MXPA02001947A - Proceso y compuestos intermedios para la preparacion de isoxazolcooxamidas y analogos. - Google Patents

Proceso y compuestos intermedios para la preparacion de isoxazolcooxamidas y analogos.

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Abstract

Rutas eficientes de sintesis para la preparacion de inhibidores de proteasa de rinovirus de la formula (I), particularmente (I'), compuestos intermedios clave utiles en estas rutas de sintesis, asi como un reactor de membrana continua util para estas rutas de sintesis. Estos compuestos de la formula (I), asi como las composiciones farmaceuticas que contienen estos compuestos, son adecuados para tratar pacientes u hospedadores infectados con uno o mas picarnavirus.

Description

PROCESO Y COMPUESTOS INTERMEDIOS PARA LA PREPARACIÓN DE ISOXAZOLCOOXAMIDAS Y ANÁLOGOS Campo Técnico y Aplicabilidad Industrial La presente invención se refiere a un proceso mejorado para la preparación de etil-3{(5'-metilisoxazol -3 ' -carbonil) -L-Val? (COCH2) -L- (4-F-Fe) -L- (( S )- Pirrol -Ala) } -E -propanoato , sus análogos y sales farmacéuticamente aceptables del mismo. La presente invención también incluye un nuevo grupo de compuestos intermedios que se van a usar en el proceso anterior. Adicionalmente, la presente invención incluye un reactor de membrana continua útil para el uso con los procesos de la presente invención .
Antecedentes de la Invención Los picornavirus son una familia de virus que contienen ARN, de hebra positiva, no envueltos, diminutos que infectan humanos y otros virus . Estos virus incluyen los rinovirus humanos, poliovirus humanos, coxsackievirus humanos, ecovirus humanos, REF: 135758 _ri_t_ta_^_a_é_H_a_l_B__i enterovirus humanos y bovinos, virus de encefalomiocardit is , virus de meningitis, virus de pie y boca, virus de hepatitis A y otros. Los rinovirus humanos son la causa principal del resfriado común.
Se requieren enzimas 3C proteolíticas para la maduración natural de los picornavirus . De esta manera, la inhibición de la actividad de estas enzimas 3C proteolíticas debe representar un planteamiento importante y útil para el tratamiento y curación de infecciones virales de esta naturaleza, incluyendo el resfriado común.
Se han descubierto recientemente algunos inhibidores de molécula pequeña de la actividad enzimática de la 3C proteasa picornaviral (es decir, compuestos ant ipicornaviral es ) . Ver, por ejemplo, Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 08/850,398, presentada el 2 de Mayo de 1997, por Webber et al.; Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 08/9991,282, presentada el 16. de diciembre de 1997, por Dragovich et al.; y Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 08/991,739, presentada el 16 de diciembre de 1997 por Webber et _fe_^_^_N_H_^_É_M_ti_ÍI_Í_Í_l_Í_B_tf_a_H_l_ _^ al. Estas solicitudes d Patente de los Estados Unidos, las descripciones de las cales se incorporan en la presente como referencia, describen ciertos compuestos ant ipicornavirales y los métodos para su síntesis .
De manera más reciente, se ha descubierto un grupo especialmente potente de agentes picornavirales como se expone en la solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 60/098,354, (la solicitud "354) presentada el 28 de agosto de 1998, por Dragovich et al., que se incorpora en la presente como referencia. Esta solicitud describe, ínter Alia, un grupo de agentes ant ipicornavirales de la fórmula general I. Un compuesto particularmente promisorio, el AG7088, que cae dentro el alcance de este grupo, exhibe excelentes propiedades antivirales contra una plétora de serotipos rinovirales y actualmente está en ensayo clínico en humanos. La solicitud "354 también describe métodos y compuestos intermedios útiles para sintetizar estos compuestos. Por ejemplo, el Método General V en la presente describe un método general para sintetizar los compuestos de la Fórmula general I que comprende someter un ácido carboxílico de la fórmula general BB a una reacción de formación de amida con una amina de la fórmula general P para proporcionar un producto final CC, como se muestra a cont inuac ion .
CC ^l^aB La solicitud '354 describe métodos para sintetizar los compuestos intermedios de las Fórmulas generales BB y P, y enseña métodos para llevar a cabo la reacción de formación de amida referida anteriormente. De esta manera, la solicitud '354 enseña métodos adecuados para sintetizar los compuestos de la fórmula general I a partir de un ácido carboxílico BB (dentro del alcance de los compuestos de la fórmula general II referida posteriormente) y los compuestos de la fórmula general P (la misma como los compuestos de la fórmula general III referida posteriormente) . De manera similar, dos recientes publicaciones de Dragovich describen agentes antipicornavirales y los métodos de síntesis adecuados para su síntesis. Ver, Structure-Based Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Irreversible Human Rhinovirus 3C Proteases Inhibitors. 3. Structure Activity Studies of Ketomethylene-Containing Peptidomimetics, Dragovich et al., Journal of Medicinal Chemistry, ASAP, 1999; y Structure-Based Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Irreversible Human Rhinovirus 3C Proteases Inhibitors. 4. incorporation of R1 Lactaman Moieties as L-Glutamine Replacements, Dragovich et al., Journal of Medicinal Chemistry, ASAP, 1999. Estos Artículos mencionados con anterioridad se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. Sin embargo, aun hay un deseo de descubrir procesos más eficientes mejorados y nuevos compuestos intermedios para el uso en la síntesis de los compuestos del grupo de agentes antipicornavirales . En particular, hay una necesidad de métodos mejorados para sintetizar los compuestos de las fórmulas generales I, II y III. El proceso de la presente invención comprende un paso de reducción enzimática. Debido a lo costoso de ciertos catalizadores, incluyendo catalizadores enzimáticos, ha habido una necesidad de reciclar ciertos catalizadores costosos. Esto se ha hecho, ínter. Alia, mediante el uso de un reactor de membrana continua. El desarrollo de reactores de membrana continua a hecho uso de estos catalizadores costosos económicamente viable en la preparación de los compuestos. Sin embargo, hasta la presente invención, los reactores de membrana continua han sido costosos y carecen de versatilidad para variar significativamente la escala de la reacción catalítica. Específicamente, los reactores de membrana continua, conocidos, emplean reactores de filtro de fibra hueca, en los cuales la mayoría del volumen del (los) reactivo (s) y enzima (s) está presente, donde se presenta la mayoría de la reacción enzimática. Por consiguiente, para variar la escala de la reacción, se debe emplear un reactor de filtro de fibra hueca, diferente de tamaño apropiado. Ver, por ejemplo, E. Schmidt et al., Journal of Biotechnology, 24 (1992) 315-327, que describe un reactor de membrana continua. El artículo mencionado anteriormente se incorpora en la presente como referencia. Adicionalmente, debido ai costo de los reactores de filtro de fibra hueca, los reactores de membrana continua, conocidos tienden a ser costosos. De esta manera, hay una necesidad de un reactor de membrana continua más económico y versátil.
Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere al descubrimiento de un proceso eficiente y económicamente efectivo para la preparación de los agentes antipicornavirales de la fórmula I, tal como el compuesto AG7088, así como compuestos intermedios que son útiles en esa síntesis. Los agentes antipicornavirales de la fórmula I comprenden: SU_Í_á_W_ en donde Rx es H, F, un grupo alquilo, OH, SH, o un grupo O-alquilo; R2 y R3 son cada uno independientemente H; en donde n es un número entero de 0 a 5 , A es CH o N, A, y cada A3 se seleccionan independientemente a partir de C(R41)(R..), N(R41), S, S(O), S(0)2 y O, y A. es NH o NR., , donde cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, con la condición que no más de dos heteroátomos se presenten consecutivamente en el anillo representado anteriormente formado por A,, A2 , (A3)n, A. y C=0, y al menos uno de R2 y R3 es R4 es R5 y R6 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18 , o -NR17OR18, en donde R17, R18, y R?9 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menos uno de R7 o R8 sea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18, o -NR17OR18; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N, S, ; y Z y Zx son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, ' un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -CO,R21, CN, -C(0)NR21R22, -C (O) NR21OR22 , -C(S)R,,, -C(S)NR21R2 , -N02, -SOR,,, -SO-R,., -S02NR21R2 , -SO (NR-.) (OR. , -SONR21, -PO(OR,.),, -PO(R-.) (R. , -PO (NR21R22 (OR ) , -PO(NR21R22) (NR.3R:4) , - (CO) NR1NR2,R,3 , o -C ( S ) NR:,NR;;R:j , donde R21, R22, R,3 y R,4 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalqulo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cualquiera de dos de R_, , R„„, R,3 y R24, junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición que Z y Z, no sean ambos H; o Z? Y X ' junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z? o R1 son como se definen anteriormente excepto para las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Zx, junto con los átomos a los cuales se unen, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z y Z son como se definen anteriormente excepto para __^Í_M_iM las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo . Como se analiza anteriormente, estos agentes antipícornavirales de la fórmula I se pueden sintetizar al someter un compuesto de la fórmula general II junto con un compuesto de la fórmula general III a una reacción adecuada de formación de amida. El proceso de la presente invención proporciona un método más efectivo en el costo y más eficiente para sintetizar los compuestos de la fórmula I a partir de los compuestos de las fórmulas II y III. El proceso de la presente invención también proporciona métodos más efectivos en el costo y más eficientes para sintetizar los compuestos de la fórmula II, proporcionando de esta manera un método total, mejorado para la síntesis de los agentes antipicornavirales de la fórmula I . Adicionalmente, la presente invención proporciona nuevos compuestos intermedios para el uso en los procesos de la presente invención, y nuevos procesos para la preparación de estos nuevos compuestos intermedios. La presente invención también se refiere a un reactor de membrana continua que se puede usar en los procesos de la presente invención. Estos objetos, ventajas y características de la presente invención se entenderán más completamente y se apreciarán con referencia a la especificación descrita.
Descripción Detallada de una Modalidad Preferida de la Invención Como se usa en la presente solicitud, las siguientes definiciones aplican: De acuerdo con una convención usada en la técnica, se usa en fórmulas estructurales en donde para representar la unión que es el punto de unión de la porción o sustituyente para la estructura del núcleo o armazón . Donde se incluyen carbonos quirales en estructuras químicas, al menos que se represente una orientación particular, ambas formas quiméricas se propone que se abarquen. Un "grupo alquilo" se propone que signifique un radical monovalente de cadena recta o ramificada de átomos de carbonos saturados y/o insaturados y átomos de hidrógeno, tal como metilo, (Me) , etilo (Et) , propilo, isopropilo, butilo (Bu), isobutilo, t-butilo, (t-Bu), etenilo, pentenilo, butenilo, propenilo, etinilo, butinilo, propinilo, pentinilo hexinilo, y similares, que pueden estar insustituidos (es decir, que contienen solo carbono e hidrógeno) o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados como se define posteriormente (por ejemplo, uno o más halógenos, tal como F, Cl, Br o I, donde F y Cl que se prefiere) . Un "grupo alquilo inferior" se propone que signifique un grupo alquilo que tiene de 1 a 4 átomos de carbono en su cadena. Un "grupo cicloalquilo" se propone que signifique un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico, monovalente, no aromático que contiene 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 átomos de carbono de anillo, cada uno de los cuales puede estar saturado o insaturado, y que puede estar insustituido o sustituido por uno o más sustituyentes adecuados como se define posteriormente, y al cual se pueden fusionar uno o más grupos heterocicloalquilo, grupos arilo, o grupos heteroaplo, que por si mismos pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes. Los ejemplos ilustrativos de los grupos cicloalquilo incluyen las siguientes porciones: Un "grupo heterocicloalquilo" se propone que signifique un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico, monovalente, no aromático, que está saturado o insaturado, que contiene 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o 18 átomos de anillo, que incluye 1, 2, 3, 4, o 5 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno y azufre, donde el radical está insustituido o sustituido por uno o más sustituyentes adecuados como se define posteriormente, y al cual se pueden fusionar uno o más grupos cicloalquilo, grupos arilo, o grupos heteroarilo, que por si mismos pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados. Los ejemplos ilustrativos de grupos heterocicloalquilo incluyen las siguientes porciones : Un "grupo arilo" se propone que signifique un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico, monovalente, aromático que contiene 6, 10, 14 o 18 átomos de carbono de anillo, que pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados como se define posteriormente, y el cual se pueden fusionar uno o más grupo cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo, o grupos heteroarilo, que por si mismos pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados. De esta manera, el término "grupo arilo" incluye un grupo bencilo (Bzl). Los ejemplos ilustrativos de grupos arilo incluyen las siguientes porciones: Un "grupo heteroarilo" se propone que signifique un radical monocíclico, bicíclico o tricíclico, monovalente, aromático que contiene 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, o 18 átomos de anillo, que incluyen 1, 2, 3, 4, o 5 heteroátomos seleccionados de nitrógeno, oxígeno, azufre, que pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados como se define posteriormente, y al cual se pueden fusionar uno o más grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo, o grupos arilo, que por si mismos pueden estar insustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes adecuados. Los ejemplos ilustrativos de grupos heteroarilo incluyen las siguientes porciones: Un "heterociclo" se proponen que signifique un grupo heteroarilo o heterocicloalquilo (cada uno de los cuales, como se define anteriormente, están opcionalmente sustituidos) . Un "grupo acilo" se propone que signifique un radical -C(0)-R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente . Un "grupo tioacilo" se propone que signifique un radical -C(S)-R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente . Un "grupo sulfonilo" se propone que signifique un radical -S02R, donde R es un sustituyente como se define posteriormente . Un "grupo hidroxi" se propone que signifique el radical -OH. Un "grupo amino" se propone que signifique el radical -NH2. Un "grupo alquilamino" se propone que signifique el radical -NHRa, donde Ra es un grupo alquilo. Un "grupo dialquilamino" se propone que signifique el radical -NRaRb, donde Ra y 1^ son cada uno independientemente un grupo alquilo. Un "grupo alcoxi" se propone que signifique el radical -ORa, donde Ra es un grupo alquilo. Los grupos t-a. t,».., - i-jni.. k itttm ••('.__•— - •"-—• - **-t^-"«'-»'*——- '*"»* •»-*-- alcoxi de ejemplo incluyen metoxi, etoxi, propoxi, y similares . Un "grupo alcoxicarbonilo" se propone que signifique el radical -C(0)ORa, donde Ra es un grupo alquilo. Un "grupo alquilsulfonilo" se propone que signifique el radical -SO„Ra, donde Ra es un grupo alquilo. Un "grupo alquilaminocarbonilo" se propone que signifique el radical -C(0)NHRa donde Ra es un grupo alquilo. Un "grupo dialalquilaminocarbonilo" se propone que signifique el radical -C(0)NRaRb, donde Ra y Rc son cada uno independientemente un grupo alquilo. Un "grupo mercapto" se propone que signifique el radical -SH. Un "grupo alquiltio" se propone que signifique el radical -SRa en donde Ra es un grupo alquilo. Un "grupo carboxi" se propone que signifique el radical -C(0)OH. Un "grupo carbamoilo" se propone que signifique el radical -C(0)NH2. Un "grupo ariloxi" se propone que signifique el radical -ORc, donde Rc es un grupo arilo. Un "grupo heteroariloxi" se propone que signifique el radical -ORd, donde Rd es un grupo heteroarilo . Un "grupo ariltio" se propone que signifique el radical -SRc, donde Rc es un grupo arilo. Un "grupo heteroariltio" se propone que signifique el radical -SRd, donde Rd es un grupo heteroarilo . Un "grupo saliente" (Lv) se propone que signifique cualquier grupo adecuado que se desplazará por una reacción de sustitución. Un experto en la técnica conocerá que cualquier base conjugada de un ácido fuerte puede actuar como un grupo saliente. Los ejemplos ilustrativos de grupos salientes adecuados incluyen de manera enunciativa y sin limitación, -F, -Cl, Br . Cloruros de alquilo, brumuros, yoduros de alquilo, sulfonatos de alquilo, bencensulfonatos de alquilo, p-toluensulfonatos de alquilo, metansulfonatos de alquilo, triflato, y cualquier grupo que tenga unión bisulfato, metil-sulfato o sulfonato. Los grupos protectores típicos, reactivos y solventes tal como de manera enunciativa y sin limitación, aquellos listados posteriormente en la Tabla 1 tienen las siguientes abreviaciones como se usa en la presente y en las reivindicaciones. Un experto en la técnica reconocerá que los compuestos listados dentro de cada grupo se pueden usar de manera intercambiable, por ejemplo, un compuesto listado bajo "reactivos y solventes" se puede usar como un i^ tá ? ?. *..i. ¡-Jk .... t * >*a-fcA, -1"—"- grupo protector, y así sucesivamente. Adicionalmente, un experto en la técnica conocerá otros posibles grupos protectores, reactivos y solventes; estos se proponen para estar dentro del alcance de esta invención.
Tabla 1 Grupos Protectores Ada Adamantano-acetilo Alloc Aliloxicarbonilo Allyl Éster alílico Boc Butiloxicarbonilo Cbz Benciloxicarbonilo FmoC Fluorenilmetiloxicarbonilo OBzl Éster bencílico OEt Éster etílico OMe Éster metílico Tos (Tosyl) p-Toluensulfonilo Trt Trifenilmetilo Reactivos y Solventes ACN Acetonitrilo AcOH Ácido acético Ac . sub .2 0 Anhídrido de ácido acético AdacOH Ácido adamantano-acético AIBN 2 , 2-azobisisobutironitrilo htA.oajia-mnnt- fifj-jffjMjA-....,- ....._...,. ? nm , -Jr -t r-"*— -*• -<——"—-» Alloc-Cl Cloruro de aliloxicarbonilo BHT 2 , 6-di-ter-butil-4-metilfenol Boc.Sub-20 Dicarbonato de di-ter-butilo CDI 1,1' -carbonildiimidazol CDMT Clorodimetiltriazina DCM Cloruro de metileno DIEA Diisorporiletilamina DIPEA N, N-diispropiletilamina DMA Diemtilacetamida DMF N, N-dimetilformamida DMSO Sulfóxido de dimetilo EDTA Ácido etilendiaminotetraacético Et.sub.3 N Trietilamina EtOAC Acetato de etilo FDH Formiato-deshidrogenasa FmocOSu 9-fluorenilmetiloxicarbonilo Éster de N- hidroxisuccinimida HATU N-óxido de N- [ (dimetilamino) -1H-1 , 2 , 3- triazol]4, 5-b]piridilmetileno] -N-metanaminio hexafluorofosfato HOBT 1-hidroxibezotriazol HF Ácido fluorhídrico LDH Lactato-deshidrogenasa LiHMDS Bistrimetilsililamida de litio MeOH Metanol Mes (Mesyl,' Metanosulfonilo MTBE Éter metílico de t-butilo NAD Dinucleótido de nicotinamida-adenina NADH Hidrógeno-peróxido-oxidoreductasa NaHMDS Bistrimetilsililamida sódica NMP l-metil-2-pirrolidona Nin. Ninhidrina i-PrOH Iso-propanol Pip Piperidina PPL Lípasa pTSA Ácido-p-toluens?lfónico monohidratado Pyr Piridina TEA Trietilamina TET Trietilentetraamina TFA Ácido trifluoroacético THF Tetrahidrofurano Triflate Trifluorometansulfonilo . (Tf) El término "porción orgánica adecuada" se propone que signifique cualquier porción orgánica reconocible, tal como por prueba de rutina, por aquellos expertos en la técnica como que no afecta adversamente la actividad inhibitoria de los compuestos inventivos. Los ejemplos ilustrativos de las porciones orgánicas adecuadas incluyen de manera enunciativa y sin limitación, grupos hidroxilo, grupo alquilo, grupos oxo, grupos cicloalquilo, grupos 5 heterocicloalquilo, grupos arilo, grupos heteroarilo, grupos acilo, grupos sulfonilo, grupos mercapto, grupos alquiltio, grupos alcoxi, grupos carboxi, grupos amino, grupos alquilamino, grupos dialquilamino, grupos carbamoilo, grupos ariltio, grupos heteroariltio, y 10 similares. El término "sustituyente" o "sustituyente adecuado" se propone que signifique cualquier sustituyente adecuado que se pueda reconocer o seleccionar, tal como a través de la prueba de rutina, como aquellos expertos en la 15 técnica. Los ejemplos ilustrativos de sustituyentes adecuados incluyen grupos hidroxi, halógeno, grupos oxo, grupos alquilo, grupos acilo, grupos sulfonilo, grupos mercapto, grupos alquiltio, grupos alquiloxi, grupos cicloalquilo, grupos heterocicloalquilo, grupos arilo, 20 grupos heteroarilo, grupos carboxi, grupos amino, grupos alquilamino, grupos dialquilamino, grupos carbamoilo, grupos aliloxi, grupos heteroaliloxi , grupos ariltio, grupos heteroariltio, y similares. El término "opcionalmente sustituido" se propone 25 que indique de manera expresa que el grupo especificado está insustituido o sustituido por uno o más sustituyentes adecuados, al menos que los sustituyentes adecuados se especifique de manera expresa, caso en el cual el término indica que el grupo está insustituido o sustituido con los 5 sustituyentes especificados. Como se define anteriormente, varios grupos pueden estar insustituidos o sustituidos (es decir, están opcionalmente sustituidos) a menos que se indique de otra manera en la presente (por ejemplo, al indicar que el grupo especificado está insustituido) . 10 Un "profármaco" se propone que signifique un compuesto que se cubre bajo las condiciones fisiológicas o por solvólisis o metabólicamente a un compuesto especificado que es farmacéuticamente activo. Una "metabolito farmacéuticamente activo" se 15 propone que signifique un producto farmacológicamente activo producido a través del metabolismo en el cuerpo de un compuesto especificado. Un "solvato" se propone que signifique una forma de solvato farmacéuticamente aceptada de un compuesto 20 especificado que retiene la efectividad biológica de este compuesto. Los ejemplos de solvatos incluyen compuestos de la invención en combinación con agua, isopropanol, etanol, metanol, sulfóxido de dimetilo, acetato de etilo, ácido acético, o etanolamina. 25 Una "sal farmacéuticamente aceptable" se propone que signifique una sal que retiene la efectividad biológica de los ácidos libres y bases del compuesto especificado y que no es biológicamente o de otra manera indeseable. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen 5 sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, fosfatos monoácido, fosfatos diácidos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, capilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, 10 propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butina-1 , 4-dioatos, hexina- 1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos , metilbenzoatos, denitrobenzoatos , hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftlatos, sulfonatos, silenosulfonatos , filacetatos, 15 fenilpropionatos , filbutiratos, citratos, lactatos, ?- hidroxibutiratos , glicolatos, tartratos, etano-sulfonatos , • propanosulfonatos, naftalen-1-sulfonatos, naftalen-2- sulfonatos, y mandelatos. La presente invención proporciona adicionalmente 20 métodos de síntesis que están comprendidos de uno de los pasos de síntesis expuestos en la presente descripción. Un método sintético está comprendido de un paso de síntesis cuando el paso de síntesis es al menos parte del método de síntesis final. De esta manera, el método de síntesis solo 25 puede ser el paso de síntesis o tener pasos de síntesis ^¡^^A^gUÍgtig adicionales que pueden estar asociados con éste. Este método de síntesis puede tener pocos pasos de síntesis adicionales o puede tener numerosos pasos de síntesis adicionales . Si el agente antipicornaviral de la fórmula I formado del proceso de la presente invención es una base, una sal deseada se puede preparar por cualquier método adecuado conocido en la técnica, incluyendo el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares, o con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido maléico, ácido succinico, ácido mandélico, ácido cumárico, ácido málonico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido piranosidílico, tal como ácido glucorónico o ácido galacturónico; ácido alfa-hidroxi , tal como ácido cítrico, o ácido tartárico; aminoácido tal como ácidos apsártico o ácido glutámico; ácido aromático, tal como ácido benzoico o ácido cinnamico; ácido sulfónico, tal como ácido p-toluensulfónico o ácido etansulfónico; o similares . Si el agente antipicornaviral de la fórmula I formado del proceso de la presente invención es un ácido, es una sal deseada se puede preparar por cualquier método adecuado conocido en la técnica, incluyendo tratamiento del .^j-. .j.. ácido libre con una base inorgánico u orgánica, tal como amina (primaria, secundaria o terciaria) , un hidróxido de metal alcalino o metal alcalinotérreo; o similares. Los ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos tal como glicina o arginina; amoníaco; aminas primarias, secundarias y terciarias; y aminas cíclicas; tal como piperidina, morfolina y piperazina; así como sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio. En el caso de compuestos, sales o solvatos que son sólidos, se entiende por aquellos expertos en la técnica que los compuestos de la fórmula I de estos compuestos intermedios usados en el proceso de la presente invención, sales y solvatos de los mismos, pueden existir en formas cristalinas diferentes, todas las cuales se propone que este dentro del alcance de la presente invención en fórmulas especificadas. Los agentes antipicornavirales de la fórmula I y los compuestos intermedios usados en el proceso de la presente invención, pueden existir como esteroisómeros individuales, racematos, y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Todos estos estereoisómeros individuales, racematos y mezclas de los mismos se proponen que estén dentro del alcance de la presente invención. De manera preferente, sin embargo, los compuestos intermedios usados en el proceso de la presente invención se usan en la forma ópticamente pura. Como se entiende en general por aquellos expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro es uno que es enantiómericamente puro. Como se usa en la presente, el término "ópticamente puro" se propone que signifique un compuesto que comprende al menos una cantidad suficiente de un enantiómero individual para producir un compuesto que tiene la actividad farmacológica deseada. De manera preferente "ópticamente puro" se propone que signifique un compuesto que comprende al menos 90 % de un isómero individual (80 % de exceso enantíomérico) , de manera más preferente de menos de 95 % (90 % e.e.) de manera aun más preferente al menos 97.5 % (95 % e.e.) de manera más preferente al menos 99 % (98 % e.e.) . De manera preferente, los agentes antipicornavirales de la fórmula I formados del proceso de la presente invención son ópticamente puros. La presente invención se refiere a un proceso para preparar agentes antipicornavirales de la fórmula I En donde R. es H, F, un grupo alquilo, OH, SH, o un grupo O-alquilo ; R, y R3 son cada uno independientemente H; en donde n es un número entero de 0 a 5 , ? es CH o N, A, y cada A3 se seleccionan independientemente a partir de C.R.-MR..), N(R41), S, S(O), S(0)2 y O, y A4 es NH o NR4l, donde cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, con la condición que no más de dos heteroátomos se presenten simultáneamente en el anillo representado anteriormente formado por A1 , A2 , (A3)n, A4 y C=0, y al menos uno de R2 y R3 es R. y R6 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R. y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocícloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR.,, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18, o -NR17OR18, en donde R17 , Rlg, y R19 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menos uno de R7 o R8 sea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18 , o -NR17OR18; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N, S, ; y Z y Z1 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, CN, -C(0)NR21R22, -C (0) NR21OR22 , -C(S)R21, -C(S)NR21R22, -N02, -SOR-., -S0:R21, -S02NR21R22, -SO (NR21 ) (OR22) , -S0NR21, -PO(OR21) , -P0(R21) (R22) , -PO (NR21R22) (OR22) , -PO(NR21R22) (NR23R24) , - (CO)NR-.NR--R-- , o -C (S) NR21NR22R23 , donde R21, R22, R23 y R24 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cualquiera de dos de RA., R22, R^ y R,4, junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición que Z y Z, no sean ambos H; o Z! y X > junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquílo, donde ? o Rx son como se definen anteriormente excepto para las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Zlf junto con los átomos a los cuales se unen, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z y Zx son como se definen anteriormente excepto para las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo . La presente invención describe que un compuesto de la fórmula I se puede preparar al someter un compuesto de la formula II y un compuesto de la fórmula III a una reacción de formación de amida: La reacción de formación de amida se puede lograr por cualquier método adecuado, reactivos y condiciones de reacción adecuadas. De manera preferente, cualquiera de los métodos descritos en la solicitud v354 se utiliza. Por ejemplo, un compuesto de la fórmula II se puede hacer reaccionar con un compuesto de la fórmula III en la presencia de HATU, DIPEA, CH.CN y H20 para producir el compuesto deseado de la fórmula I. Se puede usar cualquier método de purificación adecuado para purificar adicionalmente un compuesto de la fórmula I . De manera más preferente, el compuesto de la fórmula I se prepara por una reacción de formación de amida que comprende los pasos de: (a) hacer reaccionar el compuesto de la fórmula II con un compuesto de la fórmula Illa de la presencia de N-metilmorfolina para formar una mezcla de reacción. hit ?i? ÉiitiiÉiiH- **** ** -*— « *^-* -.•-*.. A— +*i *i F3CCOOH . (b) adicionar un compuesto de la fórmula Lv-X a la mezcla de reacción para formar un compuesto de la fórmula I, en donde X es cualquier haluro adecuado. De manera preferente, el método para preparar el compuesto de la fórmula I que utiliza la reacción de formación de amida más preferible utiliza algunos o todos los reactivos o condiciones de reacción descritas posteriormente. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula II y el compuesto de la fórmula IIIA en DMF se combinan en un recipiente adecuado. El recipiente adecuado es de manera preferente un matraz de cuello individual que entonces se cubre con cualquier septo adecuado y se cubre con una sonda de temperatura. Se usa el gas de un nitrógeno para purgar el recipiente adecuado antes de que se adicione la N-metilmorfolina a la mezcla de reacción. De manera más preferente, la N-metilmorfolina se adiciona de una jeringa en una porción individual y la mezcla de reacción se enfría a aproximadamente entre 900°C y 52C. De manera más preferente, la mezcla de reacción se enfría a aproximadamente 02C. Luego se adiciona una solución del compuesto de la fórmula Lv-X a la mezcla de reacción. De manera más preferente, la solución del compuesto de la fórmula Lv-X es una solución del compuesto de la fórmula Lv-X en DMF. De manera más preferente, el compuesto de la fórmula es LvX es CDMT . La solución del compuesto de la fórmula LvX se adiciona a la mezcla de reacción por cualquier método adecuado para mantener la mezcla de reacción a una temperatura constante. Por ejemplo, la solución del compuesto de la fórmula Lv-X se puede adicionar a la mezcla de reacción gota a gota utilizando una jeringa. Al término de la adición de la solución del compuesto de la fórmula Lv-X, la mezcla de reacción se deja calentar a aproximadamente temperatura ambiente. El progreso de la reacción se puede seguir al monitorear la desaparición del compuesto de la fórmula III por cromatografía en capa delgada (posteriormente "TLC") . Cuando la reacción esté al menos sustancialmente completa, el compuesto de la fórmula I se puede precipitar de la solución para formar una suspensión espesa al adicionar lentamente agua a la mezcla de reacción. El compuesto de la fórmula I entonces se puede remover de la suspensión espesa por cualquier medio adecuado conocido por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, el compuesto de la fórmula I se puede remover de la suspensión espesa por filtración. Cualquier método de purificación adecuado producido por un experto en la técnica se puede usar para purificar el compuesto de la fórmula I. De manera más preferente, el compuesto de la fórmula I se purifica por recristalización. Se puede usar cualquier método conocido por los expertos en la técnica para preparar el compuesto de la fórmula IIIA. Sin embargo, la presente invención también describe un nuevo método para preparar el compuesto de la fórmula III que comprende el paso de hacer reaccionar el 10 compuesto de la fórmula IIIB con TFA: 15 (HB) (I?A) De manera preferente, el método para preparar el compuesto de la fórmula IIIA a partir el compuesto de la fórmula IIB utiliza algunos o todos los reactivos y 20 condiciones de reacción descritos posteriormente. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula IIIB y DCM, se colocan en un recipiente adecuado y se cubren con un septo. El recipiente entonces se purga con nitrógeno seguido por la adición de TFA. De manera más 25 AA^áiaMaai^ij^aílÍtjt.-A-AA.A A .... «A AI .- h,is¡á& .L^t u?,¡iii?lt?íxÍjk .^*ALL Jlusáak ^¿?>Axk*? iuiáiiM¡Íi B l^t <?tr i ¡ preferente, el TFA se adiciona vía jeringa mientras se agita. El progreso de la reacción se sigue por TLC. Una vez que el material de inicio ha desaparecido sustancialmente el solvente y el TFA en exceso se remueven por cualquier medio adecuado. Por ejemplo, el solvente y el TFA en exceso se pueden remover por destilación a vacío. De manera preferente, el compuesto de la fórmula IIIA se usa inmediatamente en el progreso de la presente invención para preparar el compuesto de la fórmula I. La presente invención también se refiere a un proceso para la preparación de los compuestos IIA: Un experto en la técnica reconocerá que los compuestos de la fórmula IIA caen dentro del género como se define por la fórmula II. Por consiguiente, los compuestos de la fórmula IIA también son compuestos intermedios útiles para preparar los agentes antipicornavirales de la fórmula I. La presente invención describe un proceso para preparar los compuestos de la fórmula IIA, que comprende *.*k???*¡?,* los pasos de: (a) la conversión de un compuesto de la fórmula XIII a un ß-cetoéster de la fórmula XIV al hacerlo reaccionar con una 1 , 1 ' -carbonildiimidazol y un enolato de litio de acetato de t-butilo; (b) la conversión del compuesto de la fórmula XIV a un enolato de la fórmula XV al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula XVI bajo condiciones de reacción adecuados . (c) la hidrogenólisis del compuesto de la fórmula XV para producir un compuesto de la fórmula XVII; (d) la acilación del compuesto de la fórmula XVII al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula R20-X bajo condiciones adecuadas para producir un compuesto de la fórmula XVIII, en donde X es un haluro; y (e) la hidrólisis enzimática del compuesto de la fórmula XVIII para producir el compuesto de la fórmula IIA. De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula III a aquel de la fórmula XIV se utiliza a uno o todos los reactivos y condiciones de reacción descritas posteriormente. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula XIII se agita con CDI en THF bajo una corriente de nitrógeno durante al menos una hora a temperatura ambiente para producir un compuesto intermedio de acil-imidazol . Luego, en un recipiente separado, se carga la solución de bistrimetilsililamidas de litio (LHMDS) en THF bajo nitrógeno, antes de enfriar a -702C. Se adiciona acetato de t-butilo lentamente a la solución de LHMDS manteniendo la temperatura por debajo de aproximadamente -602C para formar una mezcla de reacción. El compuesto intermedio de acilimidazol preparado como se describe anteriormente, se adiciona lentamente a la mezcla de reacción, que comprende el enolato de litio de acetato de t-butilo, bajo nitrógeno manteniendo la temperatura interna a o por debajo de aproximadamente -602C. Una vez que se termina esta adición, la mezcla de reacción se agita a -602C durante al menos una hora adicional. La mezcla de reacción entonces se carga con HCl para enfriar rápidamente la reacción. El HCl se adiciona lentamente, con agitación vigorosa, manteniendo la temperatura interna de la mezcla de reacción por debajo de aproximadamente -502C. Las altas temperatura durante el enfriamiento rápido luego caen racemización. El HCl concentrado se adiciona para ajustar al pH a aproximadamente entre 6-7.5. Cualquier sólido que precipite se filtra. Debido a las temperaturas más calientes disuelven las impurezas, la filtración se lleva a cabo de manera más preferente en frío y rápidamente en celita. Los sólidos entonces se lavan con MTBE. El filtrado se diluye con MTBE y HCl y se agita durante al menos 15 minutos. El pH se debe verificar para asegurar que un pH este entre aproximadamente 1-2. Después de que la capa orgánica se separa, se puede verificar para la pureza quiral por HPLC quiral. Si los productos quiralmente puros se desean, la pureza quiral debe ser de aproximadamente 98 % en esta etapa. La capa orgánica se lava, de manera preferente con HCl ÍM y se agita durante aproximadamente 15 minutos antes de que las capas se separan. Los productos de manitol se lavan, de manera preferente con solución de bicarbonato de sodio saturada y se agitan durante al menos aproximadamente 15 minutos, antes de que se separen las capas. La capa orgánica entonces se lava, de manera preferente con salmuera. Las fases se separan antes de que se seque la fase orgánica de manera preferente sobre sulfato de .. .. ^...^«Ií*.ait^fc.*««d^ magnesio anhidro. Luego se filtran y se despojan bajo vacío para remover los solventes y acetato de t-butilo sin reaccionar. Se mantiene un alto vacío durante al menos aproximadamente 20 horas para asegurar la remoción del acetato de t-butilo y siloxanos. En esta etapa, el producto se puede analizar para la pureza. Si el producto es significativamente menos de aproximadamente 90 % puro, el producto se puede cromatografiar sobre el sílice usando acetato de etilo/hexano al 20 % . Bajo estas condiciones preferibles, se logran rendimientos de entre 60 y 88 % del compuesto XIV. La conversión del compuesto de la fórmula XIV a aquel del compuesto de la fórmula XV al hacerlo reaccionar con el compuesto de la fórmula XVI se puede llevar a cabo usando cualquier método adecuado, reactivos y condiciones de reacción adecuados. Un ejemplo de este método general se describe en R. V. Hoffman y J. Tao, Tetrahedron, Vol. 53, No. 21, pp. 7119-1726, 1997, que se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. De manera preferente, el método y todos o algunos de los reactivos y condiciones de reacción descritas posteriormente se usan. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula XIV se hace reaccionar primero con un hidruro de metal alcalino antes de que se haga reaccionar con el compuesto de la fórmula XVI. De manera más preferente, el hidruro de metal alcalino es hidruro de sodio. La reacción con el hidruro de metal alcalino se lleva a cabo entre aproximadamente 02C y 32C. El reactivo se mantiene entre aproximadamente 02C y 52C durante la adición del compuesto de la fórmula XVI a la mezcla de reacción antes de que la mezcla de reacción se caliente lentamente a temperatura ambiente durante al menos aproximadamente 2 horas. Se puede usar cualquier método de hidrogenólisis adecuado para convertir el compuesto XV al compuesto XVII. De manera preferente, se usa hidrogenólisis con paladio bajo presión. Se pueden usar cualquiera de las condiciones de reacción adecuadas en la acilación del compuesto XVII. De manera preferente, se utilizan el método y algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritos posteriormente en la presente. De esta manera de manera preferente, el compuesto crudo de la fórmula XV se disuelve en cloruro de metileno y se enfría a aproximadamente 02C (temperatura interna) o cualquier medio adecuado, por ejemplo, usando un baño de hielo/sal bajo un manto de argón. La solución se carga con el compuesto de la fórmula R,0-X como un líquido. De manera más preferente, R,0-X es R20-Cl . Entonces, se adiciona lentamente diisopropilétil-amina . La reacción se deja calentar lentamente a temperatura ambiente. La reacción se puede monitorear por TLC y finalmente por HPLC. En general, esta reacción se debe terminar en el espacio de aproximadamente 1 hora. La reacción se enfría rápidamente con HCl, antes de que la capa acuosa se remueva y los productos orgánicos se re-extraigan con HCl. La fase acuosa entonces se remueve antes de que se extraigan los productos orgánicos con carbonato saturado. Los productos orgánicos entonces se secan, de manera preferente, sobre sulfato de sodio. El producto entonces se filtra se concentra bajo vacío. Se puede usar cualquier método de hidrólisis enzimática adecuado para convertir el compuesto XVIII al compuesto IIA. Sin embargo, la presente invención describe que el uso de la hidrólisis enzimática es importante como lo opuesto a la hidrólisis bajo condiciones normales, debido que produce un compuesto IIA con menos de 5% de epímero en el carbono que enlaza los grupos R7 y R8. Se puede usar cualquier aparato adecuado en el paso de hidrólisis enzimática. De manera preferente, se usa un reactor una membrana continua. De manera más preferente, el reactor de membrana continua de la presente invención se usa como se describe posteriormente en la presente. De manera preferente, se usa pancreasa-lipasa porcina como la enzima para hidrolizar el compuesto XVIII. De manera más preferente, la hidrólisis enzimática se lleva a cabo a un pH de 7.2 a una temperatura de entre gg^ ^HH^ aproximadamente 37-402C. Otro aspecto de la presente invención es la preparación de los compuestos de la fórmula IIA por un proceso que comprende los pasos de: (a) la conversión de un compuesto de la fórmula XIX al ß-cetoéster de la fórmula XX al hacerlo reaccionar con 1 , 1 ' -carbonildiimidazol seguido por tratamiento con enolato de litio de acetato de t-butilo; (b) la conversión del compuesto de la fórmula XX a un compuesto de la formula XXI al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula XXII bajo condiciones de reacción adecuadas; (c) la hidrogenación del compuesto de la fórmula XXII para producir un compuesto de la fórmula XXIII; y (XXffl) (d) la acilación de un compuesto de la fórmula XXIII al hacerlo reaccionar con R20-X bajo condiciones adecuadas para producir el compuesto de la fórmula IIA, en donde X es cualquier haluro adecuado. De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula XIX al compuesto de la fórmula XX utiliza algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritos posteriormente. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula XIX se disuelve en THF antes de que el 1 , 1 ' -carbonildiimidazol se adicione a la solución a la temperatura ambiente. La mezcla resultante se agita durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente para producir una solución de un compuesto intermedio de acil-imidazol . En un recipiente separado, se adiciona lentamente acetato de s-bencilo a una solución de LiHMDS en THF para formar una mezcla. Las reacciones exotérmica, por lo tanto, la temperatura se mantiene de manera preferente por debajo de -702C. Después de la agitación de la mezcla durante aproximadamente 30 minutos, la solución de acil-imidazol se adiciona lentamente para formar una mezcla de reacción. La reacción es exotérmica, de esta manera la temperatura de la mezcla de reacción se mantiene de manera preferente bajo aproximadamente -682C. Se puede usar cualquier medio adecuado para enfriar la mezcla de reacción. Por ejemplo, el medio de enfriamiento puede ser un baño de hielo seco. Después de la agitación durante al menos aproximadamente 55 minutos, la mezcla de reacción se puede remover a partir del medio de enfriamiento. Entonces se adiciona un ácido a la mezcla de reacción para enfriar rápidamente la reacción. De manera más preferente, el ácido es HCl ÍM, el ácido se adiciona lentamente en la temperatura de la mezcla de reacción y se mantiene bajo aproximadamente 252C durante la adición del ácido. La capa orgánica de la mezcla de reacción enfriada entonces se separa y se lava. De manera más preferente, la capa orgánica se lava con carbonato de sodio saturado y salmuera. La capa orgánica entonces se seca y se concentra para producir un compuesto de la fórmula XX. De manera más preferente, se usa sulfato de magnesio como el agente de secado. Para prevenir la descomposición del compuesto de la fórmula XX, el compuesto se almacena de manera más preferente en un refrigerador. De manera preferente, el método para convertir un compuesto de la fórmula XX al compuesto de la fórmula XXI utiliza algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritas anteriormente. De esta manera, de manera preferente, un compuesto de la fórmula XX se adiciona lentamente a una solución NaH en THF. De manera más preferente, la solución de NaH en THF se mantiene a aproximadamente a -102C, en tanto que el compuesto de la fórmula XX se adiciona a esto. Una vez que el compuesto de la fórmula XX se ha adicionado a la reacción, la mezcla de reacción se deja calentar durante aproximadamente 20 minutos. Entonces se adiciona una solución del compuesto de la fórmula XXII en cloruro de metileno a la mezcla de reacción. El progreso de la reacción se puede monitorear al observar la desaparición de los materiales de inicio usando cualquier método adecuado. Por ejemplo, se puede usar HPLC &Ja,iáíkmit ja,jiigaaiifea?ailÉÉÉtÉiliÉÉlfc para monitorear el progreso de la reacción. La mezcla de reacción entonces se agita durante aproximadamente 48 horas antes de que se adicione MTBE a esto. Entonces se adiciona un ácido adecuado a la mezcla de reacción antes de que la capa acuosa se separe y se extraiga usando MTBE. De manera más preferente el ácido es HCl ÍM. Las capas orgánicas entonces se combinan, se secan, se filtran y se concentran para producir el compuesto de la fórmula XXI. De manera más preferente, la capa orgánica combinada se seca en sulfato de magnesio y se filtra a través de una almohadilla corta de gel de sílice. De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula XXI al compuesto de la fórmula XXIII utiliza algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritas posteriormente. De esta manera, de manera preferente, el compuesto de la fórmula XXI se disuelve en una mezcla desgasificada de THF y ácido concentrado. De manera más preferente, el ácido concentrado es ácido sulfúrico. Se adiciona Pd al 10 %-C a la mezcla de reacción antes de que la mezcla se agite en un agitador Parr bajo una presión de aproximadamente 3.52 kg/cm2 (50 libras/pulgada cuadrada) durante aproximadamente 5 horas. La mezcla entonces se disuelve en metanol, se filtra a través de celita para producir el compuesto de la fórmula XIII. ..i . É^^I^^ m?m »iffimat ß?»' m?6§mM l De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula XIII al compuesto de la fórmula IIA utiliza algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritas posteriormente. De esta manera, de manera preferente el compuesto de la fórmula XXIII se disuelve en dioxano, seguido por la adición de diisopropiletilamina para formar una suspensión a 02C. Una solución del compuesto de la fórmula R20-X en dioxano a una temperatura similar a aquella de la suspensión se adiciona a la suspensión para formar una mezcla de reacción. De manera más preferente, R,0-X es R20-C. La mezcla de reacción se agita durante al menos aproximadamente 1 hora. Luego, se adiciona cloruro de metileno a la mezcla de reacción antes de que la mezcla de reacción se lave con HCl ÍM luego bicarbonato de sodio saturado, se seca con sulfato de magnesio y se filtra a través de una almohadilla corta de gel de sílice para producir el compuesto de la fórmula IIA. El compuesto de la fórmula IIA entonces se puede purificar por cualquier medio conocido por un experto en la técnica. Por ejemplo, el compuesto se puede purificar por recristalización y/o cromatografía. La presente invención también se refiere a un proceso mejorado para la preparación del compuesto de la fórmula XXII. Como se describe anteriormente, el compuesto de la fórmula XXII es un material de inicio importante para r !? el uso en el proceso para preparar el compuesto de la fórmula IIA. El proceso para preparar el compuesto de la fórmula XII comprende: (a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula XXIV con trietilamina y bromuro de bencilo para dar un compuesto de la fórmula XXV; y 15 (b) convertir el compuesto de la fórmula XXV al compuesto de la fórmula XXII. De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula XXIV al compuesto de la fórmula XXV 0 utiliza algunos o todos los reactivos o condiciones de reacción descritos posteriormente. De esta manera, de manera preferente el compuesto de la fórmula XXIV se disuelve en acetona, seguido por la adición lenta de trietilamina a una temperatura menor de aproximadamente 5 ^¿^^^¿¿^¡^^^^¡^¿ M L&iiá k^ 302C para formar una mezcla de reacción. Entonces se adiciona bromuro de bencilo a la mezcla de reacción que entonces se agita durante al menos 65 horas. Entonces se adiciona MTBE a la mezcla de reacción y se agita durante aproximadamente 5 minutos. La mezcla de reacción entonces se filtra a través de una almohadilla corta de gel de sílice para remover la mayoría de una sal de trietilamina que precipita de la mezcla de reacción. Entonces el gel de sílice se lava con MTBE antes de que se combinen los filtrados. El filtrado combinado entonces se lava. De manera más preferente, el filtrado se lava con HCl ÍM, bicarbonato de sodio saturado y salmuera. Luego, el filtrado se seca en sulfato de magnesio, se filtra a través de una almohadilla corta de gel de sílice y se concentra para dar el compuesto de la fórmula XXV. El compuesto de la fórmula XXV se puede recristalizar para dar un producto cristalino . De manera preferente, el método para convertir el compuesto de la fórmula XXV al compuesto de la fórmula XXII utiliza algunos o todos los reactivos y condiciones de reacción descritos posteriormente. De eeta manera, de manera preferente el compuesto de la fórmula XXV se disuelve en cloruro de metileno y se enfría a aproximadamente -102C. Aunque se puede sustituir cualquier grupo saliente adecuado con el grupo hidroxi del compuesto de la fórmula XXV para producir un compuesto de la fórmula XXII, de manera preferente, el grupo saliente es -OTf. Por consiguiente, de manera más preferente Tf20 se adiciona a la solución del compuesto de la fórmula XXV en cloruro de metileno, seguido por la adición lenta de 2 , 6-lut?dina . Debido a que la reacción es exotérmica, la temperatura de la mezcla de reacción se mantiene de manera preferente a una temperatura menor de aproximadamente -8eC. Una vez que se ha adicionado 2,6-lutidina a la mezcla de reacción, la mezcla de reacción se filtra y se deja calentar durante aproximadamente 1 hora. La mezcla de reacción entonces se concentra bajo vacío de campana. El producto crudo, normalmente en la forma de un aceite, entonces se disuelve en hexanos y se agita en hielo seco para precipitar una sal de lutidinio. El precipitado entonces se remueve por filtración a través de una capa delgada de gel de sílice. El filtrado entonces se concentra para producir el compuesto de la fórmula XXII, en donde el grupo saliente Lv es -OTf. La presente invención también se refiere a nuevos compuestos que caen dentro del alcance de los compuestos de las fórmulas IIA; XVIII; XVII; XV; IIIB y IIIA, respectivamente. Estos compuestos particulares se exponen posteriormente y son particularmente útiles como compuestos intermedios en el proceso de la presente invención para ..>J ^^Maá?^^k»J¡?Ík ~.?k..í,t*A~l lá , sintetizar compuestos antipicornavirales particularmente útiles de la fórmula general I, incluyendo AG7088: !• 11 Otro aspecto de la presente invención se refiere a procesos mejorados para preparar compuestos que caen dentro del alcance de las fórmulas XXIV y XVI, reactivos clave en el proceso de la presente invención para preparar los compuestos de la fórmula IIA. El primero de estos es un proceso para la preparación de compuestos de las fórmulas VII que caen dentro del alcance de los compuestos de la fórmula XXIV y opcionalmente, la conversión del compuesto de la fórmula VII al compuesto de la fórmula XVIA, el alcance de la cual se traslapa con los compuestos de la fórmula XVI : en donde R10 es un halógeno un grupo alquilo; que comprende los pasos de: Paso A: Convertir un compuesto de la fórmula VI a un compuesto de la fórmula V que comprende los sub-pasos de: (a) hacer reaccionar un benzaldehído sustituido en R,„ de la fórmula VI: i)«*jt.llil,.J-- .¿<lA-tfaf .kbA ?Jl&lbl con hidantoina en un medio acuoso en la presencia de un catalizador a temperatura de reflujo para formar una mezcla de reacción; (b) tratar la mezcla de reacción con un exceso de hidróxido de metal alcalino a temperatura de reflujo para formar una solución tratada con hidróxido de metal alcalino; (c) adicionar un haluro de metal alcalino a la solución tratada con hidróxido de metal alcalino para dar una solución; (d) acidificar la solución con un ácido concentrado para dar un precipitado de la fórmula V; y (e) lavar opcionalmente el precipitado de la fórmula V con un agente de lavado; Paso B: la reducción enzimática del compuesto de la fórmula V a un compuesto de la fórmula VII; Paso C opcional: una esterificación del compuesto VII a un compuesto de la fórmula XII al hacer reaccionar el compuesto de la fórmula VII con un compuesto de la fórmula R''-OH, en donde R' ' es un alquilo o arilo; y Paso D opcional : la conversión del compuesto de la fórmula XII al compuesto de la fórmula XVIA. De esta manera, la presente invención describe que la reacción del benzaldehído sustituido con R10 con la hidantoina en un medio acuoso en la presencia de una cantidad catalítica de una amina primaria o secundaria bajo reflujo durante al menos aproximadamente 4 horas, dependiendo de la amina usada, producirá 5-bencilideno-hidantoina sustituida en R10. Las aminas preferidas tienen puntos de ebullición por arriba de aquel del medio acuoso usado. Una amina particularmente preferida es l-amino-2-propanol . Cuando el 1-arru.no-2-propanol se usa como un catalizador, se usa agua como la solución acuosa y la reacción molar del benzaldehído sustituido en R10 a hidantoina al catalizador es de 1:1:0.1, la reacción se termina en aproximadamente 4 horas.
De acuerdo a la presente invención, la 5-benciliden-idantoina sustituida en R10 se puede hidrolizar por una cantidad en exceso y un hidróxido de metal alcalino. De manera preferente, el hidróxido de metal alcalino usando es hidróxido de sodio. Cuando se usa 1-amino-2-propanol como un catalizador, las relaciones molares de hidróxido de sodio a hidantoina son individualmente 5:1, y la reacción se lleva a cabo bajo reflujo, la reacción se termina en aproximadamente 50 minutos. La presente invención también describe que la adición de un haluro de metal alcalino a la solución tratada con hidróxido de metal alcalino incrementa la precipitación de fenilpiruato sustituido en R10 del metal alcalino, monohidratado en la acidificación. De manera preferente, el haluro de metal alcalino es cloruro de sodio. Cuando se usa cloruro de sodio, casi todo el fenilpiruvato de sodio precipita como fenilpiruvato de sodio monohidratado a un pH de aproximadamente 8.5. De manera preferente, el precipitado recolectado de fenilpiruvato de metal alcalino monohidratado se lava para remover las impurezas en exceso y para facilitar el proceso de secado que se debe desear. Cualquier agente de lavado adecuado conocido en la técnica se puede seleccionar. De manera preferente, se selecciona un alcohol ^££ ; ..I .i primario como el agente de lavado. De manera más preferente, el agente de lavado es metanol debido a que el precipitado de fenilpiruvato de metal alcalino monohidratado es escasamente soluble en el mismo. Cualquier enzima adecuada conocida en la técnica se puede usar en el paso V para catalizar la reacción de reducción del compuesto de la fórmula V de manera preferente, la reacción de reducción se cataliza por formiato-deshidrogenasa y lactato-deshidrogenasa . Se puede usar cualquier método de reducción enzimática adecuada conocido en la técnica. De manera preferente, se usa cualquier método de catálisis enzimática encerrado en membrana ("el método MEEC") o el método de coinmovilización. Estos métodos generales se conocen en la técnica. Por ejemplo, ver Bendnarski et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 1283-1285, para un análisis general con respecto a la catálisis enzimática encerrada en membrana. Ver también, Pollak et al., j. Am. Chem. Soc. 1980, 102, 6324-6336, para un análisis general del método de co- inmovilización. Estas referencias se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. Sin embargo, cuando la reacción de reducción enzimática del paso B comprende más de una preparación a pequeña escala de manera preferente, se emplea un reactor de membrana continua. De manera más preferente, el reactor de membrana continua de la presente invención se usa. Cuando se usa el reactor de membrana continua de la presente invención, de manera preferente todos o algunos de los siguientes reactivos y condiciones se usan: NAD al 1 % , 4 equivalentes de formiato de amonio, un pH de 7.3-7.4 para los efluentes y un pH de 6.2-6.3 para los sustratos. FDH/LDH=20/200 (U/mL) y se usa mercapto etanol 1 mM. Si se usa el método de inmovilización, se prefiere llevar a cabo en cuatro pasos. El primer paso es la preparación de N-acriloxisuccinimida . El segundo paso es la preparación del copolímero para el uso en el método de co-inmovilización. De manera preferente, el polímero es PAN 500 que se puede preparar por una copolimerización por radicales. Un experto en la técnica reconocerá que el PAN 500 es un copolímero soluble en agua de acrilamida y N-acriloxisuccinimida que libera 500 (±25) µmol de N-hidroxisuccinimida por gramo de polímero seco en tratamiento con solución acuosa de etilamina en exceso. El tercer paso es la co-inmovilización de las enzimas. De manera preferente, como se describe anteriormente, las enzimas son formiato-deshidrogenasa y lactato-deshidrogenasa . El cuarto paso es la reducción enzimática de la reducción del compuesto de la fórmula V para dar el compuesto de la fórmula VII. El compuesto de la fórmula VII se puede aislar n esta etapa del proceso y usar el proceso descrito anteriormente para preparar el compuesto de la fórmula IIA. Se puede usar cualquier método adecuado para aislar y purificar el compuesto de la fórmula VII. Opcionalmente el compuesto de la fórmula VII se puede usar para preparar el compuesto de la fórmula XVIA como se describe anteriormente . La presente invención también describe que si las formas enantiómericas de un compuesto de la fórmula VII se buscan, el uso de D-lactato-deshidrogenasa del Paso B descrito anteriormente producirá un enantiómero de la fórmula VII.
De manera similar, el uso de L-lactato-deshidrogenasa en el Paso B descrito anteriormente producirá un enantiómero de la fórmula VIIIB: (VHB) La reacción de esterificación del paso C opcional se puede realizar con cualquier reactivo y condición adecuada. De manera preferente, la esterificación se realiza aproximadamente a temperatura ambiente en presencia de ácido clorhídrico y dioxano. De manera similar, los enantiómeros VII y VIIIB se pueden convertir en enantiómeros XIIA Y XIIB, respectivamente, por el mismo proceso de esterificación: (X?A) (X?B) Se puede usar cualquier método adecuado para convertir el compuesto de la fórmula XIII al compuesto de la fórmula XVIA en el paso B opcional del presente proceso. Por ejemplo, los métodos adecuados se describen en Efffenberger et al., J. Liebigs, Ann. Chem. 1996, 314, y "Peptidomimetics Protocols", Hoffman et al., Human Press, NJ, U.S.A; 1999, pp 103-124. Estas referencias se incorporan en la presente como referencia. Utilizando este mismo paso D opcional, los enantiómeros XII y XIIIB se pueden convertir a los enantiómeros XVIB y XVIC, respectivamente; (XVIB) (XVIC) El segundo de los procesos para preparar los compuestos de las fórmulas VII y XVIA comprende los pasos de: Paso A' convertir serina al compuesto de la fórmula VII que comprende los sub-pasos de: (a) convertir serina a glicidato de potasio en un proceso estándar; (b) convertir opcionalmente glicidato de potasio a un ácido glicídico; y (c) llevar a cabo una reacción de abertura de anillo de epóxido regioselectiva por el compuesto de la fórmula R10-fenil-Q; en donde Q es un bromuro activado, un sulfato, o un yoduro primario; Paso B' opcional: una esterificación del ^^^?^??áÉ^^? -"-•""* »*>••• -' fe- compuesto de la fórmula VII a un compuesto de la fórmula XII al hacer reaccionar el compuesto de la fórmula R''-OH, en donde R' ' es un alquilo o arilo; y Paso C' opcional: la conversión del compuesto de la fórmula XII del compuesto de la fórmula XVIA. Por consiguiente, el subpaso (a) del Paso A' de este proceso requiere la conversión de serina a glicidato de potasio por un proceso normal. Se puede usar cualquier proceso normal conocido en la técnica. Por ejemplo, Larchevéque et al., Tetrahedron Lett. 1987, 28, 1993-1996, describe la preparación de glicidato de potasio a partir de serina. Esta referencia se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. De manera preferente, se hace reaccionar serina con ácido nítrico a una temperatura adecuada para producir ácido 2-bromo-3-hidroxi-propanoico . De manera más preferente, el ácido nitroso comprende una mezcla de nitrato de sodio y bromuro de hidrógeno, y la reacción se lleva a cabo entre aproximadamente -102C a temperatura ambiente en la presencia de un haluro de metal alcalino. Cualquier haluro de metal alcalino adecuado conocido en la técnica se puede usar. Sin embargo, de manera preferente, el haluro de metal alcalino es bromuro de potasio y bromuro de sodio. El ácido 2-bromo-3-hidroxi-propanoico entonces se convierte a glicidato de potasio al hacerlo reaccionar con hidróxido de potasio. De manera preferente, la reacción se corre entre aproximadamente -402C a temperatura ambiente. Cuando las condiciones preferidas y reactivos se usan de acuerdo con la presente invención se puede lograr un rendimiento de 65-70 % de glicidato de potasio a partir de serina. La presente invención también describe que el uso de L-serina o de D-serina enantiomérica como el material de inicio en el proceso descrito anteriormente producirá glicidato de D-potasio y glicidato de L-potasio, respectivamente . El glicidato de potasio a partir del proceso descrito anteriormente se puede convertir directamente en el compuesto de la fórmula VII. Haciendo reaccionar el glicidato de potasio con un compuesto de la fórmula R10-fenil- provocará una reacción de abertura de anillo de epóxido, regioselectiva. De manera preferente, Q es un grupo -MgBr y la reacción de abertura de anillo regioselectiva se realiza entre aproximadamente 10 aC y temperatura ambiente en la presencia de yoduro de cobre. En lugar de convertir el potasio directamente en un compuesto de la fórmula VII, se puede convertir primero glicidato de potasio a ácido glicídico antes de que se x& convierta un compuesto de la fórmula VII por el método de abertura de anillo de epóxido descrito anteriormente. El glicidato de potasio se puede convertir a ácido glicídico por cualquier método conocido por un experto en la técnica. De manera preferente, el ácido glicídico se prepara al hacer reaccionar el glicidato de potasio con ácido nítrico concentrado . Si se usa glicidato de potasio enantiomérico en los métodos descritos anteriormente, el enantiómero 0 correspondiente del compuesto de la fórmula VII se sintetizará. Por ejemplo, si se usa slicidato de D-potasio, se formará un compuesto de la fórmula VIIA. De manera similar, si se usa glicidato de L-potasio, se formará un compuesto de la fórmula VIB. En esta etapa, el compuesto de la fórmula VII se puede aislar para el uso en el proceso descrito anteriormente para preparar el compuesto de la fórmula IIA. De manera alternativa, el compuesto de la fórmula VII se puede usar en el proceso descrito posteriormente para preparar el compuesto de la fórmula XVIA. Los pasos B' y C opcionales corresponden a los pasos C y D opcionales del primer proceso descrito para sintetizar el compuesto de la fórmula XVIA a partir de un compuesto de la fórmula VI, respectivamente. De esta manera, los métodos, reactivos y condiciones de reacción preferidas descritos anteriormente para los pasos C y D opcionales también se usan de manera preferente en los pasos B' y C opcionales. El tercero de los procesos para preparar un compuesto que cae dentro del alcance de la fórmula XVIA, específicamente un compuesto de la fórmula XVIB, comprende los pasos de: Paso A' : la preparación de un compuesto de la fórmula XIIA de la fórmula IX que comprende los sub-pasos de: (a) una dihidroxilación asimétrica de un compuesto de la fórmula IX para formar un compuesto de la fórmula XA: (b) hacer reaccionar el compuesto de la fórmula IX con 1 , 1 ' -carbonildiimidazol en la presencia de tolueno para formar un compuesto de la fórmula XI; y (c) una reducción mediada por paladio del compuesto de la fórmula XI; y Paso B' ', la conversión del compuesto de la fórmula XIIA del compuesto de la fórmula XVIB . De manera preferente, la dihidroxilación f asimétrica es una dihidroxilacion asimétrica no aguda realizada a aproximadamente temperatura ambiente. La dihidroxilación asimétrica. Incluyendo la dihidroxilación asimétrica no aguda se analiza en general en Kolb et al., Chem. Rev. 1994, 94, 2483-2547. Esta referencia se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. De manera preferente, la reacción del compuesto de la fórmula IX con CDI en la presencia de tolueno se realiza a aproximadamente 802C. De manera preferente, el paso de reducción mediado por paladio, Paso A' ' (c) , se realiza al hacer reaccionar el compuesto de la fórmula XI con una mezcla de hidrógeno, paladio y carbono en la presencia de ácido fórmico a aproximadamente temperatura ambiente. ^^^|gg^^ »~.tí?. *if - ^....^^«a El paso B' ' corresponde al paso D opcional del primer proceso descrito en la presente para sintetizar los compuestos de la fórmula XVIA a partir de un compuesto de la fórmula VI. De esta manera, el mismo método, reactivos y condiciones de reacción descritos por el uso en el paso D opcional también se usa de manera preferente en el paso D opcional también se usa de manera preferente en el Paso B' ' . La presente invención también se refiere a los compuestos de la fórmula IVA, que caen dentro del alcance del género definido por la fórmula IV como se cita anteriormente. Por consiguiente, los compuestos de la fórmula IVA también serán compuestos intermedios útiles en los procesos de la presente invención para la preparación de los compuestos de la fórmula I. De esta manera, la presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula IVA: Y es OH, OS02CF3, OSO„CH., OSO, (p-tolilo) , haluro o cualquier otro grupo saliente; y ¡, ¿- n,..,.k^¡,í?. &ÍÁ*?*¡&,tU R' es H, grupo alquilo o arilo. De manera preferente, Rl0 es un grupo 4- fluoro, Y es OH o Otf, y R' es OH o Me. Como se analiza anteriormente, la presente invención también ee refiere a un reactor de membrana continua que se puede usar en los procesos en la presente invención. En particular, el reactor de membrana continua de la presente invención es adecuado para el uso en cualquier reacción en la cual se emplea un catalizador de un tamaño molecular relativamente grande, tal como enzimas y catalizadores fijados. Los ejemplos de estos catalizadores de describen en Rissom et al., Tetrahyedron: Asymetri, 1999, 10, 923-928; Shmidth et al., J.
Biotechnology, 1992, 2_4, 315-327; y Lin et al., Bíosci . Biotech. Biochem. 1997, 61, 2029-2033. Las referenciae mencionadas con anterioridad se escriben en la preeente como referencia. De manear más particular, el reactor de membrana continua de la presente invención es de uso en aquellas reacciones catalíticas en las cuales exista un deseo para recicla el catalizador. Por ejemplo, el reactor de la presente invención es útil para el uso en reacciones de reducción enzimática que utilicen productos químicoe o bio-catalizadores . El reactor de membrana continua de la presente invención que tiene un volumen de reactor que comprende una í^ktí ^i±** *. «-t-fcj- -—Jh-vnft fljfji¡gfck*. *?*JSLÍM.?. *+ .**-* -fi.f-.. unidad de filtro de flujo tangencial, un circuito de reactor para hacer circular los reactivoe a travée del filtro de flujo tangencial, y la bomba de alimentación de sustrato para alimentar el sustrato de circuito de reactor, en donde el circuito de reactor comprende: (a) un tubo; y (b) un bomba de circulación. La unidad de flujo tangencial comprende un filtro de membrana de flujo tangencial y una unidad para alojar el filtro. Se puede usar cualquier unidad de flujo tangencial adecuada. Una unidad de flujo tangencial adecuada es una que permite que el producto deseado, o permeado, paee a través de este pero permanezcan las moléculas más grandes del catalizador en el reactor. Un ejemplo preferido de una unidad de flujo tangencial es el Módulo Pellicon 2 comercialmente disponible de Millipore Corporation. El Módulo Pellicon 2 emplea un dispositivo de filtración de flujo tangencial de estilo cartucho que permite la eecala aecendente fácil de la reacción. De manera específica, se pueden emplear cualquier cartucho Pellican 2 individual o una serie de cartuchos se pueden usar en combinación para permitir que se corra a una reacción de escala más grande. De esta manera, la utilización de un sistema de cartucho de flujo tangencial permite el procesamiento de volúmenes de fluido de menos de un litro hasta miles de litros.
El circuito de reactor, en el cual se presenta la mayoría de la reacción catalizada, tiene un volumen interno . El volumen interno se define por el volumen de reactivos y catalizador que el circuito de reactor puede sostener. El volumen de reactor se define por el volumen de reactivos y el catalizador que puede sostener el circuito de reactor y la unidad de flujo tangencial en combinación. El circuito de reactor del reactor de la presente invención tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 50 % del volumen del reactor. De manera preferente, el circuito de reactor tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 60 % del volumen de reactor. De manera aun más preferente, el circuito de reactor tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 70 % del volumen del reactor. De manera aun más preferente, el circuito de reactor tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 80 % del volumen del reactor. En una modalidad máe preferida de la presente invención, el circuito de reactor tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 90 % del volumen del reactor, En una modalidad más preferida de la presente invención, el circuito de reactor tiene un volumen interno de al menos aproximadamente 95 % del volumen del reactor. El circuito de reactor comprende un tubo de cualquier tamaño adecuado y elaborado de cualquier material k.üi?..i. ? ? ¡ ~.*m.>*é*am** frfHñr.. adecuado. De manera preferente, el circuito de reactor comprende tubería que es flexible. La tubería flexible permite que la tubería se corte a cualquier tramo deseado como un medio para variar fácilmente el volumen del reactor. Los ejemplos de materiales de tubería adecuados incluyen polietileno, polipropileno, poliuretano, polivinilo, vinilo, nylon, Polímero de butileno, silicón PTFE, ETFE, PFA, VitonR, acero inoxidable, vidrio, PVDF, TeflonR, un polímero alquílico y un material de perfluoro. Viton" está comercialmente disponible de Dupont Dow Elastomers LLC y comprende un caucho termoendurecido fluorado al 67 %. TeflónR está comercialmente disponible de El Dupont deNemours & Co . y comprende tetrafluoro-etileno . Cuando el vector de membrana continua de la presente invención se usa en el proceso de la preeente invención para llevar a cabo una reducción enzimática, se ha encontrado que PVC, TygonR y cualquier polímero clorado daña, o desactiva, las enzimas y por lo tanto no son materialee adecuadoe . Adicionalmente, en tanto que la tubería de silicón no se ha encontrado que sufra el miemo problema, el silicio tiende a hincharse cuando se usa en los procesos de la presente invención lo que puede conducir a la fluctuación en las condiciones de reacción debido al cambio secuencial en el tiempo de residencia. &>i ffi _&- . ^j¡.i^fa=A«^-ir?i?ti?íiíÉr .i^¡..^...A.^^..--^^^ já &.a.
Se puede emplear cualquier bomba de circulación adecuada y bomba de alimentación de sustrato en el circuito de reactor. Los ejemplos de bombas de circulación adecuadas incluyen bomba peristáltica, de fuelles, diafragma, de cavidad progresiva, pistón, lineal flexible, de disco de nutación, o de membrana. No adecuada como la bomba de circulación o bomba de alimentación y sustrato es una bomba de engranes . Para la operación eficiente del vector de membrana continua de la presente invención, la bomba de alimentación de suetrato opera a una mayor velocidad que la bomba de circulación. Por ejemplo, cuando ee uea el reactor de membrana continua con loe proceeos de la presente invención, la reacción se desempeña de manera más eficiente si la bomba de alimentación y sustratos se ajustan a velocidad de aproximadamente 20 veces más rápidas que la bomba de circulación. En una modalidad preferida el reactor de membrana continua de la presente invención, el circuito de reactor también comprende cualquiera de los siguientes. Una trampa de burbujas, un medidor de presión un monitor de pH, un intercambiador de calor, y una válvula de compuerta. En otra modalidad preferida, el reactor de membrana continua comprende una o máe líneae de alimentación de eustrato que comprende una bomba de alimentación y suetrato, y también de manera más preferente comprenden una válvula de retención, un filtro estéril y un medidor de presión. La adición de más de una línea de alimentación permite que una se use para alimentar los sustratos y las otras para otros propósitos tal como para propósitos de saneamiento. La adición de un filtro estéril a cada una de las líneas de alimentación ayuda a la remoción de partículas y microbios antes de que puedan entrar en el reactor. Las partículas indeseadas pueden bloqueare los poroe de la membrana en la unidad de filtro de flujo tangencial, en tanto que loe microbios pueden aniquilar ciertas enzimas. La adición de un intercambiador de calor se puede usar para mantener o variar la temperatura de reacción. Un reactor de membrana continua preferido se representa en la figura 1. Un reactor de membrana continua más preferido de la presente invención se representa en la figura 2, partes 1 y 2. li iii hi i im in i IIÜIG -»- -*-*•*-- *""i?iyffl?.riMiü -- -—** -»•*' - -----"» '-*•*-•* •' " Tabla 1: Lista de partes del reactor de membrana continua representada en la figura 2 7¡a?.&>£«mí&kií ...¿¿J ^kí^i^i t ^^^^Jc^^^^i ?. A.1. t??MUkdUt ik ¡ét ^? -^JMk?'^-^^^^'' ^---^-!:e^fi?s^í'^ *"**-**>"— ?"f- f '*-'*- * Tabla 1 (continuación) Los siquientes ejemplos se proporcionan específicamente para propósitos ilustrativos de la presente invención y no ee deben leer como limitantee del alcance de protección de la presente invención, como se define por las reivindicaciones anexas.
EJEMPLOS : Los siquientee eequemas de reacción representan ejemplos de la preparación de varioe compuestos de la presente invención, que utilizan varios procesos de la presente invención. En particular, los eequemae repreeentan preparaciones de ejemplo expuestas posteriormente en la presente .
Esquema de Reacción 1 Clorhidra8 de 4F-D-fenilalanina Esquema de Reacción 2 Esquema de Reacción 3 Esquema de Reacción 4 Esquema de Reacción 5 Esquema de Reacción 6 Esquema de Reacción 7 Esquema de Reacción 8 Esquema de Reacción 9 Esquema de Reacción 10 10 11 Esquema de Reacción 11 Los siguientes ejemplos describen más completamente la preparación de los compuestos de la presente invención usando los métodos de la presente invención. -»-itfiiifeá En emplo 1 Preparación del corapwesto ÍA por diazotización (Ver esquema de reacción 1 para la estructura de ÍA) .
Materia Prima Fuente Cantidad Peso Moles molecular Clorhidrato de 4-fluoro- 1443- 389 g 219.5 1.73 D-fenilalanina 057 H, S04 ÍM (389 mL, ácido Stock 7.24 L 7.24 sulfúrico al 9Í en 6.85 L de agua Nitrito de sodio al 99.99 Aldrich 477.5 g 69.0 6.92 Sulfato de magnesio Fisher 100 g Éter metílico de t-butilo Fisher 3.6 L (MTBE) Cloruro de metileno Fisher ÍL Hexanos Fisher 2L Procedimiento : En un reactor de 12L, se disolvió clorhidrato de 4-fluoro-D-fenilalamna (380 g) en 7.4 L de ácido sulfúrico ÍM. La solución se enfrió a -5°C usando acetona/hielo. $7 Entonces, la solución se cargó lentamente con nitruro de sodio (477.5 g disuelto en 730 mL de agua), manteniendo la temperatura en o por debajo de 0°C. El tiempo de adición es típicamente de 3 horas. La eolución ee mantuvo a 0°C durante 3 o más horas. Es importante mantener 0°C durante y después de la adición durante al menos este periodo de tiempo eetipulado. La mezcla de reacción entoncee se calentó a temperatura ambiente durante aproximadamente 5 horas y se mantuvo durante la noche. En eeta etapa, se vio flotar un producto sólido blanco en la mezcla de reacción. Este producto se extrajo tres veces con MTBE (usando 1.2 L de MTBE por extracción, recordando agitar la mezcla vigorosamente cada vez durante al menoe 15 minutoe) . Los extractos orgánicoe ee eecaron con 100 g de sulfato de magnesio anhidro, antes de la filtración. El producto se llevó a sequedad (RMN 1H indicó al menos 70 % de pureza) . En esta etapa, se obtuvieron aproximadamente 380.g de producto crudo. El sólido crudo ÍA se mantuvo en ÍL de cloruro de metileno y 2L de hexanos y ee puso a reflujo (42°C) . Se mantuvo durante 2 horas a reflujo con buena agitación, antes de que ee enfríe a temperatura ambiente. Entoncee ee mantuvo durante 2 horae adicionales a temperatura ambiente con agitación. Después de la filtración, la torta se enjuagó con hexanos/cloruro de metileno 2:1. La reacción produjo 148 g (46 %) del compuesto ÍA; Pureza de HPLC quiral a >97 % ; RMN (CD3OD) d 7.25-7.00 (m, 4H) , 4.50 (AB cuarteto, J = 8 Hz, J = 4 Hz, 1H) , 3.15 (dd, J = 14 Hz, J = 4 Hz, 1H) , 2.95 (dd, J = 14 Hzm J = 8 Hz 1H.
El emplo 2 Preparación de ÍA por reducción enzimática: Paso A - Preparación de compuesto 3. (ver esquema de reacción 2 para estructura 3) Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles Fluorobezaldehido Aldrich 115 . 92 g 12 . 11 0 . 934 Hidantoma Aldrich 93 . 53 g 100. Oí 0.934 l-am?no-2-propanol Aldrich 7.01 g 75.11 0.0934 Hidroxido de sodio Fisher 187 g 40.00 4.68 Cloruro de sodio Fisher 108.9 g 58.44 1.86 HCl Conc. (37.; Fisher 311 L Procedimiento : Una mezcla de 4 -fluorobenzaldehído, hidantoina, y l-ammo-2 -propanol (10 %) en agua (235 mL) se sometió a reflujo durante 4 horas (130-135°C) . La mezcla se cargó con 935 g de solución acuosa caliente de hidróxido de sodio al 20 % (187 g de NaOH, 4.68 mol) y ee metió a reflujo durante 50 minutos. La mezcla entonces se enfrió a 0°C y se cargó con 108.9 g de cloruro de sodio. El pH de la eolución se ajustó a aproximadamente 8.5 ueando HCl concentrado (37 % , aproximadamente 311 mL) a 0°C, antes de que se filtre. El licor madre se dejó reposar durante la noche y se filtró nuevamente. Los precipitados se combinaron y lavaron con metanol (aproximadamente 5 mL) para obtener una pureza por HPLC de >80 % . (Nota: esta sal es pura de manera suficiente para la reacción enzimática subeiguiente, pero ee puede obtener mayor pureza al lavar con cantidades mayores de metanol) . El precitado se secó bajo un vacío de campana para obtener una sal blanca de sodio monohidratada 3 : rendimiento 70-75 % . Análisie calculado para C9H603Fna . H20 : C, 48.66; H, 3.63. Encontrado: C, 48.64; H, 3.74. RMN'H (D20) 57.02-7.19 (m, 4.72 (s, 2H) (nota: eeta sal se debe almacenar en un refrigerador para prevenir la descomposición) .
Paeo B.- Preparación de ÍA a partir de 3 Ya eea el método de MEEC (procedimiento Bl) o el método de co-inmovilización (procedimiento B2 ) ee puede uear para preparar ÍA.
Procedimiento Bl : Preparación de ÍA usando el método de MEEC Materia Prima Fuente (No. de Cantidad PM Moles Catalogo) Compuesto 3 11.1 g 222 0.05 D-lactato Sigma(L 9636! 1900 U Deshidrogenasa Formiato-deshidrogenasa Sigma (F8694) 125 U (FDH) NAD Sigma (N7004) 334 mg 663.4 0.0005 Formiato de sodio Sigma (S2140) 10.25 g 68.01 0.15 Mercaptoetanol Sigma (M6250) 39 mg 78.13 0.0005 Clorhidrato de Trizma Sigma (T6666) 400 mg 157.6 0.0025 EDTA Sigma (E1644) 186 mg 372.2 0.0005 DL-ditiotreitol Sigma (D5545; Membrana de diálisis VWR (25218-435 ] (MWCO 12, 000-14, 000) Procedimiento : Se disolvieron 3, formiato de sodio, mercaptoetanol, clorhidrato de Trizma con y EDTA en agua deshionizada (500 mL) y la solución se desgasificó con jj^ll?ffÍM?Writ^f^i"'''"'a'fc*- 'j»i-«« .-«Ji.Atj .lntatMi tl;fÉrt? A^,a^ti?i^^^¿^-ijA A? argón durante aproximadamente 30 minutos. La solución se ajustó a un pH de aproximadamente 7.5 usando NaOH (1.0 M) , y NAD (1 %) se adicionó. Se enjuagaron cuatro tubos de diálisis (aproximadamente de 4 cm de largo cada uno) con agua deshionizada y uno de los extremos de cada uno se unió con roeca. Se dieolvieron FDH y D-LDH en una alícuota de 8 mL de la mezcla de reacción y se transfirió a los 4 tubos (de aproximadamente 2 mL) ueando una pipeta Eppendorf. Loe otroe extremoe de la tubería ee unieron y suspendieron en la mezcla de reacción (Nota: se debe tomar cuidado para excluir tanto aire como sea posible y aseguraree que no haya fugae) . Se burbujeo suavemente argón a través de la solución para remover C02. La mezcla entonces se agitó a temperatura ambiente durante 3 días manteniendo el pH a 7.5 ± 0.1 por adición controlada de pH estándar de HCl ÍM (conversión >95 % por HPLC) . Entonces se removieron los tuboe de diálieis. La agitación se continuó durante aproximadamente 6 horas en 100 mL de amortiguador de tris 50 mM (pH 7.5 ditiotreitol 5 mM) ) . (Nota: Las boleas que contienen enzima se pueden volver a utilizar por almacenamiento a 4°C en 50 ml de amortiguador tris 5 mM (pH 7.5 ditiotreitol 5 mM) ) . Las capas acuosas se combinaron y la solución se ajustó a un pH de 3.0 por adición lenta de HCl concentrado. La eolución se extrajo con MTBE (50 x 4 mL) , se secó con MgS04 y se concentró a un aceite crudo. El aceite se solidificó en 250 mL de hexanos/cloruro de metileno (2:1) y se filtró. El filtrado entonces se concentró y solidificó nuevamente en 50 mL de hexanos/cloruro de metileno (2:1). Los sólidoe blancos se combinaron y se secaron bajo vacío de campana para producir un sólido blanco ÍA: rendimiento 7.2-7.4 g (78-80 %); pureza por HPLC >95 % .
Procedimiento B2 : Preparación de ÍA usando el método de co-inmovilización. Este procedimiento se llevó a cabo en 4 pasoe . El primer paso fue la preparación de N-acriloxisuccinimida . El segundo fue la preparación de PAN 500 por una copolimerización radical. El tercero fue una co-inmovilización de FDH y D-LDH. Este último paso fue una reducción enzimática de la sal 3 de sodio de a-cetoácido para dar ÍA.
Paso 1: Preparación de N-acriloxisuccinimida Materia Prima Fuente Cantidad PM Molee Cloruro de acriloito Aldrich 100 g 90.51 1.10 N-hidroxieuccinimida Aldrich 115 g 115.10 1.00 Trietilamina Aldrich 110 g 101.19 1.09 2, 6-di-teri-butil-4- Aldrich 50 mg 220.36 0.00023 metilpenol (BHT) Procedimiento : Se disolvieron N-hidrox succinimida y trietilamma en 1.5 L de cloroformo a 0°C. Se adicionó gota a gota cloruro de acriloilo durante un periodo de 20 minutos y se agitó durante 20 minutos adicionales a 0°C. La solución se lavó con porciones de 800 mL enfriadas con hielo de agua y ealmuera eaturada y luego ee secó con MgS04 y ee filtró. Se adicionaron 50 mg de BHT a la eolución de cloroformo, y ee concentró a un volumen de 300 mL y se filtró. Lentamente, se adicionaron 30 mL de acetato de etilo y 200 mL de hexanos a la solución en tanto que se agita, antes de que se deje reposar a 0°C durante 2 horas. El sólido blanco producido se filtró y lavó primero con 100 ml de hexanos/acetato de etilo (4:1) enfriado con hielo, luego con 100 mL de hexanos/acetato de etilo (9:1) y finalmente con hexanos (100 mL 2 X) . (Nota: eete material es suficientemente puro para ser usado para la preparación de PAN 500 descrito posteriormente) . Loe crietalee ee secaron bajo vacío de campana para producir N- acriloxieuccinimida ; rendimiento 115 g (68 %); p.f. 68-70 °C. RMN *H (CDC13) d 6.0-7.0 (m, 3H) , 2.85 (s, 4H) ; FTIR (Nujol) 1800, 1775, 1735, 1260, 995, 870 cm'1.
Paso 2: Preparación de PAN 500 Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles N-acriloxieuccinimida - 30 g 169.1 0.17Í Acrilamida Aldrich 275 g 71.08 AIBN Aldrich 1.75 g 164.21 0.011 THF Fieher 2.5 L Procedimiento : Se cargaron acrilamida, N-acriloxieuccinimida, AIBN y THF (2.5 L) en un matraz de 5 L. La eolución ee desgasificó con argón durante 30 minutos bajo agitación vigorosa y luego se sometió a reflujo a 50°C bajo argón durante 24 horas. (Precaución: esta reacción es exotérmica durante las primeras 1-2 horas) . Entonces se cargó con 1 L de THF y se agitó durante 10 minutos. El precipitado formado se filtró completamente se lavó con THF (1 L X 4) . El producto se secó bajo vacío de campana para producir PAN 500: rendimiento aproximadamente 304 g de un polvo blanco muy esponjoeo. FTIR (Nujol) 3340, 3200, 1730, 1660, 1210, 1070, cm"1. (Nota: este polímero se debe almacenar en un desecador de secado) .
Paso 3: co-inmovilización de FDH y D-LDH Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles Trietilentetramina Aldrich 146 . 34 (60%, TET) MGC126H20 Sigma 50 mg 203.3 0, .24mmol Piruvato de sodio Sigma 50 mg 110.0 0. .45mmol NADH Sigma 50 mg 709.4 0. .07mmol Formiato de sodio Sigma 306 mg 68.01 4. .5mmol NAD Sigma 111 mg 663.4 0. .17mmol FDH Sigma(F8649) 200 U D-LDH Sigma(L2395) 5000 U Hepes Sigma (H9897) - DL-ditiotreitol Sigma (D5545) - Sulfato de amonio Sigma 1 . 32 g 132 . 1 O . O lmol Procedimiento : Se centrifugaron 5000 U de D-LDH comercialmente dieponible en (NH4)2S04 3.2 M a 4°C durante 10 minutoe. El precipitado reeultante ee dieolvió en 3 mL de amortiguador Hepee 0.3 M (pH 7.5), y se dializó contra 500 mL de amortiguador Hepes desoxigenado 50 mM (pH 7.5) a 4°C bajo argón durante la noche con agitación. Esta solución se cargó con 13.0 g de PAN 500 al adicionarla a un vaso de precipitado de 500 mL al cual se adicionaron 42 mL de amortiguador Hepes 0.3 M (pH 7.5) que contiene cloruro de magnesio, piruvato de sodio, NADH, NAD y formiato de sodio. La mezcla se agitó vigorosamente durante 1 minuto antes de que se adicionaron L-ditiotreitol (650 µl , 0.50 M) y TET (5.53 mL, 0.50 M) a la mezcla. La mezcla entonces se enjuagó durante 1 minuto antes de que se adicionaran D-LDH y FDH (Nota: la mezcla se vuelve gel despuée de aproximadamente 2 minutoe adicionalee de agitación) . El gel ee mantiene a temperatura ambiente durante 1 hora antes de que se adicionen aproximadamente 200 mL de amortiguador Hepes 5 mM (pH 7.5, que contiene 1.32 g de (NH4)2S04). El gel se fraccionó en un mezclador Waring a baja velocidad durante 3 minutos y luego a alta velocidad durante 30 segundoe . Las partículas de gel se separaron por centrifugación, se lavaron con 20 ml de amortiguador Hepee 50 mM (pH 7.5), y se separaron nuevamente por centrifugación. aso 4: Preparación de ÍA usando co-inmovilización.
Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles Compuesto 3 11.10 g 222 0.050 D-LDH y FDH coimmovilizado PAN NAD Sigma (N7004) 167 mg 663.4 0.00025 Formiato de eodio Sigma (S2140) 4.10 g 68.01 0.060 Mercaptoetanol Sigma (M6250) 19.5 mg 78.13 0.00025 Clorhidrato de Sigma(T6666) 150 mg 157.6 0.00095 Trizma DL-ditiotreitol Sigma (D5545 Procedimiento : Se dieolvieron en agua deeionizada (500 mL) 3, formiato de eodio, mercaptoetanol y clorhidrato de Trizma y la eolución ee deegaeificó con argón durante 30 minutos. La solución se ajuetó a un pH de aproximadamente 7.5 y se - ,. r kJt*?tS?L..! »A.*Aaski*> adicionó NAD (1 %) . Se adicionaron el gel de FDH y D-LDH PAN co-in ovilizados . Se burbujeó suavemente a argón a través de la solución para remover C02 y la mezcla entonces se agitó a temperatura ambiente durante 5 días a un pH de aproximadamente 7.5 ± 0.1 por una adición controlada de pH normal de HCl ÍM (conversión mayor a 91 % por HPLC) . (Nota: el uso de formiato de sodio en exceso conduce a un tiempo de reacción más corto, ver método MECC . Los gelee que contienen enzimae ee removieron por centrifugación y se lavaron dos veces con porciones de 50 mL de agua desgasificada. (Nota: los gelee que contienen enzimae se pueden reutilizar por almacenamiento a 4°C en 50 mL de amortiguador Tris 5 mM (pH 7.5 ditiotreitol 5 mM) ) . Las capas acuosas se combinaron y la solución se ajuetó a un pH de 3.0 por la adición lenta de HCl concentrado. El producto ee extrajo con MTBE (50 X 4 mL) , ee secó con MgS04 y ee concentró para producir un producto de aceite crudo. El aceite se solidificó en 250 mL de hexanos/cloruro de metileno (2:1) y se filtró. El filtrado se concentró y solidificó nuevamente en 50 mL de hexanos/cloruro de metileno (2:1) . Los sólidos blancoe ee combinaron y se secaron bajo vacío de campana para producir un producto sólido blanco, compuesto ÍA: rendimiento 7.2 g (86 %) pureza por HPLC >95 % .
Ejemplo 2a Preparación de ÍA por reducción enzimática usando el reactor de membrana continua de la presente invención: Paso A - Preparación del com uesto 3 Procedimiento : A un reactor de 50 L equipado con una sonda de temperatura, condensador de reflujo, agitador y espirales de enfriamiento se adicionaron 2.482 kg de p-fluoro- benzaldehído, 2.002 kg de hidantoina, y 150 g de 1-amino- propanol en agua. La mezcla resultante se calentó y se metió a reflujo durante aproximadamente 10 horas. La solución se monitoreo para la desaparición de p- 10 fluorobenzaldehído tanto por HPLC (254 nm) como por RMN ltí (el movimiento del protón de aldehido de 10 ppm a 7.2 ppm). La reacción produjo una suepeneión espesa amarilla. El análisie por HPLC de la euepeneión eepesa amarilla pareció mostrar solo una conversión de 35 %, sin embargo, el RM? XH D mostró una conversión de aproximadamente 90 % . Se piensa que el método de HPLC indicó una conversión inexactamente ba a debido al fuerte cromóforo de benzaldehído. Entonces se preparó hidróxido de eodio eeparado en solución acuosa que se calentó a aproximadamente 98°C. 0 Esta solución entonces se adiciono cuidadosamente a la suepeneión eepesa amarilla. La mezcla de reacción entoncee ee metió a reflujo durante aproximadamente 3 horas, antes de que se dejara enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción nuevamente se monitoreo por HPLC (254 nm) para ? la desaparición completa del pico intermedio condensado. La mezcla de reacción resultante estaba en la forma de una solución amarilla/naranja transparente. Una vez que se enfrió la mezcla de reacción a aproximadamente 20°C ± 5°C, se adicionó cloruro de sodio y la mezcla de reacción se agitó. En tanto que se mantiene el flujo de refrigerante, se insertó una sonda de pH y ácido clorhídrico concentrado se adicionó para ajustar el pH para estar entre aproximadamente 8.0 - 8.5. En tanto que al ajustar el pH, la temperatura de reacción se mantuvo a una temperatura menor de aproximadamente 30°C al regular la velocidad de adición de ácido. Despuée de aproximadamente 4 horas, la mezcla de reacción resultante, la forma de una suspensión espeea amarilla pálida, ee filtró a través de un embudo buchner de mesa con un papel filtro # 1. La torta húmeda entonces se lavó al regresarla a un reactor de 50 L, adicionándole aproximadamente 33.35 L de metanol y luego agitando durante 15 minutos. Los sólidoe ee filtraron nuevamente de manera completa usando un embudo buchner y la torta húmeda se lavó usando el mismo procedimiento nuevamente usando aproximadamente 33.35 L de metanol. Los sólidoe lavados, 'resultantes entonces se secaron en un horno a temperatura ambiente bajo vacío de campana durante aproximadamente cuatro días para producir el compuesto 3, un sólido blanco o completamente banco. El producto fue >80 % por HPLC (254 nm) con un rendimiento de aproximadamente 75 %. RMN 1H (D20) d 7.02-7.19 (m 4H) , 4.72 (s, 2H) .
Paeo B - Preparación de compuesto ÍA usando el reactor de membrana continua de la presente invención.
Procedimiento : Asegurando que el reactor de membrana continua (240 mL) se montara como se expone en la presente reacción como se muestra en la Figura 2, partes 1 y 2, el reactor se lavó con solución v/v al 0.02 % de ácido paracético en agua hasta que sea removido un total de 2.5 litros del orificio de permeado. Luego, se preparó una solución de 2.5 L de 0.2 µM de agua filtrada y mercaptoetanol 0.1 M (195 mg) y se usó para enjuagar el reactor. A un matraz de fondo redondo de 12 L con un agitador elevado, medidor de pH y un difusor de gas se adicionaron 6.75 L de agua que se ha filtrado a través de un filtro de 0.2 µM o más fino. El matraz entonces se purgó con argón durante al menos aproximadamente 30 minutos. Entonces se adicionó el compuesto 3 al matraz de 12 L y se disolvió en agua desgasificada en el mismo, junto con formiato de amonio y mercaptoetanol . Manteniendo la purga de argón, la solución resultante se agitó hasta que se han dieuelto todoe los sólidos. Una vez disueltos, el pH de la solución se ajustó a aproximadamente 7.0 usando hidróxido de sodio 1 N. Entonces se adicionó ß-NAD a la solución de reacción y se agitó para disolver los sólidos. El pH entonces se ajustó a aproximadamente 6.2 para producir una solución de sustrato. Las enzimas, formiato-deehidrogenasa y deshidrogenase láctica, entonces se disolvieron usando 100 mL de la solución de eustrato antes de que ee adicionaran al reactor al bombearlos a través de la línea de alimentación de sustrato. La velocidad de bombeo empezó en aproximadamente 1.0 mL/min. Se tomó cuidado de mantener el pH de la solución de sustrato a aproximadamente 6.2. El efluente (o permeado) se monitoreo por conversión por HPLC (254 nM) . El pH del efluente también se verificó de manera frecuente, lo que también ayudó a monitorear la conversión (debe ser pH = 7.3-7.4. La velocidad de alimentación (la velocidad de bombeo) se ajustó conforme sea necesario para incrementar la conversión y/o el rendimiento conforme sea neceeario . Una vez que se alimentó completamente el sustrato a través del reactor, el permeado resultante se trató por acidificación a un pH de aproximadamente 3.0, usando ácido clorhídrico concentrado. La solución resultante entonces ee extrajo con MTBE, se dividió en tres porciones separadas. La solución extraída con MTBE se lavó con salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró en un rotovapor para producir un aceite amarillo. Al aceite se adicionaron 810 ml de diclorometano hasta que todo el aceite se haya disuelto. Lentamente, se adicionaron 1.62 L de hexanos a la solución y la solución se calentó a reflujo, se enfrió a 10°C en tanto que se agita . Entonces se filtró completamente un producto ' 3 ' ' ' 'ttii ^SJ^ *^**^.,^*^,^ sólido y se lavó como una torta con 1.2 L de una solución de hexano : diclorometano 2:1. Loe eólidos lavados entonces se secaron bajo vacío de campana durante 3 días a temperatura ambiente para producir un polvo blanco. El rendimiento fue de aproximadamente 70 % (pureza 91 % por HPLC) con una productividad del reactor de 280 g/ (d x L) . PA N'H (CD3C1) d 7.25-7.00 (m, 4H) , 4.50 (AB cuarteto, J = 4, 8 Hz 1H) , 3.15 (dd, J = 4, 14 Hz 1H) , 2.95 (dd, J = 8, 14 Hz) , 1H) . La pureza enantiómerica del éster metílico correspondiente de la muestra fue >99.99 % (Chiralpak AS, 4.6 x 250 mm, 10 µm) .
Ejemplo 2b Preparación de ÍA a partir de 3 usando el reactor de membrana continua de la presente invención: Procedimiento : Una vez que ee ha montcido a un reactor de membrana continua de la preeente invención como se muestra en la Figura 2, partes 1 y 2, que tiene una capacidad de 1.545 L, el reactor se lavó con solución al 0.02 % v/v de ácido peracético en agua filtrada 0.2 µM, es decir, agua que se ha filtrado a través de un filtro de 0.2 µM o más fino, hasta que se han removido aproximadamente 15 L de la solución del orificio de permeado. El reactor entonces se enjuagó con 15 L de agua filtrada a 0.2 µM. Se prepararon 15 L de una solución de agua filtrada 0.2 µM y mercaptoetanol 0.1 mM y se usó para enjuagar el reactor. A un matraz de fondo redondo de 22 L equipado con un agitador elevado, medidor de pH y difusor de gas se adicionaron 9.0 L de agua filtrada 0.2 µM. El matraz entonces se purgó con argón durante al menoe 30 minutos. Se disolvieron 400 g de 3 en el agua desgaeificada junto con formiato de amonio y mercaptoetanol. Manteniendo la purga de argón, la eolución ee agitó hasta que se han disuelto todos los sólidoe. Una vez que ee han dieuelto los sólidos, el pH de la solución se ajustó a un pH de aproximadamente 6.26 usando HCl ÍN. Entonces se adicionó ß-NAD a la solución y la solución se agitó hasta que se dieolvió. La solución de sustrato resultante se mantuvo a un pH de aproximadamente 6.26.
Las enzimas (Formiato-Deshidrogenasa y Deshidrogenasa Láctica) entonces se disolvieron en 600 mL de la solución de sustrato. La solución de sustrato que contiene las enzimas entonces se puso en el reactor al alimentar la solución a través de la línea de alimentación de suetrato del reactor. El reeto de la mezcla de sustrato entonces se bombeó en el reactor a una velocidad de 7.6 mL/minuto. Se tomó cuidado de mantener el pH de la solución de suetrato a aproximadamente 6.26 y mantener una purga ligera de argón. El efluente ee monitoreo para la convereión por HPLC (254 nM) . También el pH del efluente ee verificó frecuentemente que también ayudó a monitorear la convereión (pH debe ser 7.3-7.4) . Nota: La velocidad de alimentación se puede ajustar conforme eea necesario para variar la conversión o velocidad de rendimiento conforme se desee. La convereión ee encontró que es de 90-95 % por HPLC. Una vez que la solución inicial que contiene 400 g de 3 se ha limitado en el reactor, otra eolución de suetrato que contiene 400 g de 3 , preparada de la misma manera como se describe anteriormente se preparó y bombeó en el reactor. Esto se repitió hasta que ee ha usado un total de 1.2 kg de 3. En la corrida total de 1.2 kg no se usaron enzimas adicionales por el reactor, y la conversión de 3 a 1A se encontró que es mayor de 90 % por HPLC. iÍH?IÍÍ Í ??-**"-* "?- "*• -* * Ei emplo 3 Preparación de 2 : (ver esquema de reacción 1 para estructuras de ÍA y 2A) Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles 1A 1443-111 144 g 184.2 0.781 Metano! Fisher 950 mL 4M HCI/Dioxano Aldrich 18 mL Hexanos Fisher 300 mL Procedimiento : Se agitaron 144 g del compuesto ÍA en 950 mL de metanol y 18 mL de HCL/dioxano 4 M a temperatura ambiente durante 20 horas. La terminación de la reacción se confirmó por HPLC. Una vez completa, los solventes se extrajeron ba o vacío. El producto concentrado (aceitoso en esta etapa) se agitó vigorosamente con un agitador elevado, en tanto que se adicionaron lentamente 300 mL de hexanos. La agitación se mantuvo durante 30 minutos. El compuesto 2A fue un sólido polvoso en esta etapa. Se enfrió a 10°C y se filtró para producir un producto sólido. Adicionalmente, el , ^. km ¿M,¿d;MÉ ,^?k??»hk : filtrado en la concentración también produjo 4-5 g de un producto claro también. Al confirmar por HPLC que el filtrado concentrado fuera en realidad el producto limpio, ambos sólidos se combinaron y secaron ba o vacío a temperatura ambiente (Nota: alternativamente, se empleó el lavado con MTBE/bicarbonato de sodio acuoso para remover las impurezas acidas portadas de ÍA) . Rendimiento de compuesto 2, 141 g (95 %) ; HPLC quiral, pureza >97 % ee . RMN'H (CDcl3 d7.25-7.00 (m 4H) , 4.50 (AB cuarteto, J = 8 Hz, 1H) , 3.82 (s, 3H) , 3.15 (dd, J = 13 Hz, J = 4 Hz, 1H) , 2.95 (dd, J = 14 Hz, J = 7Hz, 1H) , 2.85 (br. S, 1H) . (Nota: los métodos enzimáticos conducen al compuesto 2A con >99.9% ee) .
Ejemplo 4 Preparación de ÍC: (ver esquema de reacción 5 para las estructuras de 2A y 1C) . iM#É??tíÍlk'- -«*S-»^*-»flfa-tt.
Materia Prima Fuente Cantidad PM Molee 2A - 200 g 198.2 1.01 MTBE Fisher 4L 99.99% Triflico anidrido Aldrich 484 g 202.1 1.71 2, 6 Lutidina Aldrich 184 g 107.1 1.71 ácido cítrico ÍM Stock 2x 1 L Bicarbonato de sodio Stock 2x 1 L saturado Sulfato de magnesio 150 G anhidro Procedimiento : Se disolvieron 200 g del compuesto 2A en 4L de MTBE bajo nitrógeno y se enfrió a -10°C. Se adicionó anhídrido triflico vía un embudo de adición durante 15 minutos, seguido por la adición lenta de 2,6-lutidina vía un embudo de adición en donde la temperatura interna se mantuvo por debajo de 3°C. La mezcla entonces se agitó durante 1 hora a 0°C antes de que se adicionaran en tanto que se agitan 1.9 L de agua. La solución se agitó durante 15 minutos adicionales. La capa orgánica superior entonces se separó y lavó dos veces con ÍL (ÍM) de ácido nítrico y luego dos veces con ÍL de solución saturada de bicarbonato de sodio. Entonces se secó sobre sulfato de magnesio «k,ÁA£&?sixkk„x a. anhidro, se filtro sobre celita y se extrajo un aceite bajo vacío para producir el compuesto ÍC. El rendimiento de ÍC, 340 g (95 5) ; RMN ?U (CDCi3) debe indicar que el compuesto es mayor de 95 % puro. (Nota: si la conversión no es completa, repetir los pasos anteriores dependiendo del grado de conversión) . Después de que se ha llevado a cabo la operación de re-elaboración, el producto aislado se ajustó a >95 % de pureza (RMN XH) . Este triflato, compuesto ÍC, se debe almacenar frío para prevenir la descomposición.
Eiemplo 5 Procedimiento para la preparación de 14 : (Ver esquema de reacción 6 para las estructuras de los compuestos referidos en los ejemplos 5-9) .
Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles Z-L-Valina Calbiochem 200 g 251 0, .796 Carbonildnmidazol (CDI) Aldrich 135 g 162 0. .836 THF Anhidro Fisher 3.3 L - - Bistrimetilsililamida de Aldrich 2.78 L ÍM 2. ,78 litio ÍM en THF (LHMDS en soln . THF) Acetato de t-Butilo Aldrich 355 g 116 3. ,06 HCL 1M Stock 10 L - - MTBE Fisher 8 L - - Sal de Bicarbonato de sodio Stock 4 L - - Salmuera Stock 2 L - - Sulfato de magnesio anhidro Fisher 300 g - - bkáí?taak.^, ^¡tí r^^^L.^A£^^ák¡.-Á.¿s¡ai jA^? .
Procedimiento : Se agitaron 200 g de Z-L-Valina con CDI en 3.3L de THF bajo una corriente de nitrógeno durante aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. Después de 1 hora, debe estar completa la formación de imidazolido. En un reactor de 12 L, la mezcla de reacción se cargó con 2.78 L de solución de bistrimetilsililamida de litio ÍM en THF bajo nitrógeno, luego se enfría a -70°C. Entonces se adicionó lentamente acetato de t-butilo (410 g) durante un periodo de aproximadamente 1 hora manteniendo la temperatura por debajo de -60°C. La mezcla de reacción entonces se agitó durante 30 minutos a -60° a -70°C. El anhídrido preparado en el paso anterior se mantuvo en un embudo de adición y ee adicionó lentamente al enolato, bajo nitrógeno con buena agitación, manteniendo la temperatura interna en o por debajo de -60°C. Una vez que se termina la adición, la mezcla de reacción ee agitó a -60°C durante 1 hora. Entoncee ee carga con 4.0 L de HCl de ÍM, lentamente, con agitación vigoroea, manteniendo la temperatura interna por debajo de -50°C. Temperaturas mayoree durante el enfriamiento rápido provocan racemización. Se adicionaron 200 mL de HCl 12M concentrado para ajustar el pH entre 6-7.5. Un lote de sólido cayó de la solución, principalmente imidazol e impurezas orgánicas atrapadas y sales de amina.
, I.A.....A., kt t?$?A.?t **M ?&±* ¿iLi M, Estos sólidos se filtraron completamente sobre celita. Debido a que las temperaturas más calientes tienden a disolver las impurezas, la filtración se llevó a cabo en frió y rápidamente sobre celita. Los sólidos se lavaron con 4 L de MTBE. El filtrado se diluyó con 2L de MTBE y HCl ÍM (2L) y se agitó durante 15 minutos. El pH se verificó para aeegurar que eetaba aproximadamente entre 1-2. La capa orgánica entonces se separó y verificó por HPLC quiral (debe ser mayor a 98 %) . La capa orgánica se lavó con HCl ÍM 2 X 2L, se agitó durante 15 minutos y las capae ee eepararon. Los productoe orgánicoe se lavaron nuevamente con solución saturada de bicarbonato de sodio 2 X 2L, ee agitaron durante 15 minutos y las capas se separaron. La capa orgánica se lavó con 2L de salmuera, las faeee se separaron y la capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro. La capa orgánica seca se filtró y extrajo bajo vacío para remover solventes y acetato de t-butilo sin reaccionar, manteniendo un alto vacío (bomba) durante al menos 20 horas para asegurar la remoción de acetato de t-butilo y siloxanos. Se analizó una pequeña muestra usando RMN 1H (CDC13), TLC (hexanos/acetato de etilo 1:1) y HPLC. La pureza del producto debe estar cercana a 90 %. Si no, este compuesto se puede cromatografiar sobre sílice usando acetato de etilo/hexanos al 20 %. En la mayoría de los casos, el compuesto debe ser probado en el ueo primero en *s*j*&Mri *sáá? > Í¡ ¿¿ ? el paso (expuesto en el Ejemplo 6 posterior) con 10 g de corrida, antes de la puesta de eecala. Nota: Si el RMNH contiene aun picoe de imidazol (a 7.00 (s) y 7.62 (s) ppm), re-tratar con 2L de MTBE y lavar doe veces con 500 mL de HCl ÍN, dos veces con NaHC03 saturado, una vez con 500 L de salmuera y secar sobre MgS04. Rendimiento de 14, 220 g (79 %). Si ee busca un producto final químicamente puro, se recomienda que no se deba proseguir al próximo paso sin que la pureza quiral del compuesto 14 exceda el 95 %.
Ejemplo 6 Preparación de 15 Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles 14 257 g 351 0.732 THF Anhídrido Fisher 4.5 L - - Hidruro de sodio al 60% en Aldrich 29.2 g 24.1 0.732 aceite mineral ÍC (90%) 350 g 330.3 0952 HCl ÍM Stock IL MTBE Fisher 6 L Salmuera Stock 1.6 L Ácido trifluoroacético Aldrich 210 mL sal de Bicarbonato de sodio Stock 4 L Sulfato de magnesio anhidro Fisher 150 g Cloruro de metileno Fisher 500 mL Procedimiento : Se convirtió en suspensión espesa el hidruro de sodio en 2.5 L de THF bajo argón y se enfrió a -5°C. 14 (257 g) se disolvió en ÍL THF y se adicionó vía un embudo de adición a hidruro de sodio durante 15 minutos. La solución se agitó durante 30 mi.-iutos manteniendo la temperatura interna entre 0°C y 3°C. El compuesto ÍC (340 g) se disolvió en ÍL de THF y se adicionó vía un embudo de adición a la solución, manteniendo la temperatura interna entre 0o y 5°C para formar una mezcla de reacción. La mezcla de reacción aproximadamente se calentó lentamente a una temperatura ambiente durante 2 horas y se mantuvo a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 horas. Se adicionaron ÍL de HCl ÍM y 31 de MTBE y la mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos. La capa orgánica se separó, se lavó doe vecee con 800 ml de ealmuera y ee eecó sobre sulfato de magnesio anhidro. La capa orgánica seca entonces se filtró sobre celita y se extrajo a sequedad bajo vacío produciendo 510 g de epímeros intermedios que ee tomaron directamente en el paeo de deecarboxilacíón expueeto posteriormente. Los epímeros intermedios se disolvieron en 500 ml de cloruro de metileno al cual se adicionaron 210 ml de ácido trifluoroacético (TFA) antee de que ee agitaran durante entre 6-20 horas a temperatura ambiente. La fajjiMgfc ?mááa¡a¡¿ iMimß i solución resultante se analizó por TLC (acetato de etilo/hexanos al 20 % con sulfato de amonio sérico/agente de tinción de ácido molibdíco) . Se observó un punto principal que corresponde al compuesto 15 (Rf 0.3). Los solventes se extrajeron bajo vacío y el aceite concentrado se disolvió en 2L de MTBE. El aceite entonces se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio (4 x ÍL) . Se agitó durante un mínimo de 15 minutos por lavado. (Nota: Para la remoción efectiva de TFA, cuatro extractos de MTBE en una solución de bicarbonato acuoso de rápida agitación) . Los productos orgánicos entonces se lavaron con 500 mL de salmuera, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtraron sobre celita y se extrajeron bajo vacío. El rendimiento de 15 crudo fue de 492 g. El espectro de RMN XH crudo se corrió en CDC13 que indicó un nivel de pureza de aproximadamente 60 %. El 15 crudo (492 g) se pre-absorbió en gel de sílice (1 kilo) . Se cargó una columna usando una carga de 9:1 (4 kilos, de manera preferente 15:1) y ee eluyó con EtOAC/Hexanos al 10 % (2 volúmenes de columna) , 15 % (2 volúmenes de columna) , 20 % (2 volúmenes de columna) . El compuesto ee eluyó deepuée de 5-6 volúmenee de columna. Se aislaron aproximadamente 15 g de 15 puro que contiene un subproducto de cetona que co-eluye con el 15 deseado. La pureza final por UV se encontró que es de aproximadamente -88 % con el 12 % restante que son impureza de cetona. Nota: Esta impureza de cetona no se removió hasta después de la hidrólisis de éster enzimática del éster expuesta en el Ejemplo 9 posterior. El rendimiento de 15 fue de 45 %.
Ejemplo 7 Preparación de 16: Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles 15 183 g 429.4 0.364 THF(7mL/g) Fisher 1.3 L H2S0 (conc.) Fisher 37 g 18 M 0.364 10% Pd/C (10 % en peso) Aldrich 18 g 10 % p - 16 143 g 393.15 - Procedimiento : Se disolvió 15 crudo (183 g) en 1.3 L de THF en un matraz hidrogenador de 2L eeguido por la adición de ácido eulfúpco concentrado (1.0 equivalentes, 0.364 mol, 20 ml), 30 g en peso. La solución entoncee ee purgó con argón (sub-superfície durante 15 minutos) . Se cargó 10 % en peso de catalizador de paladio (18 g) al reactor manteniendo la purga de argón. El matraz entonces se cargó con hidrógeno, ee evacuó 3 vecee, luego ee agitó bajo presión (2.81 kg/cm2 (40 librae/pulgada cuadrada)) durante 5-10 horas, hasta que la reacción se terminó por HPLC. La reacción se monitoreó por TLC (THF/hexanos al 50 %, con sulfato sérico, tinción con ácido fosfomolíbdico) y HPLC (método gluco) . El catalizador entonces se filtró completamente a través de una almohadilla de celita y los solventes se extrajeron bajo vacío en un evaporador giratorio. El rendimiento de 16 crudo fue de 170 g (120 %) como un aceite amarillo.
Eiemplo 8 Preparación de 17 Materia Prima Fuente Cantidad PM Moles 16 170 g 393.2 0.364 crudo CH2C12(ACS) Fisher 2.9 L DIPEA(2. leq. ) Aldrich 133 Ml 129.3 0.764 d=0.742 Ácido 5-metil-3- Maybridge 58 g 145.6 0.400 carboxi Cloruro de íeoxaazol Chem. Co . HCl ÍN Stock 0 . 8 L sal de Bicarbonato de Stock 0 . 8 L Sodio Sulfato de Sodio. Fisher 100 q Anhídrido 17 164 q 402.18 Procedimiento : En un matraz de fondo redondo de 5L, ee disolvió el 16 crudo (170 g) en cloruro de metileno (2.9 L) y se enfrió a 0°C (temperatura interna) con un baño de hielo/sal en tanto que está bajo un manto de argón. La solución amarilla se cargó con cloruro de ácido isoxazol (58 g) como un líquido (deecongelado a 35°C en un baño de agua caliente) . Debido al interée de la eetabilidad, ee aconeejable almacenar frío el cloruro de ácido. Lentamente, ee adicionó diisopropiletil-amina (0.3 L) vía un embudo de adición durante 10 minutos. La mezcla de reacción entonces se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente en tanto que ee monitorea la reacción por TLC y finalmente por HPLC (completa en general en el eepacio de 1 hora) . La reacción se enfrió rápidamente con HCl ÍM (400 mL) , la capa acuosa se removió y los productos orgánicos se re-extrajeron con HCl ÍM (400 mL) . La capa acuosa se removió y los productoe orgánicoe ee re-extrajeron con bicarbonato saturado (2 x 400 mL) . Los productos orgánicos se secaron sobre sulfato de sodio (100 g) , se filtraron y concentraron bajo vacío para producir 164 g (112 %) del compuesto 17 como un aceite amarillo crudo.
J LM>M.. .I..?!SÍ -**x. ik .í*»A k t Eiemplo 9 Preparación de 12 Materia Prima Fuente Cantidad PM Molee 17 164 g 402.2 0. .3 (crudo) THF Fisher 155 mL - - /Amortiguador de KH2P04 Stock 12 L 0.1 M - KH2P04(>99.5%) Fluka 163 g 136.1 1. .2 NaOH (ION) Stock -40 Ml 40 - PPL-Tipo II crudo) Aldrich 123 g Crudo - 075g/g HCl (conc.) Fisher -80 mL 12 142 g 390.2 Procedimiento : Para hacer 12L de un amortiguador, se adicionaron 163 g de fosfato diácido de potasio a 12 L de agua desionizada (pH = 4-5), y el pH se ajuetó para eetar entre aproximadamente 7.0-7.2 con NaOH 10M (aproximadamente 40 L) a una temperatura de 37-40°C. Se dieolvió 17 (164 g) en THF (115 mL) y ee adicionó a la solución de amortiguador a 37-40°C. La solución pareció bifásica al comienzo de la reacción. La enzima de PPL (123 g) se adicionó a la mezcla de reacción y se agitó a 37-40°C antes de que se enfriara rápidamente con HCl 12M a un pH de entre aproximadamente 1-1.5. La mezcla resultante se agitó durante 20 minutos en tanto que se enfría a temperatura ambiente. Tanto la enzima como el producto se hace que se colisionen en la fase acuosa. La mezcla de reacción se filtró sobre una almohadilla de celita que recolecta el producto y enzimas. La almohadilla se secó. El matraz receptor se reemplazó con uno limpio, y la mitad superior de la suspensión espesa de la almohadilla de celita se lavó con cloruro de metileno (3 x 750 mL) . Los productoe orgánicos se combinaron (remover agua en exceso por extracción ei eetá presente en una gran cantidad), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y concentraron bajo vacío para producir un sólido blanco. El sólido blanco se secó bajo vacío para producir 150 g de un producto seco crudo. Se empacó una columna con 1.5 kg de sílice agitada en una mezcla en 1:80:20 (i-PrOH: CH2C12 : Hexanos) , de 4L. El producto seco crudo se cargó en seco en sílice de aproximadamente 250 g y se distribuyó a la columna con aproximadamente 500 mL de solvente del espacio superior. Se adicionaron dos volúmenes de columna (aproximadamente 2 X 6L) de la miema mezcla de eluyente entoncee ee adicionaron ~ 2 X 6L 3: 80; 20 (i-PrOH:CH,Cl2 : Hexanos ) . Rendimiento de 12 crudo fue de 150 g. El rendimiento combinado sobre 3 pasos despuée de cromatografía estaba entre aproximadamente 65-70 %, 94 g [71 %) Ejemplo 9A Purificación de 12 Se purificó 12 vía una extracción con bicarbonato de sodio acuoso y precipitación subsecuente por acidificación. El compuesto se disolvió parcialmente en 60 volúmenes de bicarbonato de sodio saturado y se extrajo con 10 volúmenes de éster test-butílico de metilo. La capa orgánica resultante se extrajo dos veces con 10 volúmenes de solución saturada de bicarbonato de sodio. Los extractos acuosos de bicarbonato entonces se combinaron y acidificaron a un pH de aproximadamente 1. La desgasificación resultante del dióxido de carbono mantuvo la solución a una temperatura por arriba de aproximadamente 20°C. El producto AG7172, precipitó de la solución en la acidificación. El 12 entonces se filtró completamente, se lavó con 4 volúmenes de agua y se secó in vacuo a 50 °C con una purga de nitrógeno.
Eiemplo 10 Procedimiento para la preparación del compuesto 6 : (Ver esquema de reacción 7 para las estructuras de los compuestos referidos en los Ejemplos 10 y 11) . 41 ?^ M..^^.^A.^Ü^Í. I.?.^I¡Í.Í7. .-^.>..^^.^^ *- - *-aa¡*a Ht k$.?A i Procedimiento : Se disolvieron 36.80 g (200 mL) del compuesto ÍA en acetona (400 mL) antes de que ee adicionaran lentamente 22.6 g (220 mmol) de trietilamina, manteniendo la temperatura por debajo de 30°C. Entoncee se adicionaron 37.6 g (220 mmol) de bromuro de bencilo para formar una mezcla de reacción que ee agitó durante aproximadamente 65 horae tiempo en el cual la HPLC moetró terminación. Se adicionaron 200 mL de MTBE a la mezcla de reacción eeguidoe por minutoe de agitación antee de que la mezcla se filtrara a través de una almohadilla corta de gel de sílice para remover la mayoría de la sal de trietilamma precipitada. El gel de sílice entonces ee lavó con MTBE (200 mL) y loe filtradoe combinados. Los filtrados entonces se lavaron con HCl ÍM (200 mL) , bicarbonato de sodio saturado (100 mL X 2) y ealmuera (200 mL) . Entoncee se secaron con sulfato de magnesio, y se filtraron a través de una almohadilla corta de gel de sílice y se concentraron para producir el compuesto 6 (rendimientos 71-75 %, 35.5-37.5 g; que tiene una pureza de HPLC de entre 90->95 %) . El compueeto 6 entonces se puede recristalizar en hexanos/cloruro de metileno (8:1) para producir un producto cristalino.
Eiemplo 11 Preparación del compuesto 7 a partir del compuesto 6.
Procedimiento : Se disolvieron 1.37 G (5 mmol) del compuesto 6 en 40 mL de cloruro de metilo y se enfriaron a -10°C. Entonces se adicionaron 0.93 mL de Tf20 (5.25 mmol) a la solución seguido por la solución lenta de 0.64 mL (5.25 mmol) de 2, 6-lutidma. Debido a que la reacción fue rápidamente exotérmica, la temperatura se mantuvo por debajo de -8°C usando un baño de enfriamiento. Después de la remoción del baño de enfriamiento y la agitación de la mezcla durante aproximadamente 1 hora que permite calentar a la mezcla, la mezcla resultante se concentró bajo vacío de campana. El aceite crudo resultante entonces se disolvió en hexanos (100 mL) y se agitó sobre hielo seco para precipitar un sólido rosa, una sal de glutidinio. El precipitado se filtró a través de una capa delgada de gel de sílice y se concentró nuevamente para producir un aceite incoloro, el compuesto 7. El rendimiento fue de 90 % (1.84 g) , que se encontró que es puro por RMNXH .
Eiemplo 12 Procedimiento para la preparación del compuesto 18 a partir de Z-Valina. (Ver esquema de reacción 8 para las ¡.i*A.,-ri..Áat-ak^A».j^fa* .MÍ estructuras de los compuestos referidos en los Ejemplos 12-15) .
Procedimiento : Se disolvieron 50.26 g (200 mmol) de Z-valina seguido por 35.0 g (210 mmol) de 1 , 1 ' -carbonildiimidazol en THF (200 mL) a temperatura ambiente. La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente para producir un compuesto intermedio de imidazol de acilo en eolución. (Nota: la reacción libera óxido de carbono) . En un recipiente eeparado, ee adicionó LiHMDS (1M en THF, 642 mL) a THF (800 mL) a -78°C eeguido por adición lenta de acetato de o-bencilo (30 g, 200 mmol). Debido a que la reacción exotérmica, la temperatura ee mantuvo por debajo de -70°C. Eeta mezcla ee agitó durante 30 minutoe antee de que ee adicionara la eolución de acil-imidazol a la mezcla lentamente y a una temperatura menor de -68°C. Esta reacción también ee muy exotérmica, y de eeta manera, la temperatura ee mantuvo por debajo de -68°C. La mezcla de reacción resultante se agitó durante 55 minutos, luego ee movió del baño en el hielo seco. Se adicionó lentamente HCl 1M (500 mL) a la mezcla de reacción manteniendo la temperatura por debajo de 25 °C. Lae capae orgánicas entonces se eepararon, ee lavaron con bicarbonato de eodio saturado (200 mL) y salmuera (200 mL) , se secaron con sulfato de magnesio y se concentraron para producir el compueeto 18 a un rendimiento >85 % (>72.09 g) y que tiene una pureza por HPLC de entre 90-95 %. Para prevenir la deecomposición, el compuesto 18 se mantuvo en un refrigerador .
Eiemplo 13 Procedimiento para la preparación de 19 a partir de 18.
Procedimiento : Una solución del compuesto 18 (1.38 g, 3.60 mmol) en THF (10 mL) se adicionó lentamente a una solución de NaH (60 %, 158 mg, 3.96 mmol) en THF (20 mL) a -10°C. La mezcla de reacción resultante se removió de baño de enfriamiento y se dejó calentar en tanto que se agita durante 20 minutos. A la mezcla de reacción entonces se adicionó una solución del compuesto 7 (1.76 g, 4.33 mmol) en cloruro de metileno (10 mL) . El progreso de la reacción se monitoreo usando HPLC para observar la deeaparición de los materiales de inicio. La mezcla de reacción entonces se agitó durante 48 horas antes de que se adicione ra el MTBE (50 mL) . Después de que se adicionó lentamente HCl ÍM (75 mL) , la mezcla de reacción ee separó y la capa acuosa se extrajo por MTBE (50 mL X 2) . La capa orgánica combinada entonces se secó en sulfato de magnesio, se filtró a través de una almohadilla corta de gel de sílice y se concentró para producir un producto crudo del compuesto 19. (MS calculado 639, encontrado: MH+ 640 y Mna+ 662) . Después de la separación cromatográfica usando hexanos/acetato de etilo (4:1) este proceso produjo rendimientos de 50-60 %.
Eiemplo 14 Preparación del compuesto 20 a partir del compuesto 19.
Procedimiento: Se disolvió el compuesto 19 (680 mg, 1.06 mmol) en una mezcla desgaeificada de THF (10 mg) y ácido eulfúrico concentrado (116 mg, 1.10 mmol). A eeta solución se adicionó Pd al 10 %-C (204 mg) antes de que la mezcla de reacción resultante se agitara en un agitador par bajo una presión de 3.52 kg/cm2 (50 libras/pulgada cuadrada) durante 5 horas. La mezcla entonces se dieolvió en metanol (75 mL) , ee filtró a travée de celita y la celita ee lavó con metanol (75 mL) para producir 480 mg de un material crudo del compueeto 20 (rendimiento cuantitativo por peeo con rendimientoe totales de 50-60 % para la secuencia de dos pasos a partir del compuesto 18) , que se emite para el próximo proceso sin purificación adicional.
Eiemplo 15 Procedimiento para la preparación de 12 a partir del compuesto 20.
Procedimiento: El compuesto 20 (300 mg, 0.813 mmol) seguido por diisopropiletilamina (DIEPA) (9.45 mL, 2.60 mmol, 3.2 eq) ee dieolvieron en dioxano (40 L) para dar una euepeneión a 0°C. A eea solución se adicionó una solución de cloruro de 5-metil-3-isoxazol-3-carbonilo (130 mg, 0.894 mmol) en dioxano (10 mL) a 0°C. (Nota: la reacción es muy exotérmica) . La reacción se monitoreo por TLC y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. Entonces se adicionó cloruro de metileno (20 mL) antes de que la mezcla se lavara con HCl ÍM (10 mL) y bicarbonato de sodio saturado (10 ml ) , se secó con sulfato de magnesio y se filtró a través de una almohadilla corta de gel de sílice para producir el compuesto 12 en rendimientos de entre 65-70 % que tiene una pureza por HPLC de 95 % (MS calculado 390, encontrado: Mna+ 413) después de la separación en columna (cloruro de metileno/hexanoe/isopropanol = 79:20:3).
Eiemplo 16 Materia Prima Fuente Cantidad PM Molee 10 1.5 1.8 326.39 751 mg TFA 12.0 18.0 114.02 1.4 mL DCM 10 m L/g de 10 - 7.6 mL n-Metilmorfolina 10.0 15 0 101.15 1.6 Ml DMF 7 mL/g de 12 4.1 mL CDMT 1.05 1.6 175.58 281 mg DMF 4 Ml/g de CDMT - 1.1 L Agua 42 m/Lg de 12 24.7 mL Preparación del compueeto 11 a partir del compuesto 10.
Procedimiento: Se disolvió el compuesto 10 en DCM en un matraz de fondo redondo de un cuello y cubierto con un septo. El matraz entonces ee purgó con nitrógeno eeguido por la adición de TFA vía jeringa en tanto que la solución se está agitando. El progreso de la reacción se monitoreo por TLC ueando MeOH al 5 % en DCM haeta deepuée de aproximadamente 4 horae de que ee apareció el material de inicio. El solvente y TFA en exceeo ee removieron bajo vació a una preeión de <50 m Torr a 45°C. El producto, compueeto 11, ee ueó inmediatamente en el paeo expueeto a continuación.
Preparación del compueeto AG7088 a partir de loe compuestos 11 y 12.
Procedimiento : Los compuestos 11 y 12 se aislaron en DMF en un matraz de un cuello cubierto con un septo y equipado con una sonda de temperatura. El matraz se purgó con nitrógeno. La solución resultante ee dividió en dos porciones. En una primera porción ee adicionó n-metilmorfolina vía jeringa y se enfrió a 0°C ± 5°C. En una segunda porción de la solución se dieolvió CDMT. Eeta solución de CDMT entonces se adicionó gota a gota de jeringa a la primera porción de la eolución, manteniendo la temperatura de reacción de 0°C ± 5°C. La mezcla de reacción resultante entonces se dejó calentar a temperatura ambiente. La reacción se monitoreo durante aproximadamente 1 hora por TLC (hexanos : EtOAc : IPA 7:3:1) hasta que desapareció el compuesto 12. Una vez que la reacción se terminó el producto AG7088 se precipitó de la solución por la adición lenta de agua a la mezcla de reacción. La suspeneión eepeea resultante se filtró para obtener un rendimiento de >85 % de cristales granulares blancos del compuesto AG7088 que tiene una pureza >97 %. El producto entoncee ee recrietaliza al disolverlo en MeOH: EtOAc caliente 1:1 eeguido por la adición lenta de hexanoe (2 volúmenes) .
Se va a entender que la descripción anterior es de ejemplo y de naturaleza explicativa, y se propone para ilustrar la invención y sus modalidadee preferidas. A través de la experimentación de rutina, el experto reconocerá las modificaciones y variaciones evidentes que se pueden hacer sin que se aparten del espíritu de la invención. De esta manera, la invención ee propone que se defina no por la descripción anterior sino por las eiguientee deecripciones y sus equivalentes. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención

Claims (51)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad io contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un proceso útil para la preparación de agentes antipicornavirales de fórmula IA caracterizado porque comprende: Paso A: preparación de un compuesto de formula IIA que comprende ios sub-pasos de: (a) la conversión de un compuesto de la fórmula XIII a un ß-cetoéster de la fórmula XIV al hacerlo reaccionar con el compuesto de la fórmula XIII con 1,1'- carbonildumidazol seguido por un tratamiento con un compuesto de la fórmula XIHA; (.XIItA) (b) la convereión del ß-cetoéeter de la fórmula XIV a un enolato de la fórmula XV al hacerlo reaccionar con el ß-cetoéster de la fórmula XVI con un compuesto de la fórmula XVI : (c) la hidrogenólización del compuesto de la fórmula XV para producir un compuesto de la fórmula XVII; ^¿¡¿^^^¡¡¡¿¡¡¡fcjf^ (d) la acilación del compuesto de la fórmula XVII al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula R20-X para producir un compuesto de la fórmula XVIII, en donde X es un haluro adecuado; y (e) la hidrólisis enzimática del compuesto de la fórmula XVIII para producir el compuesto de la fórmula HA; y Paeo B: eometer al compueeto de la fórmula HA a una reacción de formación de amina con un compuesto de la fórmula III: en donde Lv es cualquier grupo salience adecuado; Z' ee cualquier grupo protector adecuado para un átomo N R. es H, F, un grupo alquilo, OH, SH, o un grupo O-alquilo R2 y R3 son cada uno independientemente H; en donde n ee un número entero de 0 a 5 , A. ee CH o N, A2 y cada A3 ee eeleccionan independientemente a partir de C(R4-)(R.-), N(R41), S, S(0), S(0)2 y 0, y A4 es NH o NR41, donde cada R41 es independientemente H o alquilo inferior, con la condición que no más de dos heteroátomos se presenten consecutivamente en el anillo representado anteriormente formado por A? , A2 , (A3)n, A4 y C=0, y al menos uno de R, y R3 es R4 es R5 y R6 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR.-R18, o -NR.7OR,8, en donde R17, Rlß, y R son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menos uno de R7 o R8 sea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR17, -SR17, -NR17R18, . muu¡Jí. a, i¿aiíÁ .,z ¿?ÍM¡? ¿ -NR19NR17R18 , o -NR17OR18 ; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de 0, N, S, ; R,n es : Z y Z-L son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, CN, -C(0)NR21R22, -C (0) NR21OR22 , -C(S)R21, -C(S)NR21R22, -N02, -S0R21, -S02R21, -S02NR21R22, -SO (NR21) (0R22) , -S0NR21 S03R21, -P0(0R21)2, -PO (R21) (R22) , -PO (NR21R22 (OR23) , -PO(NR21R22) (NR23R24) , - (CO) NR21NR22R23 , o -C (S) NR21NR22R23 , donde R21, R22, R23 y R24 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalqulo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cualquiera de dos de R21, R22, R23 y R24 , junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición que Z y Zx no sean ambos H; o z? y R? junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z1 o R. son como se definen anteriormente excepto para lae porcionee que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Z , junto con loe átomos a los cuales ee unen, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z y Z eon como se definen anteriormente excepto para las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo .
2. Un proceeo útil para la preparación de un compueeto de la fórmula HA: caracterizado porque comprende: (a) convertir un compuesto de la fórmula XIII a un ß-cetoéster de la fórmula XIV al hacerlo reaccionar con el compuesto de la fórmula XIII con 1 , 1 ' -carbonildiimidazol seguido por un tratamiento con un compuesto de la fórmula XIIIA; (b) convertir el ß-cetoéster de la fórmula XIV a un enolato de la fórmula XV al hacerlo reaccionar con el ß- cetoéeter de la fórmula XVI con un compuesto de la fórmula XVI: (c) hidrogenolizar del compuesto de la fórmula XV para producir un compueeto de la fórmula XVII; (d) acilar el compuesto ce la fórmula XVII al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula R^-X para producir un compuesto de la fórmula XVIII; en donde X es un haluro adecuado; y (e) hidrolizar enzimáticamente el compuesto de la fórmula XVIII para producir el compuesto de la fórmula HA; en donde Lv es cualquier grupo ealiente adecuado; Z' ee cualquier grupo protector adecuado para un átomo N R6 es cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR.7R18, -NR.-NR._R.., o -NR.7OR18, en donde R17 , R18, y R19 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menos uno de R7 o R8 sea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -OR17, -SR17, -NR17R18, -NR..NR.-R,., o -NR17OR18; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionadoe de O, N, S,; y
3. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque se usa pancreasa- lipaea porcina como la enzima para el paeo de hidrolización .
4. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compuesto de la fórmula XIII es Z-Valina.
5. El proceeo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compueeto de la fórmula XVI es :
6. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el ß-cetoéster de la fórmula XIV ee hace reaccionar primero con un hidruro de metal alcalino antee de que se haga reaccionar con el compuesto de la fórmula XVI.
7. El proceeo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el hidruro de metal alcalino es hidruro de sodio.
8. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el paso (c) comprende una hidrogenólieis de paladio
9. El proceso de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque se usa hidrogenólisis con paladio bajo presión.
10. El proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque ee uea # A~ff'r*'''''«-*-*---->- -^'?-*-^^^^*^***- >-..--^----'.-^-^a-Ai--^^ diisopropiletil-amina como un reactivo en el paso de acilacion (d) .
11. El proceeo de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el compueeto de la fórmula HA es: el compuesto de la fórmula XVIII es el compuesto de la fórmula XVII es : el enolato de la fórmula XV es
12. El proceso útil para preparar un compuesto de fórmula HA: caracterizado porque comprende los pasos de: (a) la conversión de un compuesto de la fórmula XIX al ß-cetoéster de la fórmula XX al hacerlo reaccionar el compuesto de la fórmula XIX con 1 , 1 ' -carbonildumidazol seguido por tratamiento con un compuesto de fórmula XIXA; (b) la conversión del compuesto de la fórmula XX a un compuesto de la formula XXI al hacerlo reaccionar con un compuesto de la fórmula XXII bajo condiciones de reacción adecuadae; (c) la hidrogenación del compueeto de la fórmula XXII para producir un compueeto de la fórmula XXIII; y (d) la acilación de un compuesto de la fórmula XXIII al hacerlo reaccionar con R20-X bajo condiciones adecuadas para producir el compuesto de la fórmula HA; en donde X es cualquier haluro adecuado, en donde Lv es cualquier grupo salien-e adecuado; Z' es cualquier grupo protector adecuado para un átomo N R6 es cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R--. -NR.9NR17R._ , o -NR17OR18, en donde R17, R18, y R19 son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menoe uno de R7 o R8 eea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R.., o -NR17OR18; R9 ee un heterociclo de cinco miembroe que tiene de uno a tree heteroátomos seleccionados de 0, N, S, ; y R20 es
13. El proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porcjue el compuesto de la fórmula XIX es :
14. El proceeo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porcrue el compueeto de la fórmula XIX ee :
15. El proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el compuesto de la fórmula XXI es : á?á ^ ^ .?^^L^M^^^^.^^ í^^?^^^
16. El proceeo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porcjue el compueeto de la fórmula XXII ee:
17. El proceeo de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porcjue el compuesto de la fórmula XXIII es:
18. El proceso útil para la preparación de un compuesto de la fórmula I, caracterizado porque comprende los pasos de: (a) hacer reaccionar el compuesto de la fórmula II con un compuesto de la fórmula HIA de la presencia de N-metilmorfolma para formar una mezcla de reacción, (b) adicionar un compuesto de la fórmula Lv-X a la mezcla de reacción para formar un compuesto de la fórmula I, en donde X es cualquier haluro adecuado. Lv es cualquier grupo saliente adecuado; R± es H, F, un grupo alquilo, OH, SH, o un grupo O-alquilo R2 y R3 son cada uno independientemente H; en donde n es un número entero de 0 a 5 , A. es CH o N, A2 y cada A3 ee eeleccionan independier temente a partir de C(R..)(R.-), N(R41), S, S(O), S(0)2 y O, y A4 ee NH o NR41, donde cada R41 ee independientemente H o alquilo inferior, con la condición que no máe de doe heteroátomoe ee preeenten coneecutivamente en el anillo representado anteriormente formado por A1 , A,, (A3)n, A4 y C=0, y al menos uno de R, y R^ es R4 es R5 y R6 eon cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, o un grupo heteroarilo; R7 y R8 eon cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, -NR19NR17R18 , o -NR.7OR18, en donde R17, R18, y R19 eon cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, o un grupo acilo, con la condición que al menos uno de R7 o R8 sea un grupo alquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -0R17, -SR17, -NR17R18, - -0R17 , - SR17 , -NR17R18 , -NR19NR17R18 , o -NR170R18 ; R9 es un heterociclo de cinco miembros que tiene de uno a tres heteroátomos seleccionados de O, N, S , ; R20 es Z y Z1 son cada uno independientemente H, F, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalquilo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, -C(0)R21, -C02R21, CN, -C(0)NR21R22, -C (O) NR210R22 , -C(S)R21, -C(S)NR21R22, -N02, -S0R21, -S02R21, -S02NR21R22, -SO (NR21) (OR22) , -S0NR21 S03R21, -PO(OR21)2, -PO (R21) (R22) , -PO (NR21R22 (0R23) , -PO(NR21R22) (NR23R24) , - (CO) NR21NR22R23 , o -C (S) NR21NR22R23 , donde R21, R22, R23 y R2. son cada uno independientemente H, un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo heterocicloalqulo, un grupo arilo, un grupo heteroarilo, un grupo acilo, o un grupo tioacilo, o donde cualquiera de dos de R21, R22, R23 y R24 , junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo heterocicloalquilo, con la condición que Z y Z no sean ambos H; o z? y Ri' junto con los átomos a los cuales están unidos, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, -_-!„ fi',-|'l,lli- „---"ilÍ ___£.-.-__ili. ¿¡ ií H n donde Z. o R. eon como se definen anteriormente excepto para las porciones que no pueden formar el grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo; o Z y Z? , junto con los átomos a los cuales se unen, forman un grupo cicloalquilo o heterocicloalquilo, donde Z y Z. son como se definen anteriormente excepto para lae porcionee que no pueden formar el grupo cicloalquílo o heterocicloalquilo .
19. El proceso de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porcjue el compueeto de la fórmula I es:
20. El proceso de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porcjue el compuesto de la fórmula II es:
21. El proceeo de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compueeto de la fórmula IIIA es: F3CCOOH .
22. El proceso de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compuesto de la fórmula es LvX es clorodimetiltriazina
23. El proceso de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el compuesto de la fórmula IIIA se prepara por un proceso que comprende el paso de hacer reaccionar el compuesto de la fórmula HIB con ácido trifluoroacético, en donde el compuesto de la fórmula HIB es
24. El proceso útil para la preparación del compueeto de la fórmula XVIA: en donde R10 ee un halógeno un grupo alquilo; caracterizado porque comprende loe pasos de: Paso A: Convertir un compuesto de la fórmula VI a un compuesto de la fórmula V que comprende los sub-pasoe de: (a) hacer reaccionar un benzaldehído sustituido en R,„ de la fórmula VI: con hidantoma en un medio acuoso en la presencia de un n i| ? ??. ÉÉ*?r??1 catalizador a temperatura de reflujo para formar una mezcla de reacción; (b) tratar la mezcla de reacción con un exceso de hidróxido de metal alcalino a temperatura de reflujo para formar una solución tratada con hidróxido de metal alcalino; (c) adicionar un haluro de metal alcalino a la solución tratada con hidróxido de metal alcalino para dar una solución; (d) acidificar la solución con un ácido concentrado para dar un precipitado de la fórmula V; y Paso B: la reducción enzimática del compuesto de la fórmula V a un compuesto de la fórmula VII; tím iáMí m^Áá Paso C: una esterificación del compuesto VII a un compuesto de la fórmula XII al hacer reaccionar el compueeto de la fórmula VII con un compueeto de la fórmula R' ' -OH, en donde R' ' ee un alquilo o arilo; y Paeo D: la convereión del compueeto de la fórmula XII al compuesto de la fórmula XVIA.
25. El proceso de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la reacción de reducción enzimática del paso B es catalizada por formiato- deshidrogenasa y lactato-deehidrogenasa formada.
26. El proceso de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la reacción de reducción del paso B uea catálisis enzimática encerrada en membrana .
27. El proceso de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la reacción de reducción del paso B usa catálisis enzimática de coinmovilización .
28. El proceso de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque la catálisis enzimática de co-inmovilización usa PAN 500 como un copolímero adecuado.
29. El proceso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la lactato deshidrogenasa ee D-lactato deshidrogenasa .
30. El proceso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la lactato deshidrogenasa es L-lactato deshidrogenasa .
31. El proceso de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el paso C de esterificación ee desarrolla en aproximadamente temperatura ambiente en la presencia de ácido clorhídrico y dioxano.
32. El proceeo de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el catalizador usado en el paso (a) es una amina primaria o secundaria
33. El proceso de conformidad con la reivindicación 32, caracterízado porque el catalizador es l-amino-2-propanol .
34. Un proceso para preparar el compuesto de la fórmula XVIA: caracterizado porque comprende: Paso A' convertir serina al compuesto de la fórmula VII que comprende los sub-pasos de: (a) convertir serina a glicidato de potasio en un proceso estándar; y (b) llevar a cabo una reacción de abertura de anillo de epóxido regioselectiva por el compuesto de la fórmula R10-fenil-Q; Paso B' : una esterificación del compuesto de la fórmula VII a un compuesto de la fórmula XII al hacer reaccionar el compuesto de la fórmula R' ' -OH; Paso C : la conversión del compuesto de la fórmula XII del compuesto de la fórmula XVIA. en donde R10 es un halógeno un grupo alquilo, R' ' es un alquilo o arilo; y ^Í|^^k||^ ^?^^ ? ^^ MA? kíA Q es un bromuro activado, un sulfato, o un yoduro primario
35. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la eerina es L-serina.
36. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la eerina es D-serina .
37. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque Q es -MgBr.
38. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque R10 es F en la posición para del anillo de fenilo.
39. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque la esterificación en el paso B' se desarrolla en temperatura ambiente en la presencia de ácido clorhídrico y dioxano.
40. El proceso de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque el glicidato de potasio formado a partir del paso A' (a) se convierte a un ácido glicídico despuée de la reacción de abertura de anillo de epóxido regioselectiva del paso A' (a) se desarrolla .
41. Un proceso para preparar un compueeto de la fórmula XVIB : (XVGB) caracterizado porque comprende: Paeo A' ' : la preparación de un compueeto de la fórmula XIIA de la fórmula IX que comprende los sub-paeoe de: (a) una dihidroxilación aeimétrica de un compueeto de la fórmula IX para formar un compuesto de la fórmula XA: " FS j (b) hacer reaccionar el compuesto de la fórmula IX con 1, 1 ' -carbonildiimidazol en la presencia de tolueno para formar un compuesto de la fórmula XI; y (c) una reducción mediada por paladio del compuesto de la fórmula XI; y Paso B'', la conversión del compuesto de la fórmula XHA 5 del compuesto de la fórmula XVIB . en donde R10 es un halógeno un grupo alquilo; y R' ' ee un alquilo o arilo.
42. El proceso de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque la dihidroxilación 0 asimétrica es una dihidroxilación asimétrica no aguda.
43. El proceso de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el paso (b) ee deearrolla a aproximadamente 80°C.
44. El proceso de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque el paso de 5 reducción mediado por paladio, se realiza en la presencia de ácido fórmico a aproximadamente temperatura ambiente.
45. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente fórmula: y una sal de adición acida del mismo.
46. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente fórmula: y una sal de adición acida del mismo.
47. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente fórmula: y una sal de adición acida del mismo.
48. Un compuesto caracterizado porque tiene la siguiente fórmula: y una sal de adición acida del mismo.
49. Un proceso para preparar un compuesto de la fórmula VII: en donde R10 es un halógeno un grupo alquilo; caracterizado porque comprende los pasoe de: Paso A: Convertir un compuesto de la fórmula VI a un compuesto de la fórmula V que comprende los sub-pasos de: (a) hacer reaccionar un benzaldehído eustituido en R10 de la fórmula VI : con hidantoina en un medio acuoso en la preeencia de un catalizador a temperatura de reflujo para formar una mezcla de reacción; (b) tratar la mezcla de reacción con un exceso de hidróxido de metal alcalino a temperatura de reflujo para formar una eolución tratada con hidróxido de metal alcalino ; (c) adicionar un haluro de metal alcalino a la eolución tratada con hidróxido de metal alcalino para dar una solución; (d) acidificar la solución con un ácido concentrado para dar un precipitado de la fórmula V; Paso B: la reducción enzimática del compuesto de la fórmula V a un compuesto de la fórmula VII;
50. Un proceso para la preparación de un compuesto de fórmula VII caracterizado porque comprende los pasoe de: (a) convertir serina a glicidato de potaeio en un proceeo estándar; (b) llevar a cabo una reacción de abertura de anillo de epóxido regioeelectiva por el compuesto de la fórmula R?0-fenil-Q para dar el compuesto de la fórmula VII, en donde R10 es un halógeno un grupo alquilo; y en donde Q es un bromuro activado, un eul fato, o un yoduro primario .
51. El proceso de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque el glicidato de potasio formado a partir del paso (a) se convierte a un ácido glicídico después de la reacción de abertura de anillo de epóxido regioselectiva del paso(b) se desarrolla.
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