MXPA03007176A

MXPA03007176A - Composicion y metodos para la modulacion de la estructura y/o funcion vascular.

Info

Publication number: MXPA03007176A
Application number: MXPA03007176A
Authority: MX
Inventors: N Vournakis John
Original assignee: Marinepolymer Tech Inc
Priority date: 2001-02-12
Filing date: 2002-02-08
Publication date: 2005-02-14
Also published as: JP5945293B2; ES2456695T3; JP5303088B2; US7041657B2; WO2002063961A1; CA2437812A1; JP2016053067A; EP1365651A4; JP2010265285A; AU2007251899A1; JP2004526705A; EP2468094B1; DK2468094T3; US7115588B2; AU2002306455B2; US20070072826A1; JP5543861B2; US8481512B2; US20030078234A1; AU2007251899B2

Abstract

La presente invencion se refiere a composiciones que comprenden polimeros de ??-1-4-N-acetilglucosamina semicristalinos (p-G1cNac) y metodos para utilizar tales polimeros para la modulacion de la estructura y/o funcion vascular. Las composiciones y metodos divulgados son utiles para estimular, en forma dependiente de la concentracion de p-G1cNac, la liberacion de endotelina-1, vasoconstriccion, y/o reduccion de flujo sanguineo fuera de un vaso roto, asi como para contribuir a la suspension del sangrado o para efectuar dicha suspension. Los metodos de la presente invencion incluyen la administracion topica de materiales que comprenden polimeros de p-G1cNac semicristalinos libres de proteinas y sustancialmente libres de amino acidos simples asi como de otros contaminantes organicos e inorganicos, y cuyos azucares de monosacarido constituyentes estan unidos en una conformacion ??-1-4.

Description

COMPOSICIÓN Y MÉTODOS PARA LA MODULACIÓN DE LA ESTRUCTURA Y/O FUNCIÓN VASCULAR 1.- INTRODUCCIÓN La presente invención se refiere a composiciones que comprenden polímeros de polisacáridos de ???-ß-1->4-?-acetilglucosamina (p-GlcNac) semi-cristalinos y a métodos para utilizar estos polímeros para causar, de manera dependiente de la concentración de p-GlcNac, una estimulación pasajera, localizada de liberación de endotelina-1, vasoconstricción, y/o reducción de flujo sanguíneo fuera de un vaso roto. Estos efectos, individual y/o colectivamente, contribuyen o provocan la suspensión del sangrado. Más específicamente, los métodos de la presente invención comprenden la administración tópica de composiciones y materiales que comprenden polímeros semi-cristalinos de N-acetilglucosamina libres de proteínas y sustancialmente libres de aminoácidos 'individuales y otros contaminantes orgánicos e inorgánicos, y cuyos azúcares de monosacáridos constituyentes están unidos en una conformación ß-1->4. 2.- ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA La homeostasis vascular depende, en parte de la secreción regulada de moduladores bioquímicos por células endoteliales. En condiciones fisiológicas normales, las células endoteliales sintetizan y secretan óxido nítrico, prostaciclina, PG12, adenosina, factor hiperpolarizante, inhibidor de vía de factor tisular, asi como activador de escuplasminógeno . Las células endoteliales activan también la antitrombina III y la protexna C que, colectivamente, median la dilatación vascular, inhiben la adhesión de plaquetaria, activación plaquetaria, formación de trombina y deposito de fibrina. El óxido nítrico, en particular, desempeña una función importante en la homeostasis vascular (Pearson, J.D. (2000) Lupus 9 (3) : 183-88; Becker y colaboradores (2000) Z Kardiol 89 (3) : 160-7; Schin-Kert, V.B. (1999) Transfus Clin Biol 6 (6): 355-63) . La producción de óxido nítrico y prostaciclina, que son vasodilatadores potentes e inhibidores de la agregación y activación plaquetaria, es la base de la actividad antitrombótica del endotelio (Yang y colaboradores (1994) Circulation ¡39 (5) : 2666-72) . El óxido nítrico es sintetizado a nivel basal constitutivo, a partir de arginina por óxido nítrico sintasa, y esta síntesis es estimulada por los agentes vaso-activos acetilcolina y bradiquinina . Se ha mostrado que la inhibición de la óxido nítrico sintasa por los análogos de arginina monometil-L-arginina (L-NMMA) y éster metílico de nitro-L-arginina (L-N7AME) reduce los niveles de óxido nítrico y provoca no solamente una vasoconstricción de conformidad con lo medido por formación de imagen por ultrasonido intravascular, sino también un incremento de la agregación plaquetaria (Yao y colaboradores (1992) Circulation 8_6 (4) : 1302-9; Emerson y colaboradores (1999) Thxomb Haemost 81 (6) : 961-66) . Una perturbación del endotelio como resultado de aterosclerosis, diabetes, reperfusión post-isquémica, inflamación o hipertensión por ejemplo, provoca un estado pro-trombotico en el cual el endotelio elabora un conjunto adicional de moduladores bioquímicos que incluyen TNF-a, IL-8, factor de von Willebrand, factor de activación de plaquetas, activador de plasminógeno tisular, así como inhibidor de activador plasminógeno de tipo 1. (Pearson, J.D. (2000) Lupus 9 (3) : 183-88; Becker y colaboradores (2000) Z Kardiol 8_9 (3) : 160-7; Schinin-Kerth, V.B. (1999) Transfus Clin Blol 6_ (6) : 355-63) . Además, el endotelio vascular sintetiza y elabora las endotelinas que son los péptidos vasoconstrictores más potentes conocidos. Las endotelinas son una familia de péptidos de 21 aminoácidos, es decir, endotelina-1, endotelina-2, y endotelina-3, originalmente caracterizados por sus propiedades potentes de vasoconstricción y angiogénicas (véase, por ejemplo, Luscher y colaboradores (1995) , Agentes Actlons Suppl. (Suiza) 4J5: 237-253; Yanagisawa y colaboradores (1988) Nature 332 : 411-415) . Los tres isopéptidos de la familia de las endotelinas, endotelina-1, endotelina-2, y endotelina-3, poseen secuencias de aminoácidos altamente conservadas que son codificadas por tres genes separados (véase, por ejemplo, Inoue y colaboradores (1989) Proc Nati Acad Sci USA 86: 2863-67; Saida y colaboradores (1989) J Biol Chem 264: 14613-16) . Aún cuando las endotelinas han sido sintetizadas en varios tejidos incluyendo células de músculo liso, la endotelina-1 es sintetizada exclusivamente por el endotelio vascular (Rosendorff, C. (1997) Cardiovasc Drugs 10 (6): 795-802). Las endotelinas son sintetizadas como preproendotelinas de doscientos tres aminoácidos. La secuencia de señal de endotelina es disociada y al proteina es procesada adicionalmente de manera proteolitica para proporcionar la forma de 21 aminoácidos madura, biológicamente activa (véase, por e emplo, Kashiwabara y colaboradores (1989) FEBS Lett 247 : 337-40) . La síntesis se endotelina regulada mecanismos autocrinos incluyendo enzimas de conversión de endotelinas y no endotelinas así como por quimasas (Baton y colaboradores (1999) Curr Opin Nephrol Hypertens 8 (5) : 549-56) . La elaboración de endotelina-1 a partir del endotelio es estimulada por al angiotensxna II, vasopresina, endotoxina, y ciclosporina ínter alia (véase por ejemplo, Brooks y colaboradores (1991) Eur J Pharm 194: 115-17) y es inhibida por óxido nítrico. La actividad de endotelina es mediada a través de enlace con afinidades preferentes para dos receptores acoplados a proteína G distintos, ETñ y ETB, en forma autocrina/paracrina (véase, por ejemplo, Hocher y colaboradores (1997) Eur. J. Clin. Blochem. 35 (3) : 175-189; Shichiri y colaboradores (1991) J. Cardiovascular Pharmacol. 17: S76-S78) . Los receptores de ETA se encuentran en músculo liso vascular enlazados a vasoconstricción y han sido asociados con enfermedades cardiovasculares, renales, y del sistema nervioso central. Los receptores ETB son más complejos y presentan acciones antagonistas. Los receptores ETB en el endotelio tienen la doble función de depuración y vasodilatacion mientras que los receptores ETB en células de músculo liso median también la vasoconstricción (Dupuis, J. (2000) Can J Cardiol 16 (1) : 903-10) . Los receptores ETB en el endotelio están relacionados con la liberación de óxido nítrico y prostaciclina (Rosendorff, C. (1997) Cardiovasc Drugs 10. (6) : 795-802) . Existen varios agonistas y antagonistas de receptores de endotelina (Webb y colaboradores (1997) Medicinal Research Revíews 17_ (1) : 17-67) , que ha sido utilizados para- estudiar el mecanismo de acción de las endotelinas. Puesto que se sabe que la endotelina tiene una actividad vasoconstrictora potente, se estudiaron antagonistas de la endotelina en particular (se conocen también como "antagonistas de receptor de endotelina" en la técnica) en cuanto a su función posible en el tratamiento de enfermedades humanas, especialmente enfermedades cardiovasculares tales como hipertensión, insuficiencia cardiaca congestiva, aterosclerosis, restenosis, e.,, infarto del miocardio (Mateo y colaboradores, (1997) Phaxmacological Res. 36 (5): 339-351). Además, se ha mostrado que la endotelina-1 participa en el funcionamiento normal del ciclo menstrual. La menstruación representa un ejemplo notable de reparación y reemplazo tisular, que involucra el remodelado y la regeneración regulada de una nueva capa de tejido endometrial que recubre el útero. Este procedo de reparación y remodelado es notable porque se efectúa sin cicatriz, un fenómeno que no se observa en general en otros órganos del cuerpo. Defectos en este proceso de reparación forman posiblemente la base de un sangrado endometrial excesivo o anormal en mujeres con menorragia documentada asi como en mujeres que llevan implantes subcutáneos de levonorgestrel (NORPLA T) para propósitos contraceptivos. En ambos grupos de pacientes, solamente niveles muy bajos de endotelina-1 endometrial han sido detectados en comparación con las poblaciones de control. Además, se ha indicado que la endotelina-1 no solamente puede desempeñar una función en efectuar la suspensión del sangrado menstrual sino que la endotelina-1 puede también tener una actividad mitogénica requerida para la regeneración y el remodelado del tejido endometrial después de la menstruación (véase Salamonsen y colaboradores, 1999, Clínica de Obstetricia y Ginecología de Balliére 13_ (2) : 161-79; Goldie 1999, Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology [Farmacología Clínica y Experimental y Fisiología] 26_ 145-48; Salamonsen y colaboradores, 1999, Clin. Exp. Phamaol. Physiol. 26 (2) : 154-57) . En resumen, la homeostasis muscular refleja un equilibrio dinámico entre dos estados fisiológicos mediados por el endotelio vascular. El primer estado que ha sido nombrado antitrombótico, se caracteriza, ínter alia por la producción de ácido nítrico, vasodilatación, inhibición de sujeción y activación de plaquetas, y por represión de la síntesis de endotelina-1. El segundo estado o estado fisiológico protrombótico es caracterizado ínter alia, por la producción de endotelina-1, vasoconstricción, activación plaquetas, y heraostasis (Warner (1999), Clinical and Experimental Physiology [Fisiología Clínica y Experimental] 26: 347-52; Pearson, (2000), lupus 9 (3): 183-88). Tomando en cuenta la importancia fisiológica de la homeostasis vascular, existe la necesidad de métodos y composiciones que pueden modular uno o varios aspectos de los procesos mencionados arriba. Más específicamente, existe la necesidad de composiciones y métodos para la modulación de la liberación endotelina, vasoconstricción, y flujo sanguíneo fuera de un vaso roto y que podrían por consiguiente ser útiles para efectuar la suspensión del sangrado. Es decir, aún cuando tales composiciones y métodos actuarían de una manera independiente de la formación de barrera física, coagulación, o bien formación de coagulo de sangre, tales composiciones y métodos presentarían sin embargo, una contribución inter alia, para lograr la hemostasis. Por consiguiente, tales métodos y composiciones tendrían aplicaciones terapéuticas para el tratamiento de enfermedades o condiciones que surgen como consecuencia de la perturbación de la omeostasis vascular. Además, tomando en cuenta los efectos sistémicos que resultan, por ejemplo, de la administración a pacientes de antagonista de endotelina-1 de conformidad con lo descrito arriba, existe una necesidad aún mayor de composiciones y métodos que produzcan respuestas fisiológicas localizadas y pasajeras incluyen, sin limitarse a este ejemplo, la estimulación de liberación de endotelina-1, en tales pacientes. 3,- COMPENDIO. DE L¾ INVENCIÓN La presente invención se refiere a métodos y composiciones para el tratamiento o mejora de trastornos vasculares incluyendo trastornos de sangrado. Más específicamente, la invención se refiere a composiciones que comprenden polímeros semi-cristalinos de polisacáridos de ??1?-ß-1->4-?-acetilglucosamina (p-GlcNac) , y al uso de tales polímeros en métodos para lograr una modulación localizada y pasajera de la estructura vascular y/o de la función vascular por ejemplo mediante la estimulación de la liberación de endotelina-1, vasoconstricción y/o reducción de flujo sanguíneo fuera de vaso roto, contribuyendo así a efectuar la suspensión del sangrado . La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de los solicitantes que la aplicación tópica de polímeros semi-cristalinos de polisacáridos de ???-ß-1->4-?-acetilglucosamina (p-GlcNac) a una secuencia vascular induce no solamente la contracción de dicho vaso, por lo que se disminuye el lumen de este vaso, sino también la inducción de una estimulación pasajera, localizada de liberación de endotelina-1 en estos tejidos contiguos con las composiciones y materiales aplicados divulgados aquí . La presente invención se refiere, en un aspecto, a un método para lograr una modulación pasajera, localizada de estructura y/o función vascular en un paciente, que comprende la administración tópica de un material que comprende polímeros semi-cristalinos de poli- -l->4-N-acetilglucosamina, libres de proteína, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos^ y sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos. La administración de estos materiales induce respuestas fisiológicas pajeras y localizadas que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, la estimulación de la liberación de endotelina-1, vaso constricción, y reducción de flujo sanguíneo fuera de un vaso roto.

En una. modalidad de la presente invención, la endotelina-1 es liberada de células endoteliales vasculares. En otros aspectos de la modalidad, la liberación de endotelina-1 es estimulada a partir de otros tejidos endoteliales o a partir de plaquetas. En una modalidad, el polímero de ???-ß-1->4-?-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformació ß -l->4, y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 800,000 daltones. En otra modalidad, el polímero ????-ß-1- -N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 10,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1->4, y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 2 millones de daltones. En otra modalidad, el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 50,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß -l->4, y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 10 millones de daltones. En otra modalidad, el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 150, 000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß -l->4, y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 30 millones de daltones. En modalidades preferidas de la invención, el método divulgado es utilizado para el tratamiento de un paciente mamífero, y en modalidades más preferidas, para el tratamiento de un ser humano que requiere de un tratamiento de este tipo. Más específicamente, la modulación de estructura vascular y/o función vascular es utilizada para efectuar la suspensión de sangrado, particularmente en un paciente afectado por coagulopatía. Dicha enfermedad puede ser el resultado de un defecto genético, como por ejemplo hemofilia, o bien un tratamiento método, incluyendo, por ejemplo, la administración de anticoagulantes sistémicos, por ejemplo coumadina, a un paciente en diálisis, paciente cardiaco, u otro paciente con un riesgo incrementado de bloqueo vascular. De manera similar, el métodos de la presente invención es utilizado para efectuar una reducción temporal, localizada del flujo sanguíneo fuera de un vaso roto durante la reparación quirúrgica de un aneurismo o excisión de un tumor o pólipo, particularmente en un paciente que tiene una condición coagulopática, minimizando por consiguiente, la pérdida de sangre durante dicho procedimiento. En otras modalidades, el método de la presente invención es utilizado para el tratamientos de úlceras o varices sangrantes, especialmente varices esof gicas.

Mientras no deseamos estar limitados a ninguna teoría o mecanismo particular, creemos que dicha suspensión del sangrado a través de los métodos divulgados aquí ocurre en forma independiente de la coagulación. En otras modalidades del método de la presente invención, el material que contiene p-GlcNac es administración tópicamente a la piel del paciente o bien a la superficie de otro órgano, o bien el material puede ser aplicado directamente a una estructura vascular a modular, la cual puede ser vaso capilar, vena o arteria. En otra modalidad del método de la invención, en donde la estructura vascular es un vaso sanguíneo roto, la aplicación tópica de materiales que contienen p-GlcNac de la presente invención se utiliza para lograr la suspensión de sangrado. En una modalidad particular de la invención, la magnitud de la modulación localizada pasajera de la estructura y/o función vascular es sustancialmente proporcional a la cantidad de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina semi-cristalina aplicada . La invención se enfoca también hacia material biodegradable que comprende polímeros semi-cristalinos de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina libres de proteína, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos y sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos. En una modalidad, los polímeros semi-cristalinos de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprenden de aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación^ -l->4 y tienen un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 800,000 daltones. En otra modalidad, el polímero semi-cristalino de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 10,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unido en una conformación ß -l->4 y tienen un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 2 millones de daltones. En otra modalidad, el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 50,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación -l->4 y tienen un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 10 millones de daltones. En otra modalidad, el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 150,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß -l->4 y tienen un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 30 millones de daltones. En otra modalidad, el material biodegradable comprende polímeros semi-cristalinos de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina es un material no formador de barrera. En otra modalidad, el polímero semi-cristalino ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina comprende por lo menos un monosacárido de N-acetilglucosamina que es desacetilado . En otros aspectos de esta modalidad, el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina puede comprender aproximadamente 10%, 20%, 30%, 40%, 50% ó 60% de residuos desacetilados, a condición que el polímero de ???-ß-1->4 N-acetilglucosamina parcialmente desacetilado conserve su estructura semi-cristalina de conformidad con lo demostrado por picos agudos, discretos cuando el polímero es analizado por espectroscopia de absorción de IR, de conformidad con lo descrito en el Ejemplo 6, abajo. 4.- BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Estructura química de 100% p-GlcNAc. "n"" se refiere a un número entero hasta aproximadamente 150,000. Figura 2. Análisis de carbohidrato de p-GlcNAc, datos de Cromatografía de Gases de Espectroscopia de Masa. Los cuadrados sólidos representan p-GlcNAc purificada empleando la variación de tratamiento/neutralización del método Químico/Biológico, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Figura 3?. Espectros de dicroísmo circular de membranas sólidas de p-GlcNAc pura. Figura 3B. Espectros de dicroísmo circular de membranas sólidas de p-GlcNAc desacetilada. La desaparición de 211 nm mínimo y 195 nm máximo observada en p-GlcNAc (Figura 3A) indica una desacetilación completa bajo las condiciones utilizadas, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.4 abajo , Figura 4A. Análisis de espectros infrarrojos de membranas delgadas de p-GlcNAc pura de diátomo preparadas por el método de purificación con fuerza mecánica/biológica, arriba, y el método de purificación química/biológica, abajo. Figura 4B. Análisis de espectros infrarrojos de dos preparaciones de "quitina" comercial en membranas de conformidad con los métodos presentados con detalles en la Sección 5.5, abajo. Figura 4C. Análisis de espectros infrarrojos de p-GlcNAc pura que fue modificada por desnaturalización térmica (arriba) y por desacetilación química (abajo) , de conformidad con los métodos detallados en la Sección 5.4, abajo. Figura 4D. Análisis de espectros infrarrojos de membrana de p-GlcNAc derivada del diétomo Thalassiosíra fluviatilis, utilizando un método de purificación química/biológica, de conformidad con lo presentado con detalles en la Sección 5.3.2, abajo. Figura 4E . Análisis de espectros infrarrojos de membrana de p-GlcNAc preparada por el método de purificación con fuerza mecánica, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.1, abajo, después . de autoclave . Figura 5A. Análisis NMR de p-GlcNAc purificada empleando el método de purificación quimica/biológica, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3,2, abajo. Gráfica que muestra las amplitudes picos, áreas y proporciones con relación a controles de referencia. La proporción de las áreas totales de picos. Figura 5B. Análisis NMR de p-GlcNAc purificada empleando el método de purificación química/biológica, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. La gráfica muestra las proporciones de áreas totales de picos. Figuras 6A-B. Micrografias electrónicas de transmisión (TEM) de una membrana de p-GlcNAc preparada por método de purificación para aplicación de fuerza mecánica, según lo descrito en la Sección 5.3.1, abajo. Amplificación: (Figura 6A) , 4190 x; (Figura 6B) , 16,250 x. Figuras 7A-B. Micrografias electrónicas de transmisión (TEM) de una membrana de p-GlcNAc por tratamiento HF de conformidad i con lo descrito en. los comentarios sobre el método de purificación quimica/biológica en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: (Figura 7A) , 5170 x; (Figura 7B) , 8150 x. Figuras 8A-B. Micrografias electrónicas de transmisión (TEM) de una membrana de p-GlcNAc preparada por una variación de tratamiento con ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica, de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: (Figura 8A) , 5270 x; (Figura 8B) , 16,700 x.

Figura 9A. Micrografía electrónica de barrido que muestra una membrana de p-GlcNAc preparada por la variación de tratamiento ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: 200 x. Figura 9B. Micrografia electrónica de barrido que muestra una membrana de p-GlcNAc preparada por la variación de tratamiento ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: 1000 x. Figura 9C. Micrografia electrónica de barrido que muestra una membrana de p-GlcNAc preparada por la variación de tratamiento ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: 5000 x. Figura 9D. Micrografia electrónica de barrido que muestra una membrana de p-GlcNAc preparada por la variación de tratamiento ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: 10,000 x. Figura 9E . Micrografia electrónica de barrido que muestra una membrana de p-GlcNAc preparada por la variación de tratamiento ácido/neutralización del método de purificación quimica/biológica de conformidad con lo descrito en la Sección 5.3.2, abajo. Amplificación: 20,000 x.

Figuras 10A-B. Micrografías electrónicas de barrido de una membrana de p-GlcNAc pura elaborada a partir del material que fue inicialmente producido empleando el método de purificación por disolución celular/neutralización descrito en la Sección 5.3, abajo, disuelta en dimetilacetamida/cloruro de litio, y re-precipitada en ¾0 en una estera, de conformidad con los descrito abajo en la Sección 5.5. Amplificación: (Figura 10A) , 1000 x, (Figura 10B) , 10, 000 x. Figuras 11A-B- Micrografías electrónicas de barrido de una estera de p-GlcNAc desacetilada . Amplificación: (Figura 11A) , 1000 x, (Figura 11B) , 10,000 x. Figuras 12A-B. Fotografías de diátomos. Observe que las fibras de p-GlcNAc se extienden a partir de los cuerpos de células de diátomos . Figura 13. Diagrama que muestra algunas de las p-GlcNAc posibles y derivados desacetilados de material inicial de p-GlcNAc. (Adaptado de S. Hirano, "Production and Application of Chitin and Chitosan in Japan" [Producción y Aplicación de Quitina y Quitosano en Japón], in "Chitin y Chitosan" [Quitina y Quitosano], 1989, Skjak-Braek, Anthonsen y Sanford, eds . Elsevier Science Publis ing Co., páginas 37-43) . Figura 14. Curvas de datos NMR transformadas, empleadas para obtener áreas para cada átomo de carbono y después para calcular las proporciones entre átomos de CH3(área) y átomos de C (área) . Figura 15. Espectro CiJ-NMR de p-GlcNAc típico. Los picos individuales representan la contribución al espectro de cada átomo de carbono único en la molécula. Figura 16. Datos de espectro NMR transformados que representan valores calculados para la proporción entre átomos de CH3(área) a átomos de C(área). Arriba: Presentación gráfica de los datos; abajo: representación numérica de los datos. Figuras 17A-G» Matrices de '-GlcNAc tridimensionales producidas en varios solventes. Específicamente, las matrices de p-GlcNAc fueron producidas en agua destilada (Figura 17A, Figura 17D) , 10% de metanol en agua destilada (Figura 17B) , 25% de metanol en agua destilada (Figura 17C) , 10% de etanol en agua destilada (Figura 17E) , 25% de etanol en agua destilada (Figura 17F) y 40% de etanol en agua destilada (Figura 17G) . Amplificación: 200 x. Una escala de marca de 200 mieras es indicada en cada un de estas figuras. Figura. 18. Una curva estándar típica obtenida utilizando el procedimiento descrito, abajo, en la Sección 18.1. Una curva estándar de este tipo fue utilizada en el ensayo de lisozima-quitinasa también descrito abajo, en la Sección 18.1. Figura 19. Datos de digestión de lisozima de p-GlcNAc. La gráfica presentada aquí muestra la acumulación de N-acetilglucosamina con el paso del tiempo, conforme a las membranas de p-GlcNAc son digeridas con lisozima. La gráfica compara la velocidad de degradación de p-GlcNAc totalmente acetilada con la velocidad de degradación de p-GlcNAc parcialmente (50%) desacetilada, y demuestra que la velocidad de degradación para la p-GlcNAc parcialmente desacetilada fue sustancialmente mayor que en el caso del material de p-GlcNAc totalmente acetilado. Figura 20. Datos de digestión de lisozima de p-GlcNAc. La gráfica presentada aquí muestra la acumulación de N-acetilglucosamina con el paso del tiempo, conforme las membranas de p-GlcNAc son digeridas con lisozima. La gráfica compara la velocidad de degradación de dos membranas de p-GlcNAc parcialmente desacetiladas (específicamente una membrana de p-GlcNAc desacetilada al 25% y una membrana de p-GlcNAc desacetilada al 50%) . Los datos demuestran que la velocidad de degradación se eleva conforme se incrementa el porcentaje de desacetilación, con la velocidad de degradación para la membrana de p-GlcNAc desacetilada al 50% sustancialmente mayor que la velocidad de degradación de la membrana de p-GlcNAc desacetilada al 25%. Figuras 21A-21E. Datos de biodegradabilidad de p-GlcNAc in vivo. Las Figuras 21A-21C muestran ratas que han tenido una membrana prototipo 1 (p-GlcNAc totalmente acetiladas) implantada abdominalmente de conformidad con lo descrito abajo,- en la Sección 18.1. La Figura 21A muestra una rata el dia 0 del implante; la Figura 2IB muestra una rata el dia 14 después del implante; la Figura 21C muestra una rata el dia 21 después del implante. Las Figuras 21D-21E muestran ratas que han tenido un implante de prototipo 3A (membrana de p-GlcNAc parcialmente desacetilada y liofilizada) abdominalmente, de conformidad con lo descrito abajo, Sección 18.1. La Figura 21D muestra una rata el dia 0 del implante; la Figura 21E muestra una rata el dia 14 después del implante. Figuras 22A-22B. Vasoconstricción dependiente de la dosis de anillos aórticos aislados por p-GlcNac, ya sea con la capa endotelial intacta, Figura 22A, o después de la remoción de la capa endotelial, Figura 22B. El número de mediciones de contracción que fueron promediadas para proporcionar los valores reportados en cada concentración de p-GlcNac probada, ya sea con o sin una capa endotelial intacta, es indicado en la figura arriba, de cada concentración de p-GlcNAc probada. Figura 23A-E. Vasoconstricción arterial por p-GlcNac. La Figura 23 (A) muestra una sección transversal de una arteria porcina obtenida 60 minutos después de la aplicación de una gasa sobre un lado de la arteria. La Figura 23 (B) muestra una sección transversal de una arteria porcina obtenida 15 minutos después de la aplicación de una membrana de p-GlcNac sobre un lado de la arteria. La Figura 23 (C) muestra una sección transversal de una arteria porcina obtenida 60 minutos después de la aplicación de una membrana de p-GlcNac sobre un lado de la arteria. La Figura 23 (D) muestra una sección transversal de una arteria porcina obtenida 15 minutos después de la aplicación de un vendaje de colágena revestido con fibrina sobre un lado de la arteria. La Figura 23 (E) muestra un corte transversal de una arteria porcina obtenida 60 minutos después de la aplicación de la venda de colágena revestida con fibrina sobre un lado de la arteria. Figura 24. Vasoconstricción arterial por p-GlcNac. La Figura 24 muestra el espesor de una pared arterial porcina que o bien estuvo (1), o no bien no estuvo (2) en contacto directo con el material probado, durante 15 ó 60 minutos, según lo indicado. Los materiales aplicados a un lado de la arteria fueron: (A) venda de gasa; (B) y (C) membrana de p-GlcNac; (D) y (E) venda de colágena revestida con fibrina. 5.- DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones y métodos útiles para efectuar una modulación transiente, localizada de estructura y/o función vascular, por ejemplo, mediante (1) estimulación de liberación de endotelina-1 , (2) vasoconstricción, y (3) reducción del flujo sanguíneo fuera del vaso roto, que comprende la administración tópica de composiciones y materiales que comprenden polímeros semi-cristalinos de polisacáridos de ???-ß-1->4 M-acetilglucosamina (p-GlcNac) . La estimulación de liberación de endotelina-1, vasoconstricción, y reducción de flujo sanguíneo fuera de un vaso roto en un tejido blanco puede lograrse ya sea por aplicación directa de los materiales de la presente invención sobre el tejido objetivo, o bien por aplicación de estos materiales sobre la piel u otra superficie de órgano o tejido adyacente o contigua al tejido blanco . La presente invención se enfoca también por consiguiente a composiciones y métodos que contribuyen a la suspensión de sangrado o bien causan directamente la suspensión del sangrado. La administración de los materiales de la presente invención, que comprenden polímeros semi-cristalinos de poli-ß-l—4-N-acetilglucosamina, resulta en la estimulación de la liberación de endotelina-1, vasoconstricción y disminución del flujo de sangre fuera de un vaso roto. Estas respuestas fisiológicas, individual y/o colectivamente, contribuyen a la suspensión del sangrado o bien efectúan directamente la suspensión del sangrado, que puede ser un capilar, vena, o arteria. Mientras no deseemos ser limitado una teoría o mecanismo particular, se cree que dicha función del sangrado ocurre en forma independiente de la coagulación. Además, el logro de la suspensión del sangrado empleando las composiciones y métodos de la presente invención es también independiente de la formación de una barrera física o matriz mecánica que promueve la formación de coágulos. Es decir, de conformidad con la presente invención/ el material no tiene que ser un material de formación de barrera que proporciona una matriz mecánica que se adhiere al sitio de la aplicación y sella los limites de la herida. En contraste, las composiciones y métodos de la presente invención inducen una alteración pasajera, localizada de la estructura y/o función vascular, y es esta alteración, la cuál es independiente de la formación de coágulos, que contribuye, per se, a la suspensión del sangrado o bien logra directamente dicha suspensión. Además, los materiales preferidos de las composiciones y métodos de la presente invención comprenden polímeros semi-cristalinos totalmente acetilados de poli-ß-?—»4-N-acetilglucosamina, puesto que, de conformidad con lo demostrado en las ejemplos proporcionados en las secciones 16 y 17, así como en la figura 22, infra, materiales que comprende polímeros desacetilados al 70% de poli-ß-?—>4-N-acetilglucosamina no inducen la vasoconstricción, y por consiguiente, no disminuyen el lumen del vaso, y por consiguiente, no reducen el flujo de sangre fuera de un vaso roto . La invención se basa en parte en el descubrimiento por parte de los solicitantes que materiales aplicados tópicamente que no tienen que ser materiales de formación de barreras, que comprenden polímeros semi-cristalinos de poli-ß-?—>4-N-acetilglucosamina. (p-GlcNac) , inducen una vasoconstricción en anillos aórticos de rata Sprague-Dawley aislados. En este sistema sin sangre, la poli- -l-»4-N-acetilglucosamina totalmente acetilada indujo la concentración de los anillos aórticos e aislados en forma dependiente de la concentración. De conformidad con lo demostrado infra, en el ejemplo presentado en la sección 17, el grado de vasoconstricción que se obtiene fue sustancialmente proporcional a la concentración de p-GlcNac aplicada al anillo aórtico aislado . En contraste la poli-p-l? -N-acetilglucosamina desacetilada al 70% no indujo una vasoconstricción de los anillos aórticos aislados, en ninguna de las concentraciones probadas. Esta invención se base también en parte en el descubrimiento por parte de los solicitantes que la aplicación in vivo de membranas que son formadas de polímeros de poli-ß-?—4-3ST-acetilglucosamina, a heridas experimentales en arterias, estimuló la vasoconstricción inmediata en el sitio de contacto entre el tejido arterial y la membrana aplicada. Un análisis histológico del tejido tratado reveló que la constricción arterial fue mayor en el lado en el cuál la membrana fue aplicada que en el lado opuesto de la arteria. Además, análisis inmunoquímicos de estas muestras de tejido revelaron también la presencia de un gradiente de concentración de liberación de endotelina-1 , es decir, la estimulación de la liberación de endotelina-1 fue una respuesta fisiológica localizada. La magnitud de- la estimulación de la liberación de endotelina-1 fue mayor en la superficie en contacto con la. membrana que contiene polimero-semi-cristalino de poli- -l?4-N-acetilglucosamina, y se extendió en el tejido adyacente, aún cuando en una magnitud que disminuyó conforme se elevó la distancia de la superficie de contacto. Una estimulación localizada similar de liberación de endotelina-1 fue observada en tejido de bazo en contacto con material que comprende poli-ß-?—»4-N-acetilglucosamina semi-cristaliña. Los métodos de la presente invención comprenden administración tópica del materiales que comprenden una forma terapéuticamente efectiva y una cantidad terapéuticamente efectiva de polímeros semi-cristalinos de poli-ß-?—»4-N-acetilglucosamina, a un. paciente, con el objeto de lograr de manera pasajera y localizada: (1) incremento de liberación de endotelina-1, (2) vasoconstricción, y/o (3) reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto. A continuación se presenta primero una descripción de las características físicas del material inicial de p-GlcNac purificado, y de sus re-formulaciones. Después se describe un método para la purificación del material inicial de p-GlcNac a partir de microalgas, de preferencia diátomos, como fuentes iniciales. Tercero, se presentan re-formulaciones de p-GlcNac, y métodos para la producción de tales reformulaciones. Finalmente, se presentan usos para p-GlcNAc, derivados de p-GlcNAc y/o re-formulación de p-GlcNac del material inicial. 5.1 p-GlcNac El material inicial de p-GlcNac puede elaborarse utilizando técnicas descritas aquí, combinadas con las enseñanzas proporcionadas en las patentes norteamericanas Nos . 5,686,115, 5,624,679, 5,623,064 y 5,622,834, las cuales se incorporan aquí por referencia en su totalidad. Los polímeros de p-GlcNac utilizados aquí comprenden de aproximadamente 50 a aproximadamente 150,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina (figura 1) . La pureza del material inicial de p-GlcNac es muy alta como se videncia a través de criterios químicos y físicos. Entre 'ellos se encuentran composición química y contaminantes no polisacáridos . Primero, los datos de composición química para la p-GlcNac producida empleando dos métodos de purificación diferentes, ambos descritos en la sección 5.3, abajo, se muestra en la tabla I abajo. Como se puede observar, la composición química de la p-GlcNac producida por ambos métodos, dentro de los límites de error experimental, es la misma que las composiciones de formula de p-GlcNac. Segundo, como se muestra en la tabla I, la p-GlcNac producida esta libre de contaminantes de proteína detectables, es sustancialmente libre de otros contaminantes orgánicos tales como aminoácidos libres, y es sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos tales como ceniza y iones metal (el material inicial de p-GlcNac puede desviarse hasta aproximadamente 2% de los valores teóricos de carbono, hidrógeno, nitrógeno y oxigeno para la p-GlcNac pura) . Por consiguiente, como se emplea aqui, los términos "sustancialmente libre de contaminantes orgánicos"' y "sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos", se refieren a composiciones de p-GlcNac que tiene los perfiles para carbono, hidrógeno, nitrógeno y oxigeno que no se desvian más que aproximadamente 2% de los valores teóricos y de preferencia el material inicial de p-GlcNac contiene un perfil de conformidad con lo presentado a titulo de ejemplo en los datos experimentales sobre esferas de p-GlcNac en la tabla I (permite una desviación porcentual) . Además, el material inicial para p-GlcNac muestra un bajo porcentaje de agua unida. TABLA I DATOS DE ANÁLISIS QUÍMICO (% en peso) Valores teóricos de p-GlcNac pura: Carbono - 47.29 Hidrógeno - 6.40 Nitrógeno - 6.89 Oxigeno - 39.41 Proteina - 0.00 Datos experimentales sobre esteras de p-GlcNac: (El número de lotes experimentales para cada tipo de memb es mayor que 30 para cada tipo de membrana) MÉTODO DE FUERZA MÉTODO DE QUÍMICO/ MECÁNICA BIOLÓGICO Normalizado1 % Desv. Normalizado1 % Desv.

Carbono 47.21 ± 0.08 -0.17 4-7.31 ± 0.01 +0.04 Hidrógeno 6.45 ± 0.08 +0.78 6.34 ± 0.08 -0.94 Nitrógeno 6.97 ± 0.18 +0.87 6.94 ± 0.16 +0.73 Oxigeno 39.55 ± 0.36 +0.36 39.41 ± 0.10 0.00 Valores promedio Valores promedio Proteina 0.00 0.00 Ceniza 1.30 0.98 Humedad 2.0 1.2 Los datos analíticos brutos han sido normalizados para tomar en cuenta el contenido de ceniza y humedad de las muestras . El material inicial de p-GlcNac pura muestra un perfil de análisis de carbohidratos sustancialmente similar al perfil mostrado- en la figura 2. El monosacárido primario del material inicial de p-Glc-nac puro es N-acetilglucosamina . Además, el material inicial de p-GlcNac puro no contiene la glucosamina de monosacárido. El dicroísmo circular (CD) y los espectros infrarrojos agudos (IR) del material inicial de p-GlcNac se muestran en las figuras- 3A, y en las figuras 4A, 4D y 4E, respectivamente, que presentan análisis de material producido empleando los métodos descritos en la sección 5.3, abajo. Tales datos físicos corroboran que el material inicial de p-GlcNac es de alta pureza y semi-cristalina. La expresión "semi-cristalina" se refiere a la naturaleza altamente ordenada del material. Un experto en la materia observará que los picos agudos, bien definidos observados en los espectros infrarrojos de los polímeros de p-GlcNac de la presente invención reflejan la naturaleza cristalina, altamente ordenada del material (es decir, "semi-cristalina") examinado. La persona con conocimientos en la materia observará también que picos ensanchados, poco definidos en espectros IR de este tipo, por ejemplo lo mostrado en las. figuras 4B y 4C, indican una pérdida o falta de naturaleza semi-cristalina. Los métodos utilizados para obtener los datos de CD e IR, se describen abajo, en el Ejemplo de Trabajo presentada en la sección 6. Análisis del NMR del material inicial de p-GlcNac puro muestra un patrón sustancialmente similar a lo observado en las figuras 5A, 14, 15 y 16. Dicho patrón de NMR indica no solamente datos que son consistentes con el material inicial de p-GlcNac que es un polímero totalmente acetilado, sino que demuestra también la falta de materia orgánica contaminante dentro de las especies de p-GlcNac. La estructura micrográfica electrónica del material inicial de p-GlcNac, de conformidad con lo producido utilizando ios métodos descritos en la sección. 5.3, abajo y demostrada en los Ejemplos de Trabajo presentados abajo en la sección 8 y en la sección 9, se muestra en las figuras 6 a 9E. El material inicial de p-GlcNac presenta un alto grado de biocompatibilidad. La biocompatibilidad puede ser determinado por varias técnicas incluyendo, sin limitarse a estos procedimientos, la prueba de elución, implante intramuscular, o bien inyección intracutánea o sistémica en animales. En resumen, una prueba de elución (Farmacopea norteamericana XXII, 1990, páginas 1415-1497; farmacopea norteamericana XXII, 1991, suplemento 5, páginas 2702-2703) que sea diseñada para evaluar la biocompatibilidad de extractos de artículos de prueba, y ensaya la reactividad biológica de una línea de cultivo de células de mamíferos que es sensible a artículos citotóxicos extraíbles (por ejemplo, la línea de células L929) en respuesta al artículo de prueba. El Ejemplo de Trabajo presentado en la sección 10, abajo, demuestra una alta biocompatibilidad del material inicial de p-GlcNac. 5.2 MÉTODOS PARA PRODUCIR FUENTES DE p-GlcNac A PARTIR DE MICROALGAS 5.2.1. FUENTES DE p-GlcNac A PARTIR DE MICROALGAS El material inicial de p-GlcNac es producido mediante microalgas, de preferencia diátomos y puede ser purificado a partir de dichas microalgas, de preferencia diátomos. Los diátomos de varios géneros y numerosas especies dentro de estos géneros pueden ser utilizados como fuentes iniciales de p-GlcNac. Cada uno de estos diátomos produce p-GlcNac. Véase figuras 12A-B para fotografía de tales diátomos. Los diátomos que pueden ser utilizados como fuentes iniciales para la producción de material inicial de p-GlcNac incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, miembros del género Coscinodíscus, el género Cyclotella y el género Thalassiosira, prefiriéndose el género Thalassiosira. Entre el género Coscinodiscusr las especies de diátomo que pueden ser utilizadas para producir el material inicial de p-GlcNac incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, las especies concinnus y radiatus. Los diátomos entre el género Cyclotella, que pueden ser utilizados incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, las especies caspia, cryptica y meneghiniana. Los diátomos del género Thalassiosira que pueden ser utilizadas para producir el material inicial del material inicial para p-GlcNac incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, las especies nitzschoides, aestivalis, antárctica, deciphens, eccentrica, floridana, fluviatilis, grávida, guillardii , hyalina, minima, nordenskloldii , oceánica, polychorda, pseudonana; rotula, tubifera, rumida, y weíssflogii , prefiriéndose las especies fluviatilis y weissflogii . Diátomos tales como los descritos arriba pueden obtenerse, por ejemplo, a partir de la colección de cultivos del Bigelow Laboratory for Ocena Sciences, Center for Collection of Marine Phytoplankton (McKown Point, West Boothbay Harbor, Me., 04575). 5.2.2. MÉTODOS PARA CULTIVAR DIÁTOMOS Cualquiera de los diátomos descritos en la sección 5.2.1. arriba, puede ser cultivada mediante la utilización, por ejemplo, de los métodos descritos en esta sección. Nuevos cultivos de diátomos son iniciados por inoculación, bajo condiciones asépticas de medio nutriente con una alícuota de un cultivo de diátomos maduros. El medio nutriente debe estar libre de todos los demás microorganismos, por consiguiente todos los materiales, incluyendo agua, componentes orgánicos, y componentes inorgánicos utilizados en la preparación del medio nutriente debe estar estériles. Además, es obligatorio que todos los procedimientos incluidos en esta operación se lleven a cabo bajo condiciones estrictamente aséptica, es decir, todos los recipientes, todas las transferencias de sustancias de un recipiente a otro, etc., deben efectuarse en un entorno estéril. La cantidad de medio nutriente a preparar en un momento dado no debe rebasar lo necesario para empezar un nuevo cultivo. Por ejemplo, frascos de Fernbach que ocupan aproximadamente una superficie de aproximadamente 0.093 m~ (un pie cuadrado) pueden ser utilizados como recipientes para los cultivos de diátomos y tales recipientes requieren de un litro de medio nutriente para un crecimiento óptimo del órgano de diátomo - La preparación del medio nutriente incluye las operaciones siguientes: a) Adquisición y procesamiento de agua de mar b) Preparación de agua destilada y desionizada c) Preparación de soluciones madres de nutrientes primarios d) Preparación de soluciones madres de trabajo de nutrientes e) Preparación de medio nutriente final Agua de mar filtrada puede obtenerse, por ejemplo, a partir de Marine Biology Laboratory (Woods Hole, Mass.) recipientes de agua de mar deben almacenarse a una temperatura de 5°C (+ 2°C) . Cuando se requiere, el volumen necesario de agua puede ser filtrado a través de una unidad de filtración Buchner, utilizando una membrana de filtro de poliéter sulfona Supor-800 con tamaño de poros de 0.8 mieras (Gelman, Inc.). El agua de mar es después esterilizada por tratamiento en autoclave a una temperatura- de 121°C, por ejemplo, durante un periodo de por lo menos aproximadamente 15 minutos por litro. Al terminar el proceso de esterilización, los frascos tapados son inmediatamente enfriados, de preferencia por transferencia a un cuarto frío capaz de permitir que las soluciones alcancen una temperatura de aproximadamente 5°C (+ 2o) . Cuando se tiene que utilizar, se permite que las soluciones alcancen una temperatura ambiente. El agua del grifo es destilada y desionizada empleando equipo y procedimientos estándares, y recogida y almacenada en recipientes limpios, de preferencia de vidrio, bien tapados. A continuación se presentan fórmulas que pueden seguirse para preparar las soluciones madres necesarias para la preparación del Medio Nutriente . Se entenderá que mientras estas fórmulas deben utilizarse como guias, se contempla que variaciones rutinarias de tales fórmulas que contribuyan a la preparación de un Medio Nutriente capaz de sostener un crecimiento de diátomos de microalgas suficientes para los procesos de preparación de p-GlcNac descritos aquí están también dentro del alcance de la presente invención. I.- Soluciones Madres Primarias de Metales a Nivel de Huellas (TMPS) a. - 390 mM CuS04 · 5H20 (pentahidrato de sulfato de cobre [II]) (9.8 g de sulfato de cobre [II] /L) b. - 7.5 mM ZnS04-7H20 (heptahidrato de sulfato de zinc) (22 g de sulfato de zinc/L) c- 42 mN CoCl2-6H20 (hexahidrato de cloruro de cobalto [II]) (10 g de cloruro de cobalto [II] /L) d.- 91 mM MnCl2-4H20 (tetrahidrato de cloruro de manganeso [II]) (18 g de cloruro de manganeso [II] /L) e.- 26 mM NaMo04 · 2H20 (dihidrato de molibdato de sodio) (6.3 g de molibdato de sodio/L) f.- 1 mM H2Se03 (ácido selenioso) (0.129 g de ácido selenioso/L) Filtre en forma estéril cada nutriente con un filtro de un tamaño de poro no mayor que 0.2 miera. II.- Soluciones Madres Primarias de Vitaminas (VPS) a.- 1 mg/ml de Vitamina B12b. 0.1 mg/ml de Biotina Filtre en forma estéril ambas soluciones madres con un filtro de tamaño de poro no mayor que 0.2 miera. III.- Soluciones Madres de Trabajo de Sales de Sodio (SSWS) a.- Solución madre de trabajo de nitrato de sodio: 0.88M (75 g de NaN03/L) b. - Solución madre de trabajo de monohidrato monobásico de fosfato de sodio: 36.2 mM NaH2P04-H20 (5 g de NaH2P04 · H20/L) . Solución madre de trabajo de monohidrato de metasilicato de sodio: O.llM Na2Si03'9H20 (30 g NaSi03 ¦ 9H20/L) Filtre de manera estéril cada una de las SSWS con filtro de tamaño de poro no mayor que 0.2 miera. IV.- Soluciones Madres de Trabajo de Metales a Nivel de Huella (TMWS) 11.7 mM Na2EDTA (ácido Etilendiamina Tetraacético, dihidrato de sal disódica) (4.36 g/L) 11.7 mM FeCl3-6HzO (hexahidrato de cloruro de hierro [III]) (3.15 g/L) 1 ml/L de cada una de las seis soluciones madres de metales a nivel de. huellas primarias mencionadas arriba. Filtre de manera estéril con un filtro de un tamaño de poro no mayor que 0.2 miera.. Obsérvese que la solución madre de trabajo de metal a nivel de huellas debe prepararse fresca cada semana. V.- Solución Madre de Trabajo de Vitaminas (VWS) 1.0 pg/ml Biotina (1.0 mi de Solución Madre de Biotina primaria/100 mi) 1.0 µg ml de Vitamina B12 (0.1 mi de solución madre primaria de Vitamina B12/100 mi) 0.20 mg/ml de hidrocloruro de Tiamina (20 mg de hidrocloruro de Tiamina/100 mi) . Filtre en forma estéril con un filtro de un tamaño de poro no mayor que 0.12 miera. Obsérvese que se deberla preparar cada semana Solución Madre de Trabajo de Vitamina fresca. A continuación se describen técnicas que pueden ser seguidas para la preparación de Medio Nutriente y para el cultivo de diátomos. Se entenderá que, además de estas técnicas, cualquier variación rutinaria en las fórmulas y/o procedimientos descritos aquí que resulten en un Medio Nutriente y en procedimientos capaces de sostener el crecimiento de diátomos suficiente para los procesos de preparación descritos aquí se encuentran dentro del marco de la presente invención. Se puede preparar el Medio Nutriente, por ejemplo, de la forma siguiente: A cada litro de agua de mar esterilizada y filtrada se agrega 1 mi de la solución madre de trabajo de NaN03, 1 mi de la solución madre de trabajo de NaH2P04-H20, 1 mi de la solución madre de trabajo de Metales a Nivel de Huellas, y 1 mi. de la solución madre de trabajo de Na2Si03- 9H20. Simultáneamente, con la adición de Na2Si03' 9H20, se puede agregar 2 mis de HC1 1N y la solución puede ser agitada para que se mezcle. Después, se puede agregar 1.5 mis de NaOH 1N y la solución puede ser agitada otra vez para que se mezcle. Finalmente, se puede agregar 0.5 mi de solución madre de vitamina. Con el objeto de cultivar un nuevo cultivo de diátomo, 7 mi de un cultivo maduro, (que tiene una densidad de células de un rango de aproximadamente 1 x 10° a aproximadamente 1 x 10° células/ml) , pueden ser transferidos a un recipiente estéril que contiene 100 mi de Medio Nutriente estéril, que puede prepararse de conformidad con los métodos descritos arriba. El cultivo inoculado puede ser después incubado ruante 8 días bajo las condiciones siguientes: Temperatura: iluminación constante, 20°C. Agitación: Agitación suave de los frascos una vez al día. Después de 8 dias de incubación, se puede transferir 80 mi de este cultivo incubado, bajo condiciones estériles, a 1000 mi de Medio Nutriente, que puede estar contenido, por ejemplo, en un frasco Fernback de 2.8 L, protegido por un tapón de algodón absorbente cubierto con estupilla. Dicho cultivo puede dejars incubar y crecer hasta la densidad celular deseada, o bien alternativamente, puede ser utilizada para inocular nuevos cultivos de diátomos. Una vez que un cultivo alcanza la densidad celular deseada, las fibras de p-GlcNac del cultivo pueden ser cosechadas, y el material inicial de p-GlcNac puede ser purificado, utilizando métodos tales como los descritos abajo en la Sección 5.3. El C02 puede ser disuelto en la solución de cultivo con el objeto de mantener el pH de cultivo a aproximadamente 7 a 8, prefiriéndose aproximadamente 7.4. El mantenimiento de un entorno de pH neutral de este tipo incrementa en gran medida el rendimiento de p-GlcNac que puede obtenerse a partir de cada cultivo de diátomos. 5.3.- MÉTODOS PARA AISLAR, PURIFICAR Y CONCENTRAR FIBRAS DE p-GlcNac En esta Sección se presentan métodos que pueden ser utilizados para la preparación de fibras de p-GlcNac a partir de cultivos de diátomos tales como los descritos, arriba, en la Sección 5.2. Mientras cada uno de los métodos descritos abajo para la purificación de p-GlcNac a partir de microalgas, de preferencia diátomos, fuentes iniciales producen una p-GlcNac semi-cristalina no adulterada muy pura. Por ejemplo, el material inicial de p-GlcNac puede ser purificado a través del método de Fuerza Mecánica presentado en la Sección 5.3.1, abajo. El segundo método, que se conoce como método Químico/Biológico y es descrito abajo en la Sección 5.3.2, produce un rendimiento promedio mucho mayor que el rendimiento promedio de p-GlcNac obtenido por el método de Fuerza Mecánica. Además, la variación de tratamiento/neutralización de ácido descrita como parte del método Químico/Biológico de la Sección 5.3.2, abajo, produce fibras de p-GlcNac extremadamente largas, con algunas fibras teniendo una longitud mayor que 100 um, y que contiene moléculas de polímero de p-GlcNac de muy alto peso molecular, de hasta 20-30 millones de daltones. La determinación del peso molecular del material inicial polimérico p-GlcNac es determinada utilizando métodos cromatográficos y fisioquímicos bien conocidos por parte de las personas con conocimientos normales en la técnica incluyendo, pero sin limitarse a este ejemplo la medición de la viscosidad intrínseca . 5.3.1.- MÉTODO DE FUERZA MECÁNICA PARA LA PREPARACIÓN DE P-GlcNac PURA. Las fibras de p-GlcNac pueden ser separadas a partir de cuerpos de células de diátomos sometiendo los contenidos del cultivo a una fuerza mecánica apropiada. Dicha fuerza mecánica puede incluir, sin limitarse a estos ejemplos, una fuerza de corte generada por ejemplo por un molino coloidal, un dispositivo de ultrasonido, o un generador de burbujas, o bien una fuer-za de corte generada, por ejemplo, por una mezcladora Waring. La suspensión resultante de cuerpos de células de diátomos y fibras de p-GlcNac son segregadas. Por ejemplo, la suspensión puede ser sometida a una serie de pasos de centrifugación que separan las fibras de p-GlcNac de los cuerpos de las células, proporcionando un sobrenadante claro que presenta poco material floculento visible, o ningún material floculento visible. Un rotor de ángulo fijo, y una temperatura de aproximadamente 10°C se prefieren para los pasos de centrifugación. La velocidad, duración, y el número de total de pasos de centrifugación que se requieren pueden variar según, por ejemplo, el. rotor de centrifugación especifico utilizado, pero la determinación de valores de tales parámetros será, aparente a una persona con conocimientos ordinarios en la materia. Las fibras de p-GlcNac en el sobrenadante pueden ser concentradas después utilizando técnicas bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia. Tales técnicas pueden incluir, sin limitarse a estos ejemplos, dispositivos de succión y filtración. Finalmente, las fibras de p-GlcNac concentradas son lavadas, por ejemplo, con agua destilada-desionizada, HC1 y etanol, y otros solventes apropiados, de preferencia solventes tales como alcoholes, en los cuales se disuelven tanto materiales orgánicos como materiales inorgánicos. El Ejemplo de Trabajo presentado en la Sección 7, abajo, demuestra el uso de este método para la purificación de p-GlcNac. 5.3.2.- MÉTODO QUÍMICO/BIOLÓGICO PARA LA PURIFICACIÓN DE p-GlcNac En este método, fibras p-GlcNac son separadas de cuerpos de células de diátomos sometiéndolas a agentes químicos y/o biológicos de conformidad con lo descrito con mayores detalles abajo. Cultivos de diátomos pueden ser tratados con un agente químico capaz de debilitar las paredes de las células de diátomos, lo que provoca una liberación de fibras de p-GlcNac sin alterar su longitud y estructura. Un elemento químico de este tipo puede incluir, sin limitarse a este ejemplo, ácido fluorhídrico (HF) . Alternativamente, un cultivo de diátomos maduros puede ser tratado por un agente biológico capaz de alterar un proceso biológico puede emplearse para inhibir la síntesis de fibras de p-GlcNac, liberando así las fibras ya presentes. Por ejemplo, dicho agente puede incluir, sin limitarse a este ejemplo, polioxina-D, un inhibidor de la enzima N-acetilglucosaminil-P-transferasa . Los cuerpos de células y las fibras que contienen P-GlcNac de cultivo de diátomos tratados con un miembro de los agentes químicos y biológicos descritos arriba son después segregados. Por ejemplo, los contenidos de cultivos de diátomos tratados pueden asentarse de tal manera que los contenidos de los cultivos puedan formar dos capas distintas. La capa superior contendrá primariamente las fibras de p-GlcNac, mientras que la capa inferior contendrá los cuerpos de las células. La capa que contiene fibras de p-GlcNac superior puede ser removida por sifón, dejando atrás el material celular asentado de la capa de fondo. La capa que contiene fibras de p-GlcNac sifonada puede ser purificada adicionalmente para remover la proteína y otra materia no deseada por tratamiento con un detergente que no daña las fibras de p-GlcNac. Dicho detergente puede incluir, sin limitarse a este ejemplo, dodecil sulfato sódico (SDS) . Cuando se utiliza un tratamiento con ácido, como por ejemplo tratamiento con HF, para separar las fibras de p-GlcNac de los cuerpos de las células de diátomos, se puede incluir un paso para la dispersión de las fibras. El paso puede incluir, sin limitarse a este ejemplo, el uso de fuerza mecánica para dispersión de fibras, como por ejemplo un paso en el cual las fibras sometidas a los movimientos de un agitador orbital. Alternativamente, la suspensión tratada con ácido puede ser neutralizada, en un paso opcional, antes de purificación adicional por tratamiento con detergente. Dicha neutralización cambiará, en general, el pH de la suspensión aproximadamente 1.8 a aproximadamente 7.0f y puede lograrse, por ejemplo, por adición de un volumen apropiado de Tris (pH 8.0) 1M o bien por adición de un volumen apropiado de hidróxido de sodio (NaOH) . La neutralización, en general, proporciona fibras de p-GlcNac puras de una longitud sustancialmente mayor que en el caso de los demás métodos de purificación comentados en el presente documento. Las fibras de p-GlcNac purificadas pueden después concentradas empleando técnicas bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia, como por ejemplo mediante la utilización de un dispositivo de succión y filtración. Finalmente, las fibras de p-GlcNac son lavadas en una serie de pasos con agua destilada/desionizada con HC1 y etanol, u otros solventes apropiados de preferencia solventes tales como alcoholes en donde se disuelven tanto materiales orgánicos como materiales inorgánicos . El Ejemplo de Trabajo presentado abajo, en al Sección 8 demuestra la utilización exitosa de dicho método de purificación. El material inicial de p-GlcNac, o su derivado parcialmente desacetilado, puede ser sometido a condiciones de hidrólisis controlada, que proporcionan grupos de moléculas que tienen un peso molecular discreto uniforme u otras características físicas. Tales condiciones de hidrólisis pueden incluir, por ejemplo, tratamiento con la enzima, lisozima. p-GlcNac puede estar expuesta a lisozima para variar los periodos de tiempo, con el objeto de controlar la magnitud de la hidrólisis. Tales reacciones enzimáticas, de digestión parcial, pueden también ser controladas variando la concentración del sustrato, o de la enzima, o tanto del sustrato como de la enzima, asi como el pH y la temperatura. Además, el régimen de hidrólisis puede ser controlado en función de la magnitud con la cual la ?-GlcNac que está siendo tratada con lisozima ha sido desacetilada . Las condiciones de desacetilación pueden ser de conformidad con lo descrito arriba en esa Sección. Entre más desacetilada una molécula de p-GlcNac, entre aproximadamente 20 y aproximadamente 90 por ciento desacetilada, más completamente será hidrolizada la molécula en un periodo dado de tiempo. Cambios en cuanto a características físicas, además de la disminución del peso molecular, pueden ser causados por hidrólisis y/o tratamientos de desacetilación. Los resultados del procedimiento de hidrólisis/desacetilación se presentan abajo en el Ejemplo de Trabajo de la Sección 9. 5.4.- DERIVACIÓN DE p-GlcNac El material inicial de p-GlcNac totalmente acetilado como puro puede ser derivado, mediante la utilización de varias condiciones y varios procedimientos controlados, en un rango amplio de compuestos diferentes. Véase Figura 13 para un diagrama que muestras algunos de estos compuestos. Tales compuestos derivados pueden incluir, sin limitarse a este ejemplo, p-GlcNac parcialmente desacetilado, que ha sido modificado a través de medios químicos y/o enzimáticos, de conformidad con lo descrito con mayores detalles abajo. Además, p-GlcNac o su derivado parcialmente desacetilado puede ser derivado a través de sulfatación, fosforilación, y/o nitración. Además, como se presenta con detalles abajo, O-sulfonilo, N-acilo, O-alquilo, N-alquilo, y N-alquilideno y N-arilideno y otros derivados pueden ser preparados a partir de la p-GlcNac o bien a partir de material inicial de p-GlcNac parcialmente desacetilado puede ser utilizado para preparar varias sales orgánicas y/o quelatos de metales . Además, el material inicial de p-GlcNac, o un derivado del mismo, puede tener unido a él, ya sea covalente o no covalentemente, cualesquiera de varias moléculas. Además, el material inicial de p-GlcNac, o un derivado del mismo, puede ser sometido a condiciones de hidrólisis controlada que proporcionan grupos de moléculas que tienen características de pesos moleculares uniformes y discretas. Tales materiales son útiles en la presente invención a condición que el polímero de p-GlcNac conserve su estructura semi-cristalina de conformidad con lo demostrado por picos discretos, agudos cuando el polímero es analizado por espectroscopia de absorción de IR. Una o varias de las unidades de monosacáridos de p-GlcNac pueden estar desacetiladas para formar especies parcialmente desacetiladas de poli- -l->4-N-acetilglucosamina. Los monómeros desacetilados pueden estar distribuidos, en general, de manera esencialmente aleatoria en el polímero, o bien pueden estar relativamente agrupados en sub-regíones discretas dentro del polímero de ???-ß-1->4-?-acetilglucosamina. Un material inicial de especies de ????-ß-l->4-N-acetilglucosamina en donde una porción de las unidades de monosacáridos del material inicial de especias de ????-ß-l->4-N-acetilglucosamina ha sido desacetilada tendrá un peso molecular de hasta 30 millones de daltones, incluyendo aproximadamente 150,000 monosacáridos de glucosamina covalenteniente unidos en la configuración ???-ß-1->4-?. ?? una modalidad, por lo menos 90% de las unidades de monosacáridos de glucosamina de la especie de ???-ß-1->4-?-acetilglucosamina permanecen acetiladas mientras que en otra modalidad por lo menos aproximadamente el 80%, 70%, 60%, 50%, ó 40% de las unidades de monosacáridos de la especie de poli-ß-1- -N-acetilglucosamina permanecen acetiladas, a condición que el polímero de poli- -l->4-N-acetilglucosamina parcialmente desacetilado conserve su estructura semi-cristalina de conformidad con lo demostrado por picos discretos y agudos cuando el polímero es analizado es analizado por espectroscopia de absorción de IR, según lo descrito en el Ejemplo 6, abajo, y como se muestra en las Figuras 4A, 4D y 4E, en contraste con los espectros de absorción de IR presentados por polímeros de p-GlcNac no cristalinos, como lo mostrado en las Figuras 4B y 4C. El material inicial de p-GlcNac puede ser desacetilado por tratamiento con una base para proporcionar glucosaminas con grupos amino libres. Este proceso de hidrólisis puede ser efectuado con soluciones de hidróxido de sodio concentrado o hidróxido de potasio a temperaturas elevadas. Sin embargo, para controlar la magnitud de la desacetilación en forma precisa y para evitar la degradación de la cadena principal de carbohidrato de la molécula de polisacárido, es preferible " que un procedimiento enzimático que utiliza una enzima quitina desacetilasa sea utilizado para la desacilación de p-GlcNac. Dicho procedimiento enzimático de desacetilasa es bien conocido por parte de las personas con conocimientos en la materia y puede efectuarse como en el documento (Patente Norteamericana No. 5,219,749), que se incorpora aquí por r eferencia, en su totalidad. Una o varias de las unidades de monosacáridos del material inicial de p-GlcNac puede ser derivada de tal manera que contenga por lo menos un grupo sulfato, o bien, alternativamente, puede ser fosforilada o nitrada, de conformidad con lo indicado abajo: or NHR, en donde R y/o RL, en lugar de un hidrógeno, y/o R2/ en lugar de -COCH3, puede ser un grupo sulfato (-SHO3) , un grupo fosfato (-P(OH)2)/ o un grupo nitrato (-N02) . Abajo se describen métodos a través de los cuales tales derivados de p-GlcNac pueden prepararse. Antes de ' llevar a cabo métodos tales como ios descritos en esta Sección, puede ser provechoso liofilizar primero, congelar en nitrógeno liquido, y pulverizar el material inicial de p-GlcNac. Derivados de p-GlcNac sulfatados pueden ser generados, por ejemplo, mediante un proceso en dos etapas. En la primera etapa, p-GlcNac de 0-carboximetil puede prepararse a partir de p~GlcNac y/o derivados de p-GlcNac del material inicial, por ejemplo, empleando técnicas descritas por Tokura y colaboradores (Tokura, S. y colaboradores, 1983, Polym. J. 1_5:485) . Segundo, el paso de sulfatación puede lograrse con, por ejemplo, trióxido de N, N-dimetil-formamida-trióxido de azufre, de conformidad con las técnicas bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia, como por ejemplo las descritas por Schweiger (Schweiger, R. G., 1972, Carbohydrate Res. 21:219) . El producto resultante puede ser aislado en forma de una sal sólida. Derivados de p-GlcNac fosforilados del material inicial pueden prepararse, por ejemplo, mediante la utilización de técnicas bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia, como por ejemplo las técnicas descritas por Nishi y colaboradores (Nishi, N. y colaboradores, 1986, en "Chitin in Nature and Technology" [Quitina en Naturaleza y Tecnología] , Muzzarelli y colaboradores, eds . Plenum Press, Nueva York, páginas 297-299) . En resumen, una mezcla de p-GlcNac/ácido metansulfónico puede ser tratada con pentóxido de fósforo (aproximadamente en 0.5 a 4.0 equivalentes molares) con agitación, a un temperatura de aproximadamente 0°C a aproximadamente 5°C. El tratamiento puede tener una duración de aproximadamente 2 horas . El producto resultante puede después ser precipitado y lavado empleando técnicas estándares bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia. Por ejemplo, la muestra puede ser precipitada con un solvente como por ejemplo éter, centrifugado, lavado con un solvente, como por ejemplo, éter, acetona, o metanol, y secada. Derivados de p-GlcNac nitrados pueden ser preparados por utilización de técnicas bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia, tales como las técnicas descritas por Schorigin y Halt (Schorigin, . y Halt, E., 1934, Chem. Ger. 67:1712). En resumen, p-GlcNac y/o un derivado de p-GlcNac pueden ser tratados con ácido ni rico concentrado para formar un producto nitrado adecuado. Una o varias de las unidades monosacáridos del material inicial de p-GlcNac pueden contener un grupo sulfonilo, de conformidad con lo ilustrado abajo: en donde R3 puede ser una porción alquilo, arilo, alquenilo, o alquinilo. Dicho derivado puede ser generado por métodos bien conocidos tales como el método descrito en urita y colaboradores (Kurita, K. y colaboradores, 1990, Polym. prep. (Am. Chem. Soc, Div. Polym. Chem.) 31:624-625). En resumen, una solución de p-GlcNac alcalina acuosa puede reaccionar con una solución de cloroformo de cloruro de tosilo, y la reacción puede llevarse a cabo suavemente a bajas temperaturas. Uno o varios de los monosacáridos del material inicial da c-GlcNac o sa derivado desacetilado pueden contener uno o varios grupos O-acilo, de conformidad con lo indicado abajo: NHCRS en donde R y/o R5, en lugar de hidrógeno, pueden 3er una porción alquilo, una porción alquenilo, o una porción alquinilo, y Re puede ser una porción alquilo, una porción alquenilo, o una porción alquinilo. Un ejemplo de un derivado de este tipo puede ser generado por métodos bien, conocidos tales como los descritos por Komai {Komai, T. y colaboradores, 1986, en "Chitin in Nature and Technology" [Quitina en Naturaleza y Tecnología] , Muzzarelli y colaboradores, eds - , Plenuia Press, Nueva York, páginas 497-505) . En resumen, p-GlcNac puede reaccionar con cualquiera de varios cloruros de acilo adecuados en ácido metansulfónico para proporcionar derivados de p-GlcNac que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, derivados de caproilo, caprilo, lanoilo, o benzoilo.

Uno o varios de- los ruónosacáridos del material inicial de p-GlcNac desacetilado pueden contener un grupo N-acilo, de conformidad con lo ilustrado abajo: en donde RT puede ser una. porción alquilo, una porción alquenilo, o una porción alquinilo. Dicha derivación puede ser obtenida mediante la utilización de técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia, tales como la técnica descrita en. Hirano y colaboradores (Hirano, S. y colaboradores, 1975, Carbohydrate Research 47 : 315-320) . p-GlcNac desacetilada es soluble en numerosas soluciones acuosas de ácidos orgánicos. La adición de anhídridos seleccionados a tales soluciones que contienen p-GlcNac, en ácido acético metanólico acuoso, resulta en la formación de derivados de N-acilo-p-GlcNac. Uno o varios de los monosacáridos del material inicial de ?-Gic ac desacetilada o de su derivado desacetilado, pueden contener un grupo O-alquilo, de conformidad con lo presentado or -NIHCOCHy en donde- Re puede ser una porción alquilo, una porción alquenilo o una porción alquinilo . Dicha derivación puede ser obtenida mediante la utilización de técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, el procedimiento descrito por Maresh y colaboradores (Maresh, G. y colaboradores, en "Chitin and Chitosan" [Quitina y Quitosano.] , Skj ak-Braek, G. y colaboradores, eds . , 1989, Elsevier Publishing Co,, páginas 389-395). En resumen, p-GlcNac desacetilada puede ser dispersada en dimetoxietano (DME) y reaccionar con un exceso de óxido de propileno. El periodo de la reacción puede ser de 24 horas, y la reacción se lleva a cabo en una autoclave- a una temperatura de 40 °C a 90 °C. La mezcla puede ser después diluida con agua y filtrada. EL DME puede ser removido por descilación. Finalmente, el producto final puede ser aislado a través de liofilizació . Una o varias de las unidades de monosacáridos del material inicial de p-GlcNac puede ser un derivado alcalino, de conformidad con lo ilustrado abajo: Dicho derivado puede obtenerse a través de técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, un método tal como el descrito por Noguchi y colaboradores (Noguchi, J y colaboradores, 1969, Kogyo Kagaku Zasshi 72.;796-799) puede emplearse. En resumen, p— GlcNac puede ser macerado, en vacio, en NaOH (43%, de preferencia) durante un periodo de aproximadamente dos horas a una temperatura de aproximadamente 0°C. El exceso de NaOH puede ser removido entonces por ejemplo, por centrifugación en una centrifugadora de canasta y por prensado mecánico. Una o varias de las unidades de monosacáridos del derivado desacetilado del material inicial, de p-GlcNac pueden contener un grupo N-alquilo, de conformidad con lo ilustrado abajo: en donde Rg puede ser una porción alquilo, una porción alquenilo, o una porción alquinilo. Dicha derivación puede obtenerse mediante la utilización, por ejemplo, de un procedimiento como por ejemplo el procedimiento de Maresh y colaboradores (Maresh, G. y colaboradores, en "Chitin and Chitosan" [Quitina y Quitosano] , Sk ak-Braek, G. y colaboradores, eds ,r 1989, Elsevier Publishing Co . , páginas 389-395) , de conformidad con lo descrito arriba, para la producción de derivados de O-alquilo p-GlcNac. Una o varias de las unidades de monosacáridos del derivado desacetilado del material inicial de p-GlcNac pueden formar una sal, de conformidad con lo ilustrado abajo: en donde Ru puede ser una porción alquilo, una porción alquenilo o una porción alquinilo . Dicha derivación puede obtenerse mediante técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, un procedimiento como el descrito por Austin and Sennett (Austin, P.R. y Sennett, S., "Chitin in Nature and Technology" [Quitina en Naturaleza Tecnología], 1986, Muzzarelli, R.A.A. y colaboradores, eds.

Plenunt- Press, páginas 279-286) puede emplearse. £n resumen, p-GlcNac desacetilado puede estar suspendido en un medio orgánico, por ejemplo, acetato de etilo o isopropanol, al cuál se puede agregar un ácido orgánico apropiado, por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido glicólico o ácido láctico» La mezcla puede dejarse reposar durante un periodo de tiempo (de 1 3 horas, por ejemplo) . La temperatura de reacción y de secado puede variar de aproximadamente 12° C a aproximadamente 35° C, prefiriéndose de 20° C a 25° C. Las sales pueden ser después separadas por filtración, lavadas con medio fresco, y el medio residual evaporado. Una o varias de las unidades monosacáridas del derivado desacetilado del material inicial de p-GlcNac pueden formar un quelato de metal, de conformidad con lo ilustrado abajo: En donde R12 puede ser un ion metal, en particular de los metales de transición, y X es el enlace dativo establecido por los electrones de nitrógeno presentes en grupos amino y amino sustituido presentes en la p-GlcNac desacetilada .

Una o varias- de las unidades de monosacáridos del derivado desacetilado- del material inicial de p-GlcNac pueden contener un grupo N-alquilideno o un grupo N-arilideno, de conformidad con lo presentado abajo: En donde R3.3 puede ser una porción alquilo, una porción alquenilo, una porción alquinilo, o una porción arilo . Dicha derivación puede obtenerse empleando técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, un procedimiento tal como el descrito por Hirano y colaboradores (Hirano, S y colaboradores, 1981, J. Biomed. Mat. Res. 15_: 903-911) puede emplearse. En resumen, una reacción de N-sustitución de p-GlcNac desacetilada puede efectuarse con anhídridos carboxílicos, y/o arilaldehídos para proporcionar derivados acilo y/o ariiideno. Además, el material inicial de p-GlcNac, o bien su derivado parcialmente desacetilado, puede ser sometido a condiciones de hidrólisis controlada, que proporcionan grupos de moléculas que tienen un peso molecular discreto, uniforme, y otras características físicas. Dichas condiciones de hidrólisis pueden incluir, por ejemplo, tratamientos con la enzima, lisozima. p-GlcNac puede estar expuesta a lisoziraa durante varios periodos de tiempo, con el objeto de controlar la magnitud de la hidrólisis. Además, la velocidad de hidrólisis puede ser controlada en función de la magnitud con la cuál la p-GlcNac que esta siendo tratada con lisozima ha sido desacetilada (véase, por ejemplo los ejemplos proporcionados en la sección 15, e ilustradas en las figuras 18-20) . Dichas reacciones de digestión parcial, enzimáticas, pueden también ser controladas variando la concentración de _ sustrato, la enzima o tanto el sustrato como la enzima, asi como el pH y la temperatura. En otra modalidad, polímeros de p-GlcNac son reducidas en cuanto a tamaño por sonicación que puede variar no solamente por la potencia del instrumento utilizado sino también por el pH, concentración de sal, y temperatura de la muestra. La solubilización de p-GlcNac o derivados se describe abajo en la sección 5.5. Por consiguiente, mediante el uso de uno o varios de estos métodos, ya sea solo o en combinación con otro, se pueden hidrolizar polímeros de p-GlcNac de peso molecular más elevado en fragmentos más pequeños, que pueden ser separados cromatográfreamente según tamaños, empleado, por ejemplo, cromatografía en columna. Por ejemplo, una persona experta en la materia variará la magnitud de la digestión parcial de p-GlcNac para proporcionar productos de reacción que tienen un rango deseado de peso molecular. En otras modalidades, el sustrato utilizado para digestión parcial con lisozima, es p-GlcNac que ha sido sometida a sonicación y/o parcialmente desacetilada. Mediante la combinación de digestión enzimática parcial con técnicas de separación, por ejemplo cromatografía en columna, separación por HPLC u otras técnicas y métodos bien conocidos, una persona con conocimientos en la materia puede asilar productos de digestión con un rango angosto de distribución de pesos moleculares- Además, mediante la combinación de los productos de una serie de reacciones de digestión parcial, una persona experta en la materia puede ensamblar la composición que comprende los polímeros de p-GlcNac que tiene un gama más amplia de especies de pesos moleculares de productos de p-GlcNac, semi-cristalinos que incluyen, por ejemplo, las poblaciones divulgadas aquí, es decir polímeros que consisten de aproximadamente 50 a aproximadamente 150, 000 unidades monoméricas en una modalidad, así como de aproximadamente 50 a aproximadamente 50,000 de aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 unidades monoméricas . Las condiciones de desacetilación pueden ser de conformidad con lo descrito arriba en esta Sección. Entre más cabalmente una molécula de p-GlcNac ha sido desacetilada, entre aproximadamente 20 a aproximadamente 90 por ciento de desacetilación, más completa será hidrolizada la molécula en un periodo dado de tiempo. Cambios en cuanto a características físicas, además de la disminución del peso molecular, pueden ser cansados por hidrólisis y/o tratamientos de desacetilación. Además, una variedad de moléculas puede estar unida funcionalmente de manera covalente o no covalente a los derivados desacetilados del material inicial de p-GlcNac. Tales moléculas pueden incluir, sin limitarse a estos ejemplo, polipéptidos tales como factores de crecimiento, factor de crecimiento de nervios, proteasas, por ejemplo pepsina, hormonas o secuencias de reconocimiento de péptidos tales como secuencias de RGD, secuencias de reconocimiento de fibronectina, laminina, integrina, moléculas de adhesión celular, y similares. Véase, por ejemplo, los compuestos comentados abajo en la sección 5.6.1.1. La fijación covalentes de moléculas sobre las aminas primarias expuestas de p-GlcNac desacetilada por ejemplo mediante fijación química utilizando reactivos de reticulación bifuncionales que actúan como espaciadores químicos de longitudes específicas. Tales técnicas son bien conocidas por parte de las personas con conocimientos en la materia, y pueden parecerse, por ejemplo, a los métodos de Davis y Preston (Davis, M. y Preston, J.F. 1981, Anal. Biochem. 166:404-407) y Staros y colaboradores, (Staros, J.V. y colaboradores, 1986, Anal. Biochem. 156:220-222) . En resumen, residuos carboxilicos en el péptido a unir al material inicial de p-GlcNac desacetilado o parcialmente desacetilado pueden ser activados y después reticulados con p-GlcNac. La activación puede lograrse, por ejemplo, mediante la adición de una solución, por ejemplo carbodiimida EDC (l-etil-3- (3-dimetilaminopropil) carbodiimida) a una solución de péptidos en un amortiguador de fosfato. De preferencia, la solución contendrá además un reactivo, por ejemplo, sulfo-NHS (N- idroxisulfosuccimida) para incrementar el acoplamiento. El péptido activado puede estar reticulado con la p-GlcNac desacetilada mediante la mezcla en un amortiguador con pH alto, por ejemplo, amortiguador de carbonato (pH 9.0-9.2). La actividad biológica del péptido unido (o bien cualquier molécula unida de manera covalente) puede mantenerse variando la longitud de la molécula de enlazador (por ejemplo, el compuesto de reticulación bifuncional) utilizado para fijar la molécula sobre el material inicial de p-GlcNac. Una longitud de enlazador apropiada para una molécula dada a fijar que no alteré la actividad biológica de la molécula sujetada puede determinarse de manera rutinaria. Por ejemplo, la actividad biológica (por ejemplo, un nivel terapéuticamente efectivo de actividad biológica) de una molécula que ha sido unida a través de un enlazador de una longitud dada puede evaluarse mediante la utilización de ensayos bien conocidos específicos para la molécula dada fij ada. Además, con el objeto de mantener la actividad biológica de la molécula que esta siendo fijada, puede ser necesario utilizar un enlazador que puede ser disociado por una enzima apropiada que ocurre naturalmente para liberar el péptido (o bien cualquier molécula unida de manera covalente) . Como arriba, ensayos comúnmente empleados por parte de las personas con conocimientos en la materia pueden utilizarse para efectuar una prueba para determinar la retención de la actividad biológica de la molécula particular que esta siendo unida con el objeto de asegurar que se conserva un nivel de actividad aceptable (es decir, una actividad con un nivel terapéuticamente efectivo) . Alternativamente, moléculas tales las descritas arriba pueden estar unidades de manera no covalente a p-GlcNac y sus derivados empleando técnicas bien conocidas por parte de los expertos en la materia. Por ejemplo, una molécula o varias moléculas que elección pueden mezclarse con suspensiones de p-GlcNac, o bien la solución de p-GlcNac parcialmente desacetilada, con una solución de p-GlcNac-lactato, con una solución de sal de p-GlcNac desacetilada o parcialmente desacetilada, o bien con cualquier solución derivada de p-GlcNac. Las mezclas pueden ser entonces liofilizadas . Las moléculas se unen a las matrices de p-GlcNac después de la liofilización, probablemente a través de interacciones hidrofóbicas, electrostáticas y otras interacciones no covalentes . Tales formulaciones de p-GlcNac son por consiguiente muy fáciles de producir. Además, tales formulaciones pueden ser logradas efectivamente con una amplia gama de moléculas que tienen un amplio espectro de características físicas y propiedades de solubilidad en agua, dentro den un rango de la más hidrofóbica a la más hidrofílica. Al fijarse la molécula o las moléculas, ensayos comúnmente utilizados por parte de los expertos en la materia para probar la actividad de la molécula o las moléculas particula (es) no co alentemente unida (s) pueden emplearse para asegurar que se logra un nivel aceptable de actividad (por ejemplo, una actividad terapéuticamente efectiva) con la molécula fijada. Alternativamente, híbridos que comprenden p-GlcNac y/o derivados de p-GlcNac pueden formarse. Tales híbridos pueden contener cualquiera de varios materiales naturales y/o sintéticos, además de p-GlcNac y/o derivados de p-GlcNac. Por ejemplo, híbridos pueden ser formados a partir de p-GlcNac y/o derivados de p-GlcNac más uno o varios componentes de matriz extracelular (ECM) . Tales componentes de ECM pueden incluir, sin limitarse a estos ejemplos, colágena, fibronectina, glicosaminoglicanos y/o peptidoglicanos . Híbridos pueden también ser formados de p-GlcNac y/o derivados de p-GlcNac más uno o varios materiales sintéticos, por ejemplo polietileno. Dicho híbrido de p-GlcNac/polietileno o derivados de p-GlcNac/polietileno puede elaborarse mediante el enlace térmico de los componentes híbridos, por ejemplo a través de sometimiento a autoclave. Tales polímeros híbridos son útiles en los métodos de la presente invención, a condición que el polímero híbrido conserve la estructura semi-cristalina de p-GlcNac de conformidad con lo demostrado por picos discretos agudos cuando el polímero es analizado por espectroscopia de absorción de IR, según lo descrito en el ejemplo 6 abajo. En el caso de un híbrido de colágena/p-GlcNac, en resumen, una suspensión de p-GlcNac y una solución de colágena pueden mezclarse y liofilizarse, y reticularse, de preferencia reticularse deshidrotérmicamente . Las especies de colágena de tales híbridos pueden ser nativas o sintéticas y pueden ser origen humano o no humano, por ejemplo de bovino. Materiales híbridos de p-GlcNac/colágena y/o derivados de p-GlcNac de colágena presentan propiedades uniformes, y forman una matriz porosa. El ejemplo de trabado presentado en la sección 13 abajo, demuestra la formación, propiedades y utilizada de dicho híbrido de p-GlcNac/colágena. Además, un derivado de yodo-p-GlcNac puede ser copolimerizado por ejemplo con estireno para la fabricación de materiales plásticos novedosos. Se pueden preparar yodo-p-GlcNac a través de un proceso similar al proceso descrito por Kurita e Inoue (Kurita, K. E Inoue, S. 1989, en "Chitin and Chitosan" [Quitina y Quitosano] , Skjak-Braek y colaboradores, eds . , Elsevier Science Publishing Co., Inc., página 365), a través de tosilación e yodinación de p-GlcNac. El derivado yodo de p-GlcNac puede ser entonces dispersados en nitrobenceno y reaccionar con estireno, con fluoruro de estaño (IV) empleándose como catalizador. Híbridos que comprenden combinaciones de p-GlcNac desacetilada y tales compuestos, por ejemplo alginato de sodio y carboximetil p-GlcNac pueden formularse utilizando técnicas tales como las descritas aquí. Dichas combinaciones pueden ser formadas o reformadas, por ejemplo, en membranas y fibras . Complejos de p-GlcNac parcialmente desacetilada con polianiones, por ejemplo ácido poliacrílico o pectina, que poseen tanto cargas positivas como cargas negativas pueden formularse. La formación de estos complejos puede lograrse de conformidad con un método similar al método descrito por Míreles y colaboradores (Míreles, C y colaboradores, 1992, en "Advances in Chitin and Chitosan" [Avances en Quitina y Quitosano], Brine, C.J. y colaboradores, eds., Elsevier Publisher, Ltd) . p-GlcNac parcialmente desacetilado y ácido poliacrílico, carragenano o peptina, por ejemplo, se disuelven en HC1 y NaCl, respectivamente , y las soluciones reactivas con pH igual se mezclan. Esta operación produce moléculas efectivas que poseen tanto características positivas como características negativas útiles, por ejemplo en la inmovilización y compuestos terapéuticos. 5.5 REFORMULACIONES El material inicial de p-GlcNac, asi como derivados parcialmente desacetilados y/o sus derivados, tales como los descritos en la Sección 5.4 arriba, pueden ser disueltos y reformularse subsecuentemente en varias formas y configuraciones. Una solución del material inicial de p-GlcNac puede lograrse por tratamiento con una dimetil acetamida (DMA) /cloruro de litio. p-GlcNac puede ser fácilmente disuelto por agitación en una solución de DMA que contiene 5% de LiCl (en peso de DMA) . Derivados de p-GlcNac solubles en agua, tales como sales de p-GlcNac, pueden ser disueltos en agua. p-GlcNac que ha sido parcialmente desacetilado puede ser puesta en solución, por ejemplo en una solución levemente ácidas, por ejemplo 1% de ácido acético. Los derivados de p-GlcNac que son insolubles en agua pueden colocarse en solución en solventes orgánicos. La derivación de p-GlcNac en DMA; LiCl con isocianato de fenilo puede emplearse producir carbanilatos . Además, la derivación de p-GlcNac en DMA: LiCl con p-sulfonilcloruro de tolueno puede emplearse para producir p-sulfonato de tolueno.

El material inicial de p-GlcNac, sus derivados parcialmente desacetilados y/o sus derivados en solución pueden ser entonces precipitados y reformulados en formas que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, esferas, cadenas, microesferas, microperlas, membranas, fibras, microfibras o polvos, y esponjas. Además se pueden formular membranas uniformes, ultradelgadas (es decir, menos que 1 miera de espesor) . Tales reformulaciones pueden lograrse, por ejemplo, aprovechando el hecho de p-GlcNac pura es insoluble en soluciones tales como agua y alcohol, de preferencia etanol. La introducción, por medios convencionales, por ejemplo inyección, por ejemplo de la DNA/LiCl que contiene p-GlcNac en dicha solución acuosa o alcohólica, de preferencia de etanol, provocará la re-precipitación y por consiguiente la reformulación de la p-GlcNac disuelta. Dicha reformación de p-GlcNac pura se demuestra en el Ejemplo de Trabajo presentado abajo en la sección 11. En el caso de derivados de p-GlcNac solubles en agua, las reformulaciones pueden obtenerse por re-precipitación en tales solventes orgánicos, por ejemplo, acetato de etilo o isopropanol. Reformulaciones de p-GlcNac que ha sido parcialmente desacetilado puede lograse mediante la re-precipitación a una solución alcalina. Derivados de p-GlcNac insolubles en agua pueden ser reformulados por re-precipitación en soluciones acuosas, por ej emplo agua . Membranas de p-GlcNac asi como matrices de p-GlcNac tridimensionales pueden ser producidas a través de métodos que proporcionan la formación de tamaños de poros promedio controlados ya sea dentro de las membranas o de las matrices. El tamaño de pozo puede ser controlado en membranas y matrices mediante la variación de la cantidad de p-GlcNac que se utiliza y mediante la adición de ciertos solventes tales como metanol o etanol, prefiriéndose el etanol, en cantidades especificas, dentro de un rango aproximadamente 5% a aproximadamente 40%, antes de la formación de membranas y/o matrices. En general, entre mayor el porcentaje, menor será el tamaño de poro promedio formado. El ejemplo presentado abajo en la sección 15 demuestra la síntesis y caracterización de tales estructuras de p-GlcNac porosas. En otras modalidades, la p-GlcNac semi-cristalina es formulada como un gel, una espuma, un rocío o bien como una solución o suspensión que comprende microesferas, microperlas, o microfibrilas . Tales formulaciones pueden comprende además una cantidad adecuada de vehículo farmacéuticamente aceptable con el objeto de proporcionar la forma de administración apropiada de la p-GlcNac semi-cristalina al paciente. En una modalidad específica, el término wfarmacéuticamente aceptable" significa aprobada por un agente de regulación de un gobierno federal o de un gobierno estatal o bien listada en la Farmacopea estadounidense o otra Farmacopea generalmente reconocido para su uso en mamíferos, y más particularmente en seres humanos. El término "vehículo" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el cuál se administra un agente terapéutico. Tales vehículos farmacéuticos pueden ser líquidos, por ejemplo agua y aceite, incluyendo los de origen de petróleo, animal, vegetal o sintético, por ejemplo aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí, y similares. Los vehículos farmacéuticos pueden ser solución salina, goma de acacia, gelatina, pasta de almidón, talco, queratina, sílice coloidal, urea, y similares. Además, se pueden utilizar agentes auxiliares de estabilización, de espesamiento, lubricación y colorantes. Cuando se administra a un paciente, la p-GlcNac y los vehículos farmacéuticamente aceptables son de preferencia estériles. Soluciones salinas y soluciones acuosas dextrosa y solución soluciones de glicerol con vehículos líquidos. Vehículos farmacéuticos adecuados incluyen también excipientes tales como almidón, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, arroz, harina, gis, gel en sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, lecha descremada seca, glicerol, propileno, glicol, agua, etanol y similares. Composiciones de p-GlcNac, si se desea, pueden contener también cantidades menores de agentes humectantes emulsificantes, o bien agentes de amortiguación de pH. Composiciones que contienen p-GlcNac pueden tomar la forma de soluciones/ suspensiones, supositorios, emulsiones, aerosoles, roclos o cualquier otra forma adecuada para su uso. Otros ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", por E.W. Martin. Aún cuando las composiciones y formulaciones de p-GlcNac serán suministradas como forma de dosificación pre-mezclada, en otras modalidades, la p-GlcNac semi-cristalina divulgada aqui puede ser suministrada separadamente, por ejemplo, como un polvo liofilizado seco o bien un concentrado anhidro en un recipiente herméticamente sellado, por ejemplo, una ampolleta o un sobre que indica la cantidad de agente activo, que puede estar suspendido o disuelto en una concentración deseada en el vehículo farmacéuticamente aceptable o solvente antes de uso . La cantidad de la p-GlcNac semi-cristalina efectiva en el tratamiento del trastorno o condición particular dependerá de la naturaleza del trastorno o de la condición, y puede determinarse a través de técnicas clínicas estándares. Además, ensayos in vitro o in vivo pueden opcionalmente emplearse para ayudar a identificar rangos óptimos de dosificación. La dosis precisa de la p-GlcNac semi-cristalina a emplear en las composiciones dependerá también de la via de administración-.- y de la gravedad de enfermedad o trastorno, y será decidida tomando en cuenta el oficio del medio y las circunstancias de cada paciente. Sin embargo, la p-GlcNac semi-cristalina es aplicada en general tópicamente dentro de un rango de aproximadamente 1 mg/cm2 a aproximadamente 500 mg/cm2. En otras modalidades, la p-GlcNac semi-cristalina es aplicada generalmente tópicamente dentro de un rango de aproximadamente 2 mg/cm2 a aproximadamente 100 mg/cmz, de 5 mg/cm2 a aproximadamente 50 mg/cmz, y de 10 mg/cm2 a aproximadamente 20 mg/cm2. Dosis efectivas pueden ser extrapoladas a partir de curvas de dosis-respuesta derivadas de sistemas de pruebas con modelos de animales o in vitro . Además de los presentados infra en los ejemplos ofrecidos en las secciones 16 y 17, otros sistemas de prueba de modelo de animales bien conocidos en la técnica incluyen, sin limitarse a ellos, los siguientes: (a) un modelo porcino de hepatectomia parcial para evaluar un tratamiento de hemostasis de conformidad con lo descrito por Davidson y colaboradores (Davidson y colaboradores, 2000, Br. J. _87 ( 6) : 790-95) ; (b) un modelo de ulcera sangrante, canina, para evaluar tratamientos contemplados para lograr hemostasis es descrito por Pasricha y colaboradores (Pasricha y colaboradores, 1999 Gastointest Endose 49 (5) : 627-31) ; (c) un modelo de sangrado quirúrgico en la rata, basado en tratamiento de incisiones hepáticas, ha sido descrito por Sirieix y colaboradores (Sirieix y colaboradores 1998 Ann. Vasc. Suxg 12_(4) -.311-16) ; (d) un método para evaluar la vasoconstricción en anillos aórticos torácicos de rata aislados con endotelio intacto ha sido descrito por Kim y colaboradores (Kim y colaboradores, 2000 J Lab Clin Med 135 (2) .-180-87; véase también Guo y colaboradores, 1994 Methods Find Exp Clin Pharmacol 15 (5) : 347-54) ; (e) un modelo experimental contemplado para medir tanto el diámetro de los vasos como el flujo de sangre a través de este vaso en el conejo ha sido descrito por Carón y colaboradores (Carón y colaboradores 1998 ñrtif cells Blood Subsit Immobll Biotechnol 26 (3) : 293-308) ; (f) un método que permite la observación directa de microvasos uterino en la rata, permitiendo la evaluación de los diámetros circunferenciales de arteriolas en función de la cantidad de agente vaso activo aplicado ha sido descrita por Alsip y colaboradores, (Alsip y colaboradores 1996 Am J Obstent Bynecol 175 (2) : 388-95) ; y (g) un sistema de modelo que utiliza ratas espontáneamente hipertensas ha sido descrito por Schiffrin y colaboradores, que inter alia, evalúa el nivel de endotelina inmunoreactiva en vasos sanguíneos utilizando procedimientos de radioinmunoensayo (Schiffrin y colaboradores 1995 Br J Pharmacol 115 (8) : 1377-81) . La formulación particular de p-GlcNac semi-cristalina utilizada variará según la aplicación contemplada. Por ejemplo, p-GlcNac semi-cristalina puede ser formulada y fabricada como una membrana, un vendaje, etc., para aplicación directa a una superficie accesible- En tales formulaciones, la p-GlcNac semi-cristalina puede combinarse con uno o varios materiales incluyendo, sin limitarse a estos ejemplos, fibras naturales o fibras artificiales, y/o reformularse como copolimero de conformidad con lo descrito aquí. La cantidad de p-GlcNac semi-cristalina/cm¿ formulada en un material de este tipo es determinada por el uso contemplado, por ejemplo, los rangos más bajos para el tratamiento, Ínter alia de cortes y rasguños menores y los niveles de p-GlcNac más altos para el tratamiento de lesiones más serias. El tamaño, la forma, el espesor y la composición global incluyendo la cantidad total de p-GlcNac semi-cristalina formulada aquí, de tales materiales es determinada similarmente por el uso contemplado. En el caso en el cuál la p-GlcNac semi-cristalina debe ser administrada tópicamente sobre una superficie que no es fácilmente accesible, por ejemplo, cavidades orales o nasales o bien heridas profundas en el cuerpo, la p-GlcNac semi-cristalina es formulada inter alia, como un gel, una espuma, un rocío, una emulsión, una suspensión o una solución empleando los vehículos farmacéuticamente aceptables divulgados aquí. Tales formulaciones que habitualmente no son de materiales formadores de barrera, comprenden generalmente microesferas, microperlas, o microfibrilas formadas de p-GlcNac seml-crístalina, y pueden comprender además materiales que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, fibras naturales o artificiales, y/o p-GlcNac semi-cristalina reformulada como un copolímero de conformidad con lo descrito aquí. Otra vez, la cantidad y/o concentración de p-GlcNac semi-cristalina incluida en tales formulaciones dependerá del uso contemplado, y será aparente a los expertos en la materia y fácilmente determinada a través de una prueba de rutina in vitro e in vivor especialmente con sistemas de modelos de animales bien conocidos en la técnica. Puesto que los efectos de modulación de la p-GlcNac semi-cristalina sobre la estructura y/o función vascular están localizados y pasajeros, la administración de formulaciones que comprenden p-GlcNac semi-cristalina puede repetirse a intervalos, hasta que se resuelva la condición a corregir. En general, tales intervalos son de aproximadamente una hora pero pueden ser más cortos o más largos, según la naturaleza de la. condición tratada y según la cantidad de la p-GlcNac semi-cristalina aplicada. En los casos en los cuales una composición que comprende una formulación de p-GlcNac semi-cristalina ha sido aplicada sobre una superficie relativamente no accesible, se prefieren composiciones y formulaciones biodegradables . 5.6 USOS El material inicial de p-GlcNac tiene varios usos, incluyendo modulación de la estructura y/o función vascular a través, por ejemplo, de la estimulación de la liberación de endotelina-1 , vasoconstricción reducción de flujo de sangre a partir de un vaso roto, así como la contribución a la suspensión del sangrado o bien el logro de la suspensión del sangrado. La p-GlcNac aplicada tópicamente a la presente invención es biocompatible, biodegradable, no tóxica y no pirogénica. Puesto que los materiales de p-GlcNac de la presente invención son también inmunoneutrales, no provocan una respuesta inmune en seres humanos y por consiguiente son especialmente provechosos para su utilización en la formulación de los dispositivos divulgados aquí, que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, películas, membranas, geles, microesferas, microperlas, microfibrilas, espumas y rocío. Ciertos materiales adicionales tales como alginatos naturales y en algunos casos polímero sintético pueden también utilizarse en la construcción de tales materiales y dispositivos, en combinación con la p-GlcNac descritas aquí a condición que el polímero de poli-ß-?—>4 N-acetilglucosamina conserve su estructuras semi-cristalina de conformidad con lo demostrado por picos agudos, discretos cuando el polímero es analizado por espectroscopia de absorción de IR, de conformidad con lo descrito en el ejemplo 6, abajo. En una modalidad, la p-GlcNac consiste esencialmente --= de polímeros semi-cristalinos totalmente acetilados de ß-l—»4 N-acetilglucosamina en donde el polímero comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 150,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ???-ß-1?4, libre de proteina, sustancialmente libre de otros contaminantes orgánicos, sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos, y que tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 30 millones de daltones. En otras modalidades, la p-GlcNac consiste esencialmente de polímeros semi-cristalinos totalmente acetilados de ß-1—>4 N-acetilglucosamina en donde el polímero comprende aproximadamente 50 a aproximadamente 50,000, de aproximadamente 50 a aproximadamente 10,000, o aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1—»4, libre de proteína, sustancialmente libre de otros contaminantes orgánicos, sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos y que tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 10 millones de daltones, de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 2 millones de daltones, y de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 80,000 daltones, respectivamente. 5.6.1. ESTIMULACIÓN DE LIBERACIÓN DE ENDCTELINA-1 Materiales de p-GlcNac de la presente invención, se utilizan, por ejemplo, para estimular la liberación de endotelina-1 de conformidad con lo demostrado exitosamente en el ejemplo presentado en la sección 16, abajo. La estimulación de la liberación de endotelina-1 se empleas, ínter alia, para el tratamiento de menorragia asociado con niveles notablemente más bajos .de producción de endotelina-1 por el tejido endometrial uterino. La estimulación de la liberación de endotelina-1 se logra por aplicación tópica de composiciones y materiales que comprenden p-GlcNac al tejido objetivo de un mamífero humano o no humano, incluyendo, pero sin limitarse a estos ejemplos, animales veterinarios mascotas. Tales materiales y composiciones pueden comprender ciertos materiales adicionales tales como alginatos naturales y, en algunos casos, polímeros sintéticos, en combinación con la. p-GlcNac descrita aquí. La p-GlcNac de tales composiciones y materiales, en modalidades preferidas, consiste esencialmente de polímeros semi-cristalinos, totalmente acetilados de ß-1—»4 N-acetilglucosamina libres de proteínas, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos, y sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos, y tienen un peso molecular de hasta aproximadamente 30 millones de daltones. Materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac son formulados y aplicados por ejemplo como geles, películas, membranas y esponjas. Tales materiales pueden también ser formulados y aplicados como una solución o suspensión de microesferas, microperlas, microfibrilas, o bien como una espuma o rocío. Por consiguiente, los materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac no tienen que ser materiales formadores de barreras. Composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, son aplicados directamente al tejido blanco, es decir, al tejido en el cuál se desea estimular la liberación de endotelina-1, que podría ser, por ejemplo, tejido endometrial uterino de pacientes afectados por menorragia. El tejido blanco es, en general, tejido endotelial, y más particularmente incluye vasos sanguíneos que pueden ser arterias, venas o capilares. Los materiales que comprenden p-GlcNac semi-cristalina son aplicados tópicamente, por ejemplo, en forma de un gel, película, membrana, esponja, rocío o espuma así como suspensión, emulsión o solución de microesferas, microperlas, o microfibrilas . La aplicación tópica de los composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, estimulan, con relación al tejido blanco no tratado con p-GlcNac, la liberación de endotelina-1 en el tejido blanco que es localizada, pasajera y depende de la dosis de p-GlcNac administrado. La estimulación de la liberación de endotelina-1 es localizada en la medida en que es más notable en el tej ido en contacto directo con el material que comprende p-GlcNac, y además, el grado de estimulación de liberación de endotelina-1 en el tejido adyacente disminuye conforme la distancia desde el punto de contacto entre el tejido objetivo y el material que comprende p-GlcNac se eleva (véase, por e emplo, el ejemplo presentado en la sección 16, ínfra) . La estimulación de la liberación de endotelina-1 es pasajera en la medida en que el nivel de endotelina-1 en el tejido en contacto con el material que comprende p-GlcNac semi-cristalina es mayor poco después de la administración de tales materiales y disminuye después a los niveles observados antes de la estimulación. Es decir, la concentración de endotelina-1 en el tejido en contacto es mayor generalmente a más tardar 15 minutos después de la administración de p-GlcNac semi-cristalina, y la concentración de endotelina-1 regresa sustancialmente al nivel observado inmediatamente antes de este contacto, dentro de aproximadamente 60 minutos después de la administración de p-GlcNac semi-cristalina (véase por ejemplo, el ejemplo presentado en la sección 16, ínfra) . Por consiguiente, en los casos que requieren de una estimulación prolongada de liberación de endotelina-1, alícuotas adicionales o dosis de composiciones y/o materiales formulados con p-GlcNac semi-cristalina se aplican al tejido blanco, de manera secuencial. La estimulación de la liberación de endotelina-1 depende de la dosis en la medida en que el nivel de endotelina-1 liberado por el tejido endotelial en contacto con el material que comprende p-GlcNac es sustancialmente proporcional a la cantidad de p-GlcNac en este material (para una demostración representativa de dicho efecto "sustancialmente proporcional", véase, por ejemplo, el ejemplo presentado en la sección 16, infra) . Por consiguiente, composiciones y materiales son formulados y construidos de tal manera que contengan el nivel de p-GlcNac requerido para el nivel de estimulación de liberación de endotelina-1 que se requiere. La determinación de tales niveles es fácilmente establecida a partir de experimento in vitro de rutina, y prueba con modelo de animales. Por consiguiente, en los casos en los cuales se requiere de un mayor grado de estimulación de la liberación de endotelina-1, composiciones y materiales son formulados con una concentración incrementada de p-GlcNac. 5.6.2. INDUCCIÓN DE LA VASOCONSTRICCIÓN Materiales de p-GlcNac de la presente invención son utilizados, por ejemplo, para inducir la vasoconstricción de conformidad con lo demostrado exitosamente en los ejemplos presentados en las secciones 16 y 17, abajo, asi como de conformidad con lo ilustrado en la figura 22. La vasoconstricción se logra por aplicación tópica de composiciones y materiales que comprenden p-GlcNac semi-cristalina a -tejido objetivo de un mamífero humano o no humano, incluyendo, pero sin limitarse a estos ejemplos, animales veterinarios y mascotas . Las aplicaciones clínicas para las cuales la aplicación tópica de composiciones que comprenden p-GlcNac semi-cristalina son útiles incluyen, Ínter alia, el uso en procedimientos de diagnóstico que resultan en heridas de biopsia, por ejemplo, en el hígado y en el riñon, o bien que resultan en heridas de punción en vasos sanguíneos, por ejemplo, procedimientos de cateterización cardiaca y angioplastía de globos. Los métodos de la presente invención, son por consiguiente particularmente útiles en pacientes que padecen de cualquier forma de coagulopatía, que puede prevenir de un defecto genético o de la administración de un agente anticoagulante, por ejemplo, coumadina o heparina. Mientras no deseados limitarnos a ninguna teoría o mecanismo particular, se cree que la vasoconstricción provocada por la aplicación tópica de p-GlcNac semi-cristalina reduce físicamente el tamaño de la herida de punción y por consiguiente facilita o efectúa la suspensión del sangrado de una manera y a través de un mecanismo que no depende de la formación de coágulos . Los materiales y composiciones utilizados en la presente invención pueden comprender ciertos materiales adicionales, por ejemplo, alginatos naturales y, en algunos casos, polímeros sintéticos en combinación con la p-GlcNac descrita aquí. La p-GlcNac de tales composiciones y materiales, en modalidades preferidas, consiste esencialmente de polímeros totalmente acetilados, semi-cristalinos de ß-1—>4 N-acetilglucosamina, libres de proteína, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos, y sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos, y que tienen un peso molecular de hasta aproximadamente 30 millones de daltones. Materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, son formulados por ejemplo como geles, películas, membranas y esponjas. Tales materiales pueden también ser formulados y aplicados en forma de una solución o suspensión de microesferas, microperlas, microfibrilas o bien en forma de un rocío o espuma. Por consiguiente, los materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac no tienen que ser materiales formadores de barreras. Composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, son aplicados sobre la piel u otros tejido adyacente al tejido blanco contiguo al tejido blanco, o bien son aplicados directamente al tejido blanco, es decir, tejido o vaso en el cuál se desea inducir la vasoconstricción. El tejido blanco o el vaso blanco incluye, en general, arterias, venas, o capilares. Los materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac son aplicados tópicamente, por ejemplo, en forma de un gel, película, membrana o esponja, rocío o espuma, o bien como suspensión o solución de microesferas, microperlas o microfibrilas . La aplicación tópica de composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, estimula la vasoconstricción que es localizada y pasajera, y depende de la dosis de p-GlcNac administrada. La inducción de la vasoconstricción es localizada en la medida en que es más notable en los vasos en contacto directo con el material que comprende p-GlcNac, y además, el grado de estimulación de la vasoconstricción disminuye conforme se eleva la distancia entre el punto de contacto del material que comprende p-GlcNac y el vaso blanco. La estimulación de la vasoconstricción es pasajera en la medida en que el grado de vasoconstricción es mucho más fuerte poco después de la administración de los materiales de p-GlcNac de la presente invención, y disminuye después hasta los niveles observados antes de la estimulación. Es decir, el grado de vasoconstricción es mayor generalmente a más tardar 15 minutos después de la administración de p-GlcNac, y después disminuye hasta sustancialmente los niveles de control, dentro de aproximadamente 50 minutos después de la administración de p-GlcNac. Por consiguiente, en los casos que requieren de una vasoconstricción prolongada, alícuotas adicionales o dosis adicionales de composiciones y/o materiales formulados con p-GlcNac se aplican al tejido blanco de manera secuencial. La inducción de la vasoconstricción depende de la dosis en la medida en que el grado de vasoconstricción en los vasos en contacto con el material que comprende p-GlcNac es sustanciaimente proporcional a la cantidad de p-GlcNac en este material. Por consiguiente, composiciones y materiales son formulados y construidos de tal manera que contengan el nivel de p-GlcNac requerido para el grado de vasoconstricción deseado. La determinación de tales niveles de p-GlcNac es fácilmente determinada a partir de experimentos in vitro de rutina y prueba con modelos de animales. Por consiguiente, en los casos en los cuales se requieren de una mayor inducción de vasoconstricción, composiciones y materiales son formulados con una concentración incrementada de p-GlcNac. 5.6.3. REDUCCIÓN DEL FLUJO DE SANGRE FUERA DE UN VASO ROTO Los métodos de la presente invención que comprenden la administración tópica de materiales que comprenden p-GlcNac, se emplean, también, por ejemplo, para reducir el flujo de sangre a partir de un vaso roto en el tejido blanco. Usos clínicos para la aplicación tópica de p-GlcNac con el objeto de reducir el flujo de sangre de un vaso roto, incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, el tratamiento de aneurismos aórticos abdominales, tratamiento de embolización de tumores, lesiones de fibromas uterinos así como aneurismas cerebrales, heridas que incluyen, por ejemplo, lesiones al Bazo, hígado y vaso sanguíneo y en procedimientos quirúrgicos estándares y mínimamente invasivos, por ejemplo, intervención quirúrgica de endometriosis y operaciones de la vesícula biliar. En cada uno de estos ejemplos, la reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto como resultado de la aplicación tópica de materiales que contienen p-GlcNac, resultan en una reducción de la perdida de sangre durante la intervención. Por consiguiente, el uso de composiciones y métodos divulgados aquí para provocar la vasoconstricción es particularmente útil para el tratamiento de una condición de este tipo en pacientes que adolecen de cualquier forma de coagulopatía, que pueden surgir de un defecto genético o bien de la administración de agente anticoagulante, por ejemplo coumadina o heparina. Materiales y composiciones utilizadas en los métodos de la presente invención pueden comprender ciertos materiales adicionales, por ejemplo, alginatos naturales y, en algunos casos, polímeros sintéticos, en combinación con la p-GlcNac descrita aquí. La p-GlcNac de tales composiciones y materiales, en modalidades preferidas, consiste esencialmente de polímeros semi-cristalinos totalmente acetilados de ß-l—»4 N-acetilglucosamina, en donde el polímero está libre de proteína, sustancialmente libre de otros contaminantes orgánicos, sustancialmente libre de contaminantes inorgánicos y tiene un peso molecular de hasta aproximadamente 30 millones de da-ltones . Materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac, son formulados, por ejemplo, como geles, películas, membranas y esponjas. Tales materiales pueden también ser formulados y aplicados como una solución o suspensión de microesferas, microperlas o microfibrilas, y/o aplicados como espuma o rocío. Por consiguiente, los materiales de la presente invención que comprenden p-GlcNac no tienen que ser materiales formadores de barrera. Composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, o bien se aplican a la piel u otro tejido adyacente o contiguo al tejido blanco, o bien se aplican directamente al tejido blanco, es decir, tejido o vaso sanguíneo en donde se desea reducir el flujo de sangre fuera de un vaso roto. El vaso blanco puede ser una arteria, vena o capilar. Los materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, son aplicados tópicamente, por ejemplo, como un gel, película, membrana, esponja, rocío o espuma, o bien como una suspensión de solución de microesferas o microperlas y/o microfibrilas La aplicación tópica de las composiciones y materiales de la presente invención, que comprenden p-GlcNac, induce una reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto que es localizada, pasajera y depende de la dosis de p-GlcNac administrada. La. reducción de la sangre que sale de un vaso roto, es localizada en la medida en que es más notable en vasos en contacto directo con el material que comprende p-GlcNac, y además, el grado de reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto disminuye conforme se eleva la distancia desde el punto de contacto entre el material que comprende p-GlcNac y el vaso blanco. La reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto es pasajera en la medida en que la reducción en el flujo sangre en contacto con el material que contiene p-GlcNac es mayor poco después de la administración de tales materiales y el flujo de sangre de un vaso roto regresa después a los niveles de control. Es decir, el grado de reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto es generalmente mayor a más tardar 15 minutos después de la administración de p-GlcNac, y después la sangre que fluye a partir de un vaso roto regresa a los niveles de control dentro de aproximadamente 60 minutos después de la administración de p-GlcNac. Por consiguiente, en los casos que requieren de una reducción prolongada de flujo de sangre fuera de un vaso roto, alícuotas adicionales o dosis adicionales de composiciones y/o materiales formulados con p-GlcNac se aplican al tejido blanco o al vaso blanco en forma secuencial. La reducción del flujo de sangre fuera de vaso roto depende de la dosis en la medida en que la reducción del flujo de sangre fuera de vasos en contacto con el material que contiene p-GlcNac es sustancialmente proporcional a la cantidad de p-GlcNac en este material. Por consiguiente, composiciones y materiales son formulados y construidos de tal manera que contengan el nivel de p-GlcNac que se requiere para la reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto que se desea. La determinación de tales niveles es efectuada fácilmente a partir de experimentos in vitro de rutina y prueba con modelos de animales. Por consiguiente, en los casos en los cuales se requiere de un mayor grado de reducción de flujo de sangre fuera de un vaso roto, composiciones y materiales son formulados con una concentración incrementada de p-GlcNac. 5.6.4. INDICACIONES ESPECÍFICAS PARA USO DE LOS MÉTODOS DIVULGADOS Casos específicos en los cuales la estimulación de la liberación de endotelina-1 , vasoconstricción, y/o reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto, así como la suspensión del sangrado se desean incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, el uso de procedimientos de diagnóstico que resultan en heridas de biopsía, por ejemplo en hígado y riñon; en procedimientos de embolización que incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, la prevención de sangrado después de tratamiento endovascular de aneurismos aórticos abdominales, así como tratamientos de embolización de tumores, lesiones de fibromas uterinos asi como aneurismos cerebrales; para el tratamiento de la menorragia; en heridas incluyendo, por ejemplo, lesiones al bazo, hígado y vasos sanguíneos; en procedimientos quirúrgicos, estándares y mínimamente invasivos, por ejemplo, intervención quirúrgica de endometriosis y operaciones en la vesícula biliar; en reparación de heridas de tejidos blancos y duros, por ejemplo, heridas cutáneas y curación de quemaduras; en procedimientos quirúrgicos, especialmente en el caso de heridas esplénicas; y para diagnostico de punción de vasos sanguíneos y procedimientos de tratamiento tales como cateterización y angioplastía con globos. El material de inicio basado en p-GlcNac, que puede ser formulado en forma de un material sólido o como un gel, espuma, rocío, emulsión, suspensión o solución que comprende microperlas, microesferas o microfibrilas de p-GlcNac, puede aplicarse utilizando procedimientos quirúrgicos estándares y puede utilizarse tanto con intervenciones quirúrgicas estándares como con intervenciones quirúrgicas mínimamente invasivas. Los geles de la presente invención pueden ser administrados, por ejemplo, por extrusión a partir de un dispositivo de tipo jeringa o "bien en combinación con una membrana o película. La membrana o película puede fabricarse a partir del material basado p-GlcNac totalmente acetilado u otros materiales naturales o sintéticos.

Con relación a los procedimientos de punción de vasos sanguíneos mencionados arriba, las composiciones y materiales de la invención, que se utilizan para estimular la secreción de endotelina-1, vasoconstricción y reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto pueden aplicarse al momento en el cuál una funda de catéter es removida de un vaso sanguíneo mediante la aplicación del material basado en p-GlcNac directamente a la piel en combinación con una compresión manual o introducido en la trayectoria de catéter. Alternativamente, un dispositivo que detecta la remoción de la funda de catéter a partir del vaso sanguíneo puede ser desarrollado utilizando sistemas electrónicos o mecánicos que monitorean las diferencias químicas, físicas o de otros tipos entre la parte interna del tejido y la parte externa del tejido del vaso. Por ejemplo, la diferencia en cuanto a características dinámicas o disipación de calor puede detectarse cuando una sonda es removida del vaso; en este momento, la señal es enviada para iniciar la aplicación de la composición o material que comprende p-GlcNac, lo que estimulará la liberación de endotelina-1 inducirá la vasoconstricción y/o reducirá el flujo de sangre fuera de un vaso roto . Los métodos de la presente invención, que comprenden administración tópica de p-GlcNac, de preferencia polímeros semi-cristalinos, altamente ordenados, totalmente acetilados de p-GlcNac, para inducir la liberación de endotelina-1, vasoconstricción y reducción de sangre que fluye de un vaso roto pueden emplearse en combinación con los métodos y composiciones útiles para lograr la hemostasis. Tales otros métodos y composiciones incluyen, sin limitarse a estos ejemplos (1) la aplicación de materiales formadores de barrera que ofrecen una matriz impermeable a los eritrocitos, y plaquetas y que pueden concentrar los factores circulantes requeridos para la cascada de la coagulación, y (2) aplicación a una herida de materiales que comprenden componentes de la cascada de coagulación incluyendo, por ejemplo, trombina, fibrinógeno, y Factor 13. Los métodos de la presente invención pueden también utilizarse de manera profiláctica con el objeto de minimizar la necesidad de métodos y composiciones para lograr la hemostasis cuando se anticipa dicha necesidad o bien incrementar la eficiencia de dichos métodos y composiciones . Ejemplos de dicha necesidad incluyen, sin limitarse a estos ejemplos, la remoción de pólipos durante procedimientos gastroenterológicos, la excisión de tejido tumoral, y extracción de dientes. En tales casos, los métodos de la presente invención son utilizados para inducir la liberación pasajera, localizada de endotelina-1, la vasoconstricción, y una reducción del flujo de sangre que sale de un vaso roto en los tejidos y vasos adyacentes o continuos a un tejido blanco, minimizando asi el sangrado subsecuente que resulte del procedimiento efectuado en el paciente. 6.- EJEMPLO: CARACTERIZACIÓN FÍSICA DE PREPARACIONES DE p-GlcNac PURA En este ejemplo se prestan, análisis de dicroismo circular (CD) y espectros infrarrojo (IR) de membranas de p-GlcNac y p-GlcNac desacetilado . 6.1.- MATERIALES Y MÉTODOS P-GlcNac y preparaciones comerciales de "quitina": p-GlcNac utilizada en los estudios de CD fue preparada utilizando el método de purificación por fuerza Mecánica descrito arriba en la Sección 5.3.1. La "quitina" comercial fue adquirida en NovaChem, Ltd., Po Box 1030 Armdale, Halifax, Nueva Escocia, Canadá, B3L 4K9. Las membranas de p-GlcNac utilizadas en los estudios de IR fueron preparadas ya sea por método de purificación de Fuerza Mecánica de conformidad con lo descrito arriba en la Sección 5.3.1, o bien a través del método de purificación Química/Biológica, de conformidad con lo escrito arriba, en la Sección 5.3.2, según lo indicado. Las preparaciones comerciales de "p-GlcNac" fueron aplicadas en membranas mediante la disolución en una solución de dimetilacetamida que contenia 5% de cloruro de litio, y se formaron capas en agua destilada, desionizada hasta la precipitación de las membranas.

Derivados de p-GlcNac y tratamientos: p-GlcNac desacetilada utilizada en estudios CD e IR fue preparada por tratamiento de la p-GlcNac con NaOH al 50% a una temperatura de 60°C durante 2 horas. Las membranas de p-GlcNac desnaturalizadas térmicamente utilizadas en los estudios de IR fueron modificadas por hervor en 0.2 mM EDTA durante 3 minutos. Se sometió a tratamiento en autoclave la p-GlcNac durante 30 minutos a una temperatura de 122 °C. Técnicas de CD: Técnicas de CD de estado sólido fueron efectuadas esencialmente de conformidad con Domard (Domard, A., 1986, Int. J. Macromol. 8^:243-246). 6.2.- RESULTADOS 6.2.1. - ANÁLISIS DE CD En los espectros de CD obtenidos a partir de p-GlcNac no tratada (Figura 3A) , las transiciones electrónicas ópticamente activas esperadas n-p* y n-n* (220-185 nM) fueron observadas debido a la presencia del grupo carbonilo en la porción acetilo de p-GlcNac. Tales picos están totalmente ausentes en el espectro de CD obtenido a partir del producto de p-GlcNac desacetilado, como se muestra en la Figura 3B. 6.2.2. - ANÁLISIS DE ESPECTROS DE IR Espectros de IR obtenidos en este estudio son consistentes con la estructura química de p-GlcNac. Además, la definición aguda de cada pico de IR es una indicación de la presencia de una estructura ordenada y regular (es decir, semi-cristalina) de las fibras de p-GlcNac. Véase Figura 4A para el espectro de IR de p-GlcNac purificada a través del método de purificación de Fuerza Mecánica, y Figura 4D para el espectro de iR de p-GlcNac purificada a través del método Químico/Biológico. Para propósitos de comparación, véase la Figura 4B, que demuestra el espectro de IR de una preparación de "quitina" comercial. El espectro de IR obtenido a partir del material de p-GlcNac sometido a tratamiento en autoclave (Figura 4E) no difiere de manera visible del espectro de IR observado en la Figura 4A. Estos datos indican que el material de p-GlcNac puede ser esterilizado por tratamiento en autoclave sin pérdida de estructura de polímero, 7.- EJEMPLO: PURIFICACIÓN DE p-GlcNac UTILIZANDO EL MÉTODO DE PURIFICACIÓN DE FUERZA MECÁNICA En esta sección, p-GlcNac fue purificada empleando la técnica de Fuerza Mecánica descrita arriba, en la Sección 5.3.1. 7.1.- MATERIAL Y MÉTODOS/RESULTADOS Condiciones de cultivo de diátomos : Las especies de diátomos Thalassiosira fluviatilis fue cultivada en cultivo de conformidad con los procedimientos descritos arriba, en las Secciones 5.1 y 5.2. Procedimientos de SEM: Las técnicas de SEM utilizadas aquí son de conformidad con las descritas abajo, en la Sección 12.1.

Procedimiento de purificación de p-GlcNac: p-GlcNac fue purificado a partir del cultivo de diátomos por utilización de la técnica de Fuerza Mecánica descrita arriba, en la Sección 5.3.1. Específicamente, las fibras de p-GlcNac fueron separadas a partir de los cuerpos de células de diátomos mediante el sometimiento de los contenidos del cultivo a tres impulsos cortos de movimiento de mezclado de velocidad máxima en una mezcladora aring. El tiempo total de los tres impulsos fue de aproximadamente un segundo. La suspensión resultante fue centrifugada a 3500 revoluciones por minuto en un rotor de ángulo fijo Sorvall GS-4, durante 20 minutos a una temperatura de aproximadamente 10°C. El sobrenadante fue decantado y centrifugado otra vez, esta vez a 4000 revoluciones por minuto, en un rotor de ángulo fijo Sorvall GS-4 durante 20 minutos a una temperatura de 10°C. Otra vez, el sobrenadante fue decantado y centrifugado a 4000 revoluciones por minuto a una temperatura de 10°C. El sobrenadante final de la tercera centrifugación fue claro, con pocos flóculos visibles si es que algunos flotando en el líquido. El sobrenadante claro fue decantado en una unidad de filtración Buchner equipada con una membrana de filtro de poliéter sulfona Supor-800 con un tamaño de poros de 0.8 um (Gelman, Inc.), se aplicó succión y el líquido fue filtrado a partir de la suspensión de fibras permitiendo la recolección de las fibras en la membrana. Las fibras recogidas fueron lavadas con 1 litro de H20 desionizada, destilada a una temperatura de 70°C. Cuando casi la totalidad del agua habla sido drenada, -las fibras fueron lavadas, con succión, con 1 litro de HC1 1N a una temperatura de 70°C. Cuando la mayor parte de la solución de ácido había sido drenada, las fibras fueron lavadas con un litro de H20 destilada, desionizada a una temperatura de 70°C, empleando succión. Cuando la mayor parte del agua de lavado había sido drenada, las fibras fueron lavadas con 1 litro de etanol al 95% a temperatura ambiente, y se aplicó vacío. La membrana de filtro en la cual la membrana de filtro blanco había sido recogida fue después removida de la unidad de filtración y la membrana y su soporte de membrana fue secada en un horno de secado a una temperatura de 58 °C durante 20 minutos, después de lo cual la membrana y su soporte fueron colocados en un desecador durante 16 horas. Después de este procedimiento de purificación, el rendimiento de p-GlcNac a partir de un cultivo de 1000 mi fue de 6.85 miligramos por litro de cultivo de diátomo. Fotografías de SEM de la membrana formada por la recolección de las fibras de p-GlcNac a través de esta técnica se muestran en la Figura 6. 8.- EJEMPLO: PURIFICACIÓN DE p-GlcNac UTILIZANDO EL MÉTODO DE PURIFICACIÓN BIOLÓGICA/QUÍMICA En esta sección, se purificó p-GlcNac empleando dos de las técnicas Químicas/Biológicas descritas arriba, en la Sección 5.3.2. En resumen,. p-GlcNac fue purificada a través de tratamiento con HF, en un caso, y a través de tratamiento con ácido/neutralización en el segundo caso. 8.1.- MATERIALES Y MÉTODOS/RESULTADOS Condiciones de cultivo de diátomos: La especie de diátomos Thalassiosira fluviatilis fue cultivada de conformidad con los procedimientos descritos arriba, en las Secciones 5.1 y 5.2. Procedimientos de SEM: Las técnicas utilizadas en este estudio fueron de conformidad con lo descrito abajo, en la Sección 12.1. Procedimiento de purificación: Primero, se purificó p-GlcNac por tratamiento con HF, los resultados de dicha purificación se muestran en la Figura 7. Específicamente, bajo una campana para vapores, se agregaron 2.42 mi de una solución de HF al 49% (29N) a los contenidos de diátomos del cultivo, a temperatura ambiente, para cada 1000 mi del volumen del cultivo de células original, lo que resultó en una solución de HF 0.07M. La mezcla fue después agitada vigorosamente durante aproximadamente 30 segundos, causando la aparición de una espuma persistente en el liquido. Se dejo reposar el recipiente durante 5-6 horas para permitir el asentamiento de las partículas pesadas. Al final de este periodo de tiempo, se había formado una capa de espuma, mientras que el líquido mismo estaba dividido en dos estratos: primero, una capa angosta de color verde muy oscuro que se apoyaban en el fondo del recipiente debajo de una segunda capa de color gris-verde mucho más claro que representaba tal vez el 85-90% del volumen total del liquido. La capa de espuma fue cuidadosamente removida por sifón, empleando un tubo de vidrio capilar y succión de vacio. El sobrenadante nublado de color grisáceo fue después removido a través de aplicación de sifón, con cuidado para no perturbar la capa de fondo de color verde oscuro que consistía principalmente de cuerpos celulares asentados, y fue transferido a un recipiente de plástico separado. El sobrenadante nublado de color grisáceo se asentó sin agitación durante 16 horas adicionales. El líquido era inicialmente gris claro, casi incoloro, pero no transparente. Después de un tiempo de asentamiento de 16 horas, una pequeña cantidad de espuma permaneció en la parte superior del cuerpo principal del líquido y una pequeña cantidad de materia de color verde se había asentado en el fondo del recipiente. El líquido era más claro en cuanto a color, pero todavía no transparente. La espuma en la parte superior del líquido fue removido con sifón como arriba. La parte principal del líquido fue después cuidadosamente removida con sifón, dejando atrás la pequeña cantidad de material verde asentado en el fondo del recipiente. El líquido aislado de esta forma contenía la mayoría de las fibras de p-GlcNac y algunas impurezas . Para remover las proteínas y otra materia no deseada liberada por los diátomos durante los pasos precedentes en el procedimiento a partir del líquido que contenía fibras, la suspensión de fibras y los residuos de células fue lavada con dodecilo de sulfato de sodio (SDS) . Específicamente, el volumen necesario de solución de SDS al 20% fue agregado para lograr una concentración final del líquido de SDS al 0.5% en volumen. El recipiente que contenía el líquido fue sellado, sujetado en una posición horizontal en una máquina agitadora, y agitado durante 24 horas a razón de aproximadamente 100 agitaciones por minuto. Poco después del inicio de la agitación, grandes flóculos de fibras de p-GlcNac blancas aparecieron en la suspensión, y una cantidad considerable de espuma se acumuló en el espacio superior de los recipientes. Al final del lavado con SDS, los contenidos de los recipientes fueron transferidos a un equipo de filtración Buchner equipado con una membrana de filtro de poliéter sulfona Supor-800 con un tamaño de poros de 0,8 miera (Gelman, Inc.). El líquido fue filtrado por succión, y las fibras de p-GlcNac en el líquido fueron recogidas en una membrana de filtro. Las fibras de p-GlcNac recogidas en la membrana de filtro fueron después lavadas adicionalmente . Primero, las fibras fueron lavadas con agua desionizada destilada caliente (70°C) , empleando tres veces el volumen de la suspensión original. Con un chorro de agua que utiliza agua desionizada destilada, los grumos de fibras blancas recogidos en una membrana de filtro Buchner fueron transferidos a una mezcladora Waring, y los grumos de fibras fueron desintegrados con aproximadamente 10 impulsos cortos de mezclado. La suspensión de las fibras desintegradas fue transferida a un embudo de filtro Buchner equipado con una membrana de filtro de poliéter sulfona de conformidad con lo descrito arriba, y el liquido fue removido con succión. Las fibras recogidas fueron lavadas con 1000 mi de una solución de HC1 1N caliente (70°C) y lavados subsecuentemente adicionalmente con 1000 mi de H20 desionizada destilada caliente (70 °C) . Finalmente, las fibras fueron lavadas con 1000 mi de etanol al 95% a temperatura ambiente, y filtradas hasta sequedad. La membrana de fibra y la membrana de filtro que soporta la membrana de fibras fueron después secadas en horno de secado a una temperatura de 58°C durante 20 minutos. La membrana y el soporte de membrana fueron después colocados en un desecador durante 16 horas. Las membranas fueron después cuidadosamente desprendidas de la membrana de filtro. Segundo, se purificó p-GlcNac mediante la utilización de método de tratamiento con cido/neutralización, descrito arriba en la Sección 5.3.2. Específicamente, la p-GlcNac fue procesada de conformidad con lo descrito arriba en esta Sección, hasta antes del paso de lavado con SDS, en dicho punto la solución fue neutralizada a un pH de aproximadamente 7.0 por adición de una solución de Tris 2.9M. El rendimiento de p-GlcNac a partir de este procedimiento de purificación particular fue de 20.20 miligramos por litro de cultivo de diátomos, aún cuando en promedio se obtuvieron aproximadamente 60 miligramos por litro de cultivo de diátomos. Microgjrafias de SEM de membranas formadas durante el procedimiento de purificación se muestran en las Figuras 8A-B y 9A-9E. 9. - EJEMPLO: DESACETILACIÓN DE p-GlcNac Una membrana de p-GlcNac fue suspendida en una solución acuosa de NaOH al 50%. La suspensión fue calentada a una temperatura de 80°C durante 2 horas. La membrana desacetilada resultante fue secada y estudiada por microscopía electrónica de barrido, como se muestra en las Figuras 11A-B. 10. - EJEMPLO: BIOCOMPATIBILIDAD DE p-GlcNac En este Ejemplo, se demostró que el material inicial de p- GlcNac no muestra una reactividad biológica detectable, de conformidad con lo ensayado por pruebas de elusión, implante intramuscular en conejos, inyección intracutánea en conejos, e inyecciones sistémicas en ratones. 10.1- MATERIALES Y MÉTODOS 10.1.1- PRUEBA DE ELUSIÓN Las condiciones para la prueba de elusión cumplieron las especificaciones presentadas en la Farmacopea Norteamericana XXII, 1990, páginas 1415-1497 y Farmacopea Norteamericana XXII, Suplemento 5, 1991, páginas 2702-2703. Cultivo de células: Se utilizó una línea de células L929 de fibroblasto de ratón (American Type Culture Collection Rockville, d.; ATCC No. CCL1; NCTC con 929) . Se propagó una monocapa confluente a 24 horas de células L929 en Medio Esencial Mínimo (MEM) completo. ?-GlcNac: una membrana sólida de p-GlcNac que había sido preparada de conformidad con el método de purificación de Fuerza Mecánica descrito arriba, en la Sección 5.3.1, fue extraída en 20 mi de MEM complementado con suero de conformidad con los requerimientos de la Farmacopea Norteamericana XXII (1990) . Controles: Se utilizó caucho natural como control positivo y se utilizó silicona como control negativo. Los controles fueron probados de la misma manera que en el artículo de prueba, p-GlcNac. Extractos: Se prepararon extractos una temperatura de 37 °C, en una atmósfera humidificada que contenía 5% de dióxido de carbono, durante 24 horas. Los extractos fueron evaluados para uno cambio de pH y ajustes fueron efectuados con HC1 para disminuir el pH del extracto o bien con NaHC03 para incrementar el pH del extracto. Los extractos fueron filtrados de manera estériles por pasaje a través de un filtro en 0.22 miera, antes de su aplicación a la mono capa de células . Dosificación: Se utilizaron 3 mis de p-GlcNac o extractos de control para reemplazar el medio de mantenimiento de cultivos de células. Todos los extractos fueron probados por duplicado . Criterio de evaluación: La respuesta de la mono capa de células fue evaluada ya sea visualmente o bien bajo un microscopio. La reactividad biológica, es decir, degeneración celular y/o malformación, fue calificada en una escala de 0 a 4, de conformidad con lo mostrado abajo. El sistema de prueba es adecuado si no se observan signos de reactividad celular (Grado 0) para el articulo de control negativo, y el articulo de control positivo muestra una reactividad mayor que leve (Grado 2) . El articulo de prueba (es decir, p-GlcNac) pasa la prueba de biocompatibilidad si ninguno de los cultivos tratados con el articulo de prueba muestra una reactividad mayor que leve. Grado Reactividad Descripción de la Zona de Reactividad 0 Ninguna Gránulos intracitoplásmicos discretos; Ninguna lisis celular 1 Ligera No más que 20% de las células redondas, sujetadas de manera suelta, y sin gránulos intracitoplásmicos; células Usadas ocasionales presentes 2 Leve No más que 50% de las células son redondas, y sin gránulos intracitoplásmicos; lisis celular extensa y áreas vacias entre las células 3 Moderada No más que 70% de las capas de células contienen células redondeadas y/o Usadas 4 Severa Destrucción casi completa de las capas de células 10.1.2.- IMPLANTACIONES INTBAMUSCULARES Animales: Conejos New Zealand White, sanos, machos y hembras, (Eastern Rabbit Breeding Laboratory, Taunton, Mass.) se utilizaron. Conejos fueron alojados individualmente utilizando jaulas de acero inoxidable suspendidas. Al momento de la recepción, los animales fueron colocados en cuarentena durante 8 días, bajo las mismas condiciones, que en el caso de la prueba real. Placas de madera dura (Sani-chips™, J.P. Murphy Forest Products, Montvale, N.J.) fueron utilizadas como camas sin contacto debajo de las jaulas. La instalación de los animales fue mantenida a una temperatura de 20°±1.7°C (68°+3°F), con una humedad relativa de 30-70%, un mínimo de 10-13 intercambios completos de aire por hora, y un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas empleando luces fluorescentes de espectro completo. Los animales fueron alimentados con alimentación comercial (Agway ProLab, Waverly, N.Y.) bajo condiciones controladas y con agua de grifo principal ad Idbitum. No estuvieron presentes contaminantes conocidos en la alimentación, cama o agua que pudieran interferir con los resultados de la prueba. Los animales seleccionados para el estudio fueron escogidos entre un conjunto más grande de animales. Los conejos fueron " pesados hasta 10 g más cercanos e identificados individualmente por tatuaje en las orejas. p-GlcNac. La p-GlcNac utilizada fue de conformidad con lo descrito arriba en al Sección 10.1.1. Prueba de Implante: Dos conejos fueron utilizados para cada prueba de implante. El día de la prueba, se cortó el pelo de la piel de los animales en ambos lados de la columna vertebral. Cada animal fue anestesiado para prevenir un movimiento muscular. Utilizando agujas hipodérmicas estériles y estiletes se implantaron cuatro tiras de p-GlcNac de prueba (1 mm x 10 mm) en el músculo paravertebral en un lado de la espina vertebral de cada uno de los dos conejos (de 2.5 a 5 cm de la linea media, paralela a la columna espinal, y aproximadamente 2.5 cm entre ellas). De manera similar, dos tiras de plástico de control negativo USP RS (1 mm x 10 mm) fueron implantadas en el músculo opuesto de cada animal. Los animales fueron mantenidos durante un periodo de 7 días . Al final del periodo de observación, los animales fueron pesados y sometidos a eutanasia por barbiturato inyectable, Eutanasia-5 (Veterinary Laboratories, Inc., Lenexa, ans . ) .

Se dejó pasar un tiempo suficiente para cortar el. tejido sin sangrado. El área del tejido que rodea la porción central década tira de implante fue examinada macroscópicamente empleando un lente amplificador. Se calificaron hemorragia, necrosis, decoloraciones e infecciones empleando la escala siguiente: 0 = Normal, 1 = Leve, 2 = Moderada, y 3 = Severa. La encapsulación, en caso de estar presente, fue calificada mediante la medición primero del ancho de la cápsula (es decir, la distancia de al periferia del implante hasta la periferia d'e la cápsula) redondeado al 0.1 mm más cercano. L encapsulación fue califica de la manera siguiente: Ancho de Cápsula Resultado Ninguno 0 Hasta 0.5 mm 1 0.6-1.0 mm 2 1.1-2.0 mm 3 Mayor que 2.0 mm 4 Las diferencias entre los resultados promedio para la p-GlcNac y el control positivo fueron calculadas. La prueba se considera negativa si, en cada conejo, a diferencia entre los resultados promedio para cada categoría de reacción biológica para la p-GlcNac y los sitios de implante de plástico de control positivo no rebasa 1.0; o bien, si la diferencia entre los resultados medio para todas las categorías de reacción biológica para cada artículo de p-GlcNac y el resultado promedio para todas las categorías para todos sitios de implante de plástico de control positivo no rebasa 1.0, para un máximo de una de las cuatro tiras de p-GlcNac. 10.1.3.- INYECCIONES INTRACUTÁNEAS Animales: Conejos blanco de New Zealand W ite fueron utilizados y mantenidos de conformidad con lo descrito arriba, en la Sección 10.1.2. p-GlcNac: Una membrana sólida de p-GlcNac que había sido preparada de conformidad con el método de purificación de Fuerza Mecánica descrito arriba en la Sección 5.3.1, fue colocada en un frasco de extracción al cual se agregaron 20 mi del medio apropiado. Las extracciones fueron efectuadas calentando a una temperatura de 70°C durante 24 horas. Después de este procedimiento, los extractos fueron enfriados a temperatura ambiente. Cada botella de extracción fue agitada vigorosamente antes de la administración. Prueba Intracutánea: El día de la prueba, se cortó el pelo de los anímales en el lado dorsal. Se inyectó un volumen de 0.2 mi de cada extracto de p-GlcNac de manera intracutánea en cinco sitios en un lado de cada uno de los conejos. Se utilizó más que un extracto de p-GlcNac por conejo. En cinco sitios en el otro lado de cada conejo, se inyectó 0.2 mi de control correspondiente. Los sitios de inyección fueron observados para determinar la presencia de signos de eritema, edema y necrosis a 24, 48 y 72 horas después de la inyección.

Las observaciones calificadas de conformidad con la Escala de Draize para Calificar las Reacciones Cutáneas (Farmacopea Estadounidense XXII, 1990, 1497-1500; Farmacopea Estadounidense XXII, Suplemento 5, 1991, 2703-2705) como se muestra en la atabal II, abajo: TABLA II Escala de- Draize para Calificación de Reacciones Cutáneas Valor Eritema y Formación de Costra Ausencia de eritema 0 Eritema muy leve (apenas perceptible) 1 Eritema bien definido 2 Eritema moderado a severo 3 Eritema severo (rojo betabel) hasta formación ligera 4 de costra (lesiones profundas) Resultado posible total de eritema = 4 Formación de Edema Ausencia de edema 0 Eritema muy leve (apenas perceptible) 1 Edema ligero (los bordes son bien definidos por 2 elevación clara) Edema moderado (elevación aproximada de 1 mm y 3 extensión más allá del área de exposición) Edema severo (elevación de más de 1 mm y extensión 4 más allá del área de exposición) Resultado posible total de edema = 4 Todos los resultados de eritema y edema a las 24, 48 y 72 horas fueron sumados separadamente y divididos entre 12 (es decir, 2 animales x 3 periodos de calificación x 2 categorías de calificación) para determinar el resultado promedio global para p-GlcNac versus el control correspondiente. Los animales fueron pesados al final del período de observación y sometidos a eutanasia por inyección de un barbiturato, Eutanasia-5 (Veterinary Laboratories, Inc., Lenexa, Kans . ) . Los resultados de la prueba se cumplen si la diferencia entre los resultados de reacción de p-GlcNac y medio de control (eritema/edema) es 1.0 o menos. 10.1.4.- INYECCIONES SISTÉMICAS Animales: Se utilizaron ratones Albino Swiss (Mus musculus) , hembras, (Charles River Breeding Laboratories, Wilmington, Mass.) . Grupos de 5 ratones fueron alojados en jaulas de polipropileno equipadas con tapas de acero inoxidable. Se utilizaron trozos de madera dura (Sanichips"1, J.P. Murphy Forest Products, Montvale, J.J.) como cama de contacto en las jaulas. La instalación de los animales fue mantenida como un área de acceso limitado. Los cuartos de los animales fueron mantenidos a una temperatura de 20°±1.7°C (68° + 3°F) , con una humedad relativa de 30-70%, un mínimo de 10-13 intercambios completos de aire por hora, y un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas utilizando lámparas fluorescentes de espectro completo. Los ratones fueron alimentados con alimentación comercial y recibieron agua de grifo municipal ad libitum. Ningún contaminante conocido estuvo presente en la alimentación, cama o agua que pudiera interferir con los resultados de la prueba. Los animales seleccionados para el estudio fueron escogidos en un conjunto más grande de animales. Los ratones fueron pesados hasta el 0.1 g más cercano e identificados individualmente por perforación en las orejas. p-GlcNac: Las muestras utilizadas fueron de conformidad con lo descrito arriba, en la Sección 10.1.1. Los extractos fueron preparados de conformidad con los procedimientos descritos en la Sección 10.1.3, arriba. Prueba de Inyección Sistémica: Grupos de 5 ratones fueron inyectados ya sea con extracto de p-GlcNac o bien un articulo de control correspondiente, en las mismas cantidades y por las mismas vías que lo establecido abajo: Extractos de Articulo de Via de Dosis/kg Régimen Prueba o de Control de Admi- de In- nistración yección Inyección de Cloruro de Sodio Intravenosa 50 mi 0.1 ml/seg al 0.9%, ÜSP (0.9% NaCl) 1 en 20 Alcohol en Inyección Intravenosa 50 mi 0.1 ml/seg de Cloruro de Sodio al 0.9% ÜSP (EtOH : NaCl ) Polietilenglicol 400 (PEG 400) Intraperito- 10 ral neal Aceite de Semilla de Algodón Intraperito- 50 mi neal Extractos de la p-GlcNac preparada con PEG400 y el control correspondiente, fueron diluidos con NaCl al 0.9% para obtener 200 mg de PEG 400 por mi. Para la Prueba Intracutánea, PEG 400 fue diluido con NaCl al 0.9% para obtener 120 mg de PEG 400 por mi. Los animales fueron observados inmediatamente después de la inyección, a las 24 horas, 48 horas, y 72 horas después de la inyección. Los animales fueron pesados al final del periodo de observación y sometidos a eutanasia por exposición a gas dióxido de carbono. Los requerimientos de la prueba se cumplen si ninguno de los animales tratados con p-GlcNac muestra una reactividad biológica significativamente mayor que los animales tratados con el articulo de control. 10.2.- RESULTADOS 10.2.1.- PRUEBA DE ELUSIÓN La respuesta de la mono capa de células al articulo de prueba de p-GlcNac fue evaluada visualmente bajo un microscopio. No se utilizaron tinciones histoquiraicas en la evaluación. No se observaron signos de reactividad biológica celular (Grado 0) a las 48 horas después de la exposición al articulo de control invertido o al p-GlcNac. Una reactividad severa (Grado 4) fue observada para el articulo de control positivo, como se muestra abajo en la Tabla III: TABLA III GRADOS DE REACTIVIDAD Artículos de Control Tiempo p-GlcNac Negativo Positivo A B A B A B 0 Horas 0 0 0 0 0 0 24 Horas 0 0 0 0 4 4 48 Horas 0 0 0 0 4 4 El material inicial de p-GlcNac, pasa por consiguiente los requisitos de la prueba de elusión para biocompatibilidad y, por consiguiente no es citotóxico. 10.2.2.- IMPLANTES INTRAMUSCULARES Ambos conejos (A y B) probados incrementaron su peso corporal y no presentaron signos de toxicidad. Véase la tabla IV para datos. Además , no se observaron signos abiertos de toxicidad en ninguno de los animales. La evaluación macroscópica de los sitios de implantes de artículos de prueba y de control no mostró ninguna inflamación, ni encapsulación, ni hemorragia, ni necrosis ni decoloración. Véase la tabla IV para los resultados. Por consiguiente la prueba demuestra que la p-GlcNac ensayada no muestra reactividades biológicas en la medida en que, en cada conejo, la diferencia entre los resultados promedio para todas las categorías de reacción biológica para todos los sitios de implante de p-GlcNac y el resultado promedio para todas las categorías para todos los sitios de implante de control no rebasaron 1.0. TABLA IV Prueba de implantación (Observaciones Microscópicas) Articulo de prueba : p-GlcNac Especie Animal: Conejo Sitio de TI T2 T3 T4 Promedio Cl C2 Promedio tejido de Prueba de Control Animal #: A Inflamación 0 0 0 0 0 0 0 0 Encapsula-ción 0 0 0 0 0 0 0 0 Hemorragia 0 0 0 0 0 0 0 0 Necrosis 0 0 0 0 0 0 0 0 Decoloración 0 0 0 0 0 0 0 0 Total 0 _0 0 0_ 0 0 Resultado Promedio 0 _0 0 0 0 _0 (total/5) Valor de control Promedio : 0 Animal #: B Inflamación 0 0 0 0 0 0 0 0 ncapsula ción 0 0 0 o o o o o Hemorragia 0 0 o o o o o o Necrosis 0 0 o o o o o o Decoloración 0 0 o o o o o o Total 0 0 o o Resultado Promedio 0 0 o o (total/5) Valor de control Promedio: _o 10.2.3. PRUEBA INTRACUTÁNEA Todos los animales incrementaron su peso. Véase la tabla V para mayores datos. No se observaron signos de eritema ni edema en ninguno de los sitios de artículo de control o p-GlcNac. Signos abiertos de toxicidad no fueron observados en ningún animal. Puesto que la diferencia entre los resultados de reacción promedio de artículo de control y p-GlcNac (eritema/edema) fue inferior a 1.0, la p-GlcNac cumple con los requisitos de la prueba intracutánea. Véase tabla VI para resultados. Por consiguiente, de conformidad con lo ensayado en esta prueba, la p-GlcNac no demuestra reactividad biológica . TABLA V Pruebas intracutánea y de implante Pesos corporales y observaciones clínicas Artículo de prueba: p-GlcNac Especie Animal: Conejo Peso corporal (Kg) Grupo Animal # Sexo Día 0 Día 3 0.9% 23113 Macho 2.51 2.55 NaCl & CSO 0.9% 23114 Macho 2.43 2.46 NaCl & CSO EtOH: 23115 Macho 2.47 2.50 NaCl & PEG 400 EtOH: 23116 Macho Macho 2.63 NaCl & PEG 400 TABLA V (Continuación Animal # Cambio de Peso Signos de Toxi 23113 0.04 Ninguno 23114 0.03 Ninguno 23115 0.03 Ninguno 23116 0.04 Ninguno Peso corporal (Kg) Grupo Animal # Sexo Dia 0 Dia 7 Im lante A Macho 2.74 2.80 B Hembra 2.66 2.74 Animal # Cambio de Peso gnos de Toxicidad' A 0.06 Ninguno B 0.08 Ninguno "Resumen de observaciones del Dia 0 al Día 7 (implante) y del Día 0 al Día 3 (Intracutánea) .

TABLA VI RESULTADOS DE DRAIZE DE PRUEBA INTRACUTÁ EA Articulo de prueba: p-GlcNac (T = prueba, C = control) Especie Animal: Conejo Números de sitio Extractos de NaCl Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23113 NaCl 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl (Continuación... Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo : C ID # 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl (Continuación...) Números de sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 ID # 23114 NaCl 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl (Continuación...) Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo : C ID # 23114 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de CSO Números de sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23113 eso 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de CSO (Continuación. Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo: T C ID # 23113 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de CSO Números de sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23114 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de CSO (Continuación. Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo : C ID # 23114 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl/EtOH Números de Sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C ID # 23115 NaCl 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 EtOH 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl/EtOH (Continuación) Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo : C ID # 23115 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl/EtOH Números de Sitio Animal Vehículo T-l c-i T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23116 NaCl 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 EtOH 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de NaCl/EtOH (Continuación) Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo: T ID # 23116 0/0 0/0 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Números de sit Extractos de PEG Números de Sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23115 PEG 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de PEG (Continuación...) Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo : C ID # 23115 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de PEG Números de Sitio Animal Vehículo T-l C-l T-2 C-2 T-3 C-3 T-4 C-4 ID # 23116 PEG 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Total- o/o 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 Extractos de PEG (Continuación...) Resultados (ER/ED) Promedios Animal T-5 C-5 Tiempo: T C ID # 23116 0/0 0/0 24 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 48 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 72 horas 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 0/0 10.2.4. PRUEBA SISTÉMICA Todos los ratones tratados con el extracto de p-GlcNac o el articulo de control incrementados en peso. Véase tabla VII para datos. Además, no se observaron signos abiertos de toxicidad en ninguno de los animales de control o animales tratados con p-GlcNac. Véase tabla VI para resultados. Por consiguiente se llego a la conclusión que. ninguno de los animales de prueba de p-GlcNac mostró una reactividad biológica significativamente mayor que los animales tratados con el articulo de control. TABLA VII PESOS DE LOS ANIMALES Y OBSERVACIONES CLÍNICAS Peso corporal (g) Grupo Sexo Dosis (mi) Animal # Dia 0 Dia 3 NaCl Hembra 1.03 I. 20.6 22.8 EtOH Hembra 1.06 II. . 21.1 . 23.4 Prueba Hembra 1.02 III. 20.4 22.6 50 ml/kg Hembra 1.11 IV. 22.2 24.5 Hembra 1.05 V. 21.0 23.2 Media 21.1 23.3 Desviación Estándar ± 0.7 0.7 TABLA VII (Continuación... ) Animal # Cambio de Peso Signos de Toxicidad I. 2.2 Ninguno II. 2.3 Ninguno III. 2.2 Ninguno IV. 2.3 Ninguno V. 2.2 Ninguno TABLA VII Grupo Sexo Dosis (mi) Animal # Día 0 Día 3 NaCl Hembra 1.04 VI. 20.7 23.2 EtOH Hembra 1.04 VII. 20.8 23.5 Control Hembra 1.02 VIII. 20.3 22.3 50 ml/kg Hembra 0.91 IX. 18.2 20.6 Hembra 0.94 X. 1.9 20.9 Media 19.7 22.1 Desviación Estándar ± 1.2 1.3 TABLA VII (Continuación... ) Animal # Cambio de Peso . Signos de Toxicidad^ VI . 2.5 Ninguno VII. 2.7 Ninguno VIII. 2.0 Ninguno IX. 2.4 Ninguno X. 2.2 Ninguno TABLA VII Grupo Sexo Dosis (mi) Animal # Día 0 Día 3 PEG Hembra 1.02 XI . 20.3 22.7 Prueba Hembra 0.96 XII. 19.2 21.4 10 ml/kg Hembra 0.95 XIII. 18.9 21.6 Hembra 1.05 XIV. 20.9 22.7 Hembra 0.94 XV. 18.7 21.2 Media 19.6 21.9 Desviación Estándar ± 1.0 0.7 TABLA VII (Continuación... ) Animal # Cambio de Peso Signos de Toxicidad" XI . 2.4 Ninguno XII . 2.2 Ninguno XIII. 2.7 Ninguno XIV. 1.8 Ninguno XV. 2.5 Ninguno TABLA VII Grupo Sexo Dosis (mi) Animal # Día 0 Día 3 PEG Hembra 1.01 XVI. 20.1 22.3 Control Hembra 0 .99 XVII. 19.8 22.0 10 g/kg Hembra 1 .10 XVIII . 22.0 24.3 Hembra 1 .07 XIX. 21.4 23.6 Hembra 1 .03 XX. 20.6 22.4 Media 20.8 22.9 Desviación Estándar ± 0.9 1.0 TABLA VII (Continuación... ) Animal Cambio de Peso gnos de Toxicidad XVI. 2.2 Ninguno XVII . 2.3 Ninguno XVIII . 2.3 Ninguno XIX. 2.2 Ninguno XX. 1.8 Ninguno Resumen de observaciones 0, 4, 24, 4Í 72 horas después de la inyección. 11. EJEMPLO: REFORMULACIÓN DE p-GlcNac En el Ejemplo de Trabajo presentado en esta sección, una membrana de p-GlcNac (16.2 mg) fue disuelta en 1 mi de una solución de dimetilacetamida que contenia 5% LiCl. La solución que contenia p-GlcNac fue colocada en una jeringa y extruida en 50 mi de agua pura para precipitar una fibra. La fibra resultante fue estudiada con microscopia electrónica de barrido, como se muestra en las figuras 10A-B. 12. EJEMPLO: HÍBRIDOS p-GlcNac/COLÁGENA En este ejemplo de trabajo se presenta la formación de la caracterización de un material híbrido p-GlcNac/colágena . 12.1 MATERIALES Y MÉTODOS Materiales: se utilizó colágena de tipo I bovina en la preparación de los híbridos descritos en este estudio. Se preparó p-GlcNac de conformidad con el método de fuerza mecánica descrito arriba en la sección 5.3.2. Preparación de híbridos: se mezclaron suspensiones acuosas de colágena (10 miligramos/mi) y p-GlcNac (miligramos/ml) en proporciones diferentes, congeladas en N2 líquido (-80° C) , y mantenidas a una temperatura de -9o C durante 4 horas, y liofilizadas . El material fue reticulado deshidrotérmicamente en vacío (aproximadamente 0.030 Torr) a una temperatura de 60°C durante 3 días. Cultivo celular: Células de fibroblasto de ratón 3T3 fueron cultivadas en los híbridos de colágena/p-GlcNac producidos. Se siguieron procedimientos estándares de cultivo y se tomaron micrografías de SEM después de 8 días en cultivo. 12.2 RESULTADOS Suspensiones acuosas de colágena y p-GlcNac fueron mezcladas en proporciones diferentes (típicamente, proporcionales de suspensión de colágena: p-GlcNac de 3:1, 1:1, 2:2, y 1:3) congeladas, liofilizadas y reticuladas. Dicho procedimiento proporcionó placas de colágena/p-GlcNac . Micrografías de SEM Z- 121 de los materiales resultantes revelaron la estructura porosa del material " híbrido lo que proporciona una estructura tridimensional eficiente para la sujeción y el crecimiento de las células. 13. EJEMPLOS: CARACTERIZACIÓN POR NMR DE PREPARACIONES PURAS DE p-GlcNac En este ejemplo se presenta un análisis NMR (resonancia magnética nuclear) de una preparación de p-GlcNac pura. 13.1 MATERIALES Y MÉTODOS Preparaciones de p-GlcNac: la p-GlcNac utilizada en los estudios de NMR descritos aquí fue preparada empleando el método de purificación química descrito arriba en la sección 5.3.2, con ácido hidrofluórico utilizado como reactivo químico . Técnicas de NMR: datos de NMR de estado sólido fueron obtenidos utilizando un espectrómetro NMR Bruker 500 MHz. Un análisis de imagen computarizado fue utilizado para transformar los datos de espectro NMR brutos con el objeto de eliminar el fondo y normalizar las líneas básales. Un ejemplo de dichos datos transformados se muestra en la figura 14. Curvas de NMR transformadas tales como en la figura 14 fueron utilizadas para obtener áreas para cada tipo de átomo de carbono, y después para calcular las proporciona entre CH3 (área) y átomo de carbono (área) . Tales valores obtenidos de conformidad con lo descrito se proporciona en la figura 16. 13.2 RESULTADOS Datos de NMR de estado sólido fueron obtenidos mediante la medición del espectro de i3C-NMR de una muestra de 500 mg de p-GlcNac. Un espectro NMR típico se muestra en la figura 15. Los picos individuales representan la contribución al espectro de cada átomo de carbono único en la molécula. El porcentaje relativo de cada tipo de átomo de carbono en la molécula fue determinado dividiendo el área de pico generado por esta especie de carbono entre la suma total de las áreas bajo todos los piccs de NMR obtenidos en el espectro. Asi, fue posible calcular la proporción de cada uno de los átomos de la molécula de conformidad con lo medido por un átomo de referencia. Todas la moléculas de p-GlcNac consisten de residuos de glucosamina N-acetilados que tienen átomos de Cl, C2, C3, C4, C5, y C6. Entonces, la proporción del área del pico de átomo de carbono de N-acetil C¾ entre las áreas de todos los picos de átomo de carbono de residuo de glucosamina, arriba, debe ser 1.0 si todos los residuos de glucosamina en el polímero con N-acetilados. Datos tales como los mostrados en la figura 14 fueron utilizados para obtener valores para las proporciones de C¾ (área) . Las proporciones calculadas en la figura 16 son, en muchos casos, iguales o casi iguales a 1.0, dentro del error experimental, por ejemplo, CH3/C2=1.097, CH3/C5= 0.984, C¾/C5= 1.007, CH3/C1= 0.886. Estos resultados son consistentes con la conclusión en el sentido . en que el material inicial e p-GlcNac está libre de contaminantes y totalmente acetilado (es decir, que esencialmente el 100% de los residuos de glucosamina son N-acetilados . 14, EJEMPLO: SÍNTESIS Y CARACTERIZACIÓN BIOLÓGICA DE MATRICES DE p-GlcNac TRIDIMENSIONALES DE TAMAÑO DE PORO CONTROLADO A continuación se describen métodos para la producción de las matrices porosas basadas en p-GlcNac tridimensionales que tamaños de poro promedio controladas. Tales matrices tienen varias aplicaciones importantes, incluyendo, por e emplo, como medio para la encapsulación de células. Tales composiciones de encapsulación de células son útiles como agentes terapéuticos basados en células trasplantables y otras aplicaciones de manipulación de células y tejido tales como en la regeneración del cartílago. La capacidad de manipular la morfología y la dimensión de los materiales de p-GlcNac, como se demostró aquí, ofrece una herramienta poderosa para reformular polímeros de p-GlcNac en varias formas, incluyendo, sin limitación, microperlas, microesferas, que pueden ser formuladas como emulsiones, suspensiones y/o soluciones en un vehículo farmacéuticamente aceptable, y/o solvente farmacéuticamente aceptable. 14.1 MATERIALES Y MÉTODOS Material inicial de p-GlcNac: se preparó p-GlcNac utilizando el método de purificación química descrita arriba en la sección 5.3.2», con ácido clorhídrico utilizado como el reactivo químico. Formación de matriz: suspensiones (5 mis) que contienen 20 mg de muestras de p-GlcNac fueron elaboradas en los solventes listados abajo en la sección 14.2, antes de la liofilización. Las muestras fueron después vaciadas en tejidos de platos de cultivo tisular y congeladas a una temperatura de -20°C. las muestras congeladas fueron después liofilizadas hasta sequedad, y las matrices tridimensionales resultantes fueron removidas . Técnicas de microscopía electrónica de barrido: Los procedimientos utilizados aquí fueron efectuados de conformidad con lo descrito arriba en la sección 12.1. Las imágenes mostradas en las figuras 17A-G son amplificaciones de 200 x del material de matriz y una marca de escala de 200 mieras indicada en cada una de estas figuras. 14.2 RESULTADOS Se obtuvieron suspensiones de p-GlcNac con cada uno de los solventes siguientes, de conformidad con lo descrito arriba en la sección 14.1: A. Agua destilada B. Metanol al 10% en agua destilada C. Metanol al 25% en agua destilada D. Agua destilada solamente E. Etanol al 10% en agua destilada F. Etanol al 25% en agua destilada G. Etanol al 40% en agua destilada Muestras de matriz formadas utilizando cada uno de los solventes fueron sometidas a análisis microscópico electrónico de barrido (SEM) , de conformidad con lo ilustrado en las figuras 17A-G. Estas figuras muestran que el tamaño promedio de poro de matriz disminuye conforme el porcentaje ya sea de metanol o etanol se eleva en cada suspensión. Específicamente, un diámetro de poro en dos suspensiones de agua (figuras 17A y 17D) se acerca 200 mieras en promedio. El tamaño de poro en las muestras ilustradas en las figuras 17C y 17F (25% de metanol y etanol, respectivamente) son entre 30 y 50 en promedio. Los resultados ilustrados aquí sugieren que tanto etanol como metanol pueden utilizarse exitosamente para controlar el tamaño de poro de p-GlcNac, el etanol puede ser más eficiente que el metanol. 15. EJEMPLO: BIQDEGRADABILIDAD DE MATERIALES DE p-GlcNac El ejemplo presentado en esta sección demuestra que los materiales iniciales de p-GlcNac pueden prepararse los cuales presentan una biodegradabilidad in vivo e in vltro controlable así como tasas de resorción. ¦ 15.1 MATERIALES Y MÉTODOS Materiales de p-GlcNac: el prototipo I fue elaborado por el método descrito arriba en la sección 5.3.2, a través del método químico, con ácido hidrofluórico utilizándose como el reactivo químico. El prototipo I representó 100% de p-GlcNac acetilado. El material inicial de p-GlcNac de prototipo A fue elaborado a través del método descrito arriba en la sección 5.3.2. por medio del método químico, con ácido fluorhídrico utilizándose como reactivo químico. El material de p-GlcNac fue después desacetilado a través del método descrito arriba en la sección 5.4. Específicamente, el material de p-GlcNac fue tratado con una solución de NaOH al 40% a una temperatura de 60° C durante 30 minutos. El prototipo 3A fue determinado a ser 30% desacetilado. El material inicial de p-GlcNac del prototipo 4 fue efectuado por el método descrito arriba en la sección 5.3.2., por medio del método químico, con ácido hidrofluórico utilizándose como reactivo químico. El material de p-GlcNac fue después desacetilado a través del método descrito arriba en la sección 5.4. Específicamente, el material de p-GlcNac fue tratado con una solución de NaOH al 40% a una temperatura de 60° C durante 30 minutos. El prototipo resultante 3A fue determinado como desacetilado al 30%. El material inicial de p-GlcNac del prototipo 4 fue elaborado por el método descrito arriba en la sección 5.3.2., a través del método químico, con el ácido hidrofluórico utilizándose como el reactivo químico. El material fue entonces desacetilado por tratamiento con una solución de NaOH al 40% a una temperatura de 60° C durante 30 minutos. Después, las fibras fueron suspendidas en agua destilada congelada a una temperatura de -20° C y liofilizadas hasta sequedad. El prototipo 4 fue también determinado como desacetilado al 30%. Modelo de implante abdominal: ratas albinas Sprague-Da iey fueron utilizadas para los estudios de modelo de implante abdominal. Los animales fueron anestesiados y preparados para intervención quirúrgica, y se efectúo una incisión en la piel y músculos abdominales. El intestino ciego fue localizado y levantado. Se colocó una membrana de 1 cm x 1 cm de material de p-GlcNac en el intestino ciego, y la incisión fue cerrada con nylon. Los animales de control fueron los animales en los cuales no se colocó material en el intestino ciego. Animales fueron abiertos de 14 y 21 dias después del implante. Fotografías fueron tomadas durante el procedimiento de implante y explante (figuras 23A-E) . Muestras de intestino ciego fueron preparadas para histopatologia después del procedimiento de explantación. Ensayo de degradación in vitro de p-GlcNac por lisozima-quitinasa: el ensayo es un ensayo colorimétrico para N-acetil glucosamina, y fue efectuado de la siguiente manera: 150 µ? de una muestra de reacción fueron colocados a través de pipeta en tubos de ensayo de vidrio desechables de 13 x 100 mm, por duplicado. Se agregaron 25 µ? de amortiguador de fosfato de potasio 0.25M (pH 7.1), seguido por adición de 35 µ? de una solución de borato de potasio 0.8M (pH 9.8). Los tubos fueron inmediatamente inmersos en un baño de hielo durante un mínimo de 2 minutos. Las muestras son después removidas del baño de hielo, se agregó 1 mi de reactivo DMAB recién preparado, y las muestras fueron sometidas a vórtice. Se elaboró un reactivo DM7AB (dimetil aminobenzaldehído) por adición de 70 mis de ácido acético glacial y 10 mi de HCl 11.6N (concentrado) a 8 gramos de p-dimetil aminobenzaldehído. Las muestras fueron después incubada a una temperatura de 37° C durante 20 minutos. Para preparar una curva estándar, se utilizó el procedimiento siguiente. Una solución madres de GlcNac fue diluida a 0.1 mg/ml con amortiguador de acetato de sodio O.OlOM (pH 4.5), y se agregaron 0 ul, 20 µ?, 30 µ?, 90µ1, o 120 µ? de la solución de GlcNac diluida a una serie de tubos de ensayo. Esto fue seguido por adición de 150 µ?, 130 µ?, 60 µ?, o 30 µ?, respectivamente, de un amortiguador de acetato de sodio O.OlOM (pH 4.5) a los tubos de ensayo. Después se agregaron 25 µ? de amortiguador de fosfato de potasio 0.25M (pH 7.1) y 35 µ? de amortiguador de borato de potasio 0.8M (pH 9.8) a cada tubo de ensayo. Se prepara un conjunto por duplicado de tubos de ensayo a través del mismo procedimiento. Los tipos de ensayos son tapadas y hervidas a 100° C durante exactamente 3 minutos. Los tubos son después inmersos en un baño de hielo. Los tubos son removidos del baño de hielo y se agrega a cada tubo 1 mi de reactivo DMAB, recién preparado de conformidad con el método descrito arriba. Los tubos son incubados a una temperatura de 37° C durante 20 minutos. La absorbencia de los contenidos de cada tubo es leída a 585 nM. La absorbencia debe ser leída además rápidamente posible. La curva estándar es graficada en papel para gráficas y utilizadas para determinar la concentración de N-acetil glucosamina en las muestras de reacción. Una curva estándar típica se muestra en la figura 18. 15.2 RESULTADOS La biodegradabilidad in vitro de materiales de p-GlcNac estudiada en experimentos en los cuales se ensayo la susceptibilidad relativa de materiales de membrana de p-GlcNac a la degradación por lisozima. Membranas de p-GlcNac fueron expuesta a un exceso de lisozima en un amortiguador de acetato de 10 mM, y la liberación subsecuente de N-acetil glucosamina fue determinada empleando el ensayo descrito arriba en la sección 15.1. Los resultados de estos experimentos indicaron gue membranas parcialmente desacetiladas son más susceptibles a la digestión por lisozima (véase figura 19), y además, gue la tasa de degradación por lisozima se relaciona directamente con la magnitud de la desacetilación (véase figura 20, que compara las tasas de degradación de una membrana de p-GlcNac desacetilada al 50% con una membrana de p-GlcNac desacetilada al 25%) . Degradación in vivo de p-GlcNac Se efectuaron experimentos que se enfocaron a la biodegradabilidad in vivo de materiales de p-GlcNac. Tales experimentos utilizaron un modelo de implante abdominal. Tres materiales de p-GlcNac, de conformidad con lo indicado abajo, fueron probados. Los materiales de p-GlcNac probados fueron: 1) p-GlcNac, totalmente acetilado (prototipo designado 1); 2) membrana de p-GlcNac parcialmente desacetilado (prototipo designado 3A) ; y 3) membrana de p-GlcNac liofilizada y parcialmente desacetilada (prototipo designado 4) . Resultados La p-GlcNac totalmente acetilada (prototipo 1) fue resorbida dentro de 21 días, como se muestra en las figuras 21A-21C. La membrana de p-GlcNac parcialmente desacetilada (prototipo 3?) fue totalmente resorbida dentro de 14 días, como se muestra en las figuras 21D-21E. La membrana de p-GlcNac liofilizada y parcialmente desacetilada (prototipo 4) todavía no había sido totalmente resorbida después de 21 días después de un implante . Análisis de histopatología mostraron que una vez que el material de p-GlcNac ha siso resorbido, no existen diferencias histológicas detectables entre las muestras de tejido obtenidas a partir de los animales tratados y de los animales de control. 16. EJEMPLO: ESTIMULACIÓN POR p-GlcNac DE LA SECRECIÓN DE ENDOTELINA-1 E INDUCCIÓN DE VASOCONSTRICCIÓN ARTERIAL Este ejemplo demuestra que p-GlcNac de la presente invención puede ser utilizada para estimular la liberación de endotelina-1 y para inducir la vasoconstricción arterial in vivo. 16.1 TRATAMIENTO Y ANÁLISIS DE INCISIONES AÓRTICAS; MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES. Este estudio fue efectuado en cerdas Yorkshire White inmaduras de un peso comprendido entre 25 y 30 kg (promedio 27.5 kg) . Se utilizó en cada caso, el protocolo siguiente . PROTOCOLO 1. Después de pre-medicación estándar, se anestesian los animales por inhalación de 100% 02 y 1-2% halotano. 2. Se extrae la muestra de sangre de control para CBC y conteo de plaquetas. 3. Se expone la aorta abdominal. 4. Con sujetadores en su lugar, se hace una herida vertical de 1 cm en la aorta. 5. Se liberan los sujetadores mientras se aplica el articulo de prueba. 6. Se comprime durante un minuto. 7. Se remueve la compresión, y se observa para determinar si ocurre sangrado. 8. En caso de sangrado, se repiten los pasos 4 y 5. 9. El articulo de prueba falla si 15 compresiones de un minuto no detienen el sangrado. 10. Se recogen los tejidos para patología. 16.2 TRATAMIENTO Y ANÁLISIS DE INCISIONES ESPLÉNICAS; MATERIALES Y MÉTODOS ANIMALES. Este estudio fue efectuado en cuatro cerdas Yorkshire Whíte inmaduras con un peso comprendido entre 34 y 37 kg. Se utilizó el protocolo siguiente en cada uno de los casos . PROTOCOLOS 1. Después de una premedicación estándar, se anestesian los animales por inhalación con 100% 02 y 1-2% halotano. Se extrae la muestra de sangre de control para CBC y control de plaquetas . 2. Se descubre el bazo a través de incisión abdominal media utilizando electrocauterización para mantener una hemostasis absoluta. 3. Se aisla el bazo con esponjas. 4. Se crea un área de 2 cm x 2 cm de corte capsular en la superficie del bazo hasta una profundidad de 3 mm. 5. Se permite que la herida sangre libremente durante 10 segundos . 6. Se remueve la sangre acumulada con una esponja quirúrgica . 7. Se aplica el agente de prueba. 8. Se aplica una presión suave durante 1 minuto. 9. Se remueve la presión, se observa para determinar la presencia de sangrado durante 2 minutos. 10. Si la herida sangra, se repiten los pasos 5 y 6. 11. Se registro el número de composiciones que se requieren para controlar el sangrado y el tiempo hasta la hemostasis. 12. Se documenta si se logró la cesación completa del sangrado. (Definida como la ausencia de re-sangrado durante un periodo de 2 minutos después de la suspensión del sangrado) . 13. Se recogen los tejidos para patología. 16.3 PROTOCOLOS DE INMUNOTINCIÓN DE BAZO La inmunotinción fue efectuada empleando el kit de tinción de ET-1 de Peninsula Laboratories, Inc. (número de catálogo HIS-6901) con modificaciones menores. Preparación de platina y procedimiento de tinción 1. El tejido de bazo es muestreado y conservado por inserción de las muestras en parafina, en platinas, utilizando métodos estándares. La parafina es subsecuentemente removida mediante incubación durante 10 minutos en xileno al 100%. Se rehidratan las platinas en una serie graduada de 100% etanol, 95% etanol, y después en agua del grifo mediante inmersión 5 veces en cada solución. Se circunscriben las muestras de tejido ccn una pluma a prueba de agua Imm Edge (Vector Laboratories, número de catálogo H-4000) . Se almacenan las platinas en PBS, solución pH 7.4 en un frasco de Coplin. Se diluye la solución de remoción de máscara de antigeno (Vector Laboratories, número de catálogo H-3300) 100X y se calienta durante 30-45 segundos en otro frasco de Coplin. Se transfieren las platinas a esta solución y se incuba durante 20 minutos. Se cerciora que existe una cantidad suficiente de solución para cubrir las muestras de tejido para evitar el secado. Se enjuagan las platinas con una solución de PBS, pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se drena o seca las platinas para remover la solución en exceso. Se agregan 2 gotas de 100 µL de solución de bloqueo de suero de cabra normal a cada platina. Se incuba durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se drena o seca la solución en exceso de las platinas. No se enjuaga. Se reconstituye e anticuerpo primario liofilizados con 32 x~L de solución de PBS pH 7.4. A partir de esta solución madre, se diluye el anticuerpo primario por los factores de dilución de 400. Se agregan 2 gotas de 100 µ?? de anticuerpo primario diluido a cada platina. Se colocan las platinas horizontalmente en soportes de madera en una cámara de humedad y se incuba durante la noche a 4o C. Se enjuaga bien con una solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se agregan 2 gotas de 100 µ?, de anticuerpo secundario biotinilado a cada platina. Se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con una solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se apagan las platinas en peróxido de hidrógeno certificado al 3% (Fisher, número de catálogo H 312-500) durante 30 minutos a temperatura ambiente en un frasco de Coplin. Se enjuaga bien con PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se agregan 2 gotas de 100 µ? de conjugado Estreptavadina-HRP a cada platina y se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con una solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se hace una solución de DAB Chromagen (Vector Laboratories, número de catálogo sk-41067) mediante la adición de 5.0 mL de agua destilada a un frasco de centello de vidrio. Se agregan 2 gotas de una solución madre de amortiguador y se mezcla bien. Después se agregan 4 gotas de solución madre de DAB y se mezcla bien. Después se agregan 4 gotas de solución madre de DAB y se mezcla bien. Finalmente se agregan 2 gotas de una solución de peróxido de hidrógeno y se mezcla bien. Se agregan 200 µL de una solución DAB-Chromagen a cada platina. Se incuba durante 3 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con agua destilada y se seca. 9. Se contratiñen las platinas con una solución madre de 0.2% Working Lig t Green Solution (Sigma, número de catalogo L 5382) con un factor de dilución de 6. Se sumergen las platinas 3 veces en una solución orking Light Green y después se sumergen las platinas 5 veces cada una en una serie deshidratante de agua destilada, después etanol al 95%, después de etanol al 100%, y finalmente xileno al 100%. Se drena o secan las platinas para remover el exceso de xileno. 10. Se agregan 2 gotas de solución de montaje Cytoseal XYL (Stephens Scientific, número de catálogo 8312-4) y se monta la platina. 16.4 PROTOCOLO DE INMUNOTINCIÓN DE ARTERIAS La inmunotinción de tejidos arteriales efectuados utilizando un ET-1 Staining Kit de Península Laboratories, Inc. (número de catálogo HIS-6901) con ciertas modificaciones. Preparación de la platina 1. Se excitan las arterias pulmonares del venado obtenido comercialmente . 2. Se colocan las arterias en 100 mL de medio RPMI y se colocan en hielo. 3. Se efectúa una incisión en la arteria con un escalpelo. 4. Se coloca una membrana cuadrada de 1 cm X 1 cm que consiste fibras de p-GlcNac totalmente acetilada en la incisión durante 15 minutos. 5. Se hacen rebanadas transversales de la arteria en el sitio de aplicación de la membrana, para propósitos de histología. 6. Se colocan las secciones en formaldehido al 9%. Se preparan las platinas con parafina. Procedimiento de tinción 1. Se remueve la parafina de las platinas mediante incubación durante 10 minutos en xileno al 100%. Se re- hidratan las platinas en una serie graduada de 100% etanol, 95% etanol, y después en agua del grifo mediante inmersión 5 veces en cada solución. Se circunscriben las muestras de tejido con una pluma a prueba de agua Imm Edge (Vector Laboratories, número de catálogo H-4000) . Se almacenan las platinas en solución de PBS pH 7.4 en un frasco de Coplin. 2. Se diluye una solución de remoción de máscara de antigeno (Vector Laboratories, número de catálogo H- 3300) 100 veces y se calienta durante 30-45 segundos en otro frasco de Coplin. Se transfieren las platinas a esta solución y se incuban durante 20 minutos. Se cerciora que existe una cantidad suficiente de solución para cubrir las muestras de tejido para evitar el secado. Se enjuagan bien las platinas con una solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se drenan o secan las platinas para remover el exceso de solución. Se agregan 2 gotas o 100 µ?. de una solución de bloqueo de suero de cabra normal a cada platina. Se incuba durante 20 minutos a temperatura ambiente. Se drena o seca la solución en exceso de las platinas. No se en uaga . Se reconstituye el anticuerpo primario liofilizado con 32 µ] de solución de PBS pH 7.4. A partir de esta solución madre, se diluye el anticuerpo primario por un factor de dilución de 100. Se agregan 2 gotas o 100 µ?, de anticuerpo primario diluido a cada platina. Se colocan las platinas horizontalmente en soportes de madera en una cámara de humidificación y se incuba durante la noche a 4o C. Se enjuaga bien con solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se agregan 2 gotas o 100 xL de anticuerpo secundario biotinilado a cada platina. Se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con una solución de PBS pH 7.4 durante 2. minutos; se repite dos veces . Se apagan las platinas en peróxido de hidrógeno certificado 3% (Fisher, número de catálogo H 312-5000) durante 30 minutos a temperatura ambiente en un frasco de Coplin. Se enjuaga bien con PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces. Se agregan 2 gotas o 100 xh de conjugado estreptavadina-HRP a cada platina y se incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con una solución de PBS pH 7.4 durante 2 minutos; se repite dos veces . Se hace una solución DAB Chromagen (Vector Laboratories, número de catálogo sk-41067) mediante la adición de 5.0 mL de agua destilada a un frasco de centello de vidrio. Se agregan 2 gotas de solución madre de amortiguador y se mezclan bien. Después, se agregan 4 gotas de solución madre DAB y se mezcla bien. Finalmente, se agregan 2 gotas de una solución de peróxido de hidrógeno y se mezcla bien. Se agregan 200 µ?? de una solución DAB Chromagen a cada platina. Se incuba durante 3 minutos a temperatura ambiente. Se enjuaga bien con agua destilada y se seca. Se contratiñen las platinas con una solución madre de 0.2% Working Light Green Solution (Sigma, número de catálogo L 5382) con un factor de dilución de 6. Se sumergen las platinas 3 veces en una solución Working Light Green y después se sumergen las platinas 5 veces cada una en una serie deshidratante de agua destilada después 95% de etanol, después 100% de etanol, y finalmente en 100% de xileno. Se enjuagan y secan las platinas para remover el exceso de xileno. 10. Se agregan 2 gotas de solución de montaje Cytoseal XYL (Stephens Scientific, número de catálogo 8312-4) y se monta la platina. RESULTADOS Un examen histológico e inmunológico del tejido arterial tratado con una membrana que consiste de fibras de p-GlcNac totalmente acetilada estimuló la vasoconstricción inmediata en el sitio de contacto del tejido de arteria dañada y polímero de p-GlcNac. La vasoconstricción inducida por aplicación de la membrana de p-GlcNac fue observada más fácilmente, histológicamente, con los animales experimentales más granes. La constricción de tejido arterial es más notable en el lado de la arteria en donde se aplicó la membrana de p-GlcNac. Los resultados estos análisis se presentan en la figura 23 y figura 24. Sesenta minutos después de la aplicación de una gasa sobre la arteria porcina (figura 23(A) y figura 24, muestra A), valores comparables para espesores de pared arterial fueron obtenidos, que la pared fuese medida en el punto de contacto con la gasa, (1), o bien en un punto en el lado opuesto del punto en donde se aplicó la gasa. En contraste, la aplicación de una membrana formulada con p-GlcNac semi-cristalina a la arteria porcina (figura 23(B), figura 24, muestra B) indujo un espesamiento notable de la pared en el área de contacto (1), que fue aparente 15 minutos después de la aplicación de la membrana. Después de 60 minutos de contacto, el espesor de la pared arterial, de conformidad con lo medido en el área de contacto con la membrana de p-GlcNac (1) , habla regresado a un nivel comparable al espesor medido en un punto en el lado opuesto de la arteria (2) . Experimentos de inmunotinción con anticuerpos para endotelina-1 mostró secreción de endotelina-1 en el sitio de contacto entre la membrana de p-GlcNac y el tejido vivo. El experimento in vitro con arteria pulmonar de venado mostró la presencia de endotelina-1 solamente en la superficie de contacto de la arteria con la membrana de p-GlcNac. Experimentos in vivo mostraron una liberación sustancialmente mayor de endotelina-1 no solamente en la superficie de contacto entre el tejido tratado y la membrana de p-GlcNac, sino también en capas más profundas de tejido. Dentro de los primeros 15 minutos después de la aplicación de la membrana de p-GlcNac, se detectó una mayor cantidad de endotelina-1 que en el análisis comparable efectuado solamente después de 60 minutos de contacto entre el tejido tratado y la membrana de p-GicNac. Sin embargo, el efecto de constricción fue mayor que en otras muestras examinadas . La misma inmunotinción de endotelina-1 fue observada en platinas con otras muestras, pero fue mucho menor que con la membrana de p-GlcNac. Análisis histológico e inmunológico de tejido de bazo en contacto con la membrana de p-GlcNac reveló un incremento similar de la liberación de endotelina-1. Otra vez, dentro de los primeros 15 minutos después de aplicación de las membranas experimentales se observo endotelina-1 solamente en las muestras a las cuales la membrana de p-GlcNac había sido aplicada. Después de 60 minutos de contacto entre las membranas experimentales y los tejidos tratados, todas las muestras presentaron niveles comparables de endotelina-1. 17. EJEMPLOS: INDUCCIÓN DE p-GlcNac DE VASOCONSTRICCIÓN Y LIBERACIÓN DE ENDOTELINA EN AUSENCIA DE PRODUCTOS SANGUÍNEOS Este ejemplo demuestra que la p-GlcNac semi-cristalina totalmente acetilada de la presente invención induce vasoconstricción arterial, en ausencia de sangre. Más específicamente, este ejemplo demuestra que la p-GlcNac totalmente acetilada contrae significativamente anillos aórticos de rata aislados a través de un mecanismo dependiente del endotelio, parcialmente por liberación de endotelina-1 a partir de células endoteliales, en ausencia de cualquiera de los componentes de la cascada de coagulación. 17.1 MATERIALES Y MÉTODOS Anillos aórticos fueron obtenidos a partir de ratas Sprague-Dawley machos con un peso de 275-300 g. Las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico (60 mg/kg) inyectado de manera intraperitoneal . La aorta y la SMA fueron rápidamente removidos de ratas y suspendidas en amortiguador Krebs-Henseleit calentada (KH) que consiste de (en mmol/1) : 118NaCl, 4.75 KCI, 2.54 CaCI2*2H20, 1.19 K¾P0, 1.19 MgS04»7H20, 12.5 NaHC03, y 10.0 glucosa. Vasos aislados fueron, liberados cuidadosamente de tejido conectivo y cortados en anillos de 2-3 mm de longitud. Los anillos fueron después montados en ganchos de acero inoxidable, suspendidos en 10 mi de baño de tejido, y conectados a transductores de desplazamiento de fuerza FT-03 (Grass Instruments, Quincy, MA) para registrar los cambios en cuanto a fuerza en una grabadora oscilográfica Grass modelo 7. Los baños fueron llenados con amortiguador de KH y aereados a 37° C con 98¾ 02 + 5% C02. Una fuerza de apoyo de 0.5 g fue aplicada a los anillos de SMA y después los anillos fueron equilibrados durante 90 minutos. Durante este periodo, el amortiguador en el baño de tejido fue reemplazado cada 15-20 minutos y la fuerza de apoyo de los anillos vasculares fue ajustada hasta que se mantuviera 0.5 g de pre-carga. Después de 90 a 120 minutos de equilibrio, los anillos fueron expuestos a 100 nM U-46619 (9, ll-didescxi-9a-ll -metanepoxi-prostaglandina F?a, Biomol Research Laboratories, Plymouth Meeting, PA) , un mimético de tromboxano A2 para generar 1.0 g de fuerza desarrollada. Una vez obtenida una contracción estable, se agregó acetilcolina, un vasodilatador típico dependiente del endotelio al baño en concentraciones acumuladas de 0.1, 1, 10 y 100 nM para evaluar la integridad del endotelio. Después de la estabilización de la respuesta acumulada, los anillos fueron lavados y se permitió otra vez que se equilibraron a línea basal. El procedimiento fue repetido con U-46619 seguido por p-GlcNAc. p-GlcNAc produjo una vasocontracción dependiente de la concentración de 14 a 140 g/ml, de conformidad con lo indicado en la figura 23. En una concentración desarrollada de 140 g/ml, p-GlcNac contrajo significativamente los anillos aórticos por 218 ± 21 mg de fuerza desarrollada (p menor que 0.01). Anillos aórtico de De-endotelializados (es decir, el endotelio fue removido por el hecho de hacer rodar suavemente los anillos aórticos en un alambre de acero inoxidable torcido cubierto con algodón) fueron contraídos por solamente 33 ± 12 mg de fuerza desarrollada. El pre-tratamiento con un antagonista de receptor de endotelina EtA, JKC-301 (Cyclo[D-Asp-Pro-D-Iie-Leu-D-Trp] ) , Sigma Biochemicals and Reagents, St. Louis, MO) (0.5 y 1 M) disminuyó significativamente la vasoconstricción inducida por p-GlcNac por 57 a 61% (p<0.01).

Este procedimiento fue repetido con U-46619 seguido por p-GlcNac desacetilado al 70%. La sustitución de p-GlcNac desacetilada al 70% para p-GlcNac totalmente acetilada, semi-cristalina utilizada arriba no demostró una vasoconstricción en el sistema de modelo libre de sangre en todas las concentraciones probadas. Es aparente que muchas modificaciones y variaciones de esta invención de conformidad con lo establecido aquí pueden efectuarse sin salirse del espíritu y alcance de la misma. Las modalidades específicas descritas arriba se ofrecen solamente a título de ejemplo y la presente invención es limitada solamente dentro del marco de los términos de las reivindicaciones adjuntas. Varias publicaciones se mencionan aquí y sus divulgaciones se incorporan por referencia en sus totalidades.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para lograr una modulación transitoria, localizada de estructura y/o función vascular, que comprende : la administración tópica a un paciente que requiere de dicha modulación de una cantidad suficiente de material que comprende polímeros de ??1?-ß-1? N- acetilglucosamina, semi-cristalinos en donde los polímeros están libres de proteínas, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos, y sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos, y en donde dicha administración induce por o menos una respuesta fisiológica localizada, transitoria, seleccionada dentro del grupo que consiste de estimulación de liberación de endotelina-1, vasoconstricción, y reducción de flujo sanguíneo fuera de un vaso roto, por lo que el paciente presenta una modulación localizada, transitoria de estructura y/o función vascular. 2. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la respuesta fisiológica comprende la estimulación de liberación" de endotelina-1. 3. El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde la endotelina-1 es liberada de vasos endoteliales vasculares . El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la respuesta fisiológica comprende vasoconstricción. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la respuesta fisiológica comprende la reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el polímero de ???-ß-1?4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 150,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1-4, y dicho polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 30 millones de daltones . El método de conformidad con la reivindicación 6, en donde el polímero de poli-ß-?—>4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 50,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1?4, y dicho polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 10 millones de daltones. El método de conformidad con la reivindicación 7, en donde el polímero de ???-ß-1-»4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 5C a aproximadamente 10,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1-»4, y dicho polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 2 millones de daltones . El método de conformidad con la reivindicación 8, en donde el polímero de ???-ß-1-»4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1?·4, y dicho polímero tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 800,000 daltones. El método de conformidad con la reivindicación 6, en donde el polímero semi-cristalino de ???-ß-1-»4 N-acetilglucosamina comprende por lo menos un monosacárido de N-acetilglucosamina que es desacetilado, y en donde por lo menos el 40% de dichos monosacáridos de N-acetilglucosamina son acetilados. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el paciente es un ser humano. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el material tiene forma de gel, esponja, película, membrana, espuma, rocío, emulsión, suspensión, o solución. 13. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde el material es aplicado directamente a un vaso sanguíneo . 14. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la estructura vascular es un vaso sanguíneo seleccionado dentro del grupo que consiste de capilar, vena y arteria. 15. El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde el vaso sanguíneo es un vaso sanguíneo roto. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, en donde el paciente presenta una suspensión del sangrado . 17. El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la magnitud de la modulación transitoria, localizada de estructura y/o función vascular es sustancialmente proporcional a la cantidad de poli-ß- 1—>4 N-acetilglucosamina administrada. 18. Un material no formador de barrera, biodegradable, que comprende polímeros semi-cristalinos de poli-ß-?—4 N- acetilglucosamina que comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 150, 000 monosacáridos de N- acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-l—»4, libres de proteínas, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos, sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos, y que tienen un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 30 millones de daltones . El material de conformidad con la reivindicación 18, en donde el polímero semi-cristalino de poli-ß-?—>4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 50, 000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1—>4 y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 10 millones de daltones . El material de conformidad con la reivindicación 13, en donde el polímero semi-cristalino de poli-ß-?—4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 10,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1—4 y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 2 millones de daltones. El material de conformidad con la reivindicación 18, en donde el polímero semi-cristalino de poli-ß-?—>4 N-acetilglucosamina comprende de aproximadamente 50 a aproximadamente 4,000 monosacáridos de N-acetilglucosamina covalentemente unidos en una conformación ß-1-»4 y tiene un peso molecular de aproximadamente 10,000 daltones a aproximadamente 800,000 daltones. El material de conformidad con la reivindicación 18, en donde el polímero semi-cristalino de poli-ß-?—>4 N-acetilglucosamína comprende por lo menos un monosacárido de N-acetilglucosamina desacetilado, y en donde por lo menos el 40% de dichos monosacáridos de N-acetilglucosamina son acetilados. El material de conformidad con la reivindicación 18, en donde el material es un gel, esponja, película, membrana, espuma, rocío, emulsión, suspensión o solución. Un método para tratar un paciente que tiene un trastorno vascular que comprende: administrar tópicamente a un paciente que requiere de dicho tratamiento una cantidad suficiente de material que comprende polímeros de ???-ß-1?·4 N-acetilglucosamina semi-cristalinos en donde los polímeros están libres de proteínas, sustancialmente libres de otros contaminantes orgánicos, y sustancialmente libres de contaminantes inorgánicos, y en donde dicha administración induce por lo menos una respuesta transitoria localizada seleccionada dentro del grupo que consiste de la estimulación de liberación de endotelina-1, vasoconstricción y reducción del flujo de sangre fuera de un vaso roto, por lo que el paciente presenta una modulación pasajera, localizada de estructura y/o función vascular, en donde dicha administración mejora dicha condición vascular . El método de conformidad con la reivindicación 24, en donde el trastorno vascular se selecciona dentro del grupo que consiste de menorragia, aneurismo cerebral, aneurismo abdominal, lesión de fibromas uterinos, y punción de vaso sanguíneo. RES EN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones que comprenden polímeros de ß-?-4-N-acetilglucosamina semicristalinos (p-GlcNac) y métodos para utilizar tales polímeros para la modulación de la estructura y/o función vascular. Las composiciones y métodos divulgados son útiles para estimular, en forma dependiente de la concentración de p-GlcNac, la liberación de endotelina.-l, vasoconstricción, y/o reducción de flujo sanguíneo fuera de un vaso roto, así como para contribuir a la suspensión del sangrado o para efectuar dicha suspensión. Los métodos de la presente invención incluyen la administración tópica de materiales que comprenden polímeros de p-GlcNac semicristalinos libres de proteínas y sustancialmente libres de aminoácidos simples así como de otros contaminantes orgánicos e inorgánicos, y cuyos azúcares de monosacárido constituyentes están unidos en una conformación ß-1-4.