiente de 4 a 20% de Tris-glicina (Bio ad, Hercules, CA) . Las bandas de proteína fueron visualizadas por tinción con Azul de Coomassie, extirpadas con un escalpelo y sometidas a una digestión tríptica en gel antes del análisis espectrométrico de masa. La banda de proteína teñida con Azul de Coomassie de alrededor de 40 kDa, fue extirpada y lavada con carbonato ácido de amonio 50 mM, 50% de acetonitrilo por 30 minutos, seguido por carbonato ácido de amonio y 10 mM, lavado con 50% de acetonitrilo por 30 minutos adicionales. Después del lavado, las piezas de gel fueron secadas y rehidratadas con 0.1 µg de tripsina modificada (Promega, Madison, I) en 15 µ? de carbonato ácido de amonio 10 mM. La digestión fue realizada a 37°C por 24 horas. La espectrometría de masa de ionización por desorción de láser ayudado por matriz (MALDI-MS) se llevó a cabo sobre 1.0 µ? (<5%) de la digestión utilizando un espectrómetro de masa Micromass TofSpec SE (Micromass, Beverly, MA) en el modo de reflectrón. Antes de MALDI-MS, la muestra fue mezclada con 1.0 µ? de mezcla de matriz de ácido alfa-ciano-4-hidroxícinámico (4.5 mg/ml en 0.05% de ácido trifluoroacético, 50% de acetonitrilo) más 1 µ? de calibradores internos, y luego se transfirió por puntos sobre un nuevo objetivo de uso único. Las muestras fueron luego dejadas secar al aire a temperatura ambiente. Los calibradores internos utilizados fueron 50 femtomoles de bradicinina (M + H monoisotópico es 1060.57) y 125 fmoles de ACTH Clip 18-39 (M + H monoisotópico es 2465.20) . Un total de 92 masas peptídicas (monoisotópicas) fueron enviadas para la búsqueda en la base de datos de masa peptídica utilizando búsqueda de péptidos (Peptide Search, base de datos no redundante en el EMBL) y ProFound (en la Universidad Rockefeller para la base de datos no redundante en el NCBI) . Mediante el uso de cualquier algoritmo, 24 de las 92 masas peptídicas concordaron con la proteína 3 similar a la quitinasa 3, de ratón (también llamada precursor de ECFL y de YM-1) con una cobertura mínima de 59%. Una búsqueda subsiguiente utilizando masas peptídicas sin concordancia del primer paso, no produjeron ninguna concordancia significativa . Ensayos de Actividad de Quitinasa: El fluido de BAL, recolectado como se describió previamente, fue utilizado en un ensayo de actividad de quitinasa. La actividad de quitinasa en BAL fue evaluada utilizando un ensayo de fluorescencia. Se utilizó como un sustrato el ß-?-?,?'-diacetilquitobiósido de 4-metilumbeliferilo, fluorogénico . Los ensayos fueron realizados como sigue. Las muestras de BAL fueron incubadas con el sustrato a una concentración de 0.02 M en amortiguador de citrato/fosfato (0.1 /0.2M), pH 5.2. Después de 15 minutos a 37°C, la reacción se detuvo mediante la adición de 1 mi de amortiguador de glicina 0.3 M/ idróxido de sodio, pH 10.6 y el fluorescente de 4-metilumbeliferona fue determinado con un fluorímetro a excitación de 350 nm y emisión de 450 nm. Se generó una curva estándar utilizando 4-metilumbeliferona (Sigma) . El extracto de quitinasa proveniente de Serratia marcescens fue utilizado con un control positivo (Sigma) . Sensibilización con Alérgeno Ovoalbúmina (OVA) y Pruebas de Reto : La sensibilización con OVA y el reto fueron llevados a cabo utilizando modificaciones de los protocolos previamente descritos por Yang et al. (198, J. Exp . Med. 188: 1739-1750) . En resumen, ratones de tipo silvestre recibieron inyecciones intraperitoneales (i.p) que contenían 20 µg de OVA aviar (Sigma) formado en complejo con alumbre ( esorptar; Indergen, Nueva York, NY) . Este proceso fue repetido 5 días después. Después de 7 días adicionales, los animales recibieron el reto con aerosol con OVA (1% p/v) en PBS libre de endotoxina o los animales recibieron PBS libre de endotoxina, solo. El reto con aerosol fue llevado a cabo en una cámara de aerosol de plástico de 27 x 20 x 10 cm cerrada, en la cual se colocó un ratón por 40 minutos. El aerosol fue generado utilizando un nebulizador ultrasónico Omron NE-U07 (Omron Healthcare, Vernon Hills, IL) . Los ratones fueron sacrificados veinticuatro horas, cuarenta y ocho horas, y siete días después del reto con OVA. Inducción relativa de YM y AMCasa: Los arreglos de chip génico (GENE CHIP) murino de Affymetrix (Santa Clara, CA) que comprende 12,200 oligonucleótidos , fueron utilizados para analizar la expresión del gen inducido por IL-13 en el pulmón murino. Se analizaron los niveles de la expresión del gen en ratones control inducibles por dox, que expresan IL-13. Los niveles de expresión fueron estandarizados utilizando los genes de mantenimiento doméstico (por ejemplo actina, GAPDH, exocinasa y similares) , y se calculó un índice de estimulación al dividir la proporción objetivo en los animales transgénicos (+) entre la proporción objetivo en animales transgénicos (-). Estudios de expresión de los genes, similares, fueron realizados en ratones que expresan constitutivamente IL-13 y los controles. Los ensayos GENE CHIP fueron realizados como sigue. El ARN total fue aislado a partir de los pulmones de ratones transgénicos IL-13 y controles negativos de compañeros de carnada con el reactivo Trizol (Life Technologies, Gaithersburg, MD) . Para preparar las muestras para el análisis GENECHIP de Affymetrix, el ADNc fue generado a partir de 15 µg de ARN total mediante el uso de un cebador oligo-dT modificado y un cebador oligo del promotor de la ARN-polimerasa T7, 5', con el Sistema Superscript Choice para la síntesis de ADNc (Life Technologies) . Después de la extracción con etanol-cloroformo y precipitación con etanol, la mitad de la reacción de ADNc (0.5-1.0 µg) se utilizó como una plantilla para una reacción de transcripción in vitro con CTP y UTP biotinilados (BioArray High Yield kit, Enzo Bioc em, Farmingdale, NY) siguiendo el protocolo del fabricante. El ANRc resultante fue purificado sobre una columna de resina de afinidad (RNeasy, Qiagen Valencia CA) y se cuantificó mediante absorbancia de ultravioleta (UV) . Para cada reacción, 15 µg del ARNc biotinilado fueron aleatoriamente fragmentados a un tamaño promedio de 50 nucleótidos, incubándolos a 94 °C por 35 minutos en Tris-acetato 40 mM, pH 8.1, acetato de potasio 1,000 mM, y acetato de magnesio 30 mM. El ARNc fragmentado fue dividido en dos alícuotas que fueron cada una utilizada para la hibridación a un GENECHIP de Affymetrix Mull de acuerdo al protocolo del fabricante (Aff metrix, Santa Clara, CA) , con un grupo de datos por duplicado generados para todas las muestras. Cada arreglo objetivo fue lavado y explorado (Explorador de Arreglo de Genes Hewlett-Packard G2500A) . Los datos fueron analizados con el algoritmo del software de GENECHIP de Affymetrix para generar la "diferencia promedio" y/o el grado de diferencia después de que los valores fueron normalizados. Los valores obtenidos de los controles compañeros de carnada de C57BL/6 de tipo silvestre se utilizaron como línea base, y los valores provenientes de los ratones transgénicos de IL-13 fueron expresados como los incrementos porcentuales relativos. Ensayo de Protección de Ribonucleasa : Los ensayos de protección de ribonucleasa fueron realizados utilizando el equipo de plantilla mCK-1 (PharMingen San Diego, CA) . Los ensayos de protección de ribonucleasa fueron realizados como se describe en, por ejemplo Sambrook, et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold. Spring Harbor Laboratory, New York) y Ausube et al 1997 (Current Protocols in Molecular Biology, John ilew & Sons, New York) . Administración de Alosamidina : La alosamidina (Eli Lilly and Co., Greenfield, IN and Industrial Research Limited, Lower Hutt, Nueva Zelanda) fue administrada a ratones inducibles que sobreexpresan IL-13, y ratones tipo silvestre expuestos a OVA. A los ratones se les administró 0.1 mg/kg hasta 10 mg/kg de alosamidina i.p o control con vehículo (PBS) . Los animales fueron luego sacrificados y se realizaron el análisis del fluido de BAL, el análisis histológico y morfométrico y la evaluación del volumen pulmonar, como se describe más adelante en otro sitio en la presente. Los -resultados de los experimentos presentados en este Ejemplo son ahora descritos. Ratones Transgénicos que Expresan IL-13 Constitutivamente : Los ratones transgénicos (+) que expresan IL-13 constitutivamente mostraron altos niveles de IL-13 en el fluido de BAL (hasta 2.1 ng/ml) y el ARNrn de IL-13 detectable en los pulmones. El ARNrn de IL-13 no pudo ser detectado en la piel y otros órganos viscerales de los ratones transgénicos , indicando expresión especifica de IL-13 en los pulmones. Los ratones transgénicos (-) no demostraron niveles detectables de IL-13 o el ARNrn de IL-13 en el fluido de BAL o en los pulmones. El análisis histológico de los ratones transgénicos (+) demostró características múltiples similares al asma. Estas características incluyen respuestas inflamatorias ricas en eosinófilos, linfocitos y macrófagos alrededor de las vías respiratorias pequeñas y grandes y en el parénquima adjunto. Esta respuesta fúe más leve en animales jóvenes, o animales con niveles bajos de IL-13 de BAL, y más prominente en animales más viejos o. aquellos con niveles de IL-13 más altos en BAL. La hipertrofia epitelial fue evidente en las vías respiratorias conductoras y pequeñas también (Figura 2) . La expresión constitutiva de IL-13 específica de pulmón también dio como resultado agrandamiento alveolar similar a COPD y ruptura de las paredes, así como organización focal del material cristalino dentro de los focos fibrótícos similares a cuerpos de Masson. Además, fueron observados cristales en forma de aguja, delgados, largos, en los macrófagos, alvéolos y ocasionalmente, las vías respiratorias de los animales transgénicos (+) .

Ya que la metaplasia del moco y la expresión aumentada del gen de la mucina son característicos del asma y de COPD, fue evaluado el efecto de la expresión constitutiva de IL-13 sobre el moco de las vias respiratorias. La tinción con PAS y azul alciano demostraron que la acumulación de moco fue prominente en las vías respiratorias de animales transgénicos ( +) , pero no en los compañeros de carnada transgénicos (-) (figura 3) . Fueron también evidentes incrementos impresionantes en ARNm MUG5AC, MUC2 y MUC4 de genes de la mucina, en ratones transgénicos (+) . La remodelación de las vías respiratorias con fibrosis subepitelial es una característica bien documentada de las vías respiratorias asmáticas, y la reparación desordenada y la fibrosis parenquimal son frecuentemente percibidas como aspectos del enfisema. Estas características de las enfermedades inflamatorias están asociadas con deposición incrementada del colágeno. En consecuencia, se utilizaron tinciones de tricromo de Masson, rojo sirio y ensayos de hidroxiprolina para evaluar la deposición de colágeno en las vías respiratorias de los animales transgénicos (+) y (-) . Una pequeña cantidad de colágeno fue observada en y cerca de la pared de las vías respiratorias en los animales transgénicos (-) , y fue detectado colágeno empaquetado de manera suelta en los cúmulos broncovasculares . En contraste agudo, se observó deposición aumentada del colágeno en la región subepitelial y en la adventicia de las vías respiratorias grandes y pequeñas de animales transgenicos (+) (figura 4) , similar a los hallazgos en los desórdenes humanos de las vías respiratorias. Se observó cicatrización y fibrosis parenquimal en los animales más viejos, y estas características se incrementaron con la edad. Los niveles incrementados de hidroxiprolina pudieron ser detectados tan tempranamente como a las 4-6 semanas después de la producción de IL-13, y los animales de tres meses de edad tuvieron niveles de hidroxiprolina significativamente más altos (4.1 veces, p<0.001) que los animales transgénicos (-) . Los pacientes con asma y con COPD demuestran obstrucción de las vías respiratorias y AHR (una respuesta broncoespástica exagerada a los agonistas específicos como la metacolina) . En consecuencia, fueron emprendidos estudios para determinar si estas alteraciones de las vías respiratorias estaban presentes en el modelo de animal transgénico de IL-13. La resistencia de las vías respiratorias de línea base fue levemene elevada en animales transgénicos (+) . Además, se observó también AHR después del reto con metacolina, como se determinó utilizando metodologías de evaluación invasora y no invasora. Estos datos indican alteraciones fisiológicas similares al asma y al COPD que están presentes en el modelo transgénico de IL-13.

Ratones Transgénicos inducibles : El sistema de animal transgénico inducible, específico del pulmón, permite el control temporal de la expresión de IL-13 en los pulmones murinos . Esto imita los patrones de enceramiento y disminución de la expresión de IL-13 observada en asma y COPO, y circunviene las anormalidades provocadas por la expresión del gen neonatal o in útero, observada con otros modelos transgénicos. Los ratones transgénicos inducibles fueron mantenidos sobre agua normal (libre de dox) hasta un mes de edad. No se detectó IL-13 en el fluido de BAL proveniente de animales transgénicos (-) sobre dox o agua normal. En ausencia de dox, fueron encontrados niveles de IL-13 de BAL menor o igual de 75 pg/ml en animales transgénicos (+) . Dentro de 24 horas de la administración de dox, los animales transgénicos (+) demostraron niveles incrementados de IL-13 en BAL, y los niveles en estado de reposo en el intervalo de aproximadamente 0.5 a 1.5 ng/ml fueron observados dentro de 96 horas después de la administración de dox. Los niveles de IL-13 de BAL regresaron a los niveles básales dentro de 96 horas después de que cesó la administración de dox. El ARNm de IL-13 fue solamente detectable en tejidos pulmonares de animales transgénicos (+) . La tinción con H y tricromo demostró que los pulmones obtenidos de ratones transgénicos (-) administrados con agua normal y agua que contenía dox, no demostraron anormalidades histológicas, ni tampoco sus pulmones pudieron ser distinguidos de los pulmones obtenidos de ratones transgénicos (+) administrados con agua normal. No obstante, los ratones transgénicos (+) a los que se les dio agua normal sí mostraron metaplasia leve del moco después de la tinción con D-PAS. De manera contraria, los ratones transgénicos (+) a los que se les administró agua con dox mostraron alteraciones inflamatorias del moco y alteraciones estructurales notables. Tan pocos como siete dias después de la administración de dox, fue prominente la inflamación en el fluido de BAL. En este punto en el tiempo, existió un incremento de 7.5 veces en la recuperación celular a partir del fluido de BAL, y un incremento significativo en el porcentaje de eosinófilos · del fluido de BAL (63%, p menor de 0.001) en ratones transgénicos (+) administrados con agua con dox. La recuperación de linfocitos y macrófagos fue también significativamente incrementada (p menor de 0.01) en estos ratones. También, fueron prominentes los infiltrados mononucleares , linfocíticos y eosinofílicos en las vías respiratorias y las estructuras peribronquiales, como lo fue un incremento en la metaplasia del moco. Adicionalmente, fueron notados incrementos sustanciales en el AR m de MUC-5AC, MUC-2 y MUC- . La administración crónica de dox dio como resultado fibrosis subepitelial , agrandamiento alveolar, y deposición de cristales, muy similar a aquella observada en ratones transgénicos que expresan constitutivamente IL-13. El enfisema en COPD es definido patológicamente como el agrandamiento anormal de los espacios de aire distales a la terminal bronquial del pulmón (Sénior y Shapiro, 1998, Fishman' s Pulmonary Diseases and Disorders, Vol . 1, McGraw- Hill, NY) . Como se anotó previamente, los ratones que expresan IL-13 constitutivamente, mostraron alvéolos agrandados. Para determinar si este agrandamiento fue debido al desarrollo defectuoso o a la destrucción del tejido pulmonar en un pulmón normalmente formado, a los ratones transgénicos (+) inducibles se les administró agua con dox únicamente después de que se completó el desarrollo pulmonar completo. Después de la administración de dox, fue aparente , el agrandamiento alveolar inducido por IL-13, utilizando técnicas histológicas y morfométricas . En ausencia de dox, se observaron alvéolos normales en animales transgénicos (+) y (-) (figura 6) . Deposición de Cristales de YM en Ratones que Sobreexpresan IL-13: Como se anotó previamente, fueron observados cristales en ratones transgénicos de IL-13, inducibles y constitutivos. La presencia de los cristales fue dependiente de la dosis y del tiempo. En ratones IL-13 constitutivos, los cristales pudieron ser observados en el punto de tiempo más temprano evaluado (1 mes) , y la acumulación impresionante de cristales fue evidente en animales de tres meses de edad. Similarmente , ratones IL-13 inducibles, mostraron cristales en diversos tejidos y células de las vías respiratorias, aproximadamente a los mismos intervalos de tiempo después de la administración de dox. En ratones jóvenes, los cristales fueron más comúnmente observados en macrófagos, parénquima y alvéolos, y menos comúnmente en las vías respiratorias distales. En animales más viejos, se notó deposición alveolar y parenquimal considerable de cristales, incluyendo muchos alvéolos completamente rellenos con depósitos cristalinos. Los cristales, fueron de facetas múltiples, frecuentemente en forma de agujas y aproximadamente de 20 a 120 µp? de longitud (figura 7) . Los cristales fueron purificados a partir del fluido de BAL proveniente de ratones transgénicos IL-13 (+) constitutivos, utilizando un método de gradiente de densidad de Ficoll como se describe en otro sitio en la presente. Estos cristales fueron evaluados y se determinó que estaban comprendidos de proteínas ??. No fueron encontrados otros péptidos en la muestra, y las proteínas YM no fueron detectadas en animales transgénicos (-) , indicando que los cristales en los animales transgénicos de IL-13 (+) comprenden las proteínas YM. Expresión del Gen de YM en Ratones que Sobreexpres n IL-13 : Se realizó RT-PCR como se describe en la presente, para determinar si la expresión de la proteína YM fue inducida por IL-13. En el ARN entero de pulmón proveniente de animales transgénícos (-), el AR m de YM estuvo en o cerca de los límites de sensibilidad inferiores del ensayo (figura 9) . En contraste estricto, en ratones transgénicos que expresan constitutivamente IL-13, el ARNm de YM fue detectado en todos los puntos de tiempo evaluados (ratones de 1 a 3 meses de edad) . Los ratones transgénicos (+) inducibles que no recibieron dox, demostraron bajos niveles de ARNm de YM, indicando un sistema levemente "agrietado" . Después de la administración de dox, se observaron incrementos sorprendentes en el ARNm de YM tan pocas como las 48 horas después de la introducción de dox, y los altos niveles de la expresión del ARNm de YM continuaron a todo lo largo del periodo de tres meses en el cual se administró dox (figura ) . Se utilizó hibridación in situ para localizar los sitios de la producción de la proteína YM en animales transgénicos de IL-13. El ARNm de YM no pudo ser detectado en ratones transgénicos (-) , pero se detectaron niveles impresionantes en animales transgénicos (+) utilizando las sondas antisentido. En animales transgénicos (+) , la YM se localizó intensamente hacia los macrófagos y a las células epiteliales de las vías respiratorias. Se debe notar que la tinción de YM no fue detectada cuando los mismos tejidos fueron sondeados utilizando los oligonucleótidos en sentido (figura 11) , confirmando la especificidad de estos resultados . Para averiguar si la inducción de citocina de la expresión de ARNm de YM fue específica de IL-13, se emprendió el análisis de RT-PCR utilizando el ARN de pulmón completo proveniente de una variedad de otros ratones transgenicos. Los ratones transgenicos de IL-4 expresaron niveles exagerados de YM en sus pulmones, similares a los ratones transgenicos de IL-13. Esto coincide con la evidencia que indica que IL-4 es otra citocina importante en los desórdenes de las vías respiratorias humanas, como se estableció previamente en otro sitio en la presente. Los ratones transgénicos que expresan constitutivamente IL-6, IL-11, factor1Ss de crecimiento endotelial vascular (VEGF) e IL-10 demostraron niveles de AR m de YM comparables a aquellos de los compañeros de carnada transgenicos controles (-) de IL-13, confirmando adicionalmente que las citocinas postuladas juegan un papel en la inflamación respiratoria dominada por Th2 , por ejemplo IL-13 e IL-4, son también inductores potentes y específicos de la expresión de YM.

Actividad de Quitinasa en Fluido de BAL Proveniente de Ratones que Sobreexpresan IL-13 : La actividad de la quitinasa en fluidos de BAL provenientes de los ratones transgenicos (+) y (-) que expresan constitutivamente IL-13, fue evaluada utilizando los métodos descritos en otro sitio en la presente . El fluido de BAL obtenido de ratones transgénicos (-), tuvo niveles de actividad de quitinasa < 75 unidades/ml . En contraste, se detectó un incremento impresionante en la actividad de quitinasa en ratones transgénicos (+) (figura 12) . Esto es, la actividad de la quitinasa fue detectada en animales transgénicos (+) de un mes de edad, y continuó incrementándose conforme los animales crecían. Similarmente, la actividad de la quitinasa fue detectada en animales transgénicos (+) inducibles, tan poco como a los dos días después de la administración de dox, y esta actividad también se incrementó con el tiempo. Los ratones transgénicos que sobreexpresan IL-4 también demostraron niveles incrementados de actividad de quitinasa. No obstante, el fluido de BAL proveniente de los animales transgénicos (+) de IL-6, IL-11, VEGF e IL-10, tuvieron niveles básales de actividad de quitinasa. Estos datos indican que la actividad incrementada de quitinasa correlaciona con la expresión incrementada de IL-13 y/o IL-4 y con la expresión incrementada de la proteína YM y la deposición de cristales en los tejidos pulmonares.

Expresión de A Casa en Ratones Transgénicos de IL-13 Los reportes conflictivos han indicado que YM puede o no tener actividad de quitinasa. Por ejemplo, YM purificada y recombinante han fallado en demostrar la actividad de quitinasa en un número de ensayos, indicando que ésta no es una quitinasa, sino más bien una molécula similar a quitinasa (Chang et al., 2001, J. Biol . Chem. 276:17497-17506). El fluido de BAL proveniente de los ratones transgénicos (+) de IL-13, demuestra actividad detectable de quitinasa indicando que puede estar presente una proteína de la familia de quitinasa en el fluido de BAL de estos ratones. A la fecha, la AMCasa es la única enzima identificada en los sistemas murino, que demuestra actividad de quitinasa verdadera. Para determinar si la expresión de AMCasa fue aumentada en el pulmón de ratones transgénicos (+) de IL-13, se utilizaron cebadores de T-PCR específicos para la AMCasa, como se describió anteriormente. Los niveles de AR m en controles de compañeros de carnada transgénicos (-) estuvieron cercanos o por debajo de los niveles de detección en el ensayo empleado. De manera contraria, se encontraron incrementos impresionantes en los niveles de ARNm de la AMCasa en modelos transgénicos de IL-13, constitutivos e inducibles. En los primeros, se notó en los animales que eran de uno a tres meses de edad. En el último, tan poco como a los siete días después de la administración de dox, respectivamente.

Similar a la expresión de la proteína Y , la expresión de AMCasa fue específica para animales transgénicos de IL-13, ya que no se detectó en pulmones provenientes de otros animales transgénicos (IL-10, VEGF, IL-6 e IL-11) evaluados en la presente. La hibridación in situ fue empleada para localizar la producción de AMCasa en ratones transgénicos de IL-13. La acumulación prominente del AR m de AMCasa se detectó en las células epiteliales y, a un menor grado, en los macrófagos . En contraste, el ARNm de la AMCasa no fue detectado en ratones transgénicos (-) (figura 14) . Expresión del Gen de la Quitinasa en un Modelo de Asma Murino Inducido por OVA: Se realizaron estudios para evaluar si las proteínas YM y/o AMCasa eran inducidas en el modelo de asma murino impulsado por Th2 estándar. Para este fin fue investigada, la actividad de quitinasa del fluido de BAL y la expresión de estos dos genes en los pulmones de ratones tipo silvestre sensibilizados con OVA. En animales que fueron sensibilizados con OVA, pero que no recibieron un reto de OVA, los niveles de ARNm y la actividad de quitinasa del fluido de BAL estuvieron cerca de los límites de los niveles de detección de los ensayos. No obstante, después del reto con OVA, los niveles de ARNm de YM y de AMCasa fueron fácilmente detectados y persistieron por 7 días después del reto con el antígeno. La actividad de quitinasa del fluido de BAL incrementó también en consecuencia (figura 15) . Inducción Relativa de YM y AMCasa: Se utilizaron GENECHIPS de Affymetrix, que comprenden 12,200 oligonucleótidos , para evaluar las alteraciones de la expresión de los genes inducidos por IL-13, en animales transgénicos inducibles que habían sido administrados con dox, de 1 a 2 meses de edad, y se compararon con los controles de compañeros de carnada transgénicos (-) . El análisis de GENE CHIP indicó que más de 200 genes fueron incrementados por al menos 2.5 veces, y aproximadamente 140 genes fueron subregulados por la administración de dox. De manera importante, el gen más prominentemente inducido después de la administración de dox fue YM (índice de estimulación de 64.1 ± 0.5) . La AMCasa no estuvo presente sobre el chip, sino que otro gen de la familia de quitinasa, BRP39, fue el duodécimo gen más prominentemente inducido en el arreglo (índice de estimulación de 7.1 + 0.5) . Se debe notar que la administración de dox no provocó alteraciones significativas en la expresión del gen de los animales transgénicos (-) . Ya que la AMCasa no estuvo presente sobre el GENE CHIP, fueron empleados otros métodos incluyendo RT-PCR, análisis de transferencia de Northern, y ensayos de protección de ribonucleasa. Todos indicaron que la AMCasa es un objetivo importante corriente abajo (3') de IL-13. Esto demuestra además que la AMCasa es inducida durante el curso de y potencialmente involucrada en la patogénesis de la inflamación respiratoria inducida por IL-13. Efectos de Alosamidina en Modelos de Asma urino: La alosamidina es un inhibidor potente y selectivo, conocido de las quitinasas. Los ratones de tipo silvestre fueron sensibilizados a OVA y retados con OVA un número de días después. Un día antes del reto con OVA, los ratones fueron repartidos aleatoriamente en dos grupos y recibieron diariamente dosis i.p de alosamidina o de control con vehículo. Similar a los síntomas del asma humano, el modelo de sensibilización y reto con OVA da como resultado una respuesta inflamatoria enérgica rica en eosinófilos y en linfocitos, con metaplasia prominente de moco y la hiperplasia de células en copa. La administración de alosamidina da como resultado una inhibición de las células totales, dependiente de la dosis, influjo de eosinófilos y linfocitos en el pulmón retado con OVA (figura 16) . El efecto inhibitorio fue más prominente en la más alta dosis probada (10 mg/kg) , y fue todavía prominente a la más baja dosis (1 mg/kg) . Por lo tanto, la alosamidina inhibió la inflación inducida por antígeno, en un modelo murino reconocido en la técnica, del asma humano. Similarmente, ratones transgénicos (+) de IL-13 de seis semanas de edad, fueron repartidos aleatoriamente para recibir catorce dosis diarias i.p de alosamidina (1 mg/kg) o control con vehículo. Los animales fueron luego sacrificados y el fenotipo de IL-13 fue evaluado. En comparación a los ratones transgénicos (+) que recibieron el control con vehículo, los ratones transgénicos (+) que recibieron las inyecciones de alosamidina mostraron recuperación de células del fluido de BAL, marcadamente disminuida, inflamación tisular disminuida y disminuciones impresionantes en los eosinófilos y linfocitos de BAL y de tejidos. El análisis de evaluación del volumen pulmonar, histológico y morfométrico indicó que los animales tratados con alosamidina tenían volúmenes pulmonares disminuidos y alvéolos más pequeños que los controles compañeros de carnada, indicando que la alosamidina es un potente inhibidor de la inflamación inducida por IL-13 y la remodelación pulmonar. Es importante hacer notar que en estos experimentos, la administración de alosamidina comenzó seis semanas después del nacimiento de los ratones transgénicos que expresan constitutivamente IL-13, es decir, después de que había comenzado el fenotipo similar al asma. Este tratamiento con alosamidina en estos ratones y COPD disminuyó la progresión de la patología pulmonar incluso después de que la respuesta patológica había sido iniciada. Esto es análogo a las situaciones terapéuticas en humanos donde las composiciones farmacéuticas son administradas después de que las enfermedades inflamatorias respiratorias han sido ya diagnosticadas y han progresado hasta cierto grado. Estos resultados indican que los inhibidores de una molécula similar a la quitinasa pueden tratar exitosamente las enfermedades incluso después de que ha sido establecida la patología crónica. Efectos de los Anticuerpos Anti-AMCasa en Modelos de Asma Murino Ratones tipo silvestre fueron sensibilizados a OVA y tratados con OVA un número de dias después . Un día antes del reto con OVA, los ratones fueron repartidos aleatoriamente en dos grupos y recibieron dosis diarias de anticuerpos anti-AMCasa o un suero control . Similar a los síntomas del asma humano, el modelo' de sensibilización y reto con OVA da como resultado una respuesta inflamatoria enérgica rica en eosinófilos y linfocitos, con metaplasia prominente de moco e hiperplasia de células en copa. La administración del anticuerpo anti-AMCasa dio como resultado una inhibición significativa del influjo de células totales de eosinófilos hacia el fluido de BAL de estos pulmones retados con OVA (figura 18) . Se notó una disminución similar en la inflamación total y eosinofílica en los tejidos pulmonares retados y sensibilizados con OVA. Por lo tanto, el anticuerpo anti-AMCasa inhibió la inflamación inducida por el antígeno en un modelo murino reconocido en la técnica, del asma humana.

Expresión de AMCasa en tejido pulmonar humano Las observaciones en el modelo de ratón reconocido en la técnica, del asma humano, fueron extendidas a la evaluación de la expresión de la AMCasa en tejido pulmonar humano que fue obtenido en la autopsia utilizando hibridación in si tu. En resumen, similarmente a los protocolos descritos previamente en otro sitio en la presente, con relación a la hibridación in vitro para la detección del AR m de AMCasa e Ym-1 de ratón, tejidos pulmonares normales y asmáticos fueron obtenidos a través de biopsias y fijados en formaldehído y procesados en parafina. Se cortaron secciones de cinco micrómetros, se desparafinizaron, y se trataron con proteinasa K (20 µg/ml, 37°C, 20 minutos). Los tejidos fueron luego tratados con trietilnolamina 0.1 M/anhídrido acético al 0.25% (pH 8) por 10 minutos a temperatura ambiente y se enjuagaron en PBS . Las plantillas para las sondas de ISH para AMCasa humana fueron adquiridas de Research Genetics, Inc (Huntsville, Alabama) como clones marcadores de secuencia expresada (EST) 5182357. El clon fue generado utilizando el vector pCMV~SPORT6 que comprende las secuencias promotoras T7 y SP6 que flanquean el fragmento de inserto. La secuencia del clon concordó con el ARNm de la AMCasa humana desde el nucleótido 769 al 1538 (SEQ ID NO: 14) . La secuencia del clon fue confirmada mediante secuenciamiento de nucleótidos en Keck Biotechnology Laboratory en la Universidad de Yale. Las sondas de AR en sentido y antisentido fueron transcritas in vi tro y marcadas con un equipo de marcación de ARN de digoxigenina (Roche, Indianápolis , IN) , desnaturalizadas a 65 °C y agregadas al amortiguador de hibridación comercialmente disponible (Ambion, Austin, TX) a 6 ng/µ?, y la mezcla de hibridación se incubó con el tejido toda la noche a 52 °C. Los tejidos fueron luego lavados dos veces con 4 x SSC por 5 minutos a temperatura ambiente, dos veces con 2 x SSC por 10 minutos a 37°C, e incubados con ARNasa (10 µg/ml) por 45 minutos a 37°C. Esto fue seguido por dos lavados de 10 minutos en 2 x SSC a temperatura ambiente, y tres lavados de 20 minutos en 0.2 x SSC a 50 °C. Las sondas fueron detectadas mediante la incubación toda la noche con anticuerpos de oveja para la digoxigenina conjugada con fosfatasa alcalina (Roche) , seguido por cloruro de 4-nitroazul-tetrazonio/5-bromo-4-cloro-3-indoilfosfato, como se describe por el fabricante. La expresión de la AMCasa en tejido pulmonar humano histológicamente normal ("tejido control")/ fue comparada con la expresión de AMCasa en tejidos obtenidos de pacientes humanos que habían sucumbido debido al asma fatal ("asma fatal") . Utilizando la hibridación in si tu, el ARNm de la AMCasa fue detectado en muestras de pulmón de asma fatal, pero no en tejido pulmonar control utilizando una sonda en sentido (figuras 19A y 19B, respectivamente) . El ARNm de la AMCasa estuvo localizado hacia las células epiteliales y los macrófagos en tejido de asma fatal. Además, una sonda en sentido no detectó el ARNm que codifica para la AMCasa en el tejido pulmonar de asma fatal o control, demostrando la especificidad de la sonda. Además, una sonda poli-dT puso de manifiesto el ARNm intacto en ambas muestras. La expresión del ARNm de la AMCasa en macrófagos alveolares humanos, fue también evaluada. La hibridación in si tu utilizando una sonda antisentido de AMCasa demostró ARNm de AMCasa, detectable, en macrófagos alveolares en muestras pulmonares de asma fatal (figura 19E) pero no en las muestras control . El ARNm de la AMCasa no fue detectado en muestras pulmonares de asma fatal utilizando una sonda de AMCasa en sentido, demostrando la especificidad del procedimiento de hibridación in si tu. Estos datos confirman que los resultados obtenidos utilizando el modelo de ratón reconocido en la técnica, del asma humano, están en concordancia con los datos in vivo humanos. Es decir, los datos descritos en la presente demuestran que, por primera vez, la expresión del ARNm de AMCasa se incrementa en gran medida, y correlaciona con el asma en humanos, ya que el ARNm de AMCasa está presente a niveles detectables en tej ido pulmonar de asma fatal, pero no es detectable en el tejido pulmonar histológicamente normal . Estos resultados apoyan adicionalmente la demostración de que la expresión de las moléculas similares a la quitinasa está asociada con y/o es mediadora de la enfermedad inflamatoria en mamíferos. De este modo, los datos descritos en la presente apoyan además que la inhibición de la AMCasa utilizando un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, puede tratar y/o prevenir una enfermedad inflamatoria, tal como, pero no limitada a, asma, en un mamífero, incluyendo un paciente humano. Discusión La presente invención está basada, en parte, en la evidencia experimental que sugiere fuertemente que las respuestas inflamatorias de Th2 , características de las alergias, asma atópica y las respuestas inflamatoria y de remodelación de las vías respiratorias, asociadas con estos desórdenes, han evolucionado desde las respuestas inflamatorias de Th2 primeramente desarrolladas para combatir parásitos y otros patógenos . El asma y otras enfermedades inflamatorias son de este modo la consecuencia de las respuestas Th2 pobremente controladas, promovidas de una manera independiente de parásitos y patógenos . Una vasta gama de parásitos y otros patógenos contienen quitina. Este es un componente esencial en los exoesqueletos de crustáceos e insectos, las paredes de los hongos, los tractos digestivos de insectos, la coraza microfilarial de nematodos parasitarios y componentes de los parásitos helmínticos. La quitina es un polímero de residuos de N-acetilglucosamina en un enlace ß-1,4 y es el segundo polisacárido más abundante en la naturaleza, detrás de la celulosa, y no tiene contraparte en mamíferos. La quitina comprende frecuentemente el exterior de parásitos y otros patógenos debido a que, dependiendo de su espesor, éste puede ser un recubrimiento rígido o flexible vital para la protección de los organismos contra las defensas del hospedero y del ambiente circunvecino. De este modo, debido a que ésta está presente en la interfaz hospedero/patógeno, la quitina es un antígeno prominente ya que éste está expuesto hacia el sistema inmune. De hecho, la quitina ha demostrado ser un potente adyuvante de células T- y B que aumenta las respuestas de inmunoglobulina a péptidos pobremente inmunogénicos , y que puede desplazar las respuestas inmunes en una dirección Thl (Seferian y Martínez, 2000, Vaccine 19:661-668; Shibata et al., 2000 J. Immunol . 164.-1314-1321) . Dado el gran cúmulo de evidencia que demuestra la co-evolución de los parásitos y los humanos, especialmente respecto a las respuestas inmunes del hospedero, y a la falta completa de quitina en mamíferos, es razonable creer, sin pretender estar comprometido con alguna teoría particular, que los mamíferos desarrollaron quitinasas como una defensa innata contra los parásitos que poseen quitina. Las quitinasas han sido identificadas en mamíferos. La quitotriosidasa YKL-39 han sido descritas en humanos, la proteína Y ha sido descrita en el ratón, y la quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , la oviductina, e YKL-40 han sido descritas en ratones humanos (Boot et al., 2001, J. Biol . Chem. 276-6770-6778; Boot et al., 1998, J. Biol. Chem. 273-25680-25685; ard et al., 2001, Am. J. Pathol . 158:323-332; Chang et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:17497-17506; Jin et al., 1998, Genetics 54:316-322; Bleau et al., 1999, EXS 87:211-221). A pesar de los reportes conflictivos y alguna homología secuencial a las quitinasas microbianas, únicamente la quitotriosidasa y la AMCasa han demostrado actividad de quitinasa verdadera (Boot et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:6770-6778). De las quitinasas de mamífero, la YM-1 y la AMCasa han sido identificadas como poseedoras de propiedades quimiotácticas y similares al factor de crecimiento. La YM-1 es un péptido de cadena simple de 45 kDa que forma fácilmente cristales bajo condiciones fisiológicas. Las proteínas de la familia de YM han sido identi icadas como eosinofílicas y un atrayente de células T CD4+, así como poseedoras de actividad de lectina (Owhashi et al., 2000, J. Biol. Chem. 275:1279-1286;. Chang et al., 2001, J. Biol. Chem. 276:17497-1706). La AMCasa es una proteína de 50 kDa que demuestra actividad de quitinasa. Ésta ha sido también reportada como un agente promotor del crecimiento de fibroblastos (Guoping et al., 1997, J. Cell . Biochem. 67:257-264). Como es demostrado por los datos descritos aguí, las proteínas de la familia YM y la AMCasa son altamente expresadas en el pulmón de modelos de asma inducidos por IL-13 y mediados por Th2. Sin desear estar comprometido por alguna teoría particular, cuando se observa en combinación con el papel de la quitina en las condiciones asmáticas, el nuevo descubrimiento del papel de las guitinasas en el asma y otras enfermedades de las vías respiratorias puede ser considerado como sigue. En un sujeto no asmático, no atópico, la exposición a la quitina como un antígeno, posiblemente después de la exposición a un parásito o a hongos, polariza la respuesta inmune hacia una vía Thl, la cual puede o no combatir de manera efectiva al parásito. No obstante, en el sujeto atópico o uno genéticamente dispuesto al asma o a la atopía, IL-13 y/o IL-4 son producidas, las cuales suprarregulan la expresión de YM, AMCasa y posiblemente otras quitinasas y moléculas similares a la quitina. La quitina, como se detalló al principio, aumenta la producción de IgE. Las proteínas de la familia YM, solas o en combinación con otras moléculas, poseen propiedades quimiotácticas de eosinófilos y de células T CD4+. , Por lo tanto, las proteínas YM pueden atraer eosinófilos hacia el pulmón, así como provocar daño tisular mediado por sus características de enlace a carbohidratos y de formación de cristales. La AMCasa eventualmente degrada la quitina para eliminar el patógeno. Debido a las propiedades inductoras de Thl de la quitina, la actividad de AMCasa y la degradación subsiguiente de la quitina dirigen al sistema inmune hacia una respuesta Th2 característica de la atopía y las enfermedades inflamatorias asmáticas . La presente invención incluye los métodos y las terapéuticas para el tratamiento del asma, COPD y otras enfermedades inflamatorias utilizando inhibidores de la molécula similar a la quitinasa. La invención comprende además los métodos para identificar los nuevos agentes terapéuticos para el tratamiento del asma, COPD, y otras enfermedades inflamatorias relacionadas a las quitinasas IL-13 e IL-4 y los inhibidores de la molécula similar a quitinasa . Las descripciones de todas y cada una de las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas aquí, son incorporadas por referencia en la presente, en su totalidad. Mientras esta invención ha sido descrita con referencia a las modalidades específicas, es aparente que otras modalidades y variaciones de esta invención pueden ser consideradas por otros expertos en la técnica, sin apartarse del espíritu y alcance verdaderos de la invención. Se pretende que las reivindicaciones anexas sean consideradas como incluyentes de todas las modalidades y variaciones equivalentes . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa, el método está caracterizado porque comprende la administración de una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa a dicho mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en el mamífero. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el mamífero es un humano.
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de una YM-1, una Y -2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína 1 oviductal, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago y una proteína 39 de condrocitos.
4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un · compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido.
5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc y mercurio.
6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente con una molécula similar a la quitinasa, seleccionada del grupo que consiste de una YM-1, una YM-2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína 1 oviductal, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa-, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago y una proteína 39 de condrocitos .
7. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la molécula de ácido nucleico antisentido es un ácido nucleico aislado, complementario a un ácido nucleico aislado que codifica para la molécula similar a la quitinasa, o un fragmento de la misma.
8. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la ribozima es un ácido nucleico enzimático aislado, el cual escinde específicamente el AR m transcrito de un ácido nucleico que codifica para la molécula similar a la guitinasa.
9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia y enfisema .
10. Un método de prevención de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada a un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa a dicho mamífero, con lo cual se previene la enfermedad inflamatoria en el mamífero.
11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el mamífero es un humano.
12. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de una YM-1, una YM-2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína 1 oviductal, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago y una proteína 39 de condrocitos.
13. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido.
14. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílic , neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosas pulmonar idiopática, esclerodermia y enfisema .
15. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa es una proteína YM y en donde además el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc y mercurio.
16. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa es AMCasa.
17. Un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de quitinasa, caracterizado porque comprende la administración de una cantidad efectiva de un inhibidor de quitinasa al mamífero, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en el mamífero.
18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el mamífero es un humano.
19. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la quitinasa es la quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) y en donde el inhibidor de quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamídina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc y mercurio.
21. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente con la AMCasa.
22. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la molécula de ácido nucleico antisentido es un ácido nucleico aislado, complementario a un ácido nucleico aislado que codifica para una AMCasa o un fragmento de la misma.
23. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona del grupo que consiste de asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedad pulmonar intersticial, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, bronquitis crónica, bronquitis eosinofílica, neumonía eosinofílica, neumonía, enfermedad inflamatoria del intestino, dermatitis atópica, atopía, alergia, rinitis alérgica, fibrosis pulmonar idiopática, esclerodermia y enfisema.
24. Un método para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de interleucina-13 , caracterizado porque comprende la administración al mamífero de una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en un mamífero.
25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el mamífero es un humano.
26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, un ácido nucleico, y una molécula de ácido nucleico antisentido.
27. Un método para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con una respuesta inflamatoria a Th2, caracterizado porque comprende la administración al mamífero de una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, con lo cual se trata la enfermedad inflamatoria en un mamífero.
28. Un método para identificar un compuesto útil para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero, caracterizado porque comprende administrar un compuesto a un mamífero afectado con una enfermedad inflamatoria, y comparando el nivel de una molécula similar a la quitinasa con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero, antes de la administración de dicho compuesto, en donde un nivel más bajo de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero después de la administración del compuesto, en comparación con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en el mamífero antes de la administración del compuesto, es una indicación de que el compuesto es útil para tratar una enfermedad inflamatoria en el mamífero, con lo cual se identifica un compuesto útil para tratar una enfermedad inflamatoria.
29. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el nivel de la molécula similar a la quitinasa es seleccionado del grupo que consiste del nivel de la expresión del ácido nucleico de la molécula similar a la quitinasa, y el nivel de la actividad enzimática de la molécula similar a la quitinasa.
30. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de una Y -1, una YM-2, una quitinasa ácida de mamífero (AMCasa) , una glucoproteína 1 oviductal, una glucoproteína 1 de cartílago, una quitotriosidasa, una mucina 9, una glucoproteína 39 de cartílago y una proteína 39 de condrocitos.
31. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque el mamífero es un ratón.
32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque el ratón se selecciona del grupo que consiste de un ratón transgénico que expresa constitutivamente la interleucina 13, y un ratón transgénico que expresa induciblemente la interleucina 13.
33. Un compuesto, caracterizado porque es identificado utilizando el método de conformidad con la reivindicación 28.
34. El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa es AMCasa.
35. Un compuesto, caracterizado porque es identificado utilizando el método de conformidad con la reivindicación 34.
36. Un método para identificar un compuesto útil para tratar una enfermedad inflamatoria, caracterizado porque comprende poner en contacto una célula con un compuesto, y comparar el nivel de una molécula similar a la quitinasa en dicha célula con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en una célula de otro modo idéntica no puesta en contacto con el compuesto, en donde un menor nivel de la molécula similar a la quitinasa en la célula puesta en contacto con el compuesto, en comparación con el nivel de la molécula similar a la quitinasa en la célula no puesta en contacto con el compuesto, es una indicación de que dicho compuesto es útil para tratar una enfermedad inflamatoria, con lo cual se identifica un compuesto útil para tratar una enfermedad inflamatoria.
37. Un equipo para tratar una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa, caracterizado porque comprende una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, el equipo comprende además un aplicador y un material de instrucciones para el uso del mismo.
38. El equipo de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque el inhibidor de la molécula similar a la quitinasa se selecciona del grupo que consiste de un compuesto químico, un anticuerpo, una ribozima, una molécula antisentido y un ácido nucleico.
39. El equipo de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el compuesto químico se selecciona del grupo que consiste de alosamidina, glucoalosamidina A, glucoalosamidina B, metil-N-desmetilalosamidina, desmetilalosamidina, didesmetilalosamidina, estiloguanidina, un derivado de estiloguanidina, dipéptido ciclo- (L-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (L-Arg-L-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-D-Pro) , dipéptido ciclo- (D-Arg-L-Pro) , riboflavina, un derivado de flavina, cobre, zinc y mercurio.
40. El equipo de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la molécula similar a la quitinasa es AMCasa.
41. Un equipo para prevenir una enfermedad inflamatoria en un mamífero, en donde la enfermedad está asociada con un nivel incrementado de una molécula similar a la quitinasa, caracterizado porque comprende una cantidad efectiva de un inhibidor de la molécula similar a la quitinasa, el equipo comprende además un aplicador y un material de instrucciones para el uso del mismo.