MXPA03001245A

MXPA03001245A - Metodo para el tratamiento del carcionma positivo para receptores de estrogeno.

Info

Publication number: MXPA03001245A
Application number: MXPA03001245A
Authority: MX
Inventors: Philip Frost
Original assignee: Wyeth Corp
Priority date: 2000-08-11
Filing date: 2001-08-06
Publication date: 2003-05-27
Also published as: CA2416976C; ATE278421T1; EP1318837A2; PT1318837E; US20020045638A1; WO2002013802A3; EP1318837B1; CA2416976A1; HK1056687A1; DE60106281D1; CN1446106A; DK1318837T3; AU2001283139A1; DE60106281T2; JP2004507465A; WO2002013802A2; ES2228932T3; AR033555A1; US6511986B2; CN100448487C

Abstract

La presente invencion se refiere a un metodo para el tratamiento o inhibicion de un carcinoma positivo a receptores de estrogeno en un mamifero que lo necesite, el cual comprende proporcionarle al mamifero una cantidad efectiva de una combinacion de una rapamicina y un antiestrogenico.

Description

MÉTODO PARA EL TRATAMIENTO DEL CARCINOMA POSITIVO PARA RECEPTORES DE ESTRÓGENO ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al uso de una combinación de rapamicina y un antiestrogénico, en el tratamiento o inhibición del carcinoma positivo para receptores de estrógeno, particularmente cáncer mamario y ovárico . El cáncer mamario es una de las principales causas de muerte por cáncer en mujeres en todo el mundo. El crecimiento de algunas células cancerosas en la mama en seres humanos está bajo el control hormonal. Evidencia sustancial sugiere que el estrógeno promueve el desarrollo del cáncer de mama. El efecto biológico del estrógeno en la mama está mediado por el receptor de estrógeno (ER) , el cual es un miembro de una gran familia de factores de transcripción mducibles por ligando. Al unirse con su receptor, el ligando inicia la disociación de las proteínas de choque térmico del receptor, la dimerización del receptor, la fosforilación y su unión a elementos de respuesta de ADN de genes blanco. Después de unirse al ADN, el ER regula de manera diferencial la transcripción de los genes blanco, con o sin otros factores de transcripción y coactivadores/correpresores . La acción del estrógeno puede REF: 144773 ser parcialmente bloqueada por antagonistas (antiestrogénicos) , que actúan a través de los ER de una manera que es competitiva con el estrógeno pero que no activa los genes que promueven el crecimiento celular. El agente antiestrogénico tamoxifen (Tam) ha sido la terapia de primera línea en el tratamiento y manejo del cáncer mamario, basándose en la respuesta del estrógeno para la estimulación del crecimiento tumoral. Desafortunadamente, la efectividad de la terapia con Tam se ve impedida por su actividad agonista con otros tejidos, tales como el útero, y por los efectos secundarios tales como los bochornos. Existe la necesidad de desarrollar nuevos antiestrogénicos o de desarrollar combinaciones óptimas de antiestrogénicos con otros agentes terapéuticos, para lograr una mejor eficacia y reducir los efectos secundarios. La rapamicina es un antibiótico de la clase de los trienos macrocíclicos producido por Streptomyces hygroscopi cus , el cual se encontró que tenía actividad antimicótica, particularmente contra Candida albicans, tanto In vi tro como in vivo [C. Vezina et al . , J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. ?ehgal et al . , J. Antibiot. 28, 727 (1975); H.

A. Baker et al . , J. Antibiot. 31, 539 (1978); Patente Norteamericana No. U.S. 3,929,992 y Patente Norteamericana No. U.S. 3,993,749]. Adicionalmente, la rapamicina por sí sola (Patente Norteamericana No. U.S. 4,885,171) o en combinación con picibanil (Patente Norteamericana No. U.S. 4,401,653) se ha demostrado que tienen actividad antitumoral. Un éster de rapamicina, el 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico [descrito en la Patente Norteamericana No. U.S. 5,362,718], también conocido como CCI-779, se ha demostrado que tiene actividad antitumoral contra una variedad de líneas de células tumorales, modelos tumorales en animales in vivo y en estudios clínicos de Fase I [Gibbons, J. , Proc . Am . Assoc . Can . Res . 40: 301 (1999); Geoerger, B., Proc. Am. Assoc. Can.

Res. 40: 603 (1999); Alexandre, J. , Proc. Am. Assoc. Can.

Res. 40: 613 (1999) y Alexandre, J. , Clin. C ncer. Res. 5 Suplemento de noviembre): Resumen 7 (1999)]. Se ha reportado que los antiestrogénicos no uterotróficos tienen actividad antitumoral [véase la Patente Norteamericana No. US 5,998,402]. El 2- (4-hidroxifenil) -3-metil~l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol, también conocido como ERA-923, se ha reportado que fue desarrollado para el tratamiento del cáncer mamario metastásico positivo a receptores de estrógeno [Gandhi, T. 2000 ASCO Program/Proceedings, Abstract 875, (mayo del 2000)]. DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona un método para el tratamiento o inhibición del carcinoma positivo a receptores de estrógeno en un mamífero que lo necesite, en donde el método comprende proporcionar una cantidad efectiva de una combinación de una rapamicina y un antiestrogénico a dicho mamífero . La presente invención también proporciona un producto que comprende una rapamicina y un antiestrogénico para ser administrados en forma de una preparación combinada para uso simultáneo, por separado o secuencial, en el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo a receptores de estrógeno en un mamífero. Tal como se define en la presente, el término "una rapamicina" define una clase de compuestos inmunosupresores que contienen el núcleo básico de rapamicina (que se muestra más adelante) . Las rapamicinas de la presente invención inc-luyen compuestos que pueden ser química o biológicamente modificados como derivados del núcleo rapamicina, mientras que siguen reteniendo sus propiedades inmunosupresoras . De conformidad con lo anterior, el término "una rapamicina" incluye esteres, éteres, oxíraas, hidrazonas e hidroxilaminas de rapamicina, así como rapamicinas en los cuales los grupos funcionales del grupo rapamicina han sido modificados, por ejemplo mediante reducción u oxidación. El término "una rapamicina" también incluye sales farmacéuticamente aceptables de rapamicinas que son capaces de formar tales sales, ya sea en virtud de contener una porción acida, o bien, una porción básica RAPAMICINA Se prefiere que los esteres y éteres de rapamicina tengan los grupos hidroxilo en las posiciones 42 y/ó 31 del núcleo rapamicma, esteres y éteres de un grupo hidroxilo en la posición 27 (después de la reducción química de la 27-cetona) y que las oximas, hidrazonas e hidroxilaminas se deriven de una cetona en la posición 42 (después de la oxidación del grupo 42-hidrox?lo) y de la 27-cetona del núcleo rapamicma. Los esteres y éteres en las posiciones 42 y 31 de rapamicina preferidos, se describen en las siguientes patentes, las cuales se incorporan en su totalidad en la presente como referencia: esteres de alquilo (Patente Norteamericana No. U.S. 4,316,885); esteres de aminoalquilo (Patente Norteamericana No. U.S. 4,650,803); esteres fluorados (Patente Norteamericana No. U.S. 5,100,883); esteres de amida (Patente Norteamericana No. U.S. 5,118,677); esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,118,678); esteres de sililo (Patente Norteamericana No. U.S. 5,120,842); aminoésteres (Patente Norteamericana No. U.S. 5,130,307); acétales (Patente Norteamericana No. 5,51,413); aminodiésteres (Patente Norteamericana No. U.S. 5,162,333); esteres de sulfonato y sulfato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,177,203); esteres (Patente Norteamericana No. U.S. 5,221,760); alcoxiésteres (Patente Norteamericana No. U.S. 5,233,036); éteres de O-arilo, 0-alquilo, O-alquenilo y O-alquinilo (Patente Norteamericana No. U.S. 5,258,389); esteres de carbonato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,260,300); carbamatos de arilcarbonilo y alcoxicarbonilo (Patente Norteamericana No. U.S. 5,262,423); carbamatos (Patente Norteamericana No. U.?. ,302,584); hidroxiésteres (Patente Norteamericana No. U.S. ,362,718); esteres con impedimento estérico (Patente Norteamericana No. U.S. 5,385,908); esteres heterocíclicos (Patente Norteamericana No. U.?. 5,385,909); esteres gem-disustituidos (Patente Norteamericana No. U.S. 5,385,910); esteres aminoalcanoicos (Patente Norteamericana No. U.S. 5,389,639); esteres de fosforilcarbamato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,391,730); esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,411,967), esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. 5,434,260), esteres de amidino carbamato (Patente Norteamericana No. 5,463,048); esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. U.S. 5,480,988); esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. U.?. 5,480,989); esteres de carbamato (Patente Norteamericana No. US. 5,489,680); N-óxido esteres con impedimento estérico (Patente Norteamericana No. U.?. 5,491,231); esteres de biotma (Patente Norteamericana No. U.?. 5,504,091), O-alquilésteres (Patente Norteamericana No. U?. 5,665,772) y PEG-ésteres de rapamicma (Patente Norteamericana No. U.?. 5,780,462). La preparación de estos esteres y éteres se describen en las patentes anteriormente listadas. De conformidad con lo anterior, algunos ejemplos de compuestos de rapamicina incluyen compuestos de la fórmula: en donde RA y RB se seleccionan del grupo que consiste de hidrógeno y grupos for adores de éster o éter como los descritos en cualquiera de las Patentes Norteamericanas anteriormente mencionadas. Los 27-ésteres y 27-éteres de rapamicina preferidos, se describen en la Patente Norteamericana No.

U.?. 5,256,790, la cual se incorpora en la presente como referencia. La preparación de estos esteres y éteres se describen en las patentes anteriormente listadas. Las oximas, hidrazonas e hidroxilaminas preferidas de rapamicina se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. U? 5,373,014, 5,378,836, 5,023,264 y 5,563,145, las cuales se incorporan en la presente como referencia. La preparación de estas oximas, hidrazonas e hidroxilaminas se describen en las patentes anteriormente listadas. La preparación de 42-oxorapamicina se describe en la Patente Norteamericana No. 5,023,263, la cual se incorpora en la presente como referencia. Las rapamicinas particularmente preferidas incluyen rapamicina [Patente Norteamericana No. U.S. 3,929,992], 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico [Patente Norteamericana No. U.?. 5,362,718] y 42-0- (2-hidroxi) etil rapamicina [Patente Norteamericana No. U.S. 5,665,772]. Tal como se utilizó de conformidad con la presente invención, el término "antiestrogénico" se define como un compuesto que impedirá o bloqueará los efectos de un agonista de estrógeno, tal como el 17ß-estradiol, cuando se administra de manera concomitante en un sistema de prueba. El término "no uterotróf co" significa antiestrogénicos que típicamente no producirán proliferación endometrial clínicamente significativa. Los antiestrogénicos incluyen compuestos tales como antiestrogénicos de trifenileno, incluyendo tamoxifen y 4-hidroxitamoxifen; clomifeno; y antiestrogénicos no uterotróficos , tales como aquellos mostrados a continuación en las fórmulas I y II, raloxifeno, droloxifeno, idoxifina, nafoxidma, toremifeno, ?T.:t-59, levomeloxifeno, LY-353381, CP-336156, MDL-103323, EM-800 e ICI-182, 780. Los antiestrogénicos no uterotróficos preferidos incluyen compuestos de las fórmulas I ó II que tienen las estructuras (I) (II) en donde: Ri es H, OH, carboalcoxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno o mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono; R2 es H, OH, carboalcoxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno, mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, ciano, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o trifluorometilo, a condición de que, cuando Ri sea H, R2 no sea OH. R3 y R cada uno, independientemente, son H, OH, carboalcoxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno, mono- o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono o ciano, a condición de que, cuando Ri sea H, R2 no sea OH. X es H, alquilo de 1 a 16 átomos de carbono, ciano, nitro, trifluorometilo o halógeno; n es 2 ó 3; Y es un grupo heterociclo de 5 a 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado, que contiene un nitrógeno, el cual puede, opcionalmente, contener un segundo heteroátomo que se selecciona del grupo que consiste de -O-, -NH- alquilamina de 1 a 6 átomos de carbono, -N= y ?(0)ra; m es de 0 a 2; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Los compuestos preferidos son aquellos en los cuales Ri se selecciona del grupo que consiste de H, OH o esteres de 1 a 12 átomos de carbono o éteres de alquilo de los mismos, halógeno; R2, R3. F , R5 y Re, independientemente, se seleccionan del grupo que consiste de H, OH o esteres de 1 a 12 átomos de carbono o éteres de alquilo de los mismos, halógeno, ciano, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o trihalometilo, de preferencia trifluorometilo, a condición de que, cuando R; sea H, R2 no sea OH; X se selecciona del grupo que consiste de H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, ciano, nitro, trifluorometilo, halógeno; La preparación de los antiestrogénicos de las Fórmulas I y II y sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos, se describen en la Patente Norteamericana No.

U.?. 5,998,402, la cual se incorpora en la presente como referencia. Los antiestrogénicos específicamente preferidos de las Fórmulas I y II se muestran en las siguientes Tablas.

TABLA 1 TABLA 2 - - TABLA 3 TABLA 4 Los antiestrogénicos particularmente preferidos de las Fórmulas I ó II son aquellos del Ejemplo 31 (2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) y del Ejemplo 32 ( l-[4- (2-azepan-l-il-etoxi) -bencil]-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-lH-indol-5-ol) de las tablas anteriores. Cuando sea aplicable, se pueden formar sales - - farmacéuticamente aceptables a partir de ácidos orgánicos e inorgánicos, por ejemplo, ácido acético, propiónico, láctico, cítrico, tartárico, succínico, fumárico, maleico, malónico, mandélico, málico, ftálico, clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, nítrico, sulfúrico, metansulfónico, naftalensulfónico, bencensulfónico, toluensulfónico, canforosulfónico y ácidos aceptables similarmente conocidos cuando la rapamicina o el antiestrogénico contienen una porción básica adecuada. También se pueden formar sales a partir de bases orgánicas e inorgánicas, tales como sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio, litio o potasio), sales de metales alcalinotérreos, sales de amonio, sales de alquilamonio que contienen de 1 a 6 átomos de carbono o de dialquílamonio que contienen de 1 a 6 átomos de carbono en cada grupo alquilo, y sales de trialquilamonio que contiene de 1 a 6 átomos de carbono en cada grupo alquilo, cuando la rapamicina o el antiestrogénico contiene una porción acida adecuada . Tal como se utiliza de conformidad con la presente invención, el término "proporcionar" con respecto a proporcionar un compuesto o sustancia abarcado por la presente invención, significa administrar directamente tal compuesto o sustancia, o administrar un profármaco, derivado o análogo que formará la cantidad equivalente del compuesto o sustancia dentro del cuerpo.

- - La capacidad de la combinación de las rapamicinas y antiestrogénicos de la presente invención para el tratamiento o inhibición de carcinomas positivos a receptores de estrógeno, se confirmó en tres procedimientos de prueba farmacológicos estándar, los cuales midieron la capacidad de la combinación rapamicina-antiestrogénico para medir el crecimiento de células de cáncer mamario MCF-7 y células de cáncer ovárico BG-1, como representantes de carcinomas positivos para receptores de estrógeno. En estos procedimientos de prueba, el 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico se utilizó como representante de rapamicina y el 2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-il o raloxifeno y el 4-hidroxi-tamoxífen se utilizaron como representantes de agentes antiestrogénicos . A continuación se describen brevemente los procedimientos utilizados y los resultados obtenidos. ?e mantuvieron células de cáncer mamario humano MCF-7 a 37 °C en una atmósfera húmeda con 5% de C02 y 95% de aire en medio IMEM suplementado con 10% de suero fetal bovino. Se mantuvieron células de cáncer ovárico humano BG-1 a 37 °C en una atmósfera húmeda con 5% de C02 y 95% de aire en medio IMEM suplementado con 10% de suero fetal bovino, 2 µg/mL de insulina y 1% de aminoácidos no esenciales. Un día antes del experimento, las células se inocularon en placas de - - 96 pozos a una densidad celular de 2,500 células/pozo en medio IMEM suplementado con 10% de suero fetal bovino. Al día siguiente, las células se trataron con varias concentraciones de antiestrogénico y 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico (referido como CCI-779 en las tablas que se presentan a continuación). Cinco o seis días después, el crecimiento celular se supervisó. Se agregó una solución MTT (20 µL) (0.5 mg/mL) a cada pozo y las células se incubaron durante 4 horas adicionales. Después la solución se retiró y se añadieron 150 µL de dimetiisulfóxido (DMSO) . La intensidad del color azul obscuro correspondiente al número de células, se leyó a 540 nm con un lector de placas automático. Las siguientes tablas resumen los resultados obtenidos; el 2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol se denomina como ERA-923 en las tablas que se presentan a continuación.

- - Tabla A: Efecto del CCI-779 y el ERA-923 sobre Células MCF-7 (Porcentaje de Inhibición) Tabla B. Efecto del CCI-779 y al 4-hidroxitamoxifen sobre Células MCF-7 (Porcentaje de Inhibición) - - Tabla C. Efecto del CCI-779 y el Raloxifeno sobre Células MCF-7 (Porcentaje de Inhibición) Tabla D. Efecto d?l ERA-923 (Por si solo) sobre Células MCF- 7 (Porcentaje de Inhibición) Tabla E. Efecto del CCI-779 (Por si solo) sobre Células MCF- 7 (Porcentaje de Inhibición) Tabla F . Efecto del 4 -hidroxi tamoxifen (Por sí solo) sobre Células MCF- 7 (Porcentaje de Inhibición) nM 9 ~ 02 '37 12 47 71 48 51 52 37 54 54 52.28 nM 37 37 49 04 47 11 51 71 , 50 34 51 06 58 29 nM 144 9 50 12 45 86 46 36 47 64 52 56 61 3 C nM 42 42 ; 50 39 47 6 42 54 48 22 49 75 57 28 1 J nK 46 46 154 19 53 22 48 3 51 79 59 13 59 68 1 1 50 nM 45 76 53 75 56 54 50 98 | 55 29 59 05 67 28 0 nM 49 99 59 23 58 11 58 57 161 34 61 13 64 92 1 Tabla G. Efecto del CCI-779 y el ERA-923 sobre Células BG-1 (Porcentaje de Inhibición) Tabla H. Efecto del CCI-779 y el -hidroxitamoxifen sobre Células BG-1 (Porcentaje da Inhibición) Tabla I. Efecto d?l CCI-779 y el Raloxifeno sobre Células BG-1 (Porcentaje de Inhibición) ?e llevó a cabo un análisis utilizando un software compartido de gráficas tridimensionales, Mac?ynergy II, desarrollado por Prichard y colegas (Prichard y ?hipman, 1990: 1992) para determinar si la combinación rapamicina más antiestrogénico inhibía de manera sinérgica el carcinoma positivo a receptores de estrógeno. Brevemente, se calcularon las interacciones aditivas teóricas a partir de las curvas de dosis-respuesta de cada fármaco individual, basándose en el modelo de independencia de Bliss. La superficie aditiva calculada, entonces, se restó de la superficie experimental para obtener una superficie de sinergia que representaba el % de inhibición sobre el índice de valor de sinergia aditivo calculado. Cualquier tipo por arriba del plano del 0% sugiere una sinergia. De manera similar, cualquier pico por debajo del plano del 0% indica un antagonismo. Los resultados se resumen en la tabla que se presenta a continuación para las combinaciones del 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico más los antiestrogénicos mostrados en la columna izquierda.

Los resultados obtenidos en estos procedimientos de prueba farmacológicos estándar, mostraron que la combinación de una rapamicma y un antiestrogénico inhibieron de manera smérgica el crecimiento del carcinoma positivo a receptores de estrógeno. Por ejemplo, los resultados mostraron que el tratamiento de células de cáncer mamario MCF-7 con una combinación de ERA-923 y CCI-779, causó una intensificación smérgica definida de la inhibición del crecimiento. El efecto inhibidor del crecimiento de ERA-923 en presencia de concentraciones no inhibitorias de CCI-779, se incrementó en aproximadamente 10 veces, lo cual fue estimado por la CI50, mientras que la inhibición del crecimiento causada por CCI- 779 en presencia de concentraciones no inhibitorias de ERA- 923, se incrementó en aproximadamente 40 veces. Como se muestra en la Tabla A, la sinergia fue más pronunciada a concentraciones bajas de ERA-923 (0.25 nM"1 nM) en combinación con altas concentraciones de CCI-779 (300-400 nM) . El más - - alto grado de sinergia observado fue de aproximadamente 60% por arriba del valor aditivo. Se muestran resultados similares con los antiestrogénicos raloxifeno y 4-hidroxitamoxifen, en combinación con CCI-779. Tanto el raloxifeno como el 4-hidroxitamoxifen demostraron una inhibición sinérgica en presencia de CCI-779. La inhibición sinérgica de las células MCF-7 con 4-hidroxitamoxifen en combinación con CCI-779, presentaron concentraciones óptimas que variaron de 5 a 20 nM (4-hidroxitamoxifen) y de 5 a 400 nM (CCI-779) (Tabla B) . La combinación de raloxifeno y CCI-779 también fue sinérgica en un amplio rango de concentraciones de cualquiera de los dos fármacos, variando de 0.25 a 5.0 nM de raloxifeno y de 5.0 a 400 nM de CCI-779 (Tabla C) . También se demostró una inhibición sinérgica en células de cáncer ovárico BG-1 dependientes de estrógeno, en donde los antiestrogénicos excepto el 4-hidroxitamoxifen se combinaron con una rapamicina, tal como CCI-779 (Tablas G, H, I) - La falla del 4-hidroxitamoxifen con CCI-779 para demostrar una inhibición sinérgica en células BG-1, probablemente está asociada con la actividad agonista parcial que tiene el 4-hidroxitamoxifen en el ovario. En el tercer procedimiento de prueba farmacológica estándar, ratones implantados con tumores MCF-7 fueron tratados con una combinación de ERA-923 y CCI-779. Lo siguiente brevemente resume el procedimiento utilizado y los resultados obtenidos. ?e disolvió ERA-923 en Tween 80 al 1% y NaCl al 0.9% en agua inyectable U?P. ?e hicieron alícuotas del fármaco en dosis diarias utilizando botellas de vidrio de 10.0 mL y se congelaron a -20°C hasta que se necesitaran. El CCI-779 se preparó fresco utilizando EtOH al 5%, Phosal al 4.9% y Tween 80 al 0.1% en Agua Estéril. De cada fármaco se administraron 0.2 mL por vía oral empezando un día después de la implantación del tumor. ERA-923 se administró diariamente durante todo el experimento y CCI-779 se administró cada tercer día durante los primeros 10 días. ?e administraron vehículos de control en el mismo régimen que los fármacos. ?e cultivaron células MCF-7 en medio IMEM que contenía 5% de ?uero Fetal Bovino con pases que variaban de 2 a 20. Después de la tripsinización, los tumores se resuspendieron en medio IMEM con 2% de Suero a una relación 1:1 con Matrigel. ?e inyectaron 10 millones de células por vía subcutánea en el tejido mamario de cada ratón, utilizando una jeringa de tuberculina de 1.0 mL con una aguja de calibre 23 3 4. ?e utilizaron ratones hembra atímicas ovarectomizadas nu/nu de 5 a 6 semanas de edad (Charles River Labs: Wilmington, MA),con un peso de 20.0 a 23.0 g, ?e albergaron 5 animales por jaula en un sistema de Jaulas Apiladas Microisolator (Lab Products: Maywood, NJ) . Cada ratón recibió una pella de 17ß-estradiol (0.72 mg/pella-60 días de liberación). Las pellas se - - inyectaron con un trocar de calibre 10 en el lado lateral del cuello, entre la oreja y el hombro 1-2 semanas antes de la inyección del tumor. Los grupos control fueron 15 ratones/vehículo mientras que los grupos de fármaco fueron 10 ratones/fármaco. Los tumores se midieron semanalmente por medio de calibradores solares (Cole-Parmer Instruments: Vernon Hills, IL) y el peso de los tumores se estimó a partir de su diámetro, utilizando la siguiente fórmula: Peso del tumor (mg) = longitud del tumor (mm) x ancho del tumor (mm)2/2. Los ratones fueron sacrificados 36 días después de la inyección del tumor por inhalación de C02. Lo siguiente resume los resultados que se obtuvieron. A los ratones desnudos portadores de MCF-7 se les administró ERA-923, CCI-779 ó una combinación de ambos fármacos. Bajo estas condiciones, el ERA-923 ó CCI-779 tuvieron un efecto parcial (de aproximadamente 35% de inhibición del crecimiento; inhibición del crecimiento = valor experimental - 200 (línea basal) / valor del control -200) . Sin embargo, la combinación de los fármacos inhibió el crecimiento tumoral en aproximadamente 85%. No se observaron señales de toxicidad con esta combinación de fármacos. Los resultados se resumen en la tabla que se presenta a continuación.

Efecto del tratamiento de combinación con CCI-779 y ERA-923, sobre el crecimiento de carcinoma mamario MCF-7 en ratones desnudos1 A los ratones des udo? ovarectom ados se les administraron 0.72 mg de pellas de 17ß-estradiol de liberación lenta at 60 días una semana antes de implantar 1 x 10 células morales MCF-7 cerca de las glándulas mamarias del animal . Un día después de implantado el tumor, se administró la terapia con el fármaco por vía oral (PO) de la manera indicada. El tamaño del tumor se midió en los días especificados de conformidad con ios métodos previamente establecidos (véase Discafani et al . , 1999. Biochem Pharmacol. 57: 917-925) . El tratamiento control es el efecto combinado de animales tratados con vehículo para CCI-779 (phosal) , vehículo para ERA-923 (Tween) o vehículo para ambos fármacos. Los tamaños promedio de los tumores de cada grupo control no variaron significativamente unos de otros y por lo tanto se combinaron. Los valores son el promedio ± la desviación estándar. El análisis estadístico se realizó utilizando una transformación logarítmica de los datos, seguido por la técnica ANOVA; se realizaron comparaciones por pares. Los asteriscos se refieren a la significancia estadística a p <0.05 en comparación con el grupo control. El asterisco doble (*/*) ó -/* se refiere a la significancia estadística o falta de ella en comparaciones por pares con la administración de CCI-779 ó ERA-923 por sí solos. Los valores del grupo al que se le administró CCI-779 más ERA-923 fueron estadísticamente diferentes en comparación con el grupo control al nivel de p <0.001. Se administró CCI-779 en phosal por vía oral cada tercer día comenzando en el día 1 y terminando en el día 9. Se administró ERA-923 en Tween por vía oral todos los días comenzando el día 1. Los fármacos se administraron en forma de dos dosis separadas. La dosificación se realizó en los días especificados en los grupos en los que cada fármaco se administró por sí solo. Con base en los resultados obtenidos en el - procedimiento de prueba farmacológica estándar anteriormente descrito, la combinación de una rapamicina y un antiestrogénico es útil para el tratamiento o inhibición del carcinoma positivo para receptores de estrógeno, particularmente el carcinoma mamario u ovárico positivo para receptores de estrógeno. Debe entenderse que la dosis efectiva de la combinación de una rapamicina y un antiestrogénico puede variar, dependiendo del compuesto particular utilizado, la vía de administración, la enfermedad y su gravedad, así como diversos factores físicos relacionados con el individuo que está siendo tratado. Se proyecta que una combinación de CCI-779 (como representante de rapamicina) y ERA-923 (como representante del antiestrogénico) se administrará una vez a la- semana a una dosis proyectada de 5 a 500 mg de CCI-779 (con un rango de dosis preferido de 50 a 200 mg) y de 2 a 500 mg de ERA-923 (con un rango de dosis preferido de 25 a 100 mg) . Las dosis iniciales de otras rapamicinas y antiestrogénicos se pueden obtener comparando las potencias relativas con el CCI-779 y ERA-923. Tal como se utiliza en la presente, el régimen de combinación se puede administrar de manera simultánea o se puede administrar en un régimen escalonado, administrándose la rapamicina a un tiempo diferente que el antiestrogénico en el transcurso de la quimioterapia. Esta diferencial de - - tiempo puede variar desde varios minutos, horas, días, semanas o hasta más entre la administración de los dos fármacos. Por lo tanto, el término combinación no necesariamente significa administrar al mismo tiempo o en forma de dosis unitaria, sino que cada uno de los componentes se administra apegándose a un periodo de tratamiento deseado. Por ejemplo, en la combinación de CCI-779 y ERA-923, se anticipa que el CCI-779 será administrado de manera parenteral y ERA-923 será administrado por vía oral. La combinación se puede administrar diariamente, semanalmente o incluso una vez al mes. Como es típico para los regímenes quimioterapéuticos, un curso de quimioterapia se puede repetir varias semanas después y puede seguir el mismo itinerario de administración de los dos agentes o dicho itinerario se puede modificar, basándose en la respuesta del paciente . Tales dosis se pueden administrar de una manera útil para dirigir los compuestos activos descritos en la presente al torrente sanguíneo del receptor, incluyendo la administración por vía oral, implantes, vía parenteral (incluyendo inyecciones intravenosa, intraperitoneal y subcutánea), rectal, intranasal, vaginal y transdérmica. Para los propósitos de la presente, se entiende que las administraciones transdérmicas incluyen todas las administraciones a través de la superficie corporal y - - revestimientos internos de los pasajes corporales, incluyendo tejido epitelial y mucosas. Tales administraciones se pueden llevar a cabo utilizando los compuestos de la presente, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en forma de lociones, cremas, espumas, parches, suspensiones, soluciones y supositorios (vía rectal y vaginal) . Las formulaciones orales que contienen los compuestos activos de la presente pueden comprender cualquier forma oral convencionalmente utilizada, incluyendo tabletas, cápsulas, formas bucales, trociscos, pastillas y líquidos, suspensiones o soluciones orales . Las cápsulas pueden contener mezclas de los compuestos activos con rellenos y/o diluyentes inertes tales como almidones farmacéuticamente aceptables (e.g., almidón de maíz, papa o tapioca), azúcares, agentes edulcorantes artificiales, celulosas pulverizadas, tales como celulosas cristalinas y microcristalinas, saborizantes, gelatinas, gomas, etcétera. Las formulaciones en tableta útiles pueden prepararse mediante compresión convencional, métodos de granulación en húmedo o granulación en seco y utilizar diluyentes farmacéuticamente aceptables, agentes aglutinantes, lubricantes, desintegrantes, agentes modificadores de la superficie (incluyendo tensoactivos) , agentes suspensores o estabilizantes, incluyendo, pero no limitándose a, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, laurilsulfato de sodio, celulosa microcristalina, - - carboximetilcelulosa calcica, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido algínico, goma de acacia, goma de xantano, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, sorbitol, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones deshidratados y azúcar pulverizada. Los agentes modificadores de superficie preferidos incluyen agentes modificadores de superficie no iónicos y aniónicos. Ejemplos representativos de agentes modificadores de superficie incluyen, pero no se limitan a, poloxamer 188, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetoestearílico, cera emulsificante cetomacrogol, esteres de sorbitán, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, silicato de magnesio y aluminio, y trietanolamina. Se prefiere que el poloxamer 188 se utilice más como agente modificador de superficie. Las formulaciones orales descritas en la presente pueden utilizar formulaciones de liberación retardada o controlada estándar para alterar la absorción de los compuestos activos. Las formulaciones orales preferidas de rapamicina se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. U.S. 5,559,121; 5,536,729; 5,989,591 y 5,985,325, las cuales se incorporan en la presente como referencia. En algunos casos puede ser deseable administrar los compuestos directamente en las vías respiratorias en forma de - - un aerosol. Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar de manera parenteral o intraperitoneal. Las soluciones o suspensiones de estos compuestos activos en forma de una base libre o sal farmacológicamente aceptable, se pueden preparar en medio acuoso mezclados adecuadamente con un tensoactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también se pueden preparar en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservador para prevenir el crecimiento de microorganismos. Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma farmacéutica debe ser estéril y debe ser líquida en tal grado que sean fáciles de inyectar. Debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento y debe protegerse contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (e.g., glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido) , mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales. Las formulaciones - - parenterales preferidas para la administración de la rapamicina se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. U.?. 5,530,006; 5,516,770 y 5,616,588, las cuales se incorporan en la presente como referencia. Las formulaciones en forma de supositorios pueden hacerse con materiales tradicionales, incluyendo mantequilla de cacao, con o sin la adición de ceras para alterar el punto de fusión del supositorio, y glicerina. También se pueden usar supositorios con una base soluble en agua, tal como poliet lenglicoles de varios pesos moleculares. ?e hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

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REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecedente, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un método para el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo para receptores de estrógeno en un mamífero que lo necesite, caracterizado porque comprende proporcionarle al mamífero una cantidad efectiva de una combinación de una rapamicina y un antiestrogénico. 2. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la rapamicina es rapamicina.
3. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la rapamicina es un éster, éter, oxima, hidrazona o hidroxilamina de rapamicina.
4. Un método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la rapamicina es un 42-éster ó 42-éter de rapamicina.
5. Un método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la rapamicina es 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico .
6. Un método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la rapamicina es 42-0- (2-hidroxi) etil rapamicina .
7. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el antiestrogénico es tamoxifen, 4-h?drox?tamoxifen, ó clomifeno.
8. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque el antiestrogenico es un estrógeno no uterotrófico.
9. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el antiestrogénico no uterotrófico se selecciona del grupo que consiste de raloxifeno, droloxifeno, idoxifina, nafoxidma, toremifeno, TAT-59, levomeloxifeno, LY-353381, CP-336156, MDL-103323, EM-800 e ICI-182,780.
10. Un método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el antiestrogémco no uterotrófico es un compuesto de las fórmulas I ó II que tiene la estructura (i) (ll) en donde : Ri es H, OH, alcanoiloxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno o mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono; R2 es H, OH, alcanoiloxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno, mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, ciano, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o trifluorometilo, a condición de que, cuando Rx sea H, R2 no sea OH, R3 y R4 cada uno, independientemente, son H, OH, carboalcoxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno, mono- o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono o ciano, a condición de que, cuando Ri sea H, R2 no sea OH, X es H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, ciano, nitro, trifluorometilo, o halógeno; n es 2 ó 3 ; Y es un grupo heterocíclico de 5 a 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene un nitrógeno, el cual puede, opcionalmente, contener un segundo heteroátomo que se selecciona del grupo que consiste de -O-, -NH- N (alquil)- en donde el grupo alquilo contiene de 1 a 6 átomos de carbono, -N=, y ?(0)m; m es de 0 a 2; o una sal f rmacéuticamente aceptable de los mismos .
11. Un método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el antiestrogénico es (2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del - - mismo.
12. Un método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el antiestrogénico es (l-[4-(2-azepan-1-il-etoxi) -bencil]-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la rapamicina es 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico, y el antiestrogénico es (2- (4-hidroxi-fenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque el carcinoma positivo a receptores de estrógeno es carcinoma de mama u ovárico.
15. Un método para el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo a receptores de estrógeno de la mama de un mamífero que lo necesite, caracterizado porque comprende proporcionarle al mamífero una cantidad efectiva de una combinación de 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico y (2- (4-hidroxifenil) -3- metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
16. Un método para el tratamiento o inhibición de - - un carcinoma positivo a receptores de estrógeno del ovario de un mamífero que lo necesite, caracterizado porque comprende proporcionarle al mamífero una cantidad efectiva de una combinación de 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico y (2- ( 4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
17. El uso de una combinación de una rapamicina y un antiestrogénico en la preparación de un medicamento para el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo a receptores de estrógeno en un mamífero.
18. El uso de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la rapamicina y el antiestrogénico son como los definidos en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y 15 y 16.
19. El uso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17 ó 18, caracterizado porque el carcinoma positivo a receptores de estrógeno es carcinoma de mama u ovárico .
20. Un producto caracterizado porque comprende una rapamicina y un antiestrogénico para la administración de una preparación combinada para uso simultáneo, por separado o secuencial, para utilizarse en el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo a receptores de estrógeno en un mamífero. -
21. Un producto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la rapamicina es rapamicin .
22. Un producto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la rapamicina es un éster, éter, oxima, hidrazona o hidroxilamina de rapamicina.
23. Un producto de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque la rapamicina es un 42-éster ó 42-éter de rapamicina.
24. Un producto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la rapamicina es 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico .
25. Un producto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la rapamicina es 42- 0- (2-hidroxi) etil rapamicina.
26. Un producto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizado porque el antiestrogénico es tamoxifen, 4-hidroxitamoxifen, o clomifeno.
27. Un producto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 20 a 25, caracterizado porque el antiestrogénico es un estrógeno no uterotrófico.
28. Un producto de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el antiestrogénico no uterotrófico se selecciona del grupo que consiste de raloxifeno, droloxifeno, idoxifina, nafoxidina, toremifeno, TAT-59 , levo eloxifeno, LY-353381, CP-336156, MDL-103323, EM-800 e ICI-182,780.
29. Un producto de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el antiestrogénico no uterotrófico es un compuesto de las fórmulas I ó II que tiene la estructura (I) (11) en donde: Ri es H, OH, alcanoiloxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno o mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono; R2 es H, OH, alcanoiloxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, halógeno, mono-o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono, ciano, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o trifluorometilo, a condición de que, cuando Ri sea H, R2 no sea OH, R3 y R4 cada uno, independientemente, son H, OH, alcanoiloxi de 2 a 12 átomos de carbono, alcoxi de 1 a 12 - - átomos de carbono, halógeno, mono- o poli-fluoroalcoxi de 1 a 12 átomos de carbono o ciano, a condición de que, cuando Ri sea H, R? no sea OH, X es H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, ciano, nitro, trifluorometilo, o halógeno; n es 2 ó 3; Y es un grupo heterocíclico de 5 a 7 miembros saturado, parcialmente saturado o insaturado que contiene un nitrógeno, el cual puede, opcionalmente, contener un segundo heteroátomo que se selecciona del grupo que consiste de -0-, -NH-, N (alquil)- en donde el grupo alquilo contiene de 1 a 6 átomos de carbono, -N=, y ?(0)m; m es de 0 a 2; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
30. Un producto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el antiestrogénico es (2- (4-hidroxifenil) -3-meti1-1-[4- ( 2-piperidin-1-i1-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
31. Un producto de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque el antiestrogénico es (l-[4- (2-azepan-l-il-etoxi) -bencil]-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-lH-indol-5-ol) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. - -
32. Un producto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la rapamícina es 42-éster de rapamicina con ácido 3-hidroxi-2- (hidroximetil) -2-metilpropiónico, y el antiestrogénico es (2- (4-hidroxifenil) -3-metil-l-[4- (2-piperidin-l-il-etoxi) -bencil-lH-indol-5-ol) o una sal f rmacéuticamente aceptable del mismo ó l-[4- (2-azepan-1-il-etoxi) -bencil]-2- (4-hidroxifenil) -3-metil-lH-indol-5-ol o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
33. Una composición farmacéutica para utilizarse en el tratamiento o inhibición de un carcinoma positivo a receptores de estrógeno en un mamífero, caracterizada porque comprende una rapamicina y un antiestrogénico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.