MXPA00012720A - Una cepa viral de hepatitis b, humana, mutante y sus usos. - Google Patents

Abstract

Esta invencion proporciona una cepa aislada del virus de hepatitis B designada cepa Oon del Antigeno-"S"-133 de superficie del virus de hepatitis B, humana (Metionina a Trionina) genoma viral constituyente que esta depositado bajo los Numeros de Acceso P97121501, P97121502, y P97121503 con la Coleccion Europea de Cultivo Celular el 15 de diciembre de 1997. Esta invencion tambien proporciona un acido nucleico aislado que codifica para un polipeptido que es un antigeno de superficie, principal, mutante de una cepa del virus de hepatitis B, este polipeptido que tiene una secuencia de aminoacidos que difiere de la secuencia de aminoacidos de un antigeno de superficie principal de un virus de hepatitis B tipo silvestre ya que el aminoacido en la posicion numero 133 de este polipeptido es una treonina en vez de una metionina. Esta invencion tambien proporciona un acido nucleico aislado que codifica para un peptido, en donde el peptido se codifica por una molecula de acido nucleico que compr ende a los nucleotidos 527 hasta 595 de SEQ. ID. No. 1 y el peptido purificado. Esta invencion tambien proporciona varios metodos de uso del acido nucleico aislado, descrito y peptidos. Esta invencion proporciona adicionalmente varios husos del acido nucleico aislado, descrito, polipeptidos y peptidos y anticuerpos.

Description

UNA CEPA VIRAL DE HEPATITIS B HUMANA, MUTANTE Y SUS USOS A todo lo largo de esta solicitud, se citan varias referencias dentro de paréntesis. Las descripciones de estas publicaciones en sus totalidades se incorporan de este modo como referencia en esta solicitud, para describir de manera más completa el citado de la técnica al cual corresponde esta invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere al genoma del virus de hepatitis B, aislado del carcinoma hepatocelular (HCC), y con una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) en el antigeno principal de superficie, su secuencia de nucleótidos, la secuencia deducida de aminoácidos de las cuatro proteínas principales, antigeno, anticuerpo, sistemas de detección, desarrollo de vacunas efectivas, y agentes antivirales. El HCC es uno de los principales cánceres humanos más comunes del hígado, particularmente en Asia donde se encuentran el 70 % de los nuevos casos a escala mundial cada año. Usualmente surge en hígados cirróticos como una complicación de la enfermedad crónica del ' igado. Las manifestaciones clínicas de los pacientes con HCC son inespecí ficas *t con signos y síntomas que aparecen únicamente en las etapas tardías del cáncer. Una de las causas principales de las enfermedades crónicas del hígado es la infección viral de hepatitis B. Se descubrió primero en 1963 como un virus humano que se transmite de forma parenteral, la infección viral de hepatitis B, crónica ha sido implicada más comúnmente en la patogénesis indefinida serológica del HCC. A pesar 10 del hecho que el virus de hepatitis B no exhibe características de un oncógeno viral completo, su implicación en el desarrollo del HCC se puede atribuir a varios aspectos de su interacción con las células hospedadoras de hepatocitos. Estos incluyen 15 la actividad t rascripcional promiscua de la proteina viral más pequeña, X, que intensifica el nivel de expresión de muchos genes celulares objetivo, incluyendo los proto-oncogenes. Por otra parte, el ADN viral, integrado en los cromosomas hospedadores 20 se encuentra regularmente en pacientes con HCC. También hay evidencia de un papel activo en el desarrollo de la HCC por el antígeno principal de superficie. Esta proteína ha servido como el marcador de detección principal para portadores de 25 virus de hepatitis B. El epitope más antigénico es una región altamente conservada que abarca 23 residuos de aminoácidos y se localiza desde la posición de aminoácido 124 a la 147 del antígeno principal de superficie. Esta pequeña región designada como el determinante "a" específico de grupo se encuentra en todos los subtipos y aislados de los genomas virales de hepatitis B. Sus propiedades antigénicas parecen ser debidas a su estructura propuesta de doble asa, a la cual se une el anticuerpo neutralizador inducido por vacuna. Los datos epidemiológicos indican que el antígeno principal de superficie tipo silvestre se ha encontrado en la mayoría de los pacientes con HCC. Adicionalmente, la observación indica que varias variantes del antígeno principal de superficie de pacientes con HCC pueden estar comprendidas en la patogénesis de la HCC. El análisis de secuenciación directa indicó que 24 de 63 pacientes con HCC (alrededor de 38 %) tienen varias mutaciones en el epítope "a" del antígeno principal de superficie.

Cuando se combinan los casos de tipo silvestre y variantes, la proporción del virus variante que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133, localizado en la primera asa del epitope "a" del antígeno principal de superficie (Metionina a Treonina), es tan alta como 12.7 % en 63 pacientes con HCC de la región del sureste asiático y se presenta en 5 casos locales con HCC. Sin embargo, se encuentra la misma mutación sólo en 2 % de portadores de virus de hepatitis B en una población al azar (más de 100 casos) el significado de esta variante en el residuo de aminoácido 133 se fortalece por el hecho que la porción del virus variante en el residuo de aminoácido 145 (Glicina a Arginina), mejor conocido como una mutante inducida por vacuna y localizado en la segunda asa del epítope "a", permanece constante en 8 % de los portadores del virus de hepatitis B en la muestra de población al azar. Aunque esta cepa viral variante de hepatitis B, que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie en pacientes con HCC, puede surgir diferencialmente sobre aquellas inducidas después de la vacunación (es decir, por una mutación en el residuo de aminoácido 145 del antígeno principal de superficie), según lo reportado, esta cepa comparte características similares tanto en transmisión estable y en los casos de transmisión vertical de estas cepas, a pesar de ser utilizada la profilaxis efectiva del virus de hepatitis B y la inmunoglobulina de hepatitis B (HBIG) . Es de interés el surgimiento del virus variante de hepatitis B humana, que tiene mutaciones en el epítope "a" del antígeno principal de superficie, en el HCC. La alta proporción del virus mutante con una substitución en el residuo de aminoácido 133 del antigeno principal de superficie es de interés particular puesto que puede señalar una asociación cercana con la patogénesis del HCC. Esta correlación, por lo tanto, requerirá el desarrollo urgente de sistemas específicos de detección así como vacunas profilácticas y terapéuticas efectivas y agentes antivirales. La determinación de la secuencia de nucleótidos de este virus mutante constituye el primer paso hacia estas metas y será ciertamente útil para el desarrollo de los esquemas de diagnóstico y tratamiento mencionados con anterioridad .

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona una cepa aislada del virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ? S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina), cuyo genoma viral constituyente está depositado con fecha 15 de diciembre de 1997, bajo los números de acceso P97121501, P97121502 y P97121503 con la Colección Europea de Cultivo de Células. Esta invención proporciona además un ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina.

Esta invención proporciona adicionalmente un método para producir el polipéptido y un método para obtener el polipéptido en forma purificada para recuperar un polipéptido purificado que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina. Esta invención proporciona adicionalmente un oligonucleótido de al menos 15 nucleótidos capaz de hibridarse específicamente sólo con secuencias de la cepa viral mutante del virus de hepatitis B. Esta invención proporciona adicionalmente un método para obtener anticuerpos para el polipéptido y para los anticuerpos producidos. Esta invención también proporciona el uso del ácido nucleico, polipéptido, péptido o anticuerpo identificado anteriormente, para determinar si un sujeto está infectado con la cepa viral identificada anteriormente . Esta invención también proporciona el uso de ácido nucleico, polipéptido, péptido o anticuerpo identificados anteriormente, para determinar si un sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular .

Esta invención también proporciona una vacuna para prevenir y tratar el carcinoma hepatocelular , así como una vacuna para tratar o prevenir la infección por una cepa mutante identificada anteriormente del virus de hepatitis B. Esta invención también proporciona un método para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar o prevenir el carcinoma hepatocelular y composiciones que contienen estos compuestos. Esta invención también proporciona un método para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar o prevenir la infección por una cepa mutante identificada anteriormente y composiciones que contienen estos compuestos.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es una estructura de cuatro cuadros de lectura abiertos del genoma viral de hepatitis B aislados del HCC (con una mutación de Metionina a Treonina en «¿1 residuo de aminoácido 133 del antigeno principal de superficie, como se marca por un asterisco) . Las proteínas virales principales: ADN-polimerasa, antígeno de superficie grande, medio, principal; prenúcleo, núcleo y trans-activación X se denotan como P, PreS l/PreS2/S, PreC, C y X, respectivamente. La Figura 2 es la estrategia de clonación y la determinación de secuencia del mismo genoma viral de hepatitis .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN A todo lo largo de esta solicitud, las referencias a nucleótidos específicos se refiere a los nucleótidos presentes en la hebra de codificación del ácido nucleico. Las siguientes abreviaciones normales se usan a todo lo largo de la especificación para indicar nucleótidos específicos: C citosina A = adenosina T timidina G = guanosina La presente invención proporciona la secuencia de nucleótidos del genoma de virus de hepatitis B humana aislado a partir del carcinoma hepatocelular (HCC), que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie, que consiste de 3215 nucleótidos (Figura 3) que codifica para 4 proteínas virales de traslape mostradas en las Figuras 4 -7. La invención proporciona las secuencias de aminoácidos de las cuatro proteínas virales principales, incluyendo la ADN-polimerasa , antígeno grande/intermedio/principal de superficie, núcleo y trans-activación X. Estas proteínas se pueden producir usando tecnología recombinante y se usan en el desarrollo de anticuerpos policlonales o monoclonales . La presente invención también proporciona un sistema de diagnóstico de virus de hepatitis B humana, especifico para la mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie, usando las secuencias de nucleótidos o de proteina, o los anticuerpos descritos anteriormente. Esta invención proporciona una cepa aislada del virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ' S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) genoma viral constituyente que está depositado bajo los números de acceso P97121501, P97121502 y P97121503. Esta invención también proporciona un ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina. En una modalidad específica, el polipéptido se está codificando por los nucleótidos 155 hasta 835 de la secuencia de ácidos nucleicos designada SEQ ID NO: 1, que comprende los nucleótidos "ACG" en la posición 551-553, en lugar de "ATG". El ácido nucleico puede ser ADN o ARN, específicamente ADNc o ADN genómico. En otra modalidad, el polipéptido tiene una secuencia de nucleótidos substancialmente idéntica a los residuos de aminoácidos 147 hasta 400 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. Esta invención también proporciona un ácido nucleico que codifica para un péptido, en donde el péptido se codifica por una molécula de ácido nucleico que comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID NO: 1. Esta invención también proporciona un ácido nucleico aislado que codifica para un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. Esta invención proporciona adicionalmente un vector que comprende un ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina y está enlazado operativamente a un promotor de trascripción de ARN. Esta invención proporciona además un vector que comprende un ácido nucleico aislado que codifica para un péptido, en donde el péptido se codifica por una molécula de ácido nucleico que comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID NO: 1. De manera específica, los vectores anteriores comprenden ADN viral. Esta invención proporciona también un sistema vector hospedador para la producción de un polipéptido o péptido y comprende los vectores identificados anteriormente en un hospedador adecuado. También en esta invención, está un método para producir un polipéptido el cual comprende cultivar en los sistemas vectores hospedadores descritos anteriormente, bajo condiciones adecuadas que permitan la producción del polipéptido o el péptido y su recuperación. Esta invención también proporciona un método para obtener un polipéptido o péptido en forma purificada que comprende: (a) introducir cualquiera de los vectores descritos anteriormente en una célula hospedadora adecuada; (b) cultivar la célula hospedadora resultante para producir el polipéptido; (c) recuperar el polipéptido producido en el paso (b); y (d) purificar el polipéptido o péptido recuperado de este modo. Esta invención también proporciona un polipéptido purificado que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina. En forma específica, uno puede obtener el polipéptido o péptido purificado usando los métodos anteriores. Esta invención proporciona un péptido purificado, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. Esta invención también proporciona un oligonucleótido de al menos 15 nucleótidos, capaz de hibridarse específicamente con una secuencia única de nucleótidos dentro de un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es treonina en lugar de una metionina, sin hibridarse a cualquier secuencia de nucleótidos dentro de un ácido nucleico que codifica para el antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre. En una modalidad, el oligonucleótido comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID NO: 1. Esta invención también proporciona una composición capaz de estimular o intensificar la producción de anticuerpos para el polipéptido. Esta invención también proporciona un método para obtener anticuerpos para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es treonina en lugar de una metionina, y no al antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, que comprende: (a) obtener el polipéptido en una forma purificada; (b) inmunizar un organismo capaz de producir anticuerpos contra el polipéptido purificado; (c) conectar los anticuerpos producidos; (d) combinar los anticuerpos producidos y el polipéptido purificado bajo condiciones para formar un complejo; y (e) determinar qué anticuerpos producidos forman un complejo con el polipéptido purificado para obtener anticuerpos para polipéptido. En una modalidad específica, el polipéptido se está codificando por los nucleótidos 155 hasta 835 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 1. En otra modalidad, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos substancialmente idéntica a los residuos de aminoácidos 174 hasta 400 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. Se pueden obtener estos anticuerpos a partir de un organismo tal como un conejo o un ratón. Esta invención también proporciona un método para obtener anticuerpos para un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3, que comprende: (a) obtener el péptido en una forma purificada; (b) inmunizar un organismo capaz de producir anticuerpos contra el péptido purificado; (c) conectar los anticuerpos producidos; (d) combinar los anticuerpos producidos y el péptido purificado bajo condiciones para formar un complejo; y (e) determinar qué anticuerpos producidos forman un complejo con el péptido purificado para obtener anticuerpos para el péptido. Esta invención también proporciona los anticuerpos obtenidos usando los métodos descritos con anterioridad, específicamente cuando los anticuerpos son anticuerpos monoclonales. Esta invención también proporciona anticuerpos capaces de detectar un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, es incapaz de detectar el antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre. Esta invención proporciona adicionalmente anticuerpos capaces de detectar un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. Esta invención proporciona el uso de un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie y una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es treonina en lugar de una metionina para determinar si un sujeto está infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno -'S'-133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) , en donde la determinación comprende: (a) obtener una muestra apropiada de ácido nucleico del. sujeto; y (b) determinar si la muestra de ácido nucleico del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie en una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina. En una modalidad, la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es treonina en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b), comprende: (i) poner en contacto el ARNm con el oligonucleótido bajo condiciones que permitan la unión del ARNm al oligonucleótido para formar un complejo; (ii) aislar el complejo formado de este modo; e (iii) identificar el ARNm en el complejo aislado para determinar de este modo si el ARNm es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido. En otra modalidad, la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende el ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido, que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) producir el ARNm bajo condiciones adecuadas para obtener una secuencia de aminoácidos; y (ii) comparar la secuencia de aminoácidos del paso (i) con la secuencia de aminoácidos codificada por el ácido nucleico aislado anteriormente, para determinar de este modo si la muestra de ácido nucleico es, o se deriva de, una ácido nucleico que codifica para el polipéptido . Adicionalmente, se puede determinar el paso (b) por medio de: (i) amplificar el ácido nucleico presente en la muestra del paso (a); y (ii) detectar la presencia del polipéptido en el ácido nucleico amplificado resultante. Esta invención también proporciona el uso de anticuerpos que reconocen a un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina para determinar si un sujeto está infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Ant igeno- ' S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina), en donde la determinación comprende: (a) obtener del sujeto una muestra apropiada y (b) determinar si la muestra del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico; que codifica para un polipéptido, que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina; al poner en contacto la muestra bajo condiciones apropiadas para unirse a los anticuerpos que reconocen al polipéptido, para determinar si un sujeto está infectado . En los usos identificados anteriormente, el ácido nucleico aislado, oligonucleótido o anticuerpo se puede marcar con un marcador detectable. Los ejemplos de marcadores detectables incluyen isótopos radioactivos, fluoróforos y enzimas. En las modalidades, la muestra puede comprender sangre, tejido o suero. Esta invención proporciona el uso de un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina, para determinar si un sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular, en donde la determinación comprende: (a) obtener del sujeto una muestra apropiada de ácido nucleico; y (b) determinar si la muestra de ácido nucleico del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina. En una modalidad, la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende: ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido, que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) , comprende: (i) poner en contacto el ARNm con el oligonucleótido bajo condiciones que permiten la unión del ARNm al oligonucleótido para formar un complejo; (ii) aislar el complejo formado de este modo; y (iii) identificar el ARNm del complejo aislado para determinar de este modo si el ARNm es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido.

En otra modalidad, la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) traducir el ARNm bajo condiciones adecuadas para obtener una secuencia de aminoácidos; y (ii) comparar la secuencia de aminoácidos del paso (i) con la secuencia de aminoácidos del ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido, en donde el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos substancialmente idéntica a los aminoácidos 174 hasta 400 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID No: 3 para determinar de este modo si la muestra de ácido nucleico es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido. En otra modalidad, la determinación del paso (b) comprende: (i) amplificar el ácido nucleico presente en la muestra del paso (a); y (ii) detectar la presencia del polipéptido en el ácido nucleico amplificado resultante.

Esta invención proporciona además el uso de anticuerpos que reconocen el polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de ácido nucleico de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, para determinar si un sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular, en donde la determinación comprende: (a) obtener una muestra apropiada del sujeto; y (b) determinar si la muestra del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido; que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre ya que el aminoácidos en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina; al poner en contacto la muestra bajo condiciones apropiadas para unirse los anticuerpos que reconocen el polipéptido para determinar si un sujeto está infectado . En los usos descritos con anterioridad, el ácido nucleico aislado, oligonucleótido o anticuerpo se puede marcar con un marcador detectable. Los ejemplos de marcadores detectables incluyen isótopos radioactivos, fluróforos y enzimas. En las modalidades, la muestra puede comprender sangre, tejido o suero. Esta invención proporciona un método para identificar un compuesto químico para la fabricación de un medicamento que es capaz de tratar la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon del Ant ígeno- ' S ' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) que comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, con el compuesto químico bajo condiciones que permitan la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión especifica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar la infección por la cepa viral. Esta invención también proporciona un método para identificar un compuesto químico para la fabricación de un medicamento que es capaz de prevenir la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon del Ant ígeno- ? S' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina), que comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina; con el compuesto químico bajo condiciones que permiten la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión especifica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de prevenir la infección por la cepa viral. Esta invención también proporciona un método para identificar un compuesto químico para la fabricación de un medicamento que es capaz de tratar el carcinoma hepatocelular que comprende: (a) poner en contacto el polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina; con el compuesto químico bajo condiciones que permitan la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión especifica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar la infección por la cepa viral. Esta invención también proporciona un método para identificar un compuesto químico para la fabricación de un medicamento que es capaz de prevenir el carcinoma hepatocelular, que comprende: (a) poner en contacto el polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina; con el compuesto químico bajo condiciones que permitan la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión específica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de prevenir la infección por la cepa viral. Esta invención también proporciona una composición que comprende el compuesto químico identificado por los métodos descritos anteriormente en una cantidad efectiva para tratar o prevenir la infección por la cepa y un portador farmacéuticamente efectivo . Esta invención proporciona una composición que comprende un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, o un derivado de la misma, las cantidades del polipéptido que son efectivas para estimular o intensificar la producción de anticuerpos en un sujeto, y un portador farmacéuticamente aceptable. La cantidad efectiva real se basará en el tamaño, la biodegradabilidad, la bioactividad y la biodisponibilidad del polipéptido. Si el polipéptido no se degrada rápidamente, está biodisponible y altamente activo, se requerirá una pequeña cantidad para ser efectivo. La cantidad efectiva se conocerá por un experto en la técnica; también será dependiente de la forma , el tamaño y la bioactividad del polipéptido. El uso de un adyuvante por ejemplo, disminuirá la cantidad requerida del polipéptido. Un experto en la técnica, realizará por rutina pruebas de actividad empírica para determinar la bioactividad en bioensayos y de esta manera determina la cantidad efectiva . Los portadores farmacéuticamente aceptables son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica e incluyen, pero no se limitan a, amortiguador de fosfato 0.01-0.1 M y de manera preferente 0.05 M o solución salina al 0.8 %. En forma adicional, estos portadores farmacéuticamente aceptables pueden ser soluciones acuosas o no acuosas, suspensiones y emulsiones. Los ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tal como aceite de oliva y esteres orgánicos inyectables tal como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas y/o acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución salina y medios amortiguados. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, aceites fijos o de Ringer lactados. Los vehículos intravenosos incluyen agentes de relleno nutrientes y fluidos, agentes de relleno electrolíticos tal como aquellos basados en dextrosa de Ringer y similares. Los conservadores y otros aditivos también pueden estar presentes, tal como por ejemplo ant i-microbianos , antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares. Esta invención también proporciona una composición que comprende un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 a 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3 o derivado de la misma, dichas cantidades del péptido son efectivas para estimular o intensificar la producción de anticuerpos en un sujeto, y son farmacéuticamente aceptables. Esta invención también proporciona composiciones que comprenden el compuesto químico identificado por los métodos descritos con anterioridad en una cantidad efectiva para tratar o prevenir el carcinoma hepatocelular y un portador farmacéuticamente efectivo. Esta invención también proporciona una composición que comprende el compuesto químico identificado por los métodos descritos anteriormente en una cantidad efectiva para tratar o prevenir la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon del Antigeno- ' S ' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) y un portador farmacéuticamente efectivo. Esta invención proporciona además el uso de las composiciones identificadas anteriormente para tratar un sujeto infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon del Ant ígeno- ' S ' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) . Esta invención también proporciona el uso de las composiciones identificadas anteriormente para prevenir en un sujeto, la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada a Cepa Oon del Antígeno- ' S ' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) . Esta invención también proporciona el uso de las composiciones descritas anteriormente para tratar o prevenir el carcinoma hepatocelular. Esta invención también proporciona un método para seleccionar fluidos corporales de un sujeto para una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Ant ígeno- ' S ' -133 de Superficie del Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) que comprende: (a) obtener una muestra apropiada de fluido corporal del sujeto; (b) determinar la presencia de un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina en la muestra del paso (a), para detectar la muestra para la cepa. De manera específica, en donde el fluido corporal comprende sangre, suero o una muestra de ácido nucleico de sangre o suero. Esta invención proporciona adicionalmente un método para tratar un sujeto infectado con esta cepa viral . Esta invención también proporciona un método para detectar tejidos y fluidos corporales para esta cepa viral. Esta invención proporciona una vacuna de hepatitis, que comprende una forma mutante del antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, y el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia tipo silvestre de aminoácidos del antigeno principal de superficie de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina . Esta invención también proporciona la vacuna descrita con anterioridad, que comprende además un adyuvante . Esta invención se ilustra en la sección de detalles experimentales que sigue. Estas secciones se exponen para ayudar en el entendimiento de la invención, pero no se proponen y no se debe considerar de ningún modo, como limitantes de la invención, como se expone en las reivindicaciones que siguen posteriormente.

DETALLES EXPERIMENTALES En el método descrito a continuación, el virus de hepatitis B humano que tiene la mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie se aisló y se le determinó su secuencia de nucleótidos. Se obtuvo una muestra de suero (5194) de un paciente femenino chino de 63 años de edad y portador del antigeno de superficie. A éste se le confirmó como un paciente con HCC por una biopsia subsecuente. El virus de hepatitis B de su suero tuvo una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) en el antígeno principal de superficie, como se muestra por el análisis previo de secuenciación del epitope "a". El ADN viral se extrajo antes de la determinación de su secuencia en la presente invención. Como se describe en los ejemplos que siguen, el genoma de este virus mutante de hepatitis B de HCC y que tiene mutación en el residuo de aminoácido 133 del antigeno principal de superficie que consiste de 3215 nucleótidos y es idéntico a aquel del virus tipo silvestre del mismo subtipo ( adr) . Los cuadros de lectura abiertos (ORF) que codifican para las proteínas virales principales se encuentran en las posiciones correspondientes cuando se comparan al virus tipo silvestre. La posición 1 en el genoma mutante del virus de hepatitis B se define de acuerdo a aquella en el virus tipo silvestre. La estructura de los diferentes ORF en el genoma mutante de virus humano se reportan aqui y se resumen en la Figura 1. Las ubicaciones se indican como sigue: el gen de ADN-polimerasa inicia en la posición 2307 y termina en la posición 1623, por lo tanto consiste de 2532 nucleótidos y codifica para 843 residuos de aminoácidos; el gen de antigeno de superficie grande inicia la posición 2848 y termina en la posición 835, y consiste por lo tanto de 1203 nucleótidos y codifica para 400 residuos de aminoácidos. Este antígeno de superficie grande traslapa el antígeno intermedio de superficie, que inicia en la posición 3205 y el antigeno principal de superficie que inicia en la posición 155. Tanto los antigenos intermedio (que consiste de 281 residuos de aminoácidos) y principal (que consiste de 226 residuos de aminoácidos) de superficie, terminan en la misma posición como el antígeno de superficie grande; - el gen de núcleo inicia en la posición 1814 y termina en la posición 2452, y consiste por lo tanto de 639 nucleótidos, y codifica para 212 residuos de aminoácidos; y - el gen de t rans-act ivación de X inicia en la posición 1374 y termina en la posición 1838, consiste por lo tanto de 465 nucleótidos y codifica para 154 residuos de aminoácidos. Adicionalmente, el análisis de secuencia ha establecido que este virus mutante de hepatitis B corresponde al subtipo a dr como se indica por un residuo de lisina y un residuo de arginina en las posiciones 122 y 160 respectivamente, en el antígeno principal de superficie. Consistente con el análisis previo del epitope "a" por secuenciación directa, la mutación (de Metionina a Treonina) se encuentra en el residuo de aminoácido 133 del antígeno principal de superficie . En comparación con el virus tipo silvestre de hepatitis B depositado en la base de datos del Genbank (número de acceso D16665), la identidad de esta cepa viral de hepatitis B tiene al menos el 90.3 % de la secuencia de nucleótidos. La identidad de diferentes proteínas virales del presente virus mutante de hepatitis B cuando se compara con su contraparte el virus tipo silvestre, es del 95.8 %, 97.5 %, 95.1 % y 94.8 % de las proteínas de ADN-polimerasa (PIR.- Recursos de Identificación de Proteína; número de acceso S43491), del antígeno de superficie grande (PIR; número de acceso JQ2107), del núcleo (PIR; número de acceso S43490), y de la transactivación X (PIR; número de acceso S35529), respectivamente. De forma inversa, están presentes numerosas substituciones de aminoácidos en cada una de las proteínas virales cuando se compara a sus contrapartes tipo silvestre, estos incluyen: 5 mutaciones en la proteina de ADN-polimerasa , 5 en la proteína de antígeno de superficie grande (incluyendo el cambio de Metionina a Treonina para el codón de iniciación para el antigeno principal de superficie), 5 en el núcleo y 4 en la trans-act ivación X. El genoma del virus de hepatitis B humana en la presente invención, aislado de HCC y que tiene la mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie, se puede usar como material para diseñar oligonucleótidos específicos del genoma del virus mutante. Estos oligonucleótidos se pueden usar como material para agentes de diagnóstico altamente específicos, que detectan el virus derivado de HCC que tienen una mutación en el residuo de aminoácido 133 del antígeno principal de superficie. El genoma de virus de hepatitis B humana en la presente invención, con una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie, se puede usar como material para producir proteínas de la invención al expresar un vector que tiene la región de codificación pertinente, y que puede replicarse en una célula hospedadora tal como Es cheri ch i a col i por tecnología recombinante de ADN normal. Las proteínas de la presente invención son útiles como material para agentes de diagnóstico altamente específicos capaces de detectar el virus de hepatitis B a partir de HCC, que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie. Usando métodos conocidos, se pueden usar estas mismas proteínas para producir anticuerpos policlonales y monoclonales . Los anticuerpos policlonales y monoclonales se pueden usar como material para agentes de diagnóstico, para detectar antígenos de alta especificidad de virus de hepatitis B, a partir de HCC, con una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie . Un sistema de detección que utiliza cada proteina de la presente invención o proteínas con reemplazo parcial de aminoácidos y un sistema de detección que usa anticuerpos policlonales o monoclonales a estas proteínas es útil como agentes de diagnóstico altamente específicos capaces de detectar el virus de hepatitis B humana de HCC para detectar este virus en pacientes quienes son portadores del antigeno de superficie de hepatitis B, quienes pueden posteriormente estar en riesgo de desarrollar HCC. Las proteínas o anticuerpos de estas proteínas se pueden usar como un material para el desarrollo de vacunas profilácticas y terapéuticas contra esta cepa viral. Es bien conocido que uno o más nucleótidos en una secuencia de ADN se puede sustituir por otros nucleótidos para producir la misma proteína. La presente invención también se refiere a estos cambios de nucleótidos que codifican para proteínas reportadas en esta invención. Es igualmente conocido que uno o más aminoácidos en una secuencia de proteina se pueden reemplazar por otros aminoácidos análogos, como se define por sus propiedades hidrófilas o cargas hidrófilas, para producir un análogo de la secuencia de aminoácidos. Cualquiera de los análogos de las proteínas de la presente invención que comprendan reemplazo, supresiones de aminoácidos, isoésteres (aminoácidos modificados que tienen similitud estructural y espacial cercana a los aminoácidos de proteína), o adiciones, se pueden utilizar, con la condición de que las secuencias resultantes produzcan anticuerpos que reconozcan el virus de hepatitis B de HCC con una mutación en la mutación 133 de aminoácidos (Metionina a Treonina) el antígeno principal de superficie. ejemplos La secuencia de nucleótidos y la secuencia deducida de aminoácidos del virus de hepatitis B humana, aislada de HCC que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) el antigeno principal de superficie, se determinaron de la siguiente manera: 1. Aislamiento de ADN viral El ADN viral se aisló de una muestra de suero (5194) obtenida de un paciente femenino chino de 63 años de edad, portador de antígeno de superficie. Se le confirmó como una paciente con HCC por biopsia. El virus de hepatitis B de su suero tenía una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) en el antigeno principal de superficie, como se muestra por el análisis previo de secuenciación del epítope "a".

El método de aislamiento fue: Se adicionaron 200 µl de la muestra de suero con 400 µl del amortiguador de lisis (Tris-cloruro 10 mM, pH 7.4, EDTA 1 mM y dodecil-sulfato de sodio 2 %) y 25 µl de proteinasa K (20 mg/ml), se incubó a 65°C durante 3 horas. Luego se extrajo el ADN viral por fenol /cloroformo y se precipitó por etanol. 2. Amplificación de ADN viral por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) El genoma de virus en la presente invención se amplificó por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) usando 3 conjuntos de oligonucleótidos de traslape, que se designaron de acuerdo al virus tipo silvestre de hepatitis B. Los varios sitios de enzimas de restricción se incluyeron para facilitar la clonación de los productos de PCR. La posición de estos oligonucleótidos se indica en la Figura 2 y se indica como sigue: - Indicador 1 (ATAAGCTTATGCCCCTATCTTATCAACACTTCCGGA) (SEQ ID NO: 6) comienza en el sitio de iniciación de la región de codificación de la ADN-polimerasa , en la posición 2307 de la secuencia de nucleótidos viral y corresponde a la hebra de codificación (oligonucleótido homosentido) . Se subraya un sitio adicional de la enzima de restricción HindIII; -Xba3 (GAGTCTAGACTCTGCGGTATTGTGA) (SEQ ID NO: 7) comienza en el sitio interno Xbal de enzima de restricción, en la posición 250 de la secuencia de nucleótidos viral y corresponde a la hebra complementaria (oligonucleótido anti-sentido) . Está subrayado un sitio adicional de enzima de restricción Xbal; -Xba5 (GAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCT) (SEQ ID NO: 8) comienza en el sitio interno Xbal, en la misma ubicación como aquella del oligonucleótido Xba3 pero corresponde a la hebra de purificación (oligonucleótido homosentido) . Está subrayado un sitio adicional de enzima de restricción Xbal; - Común 3 (TGAGAATTCTCACGGTGGTCTCCATGCGACGT ) (SEQ ID NO: 9) inicia en el codón finalizador de la ADN- polimerasa, en la posición 1623 de la secuencia viral de nucleótidos y corresponde a la hebra complementaria (oligonucleótido anti-sentido). Esta subrayado un sitio adicional de enzima de restricción EcoRI; -Vil (TTTGTTTACGTCCCGT (SEQ ID NO: 10) comienza cerca del sitio de iniciación del gen X, en la posición 1420 de la secuencia de nucleótidos viral y corresponde a la hebra de codificación (oligonucleótido homosentido); -HÍndIIIADW3 (CTAAGCTTAGTTTCCGGAAGTGTTGAT ) (SEQ ID NO: 11) comienza cerca del sitio de iniciación del ADN-polimerasa, en la posición 2340 y corresponde a la hebra complementaria (oligonucleótido antisentido) . Está subrayado un sitio adicional de enzima de restricción Hind III.

Usando el ADN como plantilla, entonces se llevó a cabo la PCR en un Ciclador Térmico de ADN (DNA Thermal Cycler (Perkin-Elmer, Cetus) ) durante 35 ciclos usando Pfu-polimerasa (Stratagene, E.U.A.), cada ciclo que consiste de 1.5 minutos a una temperatura de desnaturalización de 94°C, 2 minutos a una temperatura de fijación de 53°C y 4 minutos a una temperatura de extensión de 72°C. Se usaron las siguientes combinaciones de oligonucleótidos: Flagl/Xba3, Xba5/Common3 y Vil /HindI I IAD E, y los productos de amplificación generados de 1.2 kb, 1.4 kb y 1.1 kb, respectivamente. 3. Clonación de los fragmentos de ADN viral amplificados . El fragmento de ADN amplificado de Flagl/Xba3 (1.2 kb) se sometió a una digestión con enzimas de restricción por HindIII y Xbal, antes de la clonación en un plásmido BlueScript pre-tratado por las mismas enzimas de restricción. La digestión similar con Xbal y EcoRI se aplicó al producto de PCR de Xba5 /Common3 , antes de la clonación en un plásmido BlueScript pre-tratado por Xbal y EcoRI . Por otra parte, el fragmento de ADN amplificado con Vil y HindIIIAD 3 (1.1 kb ) se clonó directamente en un plásmido ZeroBlunt, desarrollado por InvitroGen (E.U.A.) para la clonación de fragmentos de ADN de extremos romos. 4. Determinación de la secuencia de nucleótidos Se determinó la secuencia de nucleótidos del virus de hepatitis B humana aislado de HCC y se reportó en la presente invención en la plantilla de ADN de plásmido por inhibidores que terminan la cadena, usando el equipo de secuenciación de ADN (Sequenase DNA Sequencing Kit (United States Biochemical Corp.)). Para facilitar el procedimiento de secuenciación, se diseñaron varios oligonucleótidos internos (de VI a Vlß), de acuerdo al virus de hepatitis B tipo silvestre, y sus posiciones se indican en la Figura 2. A partir del análisis descrito anteriormente, se determinó como se muestra en la Figura 3 la secuencia de nucleótidos de longitud completa del virus de hepatitis B, aislada de HCC y que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie. Las secuencias deducidas de aminoácidos que codifican para las proteínas virales principales se muestran en las Figuras 4-7: ADN-polimerasa viral de hepatitis B (Figura 4), antígeno de superficie grande, incluyendo el antígeno intermedio y principal de superficie (Figura 5), la proteína de núcleo (Figura 6) y la proteína de t rans-act ivación X (Figura 7) . La alineación de la secuencia de virus en la presente invención con otras secuencias virales de hepatitis B, disponibles en la base de datos del Genbank, señalará diferencias de secuencia específicas que a su vez se pueden usar para diseñar sondas de ADN. Entonces se puede desarrollar de este modo un sistema de detección que usa la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Estas reacciones de PCR comprenderán combinaciones de oligonucleótidos específicos al virus de hepatitis B humana en la presente invención, con una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie, permitiendo de este modo una detección altamente específica de ADN viral. De manera breve, el ADN viral se puede extraer como se describe en esta invención. La reacción de PCR se puede realizar usando oligonucleótidos específicos usando condiciones de cíclicas similares descritas anteriormente. Los resultados se pueden analizar entonces después de separar los productos de PCR en un gel de agarosa al 1 % . De acuerdo con procedimientos inmunológicos conocidos, es posible determinar los epítopes de secuencias de proteína como aquellas en las Figuras 4-7. La determinación de estos epitopes específicos al virus de hepatitis B humana, de HCC y que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie, permitirán la síntesis de péptidos usando métodos de ingeniería genética conocidos, síntesis de proteínas, producción de anticuerpos específicos a estos epítopes, desarrollo de reactivos específicos de diagnóstico, desarrollo de vacunas terapéuticas y profilácticas y agentes antivirales. Un sistema de detección para el anticuerpo contra el virus de hepatitis B aislado de HCC y que tiene una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie, se puede desarrollar usando placas de microtitulo de polivinilo y el método de intercalación. De manera breve, 50 µl de 5 µg/ml de concentración de un péptido del virus de hepatitis B en la presente invención, aislado de HCC y que tiene una mutación del residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antigeno principal de superficie, se puede distribuir en cada cavidad en las placas de microtítulo que se incuba durante la noche a temperatura ambiente para la consolidación. Se puede aplicar un procedimiento similar a una proteina purificada de células hospedadoras tal como Escheri chi a col i . Las cavidades de la microplaca se pueden lavar cinco veces con solución salina fisiológica que contiene Tween 20 al 0.05 %. Para el revestimiento, se pueden distribuir en cada cavidad 100 µl de amortiguador de NaCl que contiene 30 % de (v/v) de suero de becerro y Tween 20 al 0.05 % (amortiguador CS) y se descargan después de la incubación durante 30 minutos a temperatura ambiente. Para determinar los anticuerpos específicos para el virus de hepatitis B mutante (Metionina a Treonina) en el residuo de aminoácido 133 del antigeno principal de superficie, la reacción primaria se puede llevar a cabo de tal manera que 50 µl del amortiguador CS y 10 µl de una muestra de suero se puedan distribuir en cada cavidad de microplaca y se incuben en un vibrador de microplaca durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la terminación de la reacción primaria, se lavan las cavidades de microplaca cinco veces como se describe anteriormente . En la reacción secundaria, 1 ng de anticuerpos monoclonales de ratón anti-IgG humana, marcados con peroxidasa de rábano, disueltos en 50 µl de suero de becerro se pueden distribuir en cada cavidad de microplaca y se incuban en un vibrador de microplaca durante una hora a temperatura ambiente. Al término, se pueden lavar las cavidades cinco veces de la misma manera. Después de la adición del peróxido de hidrógeno (como un substrato) y 50 µl de solución de 0-fenilendiamina (como revelador de color) en cada cavidad, y después de la incubación durante 30 minutos a temperatura ambiente, se pueden distribuir 50 µl de solución de ácido sulfúrico 4 M en cada cavidad para detener el desarrollo de color adicional y para leer la absorbancia 490 nm. La presente invención hace posible la detección del virus mutante de hepatitis B humana, en particular aquellos que tienen una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie. La presente invención también proporciona sistemas de detección capaces de una detección altamente específica y sensible en una etapa temprana de detección o desarrollo de HCC cuando el HCC se puede tratar y curar . Además, estas características permiten la diagnosis exacta de pacientes en una etapa temprana del HCC y también ayudan a inhibir el virus de hepatitis B, mutante de forma más eficiente. Las proteínas y sus anticuerpos de acuerdo con la presente invención se pueden utilizar para el desarrollo de vacunas profilácticas y terapéuticas, asi como, productos farmacéuticos inmunológicos . La información de secuencia de los genes estructurales de estos virus mutantes serán útiles para el desarrollo de sistemas de detección de los antigenos de proteina pertinentes y anticuerpos. Se pueden detectar por métodos conocidos los complejos antigeno-anticuerpo. Los anticuerpos monoclonales y policlonales específicos pueden surgir al inmunizar animales tal como ratones y conejos con péptidos ó proteínas específicas para virus mutante de hepatitis B a partir de HCC. Los agentes antivirales inhibitorios se pueden diseñar y dirigir contra estas proteínas y moléculas en cultivo celular o in vivo . La presente invención se basa en estudios del genoma de virus de hepatitis B humana aislado de HCC, que tienen una mutación en el residuo de aminoácido 133 (Metionina a Treonina) del antígeno principal de superficie. La invención hace posible la detección altamente específica de estos virus mutantes de hepatitis B a partir de HCC, y proporciona materia tal como proteína, anticuerpos policlonales y monoclonales para el desarrollo de estos sistemas de detección.

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LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) TITULO DE LA INVENCIÓN: UNA CEPA VIRAL DE HEPATITIS B HUMANA, MUTANTE Y USOS DE LA MISMA (ii) NUMERO DE SECUENCIAS: 11 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:l: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 3215 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: doble (D) TOPOLOGÍA: circular (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SEQ. ID No:l: CTCCACAACA TTCCACCAAG CTCTGC AGA TCCCAGGGTG AGGGGCCTAT ATTTTCCTGC 60 TGGTGGCTCC AGTTCCGGAA CAGTAAACCC TGTTCCGACT ACTGCCTCTC CCATATCGTC 120 AATCTTCTCG AGGACTGGGG ACCCTGCACC GAACATGGAG AACACAACAT CAGGATTCCT 180 AGGACCCCTG CTCGTGTTAC AGGCGGGGTT TTTCTCGTTG ACAAGAATCC TCACAATACC 240 GCAGAGTCTA GACTC GGTG GACTTCTCTC AATTTTCTAG GGGGAGCACC CACGTGTTCC 300 TGGCCAAAAT TCGCAGTCCC CAACCTCCAA TCACTCACCA ACCTCTTGTC CTCCAATTTG 360 TCCTGGCTAT CGCTGGATGT GTCTGCGGCG T?TATCATA TTCCTCTTCA TCCTGCTGCT 420 ATGCCTCATC T C TGTTGG TTCTTCTGGA CTACCAAGGT ATGTTGCCCG TTTGTCCTCT 480 ACTTCCAGGA ACATCAACCA CCAGCACGGG GCCATGCAAG ACCTGCACGA CTCCTGCTCA 540 AGGAAACTCT ACGTTTCCCT CTTGTTGCTG TACAAAACCT TCGGACGGAA ACTGCACTTG 600 TATTCCCATC CCATCATCCT GGGCTTTCGC AAGATTCCTA TGGGAGTGGG CCTCAGTCCG 660 TTTCTCCTGG CTCAGTTTAC TAGTGCCATT TGTTCAGTGG TTCGTAGGGC TTTCCCCCAC 720 TGTTTGGCTT TCAGTTATAT GGATGATGTG GTATTGGGGG CGAAGTCTGT ACAACATCTT 780 GAGTCCCTTT TTACCTCTAT TACCAATTTT CTTTTGTCTT TGGGTATACA TTTAAACCCT 840 AATAAAACCA AACGTTGGGG CTACTCCCTT AACTTCATGG GATATGTAAT TGGAAGTTGG 900 GGTACTTTAC CGCAGGAACA TATTGTACTA AAACTCAAGC AATGTTTTCG AAAACTGCCT 960 GTAAATAGAC CTATTGATTG GAAAGTATGT CAAAGAATTG TGGGTCTTTT GGGCTTTGCT 1020 GCCCCTTTTA CACAATGTGG CTATCCTGCC TTGATGCCTT TATATGCATG TATACAATCT 1080 AAGCAGGCTT TCACTTTCTC GCCAACTTAC AAGGCCTTTC TGTGTAAACA ATATCTGAAC 1140 CTTTACCCCG TTGCCCGGCA ACGGTCCGGT CTCTGCCAAG TGTTTGCTGA CGCAACCCCC 1200 ACTGGATGGG GCTTGGCCAT AGGCCATCAG CGCATGGCTG GAACCTTTCT GGCTCCTCTG 1260 CCGATCCATA CTGCGGAACT CCTAGCAGCT TGTTTTGCTC GCAGCCGGTC TGGAGCAAAA 1320 CTTATCGGAA CCGACAACTC TGTTGTCCTC TCTCGOAAAT ACACCTCCTT TCCATGGCTG 1380 CTAGGGTGTG CTGCCAACTG GATCCTGCGC GGGACGTCCT TTGTCTACGT CCCGTCGGCG 1440 CTGAATCCCG CGGACGACCC GTCTCGGGGC CGTTTGGGGC TCTACCGTCC CCTTCTTCAT 1500 CTGCCGTTCC GGCCGACCAC GGGGCGCACC TCTCTTTACG CGGTCTCCCC GTATGTGCCT 1560 TCTCATCTGC CGGACCGTGT GCACTTCGCT TCACCTCTGC ACGTCGCATG GAGACCACCG 1620 TGAACGCACG CCAGGTCTTG CCCAAGGTCT TATATAAGAG GACTCTTGßA CTCTCAGCAA 1680 TGTCAACGAC CGACCTTGAG GCATACTTCA AAGACTGTGT GTTTAAAGAC TGGGAGGAGT 1740 TGGGGGAGGA GATTAGGTTA AAGATTTATG TACTAGGAGG CTGTAGGCAT AAATTGGTCT 1800 GTTCACCAGC ACCATGCAAC TTTTTCTCCT CTGCCTAATC ATCTCATGTT CATGTCCTAC 1860 TGTTCAAGCC TCCAAGCTGT GCCTTGGGTG GCTTTOGGAC ATGGACATTG ACCCGTATAA 1920 AGAATTTGGA GCATCTGCTG AGTTACTCTC TTTTTTGCCT TCTGACTTCT TTCCGTCTAT 1980 TCGAGATCTC CTCGACACCG CCTCTGCTCT GTATCGGGAG GCCTTAGAGT CTCCGGAACA 2040 TTGTTCGCCT CACCATACAG CACTCAGGCA AGCTATTTTG TGTTGGGGTG AGTTGATGAA 2100 TCTGGCCACC TGGGTGGGAA GTAATTTGGA AGATCCAGCA TCCAGGGAAT TAGTAGTCAG 2160 CTATGTCAAC GTTAATATGG GCCTAAAACT CAGACAAATA TTGTGGTTTC ACATTTCCTG 2220 TCTTACTTTT GGAAGAGAAA CTGTTCTTGA GTACTTGGTA TCTTTTGGAG TGTGGATTCG 2280 CACTCCTACC GCTTACAGAC CACCAAATGC CCCTATCTTA TCAACACTTC CGGAAACTAC 2340 TGTTGTTAGA CGACGAGGCA GGTCCCCTAG AAGAAGAACT CCCTCGCCTC GCAGACGAAG 2400 GTCTCAATCG CCGCGTCGCA GAAGATCTCA ATCTCGGGAA TCTCAACGTT AGTATTCCTT 2460 GGACTCATAA GGTGGGAAAC TTTACTGGGC TTTATTCTTC TACTGTACCT GTCTTTAATC 2520 CCGAGTGGCA AATTCCTTCC TTTCCTCACA TTCATTTACA AGAGGACATT ATTAATAGAT 2580 GTCAACAATA TGTGGGCCCT CTTACAGTTA ATGAAAAAAß AAGATTAAAA TTAATTATGC 2640 CTGCTAGGTT TTATCCTAAC CTTACTAAAT ATTTGCCCTT AGACAAAGGC ATTAAACCGT 2700 ATTATCCTGA ACATGCAGTT AATCATTACT TCAAAACTAG GCATTATTTA CATACTCTGT 2760 GGAAGGCTGG CATTCTATAT AAGAGAGAAA CTACACGCAG CGCCTCATTT TGTGGGTCAC 2820 CATATTCTTG GGAACAAGAG CTACAGCATG GGAGGTTGGT CTTCCAAACC TCGACAAGGC 2880 ATGGGGAGCA ATCTTGCTGT TCCCAATCCT CTGGGATTCT TTCCCGATCA CCAGTTGGAC 2940 CCTGCGTTCG GAGCCAACTC AAACAATCCA GATTGGGACT TCAACCCCAA CAAGGATCAC 3000 TGGCCAGAGG CAAATCAGGT AGGAGTGGGA GCATTCGGGC CAGGGTTCAC CCCACCACAC 3060 GGCGGTCTTT TGGGGGGGAG CCCTCAGGCT CAGGGCATAT TGACAACAGT GCCAGCAGCA 3120 CCTCCTCCTG CCTCCACCAA TCGGCAGTCA GGAAGACAGC CTACTCCCAT CTCTCCACCT 3180 CTAAGAGACA GTCATCCTCA GGCCACGCAG TGGAA 3215 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 2 : (Figura 4) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 843 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No:2 : Met Pro Leu Ser Tyr Gln His Phe Arg Lys Leu Leu Leu Leu Asp Asp 1 5 10 15 Glu Ala Gly Pro Leu Glu Glu Glu Leu Pro Arg Leu Ala Asp Glu Gly 20 25 30 Leu Asn Arg Arg Val Ala Glu Asp Leu Asn Leu Gly Asn Leu Asn Val 35 40 45 Ser lie Pro Trp Thr His Lys Val Gly Asn Phe Thr Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Ser Thr Val Pro Val Phe Asn Pro Glu Trp Gln lie Pro Ser Phe Pro 65 70 75 80 His lie His Leu Gln Glu Asp lie lie Asn Arg Cys Gln Gln Tyr Val 85 90 95 Gly Pro Leu Thr Val Asn Glu Lys Arg Arg Leu Lys Leu lie Met Pro 100 105 110" Ala Arg Phe Tyr Pro Asn Leu Thr Lys Tyr Leu Pro Leu Asp Lys Gly 115 120 125 lie Lys Pro Tyr Tyr Pro Glu His Ala Val Asn His Tyr Phe Lys Thr 130 135 140 Arg His Tyr Leu His Thr Leu Trp Lys Ala Gly lie Leu Tyr Lys Arg 145 150 155 160 Glu Thr Thr Arg Ser Ala Ser Phe Cys Gly Ser Pro Tyr Ser Trp Glu 165 170 1 5 Gln Glu Leu Gln His Gly Arg Leu Val Phe Gln Thr Ser Thr Arg His 180 185 190 Gly Asp Glu Ser Cys Cys Ser Gln Ser Ser Gly He Leu Ser Arg Ser 195 200 205 Pro Val Gly Pro Cys Val Arg Ser Gln Leu Lys Gln Ser Arg Leu Gly 210 215 220 Leu Gln Pro Gln Gln Gly Ser Leu Ala Arg Gly Lys Ser Gly Arg Ser 225 230 235 240 Gly Ser He Arg Ala Arg Val His Pro Thr Thr Arg Arg Ser Phe Gly 245 250 255 Gly Glu Pro Ser Gly Ser Gly His He Asp Asn Ser Ala Ser Ser Thr 260 265 270 Ser Ser Cys Leu His Gln Ser Ala Val Arg Lys Thr Ala Tyr Ser His 275 280 285 Leu Ser Thr Ser Lys Arg Gln Ser Ser Ser Gly His Ala Val Glu Leu 290 295 300 His Asn He Pro Pro Ser Ser Ala Arg Ser Gln Gly Glu Gly Pro He 305 310 315 320 Phe Ser Cys Trp Trp Leu Gln Phe Arg Asn Ser Lys Pro Cys Ser Asp 325 330 335 Tyr Cys Leu Ser His He Val Asn Leu Leu Glu Asp Trp Gly Pro Cys 340 345 350 Thr Glu His Gly Glu His Asn He Arg He Pro Arg Thr Pro Ala Arg 355 360 365 Val Thr Gly Gly Val Phe Leu Val Asp Lys Asn Pro His Asn Thr Ala 370 375 380 Glu Ser Arg Leu Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ala Pro 385 390 395 400 Thr Cys Ser Trp Pro Lys Phe Ala Val Pro Asn Leu Gln Ser Leu Thr 405 410 "415 .Asn Leu Leu Ser Ser Asn Leu Ser Trp Leu Ser Leu Asp Val Ser Ala 420 425 430 Ala Phe Tyr His He Pro Leu His Pro Ala Ala Met Pro His Leu Leu 435 440 445 Val Gly Ser Ser Gly Leu Pro Arg Tyr Val Ala Arg Leu Ser Ser Thr 450 455 460 Ser Arg Asn He Asn His Gln His Gly Ala Met ßln Asp Leu His Asp 465 470 475 480 Ser Cys Ser Arg Lys Leu Tyr Val Ser Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Thr 485 490 495 Phe Gly Arg Lys Leu His Leu Tyr Ser His Pro He He Leu Gly Phe 500 505 510 Arg Lys He Pro Met Gly Val Gly Leu Ser Pro Phe Leu Leu Ala Gln 515 520 525 Phe Thr Ser Ala He Cys Ser Val Val Arg Arg Ala Phe Pro His Cys 530 535 540 Leu Ala Phe Ser Tyr Met Asp Asp Val Val Leu Gly Ala Lys Ser Val 545 550 555 560 Gln His Leu Glu Ser Leu Phe Thr Ser He Thr Asn Phe Leu Leu Ser 565 570 575 Leu Gly He His Leu Asn Pro Asn Lys Thr Lys Arg Trp Gly Tyr Ser 580 585 590 Leu Asn Phe Met Gly Tyr Val He Gly Ser Trp Gly Thr Leu Pro Gln 595 600 605 Glu His He Val Leu Lys Leu Lys Gln Cys Phe Arg Lys Leu Pro Val 610 615 620 Asn Arg Pro He Asp Trp Lys Val Cys Gln Arg He Val Gly Leu Leu 625 630 635 640 Gly Phe Ala Ala Pro Phe Thr Gln Cys Gly Tyr Pro Ala Leu Met Pro 645 650 655 Leu Tyr Ala Cys He Gln Ser Lys Gln Ala Phe Thr Phe Ser Pro Thr 660 665 670 Tyr Lys Ala Phe Leu Cys Lys Gln Tyr Leu Asn Leu Tyr Pro Val Ala 675 680 685 Arg Gln Arg Ser Gly Leu Cys Gln Val Phe Ala Asp Ala Thr Pro Thr 690 695 700 Gly Trp Gly Leu Ala He Gly His Gln Arg Met Ala Gly Thr Phe Leu 705 710 715 " 720 Ala Pro Leu Pro He His Thr Ala Glu Leu Leu Ala Ala Cys Phe Ala 725 730 735 Arg Ser Arg Ser Gly Ala Lys Leu He Gly Thr Asp Asn Ser Val Val 740 745 750 Leu Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Phe Pro Trp Leu Leu Gly Cys Ala Ala 755 760 765 Asn Trp He Leu Arg Gly Thr Ser Phe Val Tyr Val Pro Ser Ala Leu 770 775 780 Asn Pro Ala Asp Asp Pro Ser Arg Gly Arg Leu Gly Leu Tyr Arg Pro 785 790 795 800 Leu Leu His Leu Pro Phe Arg Pro Thr Thr Gly Arg Thr Ser Leu Tyr 805 810 815 Ala Val Ser Pro Tyr Val Pro Ser His Leu Pro Asp Arg Val His Phe 820 825 830 Ala Ser Pro Leu His Val Ala Trp Arg Pro Pro 835 840 (2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 3 (Figura 5) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 400 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No: 3 Met Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Gln Gly Met Gly Thr Asn Leu 1 5 10 15 Ala Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro 20 25 30 Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Asn 35 40 45 Lys Asp His Trp Pro Glu Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly 50 55 60 Pro Gly Phe Thr Pro Pro His Gly Gly Leu Leu Gly Gly Ser Pro Gln 65 70 75 80 Ala Gln Gly He Leu Thr Thr Val Pro Ala Ala Pro Pro Pro Ala Ser 85 90 95 Thr Asn Arg Gln Ser Gly Arg Glp Pro Thr Pro He Ser Pro Pro Leu 100 105 110 Arg Asp Ser His Pro Gln Ala Thr Gln Trp Asn Ser Thr Thr Phe His 115 120 125 Gln Ala Leu Leu Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly 130 135 140 Gly Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Val Pro Thr Thr Ala Ser Pro 145 150 155 160 He Ser Ser He Phe Ser Arg Thr Gly Asp Pro Ala Pro Asn Met Glu 165 170 175 Asn Thr Thr Ser Gly Phe Leu Gly Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly 180 185 190 Phe Phe Ser Leu Thr Arg He Leu Thr He Pro Gln Ser Leu Asp Ser 195 200 205 Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu Gly Gly Ala Pro Thr Cys Pro Gly 210 215 220 Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro 225 230 235 240 Pro He Cys Pro Gly Tyr Arg Trp Asn Cys Leu Arg Arg Phe He He 245 250 255 Phe Leu Phe He Leu Leu Leu Cys Leu He Phe Leu Leu Val Leu Leu 260 265 270 Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val Cys Pro Leu Leu Pro Gly Thr Ser 275 280 285 Thr Thr Ser Thr Gly Pro Cys Lys Thr Cys Thr Thr Pro J .a Gln Gly 290 295 300 Asn Ser Thr Phe Pro Ser Cys Cys Cys Thr Lys Pro Ser Asp Gly Asn 305 310 315 320 Cys Thr Cys He Pro He Pro Ser Ser Trp Ala Phe Ala Arg Phe Leu 325 330 335 Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro 340 345 350 Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Val 355 360 365 He Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly Arg Ser Leu Tyr Asn He Leu Ser 370 375 380 Pro Phe Leu Pro Leu Leu Pro He Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr He 385 390 395 400 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 4: (Figura 6; (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 212 aminoácidos (B) TIPO: aminoácidos (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID o: 4 : Met Gln Leu Phe Leu Leu Cys Leu He He Ser Cys Ser Cys Pro Thr 1 5 10 15 Val Gln Ala Ser Lys Leu Cys Leu ßly Trp Leu Trp Asp Mee Asp He 20 25 30 Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Ser Ala Glu Leu Leu Ser Phe Leu 35 40 45 Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser He Arg Asp Leu Leu Asp Thr Ala Ser 50 55 60 Ala Leu Tyr Arg Glu Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys Ser Pro His 65 70 75 80 His Thr Ala Leu Arg Gln Ala He Leu Cys Trp Gly Glu Leu Met Asn 85 90 95 Leu Ala Thr Trp Val Gly Ser Asn Leu Glu Asp Pro Ala Ser Arg Glu 100 105 110 Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Val Asn Met Gly Leu Lys Leu Arg ßln 115 120 125 He Leu Trp Phe His He Ser Cys Leu Thr Phe Gly Arg Glu Thr Val 130 135 140 Leu Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly val Trp He Arg Thr Pro Thr Ala 145 150 155 160 Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro He Leu Ser Thr Leu Pro Glu Thr Thr 165 170 175 Val Val Arg Arg Arg Gly Arg Ser Pro Arg Arg Arg Thr Pro Ser Pro 180 185 190 Arg Arg Arg Arg Ser Gln Ser Pro Arg Arg Arg Arg Ser Gln Ser Arg 195 200 205 Glu Ser Gln Arg 210 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 5: (Figura 7) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 154 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID : 5 Met Ala Ala Arg Val Cys Cys Gln Leu Asp Pro Ala Arg Asp Val Leu 1 5 10 15 Cys Leu Arg Pro Val Gly Ala Glu Ser Arg Gly Arg Pro Val Ser Gly 20 25 30 Pro Phe Gly Ala Leu Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ala Val Pro Ala Asp 35 40 45 His Gly Ala His Leu Ser Leu Arg Gly Leu Pro Val Cys Ala Phe Ser 50 55 60 Ser Ala Gly Pro Cys Ala Leu Arg Phe Thr Ser Ala Arg Arg Met Glu 65 70 75 80 Thr Thr Val Asn Ala Arg Gln Val Leu Pro Lys Val Leu Tyr Lys Arg 85 90 95 Thr Leu Gly Leu Ser Ala Met Ser Thr Thr Asp Leu Glu Ala Tyr Phe 100 105 110 Lys Asp Cys Val Phe Lys Asp Trp Glu Glu Leu Gly Glu Glu He Arg 115 120 125 Leu Lys He Tyr Val Leu Gly Gly Cys Arg His Lys Leu Val Cys Ser 130 135 140 Pro Ala Pro Cys Asn Phe Phe Ser Ser Ala 145 150 ) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 6: (Figura 8) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 36 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal : ? ) DE S C R I PC I ÓN PARA LA S EC U ENC IA : S EQ . I D o : 6 ATAAGCTTAT GCCCCTATCT TATCAACAC TCCGGA 36 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO : 7 : (Figura 9) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 25 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No: 7 : GAGTCTAGAC TCTGCGGTAT TGTGA 25 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 8: (Figura 10) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 25 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No: 8 GAGTCTAGAC TCGTGGTGGA CTTCT 25 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 9: (Figura 11) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 32 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No: 9: TGAGAATTCT CACGGTGGTC TCCATGCGAC GT 32 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 10: (Figura 12) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 16 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID No: 10: TTTGTTTACG TCCCGT 16 2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO: 11: (Figura 13) (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 36 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE HEBRA: sencilla (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN PARA LA SECUENCIA: SEQ. ID o: 11: ATAAGCTTAT GCCCCTATCT TATCAACACT TCCGGA 36

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES : 1. Una cepa aislada del virus de hepatitis B designada Cepa Oon del Antígeno- ? S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (metionina a treonina) y depositada el 15 de diciembre de 1997 bajo los números de acceso P97121504, P97121505 y P97121506 con la Colección Europea de Cultivo de células . 2. Un ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa del virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina en lugar de una metionina . 3. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 2, en donde el polipéptido se está codificando por los nucleótidos 155 hasta 835 de la secuencia de ácido nucleico designada SEQ ID No 1. 4. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 3, que comprende los nucleótidos "ACG" en la posición 551-553. 5. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 2, en donde el ácido nucleico es ADN. 6. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 2, en donde el ácido nucleico es ARN. 7. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 5, en donde el ácido nucleico es ADNc. 8. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 5, en donde el ácido nucleico es ADN genómico . 9. El ácido nucleico aislado según la reivindicación 2, en donde el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a los residuos de aminoácidos 174 hasta 400 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. 10. Un ácido nucleico aislado que codifica para un péptido, en donde el péptido se codifica por una molécula de ácido nucleico que comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID NO: 1. 11. Un ácido nucleico aislado que codifica para un péptido, en donde el péptido tienen una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. 12. Un vector que comprende un ácido nucleico aislado que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa del virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 de este polipéptido es una treonina en lugar de una metionina y está enlazado operativamente a un promotor de trascripción de ARN. 13. Un vector que comprende un ácido nucleico aislado que codifica para un péptido, en donde el péptido se codifica por una molécula de ácido nucleico que comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID No 1. 14. El vector según la reivindicación 12 o 13, en donde el vector comprende ADN viral. 15. Un sistema vector hospedador para la producción de un polipéptido que comprende el vector de la reivindicación 12 en un hospedador adecuado. 16. Un sistema vector hospedador para la producción de un péptido que comprende el vector de la reivindicación 13 en un hospedador adecuado. 17. Un método para producir un polipéptido, que comprende cultivar el sistema vector hospedador de la reivindicación 15 bajo condiciones adecuadas que permita la producción del polipéptido y recuperar el polipéptido producido de este modo. 18. Un método para producir un péptido, que comprende cultivar el sistema vector hospedador de la reivindicación 16 bajo condiciones adecuadas que permitan la producción del polipéptido y recuperar el polipéptido producido de esta manera. 19. Un método para obtener un polipéptido en forma purificada que comprende: (a) introducir el vector de la reivindicación 12 en una célula hospedadora adecuada; (b) cultivar la célula hospedadora resultante para producir el polipéptido; (c) recuperar el polipéptido producido en el paso (b) ; y (d) purificar el polipéptido recuperado de este modo. 20. Un método para obtener un péptido en forma purificada que comprende: (a) introducir el vector de la reivindicación 13 en una célula hospedadora adecuada; (b) cultivar la célula hospedadora resultante para producir el polipéptido; (c) recuperar el polipéptido producido en el paso (b) ; y (d) purificar el polipéptido recuperado de esta manera . 21. Un polipéptido purificado que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos, que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina en lugar de una metionina . 22. Un polipéptido purificado obtenido a partir del método de la reivindicación 19. 23. Un péptido purificado, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. 24. Un polipéptido purificado obtenido a partir del método de la reivindicación 20. 25. Un oligonucleótido de al menos 15 nucleótidos capaz de hibridarse específicamente con una secuencia única de nucleótidos, en donde un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina en lugar de una metionina, sin hibridar a ninguna secuencia de nucleótidos en un ácido nucleico que codifica para el antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre. 26. El oligonucleótido según la reivindicación 25, que comprende los nucleótidos 527 hasta 595 de SEQ ID NO: 1. 27. Un método para obtener anticuerpos para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, y no para el antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, en donde el método comprende: (a) obtener el polipéptido de una forma purificada ; (b) inmunizar un organismo capaz de producir anticuerpos contra el polipéptido purificado; (c) colectar los anticuerpos producidos; (d) combinar los anticuerpos producidos y el polipéptido purificado bajo condiciones para formar un complejo; y (e) determinar que anticuerpos producidos forman un complejo con el polipéptido purificado para obtener anticuerpos para el polipéptido. 28. El método según la reivindicación 27, en donde el polipéptido se está codificando por los nucleótidos 155 hasta 835 de la secuencia de ácido nucleico diseñada SEQ ID NO: 1. 29. El método según la reivindicación 27, en donde el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos sustancialmente idéntica a los residuos de aminoácidos 174 hasta 400 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. 30. El método según la reivindicación 27, en donde el organismo comprende un conejo o un ratón. 31. Un método para obtener anticuerpos para un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3, que comprende: (a) obtener el péptido de una forma purificada ; (b) inmunizar un organismo capaz de producir anticuerpos contra el polipéptido purificado; (c) colectar los anticuerpos producidos; (d) combinar los anticuerpos producidos y el péptido purificado bajo las condiciones adecuadas para formar un complejo; y (e) determinar que anticuerpos producidos forman un complejo con el péptido purificado para obtener anticuerpos para el péptido. 32. El método según la reivindicación 31, en donde el organismo comprende un conejo o un ratón. 33. Los anticuerpos obtenidos en la reivindicación 27 ó 31. 34. Anticuerpos monoclonales de los anticuerpos de la reivindicación 33. 35. Anticuerpos capaces de detectar un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, en que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y es incapaz de detectar el antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre. 36. Los anticuerpos capaces de detectar un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designada SEQ ID NO: 3. 37. El uso de un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, este polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 de este polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, para determinar si un sujeto esta infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ? S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (metionina a treonina), en donde la determinación comprende: (a) obtener una muestra apropiada de ácido nucleico del sujeto; y (b) determinar si la muestra de ácido nucleico del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina. 38. El uso según la reivindicación 37, en donde la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie y una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina y en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) poner en contacto el ARNm con el oligonucleótido de la reivindicación 25 bajo condiciones que permitan la unión del ARNm al oligonucleótido para formar un complejo; (ii) aislar el complejo formado de este modo; y (iii) identificar el ARNm en el complejo aislado para determinar de este modo si el ARNm es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido . 39. El uso según la reivindicación 37, en donde la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende el ARNm que corresponde a la trascripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) traducir el ARNm bajo condiciones adecuadas para obtener una secuencia de aminoácidos; y (ii) comparar la secuencia de aminoácidos del paso (i) con la secuencia de aminoácidos del ácido nucleico asilado de la reivindicación 9 para determinar de este modo si la muestra de ácido nucleico es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido. 40. El uso según la reivindicación 37, en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) amplificar el ácido nucleico presente en la muestra del paso (a); y (ii) detectar la presencia del polipéptido en el ácido nucleico amplificado resultante. 41. El uso de un anticuerpo que reconoce a un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, para determinar si un sujeto está infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antigeno- S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina), en donde la determinación comprende: (a) obtener una muestra apropiada del sujeto; y (b) determinar si la muestra del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 de este polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, al poner en contacto la muestra bajo condiciones apropiadas para la unión a los anticuerpos de la reivindicación 35 o 36 para determinar si un sujeto está infectado. 42. El uso según la reivindicación 37, 38 o 41, en donde el ácido nucleico aislado, oligonucleótido o anticuerpo se marca con un marcador detectable, 43. El uso según la reivindicación 42, en donde el marcador detectable es un isótopo radioactivo, un fluoróforo o una enzima. 44. El uso según la reivindicación 37, en donde la muestra comprende sangre, tejido o suero. 45. El uso de un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa del virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina para detectar si un sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular, que comprende: (a) obtener una muestra apropiada de ácido nucleico del sujeto; y (b) determinar si la muestra de ácido nucleico del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina. 46. El uso según la reivindicación 45, en donde la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende ARNm que corresponde a la transcripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tienen una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) que comprende: (i) poner en contacto el ARNm con el oligonucleótido de la reivindicación 25 bajo condiciones que permitan la unión del ARNm al oligonucleótido para formar un complejo; (ii) aislar el complejo formado de este modo; y (iii) identificar el ARNm en el complejo aislado para determinar de este modo si el ARNm es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido . 47. El uso según la reivindicación 45, en donde la muestra de ácido nucleico en el paso (a) comprende ARNm que corresponde a la transcripción de ADN que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, y en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) traducir el ARNm bajo condiciones adecuadas para obtener una secuencia de aminoácidos; y (ii) comparar la secuencia de aminoácidos del paso (i) con la secuencia de aminoácidos del ácido nucleico aislado de la reivindicación 9 para determinar de este modo si la muestra de ácido nucleico es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para el polipéptido. 48. El uso según la reivindicación 45, en donde la determinación del paso (b) comprende: (i) amplificar el ácido nucleico presente en la muestra del paso (a); y (ii) detectar la presencia del polipéptido en el ácido nucleico amplificado, resultante. 49. El uso de un anticuerpo que reconoce un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, para determinar si el sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular, en donde la determinación comprende: (a) obtener una muestra apropiada del sujeto; y (b) determinar si la muestra del paso (a) es, o se deriva de, un ácido nucleico que codifica para un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, al poner en contacto la muestra bajo condiciones apropiadas para la unión a los anticuerpos de la reivindicación 35 o 36 para determinar si un sujeto tiene una predisposición para el carcinoma hepatocelular. 50. El uso según la reivindicación 46, 47 o 49, en donde el ácido nucleico aislado, oligonucleótido o anticuerpo se marca con un marcador detectable . 51. El uso según la reivindicación 50, en donde el marcador detectable es un isótopo radioactivo, un fluoróforo o una enzima. 52. El uso según la reivindicación 45, en donde la muestra comprende sangre, tejido o suero. 53. Un método para identificar un compuesto químico para el uso en la fabricación de un medicamento capaz de tratar la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ?S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) en donde el método para identificar el compuesto químico comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, en que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, con el compuesto químico bajo condiciones que permiten la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión especifica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar la infección por cepa viral . 54. Un método para identificar un compuesto químico para el uso en la fabricación de un medicamento capaz de prevenir la infección por una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antigeno- ?S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) en donde el método para identificar el compuesto químico comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, con el compuesto químico bajo condiciones que permiten la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión específica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de prevenir la infección por la cepa viral. 55. Un método para identificar un compuesto químico para el uso en la fabricación de un medicamento capaz de tratar el carcinoma hepatocelular en donde el método para identificar el compuesto químico comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, ya que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, con el compuesto químico bajo condiciones que permiten la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión especifica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de tratar el carcinoma hepatocelular. 56. Un método para identificar un compuesto químico para el uso en la fabricación de un medicamento capaz de prevenir el carcinoma hepatocelular, en donde el método para identificar el compuesto químico comprende: (a) poner en contacto un polipéptido que es un antigeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antigeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, en que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, con el compuesto químico bajo condiciones que permitan la unión entre el polipéptido y el compuesto químico; (b) detectar la unión específica del compuesto químico al polipéptido; y (c) determinar si el compuesto químico inhibe el polipéptido para identificar un compuesto químico que es capaz de prevenir la infección por cepa viral. 57. Una composición que comprende un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre en que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina, las cantidades del polipéptido son efectivas para estimular o mejorar la producción de anticuerpos en un sujeto y son farmacéuticamente aceptables . 58. Una composición que comprende un péptido, en donde el péptido tiene una secuencia de aminoácidos que comprende los residuos de aminoácidos 298 hasta 320 de la secuencia de aminoácidos designadas SEQ ID No 3, las cantidades del péptido son efectivas para estimular o mejorar la producción de anticuerpos en un sujeto, y son farmacéuticamente aceptables . 59. Una composición que comprende el compuesto químico identificado por el método de la reivindicación 55 en una cantidad efectiva para tratar el carcinoma hepatocelular y un portador farmacéuticamente aceptable. 60. Una composición que comprende el compuesto químico identificado por el método de la reivindicación 56 en una cantidad efectiva para prevenir el carcinoma hepatocelular y un portador farmacéuticamente efectivo. 61. Una composición que comprende el compuesto químico identificado por el método de la reivindicación 53 en una cantidad efectiva para tratar una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Ant ígeno- ' S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) y un portador farmacéuticamente efectivo. 62. Una composición que comprende el compuesto químico identificado por el método de la reivindicación 54 en una cantidad efectiva para prevenir la infección con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ?S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) y un portador farmacéuticamente efectivo. 63. El uso de la composición de la reivindicación 57 o 58, para tratar un sujeto infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Ant ígeno- ? S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) . 64. El uso de la composición de la reivindicación 61, para tratar un sujeto infectado con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) . 65 Uso de la composición de la reivindicación 57 o 58, para prevenir la infección con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antigeno- ?S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) en un sujeto. 66. El uso de la composición de la reivindicación 62, para prevenir la infección con una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Antígeno- ?S' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) en un sujeto. 67. El uso de la composición de la reivindicación 57 o 58, para tratar un sujeto con carcinoma hepatocelular. 68. El uso de la composición de la reivindicación 59, para tratar un sujeto con carcinoma hepatocelular. 69. El uso de la composición de la reivindicación 57 o 59, para prevenir el carcinoma hepatocelular en un sujeto. 70. El uso de la composición de la reivindicación 60, para prevenir el carcinoma hepatocelular en un sujeto. 71. Un método para seleccionar fluidos corporales de un sujeto para una cepa de virus de hepatitis B designada Cepa Oon de Ant igeno- ' S ' -133 de Superficie de Virus de Hepatitis B Humana (Metionina a Treonina) que comprende: (a) obtener una muestra apropiada de fluido corporal del sujeto; (b) determinar la presencia de un polipéptido que es un antígeno mutante principal de superficie de una cepa de virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos de un antígeno principal de superficie de un virus de hepatitis B tipo silvestre, en que el aminoácido en la posición 133 del polipéptido es una treonina, en lugar de una metionina en la muestra del paso (a) para seleccionar la muestra para la cepa. 72. El método según la reivindicación 71, en donde el fluido corporal comprende sangre, suero o una muestra de ácido nucleico de suero o sangre. 73. Una vacuna de hepatitis, que comprende una forma mutante del antigeno de superficie del virus de hepatitis B, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de la secuencia de aminoácidos tipo silvestre del antígeno principal de superficie de hepatitis B, en que el aminoácido en la posición número 133 del polipéptido es una treonina en lugar de una metionina. 74. La vacuna según la reivindicación 73, que comprende además un adyuvante.