UA73476C2 - Hepatitus b mutant virus strain, nucleic acid isolated molecule, coding mutant main surface antigen of hepatitus b virus strain, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemicalcompound for the treatment of infection of hepatitis virus strain, a composition, a method for screening of liquids of organism for hepatitis b virus, vaccine against hepatitis - Google Patents
Hepatitus b mutant virus strain, nucleic acid isolated molecule, coding mutant main surface antigen of hepatitus b virus strain, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemicalcompound for the treatment of infection of hepatitis virus strain, a composition, a method for screening of liquids of organism for hepatitis b virus, vaccine against hepatitis Download PDFInfo
- Publication number
- UA73476C2 UA73476C2 UA2000127297A UA2000127297A UA73476C2 UA 73476 C2 UA73476 C2 UA 73476C2 UA 2000127297 A UA2000127297 A UA 2000127297A UA 2000127297 A UA2000127297 A UA 2000127297A UA 73476 C2 UA73476 C2 UA 73476C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- polypeptide
- virus
- amino acid
- hepatitis
- surface antigen
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 298
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 248
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 244
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 title claims abstract description 199
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 130
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 125
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 125
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 72
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 71
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 70
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 44
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 title claims description 34
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 29
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 24
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 10
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 title description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 title description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 96
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 96
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims abstract description 96
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 96
- 101710084021 Large envelope protein Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 44
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 44
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 38
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 175
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 47
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 44
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 28
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 claims description 22
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 16
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 claims description 13
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 claims description 13
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 claims description 13
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 6
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 5
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 2
- 241000239366 Euphausiacea Species 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 229960002520 hepatitis vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 27
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 9
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 9
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 9
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 9
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 9
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 4
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 4
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 101710173438 Late L2 mu core protein Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 3
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 3
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 241000786798 Atya Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710175243 Major antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000003995 blood forming stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 101100291267 Drosophila melanogaster Miga gene Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101150063042 NR0B1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000599304 Rhorus Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 101150003160 X gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000034184 interaction with host Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- -1 olive oil Chemical compound 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000011451 sequencing strategy Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000005570 vertical transmission Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Опис винаходу
Цей винахід стосується геному вірусу гепатиту В, виділеного з карциноми печінки (НСС), і із мутацією по 2 залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) в межах головного поверхневого антигену, його послідовності нуклеотидів, визначених чотирьох головних послідовностей білка, антигену, антитіла, систем виявлення, розробки ефективних вакцин і противірусних агентів.
НСС є одним з найбільш звичайних типів раку печінки людини, зокрема в Азії, яка відрізняється тим, що на неї припадає щороку 7095 нових випадків в усьому світі. Це проявляється як цироз печінки, тобто як ускладнення 70 хронічної хвороби печінки. Клінічні ознаки пацієнтів НСС неспецифічні згідно з ознаками та симптомами, які з'являються лише на пізніх стадіях раку.
Однією з головних причин хронічних хвороб печінки є вірусне інфікування гепатитом В. Уперше відкритий в 1963 як вірус людини, який передається парентерально, хронічне вірусне інфікування гепатитом В було найпоширенішою складовою серологічно невизначеного патогенезу НСС. Незважаючи на той факт, що вірус 72 гепатиту В не виявляє ознак повного вірусного онкогена, його участь у розвитку НСС може бути приписана різним аспектам взаємодії з гепатоцитами хазяїна. До цього належить невідповідна транскрипційна активність найменшого вірусного білка, Х, який збільшує рівень експресії багатьох клітинних генів, включаючи протоонкогени. З іншого боку, часто знаходять інтегровану ДНК вірусів у хромосомах пацієнтів НСС. Існує також доказ активної ролі в розвитку НСС головного зовнішнього антигену. Цей білок служив головним маркером виявлення для носіїв вірусу гепатиту В. Найбільшим антигенним епітопом є надзвичайно консервативна ділянка, що містить 23 амінокислотних залишки й розташована з положення амінокислот 124-147 головного поверхневого антигену. Ця мала ділянка, яка визначається, як групова специфічна детермінанта "а", знаходиться у всіх підтипах та ізолятах геномів вірусу гепатиту В. її антигенні властивості проявляються завдяки запропонованій структурі подвійної петлі, до якої зв'язується індуковане вакциною нейтралізуюче антитіло. с 29 Епідеміологічні дані авторів свідчать, що головний поверхневий антиген дикого типу був знайдений у Ге) більшості пацієнтів НСС. Крім того, спостереження показують, що декілька варіантів головного поверхневого антигену пацієнтів НСС можуть брати участь у патогенезі НСС. Прямий аналіз послідовності показав, що 24 з 63 пацієнтів НСС (біля 3895) несуть різні мутації епітопу "а" головного поверхневого антигену. Якщо об'єднати варіанти дикого типу та інші випадки, пропорція іншого вірусу, який несе мутацію по залишку амінокислоти 133, ее, 30 розташовану в першій петлі епітопу "а" головного поверхневого антигену (метіонін на треонін), становить 12,790 зча в 63 НСС пацієнтів з Південно-Східного регіону Азії, Її представлені в 5 місцевих випадків НСС. Однак, така ж мутація знаходиться лише в 290 носіїв вірусу гепатиту В у рандомізованій популяції (більш ніж 100 випадків). З
Значення цього варіанту по залишку амінокислоти 133 підсилюється тим фактом, що пропорція іншого вірусу по со залишку амінокислоти 145 (гліцин на аргінін), краще відома, як індукований вакциною мутант, і розташована в
Зо другій петлі епітопу "а", залишається постійною у 895 в носіях вірусу гепатиту В у рандомізованому зразку - населення.
Хоча цей варіант штаму вірусу гепатиту В, що несе мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену в пацієнтах НСС, може виникнути незалежно від тих, що індуковані « внаслідок вакцинації (тобто з мутацією по залишку амінокислоти 145 головного поверхневого антигену), цей З 40 штам має подібні особливості в тому, що вони є стійкими, до того ж повідомлялось про випадки вертикальної с передачі цих штамів, незважаючи на ефективну профілактику вірусу гепатиту В і використання імуноглобуліну
Із» проти гепатиту В (НВІС).
Поява варіанту вірусу гепатиту В людини, що несе мутацію в епітопі "а" головного поверхневого антигену, при НСС є цікавою. Висока пропорція мутанта вірусу із заміною в залишку амінокислоти 133 головного 45 поверхневого антигену є особливо цікавою, оскільки це може вказати на близький зв'язок з патогенезом НСС. Ця 7 кореляція, таким чином, потребує термінового розвитку специфічних систем виявлення, а також ефективних оз профілактичних і терапевтичних вакцин та противірусних агентів. Визначення послідовності нуклеотидів цього мутанта вірусу складає перший крок в напрямку досягнення цієї мети й звичайно є корисним при створенні е згаданих вище діагностичних і лікувальних схем. -і 20 У цьому винаході запропоновано виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 штаму Ооп (метіонін на треонін), та який містить щи вірусний геном, що зберігається під номерами доступу Мо РО7121504, РО7121505 та РО7121506 в Європейській колекції культури клітин від 15 грудня 1997 року.
У цьому винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що
ГФ) відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу юю тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.
У цьому винаході запропоновано спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі й одержаний очищений поліпептид є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має бо послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.
У цьому винаході запропоновано олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з послідовностями лише мутантного вірусного штаму вірусу гепатиту В. бо У цьому винаході запропоновано спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, а також одержаних антитіл.
У цьому винаході запропоновано використання описаних вище нуклеїнової кислоти, поліпептиду, пептиду або антитіла для визначення того, чи інфікований суб'єкт описаним вище вірусним штамом.
У цьому винаході також запропоновано використання ідентифікованої вище нуклеїнової кислоти, поліпептиду, пептиду або антитіла для визначення того, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки.
У цьому винаході також запропоновано вакцину для попередження карциноми печінки та лікування, а також вакцину для лікування або попередження визначеного вище мутанта штаму вірусу гепатиту В.
У цьому винаході також запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки, яка здатна лікувати або 7/0 попереджати карциному печінки, Її композицій, які містять такі суміші.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки, яка здатна до лікування та/або попередження зараження описаним вище мутантним вірусним штамом, а також композиції, які містять такі сполуки.
Фігура 1. Структура чотирьох рамок зчитування геному вірусу гепатиту В людини, який був виділений з НСС /5 (з мутацією метіоніну на треонін по залишку амінокислоти 133 головного поверхневого антигену, що позначено символом зірочка). Головні білки вірусу: ДНК-полімераза, великий/середній/головний поверхневий антиген, пресерцевинний, серцевинний й трансактивуючий Х означені, як Р, Ргез1/Рге52/5, Ргес, С і Х, відповідно.
Фігура 2. Стратегія клонування та визначення послідовності того ж самого геному вірусу гепатиту В.
У цьому винаході посилання як на специфічні нуклеотиди здійснюється на нуклеотиди кодуючого ланцюга нуклеїнової кислоти. Наступні стандартні скорочення використовуються в цьому винаході, щоби вказати на специфічні нуклеотиди:
С-цитозин; А-аденозин; Т-тимідин; С-гуанозин;
У цьому винаході запропоновано послідовність нуклеотидів геному вірусу гепатиту В, який був виділений з карциноми печінки (НСС), який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на сч ов треонін) головного поверхневого антигену, що складається з 3215 нуклеотидів (Фігура 3), що кодує 4 білки вірусу, які перекриваються, показані на Фігурах 4-7. і)
У винаході запропоновано послідовності амінокислот чотирьох головних вірусних білків, до яких належать
ДНК-полімераза, великий/середній/головний поверхневий антиген, серцевинний та трансактивуючий Х. Ці білки можуть бути одержані, використовуючи рекомбінантну технологію, та використані при одержані поліклональних (а зо або моноклональних антитіл.
У цьому винаході також запропоновано діагностичну систему вірусу гепатиту В, специфічну до індукованої - вакциною мутації по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену, «г використовуючи нуклеотидні послідовності або послідовності білка чи антитіла, які описуються в цьому винаході.
У цьому винаході запропоновано виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу ме) зв гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 (метіонін на треонін), та який містить вірусний геном, ї- що зберігається під номерами доступу Мо РО7121501, РО7121502 та РО7121503.
У винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу « тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін. У специфічному втіленні, Ше) с поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо1, зокрема такої, що містить нуклеотиди "АТО" в положенні 551-553, замість "АСО". ;» Виділена нуклеїнова кислота може бути ДНК або РНК, зокрема кДНК або геномна ДНК.
В іншому втіленні винаходу поліпептид має послідовність амінокислот, по суті ту ж саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо3. -І У цьому винаході, крім іншого, запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується нуклеотидами 527-595 Послідовності Мо1. о У цьому винаході також запропоновано виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид має їх послідовність амінокислот, що містить залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як
Послідовність МоЗ3. ш- У цьому винаході також запропоновано вектор, який містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує
Ф поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не ов Метіонін, і функціонально з'єднаний з промотором транскрипції РНК.
Крім того, у цьому винаході запропоновано вектор, який містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує (Ф) пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що містить нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо1. ка В обох визначених вище векторів, вектор може містити вірусну ДНК.
У цьому винаході також запропоновано систему вектора для одержання поліпептиду, який містить описані бо вище вектори в придатному хазяїні.
У цьому винаході також запропоновано спосіб одержання поліпептиду або пептиду, який складається з вирощування систем вектора, описаних вище, за придатних умов одержання поліпептиду, та виділення поліпептиду.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб одержання поліпептиду або пептиду в очищеній формі, 65 який складається з: (а) уведення описаних вище векторів в придатну клітину хазяїна; (б) культивування клітин хазяїна таким чином, щоби одержати поліпептид; (в) виділення поліпептиду, який одержують на етапі (б); і (г)
очищення поліпептиду, виділеного таким чином.
У Цьому винаході, крім іншого, запропоновано очищений поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін. Одним зі способів одержання поліпептиду є спосіб, описаний вище.
У цьому винаході також запропоновано очищений пептид, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо3. 70 У цьому винаході також запропоновано олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з унікальною послідовністю нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, без гібридизації до будь-якої послідовності нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує головний поверхневий антиген вірусу гепатиту В дикого типу. Зокрема, олігонуклеотид містить нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо1.
У Цьому винаході також запропоновано композицію, здатну до стимулювання або збільшення одержання антитіл до поліпептиду.
У цьому винаході також запропоновано спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, а не до головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу, що складається з: (а) одержання поліпептиду в очищеній с ов формі; (б) імунізації організму, здатного до вироблення антитіл проти очищеного поліпептиду; (в) збирання утворених антитіл; (г) з'єднання одержаних антитіл і очищеного поліпептиду за умов формування комплексу; і і) (д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним поліпептидом таким чином, щоб одержати антитіла до поліпептиду. Зокрема, поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мої. В іншому втіленні поліпептид містить послідовність «я зо амінокислот, головним чином ідентичну залишкам амінокислот 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як
Послідовність МоЗ3. ї-
Можна одержати ці антитіла від організмів, таких як кролик або миша. «г
У Цьому винаході також запропоновано спосіб одержання антитіл до пептиду, де пептид містить послідовність амінокислот, що містить залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як і)
Послідовність МоЗ3, що складається з: (а) одержання пептиду в очищеній формі; (б) імунізації організму, М здатного до вироблення антитіл проти очищеного пептиду; (в) збирання утворених антитіл; (г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного пептиду за умов формування комплексу; і (д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним пептидом так, щоб одержати антитіла до пептиду.
У цьому винаході також запропоновано антитіла, які одержують внаслідок описаних вище способів, зокрема « Моноклональні антитіла. з с Крім того, у винаході запропоновано антитіла, здатні до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним
Й поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що и?» відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і нездатний до виявлення головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу. -І Цей винахід, крім того, передбачає антитіла, здатні до виявлення пептиду, який відрізняється тим, що пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, і позначеної як Послідовність Мо3. їх У цьому винаході також запропоновано використання виділеної нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот,
Ш- що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу
Ф тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеним як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 штаму Ооп (метіонін на треонін), де таке визначення складається з: (а) ов одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти від суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є (Ф, мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність ка амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін. во У одному втіленні зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, що відповідає копії ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення етапу (б) складається з: (ії) контактування мРНК з описаним вище олігонуклеотидом за б5 Умов, за яких МРНК зв'язується з олігонуклеотидом таким чином, що утворюється комплекс; (ії) виділення комплексу, який утворюється таким чином; і (ії) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоби таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.
В іншому втіленні зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, що
Кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду є треоніном, а не метіоніном, і де визначення етапу (б) складається з: (а) трансляції мРНК за придатних умов, щоб одержати послідовність амінокислот; і (її) порівняння послідовності амінокислот етапу (а) з послідовністю амінокислот, /о яка кодується вищезазначеною виділеною нуклеїновою кислотою так, щоби таким чином визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.
Етап (б) можна визначити за допомогою: (а) ампліфікації нуклеїнової кислоти, присутньої в зразку етапу (а); і (і) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті.
У цьому винаході також запропоновано використання антитіл, які розпізнають поліпептид, що є мутантним 7/5 Головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як поверхневий антиген (метіонін на треонін)-5-133 штаму Ооп вірусу гепатиту В, де таке визначення складається з: (а) одержання відповідного 2о зразка із суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, за яких сч відбувається зв'язування з антитілами, які розпізнають поліпептид так, щоби визначити, чи інфіковано суб'єкт.
В описаних вище використаннях, виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло може бути мічене і) маркером, здатним до виявлення. До прикладів маркерів, здатних до виявлення, належать радіоактивні ізотопи, флюорофори та білки.
У специфічному втіленні до зразків належать, крім іншого, кров, тканина або сироватка. Ге зо У цьому винаході запропоновано використання нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що - відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу «г тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де таке визначення складається з: (а) одержання відповідного і) зв зразка нуклеїнової кислоти суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з етапу (а) є ї- нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін. «
В одному втіленні зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, яка відповідає копії ДНК, яка кодує з с поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного антигену вірусу гепатиту з В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення етапу (б) складається з: (а) контактування з мРНК з олігонуклеотидом за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом таким чином, що утворюється комплекс; (її) виділення комплексу, який -І утворюється таким чином; і (ії) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоби таким чином визначити, чи
МРНК є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид. о В іншому втіленні зразок нуклеїнової кислоти етапу (а) містить мРНК, що відповідає копії ДНК, яка кодує ї5» поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену
Ш- вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не
Ф метіонін, і де визначення етапу (б) складається з: (а) трансляції МРНК за придатних умов, щоб одержати послідовність амінокислот; і (ії) порівняння послідовності амінокислот етапу (а) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид, яка відрізняється тим, що поліпептид містить послідовність амінокислот, головним чином ідентичну амінокислотам 174-400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність МоЗ3, так, щоби таким чином визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою (Ф) кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид. ка В іншому втіленні, визначення етапу (б) складається з: (а) ампліфікації нуклеїнової кислоти, присутньої в зразку етапу (а); і (і) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті. во У цьому винаході, крім іншого, запропоновано використання антитіл, які розпізнають поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де таке визначення складається з: (а) одержання 65 відповідного зразка із суб'єкта; і (б) визначення, чи зразок з етапу (а) є нуклеїновою кислотою або одержується з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з допомогою контакту із зразком за відповідних умов, за
ЯКИХ відбувається зв'язування з антитілами, які розпізнають поліпептид так, щоби визначити, чи інфікований суб'єкт.
В описаних вище використаннях виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло може бути мічене маркером, здатним до виявлення. До прикладів маркерів, здатних до виявлення, належать радіоактивні ізотопи, флюорофори та білки. 70 У втіленнях зразок містить кров, тканину або сироватку.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні лікувати карциному печінки, який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В /5 дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш зв'язується з поліпептидом так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна лікувати інфекції вірусної інфекції.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні попереджувати інфекцію штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-З'-133 (метіонін на треонін), який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не сч метіонін, з хімічною сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш і) інгібує поліпептид так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна до запобігання інфікуванню вірусним штамом.
У цьому винаході також запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні лікувати карциному печінки, який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним «о зо поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу - тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за «г умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш інгібує поліпептид так, щоби ме) розпізнати хімічну сполуку, яка здатна до запобігання інфікуванню вірусним штамом. ї-
У цьому винаході також запропоновано спосіб визначення хімічної сполуки для одержання ліків, які здатні попереджувати карциному печінки, який складається з: (а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такого поліпептиду, який має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В « дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною ета) с сполукою за умов, за яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою; (б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом; і (в) визначення, чи хімічна суміш інгібує ;» поліпептид так, щоби розпізнати хімічну сполуку, яка здатна до попередження інфікування вірусним штамом.
У цьому винаході також запропоновано композицію, яка містить хімічну сполуку, визначену описаними вище способами, в кількості, ефективній, щоби лікувати або попереджати інфікування штамом, і фармацевтично -І ефективний носій.
У цьому винаході запропоновано композицію, що містить поліпептид, який є мутантним головним о поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що їх відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу 5р ТИМ, ЩО амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, або його похідна,
Ш- кількість такого поліпептиду, ефективна, щоби стимулювати або збільшити одержання антитіла в суб'єкті, і
Ф фармацевтично прийнятний носій.
Фактична ефективна кількість залежатиме від розміру поліпептиду, здатності поліпептиду до біодеградації, біологічної активності поліпептиду та біодоступності поліпептиду. Якщо поліпептид не деградує швидко, він є вв біодоступним і надзвичайно активним, менша кількість буде потрібна, щоби бути ефективною. Ефективна кількість буде відома фахівцю в галузі; це також залежатиме від форми поліпептиду, розміру поліпептиду та (Ф) біологічної активності поліпептиду. Використання ад'юванта, наприклад, повинне знизити необхідну кількість ка поліпептиду. Фахівець у галузі може звичайним чином виконати емпіричні тести на активність, щоби визначити біоактивність у біотестах і таким чином визначити ефективну кількість. во Фармацевтично прийнятні носії добре відомі фахівцям у галузі й включають, крім іншого, 0,01-0,1М, краще 0,05М фосфатного буфера або 0,895 сольовий розчин. Крім того, такі фармацевтично прийнятні носії можуть бути водними або неводними розчинами, суспензіями та емульсіями. До прикладів неводних розчинників належать пропіленгліколь, поліетиленгліколь, олії, як наприклад, оливкова олія, і органічний ефір, що вводять, як наприклад, етилолеат. Водні носії містять воду, алкогольні/водні розчини, емульсії або суспензії, б5 Включаючи сольові та забуферені середовища. До парентеральних носіїв належать розчини хлориду натрію, декстроза Рингера, глюкоза й хлорид натрію, розчин Рингера з додаванням лактату або фіксовані олії. До внутрішньовенних носіїв належать рідкі та поживні наповнювачі, електролітні наповнювачі, як наприклад ті, що основані на декстрозі Рингера тощо. Консерванти та інші додатки можуть також бути присутні, як наприклад, антибіотики, антиоксиданти, хелатори, інертні гази тощо.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано композицію, яка містить пептид, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як
Послідовність Мо3, або його похідну, кількість такого пептиду ефективна, щоби стимулювати або збільшити одержання антитіла в суб'єкті, ії фармацевтично прийнятний носій.
У цьому винаході також запропоновано композиції, які містять хімічну сполуку, визначену описаними вище 70 способами в кількості, ефективній, щоби лікувати або попереджати карциному печінки, і фармацевтично ефективний носій.
У цьому винаході також запропоновано композицію, яка містить хімічну сполуку, визначену описаними вище способами, в кількості, ефективній, щоби лікувати або попереджати інфікування штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 (метіонін на треонін), 7/5 | фармацевтично ефективний носій.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано визначені вище композиції для лікування суб'єкта, інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), і фармацевтично ефективний носій.
У цьому винаході також запропоновано використання визначених вище композицій для попередження інфікування суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін).
У цьому винаході також запропоновано використання описаних вище композицій для лікування або попередження карциноми печінки.
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб скринінгу тканин і рідин тіла суб'єкта на вірус сч ов гепатиту В, визначений як сінгапурський штам вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 (метіонін на треонін), який складається з: (а) одержання відповідного зразка рідини тіла суб'єкта; (б) і) визначення наявності поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду- «о зо Че треонін, а не метіонін, у зразку етапу (а) так, щоби піддати зразок скринінгу на штам. У втіленнях цього способу рідина тіла містить кров, сироватку або зразок нуклеїнової кислоти крові або сироватки. -
У цьому винаході, крім іншого, запропоновано спосіб лікування суб'єкта, інфікованого цим вірусним штамом. «г
У цьому винаході також запропоновано спосіб скринінгу тканин і рідин організму на цей вірусний штам.
У цьому винаході також запропоновано вакцину від гепатиту, що містить мутантну форму поверхневого о зв антигену вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, що відрізняється від ї- послідовності амінокислот головного поверхневого антигену гепатиту В тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.
У цьому винаході також запропоновано описану вище вакцину та ад'ювант.
Цей винахід проілюстрований в експериментальному розділі, що йде наступним. Ці розділи наведені для « того, щоби допомогти в розумінні винаходу, і не мають наміру обмежувати цей винахід у будь-який спосіб. в с У способі, який описується нижче, виділяли вірус гепатиту В, який несе мутацію по залишку амінокислоти 133 головного поверхневого антигену, і визначали послідовність нуклеотидів. ;» Зразок сироватки (5194) одержували з б6З-річної жінки-китаянки, носія поверхневого антигену. Було підтверджено, що вона є пацієнтом НСС, за допомогою біопсії. Вірус гепатиту В з її сироватки ніс мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) в головному поверхневому антигені, як було показано -І попереднім аналізом послідовності епітопу "а". ДНК вірусів виділяли перед визначенням послідовності в цьому винаході. о Як описано в прикладах нижче, геном цього мутанта вірусу гепатиту В з НСС, що несе мутацію по залишку їх амінокислоти 133 головного поверхневого антигену, складається з 3215 нуклеотидів, що є тотожним до вірусу 5р дикого типу того ж підтипу (адг). Відкриті рамки зчитування (ОКР) головних вірусних білків знаходяться у
Ш- відповідних положеннях порівняно з вірусом дикого типу. Положення 1 в геномі мутантного вірусу гепатиту В
Ф визначається згідно з положенням у вірусі дикого типу.
Структура різних ОКЕ в геномі мутантного вірусу наведена на Фігурі 1 та їх положення вказані, як зазначено нижче: - Ген ДНК-полімерази починається з положення 2307 і закінчується в положенні 1623, таким чином складаючись з 2532 нуклеотидів, і кодує 843 амінокислотні залишки;
Ф) - Ген великого поверхневого антигену починається з положення 2848 і закінчується в положенні 835, таким ка чином складаючись з 1203 нуклеотидів, і кодує 400 амінокислотних залишки. Цей великий поверхневий антиген перекриває середній поверхневий антиген, що починається з положення 3205 і головний поверхневий антиген, во який починається з положення 155. Як середній (що складається з 281 амінокислотних залишків), так і головні (що складається з 226 амінокислотних залишків) поверхневі антигени в тому ж положенні, що й великий поверхневий антиген; - Ген серцевини починається з положення 1814 і закінчується в положенні 2452, таким чином складаючись з 639 нуклеотидів, і кодує 212 амінокислотних залишків; та 65 - Трансактивуючий ген Х починається з положення 1374 і закінчується в положенні 1838, таким чином складаючись з 465 нуклеотидів, і кодує 154 амінокислотні залишки.
До того ж, аналіз послідовності встановив, що цей мутантний вірус гепатиту В належить до підтипу ааг, як показано залишками лізину та аргініну в положеннях 122 і 160 відповідно до головного поверхневого антигену.
Мутація, індукована вакциною (з метіоніну на треонін) знаходиться по залишку амінокислоти 133 головного поверхневого антигену, що узгоджується з попереднім аналізом епітопу "а" прямим визначенням послідовності.
Порівняно з вірусом гепатиту В дикого типу, який зберігається в базі даних СЗепрапк (номер доступу 016665), ідентичність цього штаму вірусу гепатиту В становить 90,396 для послідовності нуклеотидів.
Ідентичність різних вірусних білків цього мутанту вірусу гепатиту В порівняно з їх аналогами дикого типу становить 95,895, 97,595, 95,195 і 94,895 для ДНК-полімерази (Засоби ідентифікації білка (РІК) номер доступу 7/0 РеЗаб60), великого поверхневого антигену (номер доступу РІК А9З3460), серцевини (номер доступу РІК С93460) і трансактивуючого білка Х (номер доступу РІК АЗ1289), відповідно. На відміну від цього, чисельні заміни амінокислот присутні в кожному вірусних білків, порівняно з їх дикими типами, до яких належать: 5 мутацій
ДНК-полімерази, 5 у великому зовнішньому антигені (включаючи зміни метіоніну на треонін для кодону ініціації головного поверхневого антигену), 5 в серцевині та 4 в трансактивуючому білку Х.
Геном вірусу гепатиту В у цьому винаході, який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену, може використовуватися як матеріал для одержання олігонуклеотидів, специфічних до генома мутанта вірусу. Ці олігонуклеотиди можуть використовуватися, як матеріал для надзвичайно специфічних діагностичних агентів, які виявляють вірус, що несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 головного поверхневого антигену.
Геном вірусу гепатиту В у цьому винаході із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену, може використовуватися як матеріал для одержання білків винаходу за допомогою експресії вектора, який несе відповідну кодуючу ділянку і який може реплікуватися в клітині хазяїна, як наприклад, ЕвзсПегіспіа соїї, з допомогою стандартної технології рекомбінантної ДНК. с
Білки цього винаходу корисні як матеріал для надзвичайно специфічних діагностичних агентів, здатних до виявлення вірусу гепатиту В, який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 головного і) поверхневого антигену. Використовуючи відомі способи, ці тотожні білки можуть бути використані, щоб одержати поліклональні та моноклональні антитіла.
Поліклональні та моноклональні антитіла можуть використовуватися як матеріал для діагностичних агентів, Ге зо щоби виявляти з високою специфічністю антигени вірусу гепатиту В з НСС із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену. -
Система виявлення з використанням кожного білка цього винаходу або білків з частковою заміною «Е амінокислот, і система виявлення з використанням моноклональних або поліклональних антитіл до таких білків, корисні як надзвичайно специфічні діагностичні агенти для визначення вірусу гепатиту В з НСС, щоби виявити ме) цей вірус від пацієнтів, які є носіями поверхневого антигену гепатиту В, які можуть потім мати ризик ї- виникнення НСС. Білки або антитіла до таких білків можуть використовуватися як матеріал для створення профілактичної та терапевтичної вакцини проти цього штаму вірусу.
Добре відомо, що один або більше нуклеотидів ДНК можуть бути замінені іншими нуклеотидами, щоб одержати той же білок. Цей винахід також стосується таких змін нуклеотидів, які кодують білки, згадані в « цьому винаході. Також добре відомо, що одна або більше амінокислот в послідовності білка може бути замінена пт) с іншими подібними амінокислотами, як визначено їхніми гідрофільними властивостями або зарядами, щоб . одержати аналог послідовності амінокислот. Будь-які аналоги білків цього винаходу, що містять заміну и?» амінокислоти, делеції або ізостери (змінені амінокислоти, що несуть близьку структурну та просторову подібність до амінокислот білка), додаткові амінокислоти або додавання ізостеру можуть бути використані за умови, що одержані послідовності викликають антитіла, які розпізнають вірус гепатиту В із індукованою -І вакциною мутацією в мутації амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену.
Приклади о Послідовність нуклеотидів і визначена послідовність амінокислот вірусу гепатиту В з НСС, що несуть їх індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену, була визначена наступним чином:
Ш- 1. Виділення вірусної ДНК
Ф ДНК вірусів виділяли із сироватки (5194), одержаної у 6З-річної жінки-китаянки, носія поверхневого антигену. Було підтверджено, що вона є пацієнтом НСС з допомогою біопсії. Вірус гепатиту В з її сироватки ніс мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) в головному поверхневому антигені, як було показано попереднім аналізом послідовності епітопу "а". Спосіб виділення, який використовується:
До 200мкл зразка сироватки додавали 400мкл буфера для лізису (10ММ хлорид Трису, рН 7,4, ЕОТА 1мм і (Ф, додецил сульфат натрію 295) і 25мкл протеїнази К (20мг/мл), інкубували за 6523 протягом З годин. Вірусну ДНК ко потім виділяли фенолом/хлороформом і осаджували етанолом. 2. Ампліфікація вірусної ДНК ланцюговою полімеразною реакцією (РСК). Геном вірусу був ампліфікований бо ланцюговою полімеразною реакцією (РСК), використовуючи З набори олігонуклеотидів, що перекриваються, які були одержані згідно з вірусом гепатиту В дикого типу. Уводили різні сайти ферментів рестрикції, щоби полегшити клонування продуктів РОК. Положення цих олігонуклеотидів показано на Фіг.2 і вказано, як зазначено нижче: - Прапорець 1 (АТААССТТАТОССССТАТСТТАТСААСАСТТССОБА) (Послідовність Моб) починається з сайту 65 Кодуючої ділянки ініціації ДНК-полімерази в положенні 2307 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпайї| підкреслений;
- ХваЗз (ВАСТСТАСАСТСТОСОСТАТТОТОА) (Послідовність Мо7) починається на внутрішньому сайті ферменту рестрикції ХраІ в положенні 250 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпагйі підкреслений; - Хра5 (ЗАСТСТАСАСТООСТООТОСАСТТСТ) (Послідовність Мов) починається на внутрішньому сайті Хваї в тому ж положенні, що й для олігонуклеотиду ХраЗ, але комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпайї|І підкреслений; - Соттоп З (ТССАСААТТСТСАСОСТООТСТОСАТОСОАСОСТ) (Послідовність Мо9) починається на стоп-кодоні 7/0 ДНК-полімерази в положенні 1623 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції ЕсоКіІ підкреслений; - М11 (ТІТОТТТАСОТСССОТ) (Послідовність Мо10) починається біля сайта ініціації гена Х в положенні 1420 послідовності нуклеотидів вірусу й комплементарна кодуючому ланцюгу (змістовий олігонуклеотид); - НіпапА МУЗ (СТААОСТТАСТТТОСОСААСТОТТОАТ) (Послідовність Мо11) починається близько до сайту 7/5 ініціації ДНК-полімерази в положенні 2340 й комплементарна комплементарному ланцюгу (антизмістовий олігонуклеотид). Додатковий сайт ферменту рестрикції Ніпайї|І підкреслений.
Використовуючи вірусну ДНК як шаблон, потім використовували РСК на ОМА Тпегптаї! Сусіег (Регкіп-ЕІтег,
Сеййв) протягом 35 циклів, використовуючи Ріш-полімеразу (Зігаїадепе, США), кожний цикл складався з 1,5 хвилин за температури денатурації 942С, 2 хвилин за температури гібридизації 532 і 4 хвилин за температури 7290. Використовували наступні комбінації олігонуклеотидів: Ріадї/Храз, Храбв/СоттопЗ і М11/НіпанпАОМУЗ, і одержували продукти ампліфікації 1,2 т. п. н., 1,4 т. п. н. і 1,1 т. п. н., відповідно. 3. Клонування ампліфікованих вірусних фрагментів ДНК. Ампліфікований вірусний фрагмент ДНК з Ріаді/Храз (1,2 т. п. н.) піддавали ферменту рестрикції НіпайШ ії Храї перед клонуванням в плазміду Віпезсгірі попередньо Га оброблену тими ж самими ферментами рестрикції. Подібне розщеплення Храї і ЕсоК! було застосоване до продуктів РСК з Храб/СоттопЗ (1,4 т. п. н.) перед клонуванням в плазміду ВісезЗсгірі, попередньо оброблену і)
Хваї і ЕсокІ. З другого боку, фрагмент ДНК, ампліфікований з допомогою М11 і НіпапАОМУЗ (1,1 т. п. н.), безпосередньо клонували в плазміду 7егоВішпі, одержану Іпийгобеп (США) для клонування фрагментів ДНК з тупими кінцями. Ге) 4. Визначення послідовності нуклеотидів.
Послідовність нуклеотидів індукованого вакциною вірусу гепатиту В у цьому винаході була визначена на т шаблоні ДНК плазміди інгібіторів термінації утворення ланцюга, використовуючи Зедцепазе ОМА Зедцепсіпу КИ «Ж (Опіеай 5іафез Віоспетіса! Согр.). Щоби полегшити процедуру визначення послідовності, одержували різні внутрішні олігонуклеотиди (від М1 до М16) згідно з вірусом гепатиту В дикого типу, та їхні положення показані о на Фіг.2. ч-
З аналізу, описаного вище, визначали послідовність нуклеотидів повної довжини вірусу гепатиту В, виділеного з НСС, і який несе індуковану вакциною мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену, як показано на Фігурі 3. Визначали ділянки послідовностей нуклеїнових « кислот, що кодують головні вірусні білки, показані на Фігурах 4-7: ДНК-полімераза вірусу гепатиту В (Фігура 4), великого поверхневого антигену (Фігура 5), білок серцевини (Фігура 6) і трансактивуючий білок Х (Фігура 7). - с Розташування вірусної послідовності в цьому винаході з іншими вірусними послідовностями гепатиту В, ц наведене в базі даних СепрапкК, може виявити специфічні відмінності між послідовностями, які у свою чергу "» можуть використовуватись для створення зондів ДНК. Тоді може бути створена система виявлення з використанням ланцюгової полімеразної реакції (РСК). Такі реакції РСК включать комбінації олігонуклеотидів, специфічні до вірусу гепатиту В із індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 133 (метіонін на -І треонін) головного поверхневого антигену, таким чином дозволяючи проводити виявлення цих ДНК мутантів вірусів. ДНК вірусів може бути виділена, як описано в цьому винаході. Реакції РСК, що можуть бути виконані,
Мн використовуючи специфічні олігонуклеотиди та тотожні умови циклювання, описані вище. Результати можна ьч потім аналізувати після розділення продуктів РСК на 195 агарозному гелі.
Відомі імунологічні процедури дають можливість визначення епітопів послідовностей білка, як наприклад, і тих, що наведені на Фігурах 4-7. Визначення цих епітопів, специфічних до вірусу гепатиту В з НСС, із 4) індукованою вакциною мутацією по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену дозволяє синтез пептидів, використовуючи способи генної інженерії, синтез білків, одержання антитіл, створення специфічних діагностичних реактивів, розвиток профілактичних і терапевтичних вакцин та противірусних агентів.
Система виявлення антитіл проти вірусу гепатиту В з НСС із індукованою вакциною мутацією по залишку о амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену може бути створена, полі вінілові ко мікротитрувальні планшети та спосіб сандвіча. 5Омкл Ббмкг/мл пептиду вірусу гепатиту В цього винаходу, виділеного з НСС, і переміщення мутації по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного бо поверхневого антигену, можуть бути розподілені в кожну комірку мікротитрувальних планшетів й інкубовані протягом ночі за кімнатної температури для закріплення. Подібні процедури можуть бути застосовані до білка, очищеного від клітин-хазяїна, як наприклад, ЕзсПегіспіа соїї. Комірки мікропланшету можуть бути промиті п'ять разів фізіологічним сольовим розчином, який містить 0,0595 Тмееп 20. Для покривання рідиною 100мкл буфера
Масі, який містить 3095 (по масі) сироватки теляти і 0,0595 Тм'ееп 20 (буфер С5), можуть бути розподілені в 65 кожну комірку й видалені після інкубації протягом 30 хвилин за кімнатної температури.
Щоби визначити антитіла, специфічні до індукованих вакциною мутантів вірусу гепатиту В (мутантів по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену) в сироватці, первинну реакцію виконують так, що БОмкл буфера С5 і 1Омкл зразка сироватки можуть бути розподілені в кожну комірку мікропланшету й інкубовані на мікропланшетному вібраторі протягом однієї години за кімнатної температури.
Після завершення первинної реакції комірки мікропланшету промивали п'ять разів, як описано вище.
У другій реакції Тнг моноклональних антитіл миші до (дО людини, мічених пероксидазою хріну, розчиняли в
БОмкл сироватки теляти й розподіляли в кожну комірку мікропланшету, інкубували на мікропланшетному вібраторі протягом однієї години за кімнатної температури. По завершенню комірки промивали п'ять разів таким же чином. Після додавання перекису водню (як субстрату) і ХОмкл розчину О-фенілендіаміну (як барвника) в 7/0 Кожну комірку, після інкубації протягом ЗО хвилин за кімнатної температури, 5Омкл розчину 4М сірчаної кислоти розподіляли в кожну лунку, щоби зупинити подальше забарвлення й для зчитування поглинання за 49Онм.
Цей винахід дозволяє виявляти індукований вакциною мутант вірусу гепатиту В, зокрема той, що несе мутацію по залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену. У цьому винаході також запропоновано системи виявлення, здатні до надзвичайно специфічного й чутливого виявлення на ранній 7/5 бтадії інфікування або розвитку НСС, коли НСС можна лікувати та виліковувати.
Крім того, ці властивості дозволяють ставити точний діагноз пацієнтам на ранній стадії НСС, а також допомагають інгібувати з вищою ефективністю вірус гепатиту В.
Білки та їхні антитіла у цьому винаході можуть бути використані для створення профілактичних і терапевтичних вакцин, також як і імунологічних фармацевтичних засобів. Інформація щодо послідовностей структурних генів цих мутантних вірусів буде корисна в системах виявлення відповідних білкових антигенів і антитіл.
Комплекси антиген-антитіло можуть бути виявлені відомими способами. Специфічні моноклональні та поліклональні антитіла можуть бути утворені з допомогою імунізації тварин, таких як, наприклад, миші та кролі, пептидами або білками, специфічними до індукованих вакциною мутантів вірусу гепатиту В. Інгібіторні сч ов противірусні агенти можуть бути розроблені й спрямовані проти цих білків і молекул у культурі клітин або іп мімо.
Цей винахід оснований на вивченні на виділеному вірусному геномі з індукованою вакциною мутацією по і) залишку амінокислоти 133 (метіонін на треонін) головного поверхневого антигену. Винахід робить можливим надзвичайно специфічне виявлення цих індукованою вакциною мутантів вірусу гепатиту В і пропонує матеріал, як наприклад, білок, поліклональні та моноклональні антитіла для створення такої системи виявлення. Ге зо Посилання 1. Ооп, С-)., "Мігаї пераїйів В іп Зіпдароге: ерідетіоіоду, ргемепіоп апа сопігоІ-топігіпуд пераййів -
В ргодгатте апа тападетепі ої сагіегв" У. Коуа! СоПеде РПузіс. І опадоп (1997), іп ргезв. «г 2. Одаїа, М., еї аїЇ. "Іпїесімйу апа раїйодепісйу іп спітраплеез ої а зипасе депе тшапі ої Перацйів
В мігив, (паї етегодеа іп а массіпайеа іптапе .). Іптес. Оізеазе (1997) 175:511-523. ме)
З. Ооп, С-). "Іввцез азвосіабед м/п НВМ тшапі вігаіпів" у). Коуаї. СоПеде РпНузіс І опдоп (1997), іп ргезв. ї- 4. Ооп, С-)., еї аі). Нераїййів В випасе апідепе тшиапів (НВзАд) - (Пеїг зідпітісапсе" АппаЇївз Асад. Меа. зіпдароге (1997), іп ргезв. 5. Тваї, 9У.Р., еї а). "Адайіме епПесі тоайісанйоп ої Пераїйів В зипасе апідеп апа е апідеп оп (Пе демеіортепі ої ПераїйосеїІшаг сагсіпота" Вгії. 9). Сапсег (1996) 73: 1498-1502. « б. Оп, С-)., еї аїЇ., "Моіесшаг ерідетіоіоду ої Пераїйів В Са магіапіг апа тшапів: відпіїйсапсе іп ост») с іттипе роршіайоп" ЗАМА (1996) 12: рр.5-6. . 7. Соп, К-Т, "Нераййів В іттипігайоп іп біпдароге" І апсеї (1996) 348: 1385-1386. и?» 8. Ооп, С-)., еї аї. "Мага! Півіогу ої Пераїйів В зипасе апідепе птшиапів іп спйагеп" Іапсеї (1996) 348: 1524-1525. 9. Наїгтізоп, Т.)., "Сепеїйіс магіацоп іп пераййізв В мігив" Еиг. 9). Савігоепіег. 5 Нерайоі. (1996) 8: 306-311. -І 10. Ооп, С-9У., еї аї., "МоїІесціаг ерідетіооду ої Перайіз В мігиз массіпе умагіапіз іп Зіпдароге"
Массіпе (1995) 13: 699-702. о 11. Ооп, С-)., еї а). "МоїІесшіаг ерідетіоюду ої Пераїйів В »мігиз магапів апа тшиапів - відпійсапсе їх апа (гапзтівзвірі Шу" Ргос.Зпа Іпіегпай). Зутр. Міга! Нераїйіз 5 НСС, Зіпдароге. (1995); 39-43. 12. Сагтап, МУ., еї аї., "Міга! депейіс магіайоп: пераїйіз В аз а сііпісаІ ехатріе" І апсеї (1993) 341: 349-353.
Ш- 13. Наїгтізоп, Т. 9., "Магіапів ої пераїййів В мігив" Мох Запа (1992) 63: 161-167.
Ф 14. Сагтап, МУ. Р. е(аі., "Массіпе-іпдисед езсаре тшапі ої перайіз В мігив" І апсеї (1990) 336:325-329.
Ф) іме) 60 б5 ц с - - см ї | су п
Ф нн
Ма . х
Е х
З - о
Е й
Ф с а ві ізо
З см: їх х 5 я - .
Ох
Ф о а (чав! с | г чо - т
Е а с о (Се) м і «
Го) 5 - - 9 т- «
ФІГ. 1 - с :з» -І (95) с» -0.720 42) (Ф. ко 60 65 чі
ГУ т тА
За аз
А Ж
70 2 в з тА - 8 ше т -ч «и - 57 щ- па
Ма с ее т в Б 5 із е "т б па о з 5 о
З с з о с ва о
З А ! ісе)
Зла
Б їм е- «І
БА р со ша
Ка; т. юх ча ша гя
ФІГ. 2 « - с . а -І (95) їх -.20 4) ко во 65
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
(1)ЗАГАЛЬНА ІНФОРМАЦІЯ: (1) НАЗВА ВИНАХОДУ: МУТАНТНИЙ ШТАМ ВІРУСУ ГЕПАТИТУ В ЛЮДИНИ ТА
ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ
(й) КІЛЬКІСТЬ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ: 1 (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Хз1 (Фігура 3) 70 () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (а) ДОВЖИНА: 3215 п. н. (6) ТИП: нуклеївова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: подвійна (г) ТОПОЛОГІЯ: кільцева (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ле1:
СТССАСААСА ТТОСАССАЛО СТСТОСТАСА ТОССАСОСТО АССОСССТАТ АТТТТОСТоС во
ТОСТОССТОС АСТТССОСАА САСТАААССС ТСТТСССАСТ АСТОССТСТО ССАТАТОСТе 120
ААТСТТСТСС АССАСТООбО АСССТОСАСС СААСАТОСАС ААСАСААСАТ САОСАТТОСТ 180
ВбСАССССтТо СТООТСТТАС доссбосстТІ ТТТСТОСТТО АСААСААТОС ТСАСААТАСС 240 20 .
ССАСАСТСТА САСТСТОСТО САСТТСТСТС ААТТТТСТАС бО0ОАбСАСС САССТоТТСС зоо
ТОСССААДАТ ТСОСАСТСОС САДАССТОСАА ТСАСТСАЄСА АССТОТТІСТС СТОСААТТТО зво
ТОСТООСТАТ СОСТОСАТОТ СТСТОСбОСо ТТТТАТСАТА ТТССТСТТСА ТОСТОСТОСТ 4аго
АТСССТОАТС ТІСТТОТІСо ТІСТТСТОСА СТАССААССТ АТСТТоСССо ТТТсТоСтот 480 с 29 АСТТОСАЦСА АСАТСААССА ССАОСАСОСС СССАТОСАЛС АССТОСАССА СТОСТОСТСА 540 Го)
МОСАААСТСТ АССТТІСОСТ СТТСТТОСТо ТАСААААССТ ТСОСАСОСАА АСТОСАСТТО 609
ТАТТСССАТС ССАТСАТССТ ОбОСТІТСОС ААСАТТОСТА ТООСАсТовО ССТСАСТССВ во
ТТТСТОСТОс СТСАСТІТАС ТАСТОССАТТ ТСТТСАСТОС ТТОСтТАСсос тттТосессАс 720 (Се)
ТОТТТОССТІ ТСАСТТАТАТ ССАТСАТОТО СТАТІСОССОС СОААСТСТОТ АСАЛАСАТСТТ 7во М
САСТСССТТТ ТТАССТСТАТ ТАССААТТТТ СТТТТСТСТТ ТСОСТАТАСА ТТТАВАСССТ 840 «
ААТААВАССА ААССТТОСОс СТАСТОССТТ ААСТТСАТОС САТАТСТААТ ТОСААСсТТОв з0о
ССТАСТТТАС СССАСОААСА ТАТТСТАСТА АЛАСТСААСС ААТОТТТТСО ААААСТОоССТ 960 ме)
СТАААТАСАС СТАТІСАТТО САААСТАТОТ САААСЛАТТО ТОсСсТСТТтТтТ ОбоСтТТТОсТ 1020 че - . а - і (95)
Сг» - і 4) ко бо б5
СССССТТТТА САСААТОСТОО СТАТССТОСС ТТСАТОССТТ ТАТАТОСАТО ТАТАСААТСТ 1080
ДЛОСАСОСТІ ТСАСТТТСТОС СССААСТТАС ДАСОССТІТС ТОТОТАДАСА АТАТСТОААС 1140 сСТІТАССССОа ТТОСССООСА АССОТССОСІ СТСТОССААС ТОТТТОоСтТоА СОСАдСсСсСС 1200
АСТСОАТОбО ССТІООССАТ ДОСССАТСАС СССАТОССТО ОдАсСТТІТСстТ состТестстТа 1260
СССАТССАТА СТОСОСААСТ ССТАССАОСТ ТОТТТІТОСТС ССАСССОСТО ТОСАОСАААА 1320
СТТАТССООАА СССАСААСТС ТОоТТОотТеССстТС ТСТСОСАААТ АСАССТССІТ ТССАТОоОСТо ізо
СтТАООСтТОоТо СТОССААСТО САТоСстТосОоС бобАСсОсТеСТ птТоТстТАСсот сСесотсеоссо 1440 70
СТОАДАТОСССо СобАСсдеСсс стТостТооообс сСоТТТоОбОосС ТСТАССОТОС ССТІСТТСАТ 1500 стоСсСсотТтос СОСССАССАС сОбОСОСАСС ТСТСТТТАСО СООТСТоСОС ОТАТОТОССТ 1560
ТСТСАТСТОС СОбАССОТСТ ССАСТТСОСТ ТСАССТСТОС АССТСОСАТС САСАССАССОо 1620
ТСААСОСАСО ССАОСТСТІС СССАДОоСТСТ ТАТАТААСАС САСІСТТОСА СТСТСАССАА 1680
ТСТСААСОАС СОСАССТТОАО ОСАТАСТІСА ААБАСТСТОТ СТТТАААСАС ТОСОАОСАСТ 1740
ТОСССОДССА САТТАСОТТА ААСАТЕТАТО ТАСТАООАСО СТОТАСЗСАТ АААТТССІСТ 1800
СТТСАССАСС АССАТОСААС ТІТТТСТОСТ СТОССТААТС АТСТСАТСТТ САТСТССТАС ї1ве0
ТОСТТСААСОС ТССАдДОоСстТсСТ СоСТТООСТо ОСТІТСОСАС АТОСАСАТТС АССССТАТАА 1920
АСААТІТОСА ССАТСТОаСТО АСТТАСТСТОо ТІТТТТОССТ ТСТОАСТТІСТ ТТСССТСТАТ 1980
ТОССАОАТСТО СТООАСАССОо ССТСТОСТСТ СТАТОСОСАС СССТТАСАСТ СТОССОСАДСА 2940
ТТСТТСОССТ САССАТАСАС САСТСАСОСА АДОСТАТТТІТС ТоТІОсСОсТо АОТТОАТОАА 2100
ТСтТОСССАСС ТООСТОССАА СІААТТТОСА АСАТОСАОСА ТССАСОБААТ ТАСТАСТСАС 2160 с
СТАТСТСААС СТТААТАТОС СССТАДААСІ САСАСАЛАТА ТТОТОаТТТС АСАТІТІТССТОа 2220 о
ТСТТАСТТТТ СОААбАСААЛА СТОТТСТТЯА СТАСТТООТА ТСТТТТОСАС ТОТОСАТТСО 22850
САСТОСТАСС ОСТТАСАСАС САССАДАТОС СССТАТСТТА ТСААСАСТТС СОСАААСТАС 2340
ТСТТСТІАСА ССАССАСОСА ССТОСССТАС ААСААСААСТ СССТСОССТо ОСАСАСОААС 2400 со зо СТСТСААТСО ССОСОТСОСА СААСАТСТСА АТСТСОООАА ТСТСААССТІ АСТАТТОСТТ 2460
ССАСТСАТАА ССТСССАААС ТІТАСТОСОС ТТТАТТСТТО ТАСТОТАССТ СТСТІТААТС 2520 в.
СССАСТОССА ААТТССТТСС ТІТОСТСАСА ТТСАТІТАСА АСАССАСАТТ АТТААТАСАТ 2580 чІ
СТОААСААТА ТОТОСОСССТІ СТІТАСАСТТА АТОДАЛАЛАЗ ААСАТТАААА ТТААТТАТаС 2640 со
СТОСТАСОТТ ТТАТССТААС СТТАСТААДАТ АТТТОСССТЕ АСАСАААСаС АТТАЛАСССТ 2700 -
АТТАТССТОСА АСАТОСАСТТ ААТСАТТАСТ ТСААААСТАС ОСАТТАТТТА САТАСТСТСТ 2750 - . а - (95) с» - 4) ко 60 65
ССААОССТОС САТТСТАТАТ ААСАСАСВАЛА СТАСАСОСАС СОССТСдТТТ ТОоТОоОТсАС 2820
САТАТІСТТО ОСААСАДСАС СТАСАССАТО ССАОСТТОСТ СТТССАЛАСС ТОСАСАдОСС 2вво
АТССССАССА АТСТТОСТОТ ТСССААТОСТ СТОССОАТТСТ ТІССССАТСА ССАСТТОаАС 2940
ССТОоСстТТоСОа САСССААСТС АААСААТССА САТТСОСАСТ ТСААССССАА САВОБАТСАС зо0о
ТССССАСАСО САААТСАСОТ АССАСТОССА ОСАТТОССОС САСОСТТСАС СССАССАСАС зово сосостТстТІТ, тТОсООвОсАо СССТСАСОСТ САПООСАТАТ ТОАСААСАСТ СССАаСАЗСА 3120
ССтТесСтТоСстТа ССТССАССАА ТОСССАСТСА ССААСАСАБС СТАСТСССАТ СТСТССАССТ З180
СТААДБАСАСА СТСАТССТСА СОССАСОСАС ТОСАА 3215 (2У ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме2: (Фігура 4) () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ 12 (а) ДОВЖИНА: 843 амінокислоти (6) ТИП: амінокислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (т) топологія; лінійна (їх) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме2 20 Меї Рго цем Бех Тух Сіп Нів Рпе АгФ4 Цуб Фей цею ре ем Ар Авр і 5 10 15 сіб Аза біу Рко Без біш бі бі Гей рко Агод цей Аза Авр бій біу 20 25 зо
Теза Азп Агу Аку уаї Аїа біб Абр Цей Азп о ГПелі 01у Ап Пез Азп Уаї «0 45 с "
Бех І1їе Рко Ттр ТЕ Ні цу Уаї сіу деп Рне Тіт 01у реп Тук Бех Го) 5о 55 60
Зек ТП Маї Рко чаї Ре Аб5п Рго бій Тгр біп 11е Рго бЗег РіБе рхко
І-ї то 75 во
Нів Ії Нів Гц біп сій Авр Ізе І1їе Азп Ах Сув біп біц Тук Ма) (се) 85 за 55 їм- сп1у Рко печ ТТН Уаї Азп бі Гуз АхЯ Акад Пес Ббуз Пез т116є Меб рко 100 105 1107 «
Аїа Агу Рре Тук Рго Ап ойес ТБт о Ппув Тут о йвеи Рго Беу Авр о Був а1уУ 115 120 125 со
ТІ1е цув Рко Тут Тут Рго бій Нів Аїа Маї Аб5п оНів Тут Рре цуз ТБг 130 135 140 че - . и? - (95) г» - 42) іме) бо б5
Аха Нів Тут Пец Нія Тік цес Тгр о цувє Аза п01у І1е Пеї Тух МДув АгчЧ 145 150 155 160 бі ту Тпт Ага Зег Аза бег Ре Сув біу бег Рго Тух бЗег Тгтр сій 165 170 175
Зіп б30 без біп нів 01у Ах Гей Уаї Ре бід Ту Бег ТТ Агу Нівз 180 185 190 сіу Ар бі бех Суз Суб баг біп бег Бех біу Іїе пе 5Зех Ах Бек 195 200 205
Рго Маї Фіу Рко Суз Уаії Акуд бЗех біп рез Буз біп Бек АхдЯд ем біу 210 215 220 їем біп Рко біп біп біу Бех Пе лЛіа Атя сіу Пуз Бех б1у Ату бЗехт 225 230 235 240 біу Зеш І16 Аку Аїа Ах Маї Ні Рко Тік ТБк Ак Акад Бек Рібе біу 245 250 255 сіу сім Рго бек біу бех с)у Нів І1е АБр Авп бек Аїа Бек Бек ТіК 260 265 270 бек Бех Сув Тез Нів біп бат Аїа Уаї Ах Був Тах Аза Тух Бех Ніз 275 280 285 бПеч Бах Тік беїг цуз Ак біп бек бек Зех б1іу Нів А1іа уаї біц гей 290 295 зо0о0
Ніз АБпоІх1е Ркго Рко бехт бех Аїа Аку Бех біп біу 015 біу Рго Ії1є 305 10 315 320
Рпе Зег Суз Ттр Ткр їм біп Рпе Акуд Авпобех Муз хо Сув Бех Азр 325 330 335
Тук Сув реп бек Нік ІЗ Уаї Азп Печ Пеп біз Авр Ттр сіу Рко Сув з40 345 350 с
ТЕ бі» Нів біу бій Нів Ап І1є Аху І16 Рго АгЯ Тіг Рго А1їа Агу о 155 зе з65 чаї Тпт 5Біу 41у Маї Рпе без Ма) Авр Гуз Абп о Рко Нів Ав» Тпу Аза 370 375 зво
Січ бек Аг Цей Тер Тгр Тох беїх Пеп Азп Рпе їецш біу с1у Аза Рго (Се) зво 390 335 400
Тік оСув бет Тгр Рго Пув Рпе Аїа Уаї Рко Ахп Пецп біп Бех Беч ТЕ - 405 410 "415
АвпоБбезй Ппез бек Зет Азп Гей бек Ткр рем Бех Пей Авр Чаї бБет Віа - а20 425 430 со
А1їа Ріпе Тухк Нів І12а Рко Геч Нів рхо Аза Аза Мес Ррго Нія Бем Гей 435 40 445 і - - . и? - (95) г» - 42) іме) бо б5 уаї б1у бБет бег біу цеп Рко Ахч4 Тух Маї А1ї1а Акад Пе Бех бек Тнк 450 455 4650
Бек Аку Авп о І1їе Ап Нів біп Ні5 біу Аїа Меє біп Ар Пем Нів дзр 465 470 415 480 бех Суб бек Аж ПЦуз Бей Тух Уаї Бек цей цей Без Пез Тук бує ТВ 485 439 4235
Рпе сіу АгЧ Муз Пец Ніз тен Тук бЗех Нів Рго Іїе ї1е Без біу Рпе . 50 505 510
Ака пцув їзЗе Рго Меє піу Уаї б3)іу цей бек Рко Ре Гей Пец Аза біп 515 520 525
Рпе Ту бек А1ї3з 11е Сув бек уаї Маї Ах Ату діа Ре ркго Нів Сув 530 5ЗБ 540
Кїечз Аза Рне Бек тТук Ме Авр Азр Уаї Маї ви сіу діа цуз Бех Уаї ваб 550 БЕ 5О
Сбіп Ні Бей бій бек Пец Рпе Тих бБет І1є тТНх АзпоРНе цем Печ б5ег 565 570 575 цем сіу І1е Нів цеч А5п Рго Азп оГув ТЬк о Був АгЯч Тгтр о біу Тук Зег 80 55 зо пез о Акп Ре Меї біу Тук Маї Іїе сіу бек Тхір сіу ТНг Пен рРхко біп 95 60 бо
Сі Нів І11е Уаї Пе Був йеч пуб біп Суз Рпе Ахуд цув ем Рхо Уаї 610 515 620
Азп о втЯ Рто ЇІ11е Авр Тер Буя УМаії Суз сій Аку Ізе Маї біу бем цей 625 630 635 6Аа0 сіу Рпе Аїа Аїа рРго Рпе Тік біп Суз біу Тух Рко Аїа Бей Меєс рго 545 550 555 се цеч Тук Аїа Суз ІзЗе сіп бек цув б15 Аїа Рпе Так Ре бех Рго Тиг о бо баб 6570
Тут Був Аїа Ріе реп Сув Цув с01п Тук Бей Азп без Тут Рго Маї Аза 675 вно 685
Аха біп Аку бек 01у Пец Сув сіп Уді Рпе А1а Авр Аза Тк Рго Тбг Ге) 590 695 750 сіу Ткр біу цей діа їїе сіу Нів Сіп Аху Мес А1з бЗіу ТПх Вбе Гей ч- 7т705 710 7ів5 т 720 діа Рто цей рРко І1з Нів Тіг А1а Сіц Ге їпеч діа Аза Сув Ре Ала « 725 730 735 со
Атч бег Агу бБеї біу Аїа Пубв тез І16є з1у Тк Азр Азп Бех Уаї Уаї 740 74585 750 і - - . и? - (95)
ЧК» - 42) іме) бо б5
Без Бек Ах Пув Тут Так бег Рве Рго Тгтр Печ Печ Сіу Су5 Аїа діа 755 7во те
АвпоТхр І11е цезч Аху біу Тр Бех рРБе Уа)ї Туг Уа) рго бек Аїа ем 770 775 780
АкпоРго Аза АБр Азр о рко бек Аку с01у Акад Пемч біу Пец Тук Акад РКО 785 790 795 во їпем цей Нів це Рго Ріє Аг Рко ТПх Так о біу АхЯ тТвх Бех Гцеч Тут . во5 ві0 815
Аіз Маї Зек Рко Тут Маії Рхо бек Нів меш Ркго Дар Ах Ма) Нів рРне 7170 вза 825 830
Аїа бет Рко цей Ніз Маї А1їа Тур Акуу Рко рРхто 835 840 (2 ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 3; (Фігура 5) 719 (ухАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (а) ДОВЖИНА 400 амінокислот (6) ТИП: амінокислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна (хі ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ; Послідовність Ме3:
Меє біу Сіу Ткр Бех бек Пув Рто Ахо бів сіу мес б1у ТНх Азп Гей ї 5 10 15
А1їа Маї Рхо Авп оРко Пец біу РБе рпе Рхо Авр Ні біп Беч Азр Рко 20 25 30 с
Аіїа Рне с1у Аїа Аєп бек Азп Азп рко АБр ТкЕр Авр Рпе АбБп Рго Ап 46 о пув АБр нів Тгр Рхо січ Аїа Авп бір Уаї с1у Уаїі б1у Аїа РбБе сіу 50 55 3
Рко біу РБе Тру Рхо рус Нів б1у біу цей цем сіу біу Бек рРко біп 5 170 75 во І«о) зо Аіїа сіп сіу І1їє цеч Твх ТігоМаї Рко Аїз Аїа Рго Рго рРхо Аіїа бек 85 50 95 -
Тк АБп Аку бій бех с1у Ак біп рко Тк Рко Ї16 бех Ро Рго еп «І 100 105 110
Втч Авр бЗех Нів Рго біп Аїа Тік біп Тгр Азп Бек ТІ ТБг о РБе Нів Гео) 115 120 125
Зо біп А1їа Пе Гей Аяр Рко Ате Уаї Акд с3іу Гей тук Рье Рко Аза біу - 130 135 140 40 - . и? - (95)
ЧК» - 42) ко 60 б5 сбіу бБег бек Бет біу Тих Ма) Азп Рго Уа1і Рко Тпх Татх Аза бег Рко 145 150 155 150
Іїе бБеї бет І1е Ре БбБет Ак Тит біу Ар Рко Аза рго Авп мес сій 165 170 ї75
Авп ТВг оТвут о бек сіу Рре ви сіу Рко цем Пем Уді Геп біп Аза сіу 180 185 1960
Рпе Рпе бет Пец Тпх Ако І1е Сем ТВтІ 116 Рго біп б5ех Пец Адзр Бех . 195 200 205
Ттр Ттр ТБг о бех цей Абп рРпе Гем біу біу А1їа Рго Тіт Сув рРго біу 210 215 220 бЗіп о Азп о бех біп бЗех Рто Тпт Зег Авп Ні Бет Рхуто Трх Зек Сув Рко 225 230 235 240
Рхго І1їеє Суб рко біу Туг Акд Тер Авп Суб Гей Ат Ак РБе ї11є Ізїе 245 250 255
Ріє Пейп Ре І1є ївшп Пец ївюш Суз ей І1е Ре йдем Пец Маії Ге цем 260 265 270
Авр Тут зіп біу Меє Пец Рго Уа) Суз Рко Мем ем Рко с1у Трк беї 275 280 285
Трх ТБЕ бек Тік сіу Рко Суз ув ТБПтІ Су Тіт ТБІ Ркго Аза біп б1у 280 295 300
Авп бек Тік Ре Рго бег Сув Сув Суб ТВі Пув Рко Бек Авр б1у Авп 305 310 315 320
Суз Так Су Ії Рко І)Зе рРко бек Бех Ттр Аїа Ре Аіїа Акад Рре Печм 325 330 335
Тхр бій Ткр Аза бБег Маї Акуд бБе Бех ТтТгр Геч Бек Мей Пез таї ркго 340 345 350 сі
Рре чаї біп Тгр Рпе Ууаї сіу ви Зет Рхо Тпжх Маї Тер Пец бех Маї о
ЗБ зво 365
Іїе Ттр Меє Меє Ткр Тук Ткр С1у Ату Бех Гек Тут Авп їІїе Гей Бех 370 375 зво
Рко Ріе ем Рко Пе пцем Рко І1їе Ріе Ре Сув Бец Тер Уа1 Тух І11є Ге) за5 390 зв5 «00 - - (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 4: (Фігура 6) т (4) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ; о (а) ДОВЖИНА: 212 амінокислот (б) ТИП: амінокислота - (8) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ; лінійна (ЗРОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ле4 « - . и? - (95)
ЧК» - 42) ко бо б5 мес бію цем Рпе Бей цем Суз Пем т11е Ії Бех Сув Бех Суз Рго ТіК і 5 10 15
Уаї сіп Аза Бех цуз пем Сув Пец біу Тер Пец ТтІр Ахр Мес Азр І1е 20 25 30
Авр Рго Тут Пуя бін Ре б01іу Аїа бек Аза біцш Пец Бецш Бехт Ре Гей 35 40 45
Еко с бек Авр рРпе РБе Рко Бех Іїе Акч Аяр Пец цей Ар Тих Аза Бег 5О БЕ во
Аїа пцейп Тук Аг бій Аза Пец бій Бек Рго біц Нів Суз Бех Рко Ні 55 70 75 во
Ніз Тіптх Аза Пес Ага біп Аїа І116 Гей Суа Тер біу сій цем Меб АБП 85 зо з5
Печ діа ТБх Тгр оМмаї б1іу бек Азп цец біз Азр Ро Аза бЗет Ага січ 100 105 110 їез уаї Уаї бек Тут Уаї Азп Маї Азп Мес біу рец Пув цем Акод біп 115 120 125
Іїе рей Тгр Рре Нів І11е бек СуБ Геи ТпЕ Рпе біу АхкЯ бі Тпг Ууаї 130 135 140
Гез січ Тух Пец Уаї Сех рРре Сіу Ма)! Ткр І1е6 Ак Так Рко ТБг діа 145 150 155 160
Тук Ахч Рго Рко Авп Аіа Рго І1е їеч бег Тпї беш рго бій Ту Тг 165 170 175
Чаї Уаї ВжхЧ Аху Аху біу Агу Бех Рго Ах Ату Ату Тахо Рко бБет ро 180 185 190
Ата Ака Ага Ага бек Сіп бек Рго Ат АгЯ Ага Ах Зетх біп бек АкоУ 195 260 205 с біч бек біп Аг9 Ге) 210 (ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 5: (Фігура 7) (Се) () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: Й м. (4) ДОВЖИНА: 154 амінокислоти (6) ТИП: амінокислота «І (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна со у - . и? - (95) г» - 42) іме) бо б5
(хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ле5
Мет Аза А1а Ахд Маї Сув суз біп пец Авр РКО Аза Аку Ар о уаї Гей і 5 10 15
Суз Пем Агу Рго Уаї СІіу діа б1и сет ха сіу Акад Рко Уаї бек с1у 22 25 зо
Рхо Рпе біу А1іа цей ркго бек рго бек Бек бБег А1їа Уаї рго діа Азр 35 40 45
Нів'біу Аїа Нів цем 5ег цей Акч біу пе рго Уді Суз Аіїа РБе Зег 70 50 55 о
Бек Аза с1у Рто Суб А1а цей АкЯ Ре Ту Зег Аїа дхд Ага Меє сіцч 5 7о 75 80
ТБх ТІ Маї Ап Аза Ах сіп Маї Пем Рхо пу Уді цей Тут Буз Ах4 85 90 95
ТВх Бей Сіу еп бег Аїа Мес 5ег тик ТМт Ар еп бічї діа ТтТук РЕбе 100 105 110
Був АБР Сув Маї Рце цув Азр Тур б) бій Пец сіу біч Січ 116 Ах 115 120 125 їешп Вуз Їїе тТух Уаї ви біу сіу Суб АтЯ Нівз Цув Пец Маї Суз бехг 130 115 140
РКО Аза Рко Сув Ап Рме ре Бех бег діа 145 150
С) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 6; (Фігура 8) см () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: о (2) ДОВЖИНА: 36 п. н, (б) ТИП: нуклеїнова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одивична (7) ТОПОЛОГІЯ: лінійна
І (Се) (б) опис ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Хе 6: у
АТААОСТТАТ СССССТАТСТ ТАТСААСАСТ ТССОСА зв « (2ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ де 7: (Фігура 9) о 0) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: -
Га) ДОВЖИНА: 25 пп. н. (6) ТИТТ: нуклеїнова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична - (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна « . а - (95) г» - 42) іме) бо б5
(хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ; Послідовність Ме 7:
ОАСОТСТАСАС ТСТОСОСТАТ ТОТОА 25 (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Хе 8: (Фігура 10) () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (2) ДОВЖИНА: 25 п. н. (6) ТИП: нуклеїнова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна . (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме 8; й
САСТСТАСАС ТСОТОСТОбА СТТСТ 15 (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме 9: (Фігура 11) (й) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (а) ДОВЖИНА: 32 пі. н. (бу ТИ: вуклеїнова кислота . (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ; Послідовність Ме 9;
ТОАСААТТСТ САСОСТОСТО ТССАТОСОАС ОТ 32 с (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ ле 10: (Фігура 12) (5) () ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ: (а) ДОВЖИНА: 16 п. н. 45) ТИП: нуклеїноза кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна ке, , (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ме 10: Й - " тттатттАСо ТоССОоТ Й (зе) (2) ІНФОРМАЦІЯ ЩОДО ПОСЛІДОВНОСТІ Ме І!: (Фігура 13) м (а) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛІДОВНОСТІ:
О ДОВЖИНА: 27 п. в. (6) ТИП; нуклеїнова кислота (в) ЛАНЦЮГОВІСТЬ: одинична « (г) ТОПОЛОГІЯ: лінійна (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ: Послідовність Ле 11: зв - с АТААССТТАТ СССССТАТСТ ТАТСААСАСТ ТОСООХ . и?
Claims (1)
- Формула винаходу -і о 1. Виділений штам вірусу гепатиту В, визначений як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе їз поверхневий антиген-5-133 (метіонін на треонін), що зберігається під номером доступу Мо РО7121504, РО7121505 і РО7121506 в Європейській колекції культур клітин від 15 грудня 1997 року.- 2. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим Ф антигеном штаму вірусу гепатиту В, яка відрізняється тим, що поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, причому вказана послідовність являє собою послідовність Мо 1 на Фіг. 3.З. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид кодується (Ф; нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо 1. ГІ 4. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 3, яка відрізняється тим, що містить "АСО" в положеннях 551-553. во 5. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це ДНК.6. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це РНК.7. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це кКДНК.8. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 5, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота - це геномнаДНК. 65 9. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що поліпептид містить послідовність амінокислот, по суті ту саму, що й залишки амінокислот 174-400 послідовності амінокислот,позначеної як Послідовність Мо 3,10. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, причому такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, призначена для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 (метіонін на треонін), де таке визначення включає: 70 а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти суб'єкта, і б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 7/5 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.11. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить мРНК, яка відповідає копії ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота В положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає: ї) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 35 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс, ї) виділення комплексу, який утворився таким чином, і її) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою сч об КИСЛОТОЮ або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.12. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за пп. 10, 11, яка відрізняється тим, що виділена нуклеїнова (8) кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.13. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти на стадії а) включає мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним Ге зо поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу - тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, ії де визначення на «г стадії б) включає: ї) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і ії) порівняння ме) послідовності амінокислот зі стадії Її) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової кислоти за п. 9 так, ї- щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.14. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що визначення стадії б) включає: ї) ампліфікацію нуклеїнової кислоти у зразку стадії а) та « ї) виявлення наявності поліпептиду в одержаній ампліфікованій нуклеїновій кислоті. з с 15. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 10, яка відрізняється тим, що зразок містить кров, тканину або сироватку. з 16. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 2, яка відрізняється тим, що кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту -І В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де визначення включає: о а) одержання відповідного зразка нуклеїнової кислоти з суб'єкта, і їх б) визначення, чи зразок нуклеїнової кислоти з стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу - гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності Ф амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.17. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 16, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти стадії а) містить мРНК, яка відповідає транскрипту ДНК, що кодує поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка Ф) відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу ка тим, що амінокислота в положенні, 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає: во ї) контактування мРНК з олігонуклеотидом за п. 35 за умов, за яких мРНК зв'язується з олігонуклеотидом так, щоб сформувати комплекс, ії) виділення комплексу, який утворюється таким чином, і її) розпізнання мРНК у виділеному комплексі так, щоб таким чином визначити, чи мРНК є нуклеїновою кислотою або одержана з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.18. Виділена молекула нуклеїнової кислоти за п. 16, яка відрізняється тим, що зразок нуклеїнової кислоти ве на стадії а) містить МРНК, що відповідає транскрипту ДНК, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і де визначення стадії б) включає: ї) трансляцію мРНК за придатних умов для одержання послідовності амінокислот, і ії) порівняння послідовності амінокислот стадії і) з послідовністю амінокислот виділеної нуклеїнової кислоти за п. 9 так, щоб визначити, чи зразок нуклеїнової кислоти є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид.19. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептид кодується 7/0 молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527 -595 Послідовності Мо 1.20. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, яка відрізняється тим, що кодує пептид, де пептид містить послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.21. Вектор, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним /5 поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і функціонально з'єднана з промотором транскрипції РНК.22. Вектор за п. 21, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу.23. Вектор, який відрізняється тим, що містить виділену нуклеїнову кислоту, яка кодує пептид, де пептид кодується молекулою нуклеїнової кислоти, що включає нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1.24. Вектор за п. 23, який відрізняється тим, що вектор містить ДНК вірусу.25. Векторна система хазяїна для одержання поліпептиду, що містить вектор за п. 21 в придатному хазяїні.26. Векторна система хазяїна для одержання пептиду, що містить вектор за п. 23 в придатному хазяїні. сч27. Спосіб одержання поліпептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 25 за о придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином.28. Спосіб одержання пептиду, який включає вирощування векторної системи хазяїна за п. 26 за придатних умов утворення поліпептиду, і виділення поліпептиду, одержаного таким чином.29. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає: Ге зо а) введення вектора за п. 21 в придатну клітину-хазяїна, б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид, - в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і «г г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.30. Спосіб одержання поліпептиду в очищеній формі, який включає: ме) а) введення вектора за п. 23 в придатну клітину-хазяїна, ї- б) культивування одержаної клітини-хазяїна, щоб одержати поліпептид, в) виділення поліпептиду, що одержують на стадії б), і г) очищення поліпептиду, виділеного таким чином.31. Очищений поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де « такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного з с поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін. з 32. Очищений поліпептид, одержаний згідно зі способом за п. 29.33. Очищений пептид, де пептид має послідовність, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З, -І 34. Очищений пептид, одержаний згідно зі способом за п. 30.35. Олігонуклеотид з щонайменше 15 нуклеотидів, здатний до специфічної гібридизації з унікальною і послідовністю нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує поліпептид, що є мутантним головним ї5» поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка Відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу - тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, без гібридизації до Ф будь-якої послідовності нуклеотидів у межах нуклеїнової кислоти, яка кодує головний поверхневий антиген вірусу гепатиту В дикого типу, причому олігонуклеотид включає нуклеотиди 527-595 Послідовності Мо 1.36. Спосіб одержання антитіл до поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де вказаний поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні Ф) 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, а не головним поверхневим антигеном вірусу гепатиту В ка дикого типу, що включає: а) одержання поліпептиду в очищеній формі; во б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного поліпептиду, в) збирання утворених антитіл, г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного поліпептиду за умов формування комплексу, і д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним поліпептидом так, щоб одержати антитіла до поліпептиду. 65 37. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що поліпептид кодується нуклеотидами 155-835 послідовності нуклеїнової кислоти, позначеної як Послідовність Мо 1.38. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що поліпептид має послідовність амінокислот, головним чином таку саму, що й залишки амінокислот 174 - 400 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.39. Спосіб за п. 36, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша.40. Спосіб одержання антитіл до пептиду, де пептид має послідовність амінокислот, що включає залишки амінокислот 298 - 320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З, який включає: а) одержання пептиду в очищеній формі, б) імунізацію організму, здатного до утворення антитіл проти очищеного пептиду, в) збирання утворених антитіл, 70 г) об'єднання одержаних антитіл і очищеного пептиду за умов формування комплексу, і д) визначення, які з одержаних антитіл утворюють комплекс з очищеним пептидом так, щоб одержати антитіла до пептиду.41. Спосіб за п. 40, який відрізняється тим, що організм - це кріль або миша.42. Антитіло, одержане за п. 36 або 40.43. Антитіло за п. 42, яке відрізняється тим, що воно являє собою моноклональне антитіло.44. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де зазначений поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, і нездатне до виявлення головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу.45. Антитіло, здатне специфічно зв'язувати поліпептид, де пептид має послідовність амінокислот, що включає залишки амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо 3.46. Антитіло за пп. 44, 45, яке відрізняється тим, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, с ов що несе поверхневий антиген-5-133 (метіонін на треонін), для визначення, чи суб'єкт інфікований штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген-5'-133 і) (метіонін на треонін), де визначення включає: а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує Ге зо поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену - вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не «г метіонін, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоб зв'язатися з антитілами за п. 44 або 45 так, щоб визначити, чи інфікований суб'єкт. ме)47. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло ї- мічені маркером, здатним до визначення.48. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, флюорофор або фермент.49. Антитіло за п. 46, яке відрізняється тим, що здатне до виявлення поліпептиду, який є мутантним головним « поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка в с відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В, причому такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного ;» поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, для визначення, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки, де таке визначення ВКкЛюЮЧає: -І а) одержання відповідного зразка з суб'єкта, і б) визначення, чи зразок стадії а) є нуклеїновою кислотою або одержаний з нуклеїнової кислоти, яка кодує о поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має їх послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену 5о Вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не - метіонін, за допомогою контактування із зразком за відповідних умов, щоб зв'язатися з антитілами за п. 44 або Ф 45 так, щоб визначити, чи суб'єкт має схильність до карциноми печінки.50. Антитіло за пп. 47, 48 або 49, яке відрізняється тим, що виділена нуклеїнова кислота, олігонуклеотид або антитіло мічені маркером, здатним до визначення.51. Антитіло за п. 50, яке відрізняється тим, що маркером, здатним до визначення, є радіоактивний ізотоп, флюорофор або фермент. Ф) 52. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для ка лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає: 60 а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між поліпептидом і хімічною сполукою, 65 б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб ідентифікувати хімічну сполуку, придатну для лікування інфекції вірусним штамом.53. Спосіб визначення хімічної сполуки для застосування у виробництві лікарських засобів, придатних для запобігання інфікуванню штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), де спосіб визначення хімічної сполуки включає: а) контактування поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, з хімічною сполукою за умов, в яких відбувається зв'язування між поліпептидом і 70 хімічною сполукою, б) виявлення специфічного зв'язування хімічної сполуки з поліпептидом, і в) визначення, чи хімічна сполука інгібує поліпептид так, щоб розпізнати хімічну сполуку, придатну для попередження інфікування вірусним штамом.54. Композиція, яка містить поліпептид, що є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу /5 Гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного зовнішнього вірусу В антигенного гепатиту дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, причому кількість такого поліпептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, і є фармацевтично прийнятним.55. Композиція, яка містить пептид, де пептид включає послідовність, яка складається із залишків амінокислот 298-320 послідовності амінокислот, позначеної як Послідовність Мо З, причому кількість такого пептиду є ефективною, щоб стимулювати або збільшити продукування антитіла в суб'єкті, ії є фармацевтично прийнятним.56. Композиція, що містить хімічну сполуку, визначену відповідно до способу за п. 52, у кількості, ефективній для лікування інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, сч об що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), і фармацевтично ефективний носій.57. Композиція, що містить хімічну сполуку, визначену відповідно до способу за п. 53, у кількості, і) ефективній для попередження інфекції штаму вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), і фармацевтично ефективний носій.58. Композиція за п. 54 або 55, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, Ге зо інфікованого штамом вірусу гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін). -59. Композиція за п. 56, яка відрізняється тим, що вона призначена для лікування суб'єкта, інфікованого «г штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5-133 (метіонін на треонін). ме)60. Композиція за п. 54 або 55, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування ї- суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5-133 (метіонін на треонін).61. Композиція за п. 57, яка відрізняється тим, що вона призначена для попередження інфікування суб'єкта штамом вірусу гепатиту В, визначеним як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий « антиген-З'-133 (метіонін на треонін). з с 62. Спосіб скринінгу рідин організму суб'єкта на вірус гепатиту В, визначеного як штам Ооп вірусу гепатиту В людини, що несе поверхневий антиген- 5'-133 (метіонін на треонін), який включає: ;» а) одержання відповідного зразка рідини організму суб'єкта, б) визначення наявності поліпептиду, який є мутантним головним поверхневим антигеном штаму вірусу Гепатиту В, де такий поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності -І амінокислот головного поверхневого антигену вірусу гепатиту В дикого типу тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін, у зразку стадії а) так, щоб піддати зразок скринінгу на штам. о 63. Спосіб за п. 62, який відрізняється тим, що рідина організму включає кров, сироватку або зразок їх нуклеїнової кислоти крові або сироватки.64. Вакцина від гепатиту, що містить мутантну форму поверхневого антигену вірусу гепатиту В, де такий - поліпептид має послідовність амінокислот, яка відрізняється від послідовності амінокислот головного Ф поверхневого антигену гепатиту В тим, що амінокислота в положенні 133 такого поліпептиду - це треонін, а не метіонін.65. Вакцина за п. 64, яка відрізняється тим, що додатково містить ад'ювант. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних Ф) мікросхем", 2005, М 8, 15.08.2005. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і ка науки України. 60 б5
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/SG1998/000046 WO1999066048A1 (en) | 1998-06-19 | 1998-06-19 | A mutant human hepatitis b viral strain and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA73476C2 true UA73476C2 (en) | 2005-08-15 |
Family
ID=20429862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UA2000127297A UA73476C2 (en) | 1998-06-19 | 1998-06-19 | Hepatitus b mutant virus strain, nucleic acid isolated molecule, coding mutant main surface antigen of hepatitus b virus strain, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemicalcompound for the treatment of infection of hepatitis virus strain, a composition, a method for screening of liquids of organism for hepatitis b virus, vaccine against hepatitis |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6558675B1 (uk) |
| EP (1) | EP1098981A1 (uk) |
| JP (1) | JP2002518014A (uk) |
| KR (1) | KR100498118B1 (uk) |
| CN (1) | CN1322251A (uk) |
| AR (1) | AR020093A1 (uk) |
| AU (1) | AU756866B2 (uk) |
| BG (1) | BG105066A (uk) |
| BR (1) | BR9815913A (uk) |
| CA (1) | CA2330935C (uk) |
| HU (1) | HUP0103409A3 (uk) |
| IL (1) | IL140364A0 (uk) |
| IS (1) | IS5778A (uk) |
| MX (1) | MXPA00012720A (uk) |
| MY (1) | MY118955A (uk) |
| NO (1) | NO20006456L (uk) |
| NZ (1) | NZ508890A (uk) |
| PL (1) | PL192129B1 (uk) |
| TR (1) | TR200003777T2 (uk) |
| UA (1) | UA73476C2 (uk) |
| WO (1) | WO1999066048A1 (uk) |
| YU (1) | YU80600A (uk) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW200643171A (en) | 2005-06-07 | 2006-12-16 | Temasek Life Sciences Lab Ltd | Porcine circovirus type 2 vaccines |
| JP7398556B2 (ja) | 2019-09-30 | 2023-12-14 | ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド | Ｈｂｖワクチン及びｈｂｖを治療する方法 |
| CN113201051B (zh) * | 2021-04-27 | 2022-08-02 | 复旦大学 | 一种乙肝病毒表面蛋白突变体及其在抗乙肝病毒中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9401987D0 (en) * | 1994-02-02 | 1994-03-30 | Imperial College | Modified nucleic acid |
| WO1998011916A1 (en) * | 1996-09-18 | 1998-03-26 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Viral defective interfering particles and uses thereof |
-
1998
- 1998-06-19 EP EP98926023A patent/EP1098981A1/en not_active Withdrawn
- 1998-06-19 JP JP2000554857A patent/JP2002518014A/ja active Pending
- 1998-06-19 NZ NZ508890A patent/NZ508890A/en unknown
- 1998-06-19 HU HU0103409A patent/HUP0103409A3/hu unknown
- 1998-06-19 KR KR10-2000-7014456A patent/KR100498118B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-06-19 TR TR2000/03777T patent/TR200003777T2/xx unknown
- 1998-06-19 CA CA002330935A patent/CA2330935C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-19 YU YU80600A patent/YU80600A/sh unknown
- 1998-06-19 MX MXPA00012720A patent/MXPA00012720A/es not_active Application Discontinuation
- 1998-06-19 US US09/719,528 patent/US6558675B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-19 PL PL345573A patent/PL192129B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-06-19 IL IL14036498A patent/IL140364A0/xx unknown
- 1998-06-19 BR BR9815913-5A patent/BR9815913A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-06-19 CN CN98814201A patent/CN1322251A/zh active Pending
- 1998-06-19 AU AU77951/98A patent/AU756866B2/en not_active Ceased
- 1998-06-19 UA UA2000127297A patent/UA73476C2/uk unknown
- 1998-06-19 WO PCT/SG1998/000046 patent/WO1999066048A1/en not_active Application Discontinuation
-
1999
- 1999-06-18 AR ARP990102962A patent/AR020093A1/es unknown
- 1999-06-18 MY MYPI99002517A patent/MY118955A/en unknown
-
2000
- 2000-12-18 NO NO20006456A patent/NO20006456L/no not_active Application Discontinuation
- 2000-12-18 BG BG105066A patent/BG105066A/xx unknown
- 2000-12-19 IS IS5778A patent/IS5778A/is unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO20006456L (no) | 2001-02-16 |
| WO1999066048A1 (en) | 1999-12-23 |
| CA2330935A1 (en) | 1999-12-23 |
| CN1322251A (zh) | 2001-11-14 |
| HUP0103409A3 (en) | 2003-10-28 |
| NZ508890A (en) | 2004-04-30 |
| PL345573A1 (en) | 2001-12-17 |
| NO20006456D0 (no) | 2000-12-18 |
| YU80600A (sh) | 2005-06-10 |
| AR020093A1 (es) | 2002-04-10 |
| BR9815913A (pt) | 2001-12-26 |
| MY118955A (en) | 2005-02-28 |
| HUP0103409A2 (hu) | 2001-12-28 |
| TR200003777T2 (tr) | 2001-06-21 |
| MXPA00012720A (es) | 2002-05-08 |
| PL192129B1 (pl) | 2006-09-29 |
| US6558675B1 (en) | 2003-05-06 |
| AU7795198A (en) | 2000-01-05 |
| JP2002518014A (ja) | 2002-06-25 |
| CA2330935C (en) | 2005-05-10 |
| KR20010106129A (ko) | 2001-11-29 |
| KR100498118B1 (ko) | 2005-07-01 |
| EP1098981A1 (en) | 2001-05-16 |
| AU756866B2 (en) | 2003-01-23 |
| BG105066A (en) | 2001-09-28 |
| IS5778A (is) | 2000-12-19 |
| IL140364A0 (en) | 2002-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Serçe et al. | Further characterization of a new recombinant group of Plum pox virus isolates, PPV-T, found in orchards in the Ankara province of Turkey | |
| NZ197734A (en) | Synthetic peptides which substantially duplicate the sequences of naturally-occurring specific antigenic determinants;method of preparing antigens,antibodies thereto,and vaccines | |
| US6136528A (en) | Multiple sclerosis virus | |
| Shirai et al. | T cell recognition of hypervariable region-1 from hepatitis C virus envelope protein with multiple class II MHC molecules in mice and humans: preferential help for induction of antibodies to the hypervariable region | |
| Zhao et al. | Identification and characterization of dominant helper T-cell epitopes in the nucleocapsid protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus | |
| JP2000230930A (ja) | Ｈｉｖグル−プに属するレトロウイルス、ｍｖｐ−２９０１／９４、およびその変異体を検出する診断方法及びそのための試験キット並びにワクチン | |
| CA2055149A1 (en) | Non-a, non-b hepatitis virus related antigen, antibody, detection systems, polynucleotides and polypeptides | |
| UA73475C2 (en) | Hepatitis b virus strain, induced by vaccine, nucleic acid isolated molecule coding mutant main surface antiigen of hepatitis b virus, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemical compound for treating the infection of hepatitis b strain infection, a composition, a method for the preparation of composition, a method of organism liquids screening for hepatitis b virus, a method of antibody use, vaccine against hepatitis | |
| JP2005508154A (ja) | 外套細胞リンパ腫の外套組織球から単離されたレトロウイルス | |
| UA73476C2 (en) | Hepatitus b mutant virus strain, nucleic acid isolated molecule, coding mutant main surface antigen of hepatitus b virus strain, vector and vector system for the preparation of polypeptide, a method for the preparation of polypeptide (variants), purified polypeptide (variants), oligonucleotide, a method for the preparation of antibodies (variants), antibody (variants), a method for the determination of chemicalcompound for the treatment of infection of hepatitis virus strain, a composition, a method for screening of liquids of organism for hepatitis b virus, vaccine against hepatitis | |
| US20070092936A1 (en) | Severe acute respiratory syndrome | |
| US5171839A (en) | Nucleotide and amino acid sequences of protein mtp40 of m. tuberculosis and synthetic peptides derived therefrom | |
| US5169940A (en) | Nucleotide sequences of protein MTP40 of M. tuberculosis | |
| Bodjo et al. | Mapping and structural analysis of B-cell epitopes on the morbillivirus nucleoprotein amino terminus | |
| US6787142B2 (en) | Mutant human hepatitis B viral strain and uses thereof | |
| JPH04126085A (ja) | ネコ免疫不全ウイルスの遺伝子ｒｎａに相補性を示すｄｎａ | |
| Wedege et al. | Redesignation of a purported P1. 15 subtype-specific meningococcal monoclonal antibody as a P1. 19-specific reagent | |
| US20170173126A1 (en) | Identification of pneumocystis antigens and uses thereof | |
| EP0541089A2 (en) | cDNA of human hepatitis C virus, its clone and use thereof | |
| RU2270863C2 (ru) | Мутантный штамм вируса гепатита в и его применение | |
| Schein et al. | Synthetic protein antigens for COVID-19 diagnostics | |
| EP1595959B1 (en) | Method for enhancing efficacy of a monoclonal antibody preparation | |
| Lennerstraud | Assays for reverse transcriptase activity andp53 protein. Applications for characterisation of HIV RT mutants and inhibitors, and forp53 expression in breast cancer (Immune deficiency) | |
| Chung | Identifying epitope clusters in equine infectious anemia virus Gag with cytotoxic T lymphocytes from horses with diverse MHC class I alleles | |
| RU2000133299A (ru) | Штамм вируса поствакцинального гепатита B и его применение |